DAKO ChemMateä Detection Kit Peroxidase/DAB, Rabbit/Mouse
Contents
1. CE Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse Code K5005 4th edition 4 me dition 4 Ausgabe For use with Dako automated immunostaining instruments The kit contains reagents sufficient for 500 tests Pour utilisation avec les automates de coloration Dako Ce kit contient les r actifs n cessaires pour 500 tests Zur Verwendung mit Dako Immunf rbeautomaten Die in diesem Kit enthaltenen Reagenzien sind ausreichend f r 500 Tests 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 1 22 Contents Table des mati res Inhalt Page Page Seite ENGLISH Intended Use ii dais 4 Summary and ExXplanalon seele 4 SE CN 5 As Materials et AL E ME 5 B Materials required but not provided ss 5 Be ET 6 SHOP TO ee E E E E AE E E ees yeasts 7 Reagent Preparalion EE 7 Specimen Collection and Preparation sseseseeeeeeeeeeeeeteserretttttttttttttttttttttttttttttEtEEEEEEEEEEEEEEEEEEEEn 7 Steiere 8 Quality Controle ar a A a AAA A AA AAA AAA 9 Interpretation ONRESURS a a a ek 9 Explanation of symbols is 22 FRAN AIS SNS 10 R sum et eXplicatiOn iii a A A A aha 10 R ACIITS N A NA A A A LODO ds 11 A Mat riels TE seite 11 B Mat riels requis mais non foumts n nn 12 Preca tions renent AA AA ed IA AA TA le nn t s es 12 NE A A A menaces Be ee ee ea 13 Pr parati n EE EE 13 Pr l vement et pr paration des chantillons ss 14 Proc dures pens aie tii A A 14 Controle dual A a Re Ann nn ne 15 Int2. Primary antibodies are not provided with the kit We recommend the use of Dako N Series Ready to Use Primary Antibodies or Dako concentrated Primary Antibodies Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse is based on an indirect streptavidin biotin method which has been shown to provide an increased sensitivity compared with analogous methods The biotinylated secondary antibody reagent of the kit reacts equally well with rabbit and mouse immunoglobulins thus only one secondary reagent is required for rabbit or mouse primary antibodies The secondary antibody reagent has been optimally labeled with biotin using a 7 atom spacer arm This allows each biotinylated antibody molecule to react with several alkaline phosphatase conjugated streptavidin molecules and thereby increases the sensitivity of the detection system The alkaline phosphatase conjugated streptavidin of the kit is prepared from streptavidin isolated from Streptomyces avidinii and alkaline phosphatase isolated from calf intestinal mucosa The conjugation is performed by a refined two step glutaraldehyde method Because the isoelectric point of streptavidin is close to neutral non specific ionic interactions with specimen components are avoided The biotinylated secondary antibody reagent as well as the alkaline phosphatase conjugated streptavidin is provided as ready to use in dropper bottles and have to be poured into appropriate instrument containers before u
3. Produced by Produit par Hersteller Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Danemark D nemark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 22 22
4. Dako REAL Chromogen Red 1 8 mL 28x concentrated Bottle D Dako REAL Chromogen Red 2 8 mL 28x concentrated Bottle E CHROMOGEN RED 3 X 28 Dako REAL Chromogen Red 3 8 mL 28x concentrated Bottle F Dako REAL AP Substrate Buffer 250 mL ready to use Buffered solution containing preservative Bottle G Dako REAL Levamisole 1 mL 501x concentrated Buffered solution containing levamisole B Materials required but not provided Dako automated immunostaining instruments Dako Wash Buffer specific for the individual instrument Dual Endogenous Enzyme Block code S2003 optional Dako REAL Proteinase K code S2019 diluted in Dako REAL Proteinase K Diluent code 2032 or Proteinase K Ready to Use code S3020 if necessary N Series Ready to Use Primary Antibodies or suitably diluted concentrated primary rabbit or mouse antibodies from Dako 105066 003 K5005 EF G HGW 07 04 06 p 5 22 Dako REAL Antibody Diluent code S2022 for dilution of concentrated antibodies Dako REAL Hematoxylin code S2020 or Hematoxylin for the Dako Autostainer code S3301 Target Retrieval Solution See package insert of the primary antibody N Series Ready to Use Rabbit or Mouse Universal Negative control or suitable negative control reagent for the primary antibody Dako REAL Incubation Container code S2030 optional Dako REAL Slide Holder code S2029 optional Dako instrumentation utensils Microscope slides G
5. Gewebeschnitten verwendet werden Die Packungsbeilage des jeweiligen konzentrierten primaren Antik rpers enthalt Angaben zur Verd nnung konzentrierter primarer Antik rper von Dako und zur Vorbehandlung mit Proteinase K in Verbindung mit Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse auf formalinfixierten paraffineingebetteten Schnitten Die konzentrierten prim ren Antik rper sollten mit Dako REAL Antibody Diluent Code Nr S2022 verd nnt werden Ein Dako Ger t wird mit den Objekttr gern beladen die unter Zugrundelegung der jeweiligen Matrix des jeweiligen Protokolls f r Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse Code Nr K5005 gef rbt werden Sollte auf Ihrem Dako Ger t keine Matrix kein Protokoll vorhanden sein setzen Sie sich bitte mit unserem Technischen Kundendienst in Verbindung Vor der ersten Verwendung von Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse auf dem Dako Autostainer m ssen die in Tabelle 1 angegebenen Reagenzien und Inkubationszeiten in die Reagenzienliste des Ger ts aufgenommen werden 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 20 22 Tabelle 1 Notwendige Erg nzungen der Reagenzienliste und optimale Inkubationszeiten Reagenz Code Nr Vorschlag Matrix Schritt Inkubations zeit Kurzbezeichnung Dual Endogenous Enzyme Block S2003 DEEB End Enz Block 5 Minuten optional Dako REAL Proteinase K
6. Utiliser le CHROM dans les 20 minutes Ceci signifie que la solution de travail du substrat doit tre pr par e et plac e sur l automate de coloration Dako pas plus de 20 minutes avant que l appareil ne commence l application du CHROM sur les lames Jeter toute solution de CHROM inutilisee Si la phosphatase alcaline endog ne est susceptible de donner une coloration non sp cifique ind sirable le blocage peut tre obtenu en ajoutant du L vamisole au tampon AP Substrate Buffer Utiliser du L vamisole uniquement si cela est n cessaire Pour les chantillons qui n cessitent un blocage de la phosphatase alcaline endog ne ajouter 1 goutte de L vamisole flacon G chaque 10 mL de tampon AP Substrate Buffer flacon F Ajouter et m langer avant l ajout des composants du chromog ne rouge Utiliser le tampon AP Substrate Buffer contenant du L vamisole dans les 5 jours conserver dans l obscurite entre 2 et 8 C Pour la pr paration des r actifs qui ne sont pas fournis avec la trousse veuillez vous reporter aux instructions incluses avec chaque r actif 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 13 22 Pr l vement et pr paration des chantillons Les chantillons peuvent tre des coupes de tissus fix s en routine et inclus en paraffine et des coupes de tissus congel es Divers fixateurs peuvent tre utilis s pour la conservation des chantillons Les chantillons ne doivent pas tre fix s dans du formol tamponn ne
7. ltig erkl rt werden Als Negativkontrolle werden Negative Control for N Series Rabbit Primary Antibodies Code Nr N1699 oder Negative Control for N Series Mouse Primary Antibodies Code Nr N1698 empfohlen Auswertung der Ergebnisse Die Substrat Arbeitsl sung CHROM erzeugt am Ort des vom prim ren Antik rper erkannten Zielantigens ein kontrastreiches rotes Endprodukt Die Rotf rbung muss am erwarteten Ort des Zielantigens auf der Positivkontrolle vorhanden sein Eine unspezifische F rbung stellt sich als eher diffuse Rotf rbung der mit der Negativkontrolle behandelten Objekttr ger dar Zellkerne werden durch die H matoxylin Gegenf rbung blau gef rbt 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 21 22 Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole Catalogue number Bae y Use by Toxic R f rence du catalogue Limites de temp rature Utiliser avant Toxique Bestellnummer Zul ssiger Verwendbar bis Giftig Temperature limitation Temperaturbereich In vitro diagnostic Contains sufficient for lt n gt tests medical device Manufacturer Dispositif m dical de TEE pour Fabricant diagnostic in vitro Hersteller i A S Inhalt ausreichend f r lt n gt In vitro Diagnostikum Tests Consult instructions for SC ec Batch code Harmiul onsulter les instructions R TR d utilisation LOT Code du lot x Nocif Chargenbezeichnung Gesundheitssch dlich Gebrauchsanweisung beachten
8. rpr tation desr sultats cerir Mit aos 15 Explication des YODO tt RS Ut eat ara ete Bea Te at ns ntm 22 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 2 22 DEUTSCH Verwendungszweck ke ER 16 Zusammenfassung und Erkl rung ss 16 Reagenzien AA 17 A Mitgelieferte Mat rnalien ie ae admise ane Be 17 B Erforderliches aber nicht mitgeliefertes Material nnnnnnnnnnnsnnnsreeesrtrrrtrrrrrrrrrssrrrrrrrrreent 18 Vorsichtsma hahmen se on tres Mate ka en Ren 18 Aufbewahrung erkennen sa 19 Reagenzvorkefeilung mei ua EHRE 19 Entnahme und Vorbereitung der Probe se 19 a ee ernennen ee 20 Qualit tskontrolle oct an ale Rene a daa 21 Auswertung der EXI Erbe ER ie 21 Erl uterung def SyMbol 00 ehe 22 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 3 22 ENGLISH Intended Use For in vitro diagnostic use Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse is intended for use in immunohistochemistry together with Dako automated immunostaining instruments The kit is based on the LSAB labeled streptavidin biotin method and is employed in a three step procedure The first step is incubation of the tissue with an optimally diluted primary rabbit or mouse antibody The second step is incubation with Dako REALT Link Biotinylated Secondary Antibodies AB2 and the third step is incubation with Dako REAL Streptavidin Alkaline Phosphatase AP The reaction is visualized by a RED chromogen which is also included in the
9. F rbeergebnisse zu gew hrleisten wird empfohlen das Kit nur mit empfohlenen Reagenzien zu verwenden siehe Abschnitt Erforderliches aber nicht mitgeliefertes Material Zusammenfassung und Erkl rung Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse wurde so konzipiert dass bei Verwendung der in dieser Packungsbeilage angegebenen Matrizes Protokolle optimale F rbeergebnisse mit Dako Immunf rbeautomaten erzielt werden Vor der F rbung sollte f r einige routinem ig fixierte paraffineingebettete Gewebeschnitte eine hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER mit der in der Packungsbeilage des prim ren Antik rpers angegebenen Demaskierungsl sung erfolgen Bei einigen prim ren Antik rpern werden bessere F rbeergebnisse erzielt wenn anstelle des HIER Verfahrens eine Gewebevorbehandlung mit Enzymen vorgenommen wird Bitte beachten dass f r das HIER Verfahren Dako REAL M Proteinase K Code Nr S2019 vorgesehen ist um die Batch Verarbeitung von Objekttr gern zu erleichtern Die endogene alkalische Phosphatase sollte durch Zugabe von Levamisole Fl schchen G zu AP Substrate Buffer Fl schchen F blockiert werden bevor Chromogen Red 1 Red 2 und Red 3 zugegeben werden Wahlweise kann die endogene alkalische Phosphatase auch mit Dako Dual Endogenous Enzyme Block Code Nr S2003 blockiert werden Das wirkungsvolle Waschverfahren und die in den Dako Reagenzien vorhandenen stabilisierenden Proteine machen weit
10. Solution 2019 S2032 Pro K Vorbehandlung 10 Minuten oder unter Antik rper Dako Proteinase K S2030 Prim re Antik rper Individuell Antik rper 10 25 Minuten Dako REAL Detection System K5005 K5005LIN Sekund res 15 Minuten Alkaline Phosphatase RED Link Reagenz Biotinylated Secondary Antibodies AB2 Dako REAL Detection System K5005 K5005AP Terti res Reagenz 15 Minuten Alkaline Phosphatase RED Streptavidin Alkaline Phosphatase AP Dako REAL Detection System K5005 K5005LPR Substrat Charge 20 Minuten Chromogen RED Dako REAL Hematoxylin 2020 Zusatz 1 2 Minuten oder Dako Hematoxylin for the Dako S3301 1 5 Minuten Autostainer Blueing Buffer Autostainer Puffer S3006 Zusatz 5 Minuten N Series Ready to Use Primary Antibodies F r andere Ger te von Dako sind die Namen der Reagenzien und die zugeh rigen Inkubationszeiten bereits in den Matrizes Protokollen enthalten Qualit tskontrolle Bei jedem F rbedurchlauf sollte eine als positiv bekannte Kontrollprobe mitgef hrt werden um die Leistung aller verwendeten Reagenzien zu best tigen Wenn das positive Kontrollgewebe keine F rbung aufweist muss die Markierung der Testproben f r ung ltig erkl rt werden Zum Ausschluss einer unspezifischen F rbung sollte ferner stets eine Negativkontrolle mitlaufen Ist die unspezifische F rbung nicht eindeutig von der spezifischen F rbung zu unterscheiden muss die Markierung der Testproben f r ung
11. de d tection Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse appliqu e sur des coupes fix es au formol et incluses en paraffine est fournie dans la notice de l anticorps primaire concentr Les anticorps primaires concentr s doivent tre dilu s dans le diluant Dako REAL Antibody Diluent r f S2022 Les lames sont charg es sur un appareil Dako et color es l aide du mod le protocole indiqu pour le syst me de d tection Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse r f K5005 Si le mod le protocole n est pas pr sent sur votre appareil Dako veuillez contacter notre service technique 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 14 22 Avant d utiliser le systeme de d tection Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse pour la premi re fois sur l automate de coloration Dako Autostainer il est n cessaire d ajouter les r actifs et les temps figurant au tableau 1 la liste de r actifs de l appareil Tableau 1 Ajouts n cessaires la liste de r actifs et temps d incubation optimaux R actif R f Abr viation tape du mod le Temps sugg r e d incubation Dual Endogenous Enzyme Block facultatif S2003 DEEB Blocage enzyme 5 minutes endog ne Dako REAL Proteinase K Solution 2019 S2032 Pro K Pr traitement sous 10 minutes ou anticorps Dako Proteinase K S2030 Anticorps primaires Individuel Anticorps 10 25
12. kit To ensure a proper staining it is recommended to use the kit in conjunction with other recommended reagents listed in the section Materials required but not provided Summary and Explanation Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse has been designed to give an optimal staining on Dako automated immunostaining instruments when using the templates protocols advised in this package insert Prior to staining some routinely fixed paraffin embedded tissue sections should be subjected to heat induced epitope retrieval HIER using the Target Retrieval Solution specified in the package insert for the primary antibody Some primary antibodies require enzymatic pre treatment of tissue for optimal staining instead of HIER Please note that Dako REAL Proteinase K code S2019 is designed to be used in combination with HIER in order to ease batch processing of the slides Endogenous alkaline phosphatase should be blocked by adding Levamisole Bottle G to the AP Substrate Buffer Bottle F prior to adding Chromogen Red 1 Red 2 and Red 3 Alternatively the endogenous alkaline phosphatase can be blocked with Dako Dual Endogenous Enzyme Block code S2003 Due to an effective washing procedure and the presence of stabilizing proteins in the Dako reagents extra blocking steps to reduce non specific background staining are unnecessary Dako Wash Buffer specific for the individual Dako instruments is recommended
13. von Dako Dako REAL Antibody Diluent Code Nr S2022 zur Verd nnung konzentrierter Antik rper Dako REAL Hematoxylin Code Nr S2020 oder Hematoxylin for the Dako Autostainer Code Nr 3301 Demaskierungsl sung Siehe Packungsbeilage des primaren Antik rpers N Series Ready to Use Rabbit oder Mouse Universal Negative Control oder ein anderes geeignetes Negativkontrollreagenz fur den primaren Antik rper Dako REAL Incubation Container Code Nr S2030 optional Dako REAL Slide Holder Code Nr S2029 optional Zubehor fur Dako Gerate Mikroskop Objekttrager Fur die Wachsentfernung bei paraffineingebetteten Gewebeschnitten gebrauchliche Laborreagenzien Fixiermittel wassrig oder auf Basis organischer L sungsmittel und Deckgl ser Vorsichtsma nahmen 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Fl schchen A Dako REALT Link Biotinylated Secondary Antibodies AB2 und Fl schchen B Dako REAL Streptavidin Alkaline Phosphatase AP enthalten von S ugetieren stammendes Material Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 3 Fl schchen A Dako REAL Link Biotinylated Secondary Antibodies AB2 enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Ansammlungen von Natriumazid k nnen auch in Konzentrationen die nicht als gef hrlich klassifiziert sind mit Blei und Kupferabflussrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorg
14. 2003 En raison d une proc dure de lavage efficace et de la pr sence de prot ines stabilisantes dans les r actifs Dako des tapes de blocage suppl mentaires ne sont pas n cessaires pour r duire la coloration de fond non sp cifique Il est recommand d utiliser le tampon de lavage Dako sp cifique a chaque appareil Dako Les anticorps primaires ne sont pas fournis dans la trousse L utilisation des anticorps Dako N Series Ready to Use Primary Antibodies ou des anticorps primaires concentr s Dako est recommand e Le syst me de d tection Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse est bas sur une m thode streptavidine biotine indirecte laquelle s est av r e fournir une augmentation de la sensibilit en comparaison avec d autres m thodes analogues Le r actif d anticorps secondaire biotinyl de la trousse r agit de la m me mani re avec les immunoglobulines de lapin et avec les immunoglobulines de souris un seul r actif secondaire tant ainsi n cessaire pour les anticorps primaires de lapin ou de souris Le r actif d anticorps secondaire a t marqu de mani re optimale avec de la biotine en utilisant un bras espaceur de 7 atomes Ceci permet chaque mol cule d anticorps biotinyl de r agir avec plusieurs mol cules de streptavidine conjugu e de la phosphatase alcaline et par cons quent d augmenter la sensibilit du syst me de d tection La streptavidine conjugu e la phos
15. Produkts und die notwendigen Sicherheitsma nahmen eingewiesen werden Weitere Informationen bitte dem Material Sicherheitsdatenblatt MSDS entnehmen 8 Fl schchen G Dako REAL Levamisole enth lt 1 lt 5 Levamisolhydrochlorid und ist folgenderma en markiert Gesundheitssch dlich R22 Gesundheitssch dlich bei Verschlucken S60 Dieser Stoff und sein Beh lter sind als gef hrlicher Abfall zu entsorgen 9 Fl schchen F Dako REAL AP Substrate Buffer enth lt 1 lt 20 Trometamol Bei dieser Konzentration ist f r Trometamol keine Gefahrenkennzeichnung erforderlich Auf Anfrage ist f r Fachpersonal ein Material Sicherheitsdatenblatt Material Safety Data Sheet MSDS erh ltlich 10 Entsprechende Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 11 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Aufbewahrung Bei 2 8 C aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Kit aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Kitkomponenten aus unterschiedlichen Chargen nicht austauschen Werden die Reagenzien anders als unter den genannten Bedingungen aufbewahrt sind die Bedingungen vom Anwender zu validieren Den fertigen AP Substrate Buffer mit Levamisole im Dunkeln bei 2 8 C aufbewahren und innerhalb von 5 Tagen verbrauchen Angesetzte Substrat Arbeitsl sung CHROM innerhalb von 20 Minuten verbrauchen Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich n
16. add 1 drop of Levamisole Bottle G to each 10 mL of AP Substrate Buffer Bottle F Add and mix before adding the Chromogen Red components Use the AP Substrate Buffer with Levamisole within 5 days store in the dark at 2 8 C For the preparation of reagents not provided with the kit please refer to the instructions included with the individual reagent Specimen Collection and Preparation The specimens may be routinely fixed paraffin embedded tissue sections and frozen tissue sections A variety of fixatives may be used for specimen preservation Specimens should not be fixed in neutral buffered formalin for more than 24 hours and preferably for a shorter time The optimal thickness of paraffin embedded sections is approximately 4 um The optimal thickness of frozen sections is 4 6 um The specimens should be mounted on microscope slides The sections should be mounted on the slides as flat and wrinkle free as possible Too many wrinkles will have an impact on the staining results NOTE The microscope slides must have a width suitable for the Dako instrument Please refer to the Operator s Manual for the individual Dako instrument for definition of usable microscope slides Paraffin sections should be mounted from a pre heated water bath containing distilled or deionized water The water bath should contain no additives such as gelatin poly L lysine etc Sections should be dried by heating generally at a temperature not above 60 C
17. after expiration date stamped on the kit Do not interchange kit components from different lots If reagents are stored under any conditions other than those specified the user must verify the conditions The prepared AP Substrate Buffer with Levamisole should be stored at 2 8 C in the dark and used within 5 days The Substrate Working Solution CHROM must be used within 20 minutes If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the product is suspected contact our Technical Services Reagent Preparation Substrate Working Solution CHROM The Substrate Working Solution CHROM is prepared by mixing thoroughly 750 uL AP Substrate Buffer Bottle F with 30 uL Chromogen Red 1 Bottle C 30 uL Chromogen Red 2 Bottle D and 30 uL Chromogen Red 3 Bottle E in that exact order and with thorough mixing after the addition of each chromogen Use CHROM within 20 minutes This means that the Substrate Working Solution should be prepared and placed on the Dako automated immunostaining instrument no more than 20 minutes before the instrument applies the CHROM on the slides Discard any volume of CHROM that is not used If endogenous alkaline phosphatase is expected to give unwanted unspecific staining blocking can be achieved by adding Levamisole to the AP Substrate Buffer Use Levamisole only if required For those specimens that do require blocking of endogenous alkaline phosphatase
18. command s pour la contre coloration car ils fournissent une coloration bleu clair des noyaux Les coupes de tissus color es peuvent tre mont es soit avec un milieu de montage aqueux soit avec un milieu de montage organique a base de solvant R actifs A Mat riels fournis Flacon A EEE NUNED SECONDARY AB2 Dako REAL Link Biotinylated Secondary Antibodies AB2 100 mL pr t l emploi Immunoglobulines de ch vre anti souris et anti lapin biotinyl es Dans une solution tamponn e contenant une prot ine stabilisante et de l azide de sodium La couleur de ce r actif peut varier de jaune fonc incolore sans que cela n ait aucune influence sur la performance de la trousse STREPTAVIDIN Flacon B AP Dako REAL Streptavidin Alkaline Phosphatase AP 100 mL pr t l emploi Streptavidine conjugu e de la phosphatase alcaline Dans une solution tamponn e contenant une prot ine stabilisante et un agent conservateur Flacon C Dako REAL Chromogen Red 1 8 mL concentr 28x Flacon D Dako REAL Chromogen Red 2 8 mL concentr 28x Flacon E Dako REAL Chromogen Red 3 8 mL concentr 28x Flacon F Dako REAL AP Substrate Buffer 250 mL pr t a l emploi Solution tamponn e contenant un agent conservateur Flacon G Dako REAL Levamisole 1 mL concentr 501x Solution tamponn e contenant du l vamisole 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 11 22 B Mat riels requis mais
19. ed on formalin fixed paraffin embedded sections A dilution guideline for Dako concentrated primary antibodies and the use of proteinase K pre treatment in connection with Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse applied on formalin fixed paraffin embedded sections is provided in the package insert of the concentrated primary antibody The concentrated primary antibodies should be diluted in Dako REAL Antibody Diluent code 2022 The slides are loaded onto a Dako instrument and stained using the dedicated template protocol for Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse code K5005 If the template protocol is not present on your Dako instrument please contact our Technical Services Before using Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse on the Dako Autostainer for the first time it is necessary to add the reagents and times listed in table 1 to the reagent list of the instrument Table 1 Necessary additions to the reagent list and optimal incubation times Reagent Code Suggestion for Template step Incubation short name i Time Dual Endogenous Enzyme Block optional 82003 DEEB End Enz Block 5 minutes Dako REAL Proteinase K Solution 2019 S2032 Pro K Pre treatment 10 minutes or under antibody Dako Proteinase K 2030 Primary antibodies Individual Antibody 10 25 minutes Dako REAL Detection System Alkal
20. eneral laboratory reagents for dewaxing paraffin embedded tissue sections Mounting medium aqueous or organic solvent based and coverslips Precautions 1 For professional users 2 Bottle A Dako REAL Link Biotinylated Secondary Antibodies AB2 and Bottle B Dako REAL Streptavidin Alkaline Phosphatase AP contain material of mammalian origin As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 3 Bottle A Dako REAL Link Biotinylated Secondary Antibodies AB2 contains sodium azide NaN3 a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 4 The prepared Chromogen Working Solution must be applied within 20 minutes 5 Dono expose Bottle C Dako REAL Chromogen Red 1 Bottle D Dako REAL Chromogen Red 2 Bottle E Dako REAL Chromogen Red 3 Bottle G Dako REAL Levamisole or the Substrate Working Solution CHROM to strong light 6 Bottle E Dako REAL Chromogen Red 3 is very sensitive to heat and exposure to room temperature should therefore be as brief as possible 7 Bottle E Dako REAL Chromogen Red 3 contains 1 lt 5 Fast Red KL Salt and is labeled Toxic R45 May cause cancer S35 This material and its contain
21. er must be disposed of in a safe way S45 In case of accident or if you feel unwell seek medical advice immediately show label where possible 53 Avoid exposure obtain special instructions before use Restricted to professional users Caution This product contains a substance which has not yet been fully tested The classification has been made solely on the basis of a comparison with substances with a similar structure As a main rule persons under 18 years of age are not allowed to work with this product Users must be carefully instructed in the proper work procedure the dangerous properties of the product and the necessary safety instructions Please refer to the Material Safety Data Sheet MSDS for additional information 8 Bottle G Dako REAL Levamisole contains 1 lt 5 levamisole hydrochloride and is labeled Harmful R22 Harmful if swallowed S60 This material and or its container must be disposed of as hazardous waste 9 Bottle F Dako REAL AP Substrate Buffer contains 1 lt 20 trometamol At product concentrations trometamol does not require hazard labeling Material Safety Data Sheet MSDS available for professional users on request 10 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 11 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations 105066 003 K5005 EF G HGW 07 04 06 p 6 22 Storage Store the kit at 2 8 C Do not use
22. ere Blockierungsschritte zur Verminderung einer unspezifischen Hintergrundf rbung berfl ssig Es wird empfohlen den speziellen Dako Waschpuffer f r das jeweilige Dako Ger t zu verwenden Prim re Antik rper geh ren nicht zum Lieferumfang Wir empfehlen Dako N Series Ready to Use Primary Antibodies bzw konzentrierte prim re Antik rper von Dako Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse beruht auf einem indirekten Streptavidin Biotin Verfahren das eine nachweislich h here Empfindlichkeit als analoge Verfahren aufweist Das den biotinylierten sekund ren Antik rper enthaltende Reagenz reagiert gleich gut mit den Immunglobulinen von Kaninchen und Maus so dass f r prim re Kaninchen oder Mausantik rper nur ein einziges Sekund rreagenz erforderlich ist Das sekund re Antik rper Reagenz wurde mit Hilfe eines Spacerarms aus 7 Atomen optimal mit Biotin markiert Dadurch wird die Empfindlichkeit des Detektionssystems erh ht denn jedes biotinylierte Antik rper Molek l kann mit mehreren mit alkalischer Phosphatase konjugierten Streptavidin Molek len reagieren Das mit alkalischer Phosphatase konjugierte Streptavidin im Kit wurde aus Streptavidin das aus Streptomyces avidinii isoliert wurde sowie aus alkalischer Phosphatase aus der Schleimhaut des Kalbsdarms gewonnen Die Konjugation erfolgt nach einem verfeinerten Zweischritt Glutaraldehydverfahren Da der isoelektrische Punkt des Streptavidins nahezu neutra
23. es les pr cautions d usage S45 En cas d accident ou de malaise consulter imm diatement un m decin si possible lui montrer l tiquette S53 viter l exposition se procurer des instructions sp ciales avant l utilisation R serv aux utilisateurs professionnels Attention Ce produit contient une substance qui n a pas encore t compl tement test e 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 12 22 Cette classification a t effectu e uniquement d apr s une comparaison avec des substances ayant une structure similaire En r gle g n rale il n est pas permis aux personnes g es de moins de 18 ans de manipuler ce produit Les utilisateurs doivent tre inform s sur les bonnes proc dures de travail les propri t s dangereuses du produit et les instructions de s curit n cessaires Veuillez vous reporter la fiche technique de s curit MSDS pour plus d informations 8 Le flacon G Dako REAL Levamisole contient de 1 moins de 5 d hydrochlorure de l vamisole et est d sign comme Nocif R22 Nocif en cas d ingestion S60 liminer le produit et ou son r cipient comme un d chet dangereux 9 Le flacon F Dako REAL AP Substrate Buffer contient de 1 moins de 20 de trom tamol Aux concentrations du produit le tom tamol ne n cessite pas qu on le d signe comme produit dangereux Une fiche technique de s curit MSDS est disponible sur demande pour les utilisateurs professio
24. for a minimum of 60 minutes e g overnight To ensure proper adherence of sections to slides it is important to drain the water from beneath the sections prior to the oven drying process 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 7 22 Procedure Dako automated immunostaining instruments use techniques based on different principles to obtain an optimal staining result Before running protocols on the Dako automated immunostaining instrument please read carefully the Operator s Manual for the dedicated Dako instrument After deparaffinization and hydration to buffer water most tissue sections should need to be subjected to HIER It is recommended to standardize the HIER in order to ascertain reproducible epitope retrieval To standardize the treatment it is recommended to load the slide holder fully with slides even if only one slide may hold tissue this ensures an identical heating of sections in every run At the termination of the epitope retrieval step slides must be left in the buffer for at least 20 minutes at room temperature During this cooling the Dako automated immunostaining instrument can be prepared for the staining run A few epitopes do not tolerate the HIER Please refer to the package insert for the individual Dako primary antibody for instructions Incubation with primary antibody Dako N Series Ready to Use Primary Antibodies can be used with Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse appli
25. icht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Produkt hindeutet ist unser technischer Kundendienst zu verst ndigen Reagenzvorbereitung Substrat Arbeitsl sung CHROM Die Substrat Arbeitsl sung CHROM wird angesetzt indem 750 uL AP Substrate Buffer Fl schchen F mit 30 uL Chromogen Red 1 Fl schchen C 30 uL Chromogen Red 2 Fl schchen D und 30 uL Chromogen Red 3 Fl schchen E in genau dieser Reihenfolge zugegeben werden nach Zusatz jedes einzelnen Chromogens gr ndlich mischen CHROM innerhalb von 20 Minuten verbrauchen Das bedeutet dass die Substrat Arbeitsl sung fr hestens 20 Minuten bevor das Ger t die CHROM L sung auf die Objekttr ger aufbringt angesetzt und in den Dako Immunf rbeautomaten gef llt werden darf Nicht verwendete CHROM L sung entsorgen Wird erwartet dass endogene alkalische Phosphatase eine unerw nschte unspezifische F rbung hervorruft kann die Blockade durch Zugabe von Levamisole zu AP Substrate Buffer erfolgen Levamisole nur im Bedarfsfall verwenden Zu allen Proben bei denen eine Blockade der endogenen alkalischen Phosphatase erforderlich ist 1 Tropfen Levamisole Fl schchen G f r je 10 mL AP Substrate Buffer Fl schchen F zugeben Vor Zugabe der Chromogen Red Komponenten zugeben und mischen AP Substrate Buffer mit Levamisole innerhalb von 5 Tagen verbrauchen im Dunkeln bei 2 8 C aufbewahren Angaben zum Ansetzen von Reagenzien die nicht z
26. ine K5005 K5005LIN Secondary 15 minutes Phosphatase RED Link Biotinylated Reagent Secondary Antibodies AB2 Dako REAL Detection System K5005 K5005AP Tertiary Reagent 15 minutes Alkaline Phosphatase RED Strepavidin Alkaline Phosphatase AP Dako REAL Detection System K5005 K5005LPR Substrate Batch 20 minutes Chromogen RED Dako REAL Hematoxylin 2020 Auxiliary 1 2 minutes Or Dako Hematoxylin for the Dako Autostainer S3301 1 5 minutes Blueing Buffer Autostainer Buffer S 3006 Auxiliary 5 minutes N Series Ready to Use Primary Antibodies For other Dako instruments the reagent names and incubation times are included in the templates protocols 105066 003 K5005 EF G HGW 07 04 06 p 8 22 Quality Control Each staining run should include a known positive control specimen to ascertain a proper performance of all the applied reagents If the positive control specimen fails to demonstrate positive staining labeling of test specimens should be considered invalid A negative control reagent should be used with each specimen to identify any non specific staining If non specific staining cannot be clearly differentiated from the specific staining the labeling of the test specimen should be considered invalid Negative Control for N Series Rabbit Primary Antibodies code N1699 or Negative Control for N Series Mouse Primary Antibodies code N1698 is recommended as negative control reagent Interpre
27. l ist kommt es nicht zu unspezifischen Wechselbeziehungen zwischen den lonen der Probenkomponenten Der biotinylierte sekund re Antik rper sowie das mit alkalischer Phosphatase konjugierte Streptavidin werden gebrauchsfertig in Tropffl schchen geliefert und m ssen vor Gebrauch in die entsprechenden Beh lter des Ger ts eingef llt werden 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 16 22 Das Substratsystem besteht aus vier Komponenten Chromogen Red 1 Chromogen Red 2 Chromogen Red 3 und AP Substrate Buffer Bei dem Chromogen handelt es sich um ein Fast Red Chromogen AuRerdem wird konzentriertes Levamisol mitgeliefert das zur Substrat Arbeitsl sung hinzugef gt werden kann falls eine Blockade der endogenen alkalischen Phosphatase als notwendig erachtet wird Chromogen Red 1 Red 2 und Red 3 m ssen vor Gebrauch mit AP Substrate Buffer verd nnt werden Das Substratchromogen f hrt zu einem kontrastreichen roten Endprodukt am Ort des Zielantigens F r die Gegenf rbung werden Dako REAL Hematoxylin Code Nr S2020 oder Hematoxylin for the Dako Autostainer Code Nr S3301 empfohlen da sie eine deutliche nukle re Blauf rbung hervorrufen F r die Fixierung der gef rbten Gewebeschnitte eignen sich sowohl Fixiermittel auf w ssriger Basis als auch auf Basis organischer L sungsmittel Reagenzien A Mitgelieferte Materialien Fl schchen A Kr AB2 Dako REAL Biotinylated Secondary Antibodies AB2 100 mL gebrauchsfertig Bioti
28. me non valide Les anticorps Negative Control for N Series Rabbit Primary Antibodies r f N1699 ou Negative Control for N Series Mouse Primary Antibodies r f N1698 sont recommand s comme r actif de contr le n gatif Interpr tation des r sultats La solution de travail du substrat CHROM produit une couleur rouge sur le site de l antig ne cible reconnu par Panticorps primaire La couleur rouge doit tre pr sente sur l chantillon de contr le positif l o l antig ne cible est attendu Si une coloration non sp cifique est pr sente ceci sera identifi comme une coloration rouge diffuse sur les lames trait es avec le r actif de contr le n gatif Les noyaux seront color s en bleu par le contre colorant h matoxyline 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 15 22 DEUTSCH Verwendungszweck Zur In vitro Diagnostik Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse ist f r immunhistochemische Verfahren mit Dako Immunf rbeautomaten bestimmt Das auf der LSAB Methode markiertes Streptavidin Biotin beruhende Kit wird in einem Drei Schritt Verfahren eingesetzt Zuerst wird das Gewebe mit einem optimal verd nnten prim ren Kaninchen oder Mausantik rper danach mit Dako REAL Link Biotinylated Secondary Antibodies AB2 und zuletzt mit Dako REAL Streptavidin Alkaline Phosphatase AP inkubiert Die Reaktion wird mit dem ebenfalls im Kit enthaltenen RED Chromogen sichtbar gemacht Um korrekte
29. minutes Dako REAL Detection System Alkaline K5005 K5005LIN R actif secondaire 15 minutes Phosphatase RED Link Biotinylated Secondary Antibodies AB2 Dako REAL Detection System K5005 K5005AP R actif tertiaire 15 minutes Alkaline Phosphatase RED Strepavidin Alkaline Phosphatase AP Dako REAL Detection System K5005 K5005LPR Substrat S rie 20 minutes Chromogen RED Dako REAL Hematoxylin 2020 Auxiliare 1 2 minutes ou Dako Hematoxylin for the Dako Autostainer S3301 1 5 minutes Blueing Buffer tampon pour l automate 3006 Auxiliare 5 minutes de coloration Autostainer Anticorps N Series Ready to Use Primary Antibodies Pour les autres appareils Dako les noms des r actifs et les temps d incubation sont inclus dans les mod les protocoles Contr le qualit Chaque cycle de coloration doit comprendre un chantillon de contr le positif connu pour v rifier la bonne performance de tous les r actifs appliqu s Si l chantillon de contr le positif ne pr sente pas de coloration positive le marquage des chantillons analyser doit tre consid r comme non valide Un r actif de contr le n gatif doit tre utilis avec chaque chantillon afin d identifier toute coloration non sp cifique Si une coloration non sp cifique ne peut pas tre clairement diff renci e de la coloration sp cifique le marquage de l chantillon a analyser doit tre consid r com
30. nnels 10 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 11 Les solutions inutilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conservation Conserver la trousse entre 2 et 8 C Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur la trousse Ne pas intervertir les composants de la trousse entre diff rents lots Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles qui sont indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Le tampon AP Substrate Buffer contenant du L vamisole doit tre conserv dans l obscurit entre 2 et 8 C et utilis dans les 5 jours suivant sa pr paration La solution de travail du substrat CHROM doit tre utilis e dans les 20 minutes suivant sa pr paration En cas de coloration inattendue ne pouvant tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et de suspicion d un probl me avec le produit contacter notre service technique Pr paration des r actifs Solution de travail du substrat CHROM La solution de travail du substrat CHROM est pr par e en m langeant soigneusement 750 uL de tampon AP Substrate Buffer flacon F 30 uL de Chromogen Red 1 flacon C 30 uL de Chromogen Red 2 flacon D et 30 uL de Chromogen Red 3 flacon E en suivant exactement cet ordre et en n oubliant pas de m langer soigneusement apr s l ajout de chaque chromog ne
31. non fournis Automates de coloration Dako Tampon de lavage Dako sp cifique chaque appareil Dual Endogenous Enzyme Block Agent bloquant double des enzymes endog nes r f S2003 facultatif Dako REAL Proteinase K r f S2019 dilu e dans le diluant Dako REAL Proteinase K Diluent r f S2032 ou Proteinase K Ready to Use r f S3020 le cas ch ant Anticorps N Series Ready to Use Primary Antibodies ou anticorps primaires de lapin ou de souris concentr s dilu s de facon appropri e provenant de chez Dako Dako REAL Antibody Diluent r f S2022 pour la dilution des anticorps concentr s Dako REAL Hematoxylin r f S2020 ou Hematoxylin for the Dako Autostainer r f S3301 Solution de d masquage des cibles Consulter la notice de l anticorps primaire N Series Ready to Use Rabbit or Mouse Universal Negative Control ou r actif de contr le n gatif appropri pour l anticorps primaire Bac d incubation Dako REAL Incubation Container r f S2030 facultatif Portoir de lames Dako REAL Slide Holder r f S2029 facultatif Ustensiles pour l appareil Dako Lames de microscope R actifs g n raux de laboratoire pour le d paraffinage des coupes de tissus inclus en paraffine Milieu de montage aqueux ou organique base de solvant et lamelles Pr cautions 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Le flacon A Dako REAL Link Biotinylated Secondary Antibodies AB2 et le flacon B Dako REAL Strep
32. nylierte Ziege Anti Maus und Ziege Anti Kaninchen Immunglobuline In gepufferter L sung mit stabilisierendem Protein und Natriumazid Farbschwankungen bei diesem Reagenz kraftig gelb bis farblos haben keinerlei Einfluss auf die Leistung des Kits Flaschchen B AP Dako REAL Streptavidin Alkaline Phosphatase AP 100 mL gebrauchsfertig An alkalische Phosphatase konjugiertes Streptavidin In gepufferter L sung mit stabilisierendem Protein und Konservierungsmittel Fl schchen C Dako REAL Chromogen Red 1 8 mL 28fach konzentriert Fl schchen D Dako REAL Chromogen Red 2 8 mL 28fach konzentriert Fl schchen E Dako REAL Chromogen Red 3 8 mL 28fach konzentriert Flaschchen F Dako REAL AP Substrate Buffer 250 mL gebrauchsfertig Gepufferte Substratl sung mit Konservierungsmittel Flaschchen G Dako REAL Levamisole 1 mL 501fach konzentriert Gepufferte Levamisol L sung 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 17 22 B Erforderliches aber nicht mitgeliefertes Material Dako Immunf rbeautomaten Spezielle Dako Waschpuffer f r das jeweilige Ger t Dual Endogenous Enzyme Block Code Nr S2003 optional Dako REAL Proteinase K Code Nr S2019 verd nnt in Dako REAL Proteinase K Diluent Code Nr S2032 oder Proteinase K Ready to Use Code Nr S3020 soweit erforderlich N Series Ready to Use Primary Antibodies oder entsprechend verdunnte konzentrierte primare Kaninchen bzw Mausantik rper
33. omate de coloration Dako veuillez lire attentivement le Manuel de l op rateur sp cifique l appareil Dako Apres le d paraffinage et l hydratation par tampon eau la plupart des coupes de tissus devraient n cessiter une proc dure HIER ll est recommand de standardiser la proc dure HIER de fa on garantir un d masquage d pitopes reproductible Pour standardiser le traitement il est recommand de charger compl tement le portoir de lames avec des lames m me s il est possible qu une seule lame contienne un tissu cela assure un chauffage identique des coupes dans chaque cycle la fin de l tape de d masquage d pitopes les lames doivent tre maintenues dans le tampon pendant au moins 20 minutes temp rature ambiante Durant ce refroidissement l automate de coloration Dako peut tre pr par pour le cycle de coloration Quelques pitopes ne tol rent pas la proc dure HIER Veuillez vous reporter la notice de chaque anticorps primaire Dako pour des instructions Incubation avec l anticorps primaire Les anticorps Dako N Series Ready to Use Primary Antibodies peuvent tre utilis s avec le systeme de d tection Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse appliqu sur des coupes fix es au formol et incluses en paraffine Une directive de dilution pour les anticorps primaires concentr s Dako et l utilisation du pr traitement la prot inase K en connexion avec le syst me
34. phatase alcaline de la trousse est pr par e partir de streptavidine issue de Streptomyces avidinii et de phosphatase alcaline isol e partir de muqueuse intestinale de veau La conjugaison est r alis e selon une m thode au glutarald hyde deux tapes tant donn que le point iso lectrique de la streptavidine est proche de la neutralit des interactions ioniques non sp cifiques avec les composants des chantillons sont vit es Le r actif d anticorps secondaire biotinyl ainsi que la streptavidine conjugu e la phosphatase alcaline sont fournis pr ts l emploi dans des flacons compte gouttes et doivent tre transvas s dans des r cipients appropri s de l appareil avant utilisation 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 10 22 Le syst me du substrat est form de quatre composants Chromogen Red 1 Chromogen Red 2 Chromogen Red 3 et un tampon substrat AP Substrate Buffer Le chromog ne est un chromog ne de type Fast Red De plus du l vamisole concentr est fourni pour tre ajout la solution de travail du substrat au cas o il serait n cessaire de bloquer la phosphatase alcaline endog ne Avant emploi les chromog nes Chromogen Red 1 Red 2 et Red 3 doivent tre dilu s dans du tampon AP Substrate Buffer Le substrat chromog ne forme un produit rouge vif sur le site de l antigene cible Les produits Dako REAL Hematoxylin r f S2020 ou Hematoxylin for the Dako Autostainer r f 3301 sont re
35. r une bonne coloration il est recommand d utiliser cette trousse en association avec d autres r actifs recommand s figurant la section Mat riels requis mais non fournis R sum et explication Le syst me de d tection Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse a t con u pour offrir une coloration optimale sur les automates de coloration Dako lors de l utilisation des mod les protocoles conseill s dans cette notice Avant de proc der la coloration certaines coupes de tissus fix s en routine et inclus en paraffine doivent tre soumises une proc dure de d masquage d pitope induit par la chaleur HIER l aide de la solution de d masquage des cibles sp cifi e dans la notice de l anticorps primaire Certains anticorps primaires n cessitent un pr traitement enzymatique du tissu pour une coloration optimale au lieu d une proc dure HIER Veuillez noter que le produit Dako REAL Proteinase K r f S2019 est con u pour tre utilis en association avec une proc dure HIER de fa on faciliter le traitement des s ries de lames La phosphatase alcaline endog ne doit tre bloqu e en ajoutant du L vamisole flacon G au tampon substrat AP Substrate Buffer flacon F et ceci avant l ajout des chromog nes Chromogen Red 1 Red 2 et Red 3 Une autre option pour bloquer cette phosphatase alcaline endog ne est d utiliser le produit Dako Dual Endogenous Enzyme Block r f S
36. se The substrate system consists of four components Chromogen Red 1 Chromogen Red 2 Chromogen Red 3 and an AP Substrate Buffer The chromogen is a Fast Red type chromogen In addition concentrated Levamisole is provided to be added to the Substrate Working Solution if blocking of endogenous alkaline phosphatase is considered necessary Before use the Chromogen Red 1 Red 2 and Red 3 must be diluted in the AP Substrate Buffer The substrate chromogen produces a crisp red end product at the site of the target antigen 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 4 22 Dako REAL Hematoxylin code S2020 or Hematoxylin for the Dako Autostainer code S3301 is recommended for counterstaining as they provide a clear blue nuclear staining The stained tissue sections may be mounted with either aqueous or organic solvent based mounting medium Reagents A Materials provided BEN AB2 Dako REAL Link Biotinylated Secondary Antibodies AB2 100 mL ready to use Biotinylated goat anti mouse and anti rabbit immunoglobulins In buffered solution containing stabilizing protein and sodium azide The color of this reagent may vary from strong yellow to colorless without having any influence on the performance of the kit Bottle B AP Dako REAL Streptavidin Alkaline Phosphatase AP 100 mL ready to use Streptavidin conjugated to alkaline phosphatase In buffered solution containing stabilizing protein and preservative Bottle C
37. tation of Results The Substrate Working Solution CHROM gives a red color at the site of the target antigen recognized by the primary antibody The red color should be present on the positive control specimen at the expected localization of the target antigen If non specific staining is present this will be recognized as a rather diffuse red staining on the slides treated with the negative control reagent Nuclei will be stained blue by the hematoxylin counterstain 105066 003 K5005 EF G HGW 07 04 06 p 9 22 FRANCAIS Utilisation pr vue Pour utilisation en diagnostic in vitro Le syst me de d tection Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse est destin tre utilis en immunohistochimie avec les automates de coloration Dako La trousse est bas e sur la m thode streptavidine biotine encore appel e LSAB Labeled Streptavidin Biotin et est utilis e dans le cadre d une proc dure trois tapes La premi re tape consiste en une incubation du tissu avec un anticorps primaire de lapin ou de souris dilu de fa on optimale la deuxi me tape est une incubation avec l anticorps secondaire de liaison biotinyl Dako REAL Link Biotinylated Secondary Antibodies AB2 enfin la troisi me tape est une incubation avec le produit Dako REAL Streptavidin Alkaline Phosphatase AP La r action est visualis e gr ce un chromog ne ROUGE qui est galement inclus dans la trousse Pour garanti
38. tavidin Alkaline Phosphatase AP contiennent des substances d origine animale Comme avec tout produit d origine biologique respecter les proc dures de manipulation appropri es 3 Le flacon A Dako REALT Link Biotinylated Secondary Antibodies AB2 contient de l azide de sodium NaNs un produit chimique hautement toxique sous sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations pour former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 4 La solution de travail du chromog ne doit tre appliqu e dans les 20 minutes suivant sa pr paration 5 Ne pas exposer le flacon C Dako REAL Chromogen Red 1 le flacon D Dako REAL Chromogen Red 2 le flacon E Dako REAL Chromogen Red 3 le flacon G Dako REAL Levamisole ou la solution de travail du substrat CHROM une lumi re vive 6 Le flacon E Dako REAL Chromogen Red 3 est tr s sensible la chaleur son exposition la temp rature ambiante doit donc tre aussi br ve que possible 7 Le flacon E Dako REAL Chromogen Red 3 contient de 1 moins de 5 de sel Fast Red KL et est d sign comme Toxique R45 Peut provoquer le cancer S35 Ne se d barrasser de ce produit et de son r cipient qu en prenant tout
39. tfernt worden sein Verfahren Um optimale F rbungsergebnisse zu erzielen arbeiten Dako Immunf rbeautomaten mit auf verschiedenen Prinzipien beruhenden Verfahren Das Bedienerhandbuch des betreffenden Dako Ger ts vor der Durchf hrung von F rbungen mit Dako Immunf rbeautomaten gr ndlich durchlesen Nach der Entparaffinierung und Rehydrierung mit Puffer Wasser sollte bei den meisten Gewebeschnitten ein HIER Verfahren durchgef hrt werden Um eine reproduzierbare Demaskierung zu gew hrleisten wird eine Standardisierung des HIER Verfahrens empfohlen Zur Standardisierung der Behandlung sollte die Objekttr ger Halterung komplett mit Objekttr gern beladen werden auch wenn sich nur auf einem Objekttr ger Gewebe befindet hierdurch wird eine einheitliche Erw rmung der Schnitte bei jedem Durchlauf gew hrleistet Nach dem Demaskierungs Arbeitsschritt m ssen die Objekttr ger mindestens 20 Minuten lang bei Raumtemperatur in der Pufferl sung verbleiben W hrend dieser Abk hlphase k nnen die Dako Immunf rbeautomaten f r den F rbedurchlauf vorbereitet werden Einige wenige Epitope d rfen nicht mit dem HIER Verfahren behandelt werden Angaben bitte der Packungsbeilage des jeweiligen prim ren Antik rpers von Dako entnehmen Inkubation mit dem prim ren Antik rper Dako N Series Ready to Use Primary Antibodies k nnen mit Dako REAL Detection System Alkaline Phosphatase RED Rabbit Mouse auf formalinfixierten paraffineingebetteten
40. um Lieferumfang des Kits geh ren bitte den jeweiligen Gebrauchsanweisungen entnehmen Entnahme und Vorbereitung der Probe Geeignet sind routinem ig fixierte paraffineingebettete Gewebeschnitte und Gefrierschnitte F r die Konservierung der Proben sind verschiedene Fixiermittel geeignet Die Proben sollten h chstens 24 Stunden vorzugsweise k rzer in neutral gepuffertem Formalin fixiert werden Die optimale Dicke paraffineingebetteter Schnitte betr gt etwa 4 um Bei Gefrierschnitten liegt die optimale Dicke bei 4 6 um 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 19 22 Die Proben auf Mikroskop Objekttr gern fixieren Die Schnitte sind so flach und faltenfrei wie m glich auf den Objekttr gern zu fixieren Zu viele Falten wirken sich negativ auf die Farbungsergebnisse aus HINWEIS Die Gr e der Objekttr ger muss zum Dako Ger t passen Angaben zu geeigneten Mikroskop Objekttr gern bitte dem Bedienungshandbuch des jeweiligen Dako Ger ts entnehmen Paraffineingebettete Schnitte sollten aus einem vorgew rmten Wasserbad mit destilliertem oder entionisiertem Wasser heraus fixiert werden Dieses Wasserbad darf keine Zus tze enthalten wie z B Gelatine Poly L Lysin usw Die Schnitte werden mindestens 60 Minuten lang z B ber Nacht w rmegetrocknet gew hnlich bei einer Temperatur von h chstens 60 C Damit die Schnitte gut auf den Objekttr gern haften muss vor dem Trockenprozess im Ofen alles Wasser unter den Schnitten en
41. ung stets mit viel Wasser nachsp len um Azidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 4 Angesetzte Chromogen Arbeitsl sung innerhalb von 20 Minuten verbrauchen 5 Fl schchen C Dako REAL Chromogen Red 1 Fl schchen D Dako REAL Chromogen Red 2 Fl schchen E Dako REAL Chromogen Red 3 Fl schchen G Dako REAL Levamisole sowie die Substrat Arbeitsl sung CHROM keinem starken Lichteinfall aussetzen 6 Der Inhalt von Fl schchen E Dako REAL Chromogen Red 3 ist h chst w rmeempfindlich und sollte daher nur so kurz wie m glich auf Zimmertemperatur gebracht werden 7 Fl schchen E Dako REAL Chromogen Red 3 enth lt 1 lt 5 Fast Red KL Salz und ist folgenderma en markiert Giftig R45 Kann Krebs erzeugen S35 Abf lle und Beh lter m ssen auf sichere Weise entsorgt werden S45 Bei Unfall oder Unwohlsein sofort Arzt hinzuziehen wenn m glich dieses Etikett vorzeigen S53 Exposition vermeiden vor Gebrauch besondere Anweisungen einholen Nur f r Fachpersonal bestimmt Vorsicht Dieses Produkt enth lt eine Substanz die noch nicht vollst ndig erforscht wurde Die Klassifizierung ist ausschlie lich auf der Grundlage eines Vergleichs mit Substanzen hnlicher Struktur erfolgt 105066 003 K5005 EFG HGW 07 04 06 p 18 22 Personen unter 18 Jahren d rfen mit diesem Produkt grunds tzlich nicht arbeiten Alle Anwender m ssen sorgf ltig in das richtige Arbeitsverfahren die gef hrlichen Eigenschaften des
42. utre pendant plus de 24 heures et de pr f rence pendant une p riode plus courte L paisseur optimale des coupes incluses en paraffine est d environ 4 um L paisseur optimale des coupes congel es est de 4 6 um Les chantillons doivent tre mont s sur des lames de microscope Les coupes doivent tre mont es sur les lames aussi plates que possible et avec le moins de plis possible Trop de plis aura un impact sur les r sultats de la coloration REMARQUE Les lames de microscope doivent poss der une largeur adapt e l appareil Dako Veuillez vous reporter au manuel de l op rateur de chaque appareil Dako pour la d finition des lames de microscope utilisables Les coupes en paraffine doivent tre mont es depuis le bain marie pr chauff contenant de l eau distill e ou d ionis e Le bain marie ne doit contenir aucun additif tel que de la g latine de la poly L lysine etc Les coupes doivent tre s ch es en les chauffant en g n ral une temp rature ne d passant pas 60 C et pendant 60 minutes au minimum pendant une nuit par exemple Pour garantir une bonne adh rence des coupes aux lames il est important d goutter l eau se trouvant sous les coupes avant de passer la proc dure de s chage dans une tuve Proc dure Les automates de coloration Dako utilisent des techniques bas es sur diff rents principes afin d obtenir un r sultat de coloration optimal Avant d ex cuter des protocoles sur l aut
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