FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD21 Clone 1F8
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1. FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD21 Clone 1F8 Ready to Use CE Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS608 ENGLISH Intended use Synonyms for antigen Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied 115312 003 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD21 Clone 1F8 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody labels follicular dendritic cells and mature B cells and is useful for the identification of structural alterations in the meshwork of follicular dendritic cells which are frequently found in malignant Iymphomas 1 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist C3d receptor CR2 EBV receptor 2 CD21 is a transmembrane glycoprotein belonging to a family of complement regulatory proteins comprising CD35 C4 binding protein factor H and CD55 CD21 has a Mr of 145 000 and in its soluble form sCD21 a Mr of 130 000 The extracellular region consists of multiple s2. Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Staining interpretation Performance characteristics FRANCAIS Utilisation pr vue Synonymes de l antig ne R sum et explication R actifs fournis Immunog ne Sp cificit Pr cautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni 115312 003 Cells labeled by the antibody display membrane staining Normal tissues In reactive lymphoid hyperplasia the antibody strongly labels germinal centre FDCs in 11 11 cases with a densely meshed FDC staining of the light zone and a loosely arranged much less compact FDC staining of the dark zone The antibody labels plasma cells and gives a faint and less consistent labeling of lymphocytes in the mantle zone Sinus lining cells and monocytoid B cells are weakly labeled 1 The follicular dendritic cells in the germinal centers of tonsil show a moderate to strong staining reaction whereas a subset of activated B cells in the mantle zone show a weak to moderate staining reaction Abnormal tissues In 6 cases of B cell chronic Iymphocytic leukemia the antibody showed weak surface labeling of neoplastic cells in four cases and labeled FDCs in the sparse residual germinal centres in four cases In 8 8 mantle cell lymphomas the antibody labeled loosely arranged ill defined and expan
3. 9 de ces cas o des cellules de Reed Sternberg et de Hodgkin taient marqu es par l anticorps les cellules n ont exprim aucun autre marqueur associ aux lymphocytes B ou T 6 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD21 Clone 1F8 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Der Antik rper markiert follikul re dendritische Zellen und reife B Zellen und dient zur Identifizierung struktureller Ver nderungen im Netzwerk der follikul ren dendritischen Zellen die h ufig in b sartigen Lymphomen auftreten 1 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit geeigneten Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer diagnostischer Tests des Patienten vorgenommen werden C3d Rezeptor CR2 EBV Rezeptor 2 CD21 ist ein transmembranes Glykoprotein aus der Familie komplementregulierender Proteine wie u a CD35 C4 bindendes Protein Faktor H und CD55 CD21 hat ein Mr von 145 000 und in seiner l slichen Form sCD21 ein Mr von 130 000 Die extrazellul re Region besteht aus mehreren Kurzkonsenswiederholungen die mehrere klare ligandenbindende Stellen enthalten Die Bindung der spezifischen Liganden ergibt eine differenzielle transmembran se Signaltransduktion ber den zytoplasma
4. dans sa forme soluble sCD21 une masse mol culaire de 130000 La r gion extracellulaire comprend de nombreuses r p titions de nombreuses s quences courtes qui comportent plusieurs sites de liaison des ligands distincts La liaison de ligands sp cifiques se traduit par une signalisation transmembranaire diff rentielle via la queue cytoplasmique qui peut comporter des sites de phosphorylation de la prot ine kinase C et de la tyrosine kinase 2 3 La CD21 est exprim e par les cellules dendritiques folliculaires et les lymphocytes B matures 3 Les dendritiques folliculaires forment un tissu tridimensionnel de follicules des lymphocytes B qui d finit apparemment la structure du compartiment folliculaire 1 Sur les lymphocytes B du tissu lympho de l expression de la CD21 est forte sur une zone marginale et mod r e sur les lymphocytes B de la zone du manteau Les lymphocytes B du centre germinatif se sont av r tre n gatifs la plupart des mAb de la CD21 et les lymphocytes B de la moelle osseuse pr sentent une expression tr s faible voire aucune expression de la CD21 L expression de la CD21 se perd progressivement en m me temps que les IgD apr s stimulation des lymphocytes B au repos in vitro En outre la CD21 s avere pr sente sur plusieurs types de cellules pith liales et s accompagne d une faible expression sur les cellules de leuc mies Iymphoblastiques aigu s lymphocytes T de sous ensembles de thymocytes normaux
5. benen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER ist erforderlich Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Code Nr 8015 erzielt werden Entparaffinierte Schnitte Die Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte sollte mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 erfolgen Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8015 durchf hren F r PT Link sollten die folgenden Parameter verwendet werden Vorw rmtemperatur 65 Temperatur und Zeit f r Epitopdema
6. bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 C Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L paisseur des coupes d chantillons de tissu d
7. ded FDC meshworks of either nodular or diffuse patterns resembling broken up primary follicles In 11 11 follicular lymphomas the abnormal follicles demonstrated dense sharply defined expanded and sometimes merging FDC meshworks However only loose and patchy FDC labeling was observed in five cases with high grade transformation in the areas of diffuse large cell l mphoma In 7 7 low grade MALT type B cell lymphomas the antibody labeled expanded FDC meshworks with particularly dense and confluent appearance in cases of primary salivary gland and gastric lymphomas In 5 5 T cell and histiocyte rich B cell lymphomas the antibody labeled a few compressed residual follicles at the periphery of the Iymphomatous involvement In 9 9 angioimmunoblastic T cell l mphomas clusters of dendritic cells with FDC morphology appeared with frequent incorporation of proliferating postcapillary venules In 4 4 nodular lymphocyte predominance Hodgkin s lymphomas the antibody labeled enlarged FDC meshworks overlapping the expanded mantle zones In 15 cases of Hodgkin s Iymphoma of nodular sclerosing subtype the antibody labeled sharply defined sometimes irregular FDC meshworks surrounding the negative tumor cells in 11 cases of grade and showed sparse or no labeling in 4 cases of grade Il disease 1 In follicular dendritic sarcoma the antibody labeled neoplastic cells in 17 17 cases 5 In another study 6 the antibody labeled Reed Sternberg and Hodgkin s cells
8. em Molecul Morphol 2001 9 117 24 Timens W CD Guide CD21 In Kishimoto T Kikutani H von dem Borne AEG Goyert SM Mason DY Miyasaka M et al editors Leucocyte typing VI White cell differentiation antigens Proceedings of the 6th International Workshop and Conference 1996 Nov 10 14 Kobe Japan New York London Garland Publishing Inc 1997 p 1125 Timens W BC5 CD21 workshop panel report In Kishimoto T Kikutani H von dem Borne AEG Goyert SM Mason DY Miyasaka M et al editors Leucocyte typing VI White cell differentiation antigens Proceedings of the 6th International Workshop and Conference 1996 Nov 10 14 Kobe Japan New York London Garland Publishing Inc 1997 p 140 2 Petzer AL Schulz TF Stauder R Eigentler A Myones BL Dierich MP Structural and functional analysis of CR2 EBV receptor by means of monoclonal antibodies and limited tryptic digestion Immunology 1988 63 47 53 Chan JKC Fletcher CDM Nayler SJ Cooper K Follicular dendritic cell sarcoma Clinicopathologic analysis of 17 cases suggesting a malignant potential higher than currently recognized Cancer 1997 79 294 313 Nakamura S Nagahama M Kagami Y Yatabe Y Takeuchi T Kojima M et al Hodgkin s disease expressing follicular dendritic cell marker CD21 without any other B cell marker A clinicopathologic study of nine cases Am J Surg Pathol 1999 23 363 76 Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole Catal
9. et de lymphocytes T matures 3 Se r f rer aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone 1F8 4 Isotype IgG1 kappa Pr paration de CD21 purifi e issue d amygdale humaine une puret de 60 4 Dans les analyses par Western blot de l immunog ne l anticorps marque des bandes de 145 kDa correspondant la CD21 L Epitope reconnu par l anticorps est situ au sein d un fragment de liaison de la C3d de 72 kDa 4 L anticorps marque les cellules ou lign es cellulaires connues pour exprimer la CD21 Raji NC 37 cellules d amygdale alors qu aucun marquage n est observ dans les cellules de Jurkat n gatives la CD21 lign e de lymphocytes T et dans les rythrocytes humains 4 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit
10. ffer for 1 5 minutes Paraffin embedded sections As alternative specimen preparation both deparaffinization and epitope retrieval can be performed in the PT Link using a modified procedure See the PT Link User Guide for instructions After the staining procedure has been completed the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of Dako Silanized Slides Code S3003 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 replacing the High pH Target Retrieval Solution from this kit with EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8015 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTUS3 300 uL dispense volume Autoprogram CD21 without counterstaining or CD21H with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation ste
11. hort consensus repeats which contain several distinct ligand binding sites Binding of the specific ligands results in differential transmembrane signalling via the cytoplasmic tail that has potential protein kinase C and tyrosine kinase phosphorylation sites 2 3 CD21 is expressed by follicular dendritic cells FDCs and mature B cells 3 FDCs form a three dimensional meshwork in B cell follicles which apparently defines the structure of the follicular compartment 1 On Iymphoid tissue B cells CD21 expression is strong on marginal zone and moderate on mantle zone B cells Germinal centre B cells have been found to be negative with most CD21 mAbs and bone marrow B cells have little or no CD21 expression The expression of CD21 is gradually lost together with IgD after stimulation of resting B cells in vitro Further CD21 has been found on several types of epithelial cells and with low expression on T cell acute Iymphoblastic leukemic cells subsets of normal thymocytes and mature T cells 3 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein a
12. igen eine m ige bis starke F rbereaktion w hrend eine Untergruppe aktivierter B Zellen in der Mantelzone eine schwache bis m ige F rbereaktion zeigen Pathologisches Gewebe In 6 F llen von chronischer Iymphozyt rer B Zellen Leuk mie zeigte der Antik rper eine schwache Oberfl chenmarkierung neoplastischer Zellen in vier F llen und markierte FDCs in vereinzelten Keimzentrumsresten in vier F llen In 8 von 8 Mantelzelllymphomen markierte der Antik rper locker angeordnete schlecht definierte und erweiterte FDC Netzwerke von nodul rer oder diffuser Gestalt die gebrochenen prim ren Follikeln hneln In 11 von 11 follikul ren Lymphomen zeigten die pathologischen Follikel dichte klar definierte erweiterte und manchmal sich mischende FDC Netzwerke Allerdings wurde in f nf Fallen mit hoher Transformation in den Bereichen mit diffusem groBzelligem Lymphom nur vereinzelt lockere FDC Markierung beobachtet In 7 von 7 niedriggradigen MALT Typ B Zellen Lymphomen markierte der Antik rper erweiterte FDC Netzwerke mit besonders dichter und konfluenter Erscheinung in F llen von prim ren Speicheldr sen und Magenlymphomen In 5 von 5 T Zell und histiozytenreichen B Zell Lymphomen markierte der Antik rper einige komprimierte Restfollikel im Peripheriebereich des Iymphomatosen Bereichs In 9 von 9 angioimmunblastischen T Zell Lymphomen erschienen Gruppen dendritischer Zellen mit FDC Morphologie mit h ufiger Aufnahme proliferierender postkapillarer Ve
13. in 7 37 cases of nodular sclerosing 2 41 cases of mixed cellularity and 5 12 cases of lymphocyte depletion Hodgkin s lymphoma whereas no labeling of tumor cells was observed in 4 cases of lymphocyte predominance type In nine of the cases where Reed Sternberg and Hodgkin s cells were labeled by the antibody the cells expressed no other B or T cell associated markers 6 Pour utilisation diagnostique in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD21 clone 1F8 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus Cet anticorps marque les cellules dendritiques folliculaires et les lymphocytes B matures et facilite l identification des alt rations structurelles dans le tissu de cellules dendritiques folliculaires qui sont souvent pr sentes dans les Iymphomes malins 1 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi R cepteur de C3d CR2 r cepteur de l EBV 2 La CD21 est une glycoprot ine transmembranaire qui appartient une famille de prot ines r gulatrices du compl ment comprenant la CD35 la prot ine de liaison C4 le facteur H et la CD55 La CD21 a une masse mol culaire de 145000 et
14. mmand d effectuer une contre coloration l aide de EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre l amygdale et les cellules structures doivent pr senter des sch mas de r action tels que d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus R f IS750 Les cellules marqu es par l anticorps pr sentent une coloration membranaire Tissus sains Dans l hyperplasie Iymphoide r active l anticorps marque fortement les cellules dendritiques folliculaires du centre germinatif dans 11 cas sur 11 avec une coloration des cellules dendritiques folliculaires fortement intriqu e dans la zone claire et une coloration des cellules dendritiques folliculaires organis es de mani re plus libre et moins compacte dans la zone sombre L anticorps marque les cellules plasmatiques et entra ne un marquage faible et moins homogene des lymphocytes de la zone du manteau Les cellules de la paroi sinusale et les lymphocytes B monocyto des sont faiblement marqu s 1 Les cellules dendritiques folliculaire
15. muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Mandelgewebe enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS750 Auswertung der F rbung Mit diesem Antik rper markierte Zellen weisen eine Membranf rbung auf Leistungsmerkmale Gesundes Gewebe Bei reaktiver Iymphoider Hyperplasie markiert der Antik rper Keimzentrum FDCs in 11 von 11 F llen stark mit einer dicht vernetzten FDC F rbung der hellen Zone und einer locker angeordneten viel weniger kompakten FDC F rbung der dunklen Zone Der Antik rper markiert Plasmazellen und erzeugt eine schwache und weniger konsistente Markierung von Lymphozyten in der Mantelzone Sinusdeckzellen und monozytoide B Zellen werden schwach markiert 1 Die follikul ren dendritischen Zellen im Keimzentrum der Mandeln ze
16. nd 0 015 mol L sodium azide Clone 1F8 4 Isotype IgG1 kappa CD21 preparation purified from human tonsils to 60 purity 4 In Western blotting of the immunogen the antibody labels a band of 145 kDa corresponding to CD21 The epitope recognized by the antibody is located within a 72 kDa C3d binding fragment 4 The antibody labels cells or cell lines known to express CD21 Raji NC 37 tonsil cells whereas no labeling is observed in the CD21 negative Jurkat cells T cell line and human erythrocytes 4 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date sta mped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls sh
17. nolen In 4 von 4 nodul ren durch Pr dominanz von Lymphozyten gekennzeichneten Hodgkin Lymphomen markierte der Antik rper vergr erte FDC Netzwerke die die erweiterten Mantelzonen berlappen In 15 F llen von Hodgkin Lymphomen des nodul ren sklerosierenden Untertyps markierte der Antik rper klar definierte manchmal unregelm ige FDC Netzwerke um die negativen Tumorzellen in 11 F llen mit Grad und zeigte zerstreute oder keine Markierung in 4 F llen mit Grad Il Erkrankung 1 Bei follikul rem dendritischem Sarkom markierte der Antik rper neoplastische Zellen in 17 von 17 F llen 5 In einer anderen Studie 6 markierte der Antik rper Reed Sternberg und Hodgkin Zellen in 7 von 37 F llen von nodul r sklerosierendem 2 von 41 F llen von gemischtzelligem und 5 von 12 F llen von Iymphozytenarmem Hodgkin Lymphom wohingegen keine Markierung von Tumorzellen in 4 F llen des durch Pr dominanz von Lymphozyten gekennzeichneten Typs beobachtet wurde In neun F llen in denen Reed Sternberg und Hodgkin Zellen durch den Antik rper markiert wurden exprimierten die Zellen keine anderen auf B oder T Zellen bezogenen Marker 6 References References Literatur 1 Bagdi E Krenacs L Krenacs T Miller K Isaacson PG Follicular dendritic cells in reactive and neoplastic lymphoid tissues a reevaluation of staining patterns of CD21 CD23 and CD35 antibodies in paraffin sections after wet heat induced epitope retrieval Appl Immunohistoch
18. ogue number Temperature limitation Use by R f rence catalogue Limites de temp rature Utiliser avant Bestellnummer Zul ssiger Temperaturbereich Verwendbar bis In vitro diagnostic medical device Contains sufficient for lt n gt tests Manufacturer Dispositif m dical de diagnostic in vitro Contenu suffisant pour lt n gt tests Fabricant In vitro Diagnostikum Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Hersteller Consult instructions for use Batch code Voir les instructions d utilisation Num ro de lot Gebrauchsanweisung beachten Chargenbezeichnung 115312 003 IS608 EFG LPF 25 04 08 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17
19. oit tre d environ 4 um Le pr traitement avec un d masquage d Epitope induit par la chaleur HIER est n cessaire Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8015 Coupes d paraffin es Le pr traitement des coupes de tissus d paraffin s fix s au formol et inclus en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice pour la EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8015 Les param tres suivants doivent tre utilis s pour le PT Link temp rature de pr chauffage 65 temp rature et dur e de restauration de l pitope 97 pendant 20 1 minutes laisser re froidir jusqu 65 Retirer le portoir lames et les lames Autostainer de la cuve du PT Link et plonger imm diatement les lames dans un r cipient une cuve ex PT Link Rinse Station R f PT109 contenant du EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 dilu temp rature ambiante Laisser les lames dans le Wash Buffer pendant 1 5 minutes Coupes incluses en paraffine Comme pr paration alternative des chantillons le deparaffinage et la restauration de l Epito
20. ould be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8015 Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8015 The following parameters should be used for PT Link Pre heat temperature 65 epito pe retrieval temperature and time 97 for 20 1 minutes cool down to 65 Remove Autostainer slide rack with s lides from the PT Link tank and immediately dip slides into a jar tank e g PT Link Rinse Station Code PT109 containing diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 Leave slides in Wash Bu
21. pe peuvent tre r alis s dans le PT Link l aide d une proc dure modifi e Se r f rer aux instructions du Guide d utilisation du PT Link Une fois que la proc dure de coloration est termin e les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ou lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames Dako Silanized Slides R f S3003 Le syst me de visualisation recommand est EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 rempla ant la High pH Target Retrieval Solution de ce kit par la EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8015 Les tapes de coloration et les temps d incubation sont pr programm s dans le logiciel Dako Autostainer Autostainer Plus des instruments l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume de distribution de 200 uL ou FLEXRTUS3 volume de distribution de 300 uL Autoprogram CD21 sans contre coloration ou CD21H avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l amp tape Auxiliary doit tre r gl e su
22. phocytes T et de lymphomes lymphocytes B riches en histiocytes l anticorps a marqu quelques follicules r siduels comprim s la p riph rie de l engagement lymphomateux Dans 9 cas sur 9 de lymphome lymphocytes T angio immunoblastiques des foyers de cellules dendritiques ayant une morphologie de cellules dendritiques folliculaires sont apparus avec une incorporation fr quente de veinules post capillaires prolif rantes Dans 4 cas sur 4 de lymphome hodgkinien nodulaire pr dominance Iymphocytaire l anticorps a marqu des tissus de cellules dendritiques folliculaires tendus chevauchant les zones du manteau tendues Dans 15 cas de lymphome d Hodgkin de sous type nodulaire scl rosant l anticorps a marqu des tissus de cellules dendritiques folliculaires nettement d finis parfois irr guliers entourant des cellules tumorales n gatives dans 11 cas de grade et a pr sent un marquage pars voire aucun marquage dans 4 cas de grade Il 1 Dans le sarcome dendritique folliculaire l anticorps a marqu les cellules n oplasiques dans 17 cas sur 17 5 Dans une autre tude 6 l anticorps a marqu des cellules de Reed Sternberg et d Hodgkin dans 7 cas sur 37 de maladie nodulaire scl rosante 2 cas sur 41 de lymphome cellularit mixte et 5 cas sur 12 de lymphome hodgkinien d pl tion lymphocytaire alors qu aucun marquage de cellules tumorales n a t observ dans 4 cas de type pr dominance lymphocytaire Dans
23. ps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include tonsil and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS750 IS608 EFG LPF 25 04 08 p 1 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup
24. r none IS608 EFG LPF 25 04 08 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Interpr tation de la coloration Caract ristiques de performance DEUTSCH Zweckbestimmung Synonyme f r das Antigen Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifitat Vorsichtsma nahmen Lagerung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 115312 003 Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temperature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la re programmation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est reco
25. rendes Protein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Klon 1F8 4 Isotyp IgG1 Kappa CD21 Pr parat aus menschlichem Mandelgewebe zu 60 rein 4 Beim Western Blotting des Immunogens markiert der Antik rper Banden von 145 kDa was CD21 entspricht Das vom Antik rper erkannte Epitop ist innerhalb eines 72 kDa schweren C3d bindenden Fragments lokalisiert 4 Der Antik rper markiert Zellen oder Zelllinien von denen bekannt ist dass sie CD21 exprimieren Raji NC 37 Mandelgewebezellen wohingegen keine Markierung in den CD21 negativen Jurkat Zellen T Zelllinie und menschlichen Erythrozyten beobachtet wird 4 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schch en aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angege
26. s des centres germinatifs des amygdales pr sentent une coloration mod r e forte tandis que la coloration d un sous ensemble de lymphocytes B activ s est faible mod r e Tissus tumoraux Dans 6 cas de leuc mie Iymphocytaire chronique lymphocytes B l anticorps entra ne un marquage de surface faible des cellules n oplasiques dans quatre cas ainsi qu un marquage des cellules dendritiques folliculaires dans les centres germinatifs r siduels pars dans quatre cas Dans 8 cas sur 8 de lymphome cellules du manteau l anticorps a marqu des tissus de cellules dendritiques folliculaires tendus mal d finis et peu denses soit nodulaires soit diffus ressemblant des follicules primaires bris s Dans 11 cas sur 11 de lymphome folliculaire les follicules anormaux ont pr sent un tissu de cellules dendritiques folliculaires dense nettement d fini tendu et parfois fusionnant Cependant seul un marquage des cellules dendritiques folliculaires peu denses et r parties de mani re irr guli re a t observ dans cinq cas avec une transformation de haut grade dans les zones de lymphome diffus grandes cellules Dans 7 cas sur 7 de lymphome lymphocytes B de type MALT de faible grade l anticorps a marqu des tissus de cellules dendritiques folliculaires tendus avec une apparence particuli rement dense et confluente dans les cas de lymphomes primaires gastriques et des glandes salivaires Dans 5 cas sur 5 de lymphome lym
27. skierung 97 f r 20 1 Minuten auf 65 abk hlen lassen Das Autostainer Objekttr gergestell mit den Objekttr gern aus dem PT Link Beh lter herausnehmen und die Objekttr ger sofort in einen Beh lter z B PT Link Rinse Station Code Nr PT109 mit verd nntem auf Zimmertemperatur gebrachtem EnVisionTM FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 eintauchen Die Objekttr ger f r 1 5 Minuten im Wash Buffer belassen IS608 EFG LPF 25 04 08 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Paraffineingebettete Schnitte Zur Probenpr paration kann f r Entparaffinierung und Epitopdemaskierung im PT Link auch ein modifiziertes Verfahren verwendet werden Weitere Informationen siehe PT Link Benutzerhandbuch Nach Abschluss des F rbeverfahrens m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und unter Verwendung eines permanenten Fixiermittels auf die Objekttr ger aufgebracht werden Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder w hrend des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern werden Dako Silanized Slides Code Nr S3003 empfohlen F rbeverfahren Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision M FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 das die High pH Target und erforderliche aber nich
28. t Retrieval Solution dieses Systems durch EnVision FLEX Target Retrieval Solution Low pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8015 ersetzt mitgelieferte Materialien Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 uL Abgabevolumen oder FLEXRTUS3 300 uL Abgabevolumen Autoprogram CD21 ohne Gegenf rbung oder CD21H mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dieses gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls
29. tischen Schwanz der potenzielle Phosphorylierungsstellen von Proteinkinase C und Tyrosinkinase aufweist 2 3 CD21 wird von follikul ren dendritischen Zellen FDCs und reifen B Zellen exprimiert 3 FDCs bilden ein dreidimensionales Netzwerk in B Zellfollikeln was anscheinend die Struktur des follikul ren Kompartiments definiert 1 Auf B Zellen von Iymphoidem Gewebe ist die CD21 Expression in Randzonen stark und in Mantelzonen B Zellen moderat ausgepr gt Keimzentrum B Zellen wurden mit den meisten CD21 mAbs als negativ befunden und Knochenmark B Zellen weisen wenig oder keine CD21 Expression auf Die Expression von CD21 geht zusammen mit IgD nach der Stimulierung von ruhenden B Zellen in vitro schrittweise verloren Au erdem wurde CD21 auf einigen Arten von Epithelzellen gefunden sowie mit geringer Expression auf akuten Iymphoblastischen Leuk miezellen des T Zellentyps Untergruppen von normalen Thymozyten und reifen T Zellen 3 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisie
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