FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 5/6 Clone
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1. Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 ist erforderlich Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX IS780 EFG MNI 2009 12 04 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 F rbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien Auswertung der F rbung Leistungsmerkmale References References Literatur Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 erzielt werden Paraffineingebettete Schnitte Die Vorbehandlung der formalinfixierten paraffineingebetteten Schnitte mit dem 3 in 1 Probenvorbereitungsverfahren f r Dako PT Link wird empfohlen Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 durchf hren Hinweis Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und mit permanentem Einbettmedium auf den Objekttr ger aufgebracht werden Entparaffinierte Schnitte Eine Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte mit D2. 4 CE FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin 5 6 Clone D5 16 B4 Staining interpretation Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS780 Performance characteristics ENGLISH Intended use For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin 5 6 Clone D5 16 B4 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody is useful for the distinction between low differentiated squamous cell carcinoma and adenocarcinoma Furthermore the expression of CK5 by mesothelium makes this antibody valuable in FRAN AIS the differentiation between epithelioid mesothelioma and lung carcinoma 1 when used together with other antibodies against mesothelioma markers such as calretinin and thrombomodulin 2 Anti CK 5 6 has also been found useful in the differential diagnosis of atypical proliferations of the breast 3 Antibodies to CK5 6 may also be useful as an aid in the differentiation between benign and malignant prostate glands 4 Differential Utilisation pr vue identification is aided by the results from a panel of antibodies The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist S
3. aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume de distribution de 200 uL ou FLEXRTUS volume de distribution de 300 uL Autoprogram CK56 sans contre coloration ou CK56H avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela garantit des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la re programmation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre col
4. les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L amp paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Un pr traitement avec d masquage d Epitope induit par la chaleur HIER est n cessaire avec le Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Coupes incluses en paraffine le pr traitement des coupes tissulaires fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide de la proc dure de pr paration d chantillon 3 en un pour le Dako PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice de la EnVisionT FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Remarque apr s coloration les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Coupes d paraffin es le pr traitement des coupes tissulaires d paraffin es fix
5. s par Moll 5 6 ont t identifi s La CK 5 est un type basique de cytok ratine de poids mol culaire lev dont la masse mol culaire est de 58 kDa exprim e dans les couches de cellules basales interm diaires et superficielles des pith liums stratifi s ainsi que des pith liums transitionnels des pith liums complexes des cellules m soth liales et des m soth liomes La CK 5 n est pas quelques rares exceptions pr sente dans les pith liums simples et dans les cellules non pith liales La CK 6 est galement un type basique de cytok ratine de poids mol culaire lev dont la masse mol culaire est de 56 kDa exprim e par l pith lium squameux prolif rant souvent associ la CK 16 48 kDa 5 6 Se r f rer aux nstructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone D5 16 B4 Isotype IgG1 kappa Cytok ratine 5 isol e Lors d analyses par Western
6. blot de pr parations cytosquelettiques d epiderme et d epithelium non k ratinisant l anticorps marque la cytok ratine 5 II marque galement la cytok ratine 6 et marque faiblement la cytok ratine 4 Aucune r action crois e avec les cytok ratines 1 7 8 10 13 14 18 et 19 n a t constat e 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr
7. es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link en suivant la m me proc dure que pour les coupes incluses en paraffine Apr s coloration un montage aqueux ou permanent des lames est recommand Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames FLEX IHC Microscope Slides R f K8020 IS780 EFG MNI 2009 12 04 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 CVR No 33 21 13 17 Procedure de coloration y compris le materiel requis mais non fourni Interpretation de la coloration Caracteristiques de performance DEUTSCH Zweckbestimmung Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifit t Vorsichtsma nahmen Lagerung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 115254 004 Le syst me de visualisation recommand est le EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8010 Les tapes de coloration et d incubation sont pr programm es dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l
8. und 6 Zytokeratin 4 wird schwach markiert und mit den Zytokeratinen 1 7 8 10 13 14 18 und 19 wurde keine Kreuzreaktion nachgewiesen 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schch en aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen
9. ako PT Link nach demselben Verfahren wie f r die paraffineingebetteten Schnitte beschrieben wird empfohlen Die Objekttr ger nach dem F rben mit einem w ssrigen oder permanenten Einbettmedium bedecken Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision M FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 uL Abgabevolumen oder FLEXRTU3 300 uL Abgabevolumen Autoprogram CK56 ohne Gegenf rbung oder CK56H mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dieses gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technisch
10. ation Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol 115254 004 IS780 EFG MNI 2009 12 04 p 1 4 115254 004 Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include tonsil and prostate and the cells structures should display reaction patterns as described for these tissues in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS750 Cells labeled by the antibody display cytoplasmic staining Normal tissues The antibody labels stratified squamous epithelia In complex epithelia the basal cells in most cases express CK5 Simple epithelia and non epithelial cells generally are not labeled by the antibody In tonsil the basal squamous epithelial cells show a moderate to strong staining reaction In prostate the basal cells show a weak to moderate staining reaction whereas no or only focal rea
11. ch die Basalzellen Einfache Epithelien und Nicht Epithelzellen werden generell durch den Antik rper nicht markiert In Mandelgewebe weisen die Plattenepithelzellen eine m ige bis starke F rbereaktion auf In Prostatagewebe weisen die Basalzellen eine schwache bis m ige F rbereaktion auf w hrend in den sekretorischen Zellen keine oder eine nur fokale Reaktion zu beobachten ist Pathologisches Gewebe In formalinfixierten paraffineingebetteten Geweben markiert der Antik rper 56 von 61 92 F llen epitheloider pleuraler Mesotheliome w hrend nur 9 von 63 14 metastatischen Adenokarzinomen markiert wurden Reaktives Mesothelium wurde ebenfalls markiert 2 In einer anderen Studie 1 wurden alle 23 Mesotheliome mit epitheloider oder azin rer Differenzierung durch den Antik rper stark markiert w hrend die F rbung in den sarkomatoiden Bereichen von Tumoren mit gemischter Morphologie schwach oder nicht vorhanden war In einem Fall eines sarkomatoiden Mesothelioms war die Reaktion nicht eindeutig Mesotheliome des desmoplastischen oder sarkomatoiden Typs waren negativ Von 27 sekund ren Adenokarzinomen der Pleura waren 22 negativ 4 schwach oder nicht eindeutig und 1 fokal positiv Mit dem Antik rper wurden hohe Zytokeratinspiegel 5 von 6 Positivit t bei der typischen duktalen Hyperplasie und negative F rbung der meisten F lle von atypischer duktaler Hyperplasie und duktalem In situ Karzinom nachgewiesen 3 Antik rpertests auf Prostatah
12. cinomes cellules squameuses peu diff renci s De plus l expression de la CK5 par le m soth lium rend cet anticorps utile dans la diff renciation du m soth liome pith lio de et du carcinome pulmonaire 1 lorsqu il est associ d autres anticorps dirig s contre les marqueurs du m soth liome tels que la calretinine et la thrombomoduline 2 L anti CK 5 6 s est galement av r utile dans le diagnostic diff rentiel des prolif rations mammaires atypiques 3 Les anticorps dirig s contre la CK5 6 peuvent galement s av rer utiles dans la diff renciation des glandes prostatiques b nignes et malignes 4 L identification diff rentielle est facilit e par les r sultats provenant d un panel d anticorps L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi Les cytok ratines sont des polypeptides fibreux de type alpha dont le diam tre est de 7 11 nm Il s agit de composants importants du cytosquelette de la quasi totalit des cellules pith liales ainsi que de certains types de cellules non pith liales Les cytok ratines sont g n ralement consid r es comme les marqueurs les plus r pandus de la diff renciation pith liale et jusqu pr sent 20 types distincts classifi
13. ction of the secretory cells is seen Abnormal tissues In formalin fixed paraffin embedded tissues the antibody labeled 56 61 92 of epithelioid pleural mesotheliomas while 9 63 14 of metastatic adenocarcinomas were labeled Reactive mesothelium was also labeled 2 In another study 1 all of 23 mesotheliomas with epithelioid or acinar differentiation were strongly labeled by the antibody whilst labeling in the sarcomatoid areas of tumors with a mixed morphology was weak or absent One case of sarcomatoid mesothelioma gave an equivocal reaction whereas mesotheliomas of desmoplastic or sarcomatoid type were negative Of 27 secondary adenocarcinomas of the pleura 22 were negative 4 weak or equivocal and 1 focally positive High levels of cytokeratin 5 6 positivity in ductal hyperplasia of usual type and negative staining of most cases of atypical ductal hyperplasia and ductal carcinoma in situ have been demonstrated with the antibody 3 Testing of the antibody on prostate hyperplasia showed positive reaction in the basal cells while the antibody failed to stain malignant prostatic epithelium in prostate adenocarcinoma Pour utilisation diagnostique in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin 5 6 Clone D5 16 B4 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destine a une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus Cet anticorps permet de distinguer les ad nocarcinomes des car
14. en Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Mandel und Prostatagewebe enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr IS750 Mit diesem Antik rper markierte Zellen weisen ein zytoplasmatisches F rbemuster auf Gesundes Gewebe Der Antik rper markiert stratifiziertes Plattenepithel In komplexen Epithelien erfolgt eine CK5 Expression dur
15. en Zeitpunkt wurden 20 deutlich unterschiedene Typen nachgewiesen und von Moll 5 6 nummeriert Das CK5 ist ein Grundtyp Zytokeratin mit einem hohen Molekulargewicht von 58 kDa das sowohl in den basalen intermedi ren und oberfl chlichen Zellschichten des stratifizierten Epithels wie auch im bergangsepithel komplexem Epithel sowie in Mesothelzellen und im Mesotheliom exprimiert wird CK5 wurde von wenigen Ausnahmen abgesehen in einfachen Epithelien und Nicht Epithelzellen nicht nachgewiesen CK6 ist ebenfalls ein Grundtyp Zytokeratin mit hohem Molekulargewicht von 56 kDa das durch proliferierendes Plattenepithel das oftmals mit CK16 48 kDa gepaart vorliegt exprimiert wird 5 6 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Klon D5 16 B4 Isotyp IgG1 Kappa Isoliertes Zytokeratin 5 Beim Western Blotting von Zellger stpr paraten aus Epidermis und nicht keratinisierendem Epithel markiert der Antik rper Zytokeratin 5
16. ence catalogue Bestellnummer In vitro diagnostic medical device Dispositif m dical de diagnostic in vitro In vitro Diagnostikum Consult instructions for use Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten Temperature limitation Use by Limites de temp rature Utiliser avant Zul ssiger Temperaturbereich Verwendbar bis Manufacturer Fabricant Contains sufficient for lt n gt tests Contenu suffisant pour lt n gt tests Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Hersteller Batch code Numero de lot Chargenbezeichnung IS780 EFG MNI 2009 12 04 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17
17. in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper dient zur Unterscheidung zwischen wenig differenzierten Plattenepithelkarzinomen und Adenokarzinomen Dar ber hinaus ist dieser Antik rper aufgrund der Expression von CK5 durch das Mesothel bei der Differenzierung zwischen epitheloiden Mesotheliom und Lungenkarzinom 1 n tzlich wenn er zusammen mit anderen Antik rpern gegen Mesotheliommarker z B Calretinin und Thrombomodulin eingesetzt wird 2 Anti CK 5 6 hat sich ebenfalls bei der Differenzialdiagnose atypischer Proliferationen der Brust als n tzlich erwiesen 3 Antik rper auf CK5 6 dienen auch als Unterst tzung zur Abgrenzung von benignen und malignen Prostatadr sen 4 Die Differenzialdiagnose wird durch die Ergebnisse eines Antik rper Panels unterst tzt Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit ordnungsgem en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer Diagnostiktests des Patienten vorgenommen werden Zytokeratine sind fibr se Polypeptide des Alphatyps mit einem Durchmesser von 7 11 nm Sie stellen in beinahe allen Epithelzellen wie auch in einigen Nicht Epithelzellen wichtige Komponenten des Zellger sts dar Zytokeratine gelten generell als die am weitesten verbreiteten Marker der Epitheldifferenzierung und bis zum gegenw rtig
18. m azide Clone D5 16 B4 Isotype IgG1 kappa Immunogen Isolated cytokeratin 5 Specificity In Western blotting of cytoskeletal preparations of epidermis and non keratinizing epithelium the antibody labels cytokeratin 5 It also labels cytokeratin 6 and weakly labels cytokeratin 4 No cross reaction with cytokeratins 1 7 8 10 13 14 18 and 19 has been found Precautions 1 For professional users Reactifs fournis 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used Immunogene 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin Sp cificit 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Storage Store at 2 8 Do not use after expiration date sta mped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the i conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls Pr cautions should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is
19. ns should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence y compris le mat riel requis of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended mais non fourni Staining procedure The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 The staining steps and including materials required but incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols not supplied Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTU3 300 uL dispense volume Autoprogram CK56 without counterstaining or CK56H with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Applic
20. observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support Specimen preparation The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of including materials required but approximately 4 um not supplied Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Paraffin embedded _sections Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using the 3 in 1 specimen preparation procedure for Dako PT Link Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Note After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Conservation Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link and following the same procedure as described for paraffin embedded sections After staining the slides should be mounted using aqueous or permanent mounting medium Pr paration des chantillons The tissue sectio
21. oration l aide de EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Les tissus de contr le positifs doivent comprendre les amygdales et la prostate et les cellules structures doivent pr senter des sch mas de r action tels que d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance dans tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Ref 1S750 Les cellules marqu es par l anticorps pr sentent une coloration cytoplasmique Tissus sains L anticorps marque les pith liums squameux stratifi s Dans les pith liums complexes les cellules basales expriment dans la plupart des cas la CK 5 G n ralement les pith liums simples et les cellules non pith liales ne sont pas marqu s par l anticorps Dans amygdale les cellules pith liales squameuses basales indiquent une coloration mod r e forte Dans la prostate les cellules basales pr sentent une coloration faible mod r e alors qu aucune r action ou seulement une coloration focale des cellules s cr toires est observ e Tissus tumoraux Dans les tissus fix s au formol et inclus en paraffine l anticorps mar
22. que 56 61 92 des m soth liomes pleuraux pith lio des alors que 9 63 14 des ad nocarcinomes m tastatiques ont t marqu s Le m soth lium r actif a galement t marqu 2 Dans une autre tude 1 chacun des 23 m soth liomes avec diff renciation pith lio de ou acinaire a t fortement marqu par l anticorps alors que le marquage des zones sarcomato des des tumeurs pr sentant une morphologie mixte tait faible ou absent Un cas de m soth liome sarcomato de a pr sent une r action quivoque alors que les m soth liomes de type desmoplastique ou sarcomato de taient n gatifs Sur 27 ad nocarcinomes secondaires de la pl vre 22 taient n gatifs 4 ont pr sent une coloration faible ou quivoque et 1 une r action positive de mani re focalis e Des taux lev s de positivit aux cytok ratines 5 6 dans l hyperplasie canalaire typique et une coloration n gative de la plupart des cas d hyperplasie canalaire atypique et de carcinome canalaire in situ ont t r v l l aide de l anticorps 3 Le test de l anticorps sur l hyperplasie prostatique a pr sent une r action positive au niveau des cellules basales alors que l anticorps na pas color l pith lium prostatique malin dans l ad nocarcinome de la prostate Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Cytokeratin 5 6 Clone D5 16 B4 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung
23. ummary Cytokeratins are alpha type fibrous polypeptides with a diameter of 7 11 nm They are important components of the cytoskeleton in almost all and explanation epithelial cells as well as in some non epithelial cell types Cytokeratins are generally held to be the most ubiquitous markers of epithelial differentiation and so far 20 distinct types numbered by Moll 5 6 have been revealed The CK5 is a high molecular weight basic type of cytokeratin with a molecular mass of 58 kDa expressed in the basal the intermediate and the superficial cell layers of stratified epithelia as well as in transitional epithelia complex epithelia and in mesothelial cells and mesothelioma CK5 has not with few exceptions been found in simple epithelia and in non epithelial cells CK6 is also a high molecular weight basic type of cytokeratin with a molecular mass of 56 kDa expressed by proliferating squamous epithelium often paired with CK16 48 kDa 5 6 Resume Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of et explication Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Reagent provided Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodiu
24. yperplasie ergaben in den Basalzellen positive Reaktionen w hrend der Antik rper maligne Prostataepithelzellen in Adenokarzinomen der Prostata nicht anf rbte 1 Clover J Oates J Edwards C Anti cytokeratin 5 6 a positive marker for epithelioid mesothelioma Histopathology 1997 31 140 3 2 Cury PM Butcher DN Fisher C Corrin B Nicholson AG Value of the mesothelium associated antibodies thrombomodulin cytokeratin 5 6 calretinin and CD44H in distinguishing epithelioid pleural mesothelioma from adenocarcinoma metastatic to the pleura Mod Pathol 2000 13 107 12 3 Otterbach F Bankfalvi A Bergner S Decker T Krech R Boecker W Cytokeratin 5 6 immunohistochemistry assists the differential diagnosis of atypical proliferations of the breast Histopathology 2000 37 232 40 4 Abrahams NA Ormsby AH Brainard J Validation of cytokeratin 5 6 as an effective substitute for keratin 903 in the differentiation of benign from malignant glands in prostate needle biopsies Histopathology 2002 41 35 41 Moll R Franke WW Schiller DL The catalog of human cytokeratins Patterns of expression in normal epithelia tumors and cultured cells Cell 1982 31 11 24 Moll R L we A Laufer J Franke WW Cytokeratin 20 in human carcinomas A new histodiagnostic marker detected by monoclonal antibodies Am J Pathol 1992 140 427 47 Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole 115254 004 Catalogue number R f r
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