DuoFLEX Cocktail Anti-CD3 Anti-CD20cy Ready-to
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1. Autostainer Autostainer Plus R f K8018 Une fois que la proc dure de coloration est termin e les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es a l aide d un milieu de montage permanent Eviter d utiliser de l alcool comme milieu de montage permanent car il peut diminuer la r activit de la solution chromog ne rouge Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le tissu de contr le positif doit comprendre l amygdale et les cellules structures doivent pr senter les sch mas de r action d crits pour ces tissus la section Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs 307771EFG_001 p 5 10 Interpr tation de la coloration Caract ristiques de performance Deutsch Verwendungszweck Synonyme fir das Antigen 119814 001 CD3 les cellules marqu es par l anticorps anti CD3 pr sentent une coloration rouge cytoplasmique et ou membranaire CD20 les lymphocytes B marqu s par l anticorps anti CD20 montrent une coloration brune du c t cytoplasmique de la membrane de surface cellulaire Tissus sains CD3 L anticorps anti CD3 marque les lymphocytes T dans divers tissus y compris l amygdale et le c lon Les lymphocytes T des zones interfolliculaires des amygdales pr sentent une coloration mod r e a forte tandis que la coloration rouge des lymphocytes T des centres2. DuoFLEX Doublestain System R f K6807 Les tapes de coloration et d incubation sont pr programm es dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le DuoFLEX2 volume de distribution 200 uL ou DuoFLEX3 volume de distribution 300 uL Programme automatique CD3CD20 sans contre coloration ou CD3CD20H avec contre coloration Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la reprogrammation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d h matoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako
3. 50x Code Nr K8004 erzielt werden Entparaffinierte Schnitte Die Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte sollte mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 erfolgen Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8004 durchf hren F r PT Link sollten die folgenden Parameter verwendet werden Vorw rmtemperatur 65 Temperatur und Zeit f r E pitopdemaskierung 97 f r 20 1 Minuten auf 65 abk hlen Das Autostainer Objekttr gergestell mit den Objekttr gern aus dem PT Link Beh lter herausnehmen und die Objekttr ger sofort in einen Beh lter z B PT Link Rinse Station Code Nr PT109 mit verd nntem auf Zimmertemperatur gebrachtem EnVision FLEX Wash Buffer 20x Code Nr K8007 eintauchen Die Objekttr ger f r 1 5 Minuten im Wash Buffer belassen Paraffineingebettete Schnitte Die bevorzugte Eindeckmethode ist die Verwendung eines w ssrigen Eindeckmediums Dako Faramount Code Nr S3025 Alternativ k nnen Entparaffinierung und Epitopdemaskierung im PT Link unter Verwendung eines modifizierten Verfahrens durchgef hrt werden Weitere Informationen finden Sie im PT Link Benutzerhandbuch Nach Abschluss des F rbeverfahrens m ssen die Schnitte bei 60 f r 1 Stunde luftgetrocknet in Xylol getaucht und mit einem permanenten E
4. 7 8 The only other normal cell type known to be labeled by antibodies to CD3 is Purkinje cells in the cerebellum 9 The CD3 antigen is first detectable in early thymocytes and its appearance probably represents one of the earliest signs of commitment to the T cell lineage 7 In immature thymocytes the CD3 expression is solely cytoplasmic membrane associated CD3 appears subsequently upon cell maturation 7 The majority of T cell neoplasms express the CD3 antigen while it is absent from non T cell lymphoid malignancies 10 Consistent with the pattern of synthesis of the antigen in normal thymocytes the earliest site where CD3 is detectable within neoplastic cells is in the cell cytoplasm 7 CD3 has been deemed an essential marker for the initial evaluation of chronic lymphoproliferative disorders 11 Large granular lymphocyte leukaemia of T cell type T LGL is characterized by the CD3 CD57 CD56 immunophenotype and clonal rearrangement of the T cell receptor genes 12 CD20 CD20 is a transmembrane non glycosylated protein expressed on B cell precursors and mature B cells but is lost following differentiation into plasma cells 13 In resting B cells CD20 appears in a 33 kDa non phosphorylated form After mitogen stimulation CD20 becomes heavily phosphorylated 35 37 kDa isoforms and it is a dominant phosphoprotein in activated B cells B cell lines and hairy cell leukemias 5 The long N and C terminal ends of the protein
5. Lymphomen au er bei akuten lymphoblastischen Leuk mien und plasmazyt rem malignem Lymphom Bei 9 27 F llen von Morbus Hodgkin wurde eine starke F rbung der Oberfl chenmembran der Reed Sternberg Zellen beobachtet 18 Bei Iymphoproliferativen Erkrankungen der T Zelllinie konnte bei 0 73 F llen eine Markierung mit dem Antik rper festgestellt werden 3 w hrend andere Studien ber 1 18 18 bzw 1 111 19 positiven F llen berichteten Es wurde ber seltene F lle von CD20 positiven peripheren T Zell Lymphomen berichtet 18 19 1 Mason DY Cordell J Brown M Pallesen G Ralfkiaer E Rothbard J et al Detection of cells in paraffin wax embedded tissue using antibodies against a peptide sequence from the CD3 antigen J Clin Pathol 1989 42 1194 1200 2 Pilozzi E Pulford K Jones M M ller Hermelink H K Falini B Ralfkiaer E et al Co expression of CD79a JCB117 and CD3 by lymphoblastic lymphoma J Pathol 1988 186 140 3 3 Takami T Qi C F Yamada T Yamashina M Kon S I Ishii Y et al B20 3 Reactivity and specificity of L26 pan B cell mAb on 322 cases of fresh and paraffin embedded lymphoproliferative diseases In Knapp W D rken B Gilks WR Rieber EP Schmidt RE Stein H et al editors Leukocyte typing IV White cell differentiation antigens Proceedings of the 4th International Workshop and Conference 1989 Feb 21 25 Vienna Austria Oxford New York Tokyo Oxford University Press 1989 p 134 6 4 CD guide In Kish
6. a ames Autostainer contenant les lames de la cuve du PT Link et plonger imm diatement les lames dans un r cipient une cuve par ex PT Link Rinse Station R f PT109 contenant du tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer 20x R f K8007 dilu a temp rature ambiante Laisser les lames dans le tampon de lavage pendant 1 5 minutes Coupes incluses en paraffine le milieu de montage aqueux Dako Faramount R f S3025 est la m thode privil gi e d application de lamelles de protection Comme pr paration alternative des chantillons le d paraffinage et la restauration de l Epitope peuvent tre r alis s dans le PT Link l aide d une proc dure modifi e Se r f rer aux instructions du Guide d utilisation du PT Link Une fois la proc dure de coloration termin e les coupes doivent tre s ch es l air 60 C durant 1 heure immerg es dans du xyl ne et mont es l aide d un milieu de montage permanent Eviter d utiliser de l alcool comme milieu de montage permanent car il peut diminuer la r activit de la solution chromog ne rouge Avant montage les coupes tissulaires ne doivent pas s cher lors du pr traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique qui suit Pour une meilleure adh rence des coupes tissulaires sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames Dako FLEX IHC Microscope Slides R f K8020 Le syst me de visualisation recommand est le EnVision
7. and a large number of other normal non lymphoid tissues tested 17 Mantle zone and germinal center B cells in tonsil show a moderate to strong staining reaction whereas isolated B cells in liver show a weak to moderate brown staining reaction Abnormal tissues CD3 The antibody labeled 73 96 T cell neoplasms including 7 9 Iymphoblastic 25 35 pleomorphic 5 5 immunoblastic 5 5 angioimmunoblastic lymphadenopathy like 2 2 T zone lymphomas 19 19 mycosis fungoides S zary syndrome 2 3 Lennert s lymphomas 4 13 Ki 1 positive anaplastic large cell lymphomas 3 4 lymphomatoid papulosis 1 1 coeliac associated lymphoma 1 The antibody labeled 149 149 cases of T cell precursor acute lymphoblastic leukaemias lymphomas ALL In 131 149 cases 100 of the cells were positive in 14 cases between 50 90 of the cells were positive and in 4 cases less than 50 of the cells were positive No labeling was observed in 68 68 cases of B cell precursor ALL apart from reactive infiltrating T cells 2 CD20 The CD20 antigen was labeled in most of 131 B cell neoplasms tested 3 Labeling with the antibody showed that in the differentiation of B cells the CD20 antigen was not expressed on very immature lymphoid cells 0 6 acute undifferentiated leukemias but began to be expressed on early maturational stages 14 34 common acute lymphoblastic and 7 9 pre B acute lymphoblastic leukemias and then the CD20 antigen was fully expressed on mature B cell
8. are located on the cytoplasmic side of the membrane and only a minor portion of the protein is exposed on the cell surface 13 Antibodies reacting with CD20 cytoplasmic epitopes are designated CD20cy 5 It is suggested that CD20 plays a direct role in regulating the transmembrane conductive Ca flux of B cells which indicates a possible function for CD20 as a regulator of proliferation and differentiation 13 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use polyclonal rabbit and monoclonal mouse antibody cocktail provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodium azide Polyclonal Rabbit Anti Human CD3 Monoclonal Mouse Anti Human CD20cy Clone L26 Isotype IgG2a kappa CD3 Synthetic peptide comprising amino acids 156 168 from the cytoplasmic part of the human CD3e chain coupled to thyroglobulin 1 CD20 Human tonsil B cells 14 307771EFG_001 p 1 10 Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied 119814 001 CD3 In Western blotting the CD3 ant
9. germinatifs de l amygdale et de l pith lium du c lon est faible mod r e CD20 Dans le tissu lymphoide sain l anticorps anti CD20 marque les cellules des centres germinatifs les lymphocytes de la zone du manteau et les lymphocytes interfolliculaires diss min s mais pas les lymphocytes T les histiocytes ni les plasmocytes 17 18 Aucun marquage n est observ dans l piderme les glandes s bac es les follicules pileux et les glandes eccrines de la peau l Epithelium folliculaire de la thyro de les pneumocytes et l epithelium bronchique du poumon ainsi qu un grand nombre d autres tissus non lympho des sains test s 17 Les lymphocytes B de la zone du manteau et du centre germinatif des amygdales pr sentent une coloration mod r e forte tandis que la coloration brune des lymphocytes B isol s dans le foie est faible mod r e Tissus tumoraux CD3 L anticorps a marqu 73 sur 96 n oplasmes lymphocytes T dont 7 lymphoblastiques sur 9 25 pl omorphes sur 35 5 immunoblastiques sur 5 5 angio immunoblastiques de type lymphad nopathie sur 5 2 lymphomes de la zone T sur 2 19 cas sur 19 de mycose fongoide syndrome de S zary 2 lymphomes de Lennert sur 3 4 lymphomes a grandes cellules anaplasiques positifs a la Ki 1 sur 13 3 papuloses lymphomatoides sur 4 et le seul lymphome associ une maladie coeliaque 1 L anticorps a marqu 149cas sur 149 de lymphomes leuc mies lymphoblastiques
10. prot ine est expos e sur la surface cellulaire 13 Les anticorps r agissant avec les pitopes cytoplasmiques du CD20 sont d sign s CD20cy 5 II semble que le CD20 joue un r le direct dans la r gulation du flux transmembranaire Ca conducteur de lymphocytes B ce qui indiquerait que le CD20 agit comme r gulateur de prolif ration et de diff renciation 13 Se reporter aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures d IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillon 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Cocktail d anticorps polyclonal de lapin et monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Anticorps polyclonal de lapin anti CD3 humain Anticorps monoclonal de souris anti CD20cy humain clone L26 Isotype IgG2a kappa CD3 peptide de synth se comprenant 156 168 acides amin s provenant de la partie cytoplasmique de la cha ne du CD3e humain coupl e la thyroglobuline 1 CD20 lymphocytes B d amygdale humaine 14 CD3 Lors des analyses par Western blot l anticorps anti CD3 d tecte les bandes
11. ADNc codant la mol cule CD20 indiquent que l anticorps marque un pitope intracytoplasmique localis sur la mol cule CD20 16 307771EFG_001 p 4 10 Pr cautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni 119814 001 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaNs produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosives Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique respecter les proc dures de manipulation appropri es Porter un quipement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 Ne pas utiliser apr s la date limite de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il ny a aucun signe vident indiquant l instab
12. Oe ako English Intended use Synonyms for antigen Summary and explanation Reagent provided Immunogen 119814 001 CE DuoFLEX Cocktail Anti CD3 Anti CD20cy Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus Code IK002 For in vitro diagnostic use DuoFLEX Cocktail Polyclonal Rabbit Anti Human CD3 and Monoclonal Mouse Anti Human CD20cy Clone L26 Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments Polyclonal Rabbit Anti Human CD3 antibody is useful for the identification of T cells and related neoplasms 1 2 Anti Human CD20cy antibody labels cells of the B cell lineage and is useful for the identification of neoplasms of B cell derivation 3 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist CD3 T3 CD3 complex 4 CD20 L26 5 CD3 CD3 consists of at least four different components 7 6 e 0 of 20 28 kDa On the lymphocyte cell surface CD3 is non covalently associated with the T cell receptor TCR It is believed that the CD3 components of the TCR CD3 complex mediate signal transduction upon antigen recognition by TCR 6 CD3 is expressed by T cells in thymus bone marrow peripheral lymphoid tissue and blood
13. aigu s a lymphocytes T pr curseurs LAL Dans 131 cas sur 149 100 des cellules taient positives dans 14 cas entre 50 et 90 des cellules taient positives et dans 4 cas moins de 50 des cellules taient positives Aucun marquage n a t observ dans 68 cas sur 68 de LAL a lymphocytes B pr curseurs hormis celui des lymphocytes T infiltrants r actifs 2 CD20 L antigene CD20 tait marqu sur la plupart des 131 n oplasmes a lymphocytes B test s 3 Le marquage avec l anticorps montre que dans la diff renciation des lymphocytes B l antig ne CD20 n est pas exprim sur les cellules lympho des tr s immatures 0 leuc mie aigu non diff renci e sur 6 mais commence s exprimer aux stades pr coces de maturation 14 leuc mies lymphoblastiques aigu s courantes sur 34 et 7 leuc mies lymphoblastiques aigu s pr lymphocytes B sur 9 puis l antig ne CD20 est enti rement exprim sur les lymphocytes B matures 15 leuc mies lymphocytaires chroniques sur 15 3 leuc mies prolymphocytaires sur 3 3 leuc mies tricholeucocytes sur 3 6 lymphosarcomes sur 7 et 45 lymphomes malins lymphocytes B sur 46 dont les lymphomes de Burkitt de Waldenstr m et les lymphomes immunoblastiques lymphocytes B L antigene CD20 dispara t des plasmocytes et seulement 1 cas de leuc mie cellules plasmatiques sur 2 et aucun cas de my lome sur 12 ont t marqu s par l anticorps 3 D autres tudes ont fo
14. de poids mol culaire attendu pour les antigenes CD3 2 L anticorps reconna t le CD3e tant dans une lign e de lymphocytes T Jurkat que dans une lign e de cellules tueuses naturelles NK11 mais ne r agit pas aux lysats pr par s partir de plusieurs lign es de lymphocytes B Raji Ramos et JY d une lign e de cellules my lo des U937 ou d une lign e de cellules de carcinome du c lon Colo 205 15 Lors de l immunopr cipitation partir de lysats Nonidet P40 de lymphoblastes T surface iod e l anticorps pr cipite les cha nes y 26 kDa 21 kDa and e 19 kDa de la mol cule CD3 de mani re similaire au sch ma de pr cipitation observ lors de l utilisation d un anticorps monoclonal de souris bien caract ris dirig contre le CD3 humain clone UCHT1 1 Lors d un test ELISA l anticorps marque le peptide CD3 utilis comme immunog ne CD20 L anticorps anti CD20cy humain clone L26 a t class comme un anti CD20 la Fifth International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens Cinqui mes Conf rence et Atelier internationaux sur les antig nes de diff renciation des leucocytes humains 5 L analyse SDS PAGE d immunopr cipit s form s entre le lysat cellulaire d amygdale marqu l iode et l anticorps indique une r action aux polypeptides de 30 kDa et 33 kDa principalement 14 Les tudes utilisant des cellules COS 1 transfect es par l
15. he Studien mit ordnungsgem en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer Diagnostiktests des Patienten vorgenommen werden CD3 T3 CD3 Komplex 4 CD20 L26 5 307771EFG_001 p 6 10 Zusammenfassung und Erklarung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifitat VorsichtsmaBnahmen 119814 001 CD3 CD3 besteht aus mindestens vier verschiedenen Komponenten vy 6 C von 20 28 kDa An der Oberfl che der Lymphozytenzelle ist CD3 nichtkovalent an den T Zellenrezeptor TCR gebunden Man vermutet dass die CD3 Komponenten des TCR CD3 Komplexes bei der Erkennung des Antigens durch den TCR die Signal bertagung vermitteln 6 CD3 wird von T Zellen in Thymus Knochenmark peripherem lymphoiden Gewebe und in Blut exprimiert 7 8 Die einzigen anderen normalen Zellen von denen bekannt ist dass sie durch Antik rper gegen CD3 markiert werden sind die Purkinje Zellen im Kleinhirn 9 Das CD3 Antigen ist zun chst in fr hen Thymozyten nachweisbar und sein Auftreten ist vermutlich eines der fr hesten Zeichen einer Festlegung auf die T Zell Reihe 7 Bei unreifen Thymozyten ist die CD3 Expression ausschlieBlich zytoplasmatisch und membranassoziiertes CD3 tritt anschlieBend bei Zellreifung auf 7 Die Mehrheit der T Zell Neoplasmen exprimiert das CD3 Antigen w hrend es bei nicht T Zell lymphoiden Malignit ten fehlt 10 In bereinstimmung mit dem Mu
16. he staining procedure has been completed the sections must be air dried immersed in xylene and mounted using permanent mounting medium Alcohol should be avoided with permanent mounting as it may diminish reactivity of the red chromogen Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include tonsil and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens CD3 Cells labeled by the CD3 antibody display red cytoplasmic and or membrane staining CD20 B cells labeled by the CD20 antibody display brown staining of the cytoplasmic side of the cell surface membrane Normal tissues CD3 The CD3 antibody labels T cells in various tissues including tonsil and colon T cells in the interfollicular areas of tonsil show a moderate to strong staining reaction whereas T cells in germinal centers of tonsil and in the colon epithelium show a weak to moderate red staining reaction CD20 The CD20 antibody in normal lymphoid tissue labels germinal centre cells mantle zone lymphocytes and scattered interfollicular lymphocytes but not T cells histiocytes and plasma cells 17 18 No labeling is observed in epidermis sebaceous glands hair follicles and eccrine glands in the skin follicular epithelium in the thyroid pneumocytes and bronchial epithelium of the lung
17. i der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung mit H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Nach Abschluss des Farbeverfahrens m ssen die Schnitte luftgetrocknet in Xylol eingetaucht und unter Verwendung eines permanenten Eindeckmediums eingedeckt werden Beim permanenten Eindecken sollte Alkohol vermieden werden da es die Reaktionsfahigkeit des roten Chromogens einschranken kann Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Als positive Kontrolle sollte Mandelgewebe verwendet werden und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen CD3 Mit dem CD3 Antik rper markierte Zellen weisen eine rote zytoplasmatische und oder Membranf rbung auf CD20 Mit dem CD20 Antik rper markierte B Zellen weisen eine braune F rbung an der zytoplasmatischen Seite der Zelloberfl chenmembran auf Gesunde Gewebe CD3 Der CD3 Antik rper markiert T Zellen in verschiedenen Geweben einschlie lich Mandeln und Dickdarm T Zellen 307771EFG_001 p 8 10 References Bibliographie Literaturhi
18. ibody detects bands of the expected molecular weights for CD3 antigens 2 The antibody recognizes CD3e in both a T cell line Jurkat and a natural killer cell line NK11 but does not react with lysates prepared from several B cell lines Raji Ramos and JY a myeloid cell line U937 or a colon carcinoma cell line Colo 205 15 In immunoprecipitation from Nonidet P40 lysates of surface iodated T lymphoblasts the antibody precipitates the y 26 kDa 21 kDa and e 19 kDa chain of the CD3 molecule similar to the precipitation pattern seen using the well characterized monoclonal mouse anti human CD3 clone UCHT1 1 In ELISA the antibody labels the CD3 peptide used as immunogen CD20 Anti Human CD20cy clone L26 was clustered as anti CD20 at the Fifth International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens 5 SDS PAGE analysis of immunoprecipitates formed between I labeled tonsil cell lysate and the antibody shows reaction primarily with 30 kDa and 33 kDa polypeptides 14 Studies using COS 1 cells transfected with cDNA encoding the CD20 molecule indicate that the antibody labels an intracytoplasmic epitope localized on the CD20 molecule 16 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive b
19. ilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patients Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes tissulaires incluses en paraffine et fix es au formol L paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Le pr traitement avec un d masquage d pitope induit par la chaleur HIER est n cessaire Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8004 Coupes d paraffin es le pr traitement des coupes tissulaires fix es au formol et incluses en paraffine puis d paraffin es est recommand l aide du Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice pour la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8004 Les param tres suivants doivent tre utilis s pour le PT Link temp rature de pr chauffage 65 temp rature et dur e du d masquage d pitope 97 pendant 20 1 minutes refroidissement 65 Retirer chaque portoir
20. imoto T Kikutani H von dem Borne AEG Goyert SM Mason DY Miyasaka M et al editors Leucocyte typing VI White cell differentiation antigens Proceedings of the 6th International Workshop and Conference 1996 Nov 10 14 Kobe Japan New York London Garland Publishing Inc 1997 p 1111 5 Zhou L J Tedder TF CD20 workshop panel report In Schlossman SF Boumsell L Gilks W Harlan JM Kishimoto T Morimoto C et al editors Leukocyte typing V White cell differentiation antigens Proceedings of the 5th International Workshop and Conference 1993 Nov 3 7 Boston USA Oxford New York Tokyo Oxford University Press 1995 p 511 4 6 Jacobs H Pre TCR CD3 and TCR CD3 complexes decamers with differential signalling properties Immunol Today 1997 18 565 9 7 Campana D Thompson JS Amlot P Brown S Janossy G The cytoplasmic expression of CD3 antigens in normal and malignant cells of the T lymphoid lineage J Immunol 1987 138 648 55 8 Tunnacliffe HA Olsson C Traunecker A Krissansen GW Karjalainen K De la Hera A The majority of CD3 epitopes are conferred by the epsilon chain In Knapp W D rken B Gilks WR Rieber EP Schmidt RE Stein H et al editors Leukocyte typing IV White cell differentiation antigens Proceedings of the 4th International Workshop and Conference 1989 Feb 21 25 Vienna Austria Oxford New York Tokyo Oxford University Press 1989 p 295 6 9 Garson JA Beverley PC Coakham HB Harper El Monoclona
21. indeckmedium eingedeckt werden Beim permanenten Eindecken sollte Alkohol vermieden werden da es die Reaktionsf higkeit des roten Chromogens einschr nken kann Vor dem Eindecken und w hrend der Vorbehandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens d rfen die Gewebeschnitte nicht austrocknen F r eine bessere Haftung der Gewebeschnitte an den Glas Objekttr gern werden Dako FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen Als Visualisierungssystem wird EnVision DuoFLEX Doublestain System Code Nr K6807 empfohlen Die Farbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Gerate mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll DuoFLEX2 200 uL Abgabevolumen oder DuoFLEX3 300 uL Abgabevolumen Autoprogram CD3CD20 ohne Gegenfarbung oder CD3CD20H mit Gegenfarbung Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden Nahere Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch fiir das jeweilige Gerat entnehmen Wenn die Farbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako be
22. inien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger Cocktail aus polyklonalem Kaninchen und monoklonalem Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Polyklonaler Anti Human CD3 Monoklonaler Maus Anti Human CD20cy Klon L26 Isotyp IgG2a kappa CD3 Synthetisches Peptid mit Aminos uren 156 bis 168 aus dem zytoplasmatischen Teil der an Thyroglobulin gekoppelten menschlichen CD3e Kette 1 CD20 B Zellen von menschlichem Mandelgewebe 14 CD3 Beim Western Blotting weist CD3 Banden der erwarteten relativen Molek lmassen f r CD3 Antigene nach 2 Der Antik rper erkennt CD3e sowohl in einer T Zelllinie Jurkat als auch in einer NK Zelllinie NK11 reagiert aber nicht mit Lysaten aus verschiedenen B Zelllinien Raji Ramos und JY einer myeloischen Zelllinie U937 oder einer Dickdarmkrebszelllinie Colo 205 15 In der Immunpr zipitation aus Nonidet P40 Lysaten von oberfl chenjodierten T Lymphoblasten pr zipitiert der Antik rper die y 26 kDa 21 kDa und e 19 kDa Kette des CD3 Molek ls hnlich dem Pr zipitations
23. kum Technical Support 800 424 0021 Customer Service 800 235 5763 www dako com PT0039 Rev C Edition 03 09 119814 001 307771EFG_001 p 10 10
24. kuten lymphoblastischen Leukamien Lymphome ALL In 131 von 149 Fallen testeten 100 der Zellen positiv in 14 Fallen erwiesen sich zwischen 50 90 der Zellen als positiv und in 4 F llen wurden weniger als 50 der Zellen positiv angef rbt Mit Ausnahme reaktiver infiltrierender T Zellen wurde bei 68 von 68 F llen der auf die B Zelllinie Vorl ufer zur ckgehenden ALL keine Markierung festgestellt 2 CD20 In den meisten von 131 getesteten B Zell Neoplasien wurde das CD20 Antigen markiert 3 Die Markierung mit dem Antik rper zeigte dass w hrend der Differenzierung der B Zellen das CD20 Antigen auf sehr unreifen Iymphoiden Zellen nicht exprimiert wurde 0 6 akuten nicht differenzierten Leuk mien dass seine Expression jedoch in den fr hen Reifungsstadien begann 14 34 akuten Iymphoblastischen und 7 9 akuten Pr B Lymphoblastenleuk mien Sp ter wird das CD20 Antigen voll auf reifen B Zellen exprimiert 15 15 chronischen Iymphozytischen 3 3 prolymphozytischen 3 3 Haarzellen 6 7 Lymphosarkomzell Leuk mien und 45 46 malignen B Zell Lymphomen einschlie lich Burkitt Waldenstr m und Immunoblasten B Zell Lymphome Das CD20 Antigen ist auf Plasmazellen nicht mehr vorhanden und lediglich 1 2 Plasmazell Leuk mien und 0 12 Myelomen wurden vom Antik rper markiert 3 Andere Studien lieferten vergleichbare Befunde und erbrachten positive Markierung bei 44 44 Gro zellen und Immunoblasten B Zell Lymphomen 17 sowie bei allen 40 B Zell
25. l antibodies against human T lymphocytes label Purkinje neurones of many species Nature 1982 298 375 7 307771EFG_001 p 9 10 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Erber WN Mynheer LC Mason DY APAAP labeling of blood and bone marrow samples for phenotyping leukaemia Lancet 1986 i 761 5 Braylan RC Orfao A Borowitz MJ Davis BH Optimal number of reagents required to evaluate hematolymphoid neoplasias results of an international consensus meeting Cytometry 2001 46 23 7 Kingreen D Siegert W Chronic lymphatic leukemias of T and NK cell type Leukemia 1997 11 Suppl 2 S46 9 Tedder TF Engel P CD20 a regulator of cell cycle progression of B lymphocytes Immunology Today 1994 15 450 4 Ishii Y Takami T Yuasa H Takei T Kikuchi K Two distinct antigen systems in human B lymphocytes identification of cell surface and intracellular antigens using monoclonal antibodies Clin Exp Immunol 1984 58 183 92 Lanier LL Chang C Spitz H Pillips JH Expression of cytoplasmic CD3e proteins in activated human adult natural killer NK cells and CD3y e complexes in fetal NK cells Implications for the relationship of NK and T lymphocytes J Immunol 1992 149 1876 80 Mason DY Comans Bitter WM Cordell JL Verhoeven MAJ van Dongen JJM Antibody L26 recognizes an intracellular epitope on the B cell associated CD20 antigen Am J Pathol 1990 136 1215 22 Cartun RW Coles FB Pastuszak WT Utilization of monoclo
26. les cellules de la lign e des lymphocytes B et facilite l identification des n oplasmes d riv s des lymphocytes B 3 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi 307771EFG_001 p 3 10 Synonymes de l antig ne R sum et explication R actifs fournis Immunog ne Sp cificit 119814 001 Complexe CD3 T3 CD3 4 CD20 L26 5 CD3 Le CD3 comporte au moins quatre composants diff rents y 5 e C de 20 28 kDa A la surface des lymphocytes le CD3 est li de mani re non covalente au r cepteur des lymphocytes T TCR On pense que les composants du CD3 du complexe TCR CD3 interviennent dans la transduction du signal lors de la reconnaissance de l antigene par le TCR 6 Le CD3 est exprim par les lymphocytes T dans le thymus la moelle osseuse le tissu lymphoide p riph rique et le sang 7 8 Le seul autre type de cellule normal connu pour tre marqu par les anticorps anti CD3 est les cellules de Purkinje du cervelet 9 L antigene CD3 est d abord d tectable dans les thymocytes pr coces et sa pr sence constitue probablement l un des premiers signes d appartenance a la lign e des lymphocytes T 7 Dans les thymocytes immatures l expression du CD3 es
27. muster beim deutlich charakterisierten monoklonalen antihumanen Maus CD3 Klon UCHT1 1 Beim ELISA Verfahren markiert der Antik rper das als Immunogen genutzte CD3 Peptid CD20 Anti Human CD20cy Klon L26 wurde bei dem der Fifth International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens 5 Internationale r Workshop und Konferenz ber menschliche Leukozyten differenzierende Antigene als Anti CD20 geclustert 5 Die SDS PAGE Analyse der Immunpr zipitate die zwischen l markiertem Mandelzelllysat und dem Antik rper gebildet wurden zeigte eine prim re Reaktion mit den 30 kDa und 33 kDa schweren Polypeptiden 14 Studien unter Verwendung von COS 1 Zellen die mit das CD20 Molek l kodierender cDNA transfiziert wurden deuten darauf hin dass der Antik rper ein intrazytoplasmatisch lokalisiertes Epitop auf dem CD20 Molek l markiert 16 1 Zur Anwendung durch Fachpersonal 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaNs eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Ansammlungen von Natriumazid k nnen auch in Konzentrationen die nicht als gef hrlich klassifiziert sind mit Blei und Kupferabflussrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Azidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 307771EFG_001 p 7 10 Lagerung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien Farbeverfahren und erforde
28. nal antibody L26 in the identification and confirmation of B cell lymphomas A sensitive and specific marker applicable to formalin and B5 fixed paraffin embedded tissues Am J Pathol 1987 129 415 21 Norton AJ Isaacson PG Monoclonal antibody L26 an antibody that is reactive with normal and neoplastic B lymphocytes in routinely fixed and paraffin wax embedded tissue J Clin Pathol 1987 40 1405 12 Blakolmer K Vesely M Kummer JA Jurecka W Mannhalter C Chott A Immunoreactivity of B cell markers CD79a L26 in rare cases of extranodal cytotoxic peripheral T NK T cell lymphomas Mod Pathol 2000 13 766 72 Catalogue number X Temperature limitation Consult instructions for use R f rence du catalogue Limites de temp rature Consulter les instructions d utilisation sl Bestellnummer Zulassiger Temperaturbereich Gebrauchsanweisung beachten Ec REP NB Baksh cad Use bi Dako North America Inc Dako Denmark A S anutacturer aren code se Dy 6392 Via Real Produktionsvej 42 Fabricant Code du lot Utiliser jusque Carpinteria California 93013 USA DK 2600 Glostrup Denmark Hersteller Chargenbezeichnung Verwendbar bis Authorized representative in the European Community In vitro diagnostic medical device Tel 805 566 6655 Tel 45 4485 9500 Ec REP Repr sentant Autoris dans la Communaut Europ enne Dispositif m dical de diagnostic in vitro Fax 805 566 6688 Fax 45 4485 9595 Autorisierter Repr sentant in der EU In vitro Diagnosti
29. nweise 119814 001 in den interfollikularen Bereichen der Tonsillen zeigen eine maBige bis starke Farbreaktion wahrend T Zellen in den Keimzentren der Mandeln und im Kolonepithel schwach bis maBig rot angefarbt werden CD20 Bei gesundem lymphoidem Gewebe markiert der CD20 Antik rper Zellen des Keimzentrums Lymphozyten der Mantelzone sowie einzelne interfollikulare Lymphozyten jedoch nicht T Zellen Histiozyten und Plasmazellen 17 18 Es konnte keine Markierung der Epidermis der Talgdr sen Haarfollikel und ekkrinen Dr sen der Haut des Schilddr senfollikelepithels der Pneumozyten und des Bronchialepithels der Lunge wie auch einer gro en Anzahl anderer untersuchter nicht lymphoider Gewebe festgestellt werden 17 Zellen der Mantelzone und B Zellen des Keimzentrums in Mandelgewebe weisen eine m ige bis starke F rbereaktion auf w hrend isolierte B Zellen in der Leber schwach bis m ig braun angef rbt werden Pathologische Gewebe CD3 Der Antik rper markierte 73 96 T Zellneoplasmen einschlieBlich 7 9 lymphoblastischen 25 35 pleomorphen 5 5 immunoblastischen 5 5 angioimmunoblastischen lymphadenopathieartigen 2 2 T Zonen Lymphomen 19 19 Mycosis fungoides S zary Syndrom 2 3 Lennert Lymphomen 4 13 Ki 1 positiven anaplastischen gro zelligen Lymphomen 3 4 lymphomatoiden Papulosis 1 1 z liakieassoziiertem Lymphom 1 Der Antik rper markierte 149 von 149 F llen der auf die T Zellreihe Vorl ufer zur ckgehenden a
30. ommended visualization system is EnVision DuoFLEX Doublestain System Code K6807 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol DuoFLEX2 200 uL dispense volume or DuoFLEX3 300 uL dispense volume Autoprogram CD3CD20 without counterstaining or CD3CD20H with counterstaining All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services 307771EFG_001 p 2 10 Staining interpretation Performance characteristics Fran ais Utilisation pr vue 119814 001 Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 After t
31. rliche aber nicht mitgelieferte Materialien Auswertung der Farbung Leistungsmerkmale 119814 001 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden Entsprechende Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen gt Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Der Antik rper Cocktail eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Es ist eine Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER Verfahren erforderlich Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH
32. s 15 15 chronic lymphocytic 3 3 prolymphocytic 3 3 hairy cell 6 7 lymphosarcoma cell leukemias and 45 46 B cell malignant lymphomas including Burkitt s Waldenstr m s and immunoblastic B cell lymphomas The CD20 antigen disappears on plasma cells and only 1 2 plasma cell leukaemias and 0 12 myelomas were labeled by the antibody 3 Other studies have provided comparable results showing positive labeling of 44 44 large cell and immunoblastic B cell lymphomas 17 and all of 40 B cell lymphomas with the exception of common acute lymphoblastic leukemias and malignant plasmacytic lymphoma In Hodgkin s disease strong surface membrane staining of Reed Sternberg cells was observed in 9 27 cases 18 Of lymphoproliferative diseases of T cell lineage 0 73 were labeled by the antibody 3 whereas other studies showed 1 18 18 and 1 111 19 positive cases Rare cases of CD20 positive peripheral T cell lymphomas have been reported 18 19 Ref IK002 Pour utilisation diagnostique in vitro Le cocktail DuoFLEX constitu d un anticorps polyclonal de lapin anti CD3 humain et d un anticorps monoclonal de souris anti CD20cy humain clone L26 Dako Autostainer Autostainer Plus est pr vu pour tre utilis en immunohistochimie avec les appareils Dako Autostainer Autostainer Plus L anticorps polyclonal de lapin anti CD3 humain permet l identification de lymphocytes T et des n oplasmes associ s 1 2 L anticorps anti CD20cy humain marque
33. ster der Antigensynthese bei normalen Thymozyten ist der fr heste Ort an dem CD3 in neoplastischen Zellen nachweisbar ist das Zellzytoplasma 7 CD3 gilt als wesentlicher Marker f r die erste Bewertung chronischer Iymphoproliferativer St rungen 11 Die grobgranul re T Zellenleuk mie T LGL ist durch den CD3 CD57 CD56 Immunph notyp und durch die klonale Neuanordnung der T Zellrezeptorgene charakterisiert 12 CD20 CD20 ist ein transmembran ses nicht glykosyliertes Protein das in B Zell Vorl ufern und reifen B Zellen exprimiert wird jedoch nach der Differenzierung zu Plasmazellen verloren geht 13 In ruhenden B Zellen erscheint CD20 in 33 kDa schwerer nicht phosphorylierter Form Nach mitogener Stimulation wird CD20 stark phosphoryliert 35 37 kDa schwere Isoformen und ist bei aktivierten B Zellen B Zelllinien und Haarzellenleuk mien ein dominantes Phosphoprotein 5 Die langen N und C terminalen Enden des Proteins sind auf der zytoplasmatischen Seite der Membran lokalisiert und nur ein kleiner Teil des Proteins liegt auf der Zelloberfl che 13 Mit den zytoplasmatischen CD20 Epitopen reagierende Antik rper werden als CD20cy bezeichnet 5 Es wird nahe gelegt dass CD20 eine direkte Rolle bei der Regulierung des transmembranen konduktiven Ca Flusses der B Zellen spielt was auf eine m gliche Funktion von CD20 als Regulator der Proliferation und Differenzierung verweist 13 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtl
34. t uniquement cytoplasmique et le CD3 associ la membrane apparait par la suite apr s la maturation cellulaire 7 La majorit des n oplasmes a lymphocytes T exprime l antigene CD3 alors qu il est absent des tumeurs lympho des non lymphocytes T 10 Conform ment au sch ma de synth se de l antig ne des thymocytes normaux le premier site o le CD3 est d tectable au sein des cellules n oplasiques est le cytoplasme cellulaire 7 Le CD3 s est r v l un marqueur essentiel de l valuation initiale des troubles lymphoprolif ratifs chroniques 11 La leuc mie grands lymphocytes T granuleux T LGL se caract rise par l immunoph notype CD3 CD57 CD56 et la r organisation clonale des g nes des r cepteurs de lymphocytes T 12 CD20 Le CD20 est une prot ine transmembranaire non glycosyl e exprim e sur les pr curseurs des lymphocytes B et les lymphocytes B matures mais qui est perdue apr s la diff renciation en plasmocytes 13 Dans les lymphocytes B au repos le CD20 appara t sous une forme non phosphoryl e de 33 kDa Apr s stimulation mitog ne le CD20 devient fortement phosphoryl isoformes de 35 37 kDa et est une phosphoprot ine dominante dans les lymphocytes B activ s les lign es de lymphocytes B et les leuc mies a tricholeucocytes 5 Les extr mit s N terminale et C terminale longues de la prot ine sont situ es sur le c t cytoplasmique de la membrane et seule une partie mineure de la
35. to the PT Link User Guide Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8004 The following parameters should be used for PT Link Pre heat temperature 65 epitope retrieval temperature and time 97 for 20 1 minutes cool down to 65 Remove Autostai ner slide rack with slides from the PT Link tank and immediately dip slides into a jar tank e g PT Link Rinse Station Code PT109 containing diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 20x Code K8007 Leave slides in Wash Buffer for 1 5 minutes Paraffin embedded sections Using aqueous mounting medium Dako Faramount Code S3025 is the preferred coverslipping method As alternative specimen preparation both deparaffinization and epitope retrieval can be performed in the PT Link using a modified procedure See the PT Link User Guide for instructions After the staining procedure has been completed the sections must be air dried 1 hour at 60 C immersed in xylene and mounted using permanent mounting medium Alcohol should be avoided with permanent mounting as it may diminish reactivity of the red chromogen Before mounting the tissue sections should not dry out during the pre treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of Dako FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended The rec
36. uild ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody cocktail can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8004 Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer
37. urni des r sultats comparables indiquant un marquage positif de 44 lymphomes immunoblastiques lymphocytes B sur 44 et de lymphomes grande cellules 17 et l ensemble des 40 cas de lymphomes lymphocytes B l exception des leuc mies lymphoblastiques aigu s courantes et des lymphomes malins plasmocytaires Dans la maladie de Hodgkin une forte coloration de la surface membranaire des cellules de Reed Sternberg a t observ e dans 9 cas sur 27 18 Parmi les maladies lymphoprolif ratives lign e des lymphocytes T O cas sur 73 ont t marqu s par l anticorps 3 alors que d autres tudes ont montr 1 cas positif sur 18 18 et 1 cas positif sur 111 19 De rares cas de lymphomes p riph riques lymphocytes T positifs au CD20 ont t signal s 18 19 Code Nr IK002 Zur In vitro Diagnostik Der Antik rper Cocktail DuoFLEX der aus polyklonalem Kaninchen Anti Human CD3 und monoklonalem Maus Anti Human CD20cy Klon L26 Dako Autostainer Autostainer Plus besteht ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Der polyklonale Kaninchen Anti Human CD3 Antik rper dient der Identifizierung von T Zellen und verwandten Neoplasien 1 2 Der Anti Human CD20cy Antik rper markiert Zellen der B Zelllinie und dient zur Identifizierung von Neoplasmen mit B Zell Abstammung 3 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologisc
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