Dako Autostainer/Autostainer Plus
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1. 9 FLEX Monoclonal Mouse 0843 Anti Cytomegalovirus Clones CCH2 DDG9 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus Code 15752 ENGLISH Intended use Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied 117579 004 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Cytomegalovirus Clone CCH2 DDG9 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody is useful for the identification of human cytomegalovirus HCMV infected human tissues 1 2 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist Human cytomegalovirus is a ubiquitous herpes virus The primary infection usually occurs in childhood where it most often is asymptomatic After initial exposure the virus establishes a life long infection In neonates and in immunocompromised individuals such as AIDS patients and transplant recipients HCMV can cause severe life threatening infections and it is the most common cause of viral birth defects 5 62. 3 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 C Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance t
3. Antibody CCH2 1 reacts with an early nuclear protein identical with the non structural DNA binding protein p52 7 Antibody DDG9 reacts with an immediate early nuclear protein of about 76 kDa 3 For both antibodies the reactivity persists also at later stages during the HCMV infection where the localization is less distinctly nuclear and appears to be in the cytoplasm Laser confocal microscopy however shows that the reaction is limited to the nuclear membrane 3 The antibodies do not cross react with adenovirus herpes simplex virus and varicella zoster virus 3 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use mixture of two monoclonal mouse antibodies provided in liquid form as cell culture supernatant dialysed against 0 05 mol L Tris HCI 0 015 mol L NaN pH 7 2 Clones CCH2 DDGS 3 Isotypes IgG1 kappa CCH2 and IgG2a kappa DDG9 Crude cell lysates from cytomegalovirus strain Ad169 infected human embryonic fibroblasts 3 Antibody CCH2 reacts with an early nuclear protein identical with the non structural DNA binding protein p52 7 More than 200 human CMV isolates have been successfully typed by this antibody wh
4. Stadien der HCMV Infektion wenn die Lokalisierung nicht mehr so deutlich nukle r ist und im Zytoplasma vorzuliegen scheint Konfokale Lasermikroskopie zeigt jedoch dass die Reaktion auf die Kernmembran beschr nkt ist 3 Dieser Antik rper kreuzreagiert nicht mit Adenovirus Herpes simplex Virus und Varizella Zoster Virus 3 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwartete
5. est un virus de l herp s humain tr s r pandu L infection primaire survient g n ralement durant l enfance et est le plus souvent asymptomatique Apr s l exposition initiale l infection par le virus dure toute la vie Chez les nouveau n s et les individus dont l immunit est compromise comme les patients atteints du SIDA et les receveurs de greffes le CMVH peut provoquer des infections s v res potentiellement mortelles et c est la cause principale des d ficiences cong nitales d origine virale 5 6 L anticorps CCH2 1 r agit avec une prot ine nucl aire pr coce identique la prot ine p52 non structurelle liant l ADN 7 L anticorps DDG9 r agit avec une prot ine nucl aire pr coce imm diate d environ 76 kDa 3 Pour les deux anticorps la r activit persiste aussi aux stades plus tardifs au cours des infections CMVH et la localisation est moins limit e au noyau et appara t aussi dans le cytoplasme Au microscope confocal balayage laser on observe cependant que la r action est limit e a la membrane nucl aire 3 Les anticorps ne pr sentent pas de r action crois e avec les adenovirus le virus de l herp s ni le virus varicelle zona 3 Se r f rer aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du systeme de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3
6. not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTUS3 300 uL dispense volume Autoprogram CMV without counterstaining or CMVH with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory Ifthe evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verif
7. CH2 DDG9 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper dient zum Nachweis von mit menschlichem Zytomegalovirus HCMV infizierten Geweben 1 2 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit geeigneten Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer diagnostischer Tests des Patienten vorgenommen werden Das menschliche Zytomegalievirus ist ein h ufig vorkommendes Herpesvirus Die prim re Infektion erfolgt meistens in der Kindheit und ist oft asymptomatisch Nach der ersten Exposition etabliert der Virus eine lebenslange Infektion Bei Neugeborenen und immungeschw chten Personen beispielsweise AIDS Patienten oder Transplantatempf ngern kann HCMV zu ernsten lebensbedrohlichen Infektionen f hren und es ist die h ufigste Ursache f r virale Geburtsdefekte 5 6 Der Antik rper CCH2 1 reagiert mit einem fr hen Kernprotein das mit dem nicht strukturellen DNA bindenden Protein p52 identisch ist 7 Der Antik rper DDG9 reagiert mit einem unmittelbaren fr hen Kernprotein von ca 76 kDa 3 F r beide Antik rper besteht die Reaktivit t auch in sp teren Stadien der HCMV Infektion wenn die Lokalisierung nicht mehr so deutlich nukle r ist und im Zytoplasma vorzuliegen scheint Kon
8. Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le de qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales M lange pr t l emploi de deux anticorps monoclonaux de souris fourni sous forme liquide en tant que surnageant de culture cellulaire dialys contre 0 05 mol L de Tris HCI et contenant 0 015 mol L d azide de sodium NaN pH 7 2 Clones CCH2 DDG 3 Isotype IgG1 kappa CCH2 et IgG2a kappa DDG9 Lysats de cellules brutes de fibroblastes embryonnaires humains infect s par la souche Ad169 du cytom galovirus 3 L anticorps CCH2 r agit avec une prot ine nucl aire pr coce identique la prot ine p52 non structurelle liant l ADN 7 Plus de 200 isolats CMVH ont t r pertori s avec succ s par cet anticorps qui par cons quent semble reconna tre un pitope hautement conserv au sein des souches CMVH 3 4 L anticorps DDG9 r agit avec une prot ine nucl aire pr coce imm diate d environ 76 kDa 3 Pour les deux anticorps la r activit persiste aussi aux stades plus tardifs au cours des infections CMVH et la localisation est moins limit e au noyau et appara t aussi dans le cytoplasme Au microscope confocal balayage laser on observe cependant que la r action est limit e la membrane nucl aire 3 Les anticorps ne pr sentent pas de r action crois e avec les ad novirus le virus de l herp s ni le virus varicelle zona
9. F rben mit einem w ssrigen oder permanenten Einbettmedium bedecken Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen IS752 EFG MNIV 2009 12 04 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 F rbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien Auswertung der F rbung Leistungsmerkmale Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Autostainer Link Software vorprogrammiert Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 uL Abgabevolumen oder FLEXRTU3 300 uL Abgabevolumen Autoprogram CMV ohne Gegenf rbung oder CMVH mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dieses gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubatio
10. abeled by the antibody display a nuclear staining pattern early in the HCMV infection At a later stage an apparent cytoplasmic staining pattern might be observed 3 Normal tissues Screening of normal human tissues from donors without HCMV infection with the CCH2 antibody showed no reaction with the heart lung liver kidney spleen Iymph node tonsil bone marrow skeletal muscle brain thyroid and parathyroid glands 1 Abnormal tissues In HCMV infected tissues the CCH2 antibody labeled cells in the lung liver kidney lymph node brain thyroid and parathyroid glands 1 The CCH2 and DDG9 antibodies together labeled HCMV infected tissue of esophagus stomach small intestine colon gall bladder lung adrenal gland ovary and neural tissue 2 Pour utilisation lors d un diagnostic in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Cytomegalovirus clones CCH2 DDG9 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus Cet anticorps permet l identification des tissus infect s par le cytom galovirus humain CMVH 1 2 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi Le cytom galovirus humain
11. e la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames FLEX IHC Microscope Slides R f K8020 Le syst me de visualisation recommand est le EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8010 Les tapes de coloration et les temps d incubation sont pr programm s dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume d application de 200 uL ou FLEXRTUS3 volume d application de 300 uL Programme automatique CMV sans contre coloration ou CMVH avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela confirme des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique IS752 EFG MNI 2009 12 04 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Interpretation de la coloration Caracteristiques de performance DEUTSCH Verwendungszweck Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immuno
12. echnique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Un pr traitement avec d masquage d Epitope induit par la chaleur HIER est n cessaire avec le Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de details se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Coupes incluses en paraffine le pr traitement des coupes tissulaires fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide de la proc dure de pr paration d chantillon 3 en un pour le Dako PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Remarque apr s coloration les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Coupes d paraffin es le pr traitement des coupes tissulaires d paraffin es fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link en suivant la m me proc dure que pour les coupes incluses en paraffine Apr s coloration un montage aqueux ou permanent des lames est recommand Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors d
13. ests Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Hersteller Batch code Numero de lot Chargenbezeichnung IS752 EFG MNI 2009 12 04 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17
14. fokale Lasermikroskopie zeigt jedoch dass die Reaktion auf die Kernmembran beschr nkt ist 3 Dieser Antik rper kreuzreagiert nicht mit dem Adenovirus Herpes simplex Virus und Varizella Zoster Virus 3 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertige Mischung von zwei monoklonalen Mausantik rpern in fl ssiger Form als gegen 0 05 mol L Tris HCI und 0 015 mol L NaN pH 7 2 dialysierter Zellkultur berstand Klone CCH2 DDG 3 Isotyp IgG1 Kappa CCH2 und IgG2a Kappa DDG9 Rohzelllysate von mit Zytgomegalievirusstamm Ad169 infizierten menschlichen Embryonalfibroblasten 3 Der Antik rper CCH2 reagiert mit einem fr hen Kernprotein das mit dem nicht strukturellen DNA bindenden Protein p52 identisch ist 7 Mehr als 200 menschliche CMV Isolate wurden erfolgreich mit diesem Antik rper typisiert der folglich ein innerhalb der HCMV St mme hochkonservatives Epitop zu erkennen scheint 3 4 Der Antik rper DDGS reagiert mit einem unmittelbaren fr hen Kernprotein von ca 76 kDa 3 F r beide Antik rper besteht die Reaktivit t auch in sp teren
15. gen Spezifit t Vorsichtsma nahmen Lagerung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 117579 004 l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la reprogrammation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide de EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre les tissus infect s par le CMVH et les cellules structures doivent pr senter les sch mas de r action d crits pour ces tissus dans
16. ich therefore seems to recognize an epitope which is highly conserved among HCMV strains 3 4 Antibody DDG9 reacts with an immediate early nuclear protein of about 76 kDa 3 For both antibodies the reactivity persists also at later stages during HCMV infection where localization is less distinctly nuclear and appears to be in the cytoplasm Laser confocal microscopy however shows that the reaction is limited to the nuclear membrane 3 The antibodies do not cross react with adenovirus herpes simplex virus and varicella zoster virus 3 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore po
17. les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le r actif de contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Ref 1S750 Le sch ma de coloration cellulaire est une forte coloration intranucl aire Une coloration du cytoplasme peut tre observ e Les cellules marqu es par l anticorps pr sentent une coloration nucl aire pr coce au cours de l infection CMVH Plus tard on peut observer un sch ma de coloration cytoplasmique apparent 3 Tissus sains au cours de la s lection de tissus humains sains provenant de donneurs non infect s par le CMVH avec l anticorps CCH2 aucune r action n a t observ e au niveau du c ur du poumon du foie du rein de la rate des ganglions lymphatiques de l amygdale de la moelle osseuse des muscles stri s du cerveau de la thyro de ni des glandes parathyro des 1 Tissus tumoraux dans les tissus infect s par le CMVH l anticorps CCH2 a marqu des cellules du poumon du foie du rein des ganglions lymphatiques du cerveau de la thyro de et des glandes parathyro des 1 Les anticorps CCH2 et DDG9 ont ensemble marqu les tissus infect s par le CMVH au niveau de l oesophage de l estomac de l intestin gr le du c lon de la v sicule biliaire du poumon des glandes surr nales de l ovaire et du syst me nerveux 2 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Cytomegalovirus Klone C
18. n F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 ist erforderlich Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 erzielt werden Paraffineingebettete Schnitte Die Vorbehandlung der formalinfixierten paraffineingebetteten Schnitte mit dem 3 in 1 Probenvorbereitungsverfahren f r Dako PT Link wird empfohlen Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 durchf hren Hinweis Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und mit permanentem Einbettmedium auf den Objekttr ger aufgebracht werden Entparaffinierte Schnitte Eine Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte mit Dako PT Link nach demselben Verfahren wie f r die paraffineingebetteten Schnitte beschrieben wird empfohlen Die Objekttr ger nach dem
19. nsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte HCMV infiziertes Gewebe enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer A
20. sitive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Paraffin embedded sections Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using the 3 in 1 specimen preparation procedure for Dako PT Link Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Note After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link and following the same procedure as described for paraffin embedded sections After staining the slides should be mounted using aqueous or permanent mounting medium The tissue sections should
21. utostainer Plus Code Nr 15750 Das zellul re F rbemuster ist eine starke intranukle re F rbung Das Zytoplasma kann auch gef rbt sein Mit diesem Antik rper markierte Zellen weisen im fr hen Stadium der HCMV Infektion eine Kernf rbung auf In einem sp teren Stadium kann eventuell eine auff llige zytoplasmatische F rbung beobachtet werden 3 Gesundes Gewebe Gesundes Gewebe von Personen ohne HCMV Infektion reagiert nicht mit dem CCH2 Antik rper Dies gilt f r Gewebe von Herz Lunge Leber Niere Milz Lymphknoten Mandeln Knochenmark Skelettmuskel Hirn Schilddr se und Nebenschilddr se 1 Pathologisches Gewebe Der CCH2 Antik rper markiert in HCMV infiziertem Gewebe Zellen in Lunge Leber Niere Lymphknoten Hirn Schilddr se und Nebenschilddr se 1 Die CCH2 und DDG9 Antik rper zusammen markieren HCMV infiziertes Gewebe in Speiser hre Magen D nndarm Dickdarm Gallenblase Lunge Nebenniere Eierstock und Nervengewebe 2 References References Literatur 1 Niedobitek G Finn T Herbst H Gerdes J Grillner L Landqvist M et al Detection of cytomegalovirus by in situ hybridization and immunohistochemistry using new monoclonal antibody CCH2 a comparison of methods J Clin Pathol 1988 41 1005 9 Saiz E Lubin J Robinson MJ The modified Steiner stain a new use for an old stain Staining cytomegalovirus infected cells in gastrointestinal biopsies Histochem J 1998 30 549 52 Wirgart BZ De
22. velopment of rapid methods for early diagnosis of cytomegalovirus infections dissertation Stockholm Karolinska Hospital 1991 Wirgart BZ Landqvist M H keberg I Eriksson B M Olding Stenkvist E Grillner L Early detection of cytomegalovirus in cell culture by a new monoclonal antibody CCH2 J Virol Methods 1990 27 211 20 Doniger J Muralidhar S Rosenthal LJ Human cytomegalovirus and human herpes virus 6 genes that transform and transactivate Clin Microbiol Rev 1999 12 367 82 Jarvis MA Nelson JA Human cytomegalovirus persistence and latency in endothelial cells and macrophages Curr Opin Microbiol 2002 5 403 7 Plachter B Nordin M Wirgart BZ Mach M Stein H Grillner L et al The DNA binding protein P52 of human cytomegalovirus reacts with monoclonal antibody CCH2 and associates with the nuclear membrane at late times after infection Virus Res 1992 24 265 76 Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole Catalogue number R f rence catalogue Bestellnummer In vitro diagnostic medical device Dispositif medical de diagnostic in vitro In vitro Diagnostikum Consult instructions for use Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten 117579 004 Temperature limitation Use by Limites de temperature Utiliser avant Zul ssiger Temperaturbereich Verwendbar bis Manufacturer Fabricant Contains sufficient for lt n gt tests Contenu suffisant pour lt n gt t
23. y that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous IS752 EFG MNIV 2009 12 04 p 1 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Staining interpretation Performance characteristics FRANCAIS Utilisation prevue Resume et explication Reactifs fournis Immunogene Specificite Pr cautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni 117579 004 permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include HCMV infected tissue and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS750 The cellular staining pattern is a strong intranuclear reaction Cytoplasmic staining may be observed Cells l
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