FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD31, Endothelial
Contents
1. FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CE CD31 Endothelial Cell Clone JC70A Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS610 ENGLISH Intended use Synonym for antigen Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied 115222 002 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD31 Endothelial Cell Clone JC70A Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody primarily labels endothelial cells and is useful for the identification of benign and malignant vascular disorders including angiosarcomas 1 2 In addition this antibody is valuable for the labeling of vessels when determining angiogenesis in several types of tumors 3 5 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist PECAM 1 platelet endothelial cell adhesion molecule 1 6 CD31 is a single chain type 1 transmembrane protein with a molecular mass of approximately 135 kDa belonging to the immunoglobulin superfam2. Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Hersteller Consult instructions for use Batch code Voir les instructions d utilisation Num ro de lot Gebrauchsanweisung beachten Chargenbezeichnung 115222 002 IS610 EFG LPF 09 10 07 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17
3. une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer Autostainer Plus Cet anticorps primaire marque les cellules endoth liales et facilite l identification des troubles vasculaires b nins et malins y compris les angiosarcomes 1 2 En outre cet anticorps s avere utile pour le marquage des vaisseaux lors de la d termination de l angiogen se dans divers types de tumeurs 3 5 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi PECAM 1 mol cule d adh rence cellulaire plaquette cellule endoth liale 1 6 La CD31 est une prot ine transmembranaire simple cha ne de type 1 dont le poids mol culaire est d environ 135 kDa et qui appartient la superfamille des immunoglobulines Dans le s rum humain plusieurs variants de la CD31 provenant d un pissage alternatif ont t identifi s dont une forme qui ne pr sente apparemment pas de domaine transmembranaire mais qui comporte une queue cytoplasmique 6 La CD31 se lie de mani re homophile ou h t rophile Les ligands h t rophiles incluent les glycosaminoglycanes h parane sulfate l h parine et l int grine avb3 La CD31 joue un r le dans les interactions d adherence entre les cellules endoth liales adjacent
4. Autostainer Plus Code Nr K8012 Die F rbeschritte und und erforderliche aber nicht Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert mitgelieferte Materialien Matrixprotokoll FLEXRTU2 200 uL Abgabevolumen oder FLEXRTUS3 300 uL Abgabevolumen Autoprogram CD31 ohne Gegenf rbung oder CD31H mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dieses gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leis
5. FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 K8014 Coupes d paraffin es Le pr traitement des coupes de tissus d paraffin s fix s au formol et inclus en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice pour la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 K8014 Les param tres suivants doivent tre utilis s pour le PT Link Temp rature de pr chauffage 65 temp rature et dur e de restauration de l pitope 97 pour 20 1 minutes laisser refroidir jusqu 65 Rincer les coupes avec un EnVision FLEX Wash Buffer 10x dilu temp rature ambiante Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 Coupes incluses en paraffine Comme pr paration alternative des chantillons le deparaffinage et la restauration de l Epitope peuvent tre r alis s dans le PT Link l aide d une proc dure modifi e Se r f rer aux instructions du Guide d utilisation du PT Link Une fois que la proc dure de coloration est termin e les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ou lors de la proc dure de coloration immunohistochimiq
6. Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schch en aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER ist erforderlich Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 K8014 erzielt werden Entparaffinierte Schnitte Die Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte sollte mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 erfolgen Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuc
7. ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Ref IS750 Les cellules marqu es par l anticorps pr sentent principalement une coloration membranaire avec une faible coloration cytoplasmique Tissus sains L anticorps marque les cellules endoth liales dans divers tissus notamment l endothelium dans les capillaires glom rulaires r naux et l endothelium des vasa vasorum En outre l anticorps marque les m gacaryocytes et parfois les cellules plasmatiques de la moelle osseuse 1 Dans les coupes congel es d amygdale et de rate humaine l anticorps marque certaines cellules non endoth liales notamment certains lymphocytes B et T de la zone du manteau Dans les frottis sanguins l anticorps marque les neutrophiles polymorphes 50 des lymphocytes tous les monocytes et les plaquettes 1 Dans le c lon les cellules endoth liales des gros vaisseaux pr sentent une r action mod r e forte alors que la coloration des lymphocytes B dans la zone du manteau de l amygdale est faible mod r e Tissus tumoraux Cet anticorps marque les cellules endoth liales dans diverses l sions vasculaires b nignes et malignes Dans 10 cas sur 10 1 et 6 cas sur 7 2 d angiosarcomes respectivement l anticorps a marqu des cellules endoth liales vasculaires malignes En outre l anticorps a marqu 17 ca
8. should be used for PT Link Pre heat temperature 65 epitope retrieval temperature and time 97 for 20 1 minutes cool down to 65 Rinse sections with diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 Paraffin embedded sections As alternative specimen preparation both deparaffinization and epitope retrieval can be performed in the PT Link using a modified procedure See the PT Link User Guide for instructions After the staining procedure has been completed the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of Dako Silanized Slides Code S3003 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTU3 300 uL dispense volume Autoprogram CD31 without counterstaining or CD31H with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be se
9. FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include colon and tonsil and the cells structures should display reaction patterns as described for these tissues in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS750 Cells labeled by the antibody predominantly display membrane staining with weaker cytoplasmic staining Normal tissues The antibody labels endothelial cells in a wide range of tissues including endothelium in renal glomerular capillaries and the endothelium of vasa vasorum In addition the antibody labels megakaryocytes and occasional plasma cells in bone marrow 1 In frozen sections of human tonsil and spleen the antibody labels some non endothelial cells including some mantle zone B cells and T cells In blood smears the antibody labels neutrophil polymorphs 50 of the lymphocytes all of the monocytes and platelets 1 In colon the endothelial cells of the large vessels show a moderate to strong staining reaction whereas B cells in the mantle zone of tonsils show a weak to moderate staining reaction Abnormal tissues The antibody labels endothelial cells in a variety of benign and m
10. alignant vascular lesions In 10 10 1 and 6 7 2 angiosarcomas respectively the antibody labeled malignant vascular endothelial cells Further the antibody labeled 17 17 2 and 3 3 1 hemangiomas respectively 3 3 epithelioid hemangiomas 1 1 papillary endovascular angioendothelioma 2 3 3 angiofibromas 2 2 angiokeratomas 1 1 hemangiopericytoma 1 1 chemodectoma 3 3 atrial myxomas and 2 2 cystic hygromas 1 In addition the antibody labeled endothelial cells in tumor tissues with angiogenesis 3 5 In Iymphangiomas discrepant results have been observed as the antibody was reported to label 8 8 2 and 0 4 1 cases respectively Likewise for glomus tumors where 2 2 1 and 0 7 2 cases were labeled by the antibody No labeling was observed in one case each of Iymphoepithelial cyst and pneumatosis coli 1 negative were also all of 30 benign and 4 malignant nerve sheath tumors 11 dermatofibromas 28 dermatofibrosarcoma protuberans 6 leiomyomas 3 leiomyosarcomas 3 giant cell fibroblastomas 2 52 rhabdomyosarcomas 16 small round cell tumors 11 neuroblastomas 23 Wilms tumors 20 retinoblastomas 13 esthesioneuroblastomas and 7 small noncleaved cell malignant lymphomas Additionally spindle cells in 17 cases of Kaposi s sarcomas were uniformly negative 8 Pour utilisation diagnostique in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD31 Endothelial Cell clone JC70A Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin
11. en sowie alle Monozyten und Thrombozyten 1 Beim Dickdarm zeigen die Endothelzellen der gro en Gef e eine m ige bis starke F rbereaktion die B Zellen in der Mantelzone der Mandeln dagegen nur eine schwache bis m ige F rbereaktion Pathologisches Gewebe Der Antik rper markiert Endothelzellen bei einer Vielzahl von benignen und malignen vaskul ren L sionen Bei 10 von 10 1 bzw 6 von 7 2 F llen eines Angiosarkoms markierte der Antik rper maligne vaskul re Endothelzellen Dar ber hinaus markierte der Antik rper 17 von 17 2 bzw 3 von 3 1 H mangiomen 3 von 3 epitheloiden H mangiomen 1 von 1 papill ren endovaskul ren Angioendotheliom 2 3 von 3 Angiofibromen 2 von 2 Angiokeratomen 1 von 1 H mangioperizytom 1 von 1 Chemodektom 3 von 3 atrialen Myxomen und 2 von 2 zystischen Hygromen 1 Zus tzlich markierte der Antik rper Endothelzellen in Tumorgeweben mit Angiogenese 3 5 Bei Lymphangiomen wurden unterschiedliche Ergebnisse erzielt da der Antik rper Berichten zufolge 8 von 8 2 bzw 0 von 4 1 F llen markierte Das Gleiche gilt f r Glomustumore bei denen 2 von 2 1 und O von 7 2 F llen vom Antik rper markiert wurden In jeweils einem Fall einer Lymphepithelzyste und einer Pneumatosis coli 1 konnte keine Markierung beobachtet werden und alle der folgenden F lle testeten ebenfalls negativ 30 benigne und 4 maligne Nervenscheidentumore 11 Dermatofibrome 28 F lle von Dermatofibrosarcoma protuberans 6 Leiom
12. es ainsi qu entre les leucocytes et les cellules endoth liales La ligature de la CD31 la surface des leucocytes provoque une r gulation la hausse des int grines leucocytaires fonctionnelles tandis que la diap d se leucocytaire travers l endothelium implique des interactions homophiles de la CD31 En outre l interaction h t rophile de la CD31 joue un r le distinct dans la migration des monocytes travers la lame basale sous endoth liale 6 La CD31 est exprim e sur tous les endoth liums continus notamment ceux des art res arterioles veinules veines et capillaires non sinusoides mais elle n est pas exprim e sur l endoth lium discontinu tel la pulpe rouge de la rate Par ailleurs la CD31 est exprim e de mani re diffuse la surface des m gacaryocytes des plaquettes des cellules my lo des des cellules NK et de certains lymphocytes T ainsi que sur certains pr curseurs des lymphocytes B 6 Se r f rer aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liqu
13. gnostic value of angiogenesis in operable non small cell lung cancer J Pathol 1996 179 80 8 Muller WA AS9 CD31 workshop panel report In Kishimoto T Kikutani H von dem Borne AEG Goyert SM Mason DY Miyasaka M et al editors Leucocyte typing VI White cell differentiation antigens Proceedings of the 6th International Workshop and Conference 1996 Nov 10 14 Kobe Japan New York London Garland Publishing Inc 1997 p 362 4 Fornelli CS George F Sampol J van Agthoven AJ E6 6 Biochemical analysis of endothelial antigens recognized by workshop mAb In Schlossman SF Boumsell L Gilks W Harlan JM Kishimoto T Morimoto C et al editors Leucocyte typing V White cell differentiation antigens Proceedings of the 5th International Workshop and Conference 1993 Nov 3 7 Boston USA Oxford New York Tokyo Oxford University Press 1995 p 1791 5 Nicholson SA McDermott MB DeYoung BR Swanson PE CD31 immunoreactivity in small round cell tumors Appl Immunohistochem Mol Morphol 2000 8 19 24 Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole Catalogue number Temperature limitation Use by R f rence catalogue Limites de temp rature Utiliser avant Bestellnummer Zul ssiger Temperaturbereich Verwendbar bis In vitro diagnostic medical device Contains sufficient for lt n gt tests Manufacturer Dispositif m dical de diagnostic in vitro Contenu suffisant pour lt n gt tests Fabricant In Vitro Diagnostikum
14. h IS610 EFG LPF 09 10 07 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision M FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 K8014 durchf hren F r PT Link sollten die folgenden Parameter verwendet werden Vorw rmtemperatur 65 Temperatur und Zeit f r Epitopdemaskierung 97 f r 20 1 Minuten auf 65 abk hlen lassen Schnitte mit auf Raumtemperatur ge brachtem verd nntem EnVisionTM FLEX Wash Buffer 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8012 absp len Paraffineingebettete Schnitte Zur Probenpr paration kann f r Entparaffinierung und Epitopdemaskierung im PT Link auch ein modifiziertes Verfahren verwendet werden Weitere Informationen siehe PT Link Benutzerhandbuch Nach Abschluss des F rbeverfahrens m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und unter Verwendung eines permanenten Fixiermittels auf die Objekttr ger aufgebracht werden Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder w hrend des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern werden Dako Silanized Slides Code Nr S3003 empfohlen F rbeverfahren Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision M FLEX Mouse High pH Dako Autostainer
15. ide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone JC70A 1 Isotype IgG kappa Pr paration de membrane cellulaire issue de la rate d un patient atteint d une leuc mie cellules chevelues 1 L anticorps Anti Human CD31 Endothelial Cell clone JC70A a t class comme un anti CD31 la Fifth International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens Cinqui me Conf rence et Atelier Internationaux sur les Antig nes de Diff renciation des Leucocytes Humains 7 L pitope reconnu s est av r appartenir au domaine extracellulaire 1 6 Lors d une analyse par Western blot de pr parations de membrane provenant d une rate riche en antig ne ou de plaquettes normales l anticorps marque des bandes de 100 kDa et 130 kDa respectivement ce qui correspond traditionnellement la CD31 dans le deuxi me cas La plus petite bande 100 kDa observ e avec la pr paration de rate peut tre due une d gradation prot olytique ou des variations de la glycosylation 1 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosives Lors de l limination rince
16. ily In human serum alternatively spliced versions of CD31 have been detected including a form apparently lacking a transmembrane domain but including the cytoplasmic tail 6 CD31 binds in both a homophilic and heterophilic manner The heterophilic ligands include heparan sulfate glycosaminoglycans heparin and the integrin avb3 CD31 plays a role in adhesive interactions between adjacent endothelial cells as well as between leucocytes and endothelial cells The ligation of CD31 to the surfaces of leucocytes results in upregulation of the functional leucocyte integrins and the leucocyte diapedesis across the endothelium involves homophilic CD31 interactions In addition heterophilic CD31 interaction has a separate role in the migration of monocytes across the subendothelial basal lamina 6 CD31 is expressed on all continuous endothelia including those of arteries arterioles venules veins and non sinusoidal capillaries but it is not expressed on discontinuous endothelium in e g splenic red pulp In addition CD31 is expressed diffusely on the surfaces of megakaryocytes platelets myeloid cells natural killer cells and some subsets of T cells as well as on B cell precursors 6 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality C
17. n zwischen benachbarten Endothelzellen sowie zwischen Leukozyten und Endothelzellen eine Rolle Die Ligation von CD31 an die Oberfl chen von Leukozyten f hrt zur Hinaufregulation der funktionalen Leukozytenintegrine Bei der Leukozytendiapedese durch das Endothel kommt es auch zu homophilen CD31 Interaktionen Zus tzlich spielt die heterophile CD31 Interaktion eine gesonderte Rolle bei der Migration von Monozyten durch die Basalmembran des Subendothels 6 CD31 wird auf allen kontinuierlichen Endothelien exprimiert einschlie lich denen von Arterien Arteriolen Venolen Venen und nicht sinusoiden Kapillaren Allerdings wird es auf diskontinuierlichen Endothelien wie z B in der roten Pulpa der Milz nicht exprimiert Zus tzlich wird CD31 diffus auf den Oberfl chen von Megakaryozyten Thrombozyten Myeloidzellen nat rlichen Killerzellen und einigen Unterarten von T Zellen sowie auf den Vorl ufern von B Zellen exprimiert 6 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Pro
18. o avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 K8014 Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 10x Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8012 K8014 The following parameters
19. oivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la re programmation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d hematoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Ref K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre l amygdale et le c lon et les cellules structures doivent pr senter des sch mas de r action tels que d crits pour ces tissus dans les Caract
20. ontrol 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodium azide Clone JC70A 1 Isotype IgG1 kappa Cell membrane preparation from the spleen of a patient with hairy cell leukemia 1 Anti Human CD31 Endothelial Cell clone JC70A was clustered as anti CD31 at the Fifth International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens 7 The epitope recognized was found to be within the extracellular domain 1 6 In Western blotting of membrane preparations from a spleen rich in the antigen or from normal platelets the antibody labels bands of respectively 100 kDa and 130 kDa the latter corresponding to classic CD31 The smaller band of 100 kDa observed with the splenic preparation may be due to proteolytic breakdown or to variations in glycosylation 1 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment t
21. r abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 C Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Le pr traitement avec un d masquage d Epitope induit par la chaleur HIER est n cessaire Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision
22. s sur 17 2 et 3 cas sur 3 1 d hemangiomes respectivement 3 cas sur 3 d hemangiomes pith lio des 1 cas sur 1 d angioendotheliome endovasculaire papillaire 2 3 cas sur 3 d angiofibromes 2 cas sur 2 d angiok ratomes 1 cas sur 1 d h mangiop ricytome 1 cas sur 1 de ch modectome 3 cas sur 3 de myxomes atriaux et 2 cas sur 2 d hygromas kystiques 1 L anticorps a galement marqu les cellules endoth liales des tissus tumoraux pr sentant une angiogen se 3 5 Dans les lymphangiomes des r sultats divergents ont t observ s car l anticorps aurait marqu 8 cas sur 8 2 et O cas sur 4 1 respectivement De m me pour les tumeurs glomiques 2 cas sur 2 1 et 0 cas sur 7 2 ont t marqu s par l anticorps Aucune coloration n a t observ e dans les tissus suivants un cas chaque fois kyste lympho pith lial et pneumatose colique 1 On n a not aucune coloration sur les 30 tumeurs b nignes et 4 tumeurs malignes de la gaine nerveuse test es ainsi que sur les 11 dermatofibromes 28 dermatofibrosarcomes protuberans 6 l iomyomes 3 l iomyosarcomes 3 fibroblastomes cellules g antes 2 52 rhabdomyosarcomes 16 tumeurs petites cellules rondes 11 neuroblastomes 23 tumeurs de Wilms 20 r tinoblastomes 13 esth sioneuroblastomes et 7 lymphomes malins petites cellules non cliv es En outre les cellules fusiformes dans 17 cas de sarcome de Kaposi taient toutes n gatives 8 Zur In
23. t to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics IS610 EFG LPF 09 10 07 p 1 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Staining interpretation Performance characteristics FRANCAIS Utilisation pr vue Synonyme de l antig ne R sum et explication R actifs fournis Immunog ne Sp cificit Pr cautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni 115222 002 Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision
24. tein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Klon JC70A 1 Isotyp IgG1 Kappa Pr parat der Milz Zellmembran eines Patienten mit Haarzellenleuk mie 1 Anti Human CD31 Endothelial Cell Clone JC70A wurde bei dem der Fifth International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens 5 Internationale r Workshop und Konferenz ber leukozytendifferenzierende Antigene als Anti CD31 eingestuft 7 Das erkannte Epitop wurde innerhalb der extrazellul ren Dom ne 1 ermittelt 6 Beim Westernblotting von Membranpr paraten einer antigenreichen Milz oder von gesunden Thrombozyten markiert der Antik rper Banden von 100 bzw 130 kDa wobei die letztere Bande dem klassischen CD31 entspricht Die beim Milzpr parat beobachtete kleinere Bande von 100 kDa kann m glicherweise auf einen proteolytischen Abbau oder auf Variationen bei der Glykosylierung zur ckgef hrt werden 1 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5
25. tungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision M FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe muss Zellen aus Dickdarm und Mandelgewebe enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr 15750 Auswertung der F rbung Vom Antik rper markierte Zellen weisen berwiegend eine F rbung der Zellmembran mit einer schw cheren F rbung des Zytoplasmas auf Leistungsmerkmale Gesundes Gewebe Der Antik rper markiert Endothelzellen bei einer gro en Vielfalt von Geweben einschlie lich des Endothels in glomerul ren Nierenkapillaren und des Endothels der Vasa vasorum Zus tzlich markiert der Antik rper Megakaryozyten und vereinzelte Plasmazellen im Knochenmark 1 In Gefrierschnitten von menschlichem Mandel und Milzgewebe markiert der Antik rper einige Nicht Endothelzellen darunter einige B und T Zellen der Mantelzone In Blutabstrichen markiert der Antik rper neutrophile Polymorphe 50 der Lymphozyt
26. ue suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames Dako Silanized Slides R f S3003 Le syst me de visualisation recommand est le EnVision FLEX Mouse High pH Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8012 Les tapes de coloration et d incubation sont pr programm es dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume de distribution de 200 uL ou FLEXRTU3 volume de distribution de 300 uL Autoprogram CD31 sans contre coloration ou CD31H avec contre coloration IS610 EFG LPF 09 10 07 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Interpr tation de la coloration Caract ristiques de performance DEUTSCH Zweckbestimmung Synonym f r das Antigen Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifit t Vorsichtsma nahmen Aufbewahrung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 115222 002 L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l amp tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela confirme des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation d
27. vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human CD31 Endothelial Cell Clone JC70A Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper markiert prim r Endothelzellen und dient zur Erkennung von benignen und malignen vaskul ren Erkrankungen einschlie lich Angiosarkomen 1 2 Zus tzlich ist der Antik rper hilfreich bei der Markierung von Gef en bei der Bestimmung der Angiogenese in verschiedenen Tumortypen 3 5 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit ordnungsgem en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer Diagnostiktests des Patienten vorgenommen werden PECAM 1 Platelet endothelial cell adhesion molecule 1 6 CD31 ist ein Einketten Transmembranprotein vom Typ 1 mit einer relativen Molek lmasse von ca 135 kDa und geh rt zur berfamilie der Immunglobuline In menschlichem Serum wurden anders gesplei te Versionen von CD31 nachgewiesen einschlie lich einer Form der offenbar eine transmembrane Dom ne fehlte die aber den zytoplasmatischen Schwanz aufwies 6 CD31 geht sowohl homophile als auch heterophile Bindungen ein Die heterophilen Liganden umfassen Heparansulfat Glykosaminoglykane Heparin und das Integrin v 3 CD31 spielt bei adh siven Interaktione
28. yome 3 Leiomyosarkome 3 Riesenzell Fibroblastome Giant Cell oder GCF Tumore 2 52 Rhabdomyosarkome 16 durch kleine rundliche Zellen gekennzeichnete Tumore 11 Neuroblastome 23 Wilms Tumore 20 Retinoblastome 13 sthesioneuroblastome und 7 kleinzellige nicht zentrozytische Lymphome small noncleaved cell lymphomas SNCCL Zus tzlich testeten die Spindelzellen in 17 F llen von Kaposi Sarkomen einheitlich negativ 8 References References Literatur 1 Parums DV Cordell JL Micklem K Heryet AR Gatter KC Mason DY JC70 a new monoclonal antibody that detects vascular endothelium associated antigen on routinely processed tissue sections J Clin Pathol 1990 43 752 7 DeYoung BR Swanson PE Argenyi ZB Ritter JH Fitsgibbon JF Stahl DJ et al CD31 immunoreactivity in mesenchymal neoplasms of the skin and subcutis Report of 145 cases and review of putative immunohistologic markers of endothelial differentiation J Cutan Pathol 1995 22 215 22 Engel CJ Bennett ST Chambers AF Doig GS Kerkvliet N O Malley FP Tumor angiogenesis predicts recurrence in invasive colorectal cancer when controlled for Dukes staging Am J Surg Pathol 1996 20 1260 5 Fox SB Leek RD Bliss J Mansi JL Gusterson B Gatter KC et al Association of tumor angiogenesis with bone marrow micrometastases in breast cancer patients J Natl Cancer Inst 1997 89 1044 9 Giatromanolaki A Koukourakis M O Byrne K Fox S Whitehouse R Talbot DC et al Pro
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