Monoclonal Mouse
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1. Coupes incluses en paraffine Comme pr paration alternative des chantillons le d paraffinage et la restauration de l pitope peuvent tre r alis s dans le PT Link l aide d une proc dure modifi e Se r f rer aux instructions du Guide d utilisation du PT Link Une fois que la proc dure de coloration est termin e les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ou lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames Dako Silanized Slides R f S3003 Le systeme de visualisation recommand est le EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 Les tapes de coloration et d incubation sont preprogrammees dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume de distribution de 200 ul ou FLEXRTU3 volume de distribution de 300 ul Autoprogram sans contre coloration E Cad ou Autoprogram avec contre coloration E CadH L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela confirme des temps de la2. English Intended use Synonyms for antigen Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied 117394 001 CE FLEX Monoclonal Mouse Anti Human E Cadherin Clone NCH 38 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus Code 15059 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human E Cadherin Clone NCH 38 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody is useful for the identification of E cadherin positive cells in normal and neoplastic tissues and for the differentiated diagnosis between ductal carcinoma and lobular carcinoma of the breast The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist E CD uvomorulin L CAM Arc 1 or cell CAM 120 180 1 3 E cadherin is a 120 kDa transmembrane cell adhesion molecule The gene has been localized on chromosome 16q22 1 In its extracellular domain E cadherin is involved in cell cell adhesion through calcium regulated homophilic interactions whereas in its intracellular domain E cadherin connects to the actin cytoskeleton via
3. 117394 001 Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 K8014 The following parameters should be used for PT Link Pre heat temperature 65 C epitope retrieval temperature and time 97 C for 20 1 minutes cool down to 65 C Rinse sections with diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 Paraffin embedded sections As alternative specimen preparation both deparaffinization and epitope retrieval can be performed in the PT Link using a modified procedure See the PT Link User Guide for instructions After the staining procedure has been completed the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of Dako Silanized Slides Code 3003 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 The staining steps and incubation times ar
4. F rbeverfahren 6 Qualitatskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L NaN enth lt Klon NCH 38 Isotyp IgG1 Kappa E Cadherin Uvomorulin und GST rekombinantes Protein 4 307134EFG_001 p 7 11 Spezifitat Vorsichtsma nahmen Lagerung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien F rbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 117394 001 Anti E Cadherin NCH 38 erkennt die ausgereifte 120 kDa Form und das 82 kDa Fragment von E Cadherin beim Western Blot von A431 Zelllysaten 4 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen ESS Bei 2 8 C aufbewahr
5. Metastatische L sionen 2 von 8 positiv homogen 5 von 8 positiv heterogen 1 von 8 negativ Die meisten differenzierten Krebsarten zeigten eine starke und gleichf rmig positive Immunreaktivit t an den Zell Zell Grenzen wogegen ein zunehmender Anteil schw cher bis schwach differenzierter Tumore eine heterogene oder negative Immunreaktivit t aufwies Die Tests wurden auf Gefrierschnitten durchgef hrt Die Tests wurden auf paraffineingebetteten formalinfixierten Gewebeschnitten durchgef hrt 1 Shiozaki H Tahara H Oka H Miyata M Kobayashi K Tamura S lihara K Doki Y Hirano S Takeichi M Mori T Expression of Immunoreactive E cadherin adhesion molecules in human cancers Am J Pathol 1991 139 1 17 2 Gabbert HE Mueller W Schneider A Meier S Moll R Birchmeier W Hommel G Prognostic value of E cadherin expression in 413 gastric carcinomas Int J Cancer 1996 69 184 3 Umbas R Schalken JA Aalders TW Carter BS Karthaus HFM Schaafsma HE Debruyne FMJ Isaacs WB Expression of the cellular adhesion molecule E cadherin is reduced or absent in high grade prostate cancer Canc Res 1992 52 5104 4 Antibody Certification 6 8 99 On file at Dako 5 Silye R Karayiannakis AJ Syrigos KN Poole S Van Noorden S Batchelor W Regele H Sega W Boesmueller H Krausz T Pignatelli M E cadherin catenin complex in benign and malignant melanocytic lesions J Pathol 1998 186 350 6 Heimann R Lan F McBride R Hellman S Separating fa
6. gesunder Haut wurde entlang der lateralen und oberen Oberfl chen basaler Keratinozyten an interzellul ren Grenzen eine Immunreaktivit t von E Cadherin beobachtet nicht jedoch an der Basalzell Oberfl che In den suprabasalen Hautschichten konnte eine E Cadherin Expression gleichm ig um die Peripherie der Zellen lokalisiert werden jedoch wurde keine Expression in der oberfl chlichen Corneaschicht beobachtet Die adnexen Strukturen der Haut zeigten ebenfalls eine Immunreaktivitat des E Cadherins einschlie lich einer Membranf rbung der u eren Wurzelscheidenzellen die inneren Scheidenzellen reagierten negativ sowie der azin sen Keimzellen in den Talg und Schwei dr senzellen der Haut In der Dermis gesunder Haut paraffineingebettet wurde keine E Cadherin Expression nachgewiesen 5 Pathologisches Gewebe Eine E Cadherin Immunreaktivit t wurde in einer Anzahl pathologischer Zelltypen nachgewiesen 1 3 5 10 Tabelle 1 fasst die Expression von E Cadherin in pathologischen Geweben zusammen Tabelle 1 Reaktivit t in pathologischen Geweben Gewebetyp Positive und negative F rbung und F rbungsmuster der Gewebeelemente Harnblase primares Ubergangszell 13 von 40 positiv homogen membran s Karzinom der Harnblase 13 von 40 positiv heterogen 14 von 40 negativ Hochgradig Grad IIb und III 10 von 24 positiv Niedriggradig Grad und Ila 16 von 16 positiv Oberflachlich Ta und Ti 21 von 22 positiv Invasiv T2 T3 und T
7. Ta et Ti 21 22 positives Stade invasif T2 T3 et T4 5 18 positives Cancer du sein N gatif aux nodules 136 168 positives sans chimioth rapie ou traitement hormonal Carcinome mammaire Canalaire 55 87 fortement positives majorit des cellules 29 87 plus faiblement positives h t rog nes 14 24 fortement positives majorit des cellules 10 24 plus faiblement positives h t rog nes Carcinome mammaire Lobulaire 3 21 positives localis s membrane intercellulaire tr s peu dense ou cytoplasmique faible 3 14 positives localis s membrane intercellulaire tr s peu dense ou cytoplasmique faible sophage carcinome cellules 4 15 positives squameuses 10 15 positives h t rog nes ou faibles Carcinome gastrique 108 413 positives expression lin aire homog ne et comparable la muqueuse gastrique normale 95 413 positives coloration intercellulaire lin aire mod r ment r duite ou points de 20 60 des cellules tumorales 86 413 positives coloration intercellulaire hautement r duite points fins dans lt 20 des cellules 124 413 n gatives ou immunor activit faible points lt 5 des cellules Un sch ma sp cial de l expression de la E cadh rine a t observ dans un faible pourcentage de carcinomes cellules en bague et de carcinomes indiff renci s o une forte expression intracytoplasmique de type plaque de la E cadh rine a pu tre d montr e parfois en associati
8. 117394 001 Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Epithelzellen enthalten und die Zellen Strukturen mussen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr 15750 Das zellul re F rbemuster ist membran s bzw zytoplasmatisch Gesundes Gewebe In 40 von 40 gesunden Urothelproben gefroren und paraffineingebettet wurde mit Immunhistochemie eine E Cadherin Expression nachgewiesen 8 In der gesunden menschlichen Brustdr se wurde E Cadherin stark in den interzellul ren Grenzen der luminalen Zellen sowohl von interlobul ren G ngen als auch intralobul ren terminalen G ngen und Kan len exprimiert Dagegen war die Expression in Myoepithelzellen der G nge und Kan le gefroren und paraffineingebettet wesentlich schw cher 10 Plattenepithelzellen in der Speiser hre zeigten eine starke Immunreaktivit t 15 von 15 an Zell Zell Grenzen ausgenommen in der oberfl chlichsten keratinisierenden Schicht Zudem wurde E Cadherin mittels Immunf rbung in gesunder gastrischer Mukosa an den Zell Zell Grenzen der foveolaren Epithel sowie in gastrischen Einbuchtungen und tief liegenden gastrischen Dr sen paraffineingebettet nachgewiesen 1 2 In
9. 4 5 von 18 positiv Brustkrebs Knoten negativ ohne 136 von 168 positiv Chemotherapie oder Hormonbehandlung Brustkrebs duktal 55 von 87 stark positiv Gro teil der Zellen 29 von 87 schw cher positiv heterogen 14 von 24 stark positiv Gro teil der Zellen 10 von 24 schw cher positiv heterogen Brustkrebs lobul r 3 von 21 positiv fokal sehr sp rlich an der interzellul ren Membran oder schwach zytoplasmatisch 3 von 14 positiv fokal sehr sp rlich an der interzellul ren Membran oder schwach zytoplasmatisch Speiser hre Plattenzellkarzinom 4 von 15 positiv 10 von 15 positiv heterogen oder schwach Magenkarzinom 108 von 413 positiv homogene lineare Expression mit gesunder gastrischer Mukosa vergleichbar 95 von 413 positiv m ig verringerte lineare oder gepunktete interzellul re F rbung bei 20 60 der Tumorzellen 86 von 413 positiv stark verringerte fein gepunktete interzellul re F rbung bei lt 20 der Zellen 124 von 413 negative oder schwach gepunktete Immunreaktivit t bei lt 5 der Zellen Bei einem kleinen Prozentsatz von Siegelringzell Karzinomen und undifferenzierten Karzinomen lag ein Spezialmuster der E Cadherin Expression vor bei dem eine starke intrazytoplasmatische plaque hnliche Expression von E Cadherin nachgewiesen werden konnte manchmal in Kombination mit einer sehr schwachen Immunreaktivit t an der Tumorzellmembran Endometriose 3 von 9 positiv 6 von 9 p
10. ainer Autostainer Plus Code Nr K8012 K8014 durchf hren F r PT Link sollten die folgenden Parameter verwendet werden Vorwarmtemperatur 65 C Temperatur und Zeit f r Epitopdemaskierung 97 C f r 20 1 Minuten auf 65 C abk hlen lassen Schnitte mit auf Raumtemperatur gebrachtem verd nntem EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 absp len Paraffineingebettete Schnitte Zur Probenpraparation kann f r Entparaffinierung und Epitopdemaskierung im PT Link auch ein modifiziertes Verfahren verwendet werden Weitere Informationen siehe PT Link Benutzerhandbuch Nach Abschluss des F rbeverfahrens m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und unter Verwendung eines permanenten Fixiermittels auf die Objekttr ger aufgebracht werden Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder w hrend des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von Dako Silanized Slides Code Nr S3003 empfohlen Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 ul Abgabevolumen oder FLEXRTU3 300 ul Abgabevolumen Autoprogram ohne Ge
11. asaux au niveau des bordures intercellulaires mais tait absente de la surface 307134EFG_001 p 5 11 basale de la cellule Dans les couches suprabasales de la peau l expression de la E cadh rine tait localis e uniform ment autour de la p riph rie des cellules cependant aucune expression n a t observ e sur la couche corn enne superficielle Les structures annexielles de la peau ont galement d montr limmunor activit de la E cadh rine incluant la coloration membranaire de l enveloppe ext rieure des cellules les enveloppes int rieures des cellules taient n gatives des cellules acinaires germinatives dans les glandes s bac es et des cellules des glandes sudoripares de la peau Aucune expression de la E cadh rine n a t d montr e dans le derme de la peau saine paraffine 5 Tissus tumoraux L immunoreactivite de la E cadh rine a t d montr e dans plusieurs types de cellules anormales 1 3 5 10 Le Tableau 1 r sume l expression de la E cadh rine dans les tissus malins Tableau 1 R activit des tissus anormaux Type de tissu Coloration d l ment tissulaire positive et n gative et sch ma de coloration Vessie Carcinome primaire cellules 13 40 positives homog nes membranaire transitionnelles de la vessie 13 40 positives het rogenes 14 40 n gatives Haute intensit grades IIb et Ill 10 24 positives Faible intensit grades et Ila 16 16 positives Stade superficiel
12. catenins E cadherin has a significant function in intercellular adhesion of epithelial cells the establishment of epithelial polarization glandular differentiation and stratification It is localized mainly in the adherens junctions and concentrates the urokinase plasminogen and the epidermal growth factor receptor to cell contact sites 5 6 Down regulation of E cadherin expression has been observed in a number of carcinomas and is usually associated with advanced stage and progression 5 8 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L NaNs Clone NCH 38 Isotype IgG1 kappa E cadherin uvomorulin and GST recombinant protein 4 Anti E cadherin NCH 38 recognizes the 120 kDa mature form and 82 kDa fragment of E cadherin in Western blots of A431 cells lysates 4 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build
13. che Studien mit ordnungsgem en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer Diagnostiktests des Patienten vorgenommen werden E CD Uvomorulin L CAM Arc 1 oder Cell CAM 120 180 1 3 E Cadherin ist ein 120 kDa Transmembran Zelladhasionsmolekul Das Gen wurde auf dem Chromosom 16q22 1 lokalisiert In seiner extrazellul ren Dom ne ist E Cadherin an der Zell Zell Adh sion mittels kalziumregulierter homophiler Interaktionen beteiligt w hrend es sich in seiner intrazellul ren Dom ne mittels Cateninen an das Aktin Zytoskelett bindet E Cadherin hat eine wesentliche Funktion bei der interzellul ren Adh sion von Epithelzellen der Einrichtung der Epithelpolarisation sowie der glandul ren Differenzierung und Stratifizierung Es ist haupts chlich in den adh renten Verbindungen lokalisiert und konzentriert das Urokinase Plasminogen und den epidermalen Wachstumsfaktorrezeptor an Zellkontaktstellen 5 6 Eine Abschw chung der E Cadherin Expression wurde in einer Anzahl von Karzinomen beobachtet Sie steht gew hnlich in Zusammenhang mit fortgeschrittenem Stadium und Progression 5 8 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5
14. commended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include epithelial cells and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code 1S750 The cellular staining pattern is membranous and or cytoplasmic Normal tissues E cadherin expression has been demonstrated by immunohistochemistry in 40 40 normal urothelium specimens frozen and paraffin 8 Normal human mammary gland has been found to strongly express E cadherin in the intercellular borders of the luminal cells of both the interlobular ducts and the intralobular terminal ducts and ductules but expression was much weaker in myoepithelial cells of ducts and ductules frozen and paraffin 10 Squamous epithelial cells in esophagus were found to be strongly immunoreactive 15 15 on cell cell boundaries except in the most superficial keratinizing layer Also E cadherin was immunolocalized in normal gastric mucosa at the cell cell boundaries of the foveolar epithelia as well as in gastric crypts and deep gastric glands paraffin 1 2 E cadherin immunoreactivity has been localized in normal skin along the lateral and upper surfaces of basal keratinocytes at intercellular borders but wa
15. ction tels que d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus R f 1S750 Le sch ma de coloration cellulaire est cytoplasmique et ou membranaire Tissus sains L expression de la E cadh rine a t d montr e par immunohistochimie dans 40 40 chantillons normaux d urothelium congel s et inclus en paraffine 8 La glande mammaire humaine saine a fortement exprim la E cadh rine au niveau des bordures intercellulaires des cellules luminales la fois des canaux interlobulaires et des canaux et ductules intralobulaires terminaux mais l expression tait nettement plus faible dans les cellules myo pith liales des canaux et ductules congel es et incluses en paraffine 10 Les cellules pith liales squameuses de l oesophage se sont r v l es fortement immunor actives 15 15 sur les bordures cellule cellule except dans la couche keratinisante la plus superficielle De m me la E cadh rine a t immunolocalis e dans la muqueuse gastrique saine au niveau des bordures cellule cellule de l pith lium fov olaire ainsi que dans les cryptes gastriques et les glandes gastriques profondes paraffine 1 2 L immunor activit de la E cadh rine a t localis e dans les tissus de peau sains le long des surfaces lat rales et sup rieures des k ratinocytes b
16. e pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTU3 300 uL dispense volume Autoprogram without counterstaining E Cad or Autoprogram with counterstaining E CadH The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnvVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is re
17. en Nach Ablauf des auf dem Flaschchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilitat Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten Farbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erklaren lasst und auf ein Problem mit dem Antikorper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verstandigen Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um Starke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER ist erforderlich Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 K8014 erzielt werden Entparaffinierte Schnitte Die Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte sollte mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 erfolgen Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autost
18. genf rbung E Cad oder Autoprogram mit Gegenf rbung E CadH Bei Farbedurchlaufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden Fur F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttragern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dies gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgefuhrt werden Empfohlen wird ein nichtwassriges permanentes Fixiermittel 307134EFG_001 p 8 11 Auswertung der Farbung Leistungsmerkmale
19. hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 C Ne pas utiliser apr s la date de p remption imprim e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako 307134EFG_001 p 4 11 Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais no
20. n fourni Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni Interpr tation de la coloration Caract ristiques de performance 117394 001 L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Le pr traitement avec un d masquage d pitope induit par la chaleur HIER est n cessaire Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 K8014 Coupes d paraffin es Le pr traitement des coupes de tissus d paraffin s fix s au formol et inclus en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice pour la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 K8014 Les param tres suivants doivent tre utilis s pour le PT Link Temp rature de pr chauffage 65 C temp rature et dur e de restauration de lepitope 97 C pour 20 1 minutes laisser refroidir jusqu 65 C Rincer les coupes avec un EnVision FLEX Wash Buffer 10x dilu temp rature ambiante Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012
21. nome lentigo malin 1 8 positive au m lanome lentigo membranaire 5 8 positives au m lanome lentigo h t rog nes 2 8 n gatives au m lanome lentigo 11 11 positives au m lanome m tastasique membranaires Cancer de la prostate Tumeurs 44 84 positives homog nes primaires 27 84 positives h t rog nes 13 84 n gatives L sions m tastasiques 2 8 positives homog nes 5 8 positives h t rog nes 1 8 n gative La plupart des cancers diff renci s ont pr sent une immunor activit forte et uniform ment positive aux bordures cellule cellule alors qu un pourcentage en augmentation de tumeurs moins bien diff renci es mal diff renci es a pr sent une immunor activit h t rog ne ou n gative Les analyses ont t r alis es sur des coupes cryostat Les analyses ont t r alis es sur des coupes fix es au formol et incluses en paraffine Code Nr IS059 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human E Cadherin Clone NCH 38 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Geraten bestimmt Dieser Antik rper dient zur Erkennung von E Cadherin positiven Zellen in gesunden und neoplastischen Geweben und zur Unterscheidung zwischen Duktuskarzinomen und lobul ren Karzinomen der Brust bei der Diagnose Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologis
22. on une tr s faible immunor activit au niveau de la membrane cellulaire de la tumeur Endom triose 3 9 positives 6 9 positives h t rog nes Peau Naevi m lanocytaires 20 20 positives membranaires compartiments superficiels des naevi et aux bordures entre les nids cellulaires de naevus et les k ratinocytes de l piderme environnant Les nids cellulaires de naevus de jonction taient plus h t rog nes que dans le composant pidermique ou cytoplasmiques diffus Les cellules m lanocytaires dans le derme papillaire taient n gatives Peau M lanome malin 13 70 positives membranaire 30 70 positives h t rog nes 11 70 cytoplasmiques 16 70 n gatives 117394 001 307134EFG_001 p 6 11 Deutsch Zweckbestimmung Synonyme fur das Antigen Zusammenfassung und Erklarung Geliefertes Reagenz Immunogen 117394 001 Immunor activit associ e aux types histologiques de m lanomes 1 34 positive au m lanome extension superficielle membranaire 18 34 positives au m lanome extension superficielle h t rog nes 8 34 positives au m lanome extension superficielle cytoplasmiques 7 34 n gatives au m lanome extension superficielle 3 8 positives au m lanome nodulaire h t rog nes 2 8 m lanomes nodulaires cytoplasmiques 3 8 n gatives au m lanome nodulaire 4 9 positives au m lanome lentigo malin h t rog nes 1 9 m lanome lentigo malin cytoplasmique 4 9 n gatives au m la
23. ositiv heterogen 307134EFG_001 p 9 11 References Bibliographie Literaturangaben 117394 001 Haut Melanozytische Naevi 20 von 20 positiv membran s oberfl chliches Kompartiment der Naevi und an den Grenzen zwischen Naevuszellnestern und Keratinozyten der umgebenden Epidermis Verbindende Naevuszellnester waren heterogener als in der epidermalen Komponente oder diffus zytoplasmatisch Melanozytische Zellen in der papill ren Dermis reagierten negativ Haut malignes Melanom 13 von 70 positiv membran s 30 von 70 positiv heterogen 11 von 70 zytoplasmatisch 16 von 70 negativ Immunreaktivit t verschiedener histologischer Arten von Melanomen 1 von 34 oberfl chlich ausbreitend melanom positiv membran s 18 von 34 oberfl chlich ausbreitend melanom positiv heterogen 8 von 34 oberfl chlich ausbreitend melanom zytoplasmatisch 7 von 34 oberfl chlich ausbreitend melanom negativ 3 von 8 nodul r melanom positiv heterogen 2 von 8 nodul r melanom zytoplasmatisch 3 von 8 nodul r melanom negativ 4 von 9 lentigo maligne melanom positiv heterogen 1 von 9 lentigo maligne melanom zytoplasmatisch 4 von 9 lentigo maligne melanom negativ 1 von 8 lentigin s melanom positiv membran s 5 von 8 lentigin s melanom positiv heterogen 2 von 8 lentigin s melanom negativ 11 von 11 metastisch melanom positiv membranos Prostatakrebs prim re Tumoren 44 von 84 positiv homogen 27 von 84 positiv heterogen 13 von 84 negativ
24. polarisation epitheliale la diff renciation glandulaire et la stratification Elle est localis e principalement dans les jonctions adh rentes et elle concentre le plasminog ne urokinase et le r cepteur du facteur de croissance pidermique dans les sites de contacts cellulaires 5 6 Une r gulation a la baisse de l expression de la E cadh rine a t observ e dans plusieurs carcinomes et est habituellement associ e un stade et une volution avanc s 5 8 Se r f rer aux nstructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du systeme de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone NCH 38 Isotype lgG1 kappa E cadh rine uvomoruline et prot ine recombinante GST 4 L anti E cadherine NCH 38 reconna t la forme mature de 120 kDa et le fragment de 82 kDa de E cadh rine dans les Western blots de lysats de cellules A431 4 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique
25. s absent at the basal cell surface In the suprabasal layers of skin E cadherin expression was localized uniformly around the periphery of the cells however no expression was seen the superficial corneal layer The adnexal structures of skin also demonstrated E cadherin immunoreactivity including membrane staining of the outer root sheath cells the inner sheath cells were negative acinar germinative cells in the sebaceous glands and sweat gland cells of skin No E cadherin expression was demonstrated in the dermis of normal skin paraffin 5 Abnormal tissues E cadherin immunoreactivity has been demonstrated in a variety of abnormal cell types 1 3 5 10 Table 1 summarizes expression of E cadherin in abnormal tissues 307134EFG_001 p 2 11 Table 1 Abnormal Tissue Reactivity Tissue Type Positive and Negative Tissue Element Staining and Staining Pattern Bladder Primary transitional cell 13 40 positive homogenous membranous carcinoma of the bladder 13 40 positive heterogeneous 14 40 negative High Grade grade IIb and Ill 10 24 positive Low Grade grade and Ila 16 16 positive Superficial stage Ta and Ti 21 22 positive Invasive stage T2 T3 and T4 5 18 positive Breast cancer Node negative without 136 168 positive chemotherapy or hormonal therapy Breast carcinoma Ductal 55 87 strong positive majority of cells 29 87 weaker positive heterogeneous 14 24 strong positive majority of cells 10 24 weaker po
26. sitive heterogeneous Breast carcinoma Lobular 3 21 positive focal very sparse intercellular membrane or weak cytoplasmic 3 14 positive focal very sparse intercellular membrane or weak cytoplasmic Esophagus Squamous cell carcinoma 4 15 positive 10 15 positive heterogeneous or weak Gastric carcinoma 108 413 positive homogenous linear expression and comparable to normal gastric mucosa 95 413 positive moderately reduced linear or dotted intercellular staining in 20 60 tumor cells 86 413 positive highly reduced finely dotted intercellular staining in lt 20 cells 124 413 negative or weak dotted immunoreactivity lt 5 cells Special pattern of E cadherin expression was present in a small percentage of signet ring cell carcinomas and of undifferentiated carcinomas where a strong intracytoplasmic plaque like expression of E cadherin could be demonstrated sometimes in combination with a very weak immuno reactivity at tumor cell membrane Endometriosis 3 9 positive 6 9 positive heterogeneous Skin Melanocytic naevi 20 20 positive membranous superficial compartment of naevi and at the borders between naevus cell nests and keratinocytes of the surrounding epidermis Junctional naevus cell nests were more heterogeneous than in the epidermal component or diffusely cytoplasmic Melanocytic cells in the papillary dermis were negative Skin Malignant melanoma 13 70 positive membranous 30 70 positive heterogeneous 11 70 c
27. sting was performed on paraffin embedded formalin fixed tissue sections R f 15059 Pour utilisation diagnostique in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human E Cadherin clone NCH 38 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin a une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus Cet anticorps est utile pour l identification des cellules positives la E cadherine dans les tissus sains et n oplasiques et pour le diagnostic diff renci entre le carcinome canalaire et le carcinome lobulaire du sein L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi E CD uvomoruline L CAM Arc 1 ou CAM cellulaire 120 180 1 3 La E cadh rine est une mol cule d adh sion cellulaire transmembranaire de 120 kDa Le g ne a t localis sur le chromosome 16q22 1 Dans son domaine extracellulaire la E cadh rine est impliqu e dans l adh sion cellule cellule via des interactions homophiles r gul es par le calcium tandis que dans son domaine intracellulaire la E cadh rine se connecte au cytosquelette d actine via des cat nines La E cadh rine a une fonction importante dans l adh sion intercellulaire des cellules pith liales l tablissement de la
28. t pour lt n gt tests Inhalt ausreichend f r n Ans tze Authorized representative in the European Community Repr sentant Autoris dans la Communaut Europ enne Autorisierter Reprasentant in der EU el ere Dako North America Inc Dako Denmark A S 6392 Via Real Produktionsvej 42 Carpinteria California 93013 USA DK 2600 Glostrup Denmark Tel 805 566 6655 Tel 45 4485 9500 Fax 805 566 6688 Fax 45 4485 9595 Technical Support 800 424 0021 Customer Service 800 235 5763 www dako com 307134EFG_ 001 p 11 11
29. ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 C Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 K8014 307134EFG_001 p 1 11 Staining procedure including materials required but not supplied Staining interpretation Performance characteristics
30. vage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es a temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique a l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr levement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la re programmation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d hematoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre des cellules pith liales et les cellules structures doivent pr senter des sch mas de r a
31. vorable from unfavorable prognostic markers in breast cancer the role of E cadherin Canc Res 2000 60 298 7 Bracke ME Van Roy FM Mareel MM The E cadherin catenin complex in invasion and metastasis Cur Top Microbiol Immunol 1996 213 Pt 1 123 61 8 Garcia del Muro X Torregrosa A Munoz J Castellsague X Condom E Vigues F Arance A Fabra A Germa JR Prognostic value of the expression of E cadherin and R catenin in bladder cancer Eur J Cancer 2000 36 357 9 Moll R Mitze M Frixen UH Birchmeier W Differential loss of E cadherin expression in infiltrating ductal and lobular breast carcinomas Am J Pathol 1993 143 6 1731 10 Gaetje R Kotzian S Herrmann G Baumann R Starzinski Powitz A Nonmalignant epithelial cells potentially invasive in human endometriosis lack the tumor suppressor molecule E cadherin Am J Pathol 1997 150 2 461 307134EFG 001 p 10 11 Catalogue number R f rence du catalogue Bestellnummer Manufacturer Fabricant Hersteller Use by Utiliser jusque Verwendbar bis PT0020 Rev C Edition 09 07 117394 001 Temperature limitation Limites de temp rature Zulassiger Temperaturbereich Batch code Code du lot Chargenbezeichnung Consult instructions for use Consulter les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten In vitro diagnostic medical device Dispositif m dical de diagnostic in vitro In vitro Diagnostikum Contains sufficient for lt N gt tests Contenu suffisan
32. ytoplasmic 16 70 negative Immunoreactivity associated with histological types of melanomas 1 34 superficial spreading melanoma positive membranous 18 34 superficial spreading melanoma positive heterogeneous 8 34 superficial spreading melanoma cytoplasmic 7 34 superficial spreading melanoma negative 3 8 nodular melanoma positive heterogeneous 2 8 nodular melanoma cytoplasmic 3 8 nodular melanoma negative 4 9 lentigo malignant melanoma positive heterogenous 1 9 lentigo malignant melanoma cytoplasmic 4 9 lentigo malignant melanoma negative 1 8 lentiginous melanoma positive membranous 5 8 lentiginous melanoma positive heterogeneous 2 8 lentiginous melanoma negative 11 11 metastic melanoma positive membranous Prostate cancer Primary tumors 44 84 positive homogeneous 27 84 positive heterogeneous 13 84 negative 117394 001 307134EFG_001 p 3 11 Fran ais Utilisation pr vue Synonymes de l antig ne R sum et explication R actifs fournis Immunog ne Sp cificit Pr cautions Conservation 117394 001 Metastatic lesions 2 8 positive homogeneous 5 8 positive heterogeneous 1 8 negative Most differentiated cancers demonstrated strong and uniformly positive immunoreactivity at the cell cell boundaries whereas an increasing percentage of less well differentiated to poorly differentiated tumors demonstrated heterogeneous or negative immunoreactivity Testing was performed on cryostat sections Te
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