Monoclonal Mouse
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1. This antibody recognizes an epitope found in the amino terminal 84 encoded amino acids of WT1 It reacts with all isoforms of the full length WT1 and also identifies WT1 lacking exon 2 frequently found in subsets of sporadic Wilms tumors In immunoprecipitation assays the antibody has been shown to recognize full length and in vitro translated WT1 It also detects full length denatured WT1 55 kDa in Western blots of WT1 baculovirus infected cell lysates 1 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 C Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If un2. t la WT1 pleine longueur ayant subi une traduction in vitro d tecte galement la WT1 pleine longueur d natur e 55 kDa lors de Western blots de lysats cellulaires de WT1 infect s par baculovirus 1 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaNs produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales one 307126EFG_001 p 3 8 Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni Interpr tation de la coloration 115864 001 Conserver entre 2 et 8 C Ne pas utiliser apr s la date de p remption imprim e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indi
3. 6 Se r f rer aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du systeme de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone 6F H2 Isotype IgG1 kappa Prot ine humaine WT1 tronqu e correspondant la sequence N terminale des acides amin s 1 181 1 2 L pissage alternatif du gene de transcription WT1 donne quatre esp ces distinctes d ARNm pr sentes en diff rentes quantit s Le poids mol culaire pr vu de la prot ine WT1 est compris entre 46 et 49 kDa selon les esp ces d ARNm cependant les prot ines WT1 d riv es des cellules migrent entre 50 55 kDa avec SDS PAGE 4 Cet anticorps reconna t un pitope situ sur les 84 acides amin s terminaux de WT1 Il r agit tous les isoformes de WT1 pleine longueur et identifie galement un exon 2 d pourvu de WT1 fr quemment observ dans les sous ensembles de tumeurs de Wilms isol es Dans les dosages par immunopr cipitation il a t d montr que l anticorps reconna
4. Chargenbezeichnung Consult instructions for use Consulter les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten In vitro diagnostic medical device Dispositif m dical de diagnostic in vitro In vitro Diagnostikum Contains sufficient for lt N gt tests Contenu suffisant pour lt n gt tests Inhalt ausreichend f r n Ans tze Authorized representative in the European Community Repr sentant Autoris dans la Communaut Europ enne Autorisierter Repr sentant in der EU wl Lec REP Dako North America Inc Dako Denmark A S 6392 Via Real Produktionsvej 42 Carpinteria California 93013 USA DK 2600 Glostrup Denmark Tel 805 566 6655 Tel 45 4485 9500 Fax 805 566 6688 Fax 45 4485 9595 Technical Support 800 424 0021 Customer Service 800 235 5763 www dako com 307126EFG_001 p 8 8
5. r contenir des produits de transcription W717 notamment la pl vre la rate le c ur le pr puce l endom tre et l epithelium glom rulaire du rein 7 8 Des anticorps anti WT1 dont le clone 6F H2 ont marqu le cytoplasme dans certains chantillons de tissus Une coloration cytoplasmique positive a t observ e dans les vaisseaux sanguins et le tissu conjonctif des alv oles pulmonaires 8 Une coloration cytoplasmique granulaire a galement t observ e dans les cellules my locytaires matures 11 Tissus tumoraux Des niveaux d expression de WT1 lev s ont t observ s dans les composants pith liaux et blast maux des tumeurs de Wilms tandis que les l ments stromaux taient exprim s des taux tr s faibles 10 La majorit des m soth liomes malins exprime fortement l ARNm du WT1 ainsi que le produit g nique La prot ine WT1 a t immunolocalis e l aide de l anticorps anti WT1 clone 6F H2 sur les noyaux des cellules de m soth liome malin 8 9 L expression du gene WT1 et de la prot ine a galement t d montr e dans la majorit des leuc mies aigu s mais pas dans les cellules de leuc mie my log ne chronique sauf en cas de crise blastique L anticorps a marqu les noyaux des cellules blastiques de leuc mie mais n a pas r agi aux cellules mononucl aires et aux cellules souches h matopo tiques CD34 p riph riques normales 1 11 L ARNm du WT1 a t exprim dans plusieur
6. rper hat den Kern der leuk mischen Blastenzellen markiert war aber nicht reaktiv mit gesunden mononukle ren Zellen und gesunden peripheren CD34 h matopoetischen Vorl uferzellen 1 11 Eine WT1 mRNA Exprimierung wurde auch bei zahlreichen anderen Tumoren einschlie lich Melanomen Eierstockkarzinomen und Keimstrang Stromatumoren beobachtet 11 13 Zus tzlich zur spezifischen nukle ren Immunreaktivit t wurde beobachtet dass Antik rper auf WT1 einschlie lich Klon 6F H2 in einigen F llen des Adenokarzinoms und der desmoplastischen Stroma und Basalmembran einiger Karzinomproben das Zytoplasma dieser Tumorzellen f rben Eine perinukle re F rbung der Tumorzellen in malignen Mesotheliomen konnte ebenfalls festgestellt werden 9 Diese zytoplasmatische F rbung kann seine Ursache in einer Kreuzreaktivit t mit einem Epitop haben das keinen Bezug zu WT1 hat 9 11 1 Rauscher JF et al Submitted for publication 2 Menssen HD et al Presence of Wilms tumor wt1 transcripts and the WT1 nuclear protein in the majority of human acute leukemias Leukemia 1995 9 1060 3 Coppes MJ et al The role of WT1 in Wilms tumorigenesis FASEB J 1993 7 886 4 Haber DA and Buckler AJ WT1 A novel tumor suppressor gene inactivated in Wilms tumor New Biol 1992 4 2 97 5 Rauscher FJ The WT1 Wilms tumor gene product A developmentally regulated transcription factor in the kidney that functions as a tumor suppressor FASEB J 1993 7 896 6
7. A English Intended use Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage 115864 001 CE FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Wilms Tumor 1 WT1 Protein Clone 6F H2 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS055 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Wilms Tumor WT1 Clone 6F H2 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody is useful for the identification of Wilms tumor acute leukemias malignant mesothelioma serous ovarian adenocarcinoma granulosa cell tumor and other tumors The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist WT1 is a gene involved in the induction of Wilms tumor a pediatric renal malignancy The WT1 gene located on chromosome 11p13 is inactivated in 5 to 10 of sporadic Wilms tumors and nearly 100 of Denys Drash patients a syndrome associated with genitourinary abnormalities and Wilms tumor WT7 encodes a zinc finger transcription factor which recognizes the early growth response EGR 1 consensus sequence found in promoters of growth factor genes The protein encoded by WT
8. Maheswaran S et al Physical and functional interaction between WT1 and p53 proteins Proc Natl Acad Sci USA 1993 90 5100 7 Pritchard Jones K et al The candidate Wilms tumor gene is involved in genitourinary development Nature 1990 346 194 8 Amin KM et al Wilms tumor 1 susceptibility WT1 gene products are selectively expressed in malignant mesothelioma Amer J Pathol 1995 146 2 344 9 Kumar Singh S et al WT1 mutation in malignant mesothelioma and WT1 immunoreactivity in relation to p53 and growth factor receptor expression cell type transition and prognosis J Pathol 1997 181 67 10 Varansi R et al Fine structure analysis of the WT1 gene in sporadic Wilms tumors Proc Natl Acad Sci USA 1994 91 3554 11 Menssen HD et al Detection by monoclonal antibodies of the Wilms tumor WT1 nuclear protein in patients with acute leukemia Intl J Canc 1997 70 518 12 Bruening W et al Analysis of the 11p13 Wilms tumor suppressor gene WT1 in ovarian tumors Canc Invest 1993 11 4 393 13 Rodeck U et al Expression of the WT1 Wilms tumor gene by normal and malignant human melanocytes Intl J Canc 1994 59 78 307126EFG_001 p 7 8 Catalogue number Reference du catalogue Bestellnummer Manufacturer Fabricant Hersteller Use by Utiliser jusque Verwendbar bis PT0020 Rev C Edition 09 07 115864 001 Temperature limitation Limites de temp rature Zulassiger Temperaturbereich Batch code Code du lot
9. T regulates transcription of other genes and can function both as a transcriptional activator and repressor WT1 has been demonstrated to repress transcription of various growth related genes such as platelet derived growth factor A chain PDGF A and insulin like growth factor IGF 3 5 The transcriptional activity of this protein however can be modulated through physical interactions between WT1 and p53 In the absence of wild type p53 WT1 has been demonstrated to function as a transcriptional activator of the EGR 1 promoter in transfection assays 6 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L NaN3 Clone 6F H2 Isotype IgG1 kappa Truncated human WT1 protein corresponding to N terminal amino acids 1 181 1 2 Alternate splicing of the WT1 transcript gene results in four distinct mRNA species which are present in different amounts The predicted molecular weight of the WT1 protein ranges from 46 to 49 kDa depending on the mRNA species however the WT1 proteins derived from cells migrate at 50 to 55 kDa in SDS PAGE 4
10. bung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L NaN enth lt Klon 6F H2 Isotyp IgG1 Kappa Gek rztes menschliches WT1 Protein das den N Terminal Aminos uren 1 181 entspricht 1 2 307126EFG_001 p 5 8 Spezifit t Vorsichtsma nahmen Lagerung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien F rbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 115864 001 Alternatives Splicing der WT1 Transkript Gene f hrt zu vier verschiedenen mRNA Spezies in unterschiedlichen Mengen Das erwartete Molekulargewicht des WT1 Proteins liegt abh ngig von der mRNA Spezies zwischen 46 und 49 kDa Allerdings migrieren die von Zellen abstammenden WT1 Proteine bei 50 to 55 kDa in SDS PAGE 4 Dieser Antik rper erkennt ein Epitop das in den Terminal 84 kodierten Aminos uren von WT1 angetroffen werden kann Er reagiert mit allen Isoformen des WT1 in voller L nge und identifiziert zudem WT1 mit fehlendem Exon 2 das h ufig in Teilmengen des sporadischen Wilms Tumors auftritt In Immunpr zipitationsassays wurde aufgezeigt dass der Antik rper das WT1 in voller L nge und in vitro translatiertes WT1 erkennt Er erkennt auch denaturiertes WT1 55 kDa in voller L nge in Western Blots von in mit dem Baculovirus infizierten WT1 Zelllysate
11. contre coloration WT1 ou Autoprogram avec contre coloration WT1H L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela confirme des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la re programmation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d h matoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8018 L utilisation d un milieu de montage pe
12. els auf die Objekttr ger aufgebracht werden Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder w hrend des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von Dako Silanized Slides Code Nr S3003 empfohlen Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision M FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 ul Abgabevolumen oder FLEXRTU3 300 ul Abgabevolumen Autoprogram ohne Gegenf rbung WT1 oder Autoprogram mit Gegenf rbung WT1H Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttragern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dies gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sol
13. en in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER ist erforderlich Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 K8014 erzielt werden Entparaffinierte Schnitte Die Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte sollte mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 erfolgen Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 K8014 durchf hren F r PT Link sollten die folgenden Parameter verwendet werden Vorw rmtemperatur 65 C Temperatur und Zeit f r Epitopdemaskierung 97 C f r 20 1 Minuten auf 65 C abk hlen lassen Schnitte mit auf Raumtemperatur gebrachtem verd nntem EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 absp len Paraffineingebettete Schnitte Zur Probenpr paration kann f r Entparaffinierung und Epitopdemaskierung im PTLink auch ein modifiziertes Verfahren verwendet werden Weitere Informationen siehe PT Link Benutzerhandbuch Nach Abschluss des F rbeverfahrens m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und unter Verwendung eines permanenten Fixiermitt
14. expected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support 307126EFG_001 p 1 8 Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied Staining interpretation Performance characteristics 115864 001 The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 K8014 Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 K8014 The following parameters should be used for PT Link Pre heat temperature 65 C epitope retrieval temperature and time 97 C for 20 1 minutes cool down to 65 C Rinse sections with diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostai
15. lignit t bei Kindern beteiligt ist Das WT1 Gen das sich auf dem Chromosom 11p13 befindet ist bei 5 bis 10 der sporadischen Wilms Tumore inaktiviert und bei ann hernd 100 der Denys Drash Patienten einem bei Abnormalit ten im Genitalbereich und Wilms Tumor auftretenden Syndrom WT1 kodiert einen Zinkfinger Transkriptionsfaktor der die fr he Wachstumsreaktions EGR 1 Konsenssequenz erkennt die in Promotoren von Wachstumsfaktorgenen nachweisbar ist Das von WTT kodierte Protein reguliert die Transkription anderer Gene und kann als transkriptionaler Aktivator und Repressor verwendet werden WT1 hat gezeigt dass es die Transkription verschiedener wachstumsbezogener Gene z B die von Thrombozyten abgeleitete Wachstumsfaktor A Kette PDGF A und der insulin hnliche Wachstumsfaktor IGF hemmen kann 3 5 Die transkriptionale Aktivit t dieses Proteins kann allerdings durch physikalische Interaktionen zwischen WT1 und p53 moduliert werden In Abwesenheit des p53 Wildtyps wurde nachgewiesen dass WT1 als ein transkriptionaler Aktivator des EGR 1 Promotors in Transfektionsassays funktioniert 6 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behe
16. lten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t 307126EFG_001 p 6 8 Auswertung der F rbung Leistungsmerkmale References Bibliographie Literaturangaben 115864 001 w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Epithelzellen enhalten und die Mehrheit der glatten Muskelzellen und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS750 Das zellulare Farbemuster ist zytoplasmatisch und oder nuklear allerdings ist nur die nukleare Farbung relevant Gesundes Gewebe WT1 mRNA wird stark in vom Mesenchym abstammenden Gewebe e
17. n 1 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaNs3 eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen DF Bei 2 8 C aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollt
18. ner Autostainer Plus Code K8012 Paraffin embedded sections As alternative specimen preparation both deparaffinization and epitope retrieval can be performed in the PT Link using a modified procedure See the PT Link User Guide for instructions After the staining procedure has been completed the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of Dako Silanized Slides Code 3003 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTU3 300 uL dispense volume Autoprogram without counterstaining WT1 or Autoprogram with counterstaining WT1H The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are n
19. nk Temp rature de pr chauffage 65 C temp rature et dur e de restauration de l epitope 97 C pour 20 1 minutes laisser refroidir jusqu 65 C Rincer les coupes avec un EnVision FLEX Wash Buffer 10x dilu temp rature ambiante Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 Coupes incluses en paraffine Comme pr paration alternative des chantillons le d paraffinage et la restauration de l pitope peuvent tre r alis s dans le PT Link l aide d une proc dure modifi e Se r f rer aux instructions du Guide d utilisation du PT Link Une fois que la proc dure de coloration est termin e les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ou lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames Dako Silanized Slides R f S3003 Le systeme de visualisation recommand est le EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 Les tapes de coloration et d incubation sont pr programm es dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume de distribution de 200 ul ou FLEXRTU3 volume de distribution de 300 ul Autoprogram sans
20. ot available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnvVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include epithelial cells and the majority of the smooth muscle cells and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code 1S750 The cellular staining pattern is cytoplasmic and or nuclear however only nuclear staining is relevant Normal tissues WT1 mRNA is strongly expressed in mesenchymally derived tis
21. qu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Le pr traitement avec un d masquage d pitope induit par la chaleur HIER est n cessaire Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 K8014 Coupes d paraffin es Le pr traitement des coupes de tissus d paraffin s fix s au formol et inclus en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice pour la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 K8014 Les param tres suivants doivent tre utilis s pour le PT Li
22. rmanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre les cellules pith liales et la majorit des cellules du muscle lisse et les cellules structures doivent pr senter des sch mas de r action tels que d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus R f IS750 Le sch ma de coloration cellulaire est cytoplasmique et ou nucl aire cependant seule la coloration nucl aire est pertinente 307126EFG_001 p 4 8 Caracteristiques de performance Deutsch Zweckbestimmung Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immunogen 115864 001 Tissus sains LARNm de la WTT est fortement exprim dans le tissu m senchymateux d riv Au cours du d veloppement embryonnaire une expression de WT1 a t observ e dans le m soderme du rein de la rate et de la cr te gonadique humains et la lign e m soth liale de la cavit coelomique et des organes situ s dans celle ci 7 Dans les tissus sains adultes le gene WT1 a t exprim dans les cellules de Sertoli du testicule les cellules d ciduales de l ut rus et dans la granulosa de l ovaire Plusieurs autres tissus adultes se sont av
23. s autres tumeurs notamment des m lanomes des cancers de l ovaire et des tumeurs stromales du cordon sexuel 11 13 Outre une immunor activit nucl aire sp cifique les anticorps anti WT1 dont le clone 6F H2 ont marqu le cytoplasme de cellules tumorales dans certains cas d adenocarcinomes et le stroma desmoplastique et la membrane basale de certains chantillons de carcinomes Une coloration p rinucl aire de cellules tumorales a galement t observ e dans des m soth liomes malins 9 Il est possible que ce marquage cytoplasmique repr sente une r activit crois e un pitope sans relation avec WT1 9 11 Code Nr IS055 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Wilms Tumor WT1 Clone 6F H2 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper eignet sich zur Identifizierung des Wilms Tumors akuter Leuk mien maligner Mesotheliome ser ser Eierstock Adenokarzinome Granulosazelltumore sowie weiterer Tumore Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit ordnungsgem en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer Diagnostiktests des Patienten vorgenommen werden WT1 ist ein Gen das an der Einleitung des Wilms Tumors einer Nieren Ma
24. sue During embryonic development WTT expression has been observed in human kidney spleen and gonadal ridge mesoderm and the mesothelial lining of the coelomic cavity and the organs contained within 7 WT1 gene expression in adult human tissues has been observed in sertoli cells of testes decidual cells of the uterus and in granulosa cells of the ovary A number of other adult tissues were shown to contain WT7 transcripts including pleura spleen heart foreskin endometrium and glomerular epithelium of the kidney 7 8 Antibodies to WT1 including clone 6F H2 have been demonstrated to label the cytoplasm in some tissue specimens Cytoplasmic staining of blood vessels and connective tissue of lung alveoli were observed to stain positively 8 Granular cytoplasmic staining has also been reported in mature myelocytic cells 11 Abnormal tissues High levels of WT1 expression have been demonstrated in the epithelial and blastemal components of Wilms tumors whereas stromal elements were found to be expressed at very low levels 10 The majority of malignant mesotheliomas were found to strongly express WT1 mRNA and also the gene product The WT1 protein was immunolocalized using anti WT1 clone 6F H2 to the nuclei of malignant mesothelioma cells 8 9 WT1 gene and protein expression have also been demonstrated in the majority of acute leukemias but not in cells from chronic myelogenous leukemia except when in blast crisis The antibody labeled
25. t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi WII est un g ne impliqu dans l induction de la tumeur de Wilms cancer r nal de l enfant Le gene W77 situ sur le chromosome 11p13 est inactiv dans 5 10 des tumeurs de Wilms isol es et dans pr s de 100 des cas de syndrome de Denys Drash syndrome associ des anomalies de l appareil urog nital et une tumeur de Wilms WTT code pour un facteur de transcription doigts de zinc qui reconna t la s quence consensus du g ne de croissance r ponse pr coce EGR 1 pr sente dans les promoteurs des g nes du facteur de croissance La prot ine cod e par le WTT regule la transcription d autres g nes et peut agir la fois comme un activateur et comme un r presseur de transcription Il a t prouv que le WT1 agit comme un r presseur de transcription de plusieurs g nes li s la croissance tels que le facteur de croissance d riv des plaquettes cha ne A PDGF A et le facteur de croissance insulinomimetique GF 3 5 L activit de transcription de cette prot ine peut toutefois tre modul e par des interactions physiques entre le WT1 et la p53 En l absence de p53 de type sauvage il s av re que le WT1 agit comme un activateur de transcription du promoteur d EGR 1 dans les essais de transfection
26. the nuclei of 307126EFG_001 p 2 8 Frangais Utilisation pr vue R sum et explication R actifs fournis Immunog ne Sp cificit Pr cautions 115864 001 leukemia blast cells but was unreactive with normal mononuclear cells and normal peripheral CD34 hematopoetic progenitor cells 1 11 WT1 mRNA expression has been reported in a number of other tumors including melanomas ovarian cancer and sex cord stromal tumors 11 13 In addition to specific nuclear immunoreactivity antibodies to WT1 including clone 6F H2 have been reported to stain the cytoplasm of tumor cells in some cases of adenocarcinoma and the desmoplastic stroma and basement membrane of some carcinoma specimens Perinuclear staining of tumor cells in malignant mesothelioma has also been observed 9 This cytoplasmic staining may represent cross reactivity with an epitope unrelated to WT1 9 11 Ref 15055 Pour utilisation diagnostique in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Wilms Tumor WT1 clone 6F H2 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destine a une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus Cet anticorps est utile pour l identification des tumeurs de Wilms des leuc mies aigu s des m soth liomes malins des adenocarcinomes ovariens s reux des tumeurs de la granulosa et des autres tumeurs L interpretation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl
27. xprimiert W hrend der embryonalen Entwicklung wurde die W71 Expression in der menschlichen Niere der Milz und im Gonaden Mesoderm und der Mesothelschicht des Coeloms und der darin enthaltenen Organe beobachtet 7 In adultem Humangewebe wurde die WT1 Gen Expression in Sertoli Zellen der Hoden in Dezidualzellen des Uterus und in Granulosazellen der Eierst cke beobachtet Andere adulte Gewebeproben von Pleura Milz Herz Vorhaut Endometrium und glomerularem Nierenepithel enthalten WTT Transkripte 7 8 Es wurde nachgewiesen dass Antik rper gegen WT1 einschlie lich Klon 6F H2 das Zytoplasma in einigen Gewebeproben markieren k nnen Die F rbung des Zytoplasmas bei Blutgef en und beim Bindegewebe der Lungenalveolen wurde positiv wahrgenommen 8 Eine granul re zytoplasmatische F rbung wurde auch bei reifen Myelozyten festgestellt 11 Pathologisches Gewebe In den Epithel und Blastem Komponenten des Wilms Tumors wurde ein hohes Ma an WT1 Exprimierung nachgewiesen wohingegen Stromaelemente nur sehr gering nachweisbar waren 10 Die meisten malignen Mesotheliome haben WT1 mRNA sowie das Gen Produkt stark exprimiert Das WT1 Protein wurde mit Anti WT1 Klon 6F H2 an die Zellkerne der malignen Mesothelzellen immunolokalisiert 8 9 Eine WT1 Gen und Protein Exprimierung wurde ebenfalls bei der Mehrheit der akuten Leuk mien nachgewiesen aber nicht in Zellen von chronischer myelogener Leuk mie mit Ausnahme der Blastenkrise Der Antik
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