FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human MUM1 Protein Clone
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1. FLEX Monoclonal Mouse Anti Human MUM1 Protein Clone MUMI1p Ready to Use CE Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS644 ENGLISH Intended use Synonyms for antigen Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied 117290 003 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human MUM1 protein Clone MUMip Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody labels the MUM1 protein which is expressed in a subset of B cells in the light zone of the germinal centre representing late stages of B cell differentiation plasma cells activated T cells and a wide spectrum of related haematolymphoid neoplasms Of non haematolymphoid neoplasms only a proportion of melanomas are labeled The antibody is of value for example for the subclassification of lymphoid malignancies 1 2 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist IRF4 interferon regulatory factor 4 ICSAT interferon consensus sequence bin2. limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 C Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L epaisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Un pr traitement avec d masquage d Epitope induit par la chaleur HIER est n cessaire avec le Dako PT Link Ref PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer a
3. permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Mandel und Enddarm Blinddarmgewebe enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Maus Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr 15750 Mit dem Antik rper markierte Zellen weisen vor allem eine F rbung des Zellkerns auch auch wenn schwache bis m ige zytoplasmatische F rbung meist die nukle re Positivit t begleitet 2 Gesundes Gewebe Bei Mandeln und der Milz werden Plasmazellen sowie zwischen 3 und 10 der vorwiegend im hellen Bereich vorhandenen B Zellen des Keimzentrums GC durch den Antik rper stark markiert Bei den seltenen MUM1 Protein positiven Zellen in der Mantelzone handelt es sich um B Zellen aus dem Keimzentrum die gerade durch die Follikelmantelzone wandern Ferner markiert der Antik rper 1 5 der im Keimzentrum und interfollikul ren Bereich vorhandenen T Zellen Bei Makrophagen der Mandeln follikul ren dendritischen Zellen Endothel und Epithelzellen kommt es nicht zu einer F rbung Ebenfalls MUM1 Protein negativ sind Zellen von Kortex und Medulla des Thymus Hassall sche K rperchen erythroide und myeloide Vorl uferzellen des Knochenmarks Megaka
4. vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la reprogrammation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d hematoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre le c lon l appendice l amygdale et les cellules structures doivent pr senter des sch mas de r action semblables ceux d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code 1S750 Les cellules marqu es par l anticorps pr sentent une coloration pr dominante du noyau bien qu avec une coloration
5. faible mod r e du cytoplasme dans la plupart des cas ayant une positivit nucl aire 2 Tissus sains dans l amygdale et la rate l anticorps marque fortement les cellules plasmatiques et entre 3 et 10 des lymphocytes B du centre germinatif GC situ s principalement dans la zone claire Les rares cellules positives la prot ine MUM1 dans la zone du manteau repr sentent les lymphocytes B quittant le centre germinatif et transitant par la zone du manteau folliculaire L anticorps marque galement 1 5 des lymphocytes T pr sents dans le centre germinatif et la region inter folliculaire Aucun marquage n est observ dans les macrophages de l amygdale les cellules dendritiques folliculaires les endoth liums et les pith liums Le cortex thymique la medulla thymique les corpuscules de Hassal les pr curseurs rythro des et my lo des de la moelle osseuse les megacaryocytes les ost oblastes et les ost oclastes sont galement n gatifs la prot ine MUM1 1 Dans une tude suppl mentaire de 142 tissus sains non lympho des repr sentant 33 types de tissus tous les tissus taient n gatifs l anticorps 2 Les cellules plasmatiques dans le c lon l appendice ont pr sent une coloration mod r e forte tandis que la coloration des lymphocytes B activ s de l amygdale tait faible mod r e Tissus tumoraux dans une tude portant sur un grand nombre N 210 et une grande vari t 18 types
6. in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 durchf hren Hinweis Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und mit permanentem Einbettmedium auf den Objekttr ger aufgebracht werden IS644 EFG MNI 2009 12 04 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 F rbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien Auswertung der F rbung Leistungsmerkmale References References Literatur Entparaffinierte Schnitte Eine Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte mit Dako PT Link nach demselben Verfahren wie f r die paraffineingebetteten Schnitte beschrieben wird empfohlen Die Objekttr ger nach dem F rben mit einem w ssrigen oder permanenten Einbettmedium bedecken Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen Als Visualisierungssystem wird EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 empfohlen Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprog
7. lt Klon MUM1p 1 Isotyp IgG1 kappa Rekombinantes GST MUM1 Fusionsprotein 1 Beim Western Blotting eines pHeBo CMV MUM1 HA transfizierten HeLa Zelllysats markiert der Antik rper eine dem MUM1 HA Protein entsprechende Bande von 52 kDa in nicht transfiziertem HeLa Zelllysat dagegen kam es zu keiner Markierung Der Antik rper markiert beim Western Blotting von IM9 Lysaten Myelom Zelllinie unfraktionierten Suspensionen von Mandelzellen und PHA stimulierten T Zellen eine dem MUM1 Protein entsprechende Bande von 50 kDa Bei Lysaten von U937 Zellen myeloide Zelllinie und unstimulierten T Zellen wurde keine Markierung beobachtet 1 Eine SDS PAGE Analyse der Immunpr zipitate die zwischen dem Lysat aus der IM9 Myelom Zelllinie und dem Antik rper gebildet wurden zeigte eine Reaktion mit einem 50 kDa schweren MUM1 entsprechenden Protein 1 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend
8. rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schch en aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 ist erforderlich Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 erzielt werden Paraffineingebettete Schnitte Die Vorbehandlung der formalinfixierten paraffineingebetteten Schnitte mit dem 3 in 1 Probenvorbereitungsverfahren f r Dako PT Link wird empfohlen Vorbehandlung gem der Beschreibung
9. cubation sont pr programm s dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume d application de 200 uL ou FLEXRTU3 volume d application de 300 uL Programme automatique MUM1 sans contre coloration ou MUMIH avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l amp tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela confirme des temps de lavage comparables IS644 EFG MNI 2009 12 04 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Interpr tation de la coloration Caract ristiques de performance DEUTSCH Zweckbestimmung Synonyme f r das Antigen Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifit t Vorsichtsma nahmen Lagerung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 117290 003 Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l
10. de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone MUM1p 1 Isotype IgG1 kappa Prot ine recombinante de la fusion GST MUM1 1 Dans les cas de Western blot de lysat cellulaire HeLa transfect par pHeBo CMV MUM1 HA l anticorps marque une bande de 52 kDa correspondant la prot ine MUM1 HA alors qu aucun marquage n est observ dans le lysat cellulaire HeLa non transfect Dans les cas de Western blot de Iysats IM9 lign e cellulaire de my lome les suspensions de cellules d amygdale non fractionn es et de lymphocytes T stimul s la PHA l anticorps marque une bande de 50 kDa correspondant la prot ine MUM1 Aucun marquage n est observ avec les lysats de cellules U937 lign e cellulaire my lo de et de lymphocytes T non stimul s 1 L analyse SDS PAGE de pr cipit s immunologiques form s entre le Iysat de lign e cellulaire de my lome IM9 et l anticorps pr sente une r action avec une prot ine de 50 kDa correspondant la prot ine MUM1 1 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l
11. de tumeurs h matolympho des humaines l anticorps a marqu un large ventail de lymphomes lymphocytes B lymphocytes T et cellules tueuses NK Tous les types de n oplasmes h matolympho des test s ont t marqu s l exception du lymphome de Burkitt des mastocytes et des maladies histiocytaires Au total 56 des Iymphomes lymphocytes T et cellules tueuses NK et 35 des n oplasmes lymphocytes B ont t marqu s avec une forte coloration des my lomes multiples 100 des DLBCL 51 des lymphomes de la zone marginale 58 des lymphomes lymphoplasmocytaires 50 des maladies Iymphoproliferatives post greffe 67 et de la maladie de Hodgkin 100 Sur 122 Iymphomes du centre folliculaire 23 ont t marqu s par l anticorps soit 79 de grade Ill et 21 de grades I Il Les cellules des l sions marqu es par l anticorps ne pr sentaient pas n cessairement de diff renciation plasmocytaire ce qui sugg re que l expression de la prot ine MUM1 peut pr c der l expression des prot ines CD138 et VS38 qui constituent des marqueurs plus sp cifiques de la diff renciation plasmocytaire Sur 731 n oplasmes non Iymphoides repr sentant 20 types diff rents seuls 5 m lanomes sur 22 ont t marqu s par l anticorps 2 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human MUM1 Protein Klon MUMip Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in V
12. ding protein for activated T cells and PIP PU 1 interaction partner 3 MUM1 protein multiple myeloma oncogene 1 is a 50 kDa protein encoded by the MUM1 gene that was originally identified because of its involvement in the rare t 6 14 p25 q32 translocation observed in multiple myeloma MM causing juxtaposition of the MUMT gene to the lg heavy chain locus 4 5 MUM1 protein deficient mice are unable to form germinal centres lack plasma cells in the spleen and lamina propria and exhibit a profound reduction of serum immunoglobulin levels and an inability to mount detectable antibody responses or to generate T Iymphocyte cytotoxic or antitumor responses 1 Expression of MUM1 protein is independent from the t 6 14 p25 q32 translocation and has been detected in multiple myelomas Iymphoplasmacytic Iymphomas LPL diffuse large B cell lymphomas DLBCL and activated T cells MUM1 protein is not specific for plasmacytic differentiation but it may be added to the panel of phenotypic markers available for characterization of B cell lymphoma histogenesis in addition to being a useful marker in the subclassification of lymphoid malignancies e g in B CLL 1 3 6 MUM1 protein expression is restricted to cells in the lymphocytic and melanocytic lineages 5 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Su
13. erbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Der Antik rper markiert das MUM1 Protein welches von einem Teil der B Zellen im hellen Bereich des Keimzentrums die Sp tstadien der B Zell Differenzierung repr sentierend Plasmazellen aktivierten T Zellen und einer breiten Palette assoziierter h matolymphoider Neoplasmen exprimiert wird Unter den nicht h matolymphoiden Neoplasmen wird nur ein Teil der Melanome markiert Der Antik rper ist beispielsweise f r die Subklassifizierung Iymphoider Malignit ten n tzlich 1 2 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit geeigneten Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer diagnostischer Tests des Patienten vorgenommen werden IRF4 Interferon Regulatory Factor 4 ICSAT Interferon Consensus Sequence Binding Protein f r aktivierte T Zellen und PIP PU 1 Interaktionspartner 3 Bei dem MUM1 Protein Multiples Myelom Onkogen 1 handelt es sich um ein vom MUMT Gen kodiertes Protein von 50 kDa das aufgrund seiner Beteiligung an der seltenen beim multiplen Myelom MM beobachteten t 6 14 p25 q32 Translokation die eine Nebeneinanderstellung des MUMT Gen auf den lg Schwerketten Lokus bewirkt erstmals identifiziert wurde 4 5 M use mit einem Mangel an MUM1 Protein k nnen keine Keimzentren bilden weisen einen Mangel an Plasmazellen in der Mi
14. fer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended IS644 EFG MNIV 2009 12 04 p 1 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Staining interpretation Performance characteristics FRAN AIS Utilisation pr vu Synonymes de l antig ne R sum et explication R actifs fournis Immunog ne Sp cificit Pr cautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni 117290 003 Positive and
15. from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Paraffin embedded sections Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using the 3 in 1 specimen preparation procedure for Dako PT Link Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVisio
16. g sind Von 731 nicht Iymphoiden Neoplasmen 20 verschiedener Typen wurden nur 5 von 22 Melanomen durch den Antik rper markiert 2 1 FaliniB Fizzotti M Pucciarini A Bigerna B Marafioti T Gambacorta M et al A monoclonal antibody MUM1p detects expression of the MUM1 IRF4 protein in a subset of germinal center B cells plasma cells and activated T cells Blood 2000 95 2084 92 D A gt NN 2002 100 4671 5 Natkunam Y Warnke RA Montgomery K Falini B van de Rijn M Analysis of MUM1 IRF4 protein expression using tissue microarrays and immunohistochemistry Mod Pathol 2001 14 686 94 Gaidano G Carbone A MUM1 a step ahead toward the understanding of lymphoma histogenesis Leukemia 2000 14 563 6 lida S Rao PH Butler M Corradini P Boccadoro M Klein B et al Deregulation of MUMT IRF4 by chromosomal translocation in multiple myeloma Nat Genet 1997 17 226 30 Tsuboi K lida S Inagaki H Kato M Hayami Y Hanamura et al MUM1 IRF4 expression as a frequent event in mature lymphoid malignancies Leukemia 2000 14 449 56 Chang CC Lorek J Sabath DE Li Y Chitambar CR Logan B et al Expression of MUM1 IRF4 correlates with clinical outcome in patients with B cell chronic Iymphocytic leukemia Blood Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole 117290 003 Catalogue number Reference catalogue Bestellnummer In vitro diagnostic medical device Dispositif medical de diagnostic in vitro I
17. lus L anticorps marque la prot ine MUM1 exprim e dans un sous ensemble de lymphocytes B dans la zone claire du centre germinatif correspondant aux stades avanc s de diff renciation des lymphocytes B dans les cellules plasmatiques les lymphocytes T activ s et une grande vari t de neoplasmes h matolympho des li s Parmi les neoplasmes non hematolymphoides seuls quelques m lanomes sont marqu s L anticorps est pr cieux pour la sous classification des lympho des malins 1 2 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi IRF4 facteur de r gulation de l interferon n 4 I CSAT prot ine de liaison de la s quence consensus de l interf ron pour les lymphocytes T activ s et PIP partenaire d interaction de la PU 1 3 La prot ine MUM1 my lome oncogene multiple 1 est une prot ine de 50 kDa cod e par le gene MUM1 identifi initialement pour son implication dans une translocation rare 6 14 p25 q32 observ e dans le my lome multiple MM provoquant la juxtaposition du gene MUM1 au locus de la cha ne lourde d Ig 4 5 Les souris d ficientes en prot ine MUM1 sont incapables de constituer des centres germinatifs manquent de cellules plasmatiques dans la rate et la la
18. lz und der Lamina propria sowie eine deutliche Absenkung der Serum Immunglobulinspiegel auf Au erdem zeigen sie weder nachweisbare Antik rper noch zytotoxische T Lymphozyten bzw Antitumor Reaktionen 1 Die Expression des MUM1 Proteins ist unabh ngig von der t 6 14 p25 q32 Translokation und wurde bei multiplen Myelomen Iymphoplasmatischen Lymphomen LPL diffusen gro zelligen B Zell Lymphomen DLBCL und aktivierten T Zellen nachgewiesen Das MUM1 Protein ist zwar f r die plasmazytische Differenzierung nicht spezifisch kann aber in das Panel ph notypischer Marker f r die Charakterisierung der Histogenese von B Zell Lymphomen aufgenommen werden Davon abgesehen ist es ein wertvoller Marker f r die Subklassifizierung Iymphoider Malignit ten z B von B CLL Zellen 1 3 6 Die Expression des MUM1 Proteins ist auf Zellen Iymphozytischen und melanozytischen Ursprungs beschr nkt 5 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L Natriumazid enth
19. mina propria et pr sentent une importante r duction des niveaux d immunoglobulines s riques et une incapacit induire des r ponses d anticorps d tectables ou g n rer des lymphocytes T cytotoxiques ou des r ponses anti tumorales 1 L expression de la prot ine MUM1 est ind pendante de la translocation 6 14 p25 432 et a t d tect e dans des my lomes multiples des lymphomes Iymphoplasmocytaires LPL des lymphomes diffus grands lymphocytes B DLBCL et les lymphocytes T activ s La prot ine MUM1 n est pas sp cifique la diff renciation plasmocytaire mais peut tre ajout e au panel de marqueurs ph notypiques disponibles pour la caract risation de l histogen se des lymphomes lymphocytes B Cette prot ine est en outre un marqueur permettant la sous classification des tumeurs lympho des par exemple lymphocytes B 1 3 6 L expression de la prot ine MUM se limite aux cellules des lign es lymphocytaires et m lanocytaires 5 Se r f rer aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal
20. n FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Note After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link and following the same procedure as described for paraffin embedded sections After staining the slides should be mounted using aqueous or permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTUS3 300 uL dispense volume Autoprogram MUM1 without counterstaining or MUM1H with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please re
21. n vitro Diagnostikum Consult instructions for use Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten Temperature limitation Use by Limites de temp rature Utiliser avant Zul ssiger Temperaturbereich Verwendbar bis Manufacturer Fabricant Hersteller Contains sufficient for lt n gt tests Contenu suffisant pour lt n gt tests Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Batch code Numero de lot Chargenbezeichnung IS644 EFG MNIV 2009 12 04 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17
22. negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include colon appendix and tonsil and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS750 Cells labeled by the antibody display predominantly nuclear staining although weak to moderate staining of the cytoplasm is also present in most cases with nuclear positivity 2 Normal tissues In tonsil and spleen the antibody strongly labels plasma cells and between 3 and 10 of the germinal centre GC B cells mainly located in the light zone Rare MUM1 protein positive cells in the mantle zone represent B cells exiting GC and transiting through the follicle mantle zone The antibody also labels 1 5 of the T cells present in the GC and the interfollicular area No labeling is observed in tonsil macrophages follicular dendritic cells endothelia and epithelia Thymus cortex thymus medulla Hassal s corpuscles and bone marrow erythroid and myeloid precursors megakaryocytes osteoblasts and osteoclasts are also MUM1 protein negative 1 In an additional study of 142 normal non Iymphoid tissues representing 33 tissue types all tissues were found to be negative with the antibody 2 Plasma cells in colon appendix sh
23. ow a moderate to strong staining reaction and activated B cells in the tonsil show a weak to moderate staining reaction Abnormal tissues In a study of a large number N 210 and variety 18 types of human hematolymphoid malignancies the antibody labeled a wide spectrum of B T and natural killer NK cell lymphomas All types of hematolymphoid neoplasms tested were labeled except for Burkitt s lymphoma mast cell and histiocytic disorders A total of 56 of T and NK cell lymphomas and a total of 35 B cell neoplasms were labeled with a strong labeling of multiple myeloma 100 DLBCL 51 marginal zone Iymphoma 58 LPL 50 post transplant Iymphoproliferative disorders 67 and Hodgkin s disease 100 Of 122 follicle centre lymphomas 23 were labeled by the antibody i e 79 of grade Ill and 21 of grade I Il Lesional cells labeled by the antibody did not necessarily show plasmacytic differentiation suggesting that MUM1 protein expression may precede the expression of CD138 and VS38 proteins that are more specific markers for plasmacytic differentiation Of 731 non Iymphoid neoplasms representing 20 different types only 5 22 melanomas were labeled by the antibody 2 Pour utilisation lors d un diagnostic in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human MUM1 Protein clone MUM1p Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer P
24. pplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodium azide Clone MUM1p 1 Isotype IgG1 kappa Recombinant GST MUM1 fusion protein 1 Western blotting of pHeBo CMV MUM1 HA transfected HeLa cell lysate the antibody labels a band of 52 kDa corresponding to MUM1 HA protein whereas no labeling is observed in non transfected HeLa cell lysate In Western blotting of lysates of IM9 myeloma cell line unfractionated tonsil cell suspensions and PHA stimulated T cells the antibody labels a band of 50 kDa corresponding to MUM1 protein No labelling is observed with lysates of U937 cells myeloid cell line and unstimulated T cells 1 SDS PAGE analysis of immunoprecipitates formed between lysate of the IM9 myeloma cell line and the antibody shows reaction with a 50 kDa protein corresponding to MUM1 protein 1 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived
25. rammiert Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 ul Anwendungsvolumen oder FLEXRTU3 300 ul Anwendungsvolumen Autoprogramm MUM1 ohne Gegenf rbung oder MUM1H mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dies gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges
26. ryozyten Osteoblasten und Osteoklasten 1 In einer weiteren Studie an 142 normalen nicht Iymphoiden Geweben aus 33 Gewebetypen reagierte kein Gewebe mit dem Antik rper 2 Plasmazellen in Dickdarm Blinddarm weisen eine m ige bis starke F rbereaktion auf und aktivierte B Zellen in den Mandeln weisen eine schwache bis m ige F rbereaktion auf Pathologisches Gewebe In einer Studie an einer gro en Anzahl N 210 sehr unterschiedlicher 18 Typen humaner h matolymphoider Malignit ten markierte der Antik rper eine breite Palette von B Zell T Zell und NK Nat rliche Killerzellen Zell Lymphomen Mit Ausnahme des Burkitt schen Lymphosarkoms sowie von Mastzellen und Histiozytenst rungen wurden alle Typen h matolymphoider Neoplasmen markiert Insgesamt wurden 56 der T Zell und NK Zell Lymphome und 35 der B Zell Neoplasmen markiert wobei multiple Myelome 100 DLBCL 51 Marginalzonenlymphom 58 LPL 50 posttransplant re Iymphoproliferative Erkrankungen 67 und Morbus Hodgkin 100 eine starke Markierung aufwiesen Von 122 Follikelzentrum Lymphomen wurden 23 vom Antik rper und zwar 79 Grad Ill und 21 Grad Il markiert Die von dem Antik rper markierten l sionalen Zellen wiesen nicht zwangsl ufig eine plasmazytische Differenzierung auf ein Hinweis darauf dass das MUM1 Protein m glicherweise der Expression der Proteine CD138 und VS38 vorausgeht die spezifischere Marker f r eine plasmazytische Differenzierun
27. u Guide d utilisation du PT Link Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Coupes incluses en paraffine le pr traitement des coupes tissulaires fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide de la proc dure de pr paration d chantillon 3 en un pour le Dako PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Remarque apr s coloration les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Coupes d paraffin es le pr traitement des coupes tissulaires d paraffin es fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link en suivant la m me proc dure que pour les coupes incluses en paraffine Apr s coloration un montage aqueux ou permanent des lames est recommand Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames FLEX IHC Microscope Slides Ref K8020 Le syst me de visualisation recommand est le EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 Les tapes de coloration et les temps d in
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