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1. Site japonais 36 7 Site japonais 2 53 Site australien 21 0 La sensibilit repose sur le nombre total de tests valides et exclut les r sultats ind termin s Tableau 6 R sultats de l tude de sensibilit de QFT Plus par tube d antig ne TB TBI TB2 QFT Plus Positif 160 163 164 Negatif 11 9 8 Ind termin 3 2 2 Sensibilit t 93 6 94 8 95 3 IC 95 88 8 96 7 90 3 97 6 90 9 97 9 t La sensibilit repose sur le nombre total de tests valides et exclut les r sultats ind termin s Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 25 Distributions de r ponses observ es stratifi es selon le risque Une s rie de r ponses IFN y TB1 TB2 et aux tubes de contr le a t observ e dans le cadre d essais cliniques et stratifi e selon le risque d infection M tuberculosis figures 4 7 Le groupe risques mixtes est constitu de sujets repr sentatifs d une population g n rale de test et inclut des sujets avec ou sans facteurs de risque d exposition la tuberculose et chez lesquels la tuberculose active est improbable c est dire avec LTBI Nombre de sujets 400 300 200 100 3 9 AO AO pO 4O 9 49 oO 99 69 60 Ss SE VS 4 de gt 7 Bt NS O VIS ESS GM wh IH IFN y UI ml Nombre de sujets 200 150 100 50 T T T T 1 sy RICH E oO cS 29 9 a2 o o Sy CH Be RSs gt Q 84 Ai y 7 N y BO 47 OS IFN y UI ml Nombre de sujet
2. 60 6l 62 63 64 65 66 67 68 69 Wolf T et al 2013 Tuberculosis skin test but not interferon y releasing assays is affected by BCG vaccination in HIV patients J Infect 66 376 Hsia E C et al 2012 Interferon y release assay versus tuberculin skin test prior to treatment with golimumab a human anti tumor necrosis factor antibody in patients with rheumatoid arthritis psoriatic arthritis or ankylosing spondylitis Arthritis Rheum 64 2068 Garcovich S et al 2011 Clinical applicability of QuantiFERON TB Gold testing in psoriasis patients during long term anti TNF alpha treatment a prospective observational study J Eur Acad Dermatol Ven Kwakernaak A J et al 2011 A comparison of an interferon gamma release assay and tuberculin skin test in refractory inflammatory disease patients screened for latent tuberculosis prior to the initiation of a first tumor necrosis factor inhibitor Clin Rheumatol 30 505 Vinton P et al 2009 Comparison of QuantiFERON TB Gold In Tube test and tuberculin skin test for identification of latent Mycobacterium tuberculosis infection in healthcare staff and association between positive test results and known risk factors for infection Infect Control Hosp Epidemiol 30 215 de Perio M A Tsevat J Roselle G A Kralovic S M and Eckman M H 2009 Costeffectiveness of interferon gamma release assays vs tuberculin skin tests in health c
3. Oui Mitog ne valeur z ro Validation lt 0 50 Ul ml Ind termin Valeur zero lt 8 0 Ul ml et ou valeur z ro gt 8 0 Ul ml Oui Non Pour que TB1 moins valeur z ro ou TB2 moins valeur z ro soient valides la quantit gt 25 de la valeur z ro en Ul ml doit provenir du m me tube que pour le r sultat gt 0 35 Ul ml original Figure 3 Sch ma d interpr tation QFT Plus Limitations Les r sultats du test QFT Plus doivent tre utilis s en combinaison avec les ant c dents pid miologiques le statut m dical actuel et d autres valuations diagnostiques de chaque individu Les individus dont les valeurs z ro sont sup rieures 8 0 Ul ml sont consid r s comme ind termin s car une r ponse plus grande de 25 aux antig nes TB peut se situer hors de la plage de mesure du test Les r sultats non fiables ou ind termin s peuvent survenir dans les cas suivants M Deviations par rapport la proc dure d crite dans cette notice M Niveaux excessifs d IFN y circulant ou pr sence d anticorps h t rophiles M Plus de 16 heures entre le pr l vement de l chantillon sanguin et l incubation 37 C Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 23 Caract ristiques des performances tudes cliniques Comme il n existe pas de test standard d finitif pour la LTBI une estimation de la sensibilit et de la sp cificit pour QFT Plus ne peut pas tre valu e sur le p
4. 100 es SS 0 8 0 0 9 9 9 8 9 IE LA AE 5 N RADIO NR aa ES 0 ASS I IFN y UI ml Nombre de sujets 200 150 100 50 L S297 0 20 ap AS oo A OO 07 2 s Do Bu Cat o YyY Y 9 D gt aS oP 61 IFN y Ul ml Nombre de sujets 90 60 30 L O N 9 9 9 9 9 9 9 0 0 PoP rr 5 9 0 PP AP En RETTET 1 Ne Mn AT IFN y UI ml Figure 6 Distribution de mitog ne valeur z ro soustraite Distribution de mitog ne valeur z ro soustraite dans une population faible risque n 409 Distribution de mitogene valeur z ro soustraite dans une population risques mixtes n 194 Distribution de mitog ne valeur z ro soustraite dans une population pr sentant l infection M tuberculosis confirm e par culture n 169 28 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 IFN y UI ml 8 6 T T T Faible Risques mixtes TB active risque Risque d infection par MTB Figure 7 Diff rence observ e entre les valeurs TB1 et TB2 valeur z ro soustraite stratifi e selon le risque Population faible risque n 409 population risques mixtes n 189 et population pr sentant l infection par M tuberculosis confirm e par culture n 141 Les valeurs TB1 ont t soustraites des valeurs TB2 Les sujets pr sentant des valeurs TB1 ou TB2 gt 10 0 Ul ml ont t exclus car ils se situent en dehors de l intervalle de lin arit du test Caract ristiques des performances du
5. 7 Laver les puits au moins 6 fois avec 400 pl puits de tampon _ de lavage 8 Ajouter 100 pl de solution de substrat enzymatique aux puits VARTA M langer avec l agitateur _ _ 9 Incuber pendant 30 minutes temp rature ambiante 10 Ajouter 50 pl de solution de blocage d enzyme aux puits pp ppp M langer avec l agitateur Le lal lal ia 11 Lire les r sultats 450 nm avec un filtre de r f rence de 620 4 650 nm 12 Analyser les r sultats 44 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 Cette page est intentionnellement laiss e vierge Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 45 Cette page est intentionnellement laiss e vierge 46 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 Marques d pos es QIAGEN QFT QuantiFERON Groupe QIAGEN Microsoft Excel Microsoft ProClin Rohm and Haas Co Accord de licence limit pour QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA En utilisant ce produit l acheteur ou l utilisateur accepte les conditions suivantes 1 Le produit ne doit tre utilis que conform ment aux protocoles fournis et cette notice et uniquement avec les composants contenus dans ce kit QIAGEN n accorde aucune licence sous sa propri t intellectuelle pour utiliser ou int grer les composants fournis dans ce kit avec tout autre composant non fourni dans ce kit l exception de ce qui est stipul dans les protocoles fo
6. Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA Nos Test de sang total IFN y mesurant les r ponses aux antig nes peptidiques ESAT 6 et CFP 10 Utilisation pr vue pour le diagnostic in vitro CE 622120 tel QIAGEN GmbH QIAGEN Strasse 1 40724 Hilden ALLEMAGNE T l phone 49 2103 29 0 1083 163FR Rev 02 Cli www QuantiFERON com QIAGEN www QuantiFERON com Sommaire Utilisation pr vue 4 R sum et explication du test 4 Principes du test 6 Temps requis pour effectuer le test 6 Composants et stockage 7 Mat riel n cessaire mais non fourni 8 Stockage et manipulation 8 Avertissements et pr cautions 9 Avertissements 9 Pr cautions 10 Pr l vement et manipulation des chantillons 13 Instructions d utilisation 15 Calculs et interpr tation du test 20 G n ration de la courbe de standard 20 Contr le qualit du test 21 Interpr tation des r sultats 21 Limitations 23 Caract ristiques des performances 24 tudes cliniques 24 Caract ristiques des performances du test 29 Informations techniques 34 R sultats ind termin s 34 Echantillons de plasma coagul 34 Guide de d pannage 35 R f rences 37 Symboles 42 Coordonn es 42 R sum de la proc dure du test 43 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 3 Utilisation pr vue Le test QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus est un test de diagnostic in vitro utilisant un cocktail peptidique simulant les prot ines ESAT 6 et CF
7. C S assurer que le kit est utilis avant la date de p remption S assurer que le standard reconstitu et que le concentr de conjugu 100x sont utilis s dans les 3 mois suivant la date de reconstitution Rejeter le substrat en cas de coloration bleue S assurer que les r servoirs de r actif sont propres Courbe de standard non lin aire et variabilit des duplicats Cause possible a Lavage incomplet de la microplaque b Erreur de dilution du standard c M lange insuffisant d Technique de pipetage incoh rente ou interruption pendant la mise en place du test Solution Laver la microplaque au moins 6 fois avec 400 pl puits de tampon de lavage Plus de 6 cycles de lavage peuvent tre requis en fonction du laveur utilis Une p riode de trempage d au moins 5 secondes doit tre effectu e entre chaque cycle S assurer que les dilutions du standard sont pr par es correctement conform ment la pr sente notice M langer soigneusement les r actifs par inversion ou en les vortexant doucement avant de les ajouter la microplaque L ajout des chantillons et des standards doit tre effectu de mani re continue Tous les r actifs doivent tre pr par s avant le d but du test Les informations produit et les guides techniques sont disponibles gratuitement aupr s de QIAGEN via votre distributeur ou sur le site www QuantiFERON com 36 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015
8. ELISA doit tre effectu e temp rature ambiante 22 C 5 C L incubation de la microplaque avec le conjugu les standards et les chantillons doit tre effectu e pendant 120 5 minutes La solution de substrat enzymatique est incub e sur la microplaque pendant 30 minutes La microplaque doit tre lue 450 nm avec un filtre de r f rence de 620 650 nm Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 35 D pannage ELISA f Les r actifs sont trop froids g Kit composants p rim s Bruit de fond lev Cause possible a Lavage incomplet de la microplaque b Temp rature d incubation trop lev e c Kit composants p rim s d Solution de substrat enzymatique contamin e Tous les r actifs l exception du concentr de conjugu 100x doivent tre amen s temp rature ambiante avant le d but du test ce qui prend environ une heure S assurer que le kit est utilis avant la date de p remption S assurer que le standard reconstitu et que le concentr de conjugu 100x sont utilis s dans les 3 mois suivant la date de reconstitution Solution Laver la microplaque au moins 6 fois avec 400 pl puits de tampon de lavage Plus de 6 cycles de lavage peuvent tre requis en fonction du laveur utilis Une p riode de trempage d au moins 5 secondes doit tre effectu e entre chaque cycle L incubation d ELISA doit tre effectu e temp rature ambiante 22 C 5
9. R f rences Une liste compl te de r f rences QFT Plus et QFT est disponible sur Gnowee la biblioth que de r f rence QuantiFERON sur le site www gnowee net l 2 10 11 12 13 14 15 16 Andersen P et al 2000 Specific immune based diagnosis of tuberculosis Lancet 356 1099 Balcells M E et al 2008 A comparative study of two different methods for the detection of latent tuberculosis in HIV positive individuals in Chile Int J Infect Dis 12 645 Bartalesi F et al 2009 QuantiFERON TB Gold and TST are both useful for latent TB screening in autoimmune diseases Eur Respir J 33 586 Bocchino M et al 2008 Performance of two commercial blood IFN gamma release assays for the detection of Mycobacterium tuberculosis infection in patient candidates for anti TNF alpha treatment Eur J Clin Microbiol Infect Dis 27 907 Brock et al 2006 Latent tuberculosis in HIV positive diagnosed by the M tuberculosis specific interferon gamma test Respir Res 7 56 Chun J K et al 2008 The role of a whole blood interferon gamma assay for the detection of latent tuberculosis infection in bacille Calmette Guerin vaccinated children Diagn Microbiol Infect Dis 62 389 Connell T G et al 2008 A three way comparison of tuberculin skin testing QuantiFERON TB gold and T SPOT TB in children PLoS ONE 3 e2624 doi 10 137 1 journal pone 0002624 Detjen A K et al 2007
10. les tubes QFT Plus avant le pr l vement Solution Laver la microplaque au moins 6 fois avec 400 pl puits de tampon de lavage Plus de 6 cycles de lavage peuvent tre requis en fonction du laveur utilis Une p riode de trempage d au moins 5 secondes doit tre effectu e entre chaque cycle Prendre garde lors du pipetage et du m lange des chantillons pour r duire les risques S assurer que le kit est utilis avant la date de p remption S assurer que le standard reconstitu et que le concentr de conjugu 100x sont utilis s dans les trois mois suivant la date de reconstitution Rejeter le substrat en cas de coloration bleue S assurer que les r servoirs de r actif sont propres Apr s la centrifugation viter le pipetage r p t ou le m lange du plasma par d autres moyens avant de le pr lever Prendre garde ne pas perturber la mati re sur la surface du gel quelle que soit l tape Lectures de faible densit optique pour les standards Cause possible a Erreur de dilution du standard b c d Erreur de pipetage Temp rature d incubation trop faible P riode d incubation trop courte Mauvais filtre de lecteur de microplaque utilis Solution S assurer que les dilutions du standard de kit sont pr par es correctement conform ment la pr sente notice S assurer que les pipettes sont calibr es et utilis es conform ment aux instructions du fabricant L incubation d
11. rosal 0 01 m v Conjugate 100x Concentrate lyophilized concentr de conjugu 100x 1x 0 3 ml lyophilis IFN y HRP murin anti humain contient du thim rosal si reconstitu 0 01 m v Wash Buffer 20x Concentrate concentr de tampon de lavage 20x 1 x 100 ml pH 7 2 contient du ProClin 300 0 05 v v Enzyme Substrate Solution solution de substrat enzymatique 1 x 30 ml contient du H2O2 3 3 5 5 t tram thylbenzidine Enzyme Stopping Solution solution de blocage d enzyme 1x 15 ml contient 0 5M H2SO Notice QFT Plus ELISA Toutes les configurations de produits ne sont pas disponibles dans chaque pays Veuillez vous adresser au service client QIAGEN coordonn es sur www giagen com pour de plus amples informations sur les configurations disponibles amp la commande T Voir page 9 pour les conseils de prudence et les mentions de danger Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 7 Mat riel n cessaire mais non fourni Incubateur 37 C 1 C CO non requis Pipettes volume variable calibr es de 10 pl 1 000 pl avec embouts jetables Pipettes multicanaux calibr es de 50 pl et 100 pl avec embouts jetables Agitateur de microplaque Eau d ionis e ou distill e 2 litres Laveur de microplaque laveur automatique recommand Lecteur de microplaques quip d un filtre de 450 nm et d un filtre de r f rence de 620 nm 650 nm Stockage et manipulation T
12. Clin Biochem 40 913 Stebler A et al 2008 Whole blood interferon gamma release assay for baseline tuberculosis screening of healthcare workers at a Swiss university hospital Infect Control Hosp Epidemiol 29 681 Turner J et al 1996 Stimulation of human peripheral blood mononuclear cells with live Mycobacterium bovis BCG activates cytolytic CD8 T cells in vitro Immunology 87 339 Brookes R H et al 2003 CD8 T cell mediated suppression of intracellular Mycobacterium tuberculosis growth in activated human microphages Eur J Immunol 33 3293 Stenger S et al 1998 An antimicrobial activity of cytolytic T cells mediated by granulysin Science 282 121 38 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 36 37 38 39 AO Al 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 Lalvani A et al 1998 Human cytolytic and interferon gamma secreting CD8 T lymphocytes specific for Mycobacterium tuberculosis Proc Natl Acad Sci U S A 95 270 Lewinsohn D M et al 2001 Classically restricted human CD8 T lymphocytes derived from Mycobacterium tuberculosis infected cells definition of antigenic specificity J Immunol 166 439 Lewinsohn D A et al 2007 Immunodominant tuberculosis CD8 antigens preferentially restricted by HLA B PLoS Pathol 3 1240 Day C L et al 2011 Functional capacity of Mycobacterium tuberculosis specific T
13. QFT Plus avec un nouvel chantillon sanguin Il est possible de r p ter le test ELISA de plasmas stimul s si un lavage insuffisant ou une autre d viation de proc dure avec le test ELISA sont suspect s Les r sultats ind termin s dus des valeurs mitog nes faibles ou des valeurs z ro lev es ne changeront pas si le test est r p t sauf en cas d erreur avec le test ELISA Les r sultats ind termin s doivent tre report s tels quels Les m decins peuvent choisir de pr lever nouveau un chantillon ou d effectuer d autres proc dures s ils le jugent n cessaire Echantillons de plasma coagul Si des caillots de fibrine apparaissent avec le stockage long terme des chantillons de plasma centrifuger les chantillons pour s dimenter la mati re coagul e et faciliter le pipetage du plasma 34 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 Guide de d pannage Ce guide de d pannage peut vous aider r soudre les probl mes qui pourraient se poser Pour de plus amples informations voir galement les informations techniques fournies sur www QuantiFERON com Pour les coordonn es voir la quatri me de couverture D pannage ELISA D veloppement de couleur non sp cifique Cause possible a b d e Lavage incomplet de la microplaque Contamination crois e des puits ELISA Kit composants p rim s Solution de substrat enzymatique contamin e M lange du plasma dans
14. n existe pas de test de standard d finitif pour la LTBI la culture microbiologique de M tuberculosis constitue un substitut ad quat car les patients souffrant de la maladie sont par d finition infect s Les individus de 4 sites d tude en Australie et au Japon chez lesquels une tuberculose tait suspect e puis chez lesquels on a confirm l infection par M tuberculosis par culture ont t test s pour valuer la sensibilit de QFT Plus tableaux 5 et 6 Les patients avaient re u moins de 14 jours de traitement avant le pr l vement sanguin pour le test QFT Plus Dans un r sum des r sultats obtenus pour les 4 groupes de patients positifs la culture M tuberculosis la sensibilit globale de QFT Plus pour la tuberculose active tait de 95 3 164 172 Dans les 4 groupes 159 patients taient positifs pour les deux tubes TB1 et TB2 1 patient tait positif pour le TB1 uniquement et 4 patients taient positifs pour le TB2 uniquement Un total de 1 1 2 174 des r sultats taient ind termin s Le r sultat TB2 a correctement identifi 1 patient confirm en culture dont le r sultat TB1 seul aurait t ind termin mitog ne faible voir tableaux 5 et 6 Tableau 5 R sultats de l tude de sensibilit de QFT Plus par site d tude Sensibilit QFT Plus IC 95 O 84 69 93 2 98 90 100 Site japonais 3 54 O 0 100 93 100 0 100 84 100 Sites d tude Positif Negatif Ind termin
15. valeur DO moyenne du standard z ro diluant vert doit tre lt 0 150 Si la valeur DO moyenne est gt 0 150 la proc dure de lavage de microplaque doit tre examin e Interpr tation des r sultats Les r sultats QFT Plus sont interpr t s selon les crit res suivants Remarque importante le diagnostic ou l exclusion de la tuberculose et l valuation de la probabilit de LTBI exigent une combinaison de r sultats pid miologiques historiques m dicaux et diagnostiques qui doivent tre pris en compte dans l interpr tation des r sultats QFT Plus tableau 2 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 21 Tableau 2 Interpr tation des r sultats de QFT Plus Valeur TB1 moins TB2 moins Mitogene R sultat de Rapport interpr tation z ro valeur z ro valeur z ro moins valeur QFT Plus UI ml UI ml UI ml zero UI ml gt 0 35 et gt 25 de Tous la valeur z ro Tous Positift Infection M tuberculosis gt 0 35 et probable gt 25 de Tous lt 8 0 a valeur z ro lt 0 35 Necatif Infection M tuberculosis OU 20 5 9 improbable gt 0 35 et lt 25 de la valeur zero lt 0 5 Impossible de deter bs peed miner la probabilit Ind termin d une infection par gt 8 08 Tous M tuberculosis Les r ponses au contr le positif mitogene et occasionnellement au contr le antig ne TB peuvent souvent tre situ es en dehors de la pl
16. 2 ATBI 6 TB1 8 TBI 10 TBI 11TB1 12 TB1 14 TB 16TB1 18TB1 20TB1 22 TBI G 2 TB2 4 TB2 6 TB2 8 TB2 10 TB2 11 TB2 12 TB2 14TB2 16TB2 18 TB2 20 TB2 22 TB2 H 2M 4M 6M 8M 10M 11M 12M 14M 16M 18M 20M 122M Figure 2 Configuration d chantillons recommand e 22 tests par microplaque S1 standard 1 S2 standard 2 S3 standard 3 S4 standard 4 I N chantillon 1 Plasma de valeur zero 1 TB1 chantillon 1 Plasma TB1 1 TB2 chantillon 1 Plasma TB2 1 M chantillon 1 Plasma mitog ne 8 Couvrir chaque microplaque avec un couvercle et m langer le conjugu et les chantillons standards de plasma soigneusement en utilisant un agitateur de microplaque pendant 1 minute viter les projections 9 Couvrir chaque microplaque avec un couvercle et incuber temp rature ambiante 22 C 5 C pendant 120 5 minutes Les microplaques ne doivent pas tre expos es la lumi re directe du soleil pendant incubation 10 Au cours de l incubation diluer une mesure du concentr du tampon de lavage 20x avec 19 mesures d eau d ionis e ou distill e et m langer soigneusement Une quantit suffisante de concentr de tampon de lavage 20x est fournie pour pr parer 2 litres de tampon de lavage concentr pr t l emploi Laver les puits avec 400 pl de tampon de lavage concentr pr t l emploi pendant au moins 6 cycles Un laveur de microplaque aut
17. 49 mais aucun impact sur la r ponse au mitog ne n a t constat chez les enfants de moins de 5 ans 49 tandis que le taux de r sultats ind termin s tait faible lors du d pistage de routine des enfants immigr s 46 Grossesse Dans une r gion faible charge les performances du QFT 6 pr sentent la m me qualit chaque trimestre de grossesse les r sultats tant comparables ceux de femmes non enceintes La sp cificit du QFT est largement sup rieure et sa sensibilit au moins gale En outre le QFT pourrait mieux pr dire la progression de la maladie que le TST 50 Dans une r gion charge lev e le QFT a t plus stable tout au long de la grossesse et a fourni une approximation plus pr cise de la pr valence de la LTBI de fond par rapport au TST Toutefois les auteurs ont conclu que la grossesse affectait la fois le QFT et le TST 51 VIH SIDA Les tests IGRA et TST sont tous deux affect s par l infection au 101 VIH Plusieurs donn es probantes indiquent que les r sultats doivent tre interpr t s avec prudence chez les sujets pr sen tant des taux de CD4 lt 200 52 Il a t d montr que le QFT est moins affect que le TST et l IGRA reposant sur ELISpot 53 55 Le test IGRA ne n cessite qu une seule visite Il n est donc pas touch par le probl me de faible taux de pr sence chez cette population contrairement au TCT 53 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELI
18. Cela dissoudra les antig nes sur les parois du tube Remarque importante les tubes doivent tre une temp rature de 17 C 25 C au moment de l agitation Le secouement trop nergique des tubes peut provoquer une perturbation du gel et peut entra ner des r sultats aberrants 4 Apres les avoir tiquet s remplis et agit s transf rer les tubes dans un incubateur 37 C 1 C d s que possible et dans les 16 heures suivant le pr l vement Avant l incubation maintenir les tubes temp rature ambiante 22 C 5 C 14 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 Instructions d utilisation tape 1 Incubation du sang et pr l vement du plasma Mat riel fourni M Tubes de pr l vement sanguin QFT Plus se reporter la section 3 Mat riel n cessaire mais non fourni M Voir la section 3 Proc dure 1 Si le sang n est pas incub imm diatement apr s avoir t pr lev le nouveau m lange des tubes en les retournant 10 fois doit tre effectu juste avant l incubation 2 Incuber les tubes DEBOUT 37 C 1 C pendant 16 24 heures L incubateur ne n cessite pas de CO ou d humidification 3 Apr s une incubation 37 C les tubes de pr l vement sanguin peuvent rester entre 4 C et 27 C jusqu 3 jours avant d tre centrifug s 4 Apres l incubation des tubes 37 C le pr l vement du plasma est facilit par la centrifu gation des tubes penda
19. E CONTACT AVEC LES YEUX rincer avec pr caution l eau pendant plusieurs minutes Enlever les lentilles de contact si la victime en porte et si elles peuvent tre facilement enlev es Continuer rincer EN CAS DE CONTACT AVEC LA PEAU ou les cheveux enlever imm diatement les v tements contamin s Rincer la peau l eau se doucher Appeler imm diatement un CENTRE ANTIPOISON ou un m decin Garder sous clef Porter des gants de protection des v tements de protection un quipement de protection des yeux du visage QuantiFERON Enzyme Substrate Solution Solution de substrat enzymatique QuantiFERON Attention Provoque une l g re irritation cutan e En cas d irritation cutan e consulter un m decin 10 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 QuantiFERON Green Diluent Diluant vert QuantiFERON Contient du trisodium 5 hydroxy 1 4 sulphoph nyl 4 4 sulphoph nylazo pyrazole 3 carboxylate Attention Peut provoquer une r action allergique cutan e Eliminer le contenu r cipient dans une usine de traitement des d chets agr e Enlever les v tements contamin s et les laver avant r utilisation En cas d irritation ruption cutan e consulter un m decin Porter des gants de protection des v tements de protection un quipement de protection des yeux du visage Standard IFN y QuantiFERON Contient de l acide borique Danger peut nuire la fertilit ou au foetus Eliminer le conten
20. Interferon gamma release assays improve the diagnosis of tuberculosis and nontuberculous mycobacterial disease in children in a country with a low incidence of tuberculosis Clin Infect Dis 45 322 Diel R et al 2009 Comparative performance of tuberculin skin test QuantiFERON TB Gold In Tube assay and T Spot TB test in contact investigations for tuberculosis Chest 135 1010 Diel R et al 2008 Predictive value of a whole blood IFN y assay for the development of active TB disease Am J Respir Crit Care Med 177 1164 Diel R et al 2006 Tuberculosis contact investigation with a new specific blood test in a low incidence population containing a high proportion of BCG vaccinated persons Respir Res 7 77 Dogra S et al 2007 Comparison of a whole blood interferon gamma assay with tuberculin skin testing for the detection of tuberculosis infection in hospitalized children in rural India J Infect 54 267 Drobniewski F et al 2007 Rates of latent tuberculosis in health care staff in Russia PLoS Med 4 e55 Gerogianni et al 2008 Whole blood interferon gamma assay for the diagnosis of tuberculosis infection in an unselected Greek population Respirology 13 270 Harada N et al 2008 Comparison of the sensitivity and specificity of two whole blood interferon gamma assays for M tuberculosis infection J Infect 56 348 Higuchi K et al 2009 Comparison of performance in two diagnostic methods fo
21. P 10 afin de stimuler les cellules dans le sang total h parinis La d tection de l interf ron y IFN y par le dosage d immunoabsorption par enzyme li e ELISA enzyme linked immunosorbent assay est utilis e pour identifier les r ponses in vitro aux antigenes peptidiques associ s l infection par Mycobacterium tuberculosis QFT Plus est un test indirect de recherche de l infection par M tuberculosis y compris de la maladie destin tre utilis en combinaison avec une valuation des risques des examens radiographiques ainsi que d autres valuations m dicales et diagnostiques R sum et explication du test La tuberculose est une maladie contagieuse provoqu e par une infection par les organismes complexes M tuberculosis MTB M tuberculosis M bovis M africanum qui se propagent g n ralement de nouveaux h tes via des noyaux de gouttelettes transmis par voie respiratoire par les patients atteints de tuberculose respiratoire Un individu nouvellement infect peut tomber malade en l espace de quelques semaines quelques mois mais la plupart des individus infect s restent en bonne sant L infection tuberculeuse latente LTBI un trouble asymptomatique non contagieux persiste chez certaines personnes qui peuvent d velopper une tuberculose quelques mois ou quelques ann es plus tard Le principal objectif du diagnostic de la LTBI est d envisager un traitement m dical pour pr venir la tuberculose Le test cu
22. SA 02 2015 31 Population Nombre total Conclusions et r sultats condition d tudes publi es Traitements Le QFT est moins affect par les traitements immonosuppres 112 immono seurs que le TST et pr sente une meilleure corr lation avec les suppresseurs facteurs de risque de la TB 23 27 Le QFT pr sente une sensibilit lev e chez les patients souffrant d une maladie rhumatismale 23 56 57 ainsi qu une sp cificit sup rieure celle du TST ce qui r duit le risque de faux positifs et de traitements inutiles qui auraient lieu avec le TST 23 57 58 Professionnels Il a t d montr que ce test pr sente une sp cificit 111 de sant sup rieure celle du TST ainsi qu un risque de faux positifs inf rieur et qu il est plus conomique que le TST 59 62 La variabilit proximit du seuil est un r sultat attendu avec les tests en s rie en raison du seuil dichotomique et de la variabilit inh rente d un test biologique 63 Des tudes ont indiqu des taux de conversion r version sup rieurs ceux du TST lors de tests en s rie chez des professionnels de la sant faible risque 64 65 Le CDC am ricain reconna t que le crit re souple utilis pour d finir la conversion IGRA peut entra ner plus de conversions que celles observ es avec les crit res quantitatifs plus stricts du TST En outre il a t d montr que les strat gies de r analyse sont plus efficaces dans la gestion d
23. age de la r action l aide d un lecteur de microplaque quip d un filtre 450 nm et d un filtre de r f rence de 620 nm 650 nm Les valeurs DO sont utilis es pour calculer les r sultats Calculs et interpr tation du test Le logiciel d analyse QFT Plus peut tre utilis pour analyser les donn es brutes et calculer les r sultats Il est disponible sur www QuantiFERON com S assurer que la version la plus r cente du logiciel d analyse QFT Plus est utilis e Le logiciel effectue une valuation de contr le qualit du test g n re une courbe de standard et fournit un r sultat de test pour chaque sujet comme d taill dans la section Interpr tation des r sultats En alternative l utilisation du logiciel d analyse QFT Plus les r sultats peuvent aussi tre d termin s selon la m thode suivante G n ration de la courbe de standard si le logiciel d analyse QFT Plus n est pas utilis D terminer les valeurs DO moyennes des r plicats du standard du kit sur chaque microplaque Construire une courbe de standard logt logi en tra ant le log de la DO moyenne axe y par rapport au log de la concentration IFN y des standards en Ul ml axe x en omettant le standard z ro dans ces calculs Calculer la ligne de meilleur ajustement pour la courbe de standard par analyse de r gression Utiliser la courbe de standard pour d terminer la concentration IFN y Ul ml de chacun des chantillons de plasma de t
24. age du lecteur de microplaques Cela n a pas d impact sur les r sultats du test t Si l infection par M tuberculosis n est pas suspect e les r sultats initialement positifs peuvent tre confirm s par un nouveau test des chantillons de plasma originaux en duplicats dans le dosage ELISA QFT Plus Si le test r p t d un ou de plusieurs r plicats est positif l individu doit tre consid r comme positif au test t Voir la section D pannage pour les causes possibles Dans les tudes cliniques moins de 0 25 des sujets pr sentaient des niveaux IFN y gt 8 0 Ul ml pour la valeur z ro La magnitude du niveau IFN y mesur ne peut pas tre corr l e au stade ou au degr d infection au niveau de la r ponse immunitaire ou la probabilit de progression vers la maladie active Une r ponse positive la tuberculose chez les personnes n gatives au mitog ne est rare mais a d j t observ e chez les patients souffrant de la tuberculose Cela indique que la r ponse IFN y l antigene TB est sup rieure la r ponse au mitog ne ce qui est possible car le niveau de mitog ne ne stimule pas au maximum la production d IFN y par les lymphocytes 22 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 TB1 valeur zero et ou TB2 valeur z ro gt 0 35 Ul ml s Non Interpr tation Oui TB1 valeur z ro et ou TB2 valeur z ro 25 de la valeur z ro en Ul ml
25. amen s temp rature ambiante 22 C 5 C avant d tre utilis s Attendre au moins 60 minutes pour l quilibration 2 Retirer du cadre les bandelettes superflues les resceller dans la poche en aluminium et les replacer au r frig rateur pour stocker jusqu leur utilisation Pr voir au moins 1 bandelette pour les standards QFT Plus et suffisamment de bandelettes pour le nombre de sujets test s voir figure 2 Apr s utilisation conserver le cadre et le couvercle pour un emploi ult rieur avec les bandelettes restantes 3 Reconstituer le standard IFN y avec le volume d eau d ionis e ou distill e indiqu sur l tiquette du flacon M langer doucement pour r duire la formation de mousse et pour garantir une solubilisation compl te La reconstitution du standard au volume indiqu produira une solution une concentration de 8 0 Ul ml Remarque importante le volume de reconstitution du standard du kit diff re selon les lots Utiliser le standard du kit reconstitu pour produire une s rie de dilution 1 pour 2 suivie d une s rie de dilution 1 pour 4 de l IFN y dans le diluant vert DV voir figure 1 Le 1 standard 1 contient 4 0 Ul ml le S2 standard 2 contient 1 0 Ul ml le S3 standard 3 contient 0 25 Ul ml et le S4 standard 4 contient O Ul ml DV seul Les standards doivent tre test s au moins en duplicats Pr parer des dilutions fra ches du standard de kit pour chaque session ELISA 16 N
26. are workers Arch Intern Med 169 179 Nienhaus A et al 2008 Evaluation of the interferon y release assay in healthcare workers Int Arch Occup Environ Health 81 295 Nienhaus A et al 2011 Systematic review of cost and cost effectiveness of different TB screening strategies BMC Health Serv Res 11 247 Centers for Disease Control and Prevention 2010 Updated guidelines for using interferon gamma release assays to detect Mycobacterium tuberculosis infection United States 2010 MMWR Recomm Rep 59 RR 5 1 Dorman S E et al 2014 Interferon y release assays and tuberculin skin testing for diagnosis of latent tuberculosis infection in healthcare workers in the United States Am J Respir Crit Care Med 189 77 Fong K S et al 2012 Challenges of interferon gamma release assay conversions in serial testing of health care workers in a tuberculosis control program Chest 142 55 Thanassi W Noda A Hernandez B Newell J Terpeluk P Marder D and Yesavage J A 2012 Delineating a retesting zone using receiver operating characteristic analysis on serial QuantiFERON tuberculosis test results in US healthcare workers Pulm Med doi 10 1155 2012 291294 Epub Behrman A et al 2013 Protecting Health Care Workers from Tuberculosis 2013 ACOEM Medical Center Occupational Hatlh Section Task Force on Tuberculosis and Health Care Workers J Occup Environ Med 55 985 Nienhaus A Ringshause
27. cell responses in humans is associated with mycobacterial load J Immunol 187 2222 Rozot V et al 2013 Mycobacterium tuberculosisspecific CD8 T cells are functionally and phenotypically different between latent infection and active disease Eur J Immunol 43 1568 Nikolova M et al 2013 Antigen specific CD4 and CD8 positive signatures in different phases of Mycobacterium tuberculosis infection Diagn Microbiol Infect Dis 75 277 Chicchio T et al 2014 Polyfunctional T cells and effector memory phenotype are associated with active TB in HIV infected patients J Infect doi 10 1016 j jinf 2014 06 009 Epub Ongaya A et al 2013 Mycobacterium tuberculosis specific CD8 T cell recall in convalescing TB subjects with HIV co infection Tuberculosis 93 S60 Lanicioni C et al 2012 CD8 T cells provide an immunologic signature of tuberculosis in young children Am J Respir Crit Care Med 185 206 Long G Ji Chun M Min Jin Long L Jin Hui T 2014 Interferon y release assay for the diagnosis of latent Mycobacterium tuberculosis infection in children younger than 5 years a meta analysis Clin Pediatr Howley M M et al 2014 Evaluation of QuantiFERON TB Gold In Tube and tuberculin skin tests among immigrant children being screened for latent tuberculosis infection Ped Infect Dis Diel R Loddenkember R Niemann S Meywald Walter K and Nienhaus A 2011 Negative and positive predict
28. comme d crit ci dessous Le sang peut aussi tre pr lev dans un seul tube de pr l vement sanguin g n rique contenant de l h parine de lithium comme anticoagulant avant d tre transf r vers les tubes QFT Plus Utiliser uniquement l h parine de lithium comme anticoagulant car les autres anticoagulants interf rent avec le test Remplir un tube de pr l vement sanguin volume minimal 5 ml et m langer doucement en retournant le tube plusieurs fois pour dissoudre l h parine Le sang doit rester temp rature ambiante 22 C 5 C avant d tre transf r dans les tubes QFT Plus pour incubation laquelle doit imp rativement tre lanc e dans les 16 heures suivant le pr l vement sanguin Si le sang a t pr lev dans un tube d h parine de lithium m langer les chantillons de mani re homog ne en retournant doucement le tube avant de les r partir dans les tubes QFT Plus La r partition doit tre r alis e dans des conditions d asepsie conform ment aux proc dures de s curit ad quates en retirant les bouchons des 4 tubes QFT Plus et en ajoutant 1 ml de sang dans chacun des tubes jusqu au centre du marquage noir situ sur le c t de l tiquette du tube Replacer correctement les bouchons des tubes et m langer comme d crit ci dessous 3 Imm diatement apr s avoir rempli les tubes les secouer dix 10 fois suffisamment fort pour s assurer que toute la paroi interne du tube est tapiss e de sang
29. e tait confirm e par culture n 1 28 la positivit au QFT tait sup rieure ou gale aux seuils TST de 10 et 15 mm 74 Maladie r nale Les r sultats positifs au QFT pr sentent une meilleure corr 45 en phase lation avec les facteurs de risque pour la TB que le TST et terminale sont moins associ s avec le BCG 75 Migrants Des tudes d montrent que le QFT n est pas affect par le 29 BCG et par l ge contrairement au TST 74 Il a t d montr que le QFT repr sente la m thode la plus conomique 76 Dans les r gions faible charge la majorit des cas de TB correspondait des personnes n es l tranger et des r activations de la TB latente apr s arriv e 77 La plus importante tude ce jour comparant le GFT et le TST chez des enfants immigr s pr conise l utilisation du GFT plut t que du TST pour tester l infection TB latente chez les enfants n s l tranger 46 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 33 Informations techniques R sultats ind termin s Les r sultats ind termin s sont peu fr quents et peuvent tre li s au statut immunologique de l individu test mais aussi un certain nombre de facteurs techniques en cas de non respect des instructions d utilisation ci dessus Si des probl mes techniques sont suspect s avec le stockage des r actifs le pr l vement sanguin ou la manipulation des chantillons sanguins r p ter tout le test
30. erformance of a Mycobacterium tuberculosis antigen specific IFN gamma assay Ann Rheum Dis 67 84 Mirtskhulava V et al 2008 Prevalence and risk factors for latent tuberculosis infection among health care workers in Georgia Int J Tuberc Lung Dis 12 513 Nakaoka H et al 2006 Risk for tuberculosis among children Emerging Infect Dis 12 1383 Pai M et al 2005 Mycobacterium tuberculosis infection in health care workers in rural India comparison of a whole blood interferon g assay with tuberculin skin testing JAMA 293 2746 Ponce de Leon D et al 2008 Comparison of an interferon gamma assay with tuberculin skin testing for detection of tuberculosis TB infection in patients with rheumatoid arthritis in a TB endemic population J Rheumatol 35 776 Richeldi L et al 2008 Prior tuberculin skin testing does not boost QuantiFERON TB results in paediatric contacts Eur Respir J 32 524 Rothel J S and Andersen P 2005 Diagnosis of latent Mycobacterium tuberculosis infection is the demise of the Mantoux test imminent Expert Rev Anti Infect Ther 3 981 Schoepfer A M et al 2008 Comparison of interferon gamma release assay versus tuberculin skin test for tuberculosis screening in inflammatory bowel disease Am J Gastroenterol 103 2799 Silverman M S et al 2007 Use of an interferon gamma based assay to assess bladder cancer patients treated with intravesical BCG and exposed to tuberculosis
31. ert aussi de contr le pour la bonne manipulation et la bonne incubation du sang Les tubes QFT Plus doivent tre incub s 37 C d s que possible et dans les 16 heures suivant le pr l vement Apr s une p riode d incubation de 16 24 heures les tubes sont centrifug s le plasma est retir et la quantit d IFN y Ul ml est mesur e par ELISA Un test QFT Plus est consid r positif en cas de r ponse IFN y l un des deux tubes d antig ne TB nettement sup rieure la valeur z ro d IFN y en Ul ml L chantillon de plasma du tube mitog ne sert de contr le positif IFN y pour chaque chantillon test Une faible r ponse au mitog ne lt 0 5 Ul ml indique un r sultat ind termin lorsqu un chantillon sanguin pr sente aussi un r sultat n gatif aux antig nes TB Cela peut survenir dans le cas de lymphocytes insuffisants d une activit lymphocytaire r duite en raison d une mauvaise manipulation de l chantillon d un remplissage m lange incorrect du tube mitog ne ou de l incapacit des lymphocytes du patient g n rer l IFN y Le tube de valeur z ro compense le bruit de fond par exemple niveaux excessifs d IFN y circulant ou pr sence d anticorps h t rophiles Le niveau d IFN y du tube de valeur z ro est soustrait du niveau d IFN y pour les tubes d antigene TB et le tube mitog ne Temps requis pour effectuer le test Le temps requis pour effectuer le test QFT Plus ELISA est estim ci de
32. est l aide de la valeur DO de chaque chantillon Ces calculs peuvent tre effectu s l aide des packs logiciels disponibles avec les lecteurs de microplaque ainsi qu avec les tableurs standards ou logiciels statistiques comme Microsoft Excel Il est recommand d utiliser ces logiciels pour calculer l analyse de r gression le coefficient de variation CV pour les standards ainsi que le coefficient de corr lation r de la courbe de standard 20 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 Contr le qualit du test L exactitude des r sultats du test d pend de l exactitude de la g n ration de la courbe de standard Ainsi il convient d examiner les r sultats d riv s des standards avant d interpr ter les r sultats des chantillons du test Pour que le dosage ELISA soit valide M La valeur DO moyenne du standard 1 doit tre gt 0 600 M Le CV des valeurs DO des r plicats du standard 1 et du standard 2 doit tre lt 15 M Les valeurs DO des r plicats pour les standards 3 et 4 ne doivent pas varier de plus de 0 040 unit de densit optique par rapport leur moyenne M Le coefficient de corr lation r calcul partir des valeurs d absorbance moyennes des standards doit tre gt 0 98 Le logiciel d analyse QFT Plus calcule et rapporte ces param tres de contr le qualit Si les crit res ci dessus ne sont pas respect s l analyse est invalide et doit tre r p t e La
33. g du patient dans les tubes de pr l vement sanguin et les m langer en les secouant dix 10 fois suffisam ment fort pour que toute la paroi interne du tube soit tapiss e de sang Cela dissoudra les antig nes sur les parois du tube Incuber les tubes debout 37 C 1 C pendant 16 24 heures Apr s l incubation centrifuger les tubes pendant 15 minutes de 2 000 3 000 x g FCR g pour s parer le plasma et les globules rouges Apr s la centrifugation viter le pipetage r p t ou le m lange du plasma par d autres moyens avant de le pr lever Prendre garde ne pas perturber la mati re sur la surface du gel quelle que soit l tape tape 2 IFN y ELISA l Amener les composants ELISA l exception du concentr de conjugu 100x temp rature ambiante 22 C 5 C pendant au moins 60 minutes Reconstituer le standard du kit 8 0 Ul ml avec de l eau distill e ou d ionis e Pr parer quatre 4 dilutions de standard Reconstituer le concentr de conjugu 100x lyophilis avec de l eau distill e ou d ionis e Pr parer le conjugu concentr pr t l emploi dans le diluant vert et ajouter 50 pl dans tous les puits Ajouter 50 pl d chantillons de plasma test et 50 pl de standards dans les puits correspondants M langer avec l agitateur Incuber pendant 120 5 minutes temp rature ambiante shit A Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 43
34. gerson T E et al 2012 Tests for latent tuberculosis in people with ESRD a systematic review Amer J Kidney Dis 61 33 76 Pareek M et al 2013 Community based evaluation of immigrant tuberculosis screening using interferon y release assays and tuberculin skin testing observational study and economic analysis Thorax 68 230 77 WHO Global Tuberculosis Report 2013 http www who int iris handle 10665 91355 Consult le 14 juillet 2013 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 41 IVD LOT GTIN Sewer fg fa ig Suffisant pour 2 x 96 pr parations d chantillons Fabricant autoris Symbole de la certification CE IVD Utilisation pr vue pour le diagnostic in vitro Code de lot Num ro de r f rence Code article international GTIN utiliser avant le Limite de temp rature Consulter les instructions d utilisation Ne pas r utiliser Su Inn x AN Conserver l abri des rayons du soleil Coordonn es Pour une assistance technique ou pour de plus amples informations appeler le num ro gratuit 00800 22 44 6000 consulter notre Centre d assistance technique l adresse www giagen com contact ou contacter l un des d partements d assistance technique voir quatri me de couverture ou visiter le site www giagen com 42 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 R sum de la proc dure du test tape 1 Incubation du sang l Pr lever le san
35. ive value of a whole blood interferon y release assay for developing active tuberculosis Am J Respir Crit Care Med 183 88 Machingadaize S et al 2012 Predictive value of recent QuantiFERON conversion for tuberculosis disease in adolescents Am J Respir Crit Care Med 186 1051 Riazi S et al 2012 Rapid diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection in children using interferon gamma release assays IGRAs Allergy Asthma Proc 33 217 Lighter Fisher J and Surette A M 2012 Performance of an interferon gamma release assay to diagnose latent tuberculosis infection during pregnancy Obstet Gynecol 119 1088 Mathud J S et al 2014 Pregnancy differentially impacts performance of latent tuberculosis diagnostics in a high burden setting PLoS ONE 9 e92308 Hoffman M and Ravn P 2010 The use of interferon gamma release assays in HIV positive individuals Eur Infect Dis 4 23 Cheallaigh C N et al 2013 Interferon gamma release assays for the diagnosis of latent TB infection in HIV infected individuals in a low TB burden country PLoS ONE 8 e53330 Ramos J M et al 2012 Contribution of interferon gamma release assays testing to the diagnosis of latent tuberculosis infection in HIV infected patients A comparison of QuantiFERON TB gold in tube T SPOT TB and tuberculin skin test BMC Infect Dis 12 169 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 39 55 56 57 58 59
36. lan pratique La sp cificit de QFT Plus a t estim e par approximation en valuant les taux de faux positifs chez les personnes pr sentant un faible risque pas de facteur de risque connu de l infection tuber culeuse La sensibilit a t estim e par approximation en valuant des groupes de patients souffrant de la tuberculose active confirm e en culture Sp cificit Une tude d valuation de la sp cificit de QFT Plus a t r alis e chez 409 sujets Les donn es d mographiques et les facteurs de risque d exposition la tuberculose ont t d termin s l aide d un sondage standardis au moment du test Dans un r sum des r sultats obtenus pour 2 groupes de patients pr sentant un faible risque aucun facteur de risque connu d infection tuberculeuse la sp cificit globale de QFT Plus tait de 97 6 399 409 tableaux 3 et 4 Tableau 3 R sultats de l tude de sp cificit de QFT Plus par site d tude tude Positif N gatif Ind termin Sp cificit IC 95 Japon 4 203 O 98 95 100 Australie 6 196 0 97 94 99 Tableau 4 R sultats de l tude de sp cificit de QFT Plus par tube d antig ne TB TBI TB2 QFT Plus Positif 5 10 10 N gatif 404 399 399 Ind termin O 0 0 Sp cificit 98 8 97 6 97 6 IC 95 97 2 99 6 95 6 98 8 95 6 98 8 24 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 Sensibilit pour la tuberculose active S il
37. llon obtenu avant le d veloppement de la r ponse immunitaire cellulaire des troubles comorbides qui affectent les fonctions immunitaires une mauvaise manipulation des tubes de pr l vement sanguin apr s la ponction veineuse une mauvaise ex cution du test ou d autres variables immunologiques m Un r sultat QFT Plus positif ne doit pas constituer la base unique ou d finitive de la d termination d une infection par M tuberculosis Une mauvaise ex cution du test peut entra ner des faux positifs m Un r sultat QFT Plus positif doit tre suivi d autres valuations m dicales et diagnos tiques de la tuberculose active p ex frottis et culture du BAAR radiographie du thorax m Si ESAT 6 et CFP 10 sont absents de toutes les souches BCG et de la plupart des mycobact ries non tuberculeuses connues il est possible qu un r sultat QFT Plus positif soit d une infection par M kansasii M szulgai ou M marinum Si l on suspecte de telles infections d autres tests doivent tre effectu s Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 9 Pr cautions Utilisation pr vue uniquement pour le diagnostic in vitro Lors de la manipulation des produits chimiques toujours porter une blouse de laboratoire des gants jetables et des lunettes de protection ad quats Pour plus d informations consulter les fiches de donn es de s curit FDS appropri es Celles ci sont disponibles en ligne dans un for
38. luant vert gt 10 pl 1 0 ml 3 15 pl 1 5 ml 4 20 pl 2 0 ml 5 25 pl 2 5 ml 6 30 pl 3 0 ml 7 35 pl 3 5 ml 8 AO pl 4 0 ml 9 45 pl 4 5 ml 10 50 pl 5 0 ml 11 55 pl 5 5 ml 12 60 pl 6 0 ml 5 Pour les chantillons de plasma pr lev s dans les tubes de pr l vement sanguin puis stock s ou congel s m langer les chantillons avant de les ajouter au puits ELISA Remarque importante si les chantillons de plasma sont ajout s directement depuis les tubes QFT Plus centrifug s tout m lange du plasma doit tre vit Prendre garde ne pas perturber la mati re sur la surface du gel quelle que soit l tape 6 Ajouter 50 pl du conjugu concentr pr t l emploi fra chement pr par dans les puits ELISA requis l aide d une pipette multicanaux 7 Ajouter 50 pl d chantillons de plasma de test dans les puits appropri s l aide d une pipette multicanaux voir la configuration recommand e de microplaque figure 2 Enfin ajouter 50 pl de chacun des standards 1 4 18 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 AIIN 3N ISN IZN JON Sl Sl 13 N 15N 17 N 19N J2IN B 1 TB 3 TB1 5 TB1 7 TB1 9 TBI S2 S2 13TB1 15 TB 17TB1 19TB1 21 TBI C 1 TB2 3 TB2 5 TB2 7 TB2 9 TB2 S3 S3 13 TB2 15 TB2 17 TB2 19 TB2 21 TB2 DIIM 3M I5M 7M 9M S4 S4 13M 15M 17M 19M 21M E 2N J4N J N J8N JION IIN 12 N 14N 16 N 18N 20N 22N F 2 TB
39. mat PDF pratique et compact sur le site www qiagen com safety r pertoriant les FDS imprimables pour chaque kit QIAGEN et chaque composant A AVERTISSEMENT le sang et le plasma humains doivent tre manipul s comme s ils taient potentiellement infectieux Observer les directives de manipulation du sang et des produits sanguins en vigueur Mettre au rebut les chantillons et le mat riel en contact avec le sang ou les produits sanguins conform ment aux r glementations nationales r gionales et locales en vigueur Les mentions de danger et conseils de prudence suivants s appliquent aux composants du QuantiFERON TB Gold Plus ELISA Mentions de danger LE QuantiFERON Conjugate Conjugu QuantiFERON Contient de l acide borique Danger peut nuire la fertilit ou au foetus Eliminer le contenu r cipient dans une usine de traitement des d chets agr e EN CAS d exposition prouv e ou suspect e consulter un m decin Se procurer les instructions avant utilisation Garder sous clef Porter des gants de protection des v tements de protection un quipement de protection des yeux du visage QuantiFERON Enzyme Stopping Solution Solution de blocage d enzyme QuantiFERON Contient de l acide sulfurique Danger provoque des br lures de la peau et des l sions oculaires graves Peut tre corrosif aux m taux liminer le contenu r cipient dans une usine de traitement des d chets agr e EN CAS D
40. min s et les laver avant r utilisation Garder sous clef Eliminer le contenu r cipient dans une usine de traitement des d chets agr e Autres informations Fiches de donn es de s curit www giagen com safety M le non respect de la notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA peut entra ner des r sultats erron s Lire attentivement les instructions avant toute utilisation M Ne pas utiliser le kit si un flacon de r actif pr sente des signes d endommagement ou de fuite avant son utilisation Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 11 M Ne pas m langer ou utiliser les bandelettes pour microplaque le standard IFN y le diluant vert ou le concentr conjugu 100x de diff rents lots de kit QFT Plus Les autres r actifs concentr de tampon de lavage 20x solution de substrat enzymatique et solution de blocage d enzyme peuvent tre interchang s entre les kits si les r actifs ne sont pas p rim s et si les d tails du lot sont enregistr s liminer les r actifs inutilis s et chantillons biologiques conform ment aux r glementations locales r gionales et nationales M Ne pas utiliser les tubes de pr l vement sanguin QFT Plus ou le kit ELISA apr s la date d expiration M S assurer que l quipement de laboratoire a t calibr valid pour utilisation EEE 12 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 Pr l vement et manipulation des chantillons QFT Plus
41. n F C Costa J T Schablon A and Tripodi D 2013 IFN y release assay versus tuberculin skin test for monitoring TB infection in healthcare workers Expert Rev Anti Infect Ther 11 37 Arend S M et al 2007 Comparison of two interferon gamma assays and tuberculin skin test for tracing TB contact Amer J Respir Crit Care Med 175 618 40 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 70 Mandalakas A M Detjen A K Hesseling A C Benedetti A and Menzies D 2011 Interferon gamma release assays and childhood tuberculosis systematic review and meta analysis Int J Tuberc Lung Dis 15 1018 71 Grinsdale J A Ho C S Banouvong H Kwamura L M 2011 Programmatic impact of using QuantiFERON TB Gold in routine contact investigation activities Int J Tuberc Lung Dis 15 1614 72 Walsh M C et al 2011 Sensitivity of interferon y release assays is not compromised in tuberculosis patients with diabetes Int J Tuberc Lung Dis 15 179 73 FaurholtJespen D et al 2014 Diabetes is associated with lower tuberculosis antigen specific interferon gamma release in Tanzanian tuberculosis patients and non tuberculosis controls Scand J Infect Dis 46 384 74 Painter J A et al 2013 Tuberculosis screening by tuberculosis skin test or QuantiFERON TB Gold In Tube Assay among an immigrant population with a high prevalence of tuberculosis and BCG vaccination PLoS ONE 8 e82727 75 Ro
42. nguin pour des tubes d 1 ml est relativement lent conserver le tube sur l aiguille pendant 2 3 secondes une fois qu il semble s tre rempli la hauteur souhait e Cela permet de s assurer que le bon volume est pr lev Le marquage noir situ sur le c t des tubes indique l intervalle de volume de remplissage autoris situ entre 0 8 et 1 2 ml Si le niveau de sang obtenu dans un tube d passe les limites d finies par le marquage un nouvel chantillon sanguin doit tre pr lev Si une aiguille papillon est utilis e pour le pr l vement sanguin un tube de purge doit tre utilis pour que la tubulure soit remplie de sang avant que les tubes QFT Plus ne soient employ s Dans le cas d une utilisation des tubes de pr l vement sanguin QFT Plus une altitude sup rieure 810 m tres ou si le volume de sang aspir est trop faible il est possible de pr lever le sang l aide d une seringue avant d en transf rer imm diatement 1 ml dans chacun des 4 tubes Pour des raisons de s curit la meilleure m thode consiste retirer l aiguille de la seringue en respectant les proc dures de s curit ad quates retirer les g p p q bouchons des 4 tubes QFT Plus et ajouter 1 ml de sang dans chacun des tubes jusqu au g JUSq Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 13 centre du marquage noir situ sur le c t de l tiquette du tube Replacer correctement les bouchons et m langer
43. nt 15 minutes de 2 000 3 000 x g FCR g Le module de gel s parera les cellules du plasma Si ce n est pas le cas les tubes doivent tre recentrifug s ll est possible de pr lever le plasma sans centrifugation mais il faudra faire particuli rement attention le retirer sans perturber les cellules 5 Les chantillons de plasma doivent tre pr lev s uniquement l aide d une pipette Remarque importante apr s la centrifugation viter le pipetage r p t ou le m lange du plasma par d autres moyens avant de le pr lever Prendre garde ne pas perturber la mati re sur la surface du gel quelle que soit l tape Les chantillons de plasma peuvent tre charg s directement depuis les tubes de pr l vement sanguin centrifug s vers la microplaque QFT Plus ELISA y compris lorsque des stations de travail ELISA automatiques sont utilis es Les chantillons de plasma peuvent tre stock s jusqu 28 jours entre 2 C et 8 C ou s ils sont pr lev s au dessous de 20 C pendant des p riodes prolong es Pour des chantillons de test corrects pr lever au moins 150 pl de plasma Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 15 tape 2 IFN y ELISA Mat riel fourni HB Kit QFT Plus ELISA voir la section 3 Mat riel n cessaire mais non fourni M Voir la section 3 Proc dure 1 Tous les chantillons de plasma et r actifs sauf le concentr de conjugu 100x doivent tre
44. omatique est recommand ll est essentiel de proc der soigneusement au lavage avant d ex cuter le test Veiller ce que chaque puits soit compl tement rempli de tampon de lavage pour chaque cycle de lavage Une p riode de trempage d au moins 5 secondes est recommand e entre chaque cycle Un d sinfectant de laboratoire standard doit tre ajout au r servoir d effluent et les proc dures tablies pour la d contamination de mat riel potentiellement infectieux doivent tre suivies 11 Placer les microplaques face vers le bas sur une serviette absorbante faible peluchage pour liminer tout r sidu de tampon de lavage Ajouter 100 pl de solution de substrat enzymatique dans chaque puits couvrir chaque microplaque avec un couvercle et m langer soigneusement l aide d un agitateur de microplaque Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 19 12 Couvrir chaque microplaque avec un couvercle et incuber temp rature ambiante 22 C 5 C pendant 30 minutes Les microplaques ne doivent pas tre expos es la lumi re directe du soleil pendant incubation 13 Apr s les 30 minutes d incubation ajouter 50 pl de solution de blocage d enzyme chaque puits et m langer La solution de blocage d enzyme doit tre ajout e aux puits dans le m me ordre et environ la m me vitesse que pour le substrat l tape 11 14 Mesurer la densit optique DO de chaque puits dans les 5 minutes de bloc
45. otice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 Proc dure recommand e pour les standards dupliqu s a Etiqueter les 4 tubes S1 S2 S3 S4 b Ajouter 150 pl de DV S1 S2 S3 S4 c Ajouter 150 pl du standard du kit S1 et m langer soigneusement d Transf rer 50 pl de S1 S2 et m langer soigneusement e Transf rer 50 pl de S2 S3 et m langer soigneusement f Le DV seul sert de standard z ro S4 150 pl 50 pl 50 pl ee aa Standard de Standard 1 Standard 2 Standard 3 Standard 4 kit reconstitu 4 0 Ul ml 1 0 Ul ml 0 25 Ul ml O Ul ml diluant vert Figure 1 Pr paration de la courbe de standard 4 Reconstituer le concentr de conjugu 100x lyophilis avec 0 3 ml d eau d ionis e ou distill e M langer doucement pour r duire la formation de mousse et pour garantir une solubilisation compl te du conjugu Le conjugu concentr pr t l emploi est pr par en diluant la quantit requise de concentr de conjugu 100x reconstitu dans le diluant vert tableau 1 Pr paration du conjugu Ramener tout concentr de conjugu 100x non utilis une temp rature comprise entre 2 C et 8 C imm diatement apr s emploi Utiliser uniquement du diluant vert EE m Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 17 Tableau 1 Pr paration du conjugu Nombre Volume du concentr de conjugu Volume de de bandelettes 100x di
46. r tuberculosis infection Med Microbiol Immunol 198 33 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 37 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 Kang Y A et al 2005 Discrepancy between the tuberculin skin test and the whole blood interferon gamma assay for the diagnosis of latent tuberculosis infection in an intermediate tuberculosis burden country JAMA 293 2756 Katiyar S K et al 2008 Use of the QuantiFERON TB Gold In Tube test to monitor treatment efficacy in active pulmonary tuberculosis Int J Tuberc Lung Dis 12 1146 Kipfer B et al 2008 Tuberculosis in a Swiss army training camp contact investigation using an Interferon gamma release assay Swiss Med Wkly 138 267 Luetkemeyer A et al 2007 Comparison of an interferon gamma release assay with tuberculin skin testing in HIV infected individuals Am J Respir Crit Care Med 175 737 Mackensen F et al 2008 QuantiFERON TB Gold A new test strengthening long suspected tuberculous involvement in serpiginous like choroiditis Am J Ophthalmol 146 761 Manuel O et al 2007 Comparison of Quantiferon TB Gold with tuberculin skin test for detecting latent tuberculosis infection prior to liver transplantation Am J Transplant 7 2797 Matulis G et al 2007 Detection of latent tuberculosis in immunosuppressed patients with autoimmune diseases p
47. s 90 60 30 ER O 6 O78 6 8076 6 OG Bs END DRE RAA SES 29 IE AT es et 0 IFN y UI ml Figure 4 Distribution des valeurs z ro Distribution des valeurs z ro dans une population faible risque n 409 Distribution des valeurs z ro dans une population risques mixtes n 194 Distribution des valeurs z ro dans une population pr sentant l infection M tuberculosis confirm e par culture n 174 26 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 Nombre de sujets 400 OTB 300 E TB2 200 100 O N 465 OAO 0 09 9 0 9 9 90 9 oo STU Or be 6 SA 1 Bad 7 IFN y Ul ml Nombre de sujets 200 OTB 150 E TB2 100 50 0 N 49 0 O0 O0 90 9 040 0 90 0 0 FED EEE CCE Pd OS SOS OO Or 47 IFN y UI ml o a Nombre de sujets 30 O TB E TB2 20 10 0 N 49 0 0 0 0 0 09 O 00 10 00 Q so 7 7 VT 97 k 57 bo Q 9 IFN y UI ml o 9 Figure 5 Distribution de TB1 et TB2 valeur z ro soustraite Distribution des valeurs TB et TB2 valeur z ro soustraite dans une population faible risque n 409 Distribution des valeurs TB1 et TB2 valeur z ro soustraite dans une population risques mixtes n 194 Distribution des valeurs TB1 et TB2 valeur z ro soustraite dans une population pr sentant l infection par M tuberculosis confirm e par culture n 174 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 27 Nombre de sujets 400 300 200
48. s lymphocytes T CD8 sp cifiques ESAT 6 et CFP 10 semblent tre plus fr quemment d tect s chez les sujets avec TB active que chez les sujets avec LTBI et peuvent tre associ s une exposition r cente MTB 39 41 En outre les cellules T CD8 sp cifiques MTB produisant I IFN y ont galement t d tect es chez les sujets atteints de la TB active pr sentant une co infection au VIH 42 43 et chez les jeunes enfants atteints de la TB maladie 44 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 5 Principes du test Le syst me QFT Plus emploie des tubes sp ciaux de pr l vement sanguin qui sont utilis s pour pr lever le sang total L incubation du sang est r alis e dans les tubes pendant 16 24 heures avant le pr l vement de plasma et la recherche d IFN y produit en r ponse aux antig nes peptidiques Le test QFT Plus est effectu en deux tapes Dans un premier temps le sang total est pr lev dans chacun des tubes de pr l vement sanguin QFT Plus qui incluent un tube de valeur z ro un tube TB1 un tube TB2 et un tube mitog ne Le sang peut aussi tre pr lev dans un seul tube de pr l vement sanguin g n rique contenant de l h parine de lithium comme anticoagulant avant d tre transf r vers les tubes QFT Plus Le tube mitog ne est utilis avec le test QFT Plus comme contr le positif ce qui peut s av rer important en cas de doute sur le statut immunitaire de l individu Il s
49. sasii M szulgai et M marinum 1 Les individus infect s par les organismes complexes MTB pr sentent g n ralement des lymphocytes dans leur sang qui reconnaissent ceux ci ainsi que d autres antig nes mycobact riens Ce processus de 4 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 reconnaissance implique la g n ration et la s cr tion de la cytokine IFN y La d tection puis la quantification d IFN y constituent la base de ce test Les antig nes utilis s dans QFT Plus forment un cocktail peptidique qui simule les prot ines ESAT 6 et CFP 10 De nombreuses tudes ont d montr que ces antig nes peptidiques stimulaient les r ponses IFN y dans les cellules T des individus infect s par M tuberculosis Ce n est g n ralement pas le cas chez les individus non infect s ou vaccin s par le BCG ne pr sentant ni maladie ni risque de LTBI 1 32 Toutefois les traitements m dicaux ou les troubles emp chant la fonction immunitaire peuvent r duire les r ponses IFN y Les patients souffrant de certaines autres infections mycobact riennes peuvent aussi r pondre ESAT 6 et CFP 10 car les g nes codant ces prot ines sont pr sents dans M kansasii M szulgai et M marinum 1 23 Le test QFT Plus est la fois un test de LTBI et un outil utile permettant de diagnostiquer l infection complexe M tuberculosis chez les patients malades Un r sultat positif taie le diagnostic de tuberculose mais des infections par d a
50. ssous le temps requis pour tester plusieurs chantillons en lots est aussi indiqu Incubation 37 C des tubes de sang 16 24 heures ELISA environ 3 heures pour une microplaque ELISA 22 individus lt 1 heure de travail Ajouter 10 15 minutes pour chaque microplaque suppl mentaire 6 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 Composants et stockage Blood Collection Tubes tubes de pr l vement 200 tubes Pack pour patient sanguin unique N de r f rence 622526 622222 Nombre de tests pack 50 10 QuantiFERON Nil Tube tube de valeur z ro Nil 50 tubes 10 tubes bouchon gris anneau blanc QuantiFERON TB Tube TB 50 tubes 10 tubes bouchon vert anneau blanc QuantiFERON TB2 Tube TB2 50 tubes 10 tubes bouchon jaune anneau blanc QuantiFERON Mitogen Tube tube mitog ne Mitogen 50 tubes 10 tubes bouchon violet anneau blanc Notice des tubes de pr l vement sanguin QFT Plus 1 1 Composants ELISA Kit 2 plaques ELISA N de r f rence 622120 Bandelettes pour microplaques 12 x 8 puits enduites d anticorps 2 jeux de bandelettes monoclonaux IFN y murins anti humains pour microplaques 12 x 8 puits IFN y Standard lyophilized standard IFN y lyophilis contient de I IFN y 1 x flacon 8 Ul ml humain recombinant de la cas ine bovine du thim rosal 0 01 m v si reconstitu Green Diluent diluant vert contient de la cas ine bovine du s rum 1x 30 ml normal de souris du thim
51. tan tuberculinique TCT tait jusqu r cemment la seule m thode disponible de diagnostic de la LTBI La sensibilit cutan e la tuberculine se d veloppe de 2 10 semaines apr s l infection Toutefois certains individus infect s ne r pondent pas la tuberculine notamment ceux souffrant d une vari t de troubles bloquant les fonctions immunitaires mais aussi d autres ne souffrant pas de ces probl mes l inverse certains individus ayant peu de risques de pr senter une infection par M tuberculosis montrent une sensibilit la tuberculine et pr sentent des r sultats positifs au TCT apr s vaccination par le Bacille Calmette Gu rin BCG apr s une infection par mycobact rie autre que le complexe M tuberculosis ou en raison d autres facteurs ind termin s Il faut distinguer la LTBI de la tuberculose un trouble d claration obligatoire qui affecte g n ralement les poumons et les voies respiratoires inf rieures mais peut aussi toucher d autres syst mes organiques La tuberculose est diagnostiqu e partir de r sultats historiques physiques radiologiques histologiques et mycobact riologiques QFT Plus est un test recherchant des r ponses immunitaires m diation cellulaire CMI aux antig nes peptidiques qui simulent les prot ines mycobact riennes Ces prot ines ESAT 6 et CFP 10 sont absentes de toutes les souches BCG et de la plupart des mycobact ries non tuberculeuses l exception de M kan
52. test ll a t d montr que le test QFT Plus ELISA est lin aire Pour ce faire 5 r plicats de 11 pools de plasma de concentrations IFN y connues ont t plac s de mani re al atoire sur la micro plaque ELISA La droite de r gression lin aire pr sente une pente de 1 002 0 011 et un coefficient de corr lation de 0 99 figure 8 La limite de d tection du test QFT Plus ELISA est de 0 05 Ul ml et il n existe aucune preuve d un effet crochet haute dose prozone avec les concentrations d IFN y jusqu 10 000 Ul ml Niveau d termin d IFN y Ul ml 012 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Niveau attendu d IFN y Ul ml Figure 8 Profil de lin arit du test QFT Plus ELISA Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 29 L impr cision intratest et intertest CV du test QFT Plus ELISA a t estim e Pour ce faire 3 op rateurs diff rents ont test 20 chantillons de plasma pr sentant diff rentes concentrations IFN y dans des r plicats de 3 dans 3 laboratoires diff rents et pendant 3 jours non cons cutifs Chaque chantillon a ainsi t test 27 fois dans le cadre de 9 analyses ind pendantes L un des chantillons tait un contr le z ro pr sentant une concentration IFN y calcul e de 0 08 Ul ml IC 95 0 07 0 09 Sur les 19 chantillons de plasma restants les concentra tions taient comprises entre 0 33 IC 95 0 31 0 34 et 7 7 Ul ml IC 95 7 48 7 92 L impr cision in
53. tratest au sein d une m me analyse a t estim e au moyen du calcul de la moyenne des coefficients de variation CV de chaque plasma de test contenant de l IFN y issu de chaque analyse de microplaque n 9 L impr cision est comprise entre 4 1 et 9 1 CV La covariance intratest moyenne IC 95 tait de 6 6 0 6 La moyenne du plasma IFN y z ro tait de 14 1 CV L impr cision totale ou intertest a t d termin e par comparaison des 27 concentrations calcul es d IFN y pour chaque plasma de test L impr cision intertest tait comprise entre 6 6 et 12 3 CV Le CV moyen global IC 95 tait de 8 7 0 7 Le plasma IFN y z ro pr sentait un CV de 26 1 Ce niveau de variation est pr visible car la concentration calcul e d IFN y est faible et la variation pour une estimation de concentration faible est sup rieure celle pour des concentrations plus lev es La reproductibilit du test QFT Plus a t d termin e l aide d chantillons sanguins de 102 sujets pr sentant des facteurs de risques mixtes d infection M tuberculosis Trois op rateurs diff rents et trois conditions de laboratoires diff rentes ont t valu s 3 d terminations diagnostiques par sujet ont t r alis es soit un total de 306 d terminations diagnostiques pour l ensemble des sujets La reproductibilit diagnostique globale tait de 99 IC 95 97 2 99 7 le r sultat diagnostique tant concordant po
54. u ph nom ne de conversion r version 65 68 Contacts de TB VPP et VPN sup rieures celles du TST 47 avantage de 89 la visite unique pour les sujets risquant de ne pas se repr senter 63 meilleure corr lation l exposition 69 particuli rement chez les personnes vaccin es par le BCG et les populations provenant de pays pratiquant la vaccination par le BCG 70 71 Transplantation Il a t d montr que le test est aussi efficace que le TST mais 23 moins affect que ne l est le TST par une maladie organique en phase terminale 22 32 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 Nombre total d tudes publi es Population SIR Conclusions et r sultats condition Diab te ll existe diverses donn es probantes contradictoires issues 9 d un faible nombre de publications portant sur un faible nombre de sujets Selon une tude d une zone faible charge la sensibilit du QFT n est pas compromise par le diab te chez les patients atteints de TB 72 Une tude men e en Tanzanie une r gion charge lev e sugg rant un impact n gatif du diab te sur la production d IFN y n a pas pris en compte les facteurs de confusion tels que les infections au VIH et aux helminthes 73 Dans des tudes men es au Vietnam 838 patients se d clarant diab tiques et chez lesquels la TB tait suspect e en raison de radiographies du thorax anormales ou chez lesquels la TB activ
55. u r cipient dans une usine de traitement des d chets agr e EN CAS d exposition prouv e ou suspect e consulter un m decin Se procurer les instructions avant utilisation Garder sous clef Porter des gants de protection des v tements de protection un quipement de protection des yeux du visage QuantiFERON Wash Buffer 20x Concentrate Concentr de tampon de lavage 20x QuantiFERON amp QuantiFERON IFN y Standard Contient un m lange de 5 chloro 2 m thyl 4 isothiazolin 3 one et de 2 m thyl isothiazol 3 2H one 3 1 Attention Peut provoquer une r action allergique cutan e Porter des gants de protection des v tements de protection un quipement de protection des yeux du visage Conseils de prudence Se procurer les instructions avant utilisation Porter des gants de protection des v tements de protection un quipement de protection des yeux du visage EN CAS DE CONTACT AVEC LA PEAU ou les cheveux enlever imm diatement les v tements contamin s Rincer la peau l eau se doucher EN CAS DE CONTACT AVEC LES YEUX rincer avec pr caution l eau pendant plusieurs minutes Enlever les lentilles de contact si la victime en porte et si elles peuvent tre facilement enlev es Continuer rincer EN CAS d exposition prouv e ou suspect e consulter un m decin Appeler imm diatement un CENTRE ANTIPOISON ou un m decin En cas d irritation ruption cutan e consulter un m decin Enlever les v tements conta
56. ubes de pr l vement sanguin Stocker les tubes de pr l vement sanguin entre 4 C et 25 C R actifs de kit Stocker les r actifs de kit entre 2 C et 8 C Toujours prot ger la solution de substrat enzymatique de la lumi re directe du soleil R actifs reconstitu s et inutilis s Pour obtenir des instructions sur la reconstitution des r actifs voir la page 16 Le standard de kit reconstitu peut tre conserv jusqu 3 mois s il est stock entre 2 C et 8 C Noter la date laquelle le standard de kit a t reconstitu Une fois reconstitu le concentr de conjugu 100x inutilis doit tre stock entre 2 C et 8 C et utilis dans les 3 mois Noter la date laquelle le conjugu a t reconstitu Le conjugu concentr pr t l emploi doit tre utilis dans les 6 heures suivant sa pr paration Le tampon de lavage concentr pr t l emploi peut tre stock temp rature ambiante jusqu 2 semaines S assurer que les instruments ont t v rifi s et calibr s conform ment aux recommandations du fabricant 8 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 Avertissements et pr cautions Utilisation pr vue pour le diagnostic in vitro Avertissements m Un r sultat QFT Plus n gatif n exclut pas le risque d infection par M tuberculosis ou de tuberculose les r sultats faux n gatifs peuvent tre dus l tape de l infection p ex chanti
57. ur 303 d terminations sur 306 Les r sultats de 3 sujets proches de la valeur seuil taient responsables de la variation totale Diagnostic de la LTBI Un certain nombre d tudes ont t publi es pour d montrer les performances du QFT le pr curseur du QFT Plus dans plusieurs populations pr sentant un risque d infection par MTB Les principaux r sultats de certaines tudes choisies sont indiqu s dans le tableau 7 30 Notice QuantiFERON TB Gold Plus QFT Plus ELISA 02 2015 Tableau 7 tudes publi es s lectionn es concernant le QFT Population Nombre total Conclusions et r sultats PA condition d etudes publiees Pediatrie Performances prouv es chez les enfants y compris les enfants 152 de moins de 5 ans 45 46 avec pr cision sup rieure celle du test IGRA reposant sur le test ELISpot 8 La plus importante tude ce jour comparant le QFT et le TST chez des enfants du Vietnam des Philippines et du Mexique pr conise l utili sation du QFT plut t que du TST pour tester la LTBI chez les enfants n s l tranger 46 Une tude de contacts limit s r v le une meilleure valeur pr dictive qu avec le TST chez les enfants 47 et un risque 8 fois sup rieur de progression vers la tuberculose sur une p riode de deux ans parmi les sujets convertis au QFT par rapport aux non convertis 48 La discordance n gatif au QFT positif au TST est lev e chez les enfants vaccin s par le BCG 46
58. urnis avec le produit et cette notice En dehors des licences nonc es express ment QIAGEN n offre aucune garantie indiquant que ce kit et ou son ou ses utilisations ne violent pas les droits de tiers Ce kit et ses composants sont sous licence pour une utilisation unique et ne peuvent pas tre r utilis s remis neuf ou revendus sauf mention contraire de QIAGEN QIAGEN rejette notamment toutes les autres licences expresses ou tacites autres que celles nonc es express ment L acheteur et l utilisateur du kit consentent ne pas prendre ni autoriser quiconque prendre de quelconques mesures pouvant entra ner ou faciliter la r alisation d actes interdits par les conditions pr c dentes QIAGEN peut faire appliquer les interdictions de cet Accord de licence limit e par tout tribunal et pourra recouvrir tous ses frais de recherche et de justice y compris les frais d avocats en cas d action en application de cet Accord de licence limit e ou de tous ses droits de propri t intellectuelle li s au kit et ou ses composants Pour consulter les mises jour de la licence voir le site www giagen com 2014 2015 QIAGEN tous droits r serv s www QuantiFERON com Asia Pacific techservice ap qiagen com Europe techserviceQFT eu qiagen com Middle East Africa techserviceQFT eu qiagen com Latin America not including Brazil or Mexico techservicelatam qiagen com QIAGEN www QuantiFERON com
59. utilise les tubes de pr l vement suivants l 2 3 4 QuantiFERON Nil Tubes tubes de valeur zero bouchon gris anneau blanc QuantiFERON TB1 Tubes bouchon vert anneau blanc QuantiFERON TB2 Tubes bouchon jaune anneau blanc QuantiFERON Mitogen Tube tube mitog ne bouchon violet anneau blanc Suivre les instructions ci dessous pour les tubes d h parine de lithium Les antig nes ont t s ch s sur la paroi interne des tubes de pr l vement sanguin il est donc essentiel que le contenu des tubes soit soigneusement m lang avec le sang Les tubes QFT Plus doivent tre transf r s dans un incubateur 37 C d s que possible et dans les 16 heures suivant le pr l vement Pour des r sultats optimaux respecter les proc dures suivantes 1 tiqueter correctement les tubes Veiller ce que chaque tube Nil TB1 TB2 et Mitogen soit identifiable par son tiquette ou par d autres moyens une fois que le bouchon est retir Pour chaque patient pr lever 1 ml de sang par ponction veineuse directement dans chaque tube de pr l vement sanguin QFT Plus Cette proc dure doit tre effectu e par un phl botomiste exp riment Remarque importante les tubes doivent tre une temp rature de 17 C 25 C au moment du remplissage Les tubes de pr l vement sanguin QFT Plus peuvent tre utilis s une altitude maximale de 810 m tres au dessus du niveau de la mer Comme le pr l vement sa
60. utres mycobact ries p ex M kansasii peuvent aussi entra ner des r sultats positifs D autres valuations m dicales et diagnostiques sont n cessaires pour confirmer ou exclure la tuberculose Le test QFT Plus pr sente deux tubes d antig ne TB distincts Le TB Antigen Tube 1 TB1 et le TB Antigen Tube 2 TB2 Les deux tubes contiennent des antig nes peptidiques issus des antig nes associ s au complexe MTB ESAT 6 et CFP 10 Le tube TB1 contient des peptides issus d ESAT 6 et de CFP 10 con us pour provoquer des r ponses CMI de la part des lymphocytes T auxiliaires CD4 Le tube TB2 pour sa part contient un ensemble suppl mentaire de peptides cibl s pour l induction de r ponses CMI de la part des lymphocytes T cytotoxiques CD8 Dans le d roulement naturel de l infection par MTB les cellules T CD4 jouent un r le essentiel dans le contr le immunologique gr ce la s cr tion de la cytokine IFN y D apr s des donn es probantes r centes les cellules T CD8 participent la d fense de l h te face MTB en produisant I IFN y et d autres facteurs solubles lesquels activent les macrophages pour stopper la croissance de MTB d truisent les cellules infect es ou lysent directement le MTB intracellulaire 33 35 Des cellules CD8 sp cifiques MTB ont t d tect es chez des sujets avec la LTBI et avec la TB active chez lesquels on peut fr quemment trouver les cellules CD8 produisant l IFN y 36 38 De plus le

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