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Calcitonin II - KC SOLID spol. s ro

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1. 42 ANALISI RADIOIMMUNOLOGICA DI CALCITONINA 1 USO PREVISTO PER USO DIAGNOSTICO N VITRO Questo kit contiene istruzioni e materiali per la determinazione quantitativa della calcitonina nel siero umano mediante analisi radioimmunologica RIA 2 SOMMARIO E SPIEGAZIONI La calcitonina un ormone di natura peptidica di peso molecolare 3 418 e contiene 32 aminoacidi 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 12 13 14 15 16 17 H Cys Gly Asn Leu Ser Thr Cys Met Leu Gly Thr Tyr Thr Gln Asp Phe Asn 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Lys Phe His Thr Phe Pro Gln Thr Ala lle Gly Val Gly Ala Pro NH Nell uomo l ormone ipocalcemizzante secreto dalle cellule parafollicolari tiroidee di origine neuroectoderma probabilmente in risposta ad ipercalcemia 4 Le attivit ipocalcemizzanti della calcitonina sono mediate dagli effetti su ossa e rene DiaSorin ha sviluppato e accuratamente testato una analisi radioimmunologica RIA calcitonina sensibile in grado di rilevare le concentrazioni di calcitonina CT fino a un minimo di 15 pg mL L impiego principale dell analisi RIA per calcitonina la rilevazione sierologica di crescite maligne Il cancro della tiroide midollare Medullary thyroid cancer MTC che comprende il 4 8 dei tumori tiroidei secerne calcitonina in eccesso Livelli molto elevati di calcitonina in circolo rilevati mediante analisi RIA sono utili per stabilire questo tipo di tumore 57 Alcuni ti
2. Kalibrator Kontrollserum Radioaktiv Skadligt Distribu Par DiaSorin S A 11 rue Georges Besse 92160 Antony France ET ce DiaSorin Inc 1951 Northwestern Avenue For Customer Service in the P O Box 285 U S and Canada Call Toll Free Stillwater MN 55082 0285 U S A 800 328 1482 In the United Kingdom Call 44 118 9364200 FAX 44 118 9792061 Phone 651 439 9710 FAX 651 779 7847 10399 PRINTED IN U S A
3. Peptid 96 Kreuzreaktivit t Parathormon 0 01 Insulin 0 01 Thyreotropin 0 01 Corticotropin 0 01 Prolaktin 0 01 Lachscalcitonin weist keine Kreuzreaktivit t mit den Antisera auf Rattencalcitonin weisen keine Kreuzreaktivit t auf so dass dieser Test f r Studien an Ratten verwendet werden kann 15 5 St rungen Entsprechend der Richtlinie NCCLS EP7 A wurden Studien durchgef hrt um die Auswirkungen von allgemeinen endogenen St rsubstanzen zu untersuchen Die gewonnen Werte waren auf die Zugabe von Triglycerid und H moglobin zur ckzuf hren Die Zugabe von Cholesterin und Bilirubin haben die Ergebnisse nicht beeinflusst LITERATURANGABEN FINDEN SIE AUF DER LETZTEN SEITE 31 TESTSCHEMA 1 Lyophilisierte Reagenzien rekonstituieren und gefrorene Proben vollst ndig auftauen lassen Die Reagenzien d rfen nicht auf mehr als 25 C erw rmt werden Die Reagenzien vorsichtig mischen und vor dem Gebrauch auf Crash Eis lagern 2 R hrchen in doppelter Anordnung aufstellen Den R hrchenst nder auf Crash Eis lagern 3 Reagenzien wie folgt dispensieren R hrchen Totalaktivit t NSB Kal Kontrollen und Reagenzien 0 5 unbekannte Proben Nullkalibrator 100 ul 100 ul Kalibratoren 1 6 100 ul Extrahierte Kontrollen 100 ul Extrahierte 5 100 ul unbekannte Proben 200 pl 200 pl Antiserum 4 Die R hrchen mit Parafilm abdecken und vorsichtig sch tteln 5 16bis 24 Stu
4. analytique La comparaison de la r activit crois e de l anticorps anticalcitonine a t effectu e avec les peptides suivants Peptide 96 r action crois e Hormone parathyroidienne 0 01 Insuline 0 01 Hormone de stimulation de la thyroide 0 01 Hormone adr nocorticotrope 0 01 Prolactine 0 01 Il n y a pas de r action crois e de la calcitonine de saumon vis vis des antis rums Il yaune r action crois e de la calcitonine de rat et le dosage peut tre utilis pour des tudes chez le rat 15 5 Interf rence Des tudes d interf rence ont t effectu es en utilisant la directive NCCLS EP7 A afin d valuer les effets des substances interf rantes endog nes courantes Les valeurs sont obtenues avec les interf rences observ es suite l addition de Triglyc ride et d h moglobine L addition de cholest rol et bilirubine est sans effet VOIR LA DERNIERE PAGE POUR LES R F RENCES 20 PROC DURE DE DOSAGE 1 Reconstituer les r actifs lyophilis s et permettre aux chantillons congel s de d congeler compl tement Ne pas laisser les r actifs atteindre une temp rature sup rieure 25 C M langer d licatement puis mettre sur de la glace pil e avant utilisation 2 Identifier les tubes en double Mettre le portoir de tubes sur de la glace pil e 3 Ajouter les r actifs dans les tubes comme suit Num rations NSB talon Contr les et Tubes R actifs totales 0
5. CPM de NSB 12 4 Con un papel milimetrado semilogar tmico de 2 ciclos o log logit trace el B Bo porcentual de los calibradores de calcitonina eje de ordenadas frente a la concentraci n eje de abscisas 12 5 Una los puntos con una l nea de ajuste ptimo 12 6 Interpole los niveles de calcitonina en las muestras desconocidas del trazado 12 7 Si la lectura de una muestra desconocida es superior a la del calibrador m s alto debe diluirse con calibrador 0 y volverse a someter al ensayo 12 8 Si alguna muestra desconocida est diluida corrijala hasta obtener el factor de diluci n adecuado 12 9 Calcule la uni n m xima dividiendo las CPM del calibrador 0 por el promedio de cuentas totales obtenido con los tubos de cuentas totales 38 TABLA Il Ejemplo de datos de un ensayo RIA para calcitonina Il de DiaSorin CPM CPM CPM Conc Tubo duplicadas medias corregidas uni n B T B Bo pg mL Total 17 943 18 036 18 128 NSB 878 851 4 7 824 Calibrador 0 8 055 8 052 7 201 39 9 100 8 049 Calibradores pg mL A 35 7 344 7 278 6 427 89 3 7 211 B 70 6 969 6 809 5 958 82 8 6 649 C 140 5 390 5 433 4 582 63 7 5 476 D 280 3 628 3 676 2 826 39 3 3 725 E 560 2 301 2 293 1 442 20 2 286 F 1 120 1 519 1 532 682 9 5 1 546 Muestras desconocidas 1 6 087 6 004 5 162 71 7 115 5 940 2 4 796 4 904 4 053 56 3 163 5 012 La TABLA II Y LA FIGURA 1 MUESTRAN EJEMPLOS DE DATOS Y DE UNA CURVA DE CALIBRACION 1 esta
6. r mnet Etiketterna p kartongen och p flaskan med sp r mnet anger den verkliga radioaktivitetsm ngden vid kalibreringsdatum medan bipacksedeln anger den teoretiska radioaktiviteten f r satsen 6 TECKEN SOM KAN TYDA P EN KVALITETSF RS MRING HOS REAGENSEN I SATSEN 6 1 F rekomst av onormalt partikelformigt material i n got av reagensen 6 2 En f r ndring av kalibreringskurvans l ge eller lutning j mf rt med vad som normalt erh lles 6 3 En s nkning av maximal bindning 6 4 En h g ospecifik bindning 7 PROVTAGNING OCH PROVHANTERING Det beh vs dubbelprov etthundra 100 mikroliter serum f r assayen Tag venprov i 5 eller 10 mL glasr r av vacutainertyp Centrifugera proverna i 15 minuter vid 760 x g s att hemolysfritt serum erh lles Inga tillsatser eller konserveringsmedel beh vs f r att h lla proverna intakta Alla plastartiklar glasvaror och annan materiel som kommer i kontakt med proverna m ste vara fullkomligt fria fr n kontaminerande material Fasteprov rekommenderas men r ej ett krav Kalcitonin r labilt vid rumstemperatur Om serumet inte testas omedelbart skall det f rvaras vid 15 C eller kallare Proverna f r ej tinas och frysas flera g nger 8 EJTILLHANDAH LLEN MEN N DV NDIG UTRUSTNING OCH MATERIEL 8 1 Eng ngs borosilikatr r 12 x 75 mm Plastr r far ej anv ndas 8 2 Temperaturreglerad centrifug som passar f r 12 x 75 mm r r 20 25 C 8 3 Gammar knare som kan r kna jod 1
7. 16 24 horas a 2 8 C Se agrega un segundo complejo de anticuerpo pre precipitado para separar el trazador unido del libre A continuaci n el ensayo puede centrifugarse y decantarse tras 15 20 minutos de incubaci n a 20 25 C REACTIVOS SUMINISTRADOS CON EL EQUIPO Calibrador 0 de calcitonina 1 vial 10 mL 2 viales 10 mL Calibrador de calcitonina 2 viales 1 mL 4 viales 1 mL Antisuero de calcitonina 1 vial 14 mL 2 viales 14 mL Calcitonina 91 1 vial 7 mL 2 viales 7 mL Complejo de precipitaci n de 1 vial 35 mL 2 viales 35 mL calcitonina 2 viales 1 mL 4 viales 1 mL Controles de calcitonina N mero de pruebas ALMACENAMIENTO Tras su recepci n y antes de su reconstituci n deben almacenarse todos los reactivos a 2 8 C Tras la reconstituci n almacene todos los reactivos a 15 C o menos hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta Los reactivos no deben utilizarse una vez caducados La fecha de caducidad del equipo se indica en la etiqueta externa y se corresponde con la fecha de caducidad del trazador 33 Cuando reconstituya el contenido de los viales mezcle suavemente para evitar la formaci n de espuma No deben mezclarse reactivos de diferentes lotes 4 1 Calibrador 0 de calcitonina reactivo liofilizado Tamp n borato ASB con azida s dica 0 25 afiadida Reconstituya el vial con 10 mL de agua purificada mezcle y deje reposar durante 15 20 minutos hasta que el contenido se disuelva por completo mezcle a fo
8. 22 Bei der Rekonstitution den Inhalt der Fl schchen vorsichtig mischen um Schaumbildung zu vermeiden Reagenzien aus verschiedenen Chargen d rfen nicht vermischt werden 4 1 Calcitonin Nullkalibrator Lyophilisiertes Reagenz BSA Boratpuffer mit Natriumazid 0 25 96 Jedes Fl schchen mit 10 ml destilliertem Wasser rekonstituieren mischen und 15 20 Minuten bis zur vollst ndigen L sung des Inhalts stehen lassen vor dem Gebrauch gr ndlich mischen 4 2 Calcitonin Il Kalibrator Lyophilisiertes Reagenz Humanes synthetisches Calcitonin wird mit einer nominalen Konzentration von 1000 pg ml in einem BSA Boratpuffer mit Natriumazid 0 1 96 und anderen Stabilisatoren verd nnt Jede Charge hat genaue Konzentrationswerte Das Fl schchen mit 1 0 mm destilliertem Wasser verd nnen mischen und 15 bis 20 Minuten lang auf Crash Eis stehen lassen bis sich der Inhalt vollst ndig gel st hat Vor dem Gebrauch gr ndlich mischen Um die vollst ndige Kalibratorkurve zu erhalten Serienverd nnungen vornehmen indem 500 pl des Kalibrators zu 500 pl des Nullkalibrators zugegeben werden Beispiel Wenn die Kalibratorkonzentration 1000 pg ml betr gt werden Kalibratoren von 500 250 125 62 5 und 31 25 pg ml wie folgt zusammen gesetzt 500 uL von 1000 pg ml Kalibrator zu 500 pL des Nullkalibrators geben und mischen um eine L sung von 500 pg ml zu erhalten 500 uL von 500 pg ml Kalibrator zu 500 uL des Nullkalibrators geben und mischen um eine L s
9. 24 pg ml Dies f hrt zu einem Normalbereich 2 Standardabweichungen von nicht bestimmbaren Werten ND 95 Bei Rauchern k nnen die Calcitonin Spiegel im Serum leicht erh ht sein 29 15 SPEZIELLE LEISTUNGSMERKMALE 15 1 Wiederholgenauigkeit Inter Assay Variation Mittelwert Niedrig 67 3 10 1 14 8 Mittel 278 5 18 9 6 7 Hoch 530 30 7 5 7 Intra Assay Variation Mittelwert SA VK pg ml Niedrig 92 76 13 42 14 47 Mittel 142 55 16 55 11 61 Hoch 528 79 36 7 6 95 15 2 RICHTIGKEIT DIE RICHTIGKEIT DES TESTS WURDE DURCH LINEARITATSTEST UND WIEDERFINDUNGSTEST BESTATIGT Linearit t Parallelit t Ergebnisse der Serienverd nnung von vier unbekannten Serumproben Probennumimer ann 1 2 1 4 1 8 pg ml A s s ans e I Wiederfindung F nf unbekannte Proben wurden 1 1 mit Kalibratoren 0 48 96 193 385 und 770 sowie 1540 pg ml verd nnt Jede Verd nnung wurde anschlieBend getestet und ein Gesamtmittel der Wiederfindung in Prozent f r jede verwendete unbekannte Probe berechnet Gesamtmittel d Probennummer Wiederfindung 20 15 3 Analytische Sensitivit t Wenn die geringste nachweisbare Konzentration als die scheinbare Konzentration bei 3 Standardabweichungen von den Z hlungen bei maximaler Bindung definiert wird betr gt sie 1 5 pg R hrchen 15 pg ml 30 15 4 Analytische Spezifit t Der Vergleich der Kreuzreaktivit t des Calcitonin Antik rpers wurde mit dem folgenden Peptiden durchgef hrt
10. 5 chantillons inconnus Etalon 0 100 ul 100 ul i Etalons 1 6 100 ul Contr les extraits i 100 pi Echantillons inconnus 100 ul extraits 200 yl 200 yl Antis rum 4 Couvrir les tubes avec du parafilm et agiter d licatement l aide du vortex 5 Incuber pendant 16 24 heures entre 2 et 8 C 6 Distribuer 100 pl de traceur dans tous les puits 7 Couvrir et m langer doucement l aide du vortex 8 Incuber pendant 16 24 heures entre 2 et 8 C 9 Distribuer 500 ul de complexe pr cipitant dans les puits l exception des tubes de num ration totale 10 Incuber pendant 15 25 minutes entre 20 et 25 C 11 Centrifuger 760 x g pendant 20 minutes 12 D canter les surnageants 13 Compter chaque tube dans un compteur gamma pendant 60 secondes ou g 11 plus 18 x 10 rayon en cm tr min 21 1 2 3 4 CALCITONIN RADIOIMMUNOASSAY VERWENDUNGSZWECK NUR ZUR IN VITRO DIAGNOSTIK Dieses Kit enth lt Anleitungen und Material f r die quantitative Bestimmung von humanem Calcitonin in Serum mit dem Radioimmunoassay RIA ZUSAMMENFASSUNG UND ERKL RUNG Calcitonin ist ein Peptidhormon mit einem Molekulargewicht von 3418 Dalton und enth lt 32 Aminos uren 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 12 13 14 15 16 17 H Cys Gly Asn Leu Ser Thr Cys Met Leu Gly Thr Tyr Thr Gln Asp Phe Asn 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Lys Phe His Thr Phe Pro Gl
11. Percent Percent Conc Tube CPM CPM CPM Bound B T B Bo pg mL Total Count 17 943 18 036 18 128 NSB 878 851 4 7 824 Calibrator 0 8 055 8 052 7 201 39 9 100 0 8 049 Calibrators pg mL A 35 0 7 344 7 278 6 427 89 3 7 211 B 70 0 6 969 6 809 5 958 82 8 6 649 C 140 5 390 5 433 4 582 63 7 5 476 D 280 3 628 3 676 2 826 39 3 3 725 E 560 2 301 2 293 1 442 20 0 2 286 F 1 120 1 519 1 532 682 9 5 1 546 Unknown Samples 1 6 087 6 014 5 162 71 7 115 5 940 2 4 796 4 904 4 053 56 3 163 5 012 Typical sample data and a calibrator curve are shown in TABLE Il and FIGURE 1 this information is for reference only and should not be used for the calculation of any value Calcitonin Il Sample Calibrator Curve B Bo FIGURE 1 13 LIMITATIONS OF THE PROCEDURE 13 1 If the initial concentration of any unknown sample is greater than the highest calibrator dilute with calibrator 0 only 13 2 Counting times should be sufficient to prevent statistical error for example accumulation of 2 000 CPM will yield 5 error 10 000 CPM will yield 1 error 13 3 The DiaSorin QC lab uses a smoothed spline curve fit 14 EXPECTED VALUES Normal Range Each laboratory should establish its own normal range Normal values observed in the DiaSorin Laboratory were 47 24 pg mL This would lead to a normal range 2 std dev of nondetectable ND 95 Smoking may cause slightly elevated serum calcitonin levels 15 SPECIFI
12. R hrchen auBer den R hrchen f r die Gesamtz hlung zugeben 9 10 Die R hrchen vorsichtig ohne Schaumbildung sch tteln und 15 bis 25 Minuten bei 20 25 C inkubieren 9 11 Mit 760 x G 20 Minuten lang bei 20 25 C zentrifugieren 9 12 Die berst nde bei allen R hrchen au er bei den Gesamtz hlr hrchen sofort dekantieren und maximal zwei Minuten umdrehen Bevor die R hrchen aufrecht gestellt werden die R hrchen auf Saugpapier abtupfen um alle eventuellen Tropfen von Uberst nden auf den R ndern zu entfernen 9 13 Mit einem Gammaszintillationsz hler den Niederschlag in jedem R hrchen und den R hrchen f r die Gesamtz hlung eine Minute lang ausz hlen Siehe Abschnitt Grenzen des Verfahrens ANMERKUNGEN ZUM VERFAHREN 10 1 Jedes Aliquot des Reagenz in das untere Drittel des Testr hrchens hinzugeben damit sich die Reagenzien vollst ndig vermischen 10 2 Die Testr hrchen auf Crash Eis lagern um falsche Werte zu vermeiden 10 3 Die Einwegr hrchen einiger Hersteller k nnen nichtspezifische Bindungen ergeben Bei diesem Test keine Kunststoffr hrchen verwenden 10 4 Falls Sie es vorziehen den berstand vom Prazipitat abzusaugen dabei das Pr zipitat nicht aufr hren G 1118 x 10 Radius in cm U min 26 10 5 Um die konsistente Leistung eines Radioimmunoassays vollst ndig zu berwachen m ssen m glicherweise weitere Faktoren berpr ft werden DiaSorin empfiehlt die folgenden Parameter regelm B
13. T B Bo pg ml Num ration totale 17 943 18 036 18 128 NSB 878 851 4 7 824 talon 0 8 055 8052 7201 39 9 100 0 8 049 Etalons pg ml A 35 0 7344 7278 6427 89 3 7211 B 70 0 6 969 6809 5958 82 8 6 649 C 140 5 390 5433 4582 63 7 5 476 D 280 3 628 3676 2826 39 3 3 725 E 560 2 301 2293 1442 20 0 2 286 F 1 120 1519 1532 682 9 5 1 546 chantillons d terminer 1 6 087 6014 5162 71 7 115 5 940 2 4 796 4904 4053 56 3 163 5 012 Des donn es d chantillon typiques et une courbe d talonnage sont pr sent es au TABLEAU ll et la FIGURE 1 ces informations sont fournies titre de r f rence seulement et ne doivent pas tre utilis es pour le calcul d une valeur quelconque 17 Courbe d talonnage pour les chantillons de calcitonine Il FIGURE 1 13 LIMITES DU DOSAGE 13 1 Si la concentration initiale d un chantillon d terminer est sup rieure la valeur de l talon le plus haut le diluer avec l talon 0 uniquement 13 2 Les temps de num ration doivent tre suffisants pour emp cher l erreur statistique par exemple l accumulation de 2 000 CPM donnera une erreur de 5 10 000 CPM donneront une erreur de 1 13 3 Le laboratoire CQ DiaSorin utilise un programme d ajustement de courbe cubique smoothed spline curve fit 14 VALEURS ATTENDUES Valeurs normales Chaque laboratoire doit tablir sa propre plage de valeurs de r f rence Le laboratoire DiaSorin a obtenu un intervalle d
14. TABELLE II DiaSorin Calcitonin II RIA Probendaten DoppelteDurchschnittl Korr Prozent Prozent Konz R hrchen CPM CPM CPM Gebunden B T B Bo pg ml Gesamte gez hlte Impulse 17 943 18 036 18 128 NSB 878 851 4 7 824 Kalibrator 0 8 055 8 052 7 201 39 9 100 0 8 049 Kalibratoren pg ml A 35 0 7 344 7 278 6 427 89 3 7 211 B 70 0 6 969 6 809 5 958 82 8 6 649 C 140 5 390 5 433 4 582 63 7 5 476 D 280 3 628 3 676 2 826 39 3 3 725 E 560 2 301 2 293 1 442 20 0 2 286 F 1 120 1 519 1 532 682 9 5 1 546 Unbekannte Proben 1 6 087 6 014 5 162 71 7 115 5 940 2 4 796 4 904 4 053 56 3 163 5 012 dargestellt diese Informationen dienen nur als Referenz und d rfen nicht zur Berechnung von Werten verwendet werden 28 Calcitonin Il Kalibratorkurve einer Probe HD L SR ER E DF l GEHE BE ss I EJ m ABBILDUNG 1 13 GRENZEN DES VERFAHRENS 13 1 Wenn die urspr ngliche Konzentration einer unbekannten Probe gr Ber ist als der gr te Kalibratorwert diese Probe nur mit dem Nullkalibrator verd nnen 13 2 Die Z hlzeiten sollten ausreichend lang sein um statistische Fehler zu vermeiden 2 000 CPM ergeben z B 5 Fehler 10 000 CPM ergeben 1 Fehler 13 3 Das Qualit tskontrolllabor von DiaSorin verwendet eine gegl ttete Spline Kurvenanpassung 14 ERWARTETE WERTE Normalbereich Jedes Labor sollte seinen eigenen Normalbereich ermitteln Die im Labor von DiaSorin eingehaltenen Normalwerte lagen bei 47
15. assay can be used for studies on rats 15 5 Interference Interference studies were performed using NCCLS EP7 A as a guideline to assess the effects of common endogenous interferents Values obtained from demonstrated interference due to the addition of Triglyceride and hemoglobin The addition of cholesterol and Bilirubin did not effect results SEE LAST PAGE FOR REFERENCES SCHEME OF THE ASSAY 1 Reconstitute the lyophilized reagents and allow any frozen specimens to thaw completely Do not allow reagents to reach above 25 C Mix gently then place on crushed ice before using 2 Identify tubes in duplicate Place the rack of tubes on crushed ice 3 Dispense reagents according to the following scheme Total NSB Cal Controls and Tubes Reagents Counts 0 5 unknown samples Calibrator 0 100 pl 100 uL Calibrators 1 6 100 uL 3 Extracted Controls 100 pL Extracted Unknown 100 uL Samples 200 uL 200 uL Antiserum 4 Cover the tubes with Parafilm and vortex gently 5 Incubate for 16 24 hours at 2 8 C 6 Dispense 100 uL of Tracer into all wells 7 Cover and vortex gently 8 Incubate for 16 24 hours at 2 8 C 9 Dispense 500 uL of precipitating complex into all wells except the Total Count tubes 10 Incubate for 15 25 minutes at 20 25 C 11 Centrifuge using 760 x g for 20 minutes 12 Decant the supernatants 13 Count each tube in a gamma counter for 60 seconds or longer g 11
16. been tested by a U S FDA approved method and found non reactive for the presence of HBsAg antibody to HCV and antibody to HIV 1 2 While these methods are highly accurate they do not guarantee that all infected units will be detected This product may also contain other human source material for which there is no approved test Because no known test method can offer complete assurance that hepatitis B virus HBV hepatitis C virus HCV Human Immunodeficiency Virus HIV or other infectious agents are absent all products containing human source material should be handled in accordance with good laboratory practices using appropriate precautions as described in the Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 ed May 1999 or current edition REAGENTS CONTAINING SODIUM AZIDE CAUTION Some reagents in this kit contain sodium azide Sodium azide may react with lead or copper plumbing to form highly explosive metal azides On disposal flush with a large volume of water to prevent azide build up For further information refer to Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts in the Manual Guide Safety Management No CDC 22 issued by the Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA 1976 European Communities Hazardous Substance Risk Phrases Council Directive 1999 45 EC R20 21 22 Harmful by inhalation in contac
17. diluted in BSA borate EDTA buffer with sodium azide 0 496 and red dye added Reconstitute the vial with 7 mL of purified water mix and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix gently before using 4 5 Calcitonin Precipitating Complex lyophilized reagent Normal goat serum pre precipitated with donkey anti goat serum and polyethylene glycol PEG is diluted in BSA borate buffer with sodium azide 0 1 added Reconstitute the vial with 35 mL of purified water Mix thoroughly until the suspension appears homogenous and then allow it to stand for a minimum of thirty minutes at room temperature with occasional mixing 4 6 Calcitonin Controls Level 1 and 2 lyophilized reagent Human serum is spiked if necessary with the appropriate amount of synthetic human calcitonin to obtain a concentration within a specified range Sodium azide 0 1 and other stabilizers are added Reconstitute the vial with 1 0 mL of purified water mix and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly and treat as an unknown sample Ranges are printed on the control vials CAUTION DISCARD ANY EXCESS DO NOT FREEZE 5 WARNINGS AND PRECAUTIONS FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE Not for internal or external use in humans or animals REAGENTS CONTAINING HUMAN SOURCE MATERIAL Treat as potentially infectious Each serum plasma donor unit used in the preparation of this product has
18. infecciosos todos los productos que contengan material de origen humano se deben manejar de acuerdo con las pr cticas de laboratorio correctas utilizando las precauciones adecuadas que se describen en Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 ed mayo 1999 o actual de los centros de control de enfermedades e institutos nacionales de salud y prevenci n REACTIVOS CON CONTENIDO DE AZIDA S DICA PRECAUCI N Algunos reactivos de este equipo contienen azida s dica La azida s dica puede reaccionar con las cafierias de plomo y cobre y formar azidas met licas altamente explosivas Antes de desecharlos enju guelos con abundante agua para evitar la acumulaci n de azidas Para obtener m s informaci n consulte Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts en Manual Guide Safety Management n CDC 22 publicado por Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA 1976 Advertencias establecidas en la Comunidad Europea sobre el riesgo de sustancias peligrosas Directiva del Consejo 1999 45 CE R 20 21 22 Nocivo por inhalaci n por ingesti n y en contacto con la piel R 32 En contacto con cidos libera gases muy t xicos S28 En caso de contacto con la piel l vese inmediatamente con abundante agua REACTIVOS CON CONTENIDO DE YODO 125 Este equipo contiene material radiactivo que no excede de 1 5 uCi 55 5 kBq equipo n 25065 o 3 uCi 111 kBq equipo n 25130 de yodo 125 Para a
19. jda serumkalcitoninniv er 15 SPECIFIKA PRESTANDA 15 1 Precision Medelvariation inom serier Medelv rde L G 67 3 10 1 14 8 MEDEL 278 5 18 9 6 7 HOG 530 30 7 5 7 60 Variation mellan serier Medelv rde D YC V LAG 92 76 13 42 14 47 MEDEL 142 55 16 55 11 61 HOG 528 79 36 7 6 95 15 2 RIKTIGHET RIKTIGHETEN F R ASSAYEN HAR KONTROLLERATS MED ETT LINEARITETSTEST OCH ETT UTBYTESTEST Linearitet parallellitet Seriesp dningsstudie av fyra ok nda prover pg mL Utbyte Fem ok nda prover sp ddes 1 1 med kalibreringsl sningar p 0 48 96 193 385 770 och 1 540 pg mL Varje sp dning testades sedan och det totala medelutbytet i 96 ber knades f r varje ok nt prov Totalt o 1 OS 2 ss J 3 me Lo 4 8 15 3 Analytisk k nslighet Den l gsta detekterbara halten ligger p 1 5 pg r r 15 pg ml n r den definieras som den skenbara halten vid tre standardavvikelser fr n aktiviteten f r maximal bindning 15 4 Analytisk specificitet J mf relse av kalcitoninantikroppens korsreaktivitet utf rdes med f ljande peptider Peptid korsreaktivitet Parathormon lt 0 01 Insulin 0 01 Tyreoideastimulerande hormon 0 01 Adrenokortikotropt hormon 0 01 Prolaktin 0 01 Laxkalcitonin korsregarerar ej med antiserumet R ttkalcitonin ger en korsreaktion och assayen kan d rf r anv ndas f r studier p r ttor 15 5 Interferens Interferensstudier utf rdes med NCCL
20. la zone puis la laver l aide d un produit d tergent base d alcali ou d une solution de d contamination radiologique Tout article en verre utilis doit tre enti rement lav l eau avant de laver les autres articles en verre du laboratoire Pour les praticiens ou les tablissements recevant des radio isotopes dans le cadre d une licence sp cifique La r ception l utilisation le transfert et la mise au rebut de produits radioactifs sont sujets aux r glementations et conditions de votre licence sp cifique AVERTISSEMENT Ce produit contient un produit chimique connu dans l Etat de Californie comme tant canc rig ne ATTENTION La radioactivit imprim e sur la notice d utilisation peut tre l g rement diff rente de celle qui est imprim e sur l tiquette de la bo te et sur l tiquette du tube du traceur Les tiquettes de la bo te et du tube du traceur indiquent la dose r elle de radioactivit la date de calibrage alors que la notice d utilisation indique la radioactivit th orique de la trousse 6 INDICATIONS D UNE D T RIORATION POSSIBLE DES R ACTIFS DE LA TROUSSE 6 1 Pr sence de particules anormales dans l un des r actifs 6 2 Ecart de pente ou de position de la courbe d talonnage par rapport la normale obtenue 6 3 Diminution de la liaison maximale 6 4 Haute liaison non sp cifique 7 PR L VEMENT ET PR PARATION DES CHANTILLONS Cent microlitres de s rum en doublet sont n cess
21. mL Complesso precipitante di 1 fiala 35 mL 2 fiale 35 mL calcitonina 2 fiale 1 0 mL 4 fiale 4 0 mL Controlli per calcitonina CONSERVAZIONE Dopo il ricevimento dei reagenti e prima della ricostituzione conservarli a 2 8 C Dopo la ricostituzione conservare tutti i reagenti a 15 o a una temperatura inferiore fino alla data di scadenza indicata sull etichetta reagenti non devono essere utilizzati dopo la data di scadenza La data di scadenza del kit indicata sull etichetta esterna e si riferisce alla data di scadenza del tracciante Durante la ricostituzione del contenuto delle fiale mescolare delicatamente al fine di evitare la formazione di schiuma Non si devono mescolare reagente di lotti diversi 43 4 1 Calibratore 0 di calcitonina reagente liofilizzato Tampone BSA borato con aggiunta di sodio azide 0 25 Ricostituire la fiala con 10 mL di acqua purificata mescolare e lasciare riposare per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare completamente prima dell uso 4 2 Calibratore Calcitonina Il reagente liofilizzato La calcitonina sintetica umana a concentrazione nominale di 1 000 pg mL diluita in un tampone BSA borato contenente sodio azide 0 296 con aggiunta di altri stabilizzanti valori esatti della concentrazione vengono indicati per ogni lotto Ricostituire la fiala con 1 0 mL di acqua purificata mescolare e lasciare riposare per 15 20 minuti su ghiaccio tritato fino a
22. mit 7 mi destilliertem Wasser rekonstituieren mischen und bis zur vollst ndigen L sung des Inhalts 15 bis 20 Minuten stehen lassen Vor Gebrauch vorsichtig sch tteln 4 5 Calcitonin Pr zipitierender Komplex Lyophilisiertes Reagenz Normales Ziegenserum vor pr zipitiert mit Esel Anti Ziegenserum und Polyethylenglykol PEG in einem BSA Boratpuffer mit hinzugef gtem Natriumazid 0 1 verd nnen Das Fl schchen mit 35 ml destilliertem Wasser rekonstituieren Gr ndlich mischen bis die Suspension homogen erscheint dann mindestens 30 Minuten bei Zimmertemperatur stehen lassen und hin und wieder sch tteln 23 4 6 Calcitonin Kontrollen Ebene 1 und 2 Lyophilisiertes Reagenz Bei Bedarf Humanserum mit der entsprechenden Menge an humanem Calcitonin versetzen um eine Konzentration innerhalb des Sollbereichs zu erzielen Natriumazid 0 1 96 und andere Stabilisatoren hinzuf gen Das Fl schchen mit 1 ml destilliertem Wasser rekonstituieren mischen und 15 bis 20 Minuten lang bis zur vollst ndigen L sung des Inhalts stehen lassen Gr ndlich mischen und als unbekannte Probe behandeln Die Bereiche sind auf den Kontrollfl schchen aufgedruckt ACHTUNG UBERSCHUSSIGES MATERIAL ENTSORGEN NICHT EINFRIEREN 5 WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN NUR ZUR N VITRO DIAGNOSTIK Nicht f r internen oder externen Gebrauch bei Menschen oder Tieren REAGENZIEN ENTHALTEN MATERIAL HUMANEN URSPRUNGS Dieses Produkt ist als potenziell infekti
23. som anv nds p DiaSorins kvalitetskontrollaboratorium r B Bo avsatt mot logaritmen f r koncentrationen 12 1 Ber kna medel CPM f r varje kalibreringsl sning kontroll och ok nt prov 12 2 Subtrahera medel CPM f r NSB r ren fr n alla v rden 12 3 Dividera det korrigerade CPM v rdet f r varje kalibreringsl sning kontroll och ok nt prov med det korrigerade CPM v rdet f r O l sningen CPM f r kalibreringsl sning eller ok nt prov CPM f r NSB B Bo qUvr x 100 CPM f r 0 kalibreringsl sningen CPM f r NSB 12 4 Anv nd ett lin log papper ver tv tiopotenser eller log log papper och plotta procent B Bo f r kalcitoninkalibreringsl sningarna lodr t axel mot koncentrationen v gr t axel 12 5 Rita en optimalt anpassad linje genom punkterna 12 6 L s av kalcitoninhaltenra i de ok nda proverna fr n kurvan 12 7 Om ett ok nt prov ger ett h gre v rde n den h gsta kalibreringsl sningen skall provet sp das p l mpligt s tt med kalibreringsl sning 0 och d refter testas p nytt 12 8 Om ett ok nt prov har sp tts korrigerar man f r sp dningsfaktorn 12 9 Ber kna maximal bindning genom att dividera CPM f r 0 l sningen med medelv rdet f r totalaktivitetsr ren 58 TABELL Il Exempeldata f r DiaSorin Calcitonin Il RIA CPMi Medel Korrigerad bundet Procent Konc R r dubbelprov CPM CPM B T B Bo pg mL Total aktivitet 17943 18036 18 128 NSB 878 851 4 7 824
24. superficiali 13 Contare ogni provetta in un contatore a raggi gamma per 60 secondi o pi g 1118 x 105 raggio in cm rom 52 1 2 3 4 RADIOIMMUNOASSAY F R KALCITONIN AVSEDD ANVANDNING F R DIAGNOSTISKT BRUK IN VITRO Satsen inneh ller anvisningar och materiel f r kvantitativ best mning av humant kalcitonin i serum med radioimmunoassay RIA SAMMANFATTNING OCH F RKLARING Kalcitonin r ett peptidhormon med en molekylvikt p 3 418 uppbyggt av 32 aminosyror 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 H Cys Gly Asn Leu Ser Thr Cys Met Leu Gly Thr Tyr Thr Gin Asp Phe Asn 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Lys Phe His Thr Phe Pro Gln Thr Ala lle Gly Val Gly Ala Pro NH Det r ett blodkalciums nkande hormon och uts ndras hos m nniskor troligen som svar p hyperkalcemi av sk ldk rtelns parafollikul ra celler som r av neuroektodermalt ursprung De hypokalcemiska effekterna medieras genom effekter p benv v och njure DiaSorin har tagit fram och noggrant testat en k nslig radioimmunassay RIA som kan p visa s l ga kalcitoninhalter som 15 pg mL Det prim ra anv ndningsomr det f r kalcitonin RIA r f r att p serologisk v g p visa maligna tum rer Vid medull r sk ldk rtelcancer MTC som utg r 4 8 av alla sk ldk rteltum rer uts ndras det f rh jda m ngder av kalcitonin F r bed mning av denna tum rtyp r ett p visande me
25. thyroidiennes s cr te un exc s de calcitonine Des taux tr s lev s de calcitonine dans le sang d tect s par le dosage HIA permettent d valuer ce type de tumeur 571121 Certains cancers m dullaires thyroidiens sont h r ditaires et il est important de tester tous les membres d une famille pour d pister un exc s de calcitonine quand un cas est d couvert Le dosage RIA de la calcitonine est aussi utilis pour l investigation de la production ectopique de calcitonine chez les canc reux en particulier les cancers du sein et des poumons 9 3 824 Des investigations tr s actives ont lieu afin de d couvrir l utilit des mesures de calcitonine dans l valuation des tumeurs malignes non thyroidiennes 6 PRINCIPES DU DOSAGE Le dosage DiaSorin Calcitonin Il RIA est une proc dure l tat de d s quilibre qui utilise l ajout retard d un traceur pour augmenter la sensibilit L anticorps est produit chez une ch vre par rapport la calcitonine humaine synth tique pure Dans ce dosage RIA l chantillon et le premier anticorps sont combin s et incub s pendant 16 24 heures entre 2 et 8 C Le traceur est alors ajout suivi par une seconde incubation pendant 16 24 heures entre 2 et 8 C Un second complexe d anticorps pr pr cipit est ajout pour s parer le traceur li du traceur non li Le dosage peut alors tre centrifug et d cant apr s 15 20 minutes d incubation entre 20 et 25 C R ACTIFS FOURNI
26. 0 50 e 20 della linea del calibratore 11 CONTROLLO DI QUALITA Ogni laboratorio dovrebbe includere almeno due sieri di controllo in ogni analisi per garantire la validit dei risultati di ogni analisi Determinare quindi la deviazione media e standard per ogni controllo usando un minimo di dieci analisi Si pu quindi ottenere un range accettabile di valori per questi controlli utilizzando 2 deviazioni standard dei valori determinati in precedenza Il Laboratorio di Controllo della Qualit DiaSorin ha stabilito un range per i sieri di controllo qualit inclusi nel kit 12 CALCOLO DEI RISULTATI Esistono molti metodi per calcolare i risultati di RIA ognuno tende ad ottenere una curva di calibrazione mediante tracciamento dell estensione del legame rispetto alle concentrazioni indicate dei calibratori Il grafico pu essere su scala lineare o logaritmica Ciascun metodo d essenzialmente gli stessi valori per i controlli e i campioni anche se certe analisi possono essere pi adatte per un particolare metodo rispetto ad un altro Il metodo di calcolo del Laboratorio di controllo qualit di DiaSorin di B Bo rispetto alla concentrazione di log 12 1 Calcolare il CPM medio per ogni calibratore controllo e campione non noto 12 2 Sottrarre il CPM medio delle provette NSB da tutti i conteggi 12 3 Dividere il CPM corretto di ogni calibratore controllo o campione non noto per il CPM corretto del calibratore 0 CPM del calibratore o
27. 18 x 10 radius in cm rpm 10 1 2 3 4 DOSAGE RADIO IMMUNOLOGIQUE DE LA CALCITONINE INDICATION POUR USAGE DIAGNOSTIQUE IN VITRO Cette trousse contient les instructions et les r actifs permettant d effectuer la d termination quantitative par dosage radio immunologique RIA de la calcitonine humaine dans le s rum R SUM ET COMMENTAIRE La calcitonine est une hormone peptidique avec un poids mol culaire de 3 418 et qui contient trente deux acides amin s 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 H Cys Gly Asn Leu Ser Thr Cys Met Leu Gly Thr Tyr Thr Gln Asp Phe Asn 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Lys Phe His Thr Phe Pro Gln Thr Ala lle Gly Val Gly Ala Pro NH Chez l homme cette hormone hypocalc mique est s cr t e par les cellules parafolliculaires de la thyro de d origine neuroectodermique probablement en r ponse l hypercalc mie Les actions hypocalc miques de la calcitonine se font par l interm diaire des effets sur les os et les reins DiaSorin a d velopp un dosage radio immunologique RIA sensible de la calcitonine et effectu les tests complets avant de valider ce dosage qui permet de d tecter des con centrations de calcitonine CT aussi faibles que 15 pg ml La premi re utilisation de ce dosage RIA de la calcitonine est la d tection s rologique des grosseurs malignes Le cancer m dullaire thyroidien MTC qui compte 4 896 des tumeurs
28. 234 para calcitonina de la Organizaci n Mundial de la Salud OMS El calibrador ha demostrado tener conmutabilidad con muestras de pacientes cuando se utiliza con los reactivos y el procedimiento recomendados para esta prueba de diagn stico in vitro DESECHE EL EXCESO NO LO CONGELE 4 3 Antisuero de calcitonina reactivo liofilizado Suero de cabra anticalcitonina diluido en tamp n borato ASB con azida s dica 0 196 y tintura azul afiadidas Reconstituya el vial con 14 mL de agua purificada mezcle y deje reposar durante 15 20 minutos hasta que el contenido se disuelva por completo mezcle a fondo antes de utilizar 4 4 Calcitonina 51 reactivo liofilizado Calcitonina humana sint tica marcada con yodo 125 y diluida en tamp n borato ASB con EDTA y con azida s dica 0 4 y tintura roja a adidas Reconstituya el vial con 7 mL de agua purificada mezcle y deje reposar durante 15 20 minutos hasta que el contenido se disuelva por completo mezcle a fondo antes de utilizar 4 5 Complejo de precipitaci n de calcitonina reactivo liofilizado Suero normal de cabra pre precipitado con suero de burro anticabra y polietilenglicol PEG diluido en tamp n borato ASB con azida s dica 0 1 afiadida Reconstituya el vial con 35 mL de agua purificada Mezcle a fondo hasta homogeneizar la suspensi n y deje reposar durante un m nimo de treinta minutos a temperatura ambiente mezclando cada cierto tiempo 4 6 Controles de calcitonina niveles 1
29. 25 8 4 Vortex blandare 8 5 Pipetteringshj lpmedel a Mikropipetter kalibrerade f r 100 uL och 200 uL b Repeterande dispensorer kalibrerade f r 200 uL och 500 uL 8 6 Renat vatten 9 TESTPROCEDUR 9 1 Tina patientprover och st ll dem p krossad is 9 2 Rekonstituera de frystorkade reagensen och l t frysta reagens tina fullst ndigt Se till att reagensen ej blir varmare n 20 25 C Blanda dem f rsiktigt och st ll dem p is f re anv ndning 9 3 St ll i ordning m rkta 12 x 75 mm borosilikatglasr r f r dubbelprov enligt Lathund f r testet p baksidan av omslaget 9 4 Stall provr rsst llet med r ren p krossad is gz 1118x 10 radie i cm rpm 56 10 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 9 13 Tills tt reagens enligt f ljande a R r f r total aktivitet St ll undan dessa fram till steg 7 b Ospecifik bindning NSB 100 uL kalibreringsl sning O c kalibreringsl sning 0 100 uL kalibreringsl sning O 200 uL kalcitoninantiserum bl tt d Kalcitoninkalibreringsl sningar 100 uL kalcitoninkalibreringsl sning 200 uL kalcitoninantiserum bl tt e Kvalitetskontroll och patientprover 100 uL serum 200 uL kalcitoninantiserum bl tt Vortexa r ren f rsiktigt utan att det bildas skum och inkubera dem 16 24 timmar vid 2 8 C Tills tt 100 pL 5l kalcitonin r tt till alla r r Vortexa r ren f rsiktigt utan att det bildas skum och inkubera dem 16 24 timmar
30. 7 mL 2 flaskor 7 mL Kalcitoninutf llningskomplex 1 flaska 35 mL 2 flaskor 35 mL Kalcitoninkontroller 2 flaskor 1 0 mL 4 flaskor 1 0 mL Antal test F RVARING F re rekonstituering skall alla reagens f rvaras vid 2 8 C Efter rekonstituering f rvaras alla reagens vid h gst 15 C till det utg ngsdatum som anges p etiketten Reagensen f r ej anv ndas efter utg ngsdatum Utg ngsdatum f r satsen anges p etiketten p ytterf rpackningen och motsvarar utg ngsdatum f r sp r mnet N r man rekonstituerar inneh llet i flaskorna m ste man blanda f rsiktigt f r att undvika skumbildning Reagens fr n skilda batcher f r ej blandas 53 4 1 Kalcitoninkalibreringsl sning 0 frystorkat reagens BSA boratbuffert med tillsats av 0 25 natriumazid Rekonstituera flaskans inneh ll med 10 mL renat vatten blanda om och l t st 15 20 minuter tills inneh llet r fullst ndigt uppl st blanda noga f re anv ndning 4 2 Kalcitonin Il kalibreringsl sning frystorkat reagens Humant syntetiskt kalcitonin med en nominell halt p 1 000 pg mL uppl st i BSA boratbuffert med tillsats av natriumazid 0 2 och andra stabiliserande medel De exakta koncentrationsv rdena anges f r varje batch Rekonstituera flaskans inneh ll med 1 0 mL renat vatten blanda om och l t st 15 20 minuter p krossad is tills inneh llet r fullst ndigt uppl st Blanda noga f re anv ndning F r att f en fullst ndig kalibrer
31. 796 4 904 4 053 56 3 163 5 012 I dati di campioni tipici e una curva di calibrazione sono riportati nella TABELLA Il e nella FIGURA 1 queste informazioni servono solo a scopo di riferimento e non devono essere usate per il calcolo dei valori 49 Esempio di curva di calibrazione Calcitonina Il FIGURA 1 13 LIMITI DELLA PROCEDURA 13 1 Se la concentrazione iniziale di un campione non noto maggiore del calibratore superiore diluire solo con il Calibratore 0 13 2 Il conteggio delle volte dovrebbe essere sufficiente per prevenire errori statistici ad esempio l accumulo di 2 000 CPM produrr un errore del 596 10 000 CPM produrr un errore dell 1 13 3 Il Laboratorio di controllo di qualit DiaSorin utilizza una retta curvilinea uniforme 14 VALORI PREVISTI Range normale Ogni laboratorio deve stabilire un range di riferimento proprio valori normali osservati nei laboratori DiaSorin sono risultati pari a 47 24 pg mL Tali valori determinerebbero un range normale due deviazioni standard di non rilevabile ND pari a 95 Il fumo potrebbe dare livelli di calcitonina nel siero leggermente elevati 15 CARATTERISTICHE SPECIFICHE DELLE PERFORMANCE 15 1 Precisione Variazione media intra analisi Valore medio BASSO 67 3 10 1 14 8 MEDIO 278 5 18 9 6 7 ALTO 530 30 7 5 7 50 Variazione intra analisi Valore medio 3 BASSO 92 76 13 42 14 47 MEDIO 142 55 16 55 11 61 ALTO 528 79 36 7 6 95 15 2 ACCURAT
32. APHIE LITERATUR BIBLIOGRAF A BIBLIOGRAFI 1 Abe Kaoru Adachi S Miyakawa M Tanaka K Yamaguchi N Tanaka T Kameya and Y Shimosato Production of Calcitonin Adrenocorticotropic Hormone and B Melanocyte stimulating Hormone in Tumors Derived from Amine Precursor Uptake and Decarboxylation Cells Cancer Research 37 4190 1977 2 Baylin S B W R Weisberger J C Eggleston G Mendelsohn M A Beaven M D Abeloff and D S Ettinger Variable Content of Histaminase L Dopa Decarboxylase and Calcitonin in Small Cell Carcinoma of the Lung The New England Journal of Medicine 299 3 105 1978 3 Bertagna X Y W E Nicholson O S Pettengill D G Sorenson C D Mount and D M Orth Ectopic Production of High Molecular Weight Calcitonin and Corticotropin by Human Small Cell Carcinoma Cells in Tissue Culture Evidence for Separate Precursors The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 47 6 1390 1978 4 Coombes R D G C Easty S l Detre C J Hillyard U Stevens S l Girgis L S Galante L Heywood Macintyre and A M Neville Secretion of Immunoreactive Calcitonin by Human Breast Carcinomas British Medical Journal 4 197 1975 5 Corwin T R Medullary Carcinoma of the Thyroid Surgery Gynecology and Obstetrics 138 453 1974 6 Deftos L B B Roos and J Parthemore Calcium and Skeletal Metabolism Western Journal of Medicine 123 447 1975 7 Goltzman D J T Potts
33. C PERFORMANCE CHARACTERISTICS 15 1 Precision Average Within Assay Variation Mean Value Low 67 3 10 1 14 8 Medium 278 5 18 9 6 7 High 530 30 7 5 7 Between Assay Variation Mean Value D YC V Low 92 76 13 42 14 47 Medium 142 55 16 55 11 61 High 528 79 36 7 6 95 15 2 TRUENESS THE TRUENESS OF THE ASSAY HAS BEEN VERIFIED BY THE LINEARITY TEST AND THE RECOVERY TEST Linearity Parallelism Serial Dilution Study of four Unknown Samples Sample Undiluted palm di bi 624 5 663 7 696 1 277 2 291 8 346 5 289 4 975 6 1216 9 1396 8 1487 6 819 3 1047 9 1144 2 1081 Recovery Five unknown samples have been diluted 1 1 with calibrators 0 48 96 193 385 770 and 1 540 pg mL Each dilution was then assayed and an overall mean recovery was calculated for every unknown sample used Sample Overall Mean Number Recovery 96 Lo 1 10 15 3 Analytical Sensitivity When defined as the apparent concentration at three standard deviations from the counts at maximum binding the minimum detectable amount is 1 5 pg tube 15 pg mL 15 4 Analytical Specificity Comparison of the cross reactivity of calcitonin antibody was made with the following peptides Peptide 96 Cross reactivity Parathyroid Hormone 0 01 Insulin 0 01 Thyroid Stimulating Hormone 0 01 Adrenocorticotropic Hormone 0 01 Prolactin 0 01 Salmon calcitonin does not cross react with the antisera Rat calcitonin does cross react and the
34. Calcitonin Il 125 RIA Kit For the quantitative determination of human calcitonin in serum Instruction Manual Manuel d Instructions Testanleitung Manual de Instrucciones Manuale di Istruzioni Bruksanvisning Catalog No REF KAT NR N de Cat logo Numero di Catalogo Katalognummer 25065 or 25130 DiaSorin Stillwater Minnesota 55082 0285 U S A TABLE OF CONTENTS English pianale aaa Francais Espafiol Italiano Svanska CALCITONIN RADIOIMMUNOASSAY 1 INTENDED USE FOR N VITRO DIAGNOSTIC USE This kit contains instructions and materials for the quantitative determination of human calcitonin in serum by radioimmunoassay RIA 2 SUMMARY AND EXPLANATION Calcitonin is a peptide hormone with a molecular weight of 3 418 and contains thirty two amino acids 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 H Cys Gly Asn Leu Ser Thr Cys Met Leu Gly Thr Tyr Thr Gln Asp Phe Asn 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Lys Phe His Thr Phe Pro Glin Thr Ala lle Gly Val Gly Ala Pro NH In humans this hypocalcemic hormone is secreted by thyroidal parafollicular cells of neuroectodermal origin probably in response to hypercalcemia Calcitonin s hypocalcemic actions are mediated via effects on bone and kidney DiaSorin has developed and thoroughly tested a sensitive calcitonin radio immunoassay RIA that can detect calcitonin CT concentrations as low as 15 pg mL The primary us
35. EZZA L ACCURATEZZA DELL ANALISI STATA VERIFICATA MEDIANTE TEST DI LINEARIT E TEST DI RECUPERO Linearit Parallelismo Studio di diluizione seriale di quattro campioni non noti Numero Non diluito 624 5 663 7 696 1 277 2 291 8 346 5 289 4 975 6 1216 9 1396 8 1487 6 819 3 1047 9 1144 2 1081 Recupero Cinque campioni non noti sono stati diluiti 1 1 con i calibratori 0 48 96 193 385 770 e 1 540 pg mL Ogni diluizione stata quindi analizzata ed stato calcolato il recupero medio complessivo in percentuale per ogni campione non noto utilizzato Numero Recupero medio campione complessivo 15 3 Sensibilit analitica La quantit minima rilevabile se definita come concentrazione apparente a tre deviazioni standard dai conteggi a legame massimo di 1 5 pg provetta 15 pg mL 15 4 Specificit analitica Il confronto della reattivit incrociata dell anticorpo calcitonina stato eseguito con i seguenti peptidi Peptide di reattivit incrociata Ormone paratiroideo 0 01 Insulina 0 01 Ormone tireostimolante 0 01 Ormone adrenocorticotropo 0 01 Prolattina 0 01 La calcitonina di salmone non presenta reazione incrociata con gli antisieri La calcitonina di topo non presenta reazione incrociata e l analisi pu essere utilizzati negli studi sui topi 15 5 Interferenza Studi di interferenza sono stati eseguiti in base alle linea guida NCCLS EP7 A per valutare gli effetti degli agenti interferent
36. Jr E C Ridgeway and F Maloof Calcitonin as a Tumor Marker Use of the Radioimmunoassay for Calcitonin in the Post operative Evaluation of Patients with Medullary Thyroid Carcinoma The New England Journal of Medicine 290 19 1035 1974 8 Gropp C K Havemann and A Scheuer Ectopic Hormones in Lung Cancer Patients at Diagnosis and During Therapy Cancer 46 347 1980 9 Hansen M H H Hansen and N Tryding Small Cell Carcinoma of the Lung Serum Calcitonin and Serum Histaminase Diamine Oxidase at Basal Levels and Stimulated by Pentagastrin Acta Medica Scandinavica 204 257 1978 10 Heath III J and G W Sizemore Plasma Calcitonin in Normal Man Differences Between Men and Women The Journal of Clinical Investigation 50 1135 1977 11 Hennessy J F T K Gray C W Cooper and D A Ontjes Stimulation of Thyro calcitonin Secretion by Pentagastrin and Calcium in Two Patients with Medullary Carcinoma of the Thyroid The Journal of Clinical Endocrinology 7 45 1977 12 Hill Jr C S Medullary Carcinoma of the Thyroid American Federation Proceedings 99 1973 13 Hillyard C J D G Oscier R Foa D Catovsky and J M Goldman Immunoreactive Calcitonin in Leukaemia British Medical Journal 2 1392 1979 14 Parthemore J G and L J Deftos Calcitonin Secretion in Normal Human Subjects Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 47 1 184 1978 15 Rees L H Ecto
37. Kalibreringsl sning 0 8 055 8052 7201 39 9 100 0 8 049 Kalibreringsl sning pg mL A 35 0 7 344 7278 6427 89 3 7 211 B 70 0 6 969 6809 5958 82 8 6 649 C 140 5 390 5433 4582 63 7 5 476 D 280 3 628 3676 2826 39 3 3 725 E 560 2 301 2293 1442 20 0 2 286 F 1 120 1519 1532 682 9 5 1546 Ok nda prover 1 6 087 6014 5162 71 7 115 5 940 2 4 796 4904 4053 56 3 163 5 012 Typiska provdata och en kalibreringskurva visas i TABELL Il och FIGUR 1 Denna information r endast avsedd som ett exempel och skall inte anv ndas f r att ber kna n gra v rden 59 Exempel p kalibreringskurva f r Calcitonin Il LLLI I TS at FIGUR 1 13 METODBEGR NSNINGAR 13 1 Om den ursprungliga halten i ett ok nt prov r h gre n den h gsta kalibreringsl sningen skall man sp da provet med enbart kalibreringsl sning 0 13 2 Aktiviteten i r ren m ste r knas under tillr ckligt l ng tid f r att man ska kunna undvika statistiska fel till exempel ger en r kning av 2 000 CPM ett fel p 5 96 10 000 CPM ger ett fel p 1 96 13 3 DiaSorins kvalitetskontrollaboratorium anv nder en mjuk anpassning till spline funktioner 14 F RV NTADE VARDEN Referensomr de Varje laboratorium b r uppr tta ett eget referensomr de De normalv rden som observerades p DiaSorins laboratorium l g p 47 24 pg mL vilket skulle inneb ra ett referensomr de 2 std avv inom icke detekterbart ND 95 R kning kan ge l tt f rh
38. S DANS LA TROUSSE Etalon 0 calcitonine 1 tube 10 ml 2 tubes 10 ml talon calcitonine 2 tubes 1 0 ml 4 tubes 1 0 ml Antis rum calcitonine 1 tube 14 ml 2 tubes 14 ml 125 calcitonine 1 tube 7 ml 2 tubes 7 ml Complexe pr cipitant calcitonine 1 tube 35 ml 2 tubes 35 ml Contr les calcitonine 2 tubes 1 0 ml 4 tubes 1 0 ml Nombre de dosages CONSERVATION D s r ception et avant reconstitution tous les r actifs doivent tre stock s entre 2 et 8 C Apr s reconstitution stocker tous les r actifs une temp rature inf rieure ou gale 15 C jusqu la date de p remption sur l tiquette Les r actifs ne 11 doivent pas tre utilis s au del de la date de p remption La date de p remption de la trousse se trouve sur l tiquette ext rieure et correspond celle du traceur Pendant la reconstitution du contenu des tubes agiter d licatement pour viter la formation de mousse Les r actifs de lots diff rents ne doivent pas tre m lang s 4 1 talon 0 calcitonine r actif lyophilis Tampon BSA borate contenant de l azide de sodium 0 25 Reconstituer le tube avec 10 ml d eau purifi e m langer et laisser reposer entre 15 et 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu bien m langer avant utilisation 4 2 talon calcitonine ll r actif lyophilis De la calcitonine synth tique humaine une concentration nominale de 1 000 pg ml est dilu e dans un tampon BSA borate contenant de l azi
39. S EP7 A som riktlinje f r att fastst lla effekterna av vanliga endogena interfererande substanser Resultaten visade p en interferens vid tillsats av triglycerider och hemoglobin Tillsats av kolesterol och bilirubin p verkade ej resultaten SE SISTA SIDAN F R REFERENSER 61 LATHUND F R TESTET Rekonstituera de frystorkade reagensen och l t eventuella frysta prover tina helt Se till att reagensen ej blir varmare n 25 C Blanda f rsiktigt och st ll reagensen p is tills de ska anv ndas M rk upp r r f r dubbelprover St ll provr rsst llet med r ren p krossad is Pipettera reagens enligt f ljande schema R r Reagens Totala ktivitet NSB CAL 0 5 Kontroller och ok nda prover Kalibreringsl sning 0 Kalibreringsl sningar 1 6 Extraherade kontroller Extraherade ok nda prover Antiserum 100 uL 100 uL 100 uL 200 uL 100 uL 100 uL 200 uL T ck ver r ren med parafilm och vortexa f rsiktigt Inkubera 16 24 timmar vid 2 8 C Tills tt 100 uL sp r mne till varje r r S tt p parafilm och vortexa f rsiktigt Inkubera 16 24 timmar vid 2 8 C Tills tt 500 uL utf llningskomplex i varje r r utom i totalaktivitetsr ren Inkubera 15 25 minuter vid 20 25 C Centrifugera 20 minuter vid 760 x g H ll av supernatanterna R kna varje r r i en gammar knare i minst 60 sekunder g 1118 x 10 radie i cm rpm 62 REFERENCES BIBLOGR
40. a Num rations totales b Liaison maximale Num rations moyennes par minute CPM des tubes de l talon 0 CPM moyenne des tubes de num ration totale c Liaison non sp cifique CPM moyenne des tubes NSB CPM moyenne des tubes de num ration totale d Pente de la courbe d talonnage Par exemple surveiller les points d inhibition de 80 50 et 20 de la courbe d talonnage 11 CONTR LE QUALIT Chaque laboratoire doit inclure au moins deux s rums de contr le dans chaque dosage pour garantir la validit de leurs r sultats D terminer ensuite la moyenne et l cart type pour chaque contr le sur un minimum de dix dosages Une gamme de valeurs acceptable peut donc tre obtenue pour ces contr les en utilisant l cart type 2 par rapport aux valeurs pr c demment calcul es Le laboratoire de contr le qualit de DiaSorin a d termin un intervalle de valeurs pour les s rums de contr le de qualit de la trousse 12 CALCUL DES R SULTATS Il existe de nombreuses m thodes de calcul des r sultats des dosages radio immunologiques Chacune est bas e sur l obtention d une courbe d talonnage en tracant l ampleur de la liaison par rapport aux concentrations indiqu es pour les talons Ce graphe peut tre l chelle lin aire ou logarithmique Chacune de ces m thodes donne essentiellement les m mes valeurs pour les contr les et les chantillons m me si certains dosages peuvent tre mieux adapt s une m thode par
41. aires pour le dosage Pr lever du sang par ponction veineuse dans un tube en verre vide de 5 ou 10 ml Centrifuger pendant quinze minutes 760 x g pour obtenir du s rum non h molys Aucun additif ou conservateur n est requis pour maintenir l int grit de l chantillon Tous les plastiques articles en verre ou autres produits entrant en contact avec l chantillon ne doivent absolument pas tre contamin s Un chantillon jeun est recommand mais pas obligatoire La calcitonine est labile temp rature ambiante Si le s rum n est pas dos imm diatement il doit tre conserv une temp rature inf rieure ou gale 15 C Ne pas congeler un chantillon qui a t d congel 8 MAT RIEL ET PRODUITS REQUIS MAIS NON FOURNIS 8 1 Tubes en verre borosilicat jetables 12 x 75 mm Ne pas utiliser les tubes en plastique 8 2 Centrifugeuse thermostat 20 25 C pour tubes 12 x 75 mm tubes 8 3 Compteur scintillation gamma pouvant mesurer l iode 125 8 4 Vortex 8 5 Pipettes a Micropipettes gradu es pour distribuer 100 ul et 200 ul b Distributeurs r p tition gradu s pour distribuer 200 pl et 500 pul 8 6 Eau purifi e a gt N g 1118 x 105 rayon en cm tr min 14 9 10 PROC DURE DE DOSAGE 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 9 13 D congeler les chantillons inconnus et mettre sur de la glace pil e Reconstituer les r acti
42. allet anges p flaskorna med kontrollen F RSIKTIGT KASSERA EVENTUELL VERBLIVEN L SNING F R EJ FRYSAS 54 5 _ VARNINGAR OCH F RSIKTIGHETS TG RDER FOR DIAGNOSTISKT BRUK IN VITRO Ej avsett f r vare sig inv rtes eller utv rtes bruk p m nniskor eller djur REAGENS SOM INNEH LLER MATERIAL AV HUMANT URSPRUNG Behandlas som potentiellt smittfarligt Varje donerad enhet serum plasma som anv nts f r beredning av produkten har testats med en metod godk nd av USA s l kemedelsverk FDA och befunnits negativ vad g ller f rekomst av HBsAg antikroppar mot HCV och antikroppar mot HIV 1 2 Aven om dessa metoder r mycket tillf rlitliga utg r de ingen garanti f r att samtliga infekterade enheter uppt cks Produkten kan ven inneh lla annat material av humant ursprung f r vilket det inte finns n got godk nt test Eftersom ingen k nd testmetod kan ge en fullst ndig garanti f r att det inte f rekommer hepatit B virus HBV hepatit C virus HCV humant immunbristvirus HIV eller andra infekti sa agens skall alla produkter som inneh ller material av humant ursprung hanteras i enlighet med god laboratoriepraxis och med l mpliga f rsiktighets tg rder Se handboken Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories fr n U S Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health 4 e upplagan maj 1999 eller aktuell upplaga REAGENS SOM INNEH LLER NATRIUMAZID F RSIKTIGT Vissa reagens
43. ar completamente limpios de contaminaci n Es recomendable tomar la muestra en ayunas pero no es imprescindible La calcitonina es inestable a temperatura ambiente Si el suero no se analiza inmediatamente debe almacenarse a 15 C o menos Los espec menes no deben someterse repetidamente a ciclos de congelaci n y descongelaci n 8 EQUIPO Y MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 8 1 12 tubos desechables de vidrio de borosilicato de 75 mm No deben emplearse tubos de pl stico 8 2 Centrifuga controlada por temperatura con capacidad para 12 tubos de 75 mm 20 25 C 8 3 Contador de centelleo de rayos gamma v lido para yodo 125 8 4 V rtex 8 5 Utensilios de dosificaci n a Micropipetas calibradas para suministrar 100 uL y 200 uL b Dispensadores repetitivos calibrados para suministrar 200 uL y 500 uL 8 6 Agua purificada 9 PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO 9 1 Descongele las muestras desconocidas y col quelas en hielo picado 9 2 Reconstituya los reactivos liofilizados y permita que se descongelen por completo los reactivos congelados que hubiera No permita que los reactivos alcancen temperaturas superiores a los 20 25 C M zclelos suavemente y col quelos en hielo picado antes de utilizarlos g 1118 x 10 radio en cm rpm 36 10 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 9 13 Prepare y etiquete por duplicado 12 tubos desechables de vidrio de borosilicato de 75 mm seg n el programa de
44. be wiped up then washed with an alkali detergent or radiological decontamination solution Any glassware used must be rinsed completely with water before washing with other laboratory glassware For practitioners or institutions receiving radioisotopes under a specific license The receipt use transfer and disposal of radioactive materials are subject to the regulations and conditions of your specific license WARNING This product contains a chemical known to the State of California to cause cancer RON ATTENTION Radioactivity printed in the package insert may be slightly different from the radioactivity printed on the box label and on the tracer vial label The box label and the tracer vial label indicate the actual amount of radioactivity at the calibration date where the package insert indicates the theoretical radioactivity of the kit 6 INDICATIONS OF POSSIBLE DETERORATION OF KIT REAGENTS 6 1 The presence of abnormal particulate matter in any of the reagents 6 2 A shift in the slope or position of the calibrator curve from what is normally obtained 6 3 Adecrease in maximum binding 6 4 Ahigh nonspecific binding 7 COLLECTION AND PREPARATION OF THE SPECIMEN One hundred microliters in duplicate of serum are required for the assay Collect blood by venipuncture in a 5 or 10 mL evacuated glass tube Centrifuge for fifteen minutes using 760 x g to obtain hemolysis free serum No additives or preservatives are required to mai
45. calibrator to 500 uL of calibrator 0 For example if the calibrator concentration is 1 000 pg mL calibrators of 500 250 125 62 5 and 31 25 pg mL will be made as follows Add 500 uL of 1 000 pg mL calibrator to 500 pL of calibrator 0 and mix to give 500 pg mL Add 500 uL of 500 pg mL calibrator to 500 pL of calibrator O and mix to give 250 pg mL Add 500 uL of 250 pg mL calibrator to 500 uL of calibrator 0 and mix to give 125 pg mL Add 500 uL of 125 pg mL calibrator to 500 uL of calibrator O and mix to give 62 5 pg mL Add 500 uL of 62 5 pg mL calibrator to 500 UL of calibrator 0 and mix to give 31 25 pg mL CAUTION Keep tubes on crushed ice while the serial dilutions are being made and prior to use in the assay The DiaSorin calcitonin calibrator has been analyzed against the World Health Organization calcitonin standard 70 234 The calibrator demonstrates commutability with patient samples when used with reagents and operating procedure of this in vitro diagnostic test as recommended DISCARD ANY EXCESS DO NOT FREEZE 4 3 Calcitonin Antiserum lyophilized reagent Goat anti calcitonin serum is diluted in BSA borate buffer with sodium azide 0 1 and blue dye added Reconstitute the vial with 14 mL of purified water mix and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly before using 4 4 1 Calcitonin lyophilized reagent Synthetic human calcitonin is labeled with iodine 125 and
46. campione non noto CPM di NSB B Bo m x 100 CPM del calibratore 0 CPM di NSB 12 4 Utilizzando carta millimetrata per modello log logit o semi logaritmica a due cicli tracciare la percentuale di B Bo per i calibratori di calcitonina asse verticale rispetto alla concentrazione asse orizzontale 12 5 Tracciare una linea di miglior interpolazione fra i punti 12 6 Interpolare i livelli di calcitonina nei campioni non noti dal tracciato 12 7 Se un campione non noto d una lettura maggiore rispetto al calibratore superiore il campione dovr essere diluito correttamente con il calibratore 0 e analizzato nuovamente 12 8 Se un campione non noto stato diluito correggere con il fattore di diluizione idoneo 12 9 Calcolare il legame massimo dividendo il CPM del calibratore 0 per la media dei conteggi totali ottenuta nelle provette dei conteggi totali 48 TABELLA II Dati campione DiaSorin Calcitonina Il RIA CPM Media CPM Percent Percent Conc Provetta duplicato CPM corretto legato B T B Bo pg mL Conteggio totale 17 943 18 036 18 128 NSB 878 851 4 7 824 Calibratore 0 8 055 8 052 7 201 39 9 100 0 8 049 Calibratori pg mL A 35 0 7 344 7 278 6 427 89 3 7 211 B 70 0 6 969 6 809 5 958 82 8 6 649 C 140 5 390 5 433 4 582 63 7 5 476 D 280 3 628 3 676 2 826 39 3 3 725 E 560 2 301 2 293 1 442 20 0 2 286 F 1 120 1 519 1 532 682 9 5 1 546 Campioni non noti 1 6 087 6 014 5 162 71 7 115 5 940 2 4
47. concentrations of the calibration calibrators This graph may be either a linear or logarithmic scale Each of these methods gives essentially the same values for controls and samples although certain assays may fit better into one particular method versus another The calculation method for the DiaSorin Quality Control Laboratory is B Bo versus log concentration 12 1 Calculate the average CPM for each calibrator control and unknown sample 12 2 Subtract the average CPM of the NSB tubes from all counts 12 3 Divide the corrected CPM of each calibrator control or unknown sample by the corrected CPM of the calibrator 0 CPM of Calibrator or Unknown Sample CPM of NSB B Bo x 100 CPM of 0 Calibrator CPM of NSB 12 4 Using 2 cycle semi log or log logit graph paper plot percent B Bo for the calcitonin calibrators vertical axis versus the concentration horizontal axis 12 5 Draw a best fit line through the points 12 6 Interpolate the levels of calcitonin in the unknown samples from the plot 12 7 If any unknown sample reads greater than the highest calibrator it should be diluted appropriately with calibrator 0 and assayed again 12 8 If an unknown sample has been diluted correct for the appropriate dilution factor 12 9 Calculate maximum binding by dividing CPM of calibrator 0 by the average total counts obtained in the total count tubes TABLE II DiaSorin Calcitonin Il RIA Sample Data Duplicate Average Corrected
48. d RIA av mycket h ga halter av cirkulerande kalcitonin ett v rdefullt fynd 571121 Vissa av tum rerna r rftliga och det r viktigt att screena alla i en sl kt f r f rh jda kalcitoninv rden n r ett fall uppt cks Andra anv ndningsomr den f r kalcitonin RIA r utredning av ektopisk kalcitoninproduktion hos cancerpatienter speciellt patienter med br st och lungtum rer 49 13 1824 Mycket aktiva forskningsinsatser g rs f r n rvarande f r att utreda hur anv ndbara kalcitoninm tningar r vid utv rdering av maligniteter utanf r sk ldk rteln 1919 ANALYSPRINCIP DiaSorin Calcitonin Il RIA Kit r baserad p en metod utan j mviktning d r man anv nder en f rdr jd tillsats av sp r mne f r att ka k nsligheten Antikropparna h rr r fr n get och r riktade mot rent syntetiskt humant kalcitonin denna RIA blandas prov och prim rantikropp och inkuberas 16 24 timmar vid 2 8 C D refter tills tts sp r mnet varp man inkuberar en andra g ng 16 24 timmar vid 2 8 C Ett f rutf llt sekund rantikroppskomplex tills tts f r att separera bundet och fritt sp r mne Assayen kan d refter centrifugeras och dekanteras efter 15 20 minuters inkubation vid 20 25 C REAGENS F RPACKNINGEN Kalcitoninkalibreringsl sning 0 1 flaska 10 mL 2 flaskor 10 mL Kalcitoninkalibreringsl sning 2 flaskor 1 0 mL 4 flaskor 1 0 mL Kalcitoninantiserum 1 flaska 14 mL 2 flaskor 14 mL I kalcitonin 1 flaska
49. de de sodium 0 2 et d autres stabilisants Les valeurs exactes de ces concentrations sont fournies avec chaque lot Reconstituer le flacon avec 1 0 ml d eau purifi e m langer et laisser reposer pendant 15 20 minutes sur de la glace pil e jusqu dissolution compl te du contenu bien m langer avant utilisation Afin d obtenir la courbe d talonnage compl te effectuer des dilutions en s rie en ajoutant 500 pl d talon 500 pl d talon 0 Par exemple si la concentration de l talon est de 1 000 pg ml les talons ayant les concentrations de 500 250 125 62 5 et 31 25 pg ml seront obtenus de la facon suivante Ajouter 500 ul d talon 1 000 pg ml 500 pl d talon 0 et m langer pour obtenir 500 pg ml Ajouter 500 pl d talon 500 pg ml 500 yl d talon 0 et m langer pour obtenir 250 pg ml Ajouter 500 pl d talon 250 pg ml 500 ul d talon 0 et m langer pour obtenir 125 pg ml Ajouter 500 ul d talon 125 pg ml 500 ul d talon 0 et m langer pour obtenir 62 5 pg ml Ajouter 500 ul d talon 62 5 pg ml 500 ul d talon 0 et m langer pour obtenir 31 25 pg ml PR CAUTION Maintenir les tubes sur de la glace pil e lors de la pr paration des dilutions en s rie et avant de les utiliser pour le dosage Les talons calcitonine DiaSorin ont t analys s selon le standard de l Organisation mondiale de la sant OMS 70 234 L talon d montre sa commutabilit avec les chantillons des pa
50. dej ndolos en un contador de centelleo de rayos gamma durante el tiempo suficiente para obtener precisi n estad stica consulte el apartado Limitaciones del procedimiento COMENTARIOS SOBRE EL PROCEDIMIENTO 10 1 10 2 10 3 10 4 Afiada cada alicuota de reactivo al tercio inferior del tubo de ensayo para asegurar la mezcla completa de los reactivos Los tubos de ensayo deben colocarse en hielo picado para evitar valores elevados falsos Los tubos desechables de vidrio de borosilicato de algunos fabricantes producen uniones no espec ficas elevadas No utilice tubos de pl stico en este ensayo Si prefiere aspirar el sobrenadante del precipitado tenga cuidado de no alterar el precipitado g 1118 x 105 radio en cm rpm 37 10 5 Para asegurar completamente el resultado s lido del ensayo RIA deben comprobarse varios factores adicionales DiaSorin recomienda comprobar los siguientes par metros para asegurar los resultados uniformes del equipo a Cuentas totales b Uni n m xima Promedio de cuentas por minuto CPM de los tubos de calibrador O Promedio de CPM de los tubos de cuentas totales c Uniones no espec ficas Promedio de CMP de los tubos NSB Promedio de CPM de los tubos de cuentas totales d Pendiente de la curva de calibraci n Por ejemplo controle los puntos de inhibici n de 80 50 y 2096 de la l nea de calibraci n 11 CONTROL DE CALIDAD Cada laboratorio debe incluir al menos dos sueros d
51. di analisi sul retro della copertina Mettere il portaprovette con le provette sul ghiaccio tritato Aggiungere i reagenti nel seguente modo a Provette per il conteggio totale Lasciare da parte fino al punto 7 b Legame aspecifico NSB 100 uL di calibratore O c Calibratore 0 100 uL di calibratore 0 200 pL di antisiero calcitonina blu d Calibratori di calcitonina 100 uL calibratore di calcitonina 200 uL di antisiero calcitonina blu e Controllo di qualit e campioni non noti 100 uL di siero 200 uL di antisiero calcitonina blu Agitare lentamente le provette nel Vortex senza formare schiuma e lasciare in incubazione per 16 24 ore a 2 8 C Aggiungere 100 uL di calcitonina 1 rosso in tutte le provette Agitare lentamente le provette nel Vortex senza formare schiuma e lasciare in incubazione per 16 24 ore a 2 8 C Agitare vigorosamente il complesso precipitante aggiungere 500 pL in tutte le provette eccetto le provette per il conteggio totale Agitare lentamente le provette nel Vortex senza formare schiuma e lasciare in incubazione per 15 25 minuti a 20 25 C Centrifugare a 760 x g per venti minuti a 20 25 C Lasciare immediatamente decantare i liquidi superficiali in tutte le provette eccetto quelle per il conteggio totale capovolgendole per un massimo di due minuti Asciugare le provette con carta assorbente per eliminare eventuali gocce di liquidi superficiali che possono essere rimaste sui bordi prima di riportarl
52. e completamente esente da qualsiasi contaminazione Si consigliano campioni prelevati a digiuno anche se non obbligatorio La calcitonina instabile a temperatura ambiente Se il siero non viene analizzato immediatamente deve essere conservato a una temperatura di 15 C o inferiore campioni non devono essere congelati e scongelati pi volte 8 ATTREZZATURE E MATERIALI NECESSARI NON FORNITI IN DOTAZIONE 8 1 Provette in vetro borosilicato monouso 12 x 75 mm Non usare provette in plastica 8 2 Centrifuga a temperatura controllata adatta per 12 provette da 75 mm 20 25 C 8 3 Contatore ad emissione di scintille gamma adatto per il conteggio di iodio 125 8 4 Mixer Vortex 8 5 Dispositivi per operazioni con pipetta a Micropipette calibrate per erogare 100 uL e 200 uL b Dosatori a ripetizione calibrati per erogare 200 uL e 500 uL gz 1118x 105 raggio in cm rpm 46 10 8 6 Acqua purificata PROCEDURA DI ANALISI 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 9 13 Scongelare i campioni non noti e metterli su ghiaccio tritato Ricostituire i reagenti liofilizzati e lasciar scongelare completamente eventuali campioni congelati Evitare che i reagenti raggiungano temperature superiori a 20 25 C Mescolare delicatamente e metterli sul ghiaccio prima di utilizzarli Preparare ed etichettare due serie di 12 provette in vetro borosilicato monouso da 75 mm in base allo Schema
53. e control en cada ensayo para asegurar la validez de los resultados obtenidos Debe determinarse una desviaci n media y est ndar para cada control con un m nimo de diez ensayos De este modo se puede obtener un rango aceptable de valores para estos controles usando 2 desviaciones est ndar de los valores previamente determinados El laboratorio de control de calidad de DiaSorin ha determinado un rango para los sueros de control de calidad que se incluyen en este equipo 12 C LCULO DE RESULTADOS Hay numerosos m todos para calcular los resultados de los ensayos RIA Todos tienen como finalidad obtener una curva de calibraci n que relacione el alcance de la uni n con diferentes concentraciones de los calibradores de calibraci n El gr fico puede tener una escala lineal o logar tmica Cada uno de estos m todos indica b sicamente los mismos valores para controles y muestras aunque algunos ensayos pueden ajustarse mejor a un m todo determinado que a otro El m todo de c lculo del laboratorio de control de calidad de DiaSorin es B Bo frente a concentraci n logar tmica 12 1 Calcule el promedio de CMP de cada calibrador control y muestra desconocida 12 2 Reste el promedio de CPM de los tubos NSB de todas las cuentas 12 3 Divida las CPM corregidas de cada calibrador control o muestra desconocida por las CPM corregidas del calibrador 0 CPM de calibrador o muestra desconocida CPM de NSB B Bo x100 CPM de calibrador 0
54. e diluci n en serie de cuatro muestras desconocidas N mero de la No diluida 624 5 663 7 696 1 277 2 291 8 346 5 289 4 975 6 1216 9 1396 8 1487 6 819 3 1047 9 1144 2 1081 Recuperaci n Se han diluido cinco muestras desconocidas 1 1 con calibradores 0 48 96 193 385 770 y 1 540 pg mL Despu s se han analizado las diluciones y se ha calculado un porcentaje de recuperaci n media general por cada muestra desconocida utilizada N mero de la Recuperaci n muestra media general 96 il 5 j 15 3 Sensibilidad analitica Cuando se define como la concentraci n evidente con 3 desviaciones est ndar de las cuentas a uni n m xima la cantidad m nima detectable es de 1 5 pg tubo 15 pg mL 15 4 Especificidad anal tica La comparaci n de la reactividad cruzada del anticuerpo de calcitonina se realiz con los siguientes p ptidos P ptido de reactividad cruzada Hormona paratiroidea 0 01 Insulina 0 01 Hormona de estimulaci n de la tiroides 0 01 Hormona adrenocorticotr pica 0 01 Prolactina 0 01 La calcitonina de salm n no presenta reactividad cruzada con los antisueros La calcitonina de rata s por lo que el ensayo puede utilizarse en estudios con ratas 15 5 Interferencia Se han realizado estudios de interferencia con el documento EP7 A del NCCLS como pauta para evaluar los efectos de las interferencias end genas comunes Los valores obtenidos han mostrado interferencias con la adici n de trigl
55. e for calcitonin RIA is serological detection of malignant growths Medullary thyroid cancer MTC which comprises 4 896 of thyroid tumors secretes calcitonin in excess Very high levels of circulating calcitonin detected by RIA are useful in evaluating this type of tumor 57121 Some of these MTCs are hereditary and it is important to screen all members of a family for calcitonin excess when a case is discovered Other uses of the calcitonin RIA include investigation of ectopic calcitonin production in cancer patients particularly those with breast and lung tumors 4913 1824 Very active investigation is taking place to discover the usefulness of calcitonin measurements in the evaluation of nonthyroidal type malignancies 8 16 19 3 PRINCIPLES OF THE ASSAY The DiaSorin Calcitonin Il RIA is a disequilibrium procedure using delayed tracer addition to increase sensitivity The antibody was produced in a goat against pure synthetic human calcitonin In this RIA sample and first antibody are combined and incubated for 16 24 hours at 2 8 C Tracer is then added followed by a second incubation for 16 24 hours at 2 8 C A pre precipitated second antibody complex is added to separate the bound from free tracer The assay can then be centrifuged and decanted after 15 20 minutes incubation at 20 25 C 4 REAGENTS PROVIDED IN THE KIT Calcitonin Calibrator 0 1 vial 10 mL 2 vial 10 mL Calcitonin Calibrator 2 vials 1 0 mL 4 vials 1 0 mL Calcitonin Antiseru
56. e in posizione verticale Usando un contatore ad emissione di scintille gamma contare il precipitato di ogni provetta e delle provette per il conteggio totale per un tempo sufficiente a raggiungere la precisione statistica vedere la sezione Limiti della procedura COMMENTI ALLA PROCEDURA 10 1 10 2 10 3 Aggiungere ogni aliquota di reagente al terzo inferiore della provetta di analisi al fine di garantire una miscela completa di reagenti Le provette dovranno essere messe su ghiaccio tritato per evitare valori erroneamente elevati Alcune provette monouso in vetro borosilicato di alcuni costruttori possono dare legami aspecifici elevati Non utilizzare provette in plastica per questa analisi g 1118x 10 raggio in cm rpm 47 10 4 Se si decide di aspirare il liquido superficiale dal precipitato fare attenzione a non smuovere quest ultimo 10 5 Per monitorare completamente la costanza e la validit di un analisi RIA si possono controllare altri fattori DiaSorin consiglia di controllare i seguenti parametri per garantire prestazioni costanti del kit a Conteggi totali b Legame massimo Conteggi medi al minuto CPM delle provette del calibratore 0 CPM medio delle provette per il conteggio totale c Legame non specifico Conteggi medi al minuto CPM delle provette NSB CPM medio delle provette per il conteggio totale d Pendenza della curva del calibratore Ad esempio monitorare i punti di soppressione a 8
57. ein Abkommen zur Aus bung ihrer berwachungsfunktion abgeschlossen hat 24 1 Die Lagerung des radioaktiven Materials ist auf einen speziell daf r bestimmten Bereich zu beschr nken 2 Der Zugang zu radioaktivem Material ist nur befugten Personen zu gestatten 3 Radioaktives Material nicht mit dem Mund pipettieren 4 Im vorgesehenen radioaktiven Arbeitsbereich nicht essen oder trinken 5 Versch ttetes Material aufwischen und Bereich anschlie end mit alkalischem Reinigungsmittel oder radiologischer Dekontaminationsl sung waschen Alle benutzten Glasbeh lter gr ndlichst mit Wasser sp len bevor sie zusammen mit anderen Laborbeh ltern aus Glas ausgewaschen werden F r rzte oder Einrichtungen die im Rahmen einer Sondergenehmigung Radioisotope erhalten gilt Entgegennahme Gebrauch Weitergabe und Entsorgung radioaktiven Materials unterliegen den Vorschriften und Bedingungen der jeweiligen Sondergenehmigung VORSICHT Dieses Produkt enth lt eine Chemikalie die nach Angaben des US Bundesstaates Kalifornien krebserregend ist WICHTIGER HINWEIS Die auf der Packungsbeilage angegebene Radioaktivit t kann von dem auf dem Etikett des Kartons und des Tracer Fl schchens angegebenen Wert geringf gig abweichen Sowohl das Etikett des Kartons als auch das Etikett des Tracer Flaschchens geben den tats chlichen Wert der Radioaktivit t am Kalibrationsdatum an w hrend auf dem Beipackzettel die theoretische Radioaktivit t angegeben
58. ensayo de la Ultima p gina Coloque la gradilla de tubos en hielo picado Afiada los reactivos de este modo a Tubos de cuentas totales Reservar aparte hasta el paso 7 b Uni n no espec fica NSB 100 uL de calibrador 0 c Calibrador 0 100 uL de calibrador 0 200 uL de antisuero de calcitonina azul d Calibradores de calcitonina 100 uL de calibrador de calcitonina 200 uL de antisuero de calcitonina azul e Control de calidad y muestras desconocidas 100 uL de suero 200 uL de antisuero de calcitonina azul Agite los tubos suavemente en v rtex sin que se forme espuma e incube durante 16 24 horas a 2 8 C A ada 100 uL de calcitonina 251 roja a todos los tubos Agite los tubos suavemente en v rtex sin que se forme espuma e incube durante 16 24 horas a 2 8 C Mezcle en rgicamente el complejo de precipitaci n a ada 500 uL a todos los tubos salvo a los de cuentas totales Agite los tubos suavemente en v rtex sin que se forme espuma e incube durante 15 25 minutos a 20 25 C Centrifugue con 760 x g durante veinte minutos a 20 25 C Decante inmediatamente el sobrenadante de todos los tubos salvo los de las cuentas totales invirti ndolos durante dos minutos como m ximo Antes de poner los tubos boca arriba s quelos con papel secante para eliminar las gotas de sobrenadante que puedan haber quedado en los bordes Determine el n mero de cuentas de precipitado de cada tubo y de los tubos de cuentas totales
59. enza generale Questo materiale radioattivo pu essere consegnato acquisito conservato e usato unicamente da personale medico veterinari abilitati alla pratica di medicina veterinaria laboratori clinici o ospedali e unicamente per test in vitro clinici o di laboratorio che non prevedano la somministrazione interna o esterna del materiale o di radiazioni da esso derivanti su persone o animali L acquisto il possesso la conservazione l uso e il trasferimento sono soggetti alle norme e alla licenza generale della Nuclear Regulatory Commission statunitense dello stato con cui la Commissione ha stipulato un accordo per l esercizio dell autorit normativa 1 La conservazione del materiale radioattivo deve essere limitata ad un area specificatamente designata 2 L accesso ai materiali radioattivi deve essere limitato esclusivamente al personale autorizzato 3 Non usare la bocca per versare con la pipetta materiale radioattivo 4 Non mangiare o bere nelle aree di lavoro designate per materiale radioattivo 45 5 Le zone dove possono verificarsi perdite devono essere pulite quindi lavate con detergente alcalino o soluzione per la decontaminazione radiologica Tutti gli oggetti in vetro usati devono essere accuratamente risciacquati con acqua prima di lavarli con altri oggetti in vetro del laboratorio Per i professionisti o gli istituti che utilizzano radioisotopi con una licenza specifica L acquisto l uso il trasferimento e lo smalt
60. er p att satsen ger konsekventa resultat a Totalaktivitet b Maximal bindning Medelv rdet f r aktiviteten CPM i r ren f r kalibreringsl sning 0 CPM medelv rdet f r totalaktivitetsr ren g 1118 x 105 radie i cm rpm 57 c Ospecifik bindning CPM medelv rdet f r NSB r ren CPM medelv rdet f r totalaktivitetsr ren d Kalibreringskurvans lutning F lj exempelvis kalibreringskurvans punkter f r 80 50 och 20 h mning 11 KVALITETSKONTROLL Alla laboratorier skall ta med minst tv kontroller vid varje assay f r att garantera att resultaten blir korrekta Man b r fastst lla ett medelv rde och en standardavvikelse f r varje kontroll genom att k ra den i minst tio assayer Man kan f fram ett godk nt omr de f r kontrollerna genom att anv nda 2 standardavvikelser f r de tidigare uppm tta v rdena DiaSorins kvalitetskontrollaboratorium har best mt ett intervall f r de kvalitetskontrollsera som ing r i satsen 12 RESULTATBER KNING Det finns m nga olika metoder f r att ber kna resultaten fr n RIA test Alla r baserade p att man tar fram en kalibreringskurva genom att plotta bindningsgraden mot de angivna koncentrationerna hos kalibreringsl sningarna Diagrammet kan ha antingen linj r eller logaritmisk skala Samtliga metoder ger i stort sett samma v rden f r kontroller och prov ven om en viss ber kningsmetod kan passa b ttre f r vissa assayer n f r andra Den ber kningsmetod
61. es valeurs normales de 47 24 pg ml Ce qui donnerait un intervalle de r f rence 2 carts types de non d tectable ND 95 Les fumeurs peuvent avoir des taux de calcitonine s rique l g rement plus lev s 18 15 CRITERES DE QUALITE 15 1 Pr cision Variation intra dosage moyenne Valeur moyenne Ecart type 96 C V pg ml 14 8 67 3 10 1 Moron 278 5 18 9 Elev 530 30 7 Variation entre les dosages Valeur pena Ecart type 96 C V pg ml 92 76 13 42 14 47 iu 142 55 16 55 11 61 lev 528 79 36 7 6 95 15 2 EXACTITUDE L EXACTITUDE DU DOSAGE A T V RIFI E PAR LES TESTS DE LIN ARIT ET DE R CUP RATION Lin arit parall lisme Etude de dilution en s rie de quatre chantillons inconnus Num ro Non dilu 624 5 663 7 696 1 277 2 291 8 346 5 289 4 975 6 1216 9 1396 8 1487 6 819 3 1047 9 1144 2 1081 R cup ration Cinq chantillons inconnus ont t dilu s au 1 1 avec des talons 0 48 96 193 385 770 et 1 540 pg ml Chaque dilution a t dos e et une r cup ration globale moyenne 96 a t calcul e pour chaque chantillon inconnu utilis R cup ration globale moyenne 96 Num ro d chantillon 2 E 8 e E 7 J 4 J 283 L 5 j 358 15 3 Sensibilit analytique D finie comme la concentration obtenue trois carts types de l activit de liaison maximale la quantit minimale d celable est de 1 5 pg tube 15 pg ml 19 15 4 Sp cificit
62. fs lyophilis s et permettre aux r actifs congel s de d congeler compl tement Ne pas laisser les r actifs atteindre une temp rature sup rieure 20 25 C M langer d licatement puis placer sur de la glace avant utilisation Installer des tubes en verre jetables de 12 x 75 mm tiquet s en doublet selon le Profil de dosage de la derni re page Mettre le portoir sur de la glace pil e Ajouter les r actifs comme suit a Tubes de num ration totale Laisser de c t jusqu l tape 7 b Liaison non sp cifique NSB 100 pi d talon 0 c talon 0 100 ul d talon 0 200 ul d antis rum calcitonine bleu d talons calcitonine 100 ul d talon calcitonine 200 ul d antis rum calcitonine bleu e Contr le qualit et chantillons inconnus 100 ul de s rum 200 ul d antis rum calcitonine bleu M langer les tubes d licatement l aide du Vortex en vitant la formation de mousse et incuber pendant 16 24 heures entre 2 et 8 C Ajouter 100 ul de 251 calcitonine rouge dans tous les tubes M langer les tubes d licatement l aide du Vortex en vitant la formation de mousse et incuber pendant 16 24 heures entre 2 et 8 C M langer vigoureusement le complexe pr cipitant ajouter 500 ul dans tous les tubes l exception des tubes de num ration totale M langer doucement l aide du vortex sans former de mousse et incuber pendant 15 25 minutes entre 20 et 25 C Centrifuger les tubes penda
63. gen Tests ist die eine Methode jedoch m glicherweise besser geeignet als die andere Die Umrechnungsmethode f r das DiaSorin Qualit tskontrolllabor ist B Bo gegen log Konzentration 12 1 Die durchschnittlichen CPM f r jeden Kalibrator jede Kontrolle und jede unbekannte Probe berechnen 12 2 Die durchschnittlichen CPM der NSB R hrchen von allen Z hlungen abziehen 12 3 Die korrigierten CPM jedes Kalibrators jeder Kontrolle oder unbekannten Probe durch die korrigierten CPM des Nullkalibrators dividieren CPM des Kalibrators oder der unbekannten Probe CPM der NSB Bibo 96 100 CPM des Nullkalibrators CPM der NSB 12 4 Auf halblogarithmischem oder doppeltlogarithmischem Millimeterpapier pro zentuale Bindungen B Bo f r die Calcitonin Kalibratoren vertikale Achse gegen die Konzentration horizontale Achse auftragen 12 5 Durch die Punkte eine Ausgleichsline ziehen 12 6 Die Calcitonin Spiegel der unbekannten Proben aus der grafischen Darstellung interpolieren 12 7 Wenn die Werte einer unbekannten Probe gr Ber sind als die gr Bten Kalibratorwerte ist die unbekannte Probe entsprechend mit Nullkalibrator zu verd nnen und neu zu testen 12 8 Wenn eine unbekannte Probe verd nnt wurde den Wert mit dem entsprechenden Verd nnungsfaktor korrigieren 27 12 9 Zur Berechnung der maximalen Bindung die CPM des Nullkalibrators durch die in den Gesamtz hlr hrchen erhaltenen gesamten gez hlten Impulse dividieren
64. i endogeni comuni valori ottenuti hanno dimostrato un interferenza dovuta all aggiunta di trigliceridi ed emoglobina L aggiunta di colesterolo e bilirubina non ha influito sui risultati FARE RIFERIMENTO ALL ULTIMA PAGINA PER LA BIBLIOGRAFIA 51 SCHEMA DI ANALISI 1 Ricostituire i reagenti liofilizzati e lasciar scongelare completamente eventuali campioni surgelati Evitare che i reagenti raggiungano temperature superiori a 25 C Mescolare accuratamente quindi mettere su ghiaccio tritato prima dell uso 2 Contrassegnare due serie di provette Mettere il portaprovette con le provette su ghiaccio tritato 3 Versare il reagente seguendo lo schema seguente Conteggi NSB CAL Controlli e Provette Reagenti totali 0 5 campioni non noti Calibratore 0 100 uL 100 uL Calibratori 1 6 100 uL Controlli estratti 100 uL Campioni non noti estratti 100 uL Antisiero 200 uL 200 uL 4 Coprire le provette con pellicola e agitare lentamente nel Vortex 5 Lasciare in incubazione per 16 24 ore a 2 8 C 6 Versare 100 uL di tracciante in tutti i recipienti 7 Coprire e agitare lentamente nel Vortex 8 Lasciare in incubazione per 16 24 ore a 2 8 C 9 Versare 500 uL di complesso precipitante in tutti i recipienti eccetto le provette per il conteggio totale 10 Lasciare in incubazione per 15 25 minuti a 20 25 C 11 Centrifugare a 760 x g per 20 minuti 12 Far decantare i liquidi
65. i satsen inneh ller natriumazid Natriumazid kan reagera med bly och koppar i avloppsledningarna och bilda h gexplosiva metallazider N r reagensen kasseras m ste man spola efter med stora m ngder vatten f r att f rhindra att azid ackumuleras F r ytterligare information h nvisar vi till avsnittet Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts i handboken Safety Management No CDC 22 utgiven av Centers for Disease Control and Prevention Atlanta USA 1976 Europeiska Gemenskapens Riskfraser f r farliga preparat EU kommissionens direktiv 1999 45 EC R20 21 22 Farligt vid inandning hudkontakt och f rt ring R32 Utvecklar mycket giftig gas vid kontakt med syra S28 Vid kontakt med huden tv tta genast med mycket vatten REAGENS SOM INNEH LLER JOD 125 Satsen inneh ller radioaktivt material jod 125 med en radioaktivitet som ej verstiger 1 5 uCi 55 5 kBq sats nr 25065 eller 3 uCi 111 kBq sats nr 25130 Adekvata f rsiktighets tg rder m ste vidtas och god laboratoriepraxis f ljas vid f rvaring hantering och kassering av detta material F r mottagningar och institutioner som tar emot radioisotoper under en allm n licens Detta radioaktiva material f r endast tas emot f rv rvas gas och anv ndas av l kare veterin rer med praktik inom veterin rmedicin kliniska laboratorier eller sjukhus och f r endast anv ndas f r kliniska tester in vitro eller laboratorietester in vitro vilka ej in
66. ic ridos y hemoglobina La adici n de colesterol y bilirrubina no ha afectado a los resultados CONSULTE LA BIBLIOGRAF A EN LA LTIMA P GINA 41 PROGRAMA DEL ENSAYO 1 Reconstituya los reactivos liofilizados y permita que se descongelen por completo los espec menes congelados No permita que los reactivos alcancen temperaturas superiores a los 25 C M zclelos suavemente y col quelos en hielo picado antes de utilizarlos 2 Identifique los tubos por duplicado Coloque la gradilla de tubos en hielo picado 3 Suministre los reactivos seg n el siguiente programa Cuentas NSB Cal Controles y Tubos Reactivos totales 0 5 muestras desconocidas Calibrador 0 100 uL 100 uL Calibradores 1 6 100 uL Controles extra dos 100 uL Muestras desconocidas a 100 uL extra das 200 uL 200 uL Antisuero I 4 Cubra los tubos con parafilm y agitelos suavemente en v rtex 5 Incube durante 16 24 horas a 2 8 C 6 Dispense 100 uL de trazador en todos los pocillos 7 Cubra y agite suavemente en vortex 8 Incube durante 16 24 horas a 2 8 C 9 Dispense 500 uL de complejo de precipitaci n en todos los pocillos excepto en los tubos de cuentas totales 10 Incube durante 15 25 minutos a 20 25 C 11 Centrifugue con 760 x g durante 20 minutos 12 Decante los sobrenadantes 13 Cuente cada tubo en un contador gamma durante 60 segundos o m s g 1118 x 10 radio en cm rpm
67. ig zu berpr fen um eine konsistente Leistung des Kits sicherzustellen a Gesamtz hlung b Maximale Bindung Durchschnittliche Impulse pro Minute CPM des Nullkalibratorr hrchens Durchschnittliche CPM der Gesamtz hlr hrchen c Nichtspezifische Bindung Durchschnittliche CPM der NSB R hrchen Durchschnittliche CPM der Gesamtz hlr hrchen d Steigung der Kalibratorkurve Z B berwachung der Suppressions Punkte 80 96 50 96 und 20 der Kalibratorkurve 11 QUALITATSKONTROLLE Jedes Labor sollte mindestens zwei Kontrollproben in jedem Test vorsehen um die G ltigkeit der jeweiligen Ergebnisse zu pr fen Ein Mittelwert und eine Standard abweichung sind dann f r jede Kontrolle in mindestens zehn Versuchsg ngen zu bestimmen Ein zul ssiger Wertebereich kann dann f r diese Kontrollen mit 2 Standardabweichungen der zuvor bestimmten Werte ermittelt werden Das Qualit tssicherungslabor von DiaSorin hat f r die in diesem Kit enthaltenen Kontrollen einen bestimmten Bereich festgelegt 12 ERGEBNISBERECHNUNG Es gibt viele M glichkeiten die Ergebnisse von Radioimmunoassays zu berechnen Bei jeder Methode wird eine Kalibratorkurve angelegt indem die prozentualen Bindungen gegen die angegebenen Konzentrationen der Kalibrations Kalibratoren aufgetragen werden Die Kurve kann entweder eine lineare oder eine logarithmische Skala haben Jede dieser Methoden f hrt im Wesentlichen zu denselben Werten f r Kontrollen und Proben bei eini
68. imento di materiali radioattivi sono soggetti alle norme e alle condizioni della licenza specifica AVVERTENZA Questo prodotto contiene un prodotto chimico noto nello Stato della California per provocare cancro ATTENZIONE La radioattivit stampata sulle istruzioni allegate alla confezione pu essere leggermente diversa dalla radioattivit stampata sull etichetta della scatola e sull etichetta della fiala di tracciante L etichetta sulla scatola e sulla fiala di tracciante indicano la quantit effettiva di radioattivit alla data di calibrazione mentre il materiale informativo della confezione indica la radioattivit teorica del kit 6 INDICAZIONI DI POSSIBILE DETERIORAMENTO DEI REAGENTI DEL KIT 6 1 La presenza di particolato anomalo in uno qualsiasi dei reagenti 6 2 Uno sfasamento nella pendenza o posizione della curva di calibrazione rispetto a quella che normalmente si ottiene 6 3 Una diminuzione del legame massimo 6 4 Un legame altamente non specifico 7 PRELIEVO E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Sono richiesti cento 100 microlitri in due serie di siero per l analisi Prelevare il sangue mediante venopuntura in una provetta di vetro da 5 o 10 mL sotto vuoto Centrifugare per quindici minuti a 760 x g per ottenere siero privo di emolisi Non sono richiesti additivi o conservati per mantenere l integrit del campione Tutto il materiale in plastica oggetti in vetro o altro materiale che viene a contatto con i campioni deve esser
69. informaci n s lo debe utilizarse como referencia y no para calcular ning n valor 39 Ejemplo de curva de calibraci n de calcitonina Il FIGURA 1 13 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO 13 1 Si la concentraci n inicial de una muestra desconocida es mayor que el calibrador m s alto diluya s lo con calibrador 0 13 2 La frecuencia de las cuentas deber a bastar para evitar errores estad sticos por ejemplo la acumulaci n de 2 000 CPM dar como resultado un error del 596 10 000 CPM dar como resultado un 195 de error 13 3 El laboratorio de control de calidad de DiaSorin utiliza el ajuste de curva suavizada spline 14 VALORES PREVISTOS Rango normal Cada laboratorio debe establecer su propio rango normal Los valores normales observados en el laboratorio de DiaSorin han sido de 47 24 pg mL Esto dar a como resultado un rango normal 2 desv est de valores no detectables ND 95 El tabaco puede provocar niveles ligeramente elevados de calcitonina s rica 15 CARACTER STICAS ESPEC FICAS DEL RESULTADO 15 1 Precisi n Variaci n intraensayo media Valor de la Baja 67 3 10 1 14 8 Media 278 5 18 9 6 7 Alta 530 30 7 5 7 40 Variaci n interensayo Valor de la media D E C V pg mL Baja 92 76 13 42 14 47 Media 142 55 16 55 11 61 Alta 528 79 36 7 6 95 15 2 VERACIDAD LA VERACIDAD DEL ENSAYO SE HA VERIFICADO CON LA PRUEBA DE LINEALIDAD Y LA DE RECUPERACION Linealidad paralelismo Estudio d
70. ingskurva g r man seriesp dningar genom att tills tta 500 ul kalibreringsl sning till 500 pl kalibreringsl sning 0 Om halten i kalibreringsl sningen exempelvis r 1 000 pg mL bereder man kalibreringsl sningar med 500 250 125 62 5 and 31 25 pg mL p f ljande s tt Tills tt 500 uL av kalibreringsl sningen med 1 000 pg mL till 500 uL kalibreringsl sning 0 och blanda s erh lls 500 pg mL Tills tt 500 uL av kalibreringsl sningen med 500 pg mL till 500 uL kalibreringsl sning O och blanda s erh lls 250 pg mL Tills tt 500 uL av kalibreringsl sningen med 250 pg mL till 500 pL kalibreringsl sning 0 och blanda s erh lls 125 pg mL Tills tt 500 uL av kalibreringsl sningen med 125 pg mL till 500 pL kalibreringsl sning O och blanda s erh lls 62 5 pg mL Tills tt 500 uL av kalibreringsl sningen med 62 5 pg mL till 500 uL kalibreringsl sning 0 och blanda s erh lls 31 25 pg mL F RSIKTIGT L t r ren st p krossad is medan seriesp dningarna g rs i ordning och fram till dess de anv nds i assayen DiaSorins kalcitoninkalibreringsl sning har kalibrerats mot V rldsh lsoorganisationens kalcitoninstandard 70 234 Kalibrering sl sningen fungerar p samma s tt som patientprover n r den anv nds p rekommenderat s tt med reagensen och metoden i detta diagnostiska in vitro test KASSERA EVENTUELL OVERBLIVEN LOSNING FAR EJ FRYSAS 4 3 Kalcitoninantiserum frystorkat reagens Getserum mot kalcitonin sp t
71. ione Maggio 1999 o edizione corrente REAGENTI CONTENENTI SODIO AZIDE ATTENZIONE Alcuni reagenti di questo kit contengono sodio azide La sodio azide pu reagire con componenti in piombo o rame e formare quindi azidi metalliche altamente esplosive AI momento dello smaltimento lavare con abbondante acqua per evitare la formazione di azide Per ulteriori informazioni consultare Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts nel manuale Guide Safety Management No CDC 22 pubblicato dai Centri per il controllo e la Prevenzione delle malattie di Atlanta GA 1976 Frasi di rischio per sostanze pericolose della Comunit Europea Direttiva del Consiglio 1999 45 CE R 20 21 22 Harmful by inhalation in contact with skin and if swallowed Dannoso per inalazione per contatto con la pelle ed ingestione R 32 Contact with acids liberates very toxic gas ll contatto con acidi libera gas altamente tossico S28 After contact with skin wash immediately with plenty of water Dopo il contatto con la pelle lavare immediatamente con abbondante acqua REAGENTI CONTENENTI IODIO 125 Questo kit contiene materiale radioattivo che non supera 1 5 uCi 55 5 kBq Kit n 25065 o 3 Ci 111 kBq Kit n 25130 di iodio 125 Adottare precauzioni adeguate e le buone pratiche di laboratorio per la conservazione la manipolazione e lo smaltimento di questo materiale Per i professionisti o gli istituti che utilizzano radioisotopi con una lic
72. ist ANZEICHEN F R M GLICHEN VERFALL DER KITREAGENZIEN 6 1 Ungew hnliche Partikel in einem der Reagenzien 6 2 Eine Verschiebung der Steigung oder Position der Kalibratorkurve im Vergleich zu den normalen Ergebnissen 6 3 Eine Abnahme der maximalen Bindung 6 4 Eine hohe nichtspezifische Bindung GEWINNUNG UND VORBEREITUNG DER PROBEN F r den Test werden 100 ul Serum im Duplikat ben tigt Das Vollblut durch Venenpunktion in einem evakuierten Glasr hrchen f r 5 ml oder 10 ml sammeln Die Blutproben 15 Minuten bei 760 x G zentrifugieren um h molysefreies Serum zu gewinnen Zur Aufrechterhaltung der Probenreinheit sind weder Zusatzstoffe noch Konservierungsmittel erforderlich Alle Kunststoffteile Glasteile und sonstige Materialien die Kontakt mit den Proben haben m ssen frei von jeglichen Verunreinigungen sein Eine N chternprobe wird empfohlen ist jedoch nicht erforderlich Calcitonin ist bei Zimmertemperatur labil Wenn das Serum nicht unverz glich getestet wird sollte es bei h chstens 15 C gelagert werden Proben d rfen nicht wiederholt eingefroren und aufgetaut werden ZUS TZLICH BEN TIGTE GER TE UND MATERIALIEN 8 1 Einweg Borosilikatglasr hrchen 12 x 75 mm Kunststoffr hrchen d rfen nicht verwendet werden 8 2 Zentrifuge mit Temperaturregelung 20 C bis 25 C f r R hrchen 12 x 75 mm 8 8 Gammaszintillationsz hler zur Z hlung von Jod 125 8 4 Sch ttelger t 8 5 Pipettierger te a Mikropipe
73. kBq pour la trousse No 25065 ou 3 uCi 111 kBq pour la trousse No 25130 d iode 125 Les pr cautions appropri es et les bonnes pratiques de laboratoire doivent tre utilis es pour la conservation la manipulation et la mise au rebut de ce produit Pour les praticiens ou les tablissements recevant des radio isotopes dans le cadre d une licence g n rale Ce produit radioactif peut tre recu r ceptionn d tenu et utilis uniquement par des m decins des laboratoires cliniques des h pitaux des v t rinaires et des centres de recherche dans le cadre de la pratique de m decine v t rinaire de laboratoires cliniques ou des h pitaux et uniquement pour des analyses cliniques ou de laboratoire in vitro n impliquant pas l administration interne ou externe du produit ni par rayonnement l homme ou l animal Sa r ception son acquisition sa d tention son utilisation et son transfert sont sujets aux r glementations et la licence g n rale de l U S Nuclear 13 Regulatory Commission de l tat avec lequel la Commission a conclu un accord pour l exercice de l autorit r glementaire 1 Le produit radioactif doit tre conserv dans un endroit d sign L acc s aux produits radioactifs doit tre limit au personnel autoris Ne pas pipeter des solutions radioactives avec la bouche Ne pas manger ni boire dans les zones de travail radioactives En cas de d versement de produits radioactifs dans une zone nettoyer
74. lmacenar manejar y desechar este material deben adoptarse las precauciones necesarias y pr cticas de laboratorio correctas Para facultativos o instituciones que reciben radiois topos con licencia gen rica Este material radiactivo s lo deben recibirlo adquirirlo poseerlo y utilizarlo m dicos veterinarios que practiquen la medicina veterinaria laboratorios cl nicos u hospitales y s lo para pruebas in vitro cl nicas o de laboratorio que no conlleven la administraci n interna o externa del material ni su radiaci n a seres humanos ni animales Su recepci n adquisici n posesi n uso y transferencia se rigen por la normativa y la licencia gen rica de la Comisi n Reguladora Nuclear del estado en el que la Comisi n haya llegado a un acuerdo para el ejercicio de su autoridad reguladora 1 El almacenamiento del material radiactivo debe limitarse a un rea destinada espec ficamente a tal efecto 2 El acceso a materiales radiactivos debe estar limitado nicamente al personal autorizado 3 No distribuya material radiactivo con la pipeta en la boca 4 No coma ni beba dentro de las reas destinadas a trabajos radiactivos 35 5 Las reas donde se produzcan derrames deben limpiarse y despu s lavarse con un detergente alcalino o una soluci n descontaminante radiol gica Todo recipiente de vidrio utilizado debe enjuagarse completamente con agua antes de lavarse con otros recipientes de laboratorio Para facultativos o ins
75. m 1 vial 14 mL 2 vials 14 mL I Calcitonin 1 vial 7 mL 2 vials 7 mL Calcitonin Precipitating Complex 1 vial 35 mL 2 vials 35 mL Calcitonin Controls 2 vials 1 0 mL 4 vials 1 0 mL STORAGE Upon receipt and prior to reconstitution store all reagents at 2 8 C After reconstitution store all reagents at 15 or lower until the expiration date on the label Reagents should not be used past the expiration date The expiration date of the kit is reported on the external label and corresponds to the expiration date of the tracer When reconstituting the contents of the vials mix gently to avoid foaming Reagents from different batches must not be mixed 4 4 Calcitonin Calibrator 0 lyophilized reagent BSA borate buffer with sodium azide 0 2596 added Reconstitute the vial with 10 mL of purified water mix and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly before using 4 2 Calcitonin II Calibrator lyophilized reagent Human synthetic calcitonin at a nominal concentration of 1 000 pg mL is diluted in BSA borate buffer with sodium azide 0 2 and other stabilizers added Exact concentration values are assigned with each lot Reconstitute the vial with 1 0 mL of purified water mix and allow it to stand for 15 20 minutes on crushed ice until the contents are completely dissolved mix thoroughly before using In order to obtain the entire calibrator curve make serial dilutions by adding 500 uL of
76. n Thr Ala lle Gly Val Gly Ala Pro NH Bei Menschen wird dieses hypokalz mische Hormon in den parafollikul ren Zellen neuroektodermalen Ursprungs der Schilddr se sekretiert wahrscheinlich als Reaktion auf Hyperkalz mie Die Wirkung auf Knochen und Nieren steuert die hypokalz mische Wirkung von Calcitonin DiaSorin hat einen empfindlichen Radioimmunoassay RIA entwickelt und ausgiebig getestet mit dem kleinste Calcitonin Konzentrationen CT ab 15 pg ml bestimmt werden k nnen Der Einsatzschwerpunkt f r den Calcitonin RIA liegt in der serologischen Bestimmung von malignen Geschwulsten Ein medull res Schilddr senkarzinom MTC das zu 4 8 aus Schilddr sentumoren besteht bildet Calcitonin im berfluss Sehr hohe Calcitonin Spiegel die mit einem RIA erkannt werden helfen bei der Evaluierung eines solchen Tumors 5 Einige dieser MTC sind erblich Daher ist es wichtig alle Familienmitglieder auf berm ige Calcitonin Produktion zu testen wenn ein Fall in der Familie auftritt Ein anderes Einsatzgebiet des RIA ist u a die Ermittlung der ektopischen Calcitonin Produktion bei Krebspatienten v a bei Patienten mit Brust und Lungentumoren 1 152 Der Nutzen von Calcitonin Messungen f r die Evaluierung von malignen Tumoren die ihren Ursprung nicht in der Schilddr se haben wird intensiv untersucht 8 16 19 TESTPRINZIPIEN Bei dem Calcitonin Il RIA von DiaSorin handelt es sich um ein Dys quilibriumverfahren da
77. nden lang bei 2 8 C inkubieren 6 100 ul Tracer in alle Wells dispensieren 7 Abdecken und vorsichtig sch tteln 8 16 bis 24 Stunden lang bei 2 8 C inkubieren 9 500 uL des pr zipitierenden Komplexes in alle R hrchen au er den R hrchen f r die Gesamtz hlung dispensieren 10 15 bis 25 Minuten lang bei 20 25 C inkubieren 11 20 Minuten lang mit 760 x G zentrifugieren 12 Die berst nde dekantieren 13 Jedes R hrchen mindestens 60 Sekunden lang in einem Gammas zintillationsz hler z hlen g 1118 x 10 radius in cm u min 32 1 2 3 4 RADIOINMUNOENSAYO DE CALCITONINA INDICACIONES PARA UTILIZACI N EN DIAGN STICOS N VITRO Este equipo contiene instrucciones y materiales para la determinaci n cuantitativa de calcitonina humana en suero mediante radioinmunoensayo RIA RESUMEN Y EXPLICACI N La calcitonina es una hormona pept dica con un peso molecular de 3 418 que contiene treinta y dos amino cidos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 12 13 14 15 16 17 H Cys Gly Asn Leu Ser Thr Cys Met Leu Gly Thr Tyr Thr Gln Asp Phe Asn 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Lys Phe His Thr Phe Pro Gin Thr Ala lle Gly Val Gly Ala Pro NH En los seres humanos esta hormona hipocalc mica se secreta en las c lulas parafoliculares tiroideas de origen neuroectod rmico probablemente como reacci n a la hipercalcemia La acci n hipocalc mica de la calcitonina
78. ndo antes de utilizar 4 2 Calibrador de calcitonina Il reactivo liofilizado Calcitonina humana sint tica con una concentraci n nominal de 1 000 pg mL diluida en tamp n borato ASB con azida s dica 0 296 y otros estabilizadores afiadidos Los valores de concentraci n exactos se asignan con cada lote Reconstituya el vial con 1 mL de agua purificada mezcle y deje reposar durante 15 20 minutos en hielo picado hasta que el contenido se disuelva por completo mezcle a fondo antes de utilizar Para obtener la curva de calibraci n completa haga diluciones en serie afiadiendo 500 uL de calibrador a 500 uL de calibrador 0 Por ejemplo si la concentraci n del calibrador es 1 000 pg mL los calibradores 500 250 125 62 5 y 31 25 pg mL se obtienen de este modo Agregue 500 uL de calibrador 1 000 pg mL a 500 uL de calibrador 0 y mezcle para obtener 500 pg mL Agregue 500 uL de calibrador 500 pg mL a 500 uL de calibrador O y mezcle para obtener 250 pg mL Agregue 500 uL de calibrador 250 pg mL a 500 pL calibrador 0 y mezcle para obtener 125 pg mL Agregue 500 uL de calibrador 125 pg mL a 500 uL de calibrador O y mezcle para obtener 62 5 pg mL Agregue 500 uL de calibrador 62 5 pg mL a 500 uL de calibrador O y mezcle para obtener 31 25 pg mL PRECAUCI N Deje los tubos en hielo picado mientras realiza las diluciones en serie y antes de utilizarlos en el ensayo El calibrador de calcitonina de DiaSorin se ha analizado seg n el est ndar 70
79. ndocrine Society Meeting No 60 Miami Florida 1978 Silva O L and K L Becker High Plasma Calcitonin Levels in Breast Cancer British Medical Journal 21 460 1976 Silva O L L E Broder J L Doppman R H Snider C F Moore M H Cohen and K L Becker Calcitonin as a Marker for Bronchogenic Cancer Cancer 44 680 1979 Silva O L K L Becker A Primack J L Doppman and R H Snider Hypercalcito nemia in Bronchogenic Cancer Evidence for Thyroid Origin of the Hormone Journal of the American Medical Association 234 2 183 1975 Silva O L K L Becker A Primack J L Doppman and R H Snider Increased Serum Calcitonin Levels in Bronchogenic Cancer Chest 69 4 495 1976 Tashjian AH Jr B G Howland K E W Melvin and C S Hill Jr Immunoassay of Human Calcitonin Clinical Measurement Relation to Serum Calcium and Studies in Patients with Medullary Carcinoma The New England Journal of Medicine 283 17 890 1978 SYMBOLS USED WITH DEVICES labelled with 1 hi 125 marqu l iode markiertes Antigen etiquetado con 125 English Francais Deutsch Espafiol Italiano European a aux CE Konformit ts Conformidad Conformit Conformity europ ennes kennzeichnung europea europea e Date limite Mindesthaltbar Fecha de Data di Expiration Date d utilisation keitsdatum caducidad scadenza Manufacturer Fabricant Hersteller Fabricante Fabbricante Cons
80. neb r n gon inv rtes eller utv rtes administrering av materialet eller av str lning fr n det till m nniskor eller djur F r mottagande f rv rv innehav anv ndning och verl telse g ller de regler och den allm nna licens som utf rdats av den amerikanska Nuclear Regulatory Commission eller av den stat med vilken kommissionen har ing tt ett avtal f r ut vande av regulatorisk myndighet 1 Radioaktivt material f r endast f rvaras p en speciellt avsedd plats Endast auktoriserad personal f r ha tillg ng till radioaktivt material Pipettera aldrig radioaktivt material med munnen Undvik att ta eller dricka i lokaler d r radioaktivt material anv nds Ytor d r spill kan f rekomma skall torkas av och d refter reng ras med ett alkaliskt reng ringsmedel eller radiologisk dekontamineringsl sning Alla glasvaror som anv nds m ste sk ljas noga med vatten innan de diskas tillsammans med andra glasvaror f r laboratoriebruk a gt N 55 F r mottagningar och institutioner som tar emot radioisotoper under en specifik licens N r ni tar emot anv nder verl ter och kasserar radioaktivt material g ller reglerna och villkoren i er specifika licens VARNING Produkten inneh ller en kemikalie som enligt staten Kalifornien r k nd f r att orsaka cancer OBSERVERA Den radioaktivitet som anges p bipacksedeln kan skilja sig n got fr n den aktivitet som anges p etiketterna p kartongen och p flaskan med sp
81. niveaux 1 et 2 r actif lyophilis Le s rum humain est dop si besoin est avec la quantit ad quate de calcitonine humaine synth tique afin d obtenir une concentration comprise dans l intervalle sp cifi On ajoute de l azide de sodium 0 195 et d autres stabilisants Reconstituer le tube avec 1 0 ml d eau purifi e m langer et laisser reposer pendant 15 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu bien m langer et traiter comme un chantillon inconnu Les intervalles figurent sur les tiquettes des tubes de contr le PR CAUTION LIMINER LES SURPLUS DE R ACTIF NE PAS CONGELER 5 AVERTISSEMENTS ET PRECAUTIONS POUR USAGE DIAGNOSTIQUE N VITRO Non pr vu pour une utilisation interne ou externe sur l homme ou l animal R ACTIFS CONTENANT DES PRODUITS D ORIGINE HUMAINE Traiter comme potentiellement infectieux Chaque don de s rum plasma intervenant dans la pr paration de ce produit a t test par une m thode U S agr e par la FDA et s est av r non r actif en pr sence de HBsAg d anticorps anti VHC et d anticorps anti VIH1 2 M me si ces m thodes sont extr mement pr cises elles ne garantissent pas la d tection de tous les dons infect s Ce produit peut galement contenir d autres produits d origine humaine pour lesquelles il n existe aucun test agr Comme aucune m thode de test connue ne peut offrir l assurance compl te de l absence du virus de l h patite B VHB du virus de l h pati
82. nt vingt minutes 760 x g entre 20 et 25 C D canter imm diatement le surnageant de tous les tubes l exception des tubes de num rotation totale en les renversant pendant deux minutes au maximum Placer les tubes sur du papier absorbant pour liminer toutes les gouttes de surnageant qui peuvent rester sur les bords avant de les replacer l endroit A l aide du compteur scintillation gamma compter le pr cipit de chaque tube et des tubes de num ration totale pendant le temps n cessaire l obtention d une exactitude statistique suffisante consulter le paragraphe Limitations de la Proc dure COMMENTAIRES SUR LA PROC DURE 10 1 10 2 10 3 Ajouter chaque aliquote de r actif au tiers inf rieur du tube essai pour garantir le m lange complet des r actifs Mettre les tubes essai sur de la glace pil e pour viter l obtention de valeurs faussement lev es Certains fabricants vendent des tubes jetables qui donnent des liaisons non sp cifiques lev es Ne pas utiliser de tubes en plastique pour ce dosage g 1 118 x 10 rayon en cm tr min 15 10 4 Si le surnageant est aspir dans le pr cipit prendre soin de ne pas remuer le pr cipit 10 5 Pour surveiller compl tement la pr cision constante d un dosage RIA il faut parfois v rifier des facteurs suppl mentaires DiaSorin suggere de v rifier les param tres suivants afin d assurer la constance des performances de la trousse
83. ntain integrity of the sample All plastics glassware or other materials coming into contact with the specimen should be entirely free of any contamination A fasting specimen is recommended but not required Calcitonin is labile at room temperature If the serum is not assayed immediately it should be stored at 15 C or lower Specimens should not be repeatedly frozen and thawed 8 EQUIPMENT AND MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 8 1 Disposable borosilicate glass tubes 12 x 75 mm Plastic tubes cannot be used 8 2 Temperature controlled centrifuge to accommodate 12 x 75 mm tubes 20 25 C 8 3 Gamma scintillation counter capable of counting iodine 125 8 4 Vortex 8 5 Pipetting devices a Micropipettors calibrated to deliver 100 uL and 200 pL b Repeating dispensers calibrated to deliver 200 uL and 500 uL 8 6 Purified water 9 ASSAY PROCEDURE 9 1 Thaw unknown samples and place on crushed ice 9 2 Reconstitute the lyophilized reagents and allow any frozen reagents to thaw completely Do not allow reagents to reach temperatures above 20 25 C Mix gently and then place on ice before using 9 3 Set up labeled 12 x 75 mm disposable borosilicate glass tubes in duplicate according to the Scheme of the Assay on the back page 9 4 Place the rack of tubes on crushed ice 9 5 Add reagents as follows a Total count tubes Set aside until step 7 b Nonspecific binding NSB 100 uL of calibrator 0 c Calibrator 0 100 uL of calibra
84. on of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts des Handbuches Safety Management Nr CDC 22 herausgegeben vom Centers for Disease Control and Prevention Atlanta Georgia 1976 Europ ische Gemeinschaft Gefahrenbezeichnungen f r gef hrliche Stoffe Richtlinie 1999 45 EG R 20 21 22 Gesundheitssch dlich beim Einatmen Verschlucken und Ber hrung mit der Haut R 32 Entwickelt bei Ber hrung mit S ure sehr giftige Gase S28 Bei Ber hrung mit der Haut sofort mit viel Wasser sp len REAGENZIEN MIT JOD 125 Dieses Kit enth lt radioaktives Material mit maximal 1 5 uCi 55 5 kBq Jod 125 Kit Nr 25065 bzw 3 uCi 111 kBq Jod 125 Kit Nr 25130 Bei der Lagerung Handhabung und Entsorgung dieses Materials sind entsprechende Vorsichtsma nahmen und gute Laborpraktiken einzuhalten F r rzte bzw Institutionen die im Rahmen einer Generallizenz Radioisotope erhalten gilt Entgegennahme Erwerb Besitz und Verwendung dieses radioaktiven Materials sind nur Arzten veterin rmedizinisch t tigen Tier rzten klinischen Laboren oder Krankenh usern und nur f r klinische In vitro Tests oder In vitro Labortests gestattet bei denen das Material oder dessen Strahlung weder Menschen noch Tieren intern oder extern verabreicht wird Entgegennahme Erwerb Besitz Verwendung und Weitergabe des Materials unterliegen den Vorschriften und der Generallizenz der US Nuclear Regulatory Commission bzw des Staates mit dem diese Beh rde
85. on sodio azide 0 1 con l aggiunta di colorante blu Ricostituire la fiala con 14 mL di acqua purificata mescolare e lasciare riposare per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente prima dell uso 4 4 21 Calcitonina reagente liofilizzato La calcitonina umana sintetica etichettata con iodio 125 e diluita in un tampone BSA borato EDTA contenente sodio azide 0 4 con l aggiunta di colorante rosso Ricostituire la fiala con 7 mL di acqua purificata mescolare e lasciare riposare per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare delicatamente prima dell uso 4 5 Complesso precipitante di calcitonina reagente liofilizzato Il siero normale di capra pre precipitato con siero asino anti capra e polietilene glicolico PEG viene diluito in un tampone BSA borato con l aggiunta di sodio azide 0 1 Ricostituire la fiala con 35 mL di acqua purificata Mescolare accuratamente fino a quando la sospensione si presenta omogenea quindi lasciar riposare per almeno 30 minuti a temperatura ambiente mescolando occasionalmente 4 6 Controlli di calcitonina Livello 1 e 2 reagente liofilizzato Nel siero umano si aggiunge se necessario una quantit necessaria di calcitonina umana sintetica in modo da ottenere una concentrazione nei range specificati Vengono aggiunti sodio azide 0 1 e altri stabilizzanti Ricostituire la fiala con 1 0 mL di acqua purificata mescola
86. pi di questo cancro MTC sono di natura ereditaria ed importante controllare in tutti i membri di una famiglia l eccesso di calcitonina quando si scopre un caso Altri utilizzi dell analisi RIA per calcitonina prevedono l indagine di produzione ectopica di calcitonina in pazienti affetti da cancro in particolare quelli con tumore al seno e ai polmoni 3 182 Sono in corso indagini molto attive al fine di stabilire l utilit delle misurazioni di calcitonina nella individuazione di tumori maligni di tipo non tiroideo amp 9 3 PRINCIPI DELL ANALISI L analisi RIA DiaSorin Calcitonina Il una procedura di disequilibrio che prevede l aggiunta ritardata di tracciante per aumentare la sensibilit L anticorpo stato creato in una capra utilizzando calcitonina umana pura in forma sintetica Nell analisi RIA il campione e il primo anticorpo vengono combinati e incubati per 16 24 ore alla temperatura di 2 8 C Dopo l aggiunta di tracciante ha luogo una seconda incubazione di 16 24 ore a 2 8 C Viene aggiunto un complesso pre precipitante il secondo anticorpo per separare il legato dal tracciante libero L analisi pu essere quindi centrifugata e lasciata decantare dopo 15 20 minuti di incubazione a 20 25 C 4 REAGENTI FORNITI CON IL KIT Calibratore 0 di calcitonina 1 fiala 10 ml 2 fiale 10 mL Calibratore di calcitonina 2 fiale 1 0 mL 4 fiale 1 0 mL Antisiero calcitonina 1 fiala 14 mL 2 fiale 14 mL Calcitonina 91 1 fiala 7 mL 2 fiale 7
87. pic Hormone Production by Cancer Cells Lab Lore 8 1978 16 Richardson R L F A Greco R K Oldham and G W Liddle Tumor Products and Potential Markers in Small Cell Lung Cancer Seminars in Oncology 5 258 1978 17 Roof B S R Weinstein l Vuji N M Burdash and M Dopson Immunoheterogeneity of the Calcitonins of Hypercalcemia Breast and Lung Cancer and Medullary Carcinoma of Thyroid Abstract 797 Endocrine Society Meeting No 60 Miami Florida 1978 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Roos B A Calcitonin as Tumor Marker RIA for Physicians 5 1980 Roos B A A W Lindall S B Baylin J O Neil A L Frelinger R S Birnbaum and P W Lambert Plasma Immunoreactive Calcitonin in Lung Cancer Endocrine Research Communications 6 2 169 1979 Roos B A A W Lindall S B Baylin J O Neil A L Frelinger R S Birnbaum and P W Lambert Plasma Immunoreactive Calcitonin in Lung Cancer Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 50 659 1980 Samaan J A M Ibanez and C S Hill Jr Medullary Carcinoma of the Thyroid and Astrocytoma Annals of Internal Medicine 86 5 585 1977 Schwartz K E A R Wolfsen B Forster and W D Odell Calcitonin in Nonthyroidal Cancer Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 49 438 1979 Schwartz K E A R Wolfsen and W D Odell Plasma Calcitonin Use as a Tumor Marker Abstract 572 E
88. quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente prima dell uso Per ottenere l intera curva di calibrazione fare diluizioni in serie aggiungendo 500 uL di calibratore a 500 pL di calibratore 0 Ad esempio se la concentrazione del calibratore 1 000 pg mL i calibratori da 500 250 125 62 5 e 31 25 pg mL saranno cosi composti Aggiungere 500 uL di calibratore 1 000 pg mL a 500 uL di calibratore O e mescolare per ottenere 500 pg mL Aggiungere 500 uL di calibratore 500 pg mL a 500 pL di calibratore 0 e mescolare per ottenere 250 pg mL Aggiungere 500 uL di calibratore 250 pg mL a 500 pL di calibratore 0 e mescolare per ottenere 125 pg mL Aggiungere 500 uL di calibratore 125 pg mL a 500 pL di calibratore 0 e mescolare per ottenere 62 5 pg mL Aggiungere 500 uL di calibratore 62 5 pg mL a 500 pL di calibratore O e mescolare per ottenere 31 25 pg mL AVVERTENZA Tenere le provette su ghiaccio tritato mentre si eseguono le diluizioni in serie e prima dell uso nell analisi Il calibratore DiaSorin stato analizzato in base allo standard di riferimento 70 234 per la calcitonina dell OMS II calibratore dimostra commutabilit con i campioni del paziente quando usati con reagenti e con la procedura operativa di questo test diagnostico in vitro come consigliato SCARTARE L ECCEDENTE NON CONGELARE 4 3 Antisiero calcitonina reagente liofilizzato Il siero capra anti calcitonina viene diluito in un tampone BSA borato c
89. re e lasciar riposare per 15 20 minuti fino a quando il contenuto completamente disciolto mescolare accuratamente e trattare come campione non noto range sono stampati sulle fiale dei controlli AVVERTENZA SCARTARE L ECCEDENTE NON CONGELARE 44 5 AVVERTENZE E PRECAUZIONI PER USO DIAGNOSTICO N VITRO Non per uso interno o esterno su animali o persone REAGENTI CONTENENTI MATERIALE DI PROVENIENZA UMANA Trattare come potenzialmente infettivi Ogni unit di siero plasma da donatore usata nella preparazione di questo prodotto stata testata con una metodica approvata dalla FDA statunitense e trovata non reattiva per la presenza di HBsAg anticorpi a HCV e anticorpi ad HIV 1 2 Anche se questi metodi sono estremamente accurati non garantita la localizzazione di tutte le unit infette Questo prodotto pu inoltre contenere altro materiale di provenienza umana per il quale non esiste un test approvato Poich nessuna metodologia di test approvata pu offrire garanzia completa sull assenza del virus dell epatite B HBV dell epatite C HCV del virus di immunodeficienza HIV o di altri agenti infettivi tutto il materiale di provenienza umana deve essere trattato in conformit con le buone pratiche di laboratorio adottando le precauzioni appropriate come descritto nei manuali dei Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories quarta ediz
90. rosilicate glass tubes yield elevated nonspecific bindings Do not use plastic tubes in this assay 10 4 If you choose to aspirate supernatant from precipitate be careful not to disturb the precipitate 10 5 To completely monitor the consistent performance of an RIA there are additional factors which may be checked DiaSorin suggests a check of the following parameters to assure consistent kit performance a Total Counts b Maximum Binding Average counts per minute CPM of calibrator 0 Tubes Average CPM of Total Count Tubes c Nonspecific Binding Average CPM of NSB Tubes Average CPM of Total Count Tubes d Slope of Calibrator Curve For example monitor the 80 50 and 2096 suppression points of the calibrator line QUALITY CONTROL Each laboratory should include at least two control sera in every assay to ensure the validity of each assay s results A mean and standard deviation should then be determined for each control using a minimum of ten assays An acceptable range of values may then be obtained for these controls using 2 standard deviations of the values previously determined The DiaSorin Quality Control Laboratory has determined a range for the quality control sera included in this kit g 1118 x 105 radius in cm rpm 12 CALCULATION OF RESULTS There are many methods in existence for calculating results of RIAs Each is based on obtaining a calibration curve by plotting the extent of binding against stated
91. s verz gerte Tracerzugaben nutzt um die Empfindlichkeit zu erh hen Statt reines synthetisches Humancalcitonin zu verwenden wurde der Antik rper durch Immunisierung einer Ziege hergestellt In diesen Assay werden die Probe und der erste Antik rper miteinander kombiniert und 16 bis 24 Stunden lang bei 2 8 C inkubiert AnschlieBend wird ein Tracer hinzugegeben gefolgt von einer zweiten Inkubation f r 16 bis 24 Stunden bei 2 8 C Der pr zipitierende zweite Antik rperkomplex wird hinzugef gt um den gebundenen vom ungebundenen Tracer zu trennen Der Test kann nach 15 bis 20 Minuten Inkubation bei 20 25 C zentrifugiert und dekantiert werden REAGENZIEN DES KITS Calcitonin Nullkalibrator 1 Fl schchen 10 ml 2 Fl schchen 10 ml Calcitonin Kalibrator 2 Fl schchen 1 ml 4 Fl schchen 1 ml Calcitonin Antiserum 1 Fl schchen 14 ml 2 Fl schchen 14 ml 131 Calcitonin 1 Fl schchen 7 ml 2 Fl schchen 7 ml Calcitonin Pr zipitierender 1 Fl schchen 35 ml 2 Fl schchen 35 ml Komplex 2 Fl schchen 1 ml 4 Fl schchen 1 ml Calcitonin Kontrollen Anzahl der Tests LAGERUNG Nach Empfang und vor der Rekonstitution alle Reagenzien bei 2 8 C aufbewahren Nach der Rekonstitution sind dagegen alle Reagenzien bis zum Verfallsdatum bei h chstens 15 zu lagern Die Reagenzien d rfen nach dem Verfallsdatum nicht mehr verwendet werden Das Verfallsdatum des Kits ist auf dem u eren Etikett angegeben und entspricht dem Verfallsdatum des Tracers
92. s zu behandeln Alle in der Herstellung dieses Produktes verwendeten Serum bzw Plasma spendeeinheiten wurden nach einer FDA genehmigten Methode getestet und f r nicht reaktiv auf Hepatitis B Oberfl chenantigen HBsAg Hepatitis C Antik rper HCV und Antik rper f r HIV 1 2 befunden Obwohl diese Methode u erst genau ist bietet sie keine Gew hr daf r dass alle infizierten Einheiten identifiziert werden k nnen Dieses Produkt kann auch Material humanen Ursprungs enthalten f r welches es noch kein genehmigtes Testverfahren gibt Da keine der zur Zeit bekannten Testmethoden absolute Gew hr f r die Abwesenheit des Hepatits B Virus HBV Hepatitis C Virus HCV des Retrovirus HIV oder anderer Infektionserreger bieten kann sind alle Produkte mit Komponenten humanen Ursprungs unter Einhaltung guter Laborpraktiken und entsprechender Vorsichtsma nahmen laut Empfehlungen des Leitfadens der Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 Aufl Mai 1999 oder aktuelle Auflage als potenziell infekti se Substanzen zu behandeln REAGENZIEN MIT NATRIUMAZID ACHTUNG Einige Reagenzien in diesem Kit enthalten Natriumazid das ggf mit Blei oder Kupferleitungen reagieren und h chst explosive Metallazide bilden kann Bei der Entsorgung mit viel Wasser sp len um eine Azidbildung zu vermeiden Weitere Informationen finden Sie im Abschnitt Decontaminati
93. se advierte por sus efectos en huesos y ri ones DiaSorin ha desarrollado y comprobado exhaustivamente un radioinmunoensayo RIA sensible a la calcitonina CT capaz de detectar concentraciones muy reducidas como 15 pg mL El principal uso del RIA de calcitonina es la detecci n de crecimiento maligno en suero El c ncer medular de tiroides CMT que comprende el 4 895 de los tumores tiroideos secreta calcitonina en exceso Para evaluar este tipo de tumor es muy til detectar como hace el RIA niveles muy elevados de calcitonina circulante 7112 Algunos de estos CMT son hereditarios por lo que cuando se descubre un caso es importante examinar a todos los miembros de la familia por si presentaran un exceso de calcitonina El RIA de calcitonina tambi n se emplea para investigar la producci n ect pica de calcitonina en pacientes con c ncer especialmente los afectados de tumores de mama y pulm n 13 18 2 Se est investigando intensamente si la medici n de calcitonina es til para evaluar malignidades de tipo no tiroideo 6 PRINCIPIOS DEL ENSAYO El RIA para calcitonina Il de DiaSorin es un procedimiento de desequilibrio con adici n de trazador retardada para aumentar la sensibilidad Se ha obtenido un anticuerpo anticalcitonina humana sint tica en una cabra En este RIA la muestra y el primer anticuerpo se combinan e incuban durante 16 24 horas a 2 8 C Despu s se agrega trazador seguido de una segunda incubaci n durante
94. t med BSA boratbuffert med natriumazid 0 1 och bl tt f rg mne tillsatt Rekonstituera flaskans inneh ll med 14 mL renat vatten blanda om och l t st 15 20 minuter tills inneh llet r fullst ndigt uppl st blanda noga f re anv ndning 4 4 31 kalcitonin frystorkat reagens Syntetiskt humant kalcitonin inm rkt med jod 125 och l st i BSA borat EDTA buffert med tillsats av natriumazid 0 4 96 och r tt f rg mne Rekonstituera flaskans inneh ll med 7 mL renat varren blanda om och l t st 15 20 minuter tills inneh llet r fullst ndigt uppl st Blanda f rsiktigt f re anv ndning 4 5 Kalcitoninutf llningskomplex frystorkat reagens Normalt getserum f rutf llt med antigetserum fr n sna och polyetylenglykol PEG sp tt med BSA boratbuffert med tillsats av 0 1 96 natriumazid Rekonstituera flaskans inneh ll med 35 mL renat vatten Blanda noga tills suspensionen ser homogen ut och l t den sedan st minst 30 minuter i rumstemperatur Blanda d och d 4 6 Kalcitoninkontroller niv 1 och niv 2 frystorkat reagens Humant serum med tillsats vid behov av l mplig m ngd syntetiskt humant kalcitonin f r att erh lla en halt inom det angivna omr det Med tillsats av 0 1 natriumazid och andra stabiliserande medel Rekonstituera inneh llet i flaskan med 1 0 mL renat vatten blanda om och l t st 15 20 minuter tills inneh llet r fullst ndigt uppl st blanda noga och behandla som ett ok nt prov Haltinterv
95. t with skin and if swallowed R32 Contact with acids liberates very toxic gas S28 After contact with skin wash immediately with plenty of water REAGENTS CONTAINING IODINE 125 This kit contains radioactive material which does not exceed 1 5 uCi 55 5 kBq kit No 25065 or 3 uCi 111 kBq kit No 25130 of iodine 125 Appropriate precautions and good laboratory practices should be used in the storage handling and disposal of this material For practitioners or institutions receiving radioisotopes under a general license This radioactive material may be received acquired possessed and used only by physicians veterinarians in the practice of veterinary medicine clinical laboratories or hospitals and only for in vitro clinical or laboratory tests not involving internal or external administration of the material or the radiation therefrom to human beings or animals Its receipt acquisition possession use and transfer are subject to the regulations and the general license of the U S Nuclear Regulatory Commission or of the state with which the Commission has entered into an agreement for the exercise of regulatory authority 1 Storage of radioactive material should be limited to a specifically designated area Access to radioactive materials must be limited to authorized personnel only Do not pipette radioactive material by mouth Do not eat or drink within designated radioactive work areas Areas where spills may occur should
96. te C VHC du virus de l immunod ficience humaine VIH ou d autres agents infectieux tous les produits d origine humaine doivent tre manipul s conform ment aux bonnes pratiques de laboratoire en prenant les pr cautions appropri es d crites dans le document des Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 d Mai 1999 ou derni re dition R ACTIFS CONTENANT DE L AZIDE DE SODIUM ATTENTION Certains r actifs de cette trousse contiennent de l azide de sodium L azide de sodium peut r agir avec la plomberie en plomb ou en cuivre et former des azotures ultra explosifs Pour leur mise au rebut rincer grande eau pour emp cher l accumulation d azide Pour plus d informations consulter Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts dans le manuel Guide Safety Management No CDC 22 publi par les Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA 1976 D claration des risques relatifs aux substances dangereuses des communaut s europ ennes Directive du conseil 1999 45 EC R 20 21 22 Nocif en cas d inhalation d ingestion et de contact avec la peau R 32 Un contact avec les acides d gage un gaz tr s toxique S28 Apr s un contact avec la peau laver imm diatement grande eau R ACTIFS CONTENANT DE L IODE 125 Cette trousse contient un produit radioactif qui ne d passe pas 1 5 uCi 55 5
97. ticuli re que d autres La m thode de calcul pour le laboratoire de contr le qualit DiaSorin est B Bo par rapport la concentration logarithmique 12 1 Calculer la CPM moyenne pour chaque talon contr le et chantillon inconnu 12 2 Soustraire la CPM moyenne des tubes NSB de toutes les num rations 12 3 Diviser la CPM corrig e de chaque talon contr le ou chantillon inconnu par la CPM corrig e de l talon 0 CPM de l talon ou de l chantillon inconnu CPM de NSB B Bo x100 CPM de l talon 0 CPM de NSB 12 4 En utilisant du papier logarithmique ou semi logarithmique a 2 cycles tracer le pourcentage B Bo pour les talons calcitonine axe vertical par rapport a la concentration axe horizontal 12 5 Tracer la droite de meilleur ajustement d un point l autre 12 6 Interpoler les taux de calcitonine dans les chantillons inconnus d apr s le trac 12 7 Si un chantillon d terminer est sup rieur l talon le plus lev il doit tre dilu avec l talon 0 et dos de nouveau 12 8 Si un chantillon inconnu a t dilu corriger en fonction du facteur de dilution appropri 12 9 Calculer la liaison maximale en divisant la CPM de l talon 0 par les num rations totales moyennes obtenues dans les tubes de num ration totale 16 TABLEAU II Donn es d chantillon RIA Calcitonine Il Diasorin CPM CPM CPM Pourcent Pourcent Conc Tube en double moyenne corrig e de liaison B
98. tients lorsqu il est utilis avec les r actifs et selon le mode d emploi de ce dosage diagnostique in vitro comme recommand ELIMINER TOUS LES SURPLUS DE REACTIF NE PAS CONGELER 4 3 Antis rum calcitonine r actif lyophilis Le s rum de ch vre anticalcitonine est dilu dans un tampon BSA borate contenant de l azide de sodium 0 196 et un colorant bleu Reconstituer chaque tube avec 14 ml d eau purifi e m langer et laisser reposer entre 15 et 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu bien m langer avant utilisation 4 4 1251 Calcitonine r actif lyophilis De la calcitonine humaine synth tique est marqu e l iode 125 et dilu e dans un tampon BSA borate EDTA qui contient de l azide de sodium 0 496 et un colorant rouge Reconstituer le tube avec 7 ml d eau purifi e m langer et laisser reposer pendant 15 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu m langer d licatement avant utilisation 4 5 Complexe pr cipitant calcitonine r actif lyophilis Du s rum de ch vre normal pr pr cipit avec du s rum anti ch vre d ne et du poly thyl ne glycol PEG est dilu dans un tampon BSA borate contenant de l azide de sodium 0 1 Reconstituer le tube avec 35 ml d eau purifi e Bien m langer jusqu ce que la suspension apparaisse homog ne puis laisser reposer pendant 30 minutes minimum temp rature ambiante en m langeant de temps en temps 12 4 6 Contr les calcitonine
99. tituciones que reciben radiois topos con licencia espec fica La recepci n uso transferencia y eliminaci n de los materiales radiactivos se rigen por la normativa y las condiciones de la licencia en cuesti n ADVERTENCIA Este producto contiene una sustancia qu mica conocida por el Estado de California como causante de c ncer ATENCI N La radiactividad impresa en el interior del paquete puede diferir ligeramente de la impresa en la etiqueta de la caja y en la del vial del trazador La etiqueta de la caja y la del trazador indican la cantidad real de radiactividad en la fecha de la calibraci n mientras que el prospecto del paquete indica la radiactividad te rica del equipo 6 INDICACIONES DE POSIBLE DETERIORO DE LOS REACTIVOS DEL EQUIPO 6 1 Presencia de part culas an malas en alguno de los reactivos 6 2 Desviaci n en la pendiente o posici n de la curva de calibraci n con respecto al resultado habitual 6 3 Disminuci n de la uni n m xima 6 4 Alto nivel de uniones no espec ficas 7 RECOGIDA Y PREPARACI N DE LA MUESTRA Para el ensayo hacen falta por duplicado cien microlitros de suero Recoja la sangre por punci n venosa en un tubo de vidrio vac o de 5 10 mL Centrifugue durante quince minutos con 760 x g para obtener suero no hemolizado Para mantener la integridad de la muestra no se requieren aditivos ni conservantes Todos los materiales de pl stico vidrio u otros que entren en contacto con la muestra deben est
100. tor 0 200 uL of calcitonin antiserum blue d Calcitonin calibrators 100 uL of calcitonin calibrator 200 uL of calcitonin antiserum blue 4 10 11 e Quality control and unknown samples 100 uL of serum 200 uL of calcitonin antiserum blue 9 6 Vortex the tubes gently without foaming and incubate for 16 24 hours at 2 8 C 9 7 Add 100 pL of 951 calcitonin red to all tubes 9 8 Vortex the tubes gently without foaming and incubate for 16 24 hours at 2 8 C 9 9 Vigorously mix the precipitating complex add 500 uL to all tubes except the total count tubes 9 10 Vortex the tubes gently without foaming and incubate for 15 25 minutes at 20 25 C 9 11 Centrifuge using 760 x g for twenty minutes at 20 25 C 9 12 Immediately decant the supernatant from all the tubes except the total count tubes by inverting them for a maximum of two minutes Blot the tubes with absorbent paper to remove any drops of supernatant that may be remaining on the rims before turning the tubes upright 9 13 Using a gamma scintillation counter count the precipitate of each tube and the total count tubes for a sufficient time to achieve statistical accuracy See Limitations of the Procedure section PROCEDURAL COMMENTS 10 1 Add each aliquot of reagent to the lower third of the assay tube to ensure complete mixture of reagents 10 2 Assay tubes must be set up on crushed ice to avoid spuriously high values 10 3 Some manufacturers disposable bo
101. tten kalibriert auf die Abgabe von 100 ul und 200 ul b Multipipetten kalibriert auf die Abgabe von 200 ul und 500 ul 8 6 Destilliertes Wasser G 1118 x 102 Radius in cm U min 25 10 TESTVERFAHREN 9 1 Unbekannte Proben auftauen und auf Crash Eis belassen 9 2 Lyophilisierte Reagenzien rekonstituieren und gefrorene Reagenzien vollst ndig auftauen lassen Die Reagenzien d rfen maximal auf 20 25 C erw rmt werden Vorsichtig mischen und vor dem Gebrauch auf Eis lagern 9 3 Markierte Einweg Glasr hrchen 12 x 75 mm in doppelter Ausf hrung aufstellen siehe Testplan auf der letzten Seite 9 4 Den R hrchenst nder auf Crash Eis aufbewahren 9 5 Reagenzien wie folgt zugeben a R hrchen f r die Gesamtz hlung Bis Schritt 7 beiseite legen b Nichtspezifische Bindung NSB 100 ul des Nullkalibrators c Nullkalibrator 100 ul des Nullkalibrators 200 uL des Calcitonin Antiserums blau d Calcitonin Kalibrator 100 uL des Calcitonin Kalibrators 200 uL des Calcitonin Antiserums blau e Qualit tskontrolle und unbekannte Proben 100 uL des Serums 200 uL des Calcitonin Antiserums blau 9 6 Die R hrchen vorsichtig ohne Schaumbildung sch tteln und 16 24 Stunden lang bei 2 8 C inkubieren 9 7 Allen R hrchen 100 pl Jod 5 rot zusetzen 9 8 Die R hrchen vorsichtig ohne Schaumbildung sch tteln und 16 bis 24 Stunden lang bei 2 8 C inkubieren 9 9 Den prazipitierende Komplex gr ndlich mischen 500 ul zu allen
102. ult Consulter les Gabraudhsanwel Consulte las Consultare le Instructions instructions sung beachten instrucciones de istruzioni per for Use d utilisation 9 uso l uso In vitro A Elena In vitro Diagn stico in Diagnostica in diagnostic Diagnostic in vitro Diagnostikum vitro vitro Lot No No de lot Chargen Nr N mero de lote Lotto n Temperature Limitation de Temperaturbereich Limitaci n de Limite della limitation temp rature P temperatura temperatura Antiserum Antis rum Antiserum Antisuero Antisiero Precipitating M a Reactivo Reagente reagent R actif pr cipitant Fallungsreagenz precipitante precipitante Trazador Tracciatore Tracer antigen Traceur antig ne Tracer 25 antigeno antigene etichettato con 125 Calibrator talon Kalibrator Calibrador Calibratore Control serum S rum de contr le Kontrollserum Suero de control Siero di controllo Radioactive Radioactif Radioaktiv Radiactivo Radioattivo Gesundheits n Harmful Nocif sch dlich Nocivo Nocivo SYMBOLS USED WITH DEVICES CONTINUED ON NEXT PAGE Continued from previous page Symbols used with devices C M Bee IVD o He CAL sol Swedish Europeisk verensst mmeise Utg ngsdatum Tilverkare Se bruksanvisningen Diagnostik in vitro Batch nummer Temperatur begr nsning Antiserum Utf llningsreagens Sp relement antigen betecknad 125
103. ung von 250 pg ml zu erhalten 500 uL von 250 pg ml Kalibrator zu 500 uL des Nullkalibrators geben und mischen um eine L sung von 125 pg ml zu erhalten 500 uL von 125 pg ml Kalibrator zu 500 uL des Nullkalibrators geben und mischen um eine L sung von 62 5 pg ml zu erhalten 500 pL von 62 5 pg ml Kalibrator zu 500 uL des Nullkalibrators geben und mischen um eine L sung von 31 25 pg ml zu erhalten ACHTUNG Die R hrchen w hrend der Serienverd nnungen und vor der Verwendung mit dem Test auf Crash Eis belassen Der Calcitonin Kalibrator von DiaSorin wurde entsprechend dem Calcitonin Standard 70 234 der Weltgesundheitsorganisation WHO analysiert Die Kalibratoren des Kits sind mit Patientenproben austauschbar wenn sie mit Reagenzien verwendet werden und dieser diagnostische in vitro Test wie empfohlen durchgef hrt wird BERSCH SSIGES MATERIAL ENTSORGEN NICHT EINFRIEREN 4 3 Calcitonin Antiserum Lyophilisiertes Reagenz Ziege Anticalcitonin Serum mit BSA Boratpuffer verd nnen der Natriumazid 0 1 96 enth lt und blauen Farbstoff zugeben Das Fl schchen mit 14 ml destilliertem Wasser verd nnen mischen und 15 20 Minuten bis zur vollst ndigen L sung des Inhalts stehen lassen vor dem Gebrauch gr ndlich mischen 4 4 121 Calcitonin Lyophilisiertes Reagenz Synthetisches humanes Calcitonin mit Jod 125 markieren und in einem BSA Borat EDTA Puffer mit Natriumazid 0 4 und zugesetztem roten Farbstoff verd nnen Das Fl schchen
104. vid 2 8 C Skaka utf llningskomplexet kraftigt pipettera 500 pL till alla r r utom totalaktivitetsr ren Vortexa r ren f rsiktigt utan att det bildas skum och inkubera dem 15 20 minuter vid 20 25 C Centrifugera r ren 20 minuter vid 760 x g och 20 25 C Dekantera genast supernatanten fr n alla r r utom totalaktivitetsr ren genom att v nda dem upp och ner i h gst 2 minuter H ll r ren mot absorberande papper f r att f bort eventuella supernatantdroppar fr n kanterna innan du v nder r ren r tt igen Anv nd gammar knare och r kna fallningen i varje r r samt totalaktivitetsr ren under tillr ckligt l ng tid f r att statistiskt s kra resultat ska erh llas Se avsnittet Metodbegr nsningar KOMMENTARER TILL PROCEDURERNA 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 Tills tt alla reagens till den nedersta tredjedelen av provr ret s att reagensen kan blandas fullst ndigt Assayr ren m ste g ras i ordning p krossad is f r att undvika falskt h ga v rden Eng ngs borosilikatglasr r r r fr n vissa tillverkare kan ge en f rh jd ospecifik bindning Plastr r f r ej anv ndas i denna assay Om du v ljer att suga bort supernatanten fr n f llningen m ste du vara f rsiktig s att du inte r r upp f llningen F r att bekr fta att ett RIA test ger konsekventa resultat kan man kontrollera ett antal andra faktorer DiaSorin rekommenderar att man regelbundet kontrollerar f ljande parametrar f r att vara s k
105. y 2 reactivo liofilizado Suero humano preparado en caso necesario con la cantidad adecuada de calcitonina humana sint tica para obtener una concentraci n dentro del rango especificado Se afiaden azida s dica 0 1 y otros estabilizadores Reconstituya el vial con 1 mL de agua purificada mezcle y deje reposar durante 15 20 minutos hasta que el contenido se disuelva por completo mezcle a fondo y trate la muestra como desconocida Los rangos est n impresos en los viales del control PRECAUCI N DESECHE EL EXCESO NO LO CONGELE 34 5 ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES PARA UTILIZACION EN DIAGNOSTICOS IN VITRO No debe destinarse al uso interno o externo en seres humanos ni animales REACTIVOS QUE CONTIENEN MATERIAL DE ORIGEN HUMANO Tr tense como potencialmente infecciosos Todas las unidades de suero plasma de donante usadas en la preparaci n de este producto se han comprobado mediante un m todo aprobado por la FDA estadounidense demostrando no ser reactivas a la presencia de AgsHB anticuerpos de VHC y anticuerpos de VIH 1 2 Aunque estos m todos son altamente precisos no garantizan la detecci n de todas las unidades infectadas Este producto tambi n puede contener otros materiales de origen humano para los cuales no existe prueba homologada Dado que ning n m todo de prueba puede garantizar plenamente la ausencia del virus de la hepatitis B VHB de la hepatitis C VHC el virus de inmunodeficiencia humana VIH u otros agentes

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