Genfind DNA Extraction Kit
Contents
1. Centrifugadora de sobremesa Thermo Fisher Scientific LEQ 00002 75412452 120 V Centrifugadora de sobremesa Thermo Fisher Scientific LEQ 00004 75004240 230 V Centrifugadora de sobremesa con rotor para 30 tubos NA Eppendorf Fisher Scientific 022620509 Centrifugadora de sobremesa con rotor para 30 tubos NA Eppendorf Fisher Scientific 022620525 Calentador digital de bloque seco VWR 120 12621 088 16 005 Bloque calefactor modular para placas de titulaci n VWWR NA 13259 295 Informaci n de contacto ea Fabricante Hologic Inc 502 S Rosa Road Madison WI 53719 EE UU Tel fono 1 608 273 8933 P gina web www hologic com Asistencia t cnica Su representante local le informar de las rutas de acceso para la asistencia t cnica fuera de EE UU Distribuidores P ngase en contacto con Hologic Inc para obtener una lista de proveedores y distribuidores en todo el mundo Tel fono 1 608 273 8933 P gina web www Hologic com Representante autorizado para la Comunidad Europea Hologic UK Ltd Link 10 Napier Way Crawley West Sussex RH10 9RA Reino Unido 44 0 1293 522 080 AVISO PARA EL DESTINATARIO DE ESTE PRODUCTO SOBRE LA LICENCIA LIMITADA Beckman Coulter fabrica Genfind DNA Extraction Kit para Hologic Inc La recepci n de este producto de Hologic o su distribuidor autorizado incluye una licencia limitada no exclusiva e intransferible bajo los derechos de patente que p2. GARANT AS Se otorga la garant a del equipo de los suministros y del software al cliente original para que act e sustancialmente seg n las especificaciones publicadas del producto durante un 1 a o desde la fecha de instalaci n si fuera aplicable o desde la fecha de entrega si esta fuera anterior Las opciones y accesorios postventa tienen una garant a de seis 6 meses y la garant a de los tubos de rayos X se corresponder con el prorrateo lineal indicado en la especificaci n del producto aplicable Periodo de garant a Las piezas de recambio est n garantizadas durante el periodo que reste de la garant a o noventa 90 d as desde la entrega si este plazo fuera mayor Los suministros consumibles est n cubiertos con la garant a indicada en las especificaciones publicadas durante un periodo que finaliza con la fecha de caducidad que figura en sus respectivos envases La garant a cubre la mano de obra necesaria para restablecer los servicios Hologic no garantiza que el uso de los productos no se interrumpa o no tenga errores ni que los productos funcionen con productos autorizados de otras casas TODA LA RESPONSABILIDAD DE HOLOGIC SE LIMITA EXPRESAMENTE A REPARAR O SUSTITUIR LOS PRODUCTOS SEGUN CONVENGA HOLOGIC Y DE LA FORMA DESPACHADA ORIGINALMENTE O CORREGIR EL SERVICIO QUE HAYA SUSCITADO ALGUNA RECLAMACION O A ELECCION DE HOLOGIC LA DEVOLUCION O CREDITO AL CLIENTE POR UN IMPORTE IGUAL AL PRECIO HONORARIO O CARGO DE
3. HOLOGIC LAS GARANT AS MENCIONADAS ANTERIORMENTE SUSTITUYEN Y EXCLUYEN CUALQUIER OTRA GARANT A QUE NO EST INDICADA AQU EXPRESAMENTE YA SEA EXPRESA O IMPLICITA CONFORME A DERECHO U OTRO TIPO INCLUIDAS AUNQUE NO EXCLUSIVAMENTE CUALQUIER GARANT A IMPLICITA DE COMERCIABILIDAD O CONFORMIDAD CON UN FIN DETERMINADO ESTA GARANT A LIMITADA SE CONCEDE UNICAMENTE AL CLIENTE ORIGINAL SIN QUE SE OTORGUE NI PUEDA SER VALIDA PARA UN TERCERO INCLUIDOS SIN SALVEDADES LOS CLIENTES DEL CLIENTE LA PRESENTE GARANT A SE CONSIDERAR NULA SI EL CLIENTE TRANSFIERE EL PRODUCTO A CUALQUIER ENTIDAD QUE POSEA MENOS DEL CINCUENTA 50 POR CIENTO DE LA TITULARIDAD DEL PRODUCTO ALGUNOS ESTADOS NO PERMITEN LA EXCLUSI N DE GARANT AS IMPL CITAS POR LO QUE PUEDE QUE NO SE LE APLIQUEN LAS EXCLUSIONES MENCIONADAS ANTERIORMENTE ASIMISMO PUEDE QUE TENGA OTROS DERECHOS QUE VARIEN DE UN ESTADO A OTRO Estas garant as no se aplicar n a ning n elemento que haya sido a reparado desplazado o alterado por otra persona que no sea personal de asistencia autorizado por Hologic b sometido a un abuso estr s o mal uso f sico incluidos t rmico o el ctrico c almacenado mantenido u operado de cualquier manera distinta a lo aconsejado por las especificaciones o instrucciones aplicables de Hologic o d suministrado con otra garant a distinta a la de Hologic o como una versi n previa a su lanzamiento o tal como est RECLAMACIONES Y RESARCIMIENTOS D
4. considerarse desechos de laboratorio Elimine los reactivos sin utilizar y los desechos seg n las normativas nacionales regionales y locales aplicables M todo con placa de 96 pocillos M todo con tubo Equipo Pipetas Agitadora vorticial Centrifugadora y rotores para placas Placa supermagn tica SPRI Plate 96R Termomezclador Thermomixer R Eppendorf MTP Block Eppendorf y placa adaptadora de 96 pocillos Calentador digital de bloque seco 120 VWR Bloque calefactor modular para placas de titulaci n VWR Sistema Cervista MTA para usuarios de automatizaci n Pipetas Agitadora vorticial Centrifugadora para tubos Soporte magn tico para 6 tubos SPRI Termomezclador Thermomixer R Eppendorf MTP Block Eppendorf y placa adaptadora de tubos de 2 0 ml MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Tabla 2 Materiales necesarios pero no suministrados Consulte la Tabla 5 para ver una lista de los suministros y equipos recomendados M todo con placa de 96 pocillos M todo con tubo Suministros consumibles Puntas de pipetas con filtro de barrera Placas de 96 pocillos Selladores de placas de l mina de metal Placas de 96 pocillos de 2 2 ml ABgene Tubos desechables sin nucleasas y tapones roscados Puntas de pipetas con filtro de barrera Tubos desechables sin nucleasas y tapones roscados Reactivos Trometamol 2M pH 7 5 Agua sin nucleasas Etanol
5. 3 minutos ii Deje reposar durante 2 3 minutos iii 1 000 rpm durante 2 3 minutos Coloque la placa en un im n durante 10 minutos o hasta que las perlas formen un anillo caracter stico y la soluci n est transparente Mientras que la placa est todav a en el im n transfiera 110 ul de la soluci n de ADN a una placa de 96 pocillos de PCR limpia utilizando una pipeta multicanal Si a n se ven las perlas en la soluci n de ADN coloque la placa de 96 pocillos de PCR en el im n y deje que todas las part culas se sedimenten Mientras que la placa est todav a en el im n transfiera 100 ul de ADN a una placa de 96 pocillos de PCR limpia Selle la placa con un sellador de placas de l mina de metal El ADN se puede almacenar a 4 8 C hasta cuatro semanas Para almacenarlo durante m s de cuatro semanas almacene la muestra de ADN en un congelador que no produzca escarcha a 20 0 80 C Muestras de citolog a en l quido PreservCyt M todo con tubo NOTA EL M TODO DE TUBO NO HA SIDO VALIDADO PARA SU USO CON LA MUESTRA DE CITOLOG A EN LIQUIDO SUREPATH 1 Mezcle bien la muestra cervical en una agitadora vorticial o agitando con fuerza Transfiera 2 0 ml de cada muestra a un tubo con tap n de rosca de 2 0 ml etiquetado y tape el tubo Centrifugue a aproximadamente 1 100 FCR durante 10 15 minutos Retire el sobrenadante utilizando una pipeta Retire aproximadamente 1 9 ml de sobrenadante dejando 50 100 pul de vo
6. CEDIMIENTO MANUAL Procedimiento de conversi n de muestras Muestras de citolog a en l quido SurePathTM m todo con placa de 96 pocillos NOTA LA MUESTRA CITOL GICA EN L QUIDO SUREPATHTM USADA EN ESTE METODO ES LA MUESTRA CERVICAL EN SEDIMENTO ENRIQUECIDO RESIDUAL PROCESADA DE ACUERDO CON EL MANUAL DEL USUARIO DEL PROCESADOR DE PORTAOBJETOS PREPSTAINTM PROCEDIMIENTO DE PROCESO PREPSTAIN M 1 Mezcle la muestra cervical de sedimento enriquecido residual mediante centrifugado o agit ndola vigorosamente Transfiera 1 0 ml de cada muestra a un pocillo de una placa de 2 2 ml de 96 pocillos 2 Centrifugue la placa de 2 2 ml de 96 pocillos a aproximadamente 1100 RCF durante 10 minutos 3 Coloque la placa de 2 2 ml en la placa SPR Plate 96R Super Magnet Plate Elimine el sobrenadante con una pipeta multicanal o un aspirador de 96 pocillos y una bomba la presi n del aspirador debe ser de aproximadamente 100 mm Hg vac Elimine el sobrenadante dejando 50 100 ul de volumen residual Tenga cuidado para eliminar nicamente el sobrenadante y no el material celular NOTA SI UTILIZA UN ASPIRADOR ACLARE EL ASPIRADOR CON AGUA DESTILADA NUEVA DE ACUERDO CON ESTE PASO 4 A ada 0 2 ml de soluci n de conversi n a cada muestra 5 Incube la placa 60 minutos en un calentador digital de bloque seco ajustado a 115 C 2 C 6 Una vez completada la incubaci n retire la placa del bloque calefactor 7 Transfiera todo el cont
7. DN vuelva a colocar la muestra en el im n Mientras que la muestra est todav a en el im n transfiera 100 pl de ADN a un tubo limpio Cierre el tubo El ADN se puede almacenar a 4 8 C hasta cuatro semanas Para almacenarlo durante m s de cuatro semanas almacene la muestra de ADN en un congelador que no produzca escarcha a 20 C o 80 C TABLA 5 EQUIPOS Y SUMINISTROS RECOMENDADOS N mero de Suministros y equipos referencia de Hologic Sistema Cervista MTA para usuarios de automatizaci n PRD 01406 Soluci n de conversi n para su uso con muestras cervicales de citolog a en l quido SurePathTM FOIE Placas con pocillos de 2 2 ml Abgene Fisher Scientific BC 3082 LBS 00006 Aspirador y separador incluye tubos tapones y conectores 12 234 Placa supermagn tica SPRI Plate 96R Beckman Coulter 12 238 Fisher Scientific NC9596962 Soporte magn tico para 6 tubos SPRI Beckman Coulter 16 1000 Fisher Scientific 001139 Termobloque intercambiable para microplacas Eppendorf Fisher 12 239 Scientific 05 400 35 Tubos de 2 0 ml para termobloque intercambiable para 16 1001 microplacas Eppendorf Fisher Scientific O5 400 204 Termomezclador Thermomixer con adaptador MTP 12 240 115 V Eppendorf Fisher Scientific O5 400 205 Bomba de vac o Gast Fisher Scientific 01 092 29 12 241 115 V Bomba de vac o Gast Fisher Scientific 01 092 26 12 262 230 V
8. E LA GARANT A En caso de cualquier reclamaci n de la garant a Hologic sustituir con elementos nuevos o reparados cualquier pieza del equipo componente o suministro consumible que est n cubiertos por la garant a y se esforzar el m ximo posible para restablecer o proporcionar una soluci n temporal ante cualquier defecto o error detectado del software que impida trabajar en conformidad sustancial con las especificaciones de funcionamiento Alternativamente Hologic podr elegir entre reparar o abonar al cliente una cantidad igual al precio de compra del equipo componente software suministro consumible o servicio defectuoso Los elementos sustituidos pasar n a ser propiedad de Hologic Todas las reclamaciones deber n iniciarse poni ndose en contacto con Hologic dentro del periodo de garant a aplicable y treinta 30 d as despu s de descubrir la rotura o disconformidad Se deber dar acceso razonable y una oportunidad a Hologic para que inspeccione todos los materiales relacionados Si tanto Hologic como el cliente fueran incapaces de resolver cualquier reclamaci n y el cliente no lo hubiera notificado en el plazo de un 1 a o desde que surgiera la reclamaci n el cliente no podr iniciar acciones legales posteriores Se entender que estos resarcimientos comprenden toda la responsabilidad por parte de Hologic y el resarcimiento exclusivo del cliente por incumplimiento de garant a y sustituyen a cualquier otro resarcimiento por d
9. HOLOGIC Genfind DNA Extraction Kit REF 95 449 Uso previsto Kit para la extracci n de ADN Za C Hologic UK Ltd Link 10 Napier Way Crawley West Sussex RH10 9RA Reino Unido 44 0 1293 522 080 S LO PARA EXPORTACI N NO PARA SU VENTA EN LOS ESTADOS UNIDOS DE AMERICA O CANADA Ref 15 3221 301 Revisi n 102 NDICE DE CONTENIDOS REACTIVOS SUMINISTRADOS Y REQUISITOS PARA SU ALMACENAMIENTO ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS PREPARACI N DE REACTIVOS INSTRUCCIONES DE USO EQUIPOS Y SUMINISTROS RECOMENDADOS REACTIVOS SUMINISTRADOS Y REQUISITOS PARA SU ALMACENAMIENTO Tabla 1 Genfind DNA Extraction Kit REF 95 449 Contenido y requisitos para su almacenamiento z Abreviatura Descripci n del Requisito eactivo en la componente para su etiqueta almacenamiento Enzima liofilizada 30 a 15 C pahe ds PK Viales de 1 ml Almacenar Ultrapura congelada 15 C a 30 C Tamp n para LB Soluci n para lisis celular Almacenar a lisis Genfind 0 45 um filtrada temperatura ambiente Tamp n de Soluci n de perlas 2Ca8 sz Ei ci BB magn ticas Refrigerar uni n Genfind 0 45 um filtrada No congelar levado ADN 15 C a 30 Tamp n para y Almacenar a lavado Genfind wB Etiquetamarcada temperatura con rayas azules A ambiente 0 45 um filtrada ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES 1 Para uso diagn stico in vitro 2 Existen varias condiciones de
10. al 70 para biolog a molecular Soluci n de conversi n e Trometamol 2M pH 7 5 Agua sin nucleasas Etanol al 70 para biolog a molecular PREPARACI N DE REACTIVOS Equilibre todos los reactivos a temperatura ambiente antes de usarlos i 2 Prepare una soluci n de trometamol 10 mM a partir de una soluci n madre de trometamol 2M pH 7 5 En la Tabla 3 se muestra una preparaci n recomendada para procesar muestras en placas de 96 pocillos Tabla 3 Preparaci n de trometamol 10 mM Trometamol 2M pH 7 5 100 ul 199 m1 Volumen total de soluci n C 20mt Combine el tamp n para lisis y la proteinasa K 96 ug pl en un tubo c nico de tama o apropiado seg n la Tabla 4 Mezcle pipeteando hacia arriba y hacia abajo Tabla 4 Preparaci n del tamp n para lisis Volumen N mero muestra de muestras x Volumen total Componente Tamp n para lisis 400 ul 400 ul x 1 2 9 1 00 1 2 409 1 09 1 2 Proteinasa K 9 ul Soluci n LB PK 409 ul INSTRUCCIONES DE USO PARA EL SISTEMA CERVISTA MTA Consulte el Manual del usuario de Cervista MTA ref MAN 02378 002 para conocer las instrucciones de uso del sistema Cervista MTA NOTA ANTES DE USAR EL SISTEMA CERVISTA MTA PARA LA EXTRACCI N DE ADN GENFIND DE LA MUESTRA DE CITOLOG A EN L QUIDO SUREPATH M LA MUESTRA DEBE SER TRATADA DE ACUERDO CON EL PROCEDIMIENTO DE CONVERSI N DE MUESTRA INSTRUCCIONES DE USO PARA EL PRO
11. almacenamiento consulte la Tabla 1 3 Se deber n tomar precauciones de seguridad universales cuando se manipule cualquier tejido o l quido humano Se deber n desechar las muestras seg n los requisitos locales en materia de gesti n de residuos Siga buenas pr cticas de laboratorio Prot jase con guantes desechables batas de laboratorio y protecci n en los ojos cuando manipule muestras y los reactivos del kit L vese las manos minuciosamente despu s de manipular muestras y reactivos No mezcle reactivos de diferentes lotes o de diferentes viales botellas del mismo lote No use reactivos despu s de su fecha de caducidad Antes de utilizarla deber disolver la enzima proteinasa K liofilizada en agua sin nucleasas Deber a adir 1 ml de agua a cada vial cuando sea necesario Cuando est resuspendida con agua se deber dividir el vial de 1 ml de proteinasa K en partes al cuotas y congelar de nuevo a una temperatura de entre 30 C a 15 C en un congelador que no produzca escarcha Descongele solo la proteinasa K que necesite para cada extracci n La repetida congelaci n y descongelaci n de la enzima puede provocar una p rdida de su funci n Si se ha formado un precipitado blanco en el tamp n de lavado ag telo suavemente o remu valo a temperatura ambiente hasta que se disuelvan los s lidos antes de usarlo No lo caliente para recombinarlo Los componentes del producto restos del producto envase pueden
12. as NOTA UTILICE UN SEPARADOR SI FUERA NECESARIO PARA EL RESTO DE PASOS DE ASPIRACI N SI UTILIZA UN ASPIRADOR DE 96 POCILLOS Y UNA BOMBA Retire la placa del im n y del separador y a ada 400 ul de tamp n de lavado a los pocillos de la placa con perlas Coloque la placa en un termomezclador y mezcle a 1 000 rpm durante 4 6 minutos Coloque la placa supermagn tica SPRI Plate 96R en el separador y coloque la placa de 2 2 ml en el im n durante 4 6 minutos o hasta que las perlas formen un anillo caracter stico y la soluci n quede transparente Aspire todo el sobrenadante procurando no alterar las perlas NOTA LA PLACA DEBER PERMANECER EN EL IM N Y EN EL SEPARADOR DURANTE LOS PASOS 12 14 A ada 400 pl de etanol al 70 a los pocillos con perlas e incube durante 30 60 segundos Las perlas deber n formar un anillo caracter stico Aspire todo el sobrenadante Repita el lavado con etanol al 70 a adiendo 400 ul de etanol al 70 a los pocillos con perlas e incube durante 30 60 segundos Las perlas deber n formar un anillo caracter stico Aspire todo el sobrenadante Deje que las perlas se sequen al aire durante 3 4 minutos NOTA ES IMPORTANTE ELIMINAR CUALQUIER RESTO DE ETANOL ANTES DE PROCEDER AL SIGUIENTE PASO 15 16 17 18 19 20 Retire la placa del im n y a ada 120 ul de trometamol 10 mM a cada pocillo con perlas Coloque la placa en un termomezclador y mezcle alternando a i 1 000 rpm durante 2
13. enido de cada muestra convertida a un pocillo de una segunda placa de 2 2 ml que contenga 1 59 ml de agua NOTA UTILICE PUNTAS NUEVAS CON CADA TRANSFERENCIA DE L QUIDO DE LA MUESTRA Para el m todo manual con placa de 96 pocillos contin e en el paso 2 de la secci n Muestras de citolog a en l quido PreservCyt y muestras de citolog a en l quido SurePathTM convertidas m todo con placa de 96 pocillos Para el sistema MTA consulte el Manual del usuario de Cervista MTA referencia MAN 02378 002 para conocer las instrucciones de uso del sistema Cervista MTA NOTA SI SE DESEA LAS MUESTRAS DE CITOLOG A EN L QUIDO PRESERVCYT PUEDEN PROCESARSE CONJUNTAMENTE CON EL PROCESO DE EXTRACCION DE ADN GENFIND EN CUALQUIERA DE LOS POCILLOS VAC OS DE LA PLACA DE 2 2 ML APLICANDO LAS MUESTRAS SUREPATH M CONVERTIDAS Y AGUA Procedimiento de extracci n de ADN Gentfind Muestras de citolog a en l quido PreservCyt y muestras de citolog a en l quido SurePath M convertido m todo con placa de 96 pocillos 1 Mezcle bien la muestra cervical en una agitadora vorticial o agitando con fuerza Transfiera 2 0 ml de cada muestra a una placa de 96 pocillos de 2 2 ml 2 Centrifugue la placa de 96 pocillos de 2 2 ml a una fuerza relativa centr fuga de aproximadamente 1 100 FCR durante 10 15 minutos 3 Coloque la placa de 2 2 ml en la placa supermagn tica SPRI Plate 96R Retire el sobrenadante utilizando una pipeta multicanal o
14. erecho o equidad L MITE DE RESPONSABILIDAD HOLOGIC NO SE RESPONSABILIZAR DE NINGUNA PERDIDA DA O O GASTO INCLUIDOS AUNQUE NO EXCLUSIVAMENTE PERDIDA DE BENEFICIOS DATOS O USO ESPECIAL ACCIDENTAL PUNITIVO EJEMPLAR O RESULTANTE QUE SURJA DIRECTA O INDIRECTAMENTE DE LA VENTA MANIPULACI N SERVICIO O USO DEL PRODUCTO PEDIDO O SUMINISTRADO NI DE NINGUNA CAUSA RELACIONADA CON EL MISMO A NO SER QUE LAS PARTES ASI LO ACUERDEN EXPRESAMENTE POR ESCRITO CON LA EXCEPCI N DE DA OS PERSONALES O MUERTE CAUSADOS POR ACTOS U OMISIONES NEGLIGENTES O INTENCIONADOS POR ERROR POR PARTE DE HOLOGIC EN NING N CASO SE CONSIDERAR A HOLOGIC RESPONSABLE BAJO NINGUNA TEOR A LEGAL O POR CUALQUIER OTRA CAUSA YA SEA EN BASE A LA GARANT A CONTRATO RESPONSABILIDAD EXTRACONTRACTUAL NEGLIGENCIA O CUALQUIER OTRA TEOR A INCLUSO EN EL CASO DE SER ADVERTIDO DE ESTA POSIBILIDAD DE NINGUNA CANTIDAD QUE EXCEDA EL PRECIO HONORARIO O CARGO QUE PERCIBA HOLOGIC POR EL MISMO PreservCyt es una marca comercial registrada de Hologic Inc SPRI y Genfind son marcas comerciales registradas de Beckman Coulter Todas las otras marcas comerciales marcas comerciales registradas que aparecen en el folleto de este producto son propiedad de cada una de sus respectivas empresas 2011 Hologic Inc Ref 15 3221 301 Revisi n 102
15. lumen residual Aseg rese de retirar solo el sobrenadante y no el material celular A ada 400 pul de la mezcla de tamp n para lisis proteinasa K a cada tubo NOTA UTILICE PUNTAS NUEVAS PARA CADA MUESTRA EN TODOS LOS PASOS DE TRANSFERENCIA DE L QUIDO Incube los tubos en un termomezclador durante 15 minutos a 37 G 2 C y 1000 rpm NOTA DESPUES DE ESTE PASO APAGUE EL TERMOSTATO DEL TERMOMEZCLADOR EL TERMOSTATO DEL TERMOMEZCLADOR DEBERA PERMANECER APAGADO EN EL RESTO DE PASOS 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 IMPORTANTE Mezcle bien el tamp n de uni n invirtiendo la botella varias veces asegur ndose de que las perlas est n completamente resuspendidas Despu s de mezclar a ada 200 pl a cada tubo Coloque los tubos en un termomezclador y mezcle a 1 000 rpm durante 2 3 minutos Coloque los tubos de muestra en un im n durante 4 6 minutos y espere hasta que la soluci n quede transparente Mientras los tubos est n en el im n retire el sobrenadante con una pipeta Retire los tubos del im n y a ada 400 pul de tamp n de lavado a cada tubo Coloque los tubos en un termomezclador y mezcle a 1 000 rpm durante 4 6 minutos Coloque los tubos de muestra en un im n durante 4 6 minutos y espere hasta que la soluci n quede transparente Mientras los tubos est n en el im n retire el sobrenadante con una pipeta A ada 400 pl de etanol al 70 a cada muestra coloque los tubos en el term
16. omezclador y mezcle a 1 000 rpm durante 1 minuto Coloque los tubos de muestra en un im n durante 4 6 minutos y espere hasta que la soluci n quede transparente Mientras los tubos est n en el im n retire el sobrenadante con una pipeta Nota Los tubos deber n permanecer en el im n durante los pasos 14 y 15 Repita el lavado con etanol al 70 a adiendo 400 ul de etanol al 70 a las muestras y deje reposar durante 30 60 segundos No resuspenda las perlas Retire el sobrenadante utilizando una pipeta Repita el lavado con etanol al 70 de nuevo a adiendo 400 pl de etanol al 70 a las muestras y deje reposar durante 30 60 segundos No resuspenda las perlas Retire el sobrenadante utilizando una pipeta Coloque los tubos en un termomezclador y mezcle a 1 000 rpm durante 3 4 minutos para secar las perlas NOTA ES IMPORTANTE ELIMINAR CUALQUIER RESTO DE ETANOL ANTES DE PROCEDER AL SIGUIENTE PASO Retire los tubos del im n y a ada 120 ul de trometamol 10 mM a cada muestra Coloque los tubos en un termomezclador y mezcle alternando a i 1 000 rpm durante 2 3 minutos li Deje reposar durante 2 3 minutos iii 1 000 rpm durante 2 3 minutos Coloque los tubos en un im n durante 10 minutos y espere hasta que la soluci n quede transparente 20 21 22 Mientras los tubos est n todav a en el im n transfiera 110 pul de la soluci n de ADN a un tubo limpio Si las perlas est n presentes visualmente en la soluci n de A
17. osee Beckman Coulter La compra de este producto constituye la aceptaci n por parte del destinatario de esta licencia limitada Los destinatarios que no est n dispuestos a aceptar la licencia limitada deber n devolver el producto para que se les reembolse la cantidad total pagada por el mismo Dicha licencia se concede nicamente con el prop sito de usar este producto para aislar material gen mico La anterior licencia no incluye ninguna licencia para el uso del producto en la investigaci n o el desarrollo de nuevos productos la fabricaci n de productos o su retroingenier a mejoras de la tecnolog a de este producto ni otros prop sitos comerciales El comprador de este producto no est autorizado a transferir este producto a ning n tercero para ning n fin sin el expreso consentimiento por escrito de Hologic Con excepci n de lo expresamente expuesto en este p rrafo no se concede ninguna otra licencia de manera expl cita impl cita o por exclusi n Para m s informaci n sobre la disponibilidad de licencias adicionales para la pr ctica de metodolog as patentadas p ngase en contacto con Legal Department Hologic Inc 502 South Rosa Rd Madison WI 53719 1 608 273 8933 Genfind DNA Extraction Kit utiliza tecnolog a de perlas paramagn ticas SPRI y otros componentes protegidos por las patentes de EE UU n 5 705 628 5 898 071 6 534 262 y todos sus equivalentes internacionales GARANT A LIMITADA DEL PRODUCTO
18. un aspirador de 96 pocillos y una bomba la presi n del aspirador deber ser de aproximadamente 100 mm Hg vac Retire aproximadamente 1 9 ml de sobrenadante dejando 50 100 ul de volumen residual Aseg rese de retirar solo el sobrenadante y no el material celular NOTA Sl SE UTILIZA UN ASPIRADOR ACLARE CON AGUA DESTILADA NUEVA SIGUIENDO LOS PASOS 3 8 11 12 y 14 10 11 12 13 14 A ada 400 ul de la mezcla de tamp n para lisis proteinasa K a cada pocillo con muestra de la placa de 96 pocillos NOTA UTILICE PUNTAS NUEVAS PARA CADA POCILLO CON MUESTRA EN TODOS LOS PASOS DE TRANSFERENCIA DE L QUIDO Incube la placa en un termomezclador durante 15 minutos a 37 C 2 C y 1 000 rem NOTA DESPUES DE ESTE PASO APAGUE EL TERMOSTATO DEL TERMOMEZCLADOR EL TERMOSTATO DEL TERMOMEZCLADOR DEBER PERMANECER APAGADO EN EL RESTO DE PASOS IMPORTANTE Mezcle bien el tamp n de uni n invirtiendo la botella varias veces asegur ndose de que las perlas est n completamente resuspendidas Despu s de mezclar a ada 200 pl a cada pocillo con muestra de la placa de 96 pocillos Incube la placa en un termomezclador y mezcle a 1 000 rem durante 2 3 minutos Coloque la placa supermagn tica SPRI Plate 96R en el separador y coloque la placa de 2 2 ml en el im n durante 4 6 minutos o hasta que las perlas formen un anillo caracter stico y la soluci n quede transparente Aspire todo el sobrenadante procurando no alterar las perl
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