SeroHSV IgM
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1. 10 11 Tubes essais propres pour proc der la dilution des s rums de patients tester Flacon de dilution usage unique en mati re plastique pour diluer le conjugu la peroxydase concentr Micro pipettes volume ajustable et pipettes multi canaux gamme de 5 50 50 200 et 200 1000u1 avec embouts jetables Une fiole jaug e de 1000ml Un cylindre gradu de 50 ml Une bouteille de lavage Papier absorbant Vortex Un bain marie 37 C quip d un couvercle ou une chambre humide au sein d un incubateur 37 C Un lecteur de micro plaques ELISA avec filtres de 450 et 620nm Eau distill e ou d min ralis e 2 fois Pr cautions d emploi Pour usage DIAGNOSTIC In Vitro 1 Ce coffret contient du s rum humain test par des m thodes approuv es par la FDA et r v l N gatif pour l AgHbs et pour les anticorps de l HCV et de l HIV Toutefois compte tenu du fait qu aucune m thode reconnue ne permet de garantir que les produits d riv s de sang humain ne transmettent pas d infection tous les composants de ce coffret issus de sang humain doivent tre manipul s comme des produits potentiellement infectieux La solution de substrat TMB est un produit irritant pour la peau et pour les muqueuses Tout contact direct est viter Tous les composants de ce coffret ont t calibr s et test s par lot Par cons quent il est recommand de ne pas m langer le2. 1 Flacon de 100ml Tampon de dilution de s rum IgM rouge Tampon pr t l emploi contenant des anticorps anti IgG humain et moins de 0 05 de Procline comme conservateur 1 Flacon de 50 ml Tampon de dilution du conjugu vert Tampon pr t l emploi Contient moins de 0 05 de Procline comme conservateur 1 Flacon de 40 ml Contr le n gatif S rum humain N gatif en IgM de l HSV pr t l emploi Contient moins de 0 05 de Procline et de 0 1 d azide de sodium comme conservateurs 1 Flacon de 2 ml Contr le positif S rum humain Positif en IgM de l HSV pr t l emploi Contient moins de 0 05 de Procline et de 0 1 d azide de sodium comme conservateur 1 Flacon de 2 ml Cut off s rum Solution d IgM de l HSV pr te l emploi destin e d terminer la valeur du cut off Contient moins de 0 1 d azide de sodium et de 0 05 de Procline comme conservateurs 1 Flacon de 2 5 ml HRP Conjugu la P roxydase concentr 300X Conjugu anti IeM humaine sp cifique chaine u Contient moins de 0 05 de Procline comme conservateur 1 Tube de 0 2 ml Substrat TMB Solution pr te l emploi contenant du 3 3 5 5 Tetramethylbenzidine en tant que chromog ne et du p roxyde comme substrat 1 Flacon de 14 ml Solution d arr t de la r action Solution pr te l emploi de HSO 1M 1 Flacon de 15 ml Couvercle pour la micro Plaque 1 Unit Manuel d instructions 1 MA152 01F 01 02 13 09 FLO
3. 350u1 de tampon de lavage vider le liquide et r p ter l op ration 3 fois au total 10 S cher les barrettes et le support en les retournant et en les tapotant doucement sur un papier absorbant propre 99 C Incubation avec le conjugu HRP 11 Le conjugu anti IgM humaine HRP concentr doit tre dilu sa concentration d usage juste avant son utilisation Diluer le conjugu anti IgM humaine HRP au 1 300 avec le diluant pour conjugu MA152 01F 01 02 13 Par exemple pour 2 barrettes pr parer un minimum de 3ml de conjugu dilu en proc dant comme suit M langer 10yul de conjugu concentr avec 3ml de diluant pour conjugu 12 D poser 50u1 de conjugu HRP dilu dans chaque puits 13 Couvrir les barrettes avec le couvercle et laisser incuber durant 1h 37 C en chambre humide 14 Jeter le liquide contenu dans les puis Proc der l tape de lavage telle qu elle est d crite ci dessus D Incubation avec le Substrat TMB 15 D poser 100ul de Substrat TMB dans chaque puits couvrir les barrettes avec le couvercle et laisser incuber 15 minutes temp rature ambiante 16 La r action est arr t e par addition de 100ul de solution d arr t H2S0 1M dans chaque puits E D termination des r sultats 17 Lire la densit optique 450 620nm et enregistrer les r sultats obtenus Cette lecture doit tre effectu e moins de 30 minutes apr s l addition de solution d arr t qui
4. IHMF The 12 management strategies in Herpes 1997 1 70 5 Steben M Sacks S L The Canadian Journal of Human Sexuality November 1997 1 14 http hwcweb hwc ca Genital Herpes The epidemiology and control of a common sexually transmitted disease 6 Screening for genital Herpes Simplex Guide to clinical preventive services 2 ed Infectious diseases Columbia Presbyterian Medical Center http cpmenet columia edu Te Atlanta Maternal Fetal Medicine P G Clinical Discussions 1996 4 4 http www atlanta mfm com Riott I Riott s Essential Immunology 9 edition Pp 112 129 9 Tortora G S Grabowski S R Principles of anatomy and physiology 8 edition Pp 88 950 10 Erlich Kims Safrim Sharon June 1998 Herpes Simplex Virus The Aids Knowledge Base http www hivsite ucsf edu 11 Brown Z Selke S Zeh S N Engl J Med 1997 337 509 15 The acquisition of Herpes Simplex Virus during pregnancy og MA152 01F 01 02 13 4
5. interrompt la r action chromog nique Note Avant la lecture liminer toute bulle d air pouvant se trouver dans le liquide contenu dans les puits et essuyer soigneusement le dessous de la plaque ELISA Crit res de validation du test Le test est valide si les crit res suivant sont atteints 1 D O contr le positif 20 8 2 Rapport D O contr le positif D O cut off gt 2 3 D O contr le n gatif lt 0 25 Si ces crit res ne sont pas atteints le test est consid r comme n tant pas valide et doit tre recommenc Calcul des r sultats 1 Calculez la valeur moyenne des D O obtenues lors de la mesure en double du cut off 2 Afin de normaliser les r sultats obtenus dans diff rents tests un index cut off est calcul selon la formule ci apr s 3 INDEX CUT OFF D O chantillon Moyenne des 2 D O cut off H Interpr tation des r sultats INDEX CUT RESULTAT DIAGNOSTIC OFF NEGATIF Absence Absence d anti d infection HSV IgM d celable POSITIF Pr sence d une Taux infection HSV en cons quent cours d anti IgM LIMITE Possibilit de 1 1 1 Taux bas d anti Contact avec IgM PHSV Pr levez un second chantillon dans 2 4 semaines 1 Lors de r sultats limites pr lever un second chantillon 2 4 semaines apr s le premier assay et retester les 2 en parall le Si le r sultat est nouveau limite l chantillon peut tre consid r comme tant n gatif
6. micro puits non utilis es doivent tre replac es dans la pochette aluminium en pr sence de la plaquette de produit d shydratant Rouler l extr mit et obturer l aide de ruban adh sif tout le long de l ouverture afin d en assurer l tanch it 4 Diluer le tampon de lavage au 1 20 avec de l eau d min ralis e 2 fois ou de l eau distill e Par exemple pour pr parer 1 litre de tampon de lavage ajouter 50ml de tampon de lavage concentr 950ml d eau d min ralis e 2 fois ou d eau distill e B Incubation des chantillons de s rum et des contr les 5 Diluer chaque s rum de patient tester au 1 105 avec le diluant pour s rum fourni comme suit Ajoutez 10 ul de s rum 200u1l de diluant pour s rum 1 21 et rediluer en reprenant 25ul de la dilution au 1 21 que l on ajoute 1001 de diluant pour s rum 6 D poser 50uL du Cut off s rum dans deux puits 50 ul dans chaque puit 50ul de contr le n gatif 50 ul de contr le positif et 50 ul de chaque dilution au 1 105 des chantillons tester dans les puits respectifs des barrettes de la micro plaque 7 Couvrir avec le couvercle et laisser incuber durant 1h 37 C en chambre humide Jeter le liquide contenu dans les puits 9 Etapes de Lavages Lavage Manuel Remplir chaque puits ras bord avec le tampon de lavage vider le liquide et r p ter l op ration 3 fois au total Lavage automatique Remplir chaque puits avec
7. thodes classiques Ne pas utiliser d chantillons de s rum ayant t inactiv par la chaleur Il est recommand d viter d utiliser des chantillons lip miques troubles ou contamin s Toute pr sence de mati res en suspension ou de pr cipit peut fausser les r sultats De tels chantillons peuvent tre clarifi s par centrifugation ou par filtration avant d effectuer le test Conservation des pr l vement Les chantillons doivent tre conserv s entre 2 et 8 C et test s dans les 7 jours suivant leurs pr l vements Si le d lai de stockage pr vu est plus long aliquoter les chantillons et congeler 20 C Eviter les tapes r p t es de d cong lation et recong lation Mode op ratoire A Pr paration des r actifs 1 Ramener tous les composants du coffret ainsi que les chantillons cliniques temp rature ambiante Bien homog n iser le Cut off s rum les contr les n gatif et positif et les chantillons cliniques avant d effectuer le test 2 D terminer le nombre total d chantillons tester Outre les chantillons inclure 2 puits pour le Cut off serum 1 puit pour le contr le n gatif et 1 puit contr le positif 3 Retirer la micro plaque de sa pochette d aluminium en coupant une extr mit proche de la partie scell e Laisser le nombre requis de barrettes selon le calcul effectu pr c demment sur le support Les barrettes de
8. CE SeroHSV IgM M thode immuno enzymatique ELISA pour le dosage des anticorps anti IgM sp cifiques de L Herpes Simplex Virus Type 1 et 2 Num ro de r f rence SAV 152 096 Coffret de 96 tests Pour usage diagnostic In Vitro Conserver entre 2 et 8 C Ne pas congeler al Diagnostics Ltd 3 Habosem St Ashdod 77610 ISRAEL Tel 972 8 8562920 Fax 972 8 8523176 E mail support savyondiagnostics com Utilisation SeroHSV IgMTM est destin effectuer le dosage des anticorps anti IgM sp cifiques des Virus 1 et 2 de L HERPES SIMPLEX par m thode immuno enzymatique ELISA Ce test permet de faire un diagnostic pr coce d une infection courante sur un seul s rum par d termination des ac anti IgM Pour Usage DIAGNOSTIC In Vitro Int r t diagnostic du test L Herpes Simplex Virus HSV est le virus le plus fr quemment rencontr dans les infections aigu s r cidives chez les tres humains Une fois la maladie contract e l HSV infecte les cellules nerveuses sensorielles innervant les muqueuses infect es lors de l infection aigu et migre dans les ganglions sensoriels localis s pour y demeurer l tat latent A l tat actif le virus provoque l apparition de v sicules et d ulc res La plupart des personnes infect es par l HSV peuvent produire des particules virales p riodiquement m me en l absence de signes cliniques gt 4 1 Il existe deux types d HSV
9. L HSV type 1 connu sous le nom d Herp s labial qui le plus fr quemment infecte la r gion orale provoquant des boutons de fi vre L HSV type 2 connue sous le nom d Herp s g nital qui le plus souvent infecte la sph re g nitale et la zone p ri anale Toutefois les deux types d Herp s sont susceptibles de provoquer des infections des localisations diverses et peuvent galement provoquer des infections de la peau des yeux et du cerveau La fr quence de r cidives de l HSV 2 est sup rieure celle de PHSV 1 Les HSV de type 1 et 2 se transmettent en pr sence ou en absence de v sicules ou de tout autre sympt me clinique La contamination se fait par la salive les s cr tions respiratoires et par contact direct contact sexuel par la peau ete 9 Les infections par HSV pr sentent des cons quences pathologiques graves particuli rement dans le cas de patients immuno d prim s et chez les femmes enceintes La transmission du virus au nouveau n durant l accouchement peut provoquer chez celui ci une maladie n o natale mettant sa vie en danger Les infections g nitales par l HSV 2 sont associ es un risque accru de cancer du col de l ut rus Initialement les infections par l HSV se caract risent par la pr sence transitoire d IgM suivie par une apparition plus tardive MA152 01F 01 02 13 d IgG et d IgA qui ont tendance persister dans le temps Il est possib
10. ce European Authorized Representative Obelis s a Boulevard G n ral Wahis 53 B 1040 Brussels 1 En aucun cas un test s rologique unique ne peut tre Tel 32 2 732 59 54 Fax 32 2 732 60 03 d terminant pour tablir un diagnostic d finitif Toutes les E mail mail obelis net Mobile 32 475 45 46 60 donn es cliniques doivent tre prises en consid ration 2 Un chantillon pr lev trop t t durant la p riode d infection no f aT nE primaire est susceptible de ne pas contenir d anticorps un Limitation de taux d celable 2 C temp rature Si une infection par l HSV est soup onn e pr lever un chantillon 2 4 semaines plus tard et tester les 2 en parall le Cli Consulter la notice Performances du test Dispositif m dical pour le diagnostic in vitro Pr cision Intra essai all Fabricant Echantillon Valeur Moyenne C V Rer Repr sentant autoris en de D O Europe Valeur moyenne de D O 0 196 Bibliographie 1 Ashley R L Wold P clinical Microbiology reviews Jan 1999 12 1 1 8 2 Di Carlo R P Medscape 1999 Preventing genital HSV infections on a large scale 13 meeting of the international society for STD research July 11 14 1999 3 Diaz Mitoma F Sibbald R et al JAMA 1998 280 887 92 Oral Famiciclovir for the suppression of recurrent genital Herpes A randomized controlled trial 4 The International Herpes Management Forum
11. eur d onde de 450 620 nm 8 La densit optique est proportionnelle la concentration d anticorps sp cifiques fix s sur l antig ne de la plaque Mode op ratoire Dans les puits de la microplaque sensibilis s avec les antig nes de l Herp s simplex 1 et 2 Introduire 50u1 de Cut off s rum de contr le N gatif de contr le Positif ainsi pu une dilution au 1 105 de chacun des chantillons 4 Couvrir la plaque et laisser incuber 1h 37 C en chambre humide 4 Laver 3 fois avec le tampon de lavage 7v Ajouter 50ul de Conjugu HRP dilu au 1 300 7v Couvrir la plaque et laisser incuber 1h 37 C en chambre humide we Laver 3 fois avec le tampon de lavage 7v Ajouter 100u1 de Substrat TMB 7v Couvrir la plaque et laisser incuber 15 min temp rature ambiante 7v Ajouter 100ul de solution d arr t 4 Lire la densit optique 450 620nm we Calculer et interpr ter les r sultats Mat riel additionnel n cessaire non fourni Composition du coffret Coffret de 96 tests 1 Micro Plaque sensibilis e l HSV 96 puits 8X12 s cables puits par puits sensibilis s avec les antig nes HSV type 1 et 2 pr sent s dans une pochette d aluminium scell e contenant une plaquette de produit d shydratant 2 10 11 12 1 Plaque Tampon de lavage concentr 20 X Tampon PBS Tween Contient moins de 0 05 de Procline comme conservateur
12. l HSV2 Le standard universel pour diff rentier les anticorps de PHSV1 de ceux de l HSV2 est la technique Western Blot WB qui est un test difficile r aliser et interpr ter Si l on tient compte du fait qu une prise de sang est un acte facile r aliser le diagnostic s rologique sera la m thode de d pistage la plus ais e Le test SeroHSV IgM permet la recherche des IgM anti HSV par m thode ELISA Principe du test 1 Un m lange de prot ines de virus partiellement purifi es de PHSV 1 et de l HSV 2 est adsorb sur les puits de la micro plaque du test SeroHSV IgMTM 2 Le s rum tester est dilu au 1 105 et incub dans la plaque de SeroHSV IgM Durant cette tape les anticorps sp cifiques se fixent l antig ne 3 Les anticorps non sp cifiques sont limin s par lavages successifs 4 On ajoute ensuite un conjugu anti IgM humaine coupl la p roxidase HRP Durant cette tape PHRP se fixe au complexe antig ne anticorps form au pr alable 5 L exc s de conjugu non fix est limin par lavages successifs 6 On ajoute alors un substrat TMB qui en tant hydrolys par la p roxydase va d velopper une coloration bleue du substrat 7 la r action enzymatique est stopp e par l addition d une solution d acide sulfurique La couleur bleue devient alors jaune La densit optique de la solution ainsi obtenue est lue sur un lecteur de plaques ELISA une longu
13. le de retrouver des IgM en cas de r cidives graves Un diagnostic exact et pr coce est d terminant pour initier une th rapeutique appropri e et pour ma triser la fr quence des risques de r cidive Durant ces derni res ann es on a pu constater un accroissement consid rable des cas rapport s d Herp s g nital Aux Etats Unis lorsque l on a atteint l ge de 40 ans le risque d infection par l HSV 2 est compris entre 20 et 25 La pr valence est plus lev e parmi les femmes que parmi les hommes L Herp s peut repr senter jusqu 50 des Maladies Sexuellement Transmissibles MST 1 L isolement du virus la d tection de l antig ne par immuno fluorescence directe IFD et les tests de s rologie sont les plus couramment utilis s pour le diagnostic in vitro des infections par PES La culture positive et l IFD permettent de d terminer le type du virus et donnent des r sultats consid r s comme tant cat goriques Toutefois les difficult s de pr l vement et de transport la longueur et la complexit de ces m thodes de d tection directe font que ces m thodes ne peuvent tre utilis es comme test de d pistage La plupart des tests s rologiques disponibles bas s sur une technique ELISA IFI ou d agglutination bien que plus ais s r aliser posent le probl me crucial de diff rentiation entre les deux types d HSV du fait de la similitude antig nique importante entre l HSVI et
14. s composants provenant de lots diff rents car cela peut fausser les r sultats L acide sulfurique dilu HSO 1M est un produit irritant pour les yeux et pour la peau En cas de contact avec les yeux rincer abondamment l eau courante et consulter un m decin sp cialis Conservation des r actifs Tous les r actifs fournis doivent tre conserv s entre 2 et 8 C Avant que les flacons ne soient ouverts les r actifs sont stables jusqu la date de p remption indiqu e sur le coffret Les r actifs encore bouch s ou scell s peuvent tre conserv s durant quelques heures temp rature ambiante sans provoquer de d t riorations de ces derniers NE PAS CONGELER Apr s ouverture du coffret la p remption est de 90 jours Les barrettes de micro puits non utilis es doivent tre replac es dans la pochette en papier d aluminium en pr sence de la plaquette de produit d shydratant Rouler l extr mit et obturer l aide de papier adh sif tout le long de l ouverture afin d en assurer l tanch it Il est possible que des cristaux se forment dans le tampon de lavage concentr 20X Ce ph nom ne est parfaitement normal il suffit de r chauffer le tampon 37 C avant de le diluer Apr s dilution la solution est stable durant 21 jours conserv e entre 2 et 8 C Pr l vements Pr parer les s rums partir d chantillons sanguins pr lev s aseptiquement selon les m
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