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Alpha Fetoprotein (AFP) ELISA

1. b dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Standard O mix thoroughly 6 TEST PROCEDURE 6 1 General Remarks All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use All reagents must be mixed without foaming Once the test has been started all steps should be completed without interruption Use new disposal plastic pipette tips for each standard control or sample in order to avoid cross contamination Absorbance is a function of the incubation time and temperature Before starting the assay it is recommended that all reagents are ready caps removed all needed wells secured in holder etc This will ensure equal elapsed time for each pipetting step without interruption Asa general rule the enzymatic reaction is linearly proportional to time and temperature Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 4 6 2 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 Assay Procedure Each run must include a standard curve 1 2 no 6 3 Secure the desired number of Microtiter wells in the frame holder Dispense 25 uL of each Standard Control and samples with new disposable tips into appropriate wells Dispense 100 uL Enzyme Conjugate into each well Thoroughly mix for 10 seconds It is important to have a complete mixing in this step Incubate for 30 minutes at room temperature Briskly shake out the contents of the wells Rinse the wells 5 times with distilled water 400 u
2. Cela pourrait engendrer irritations ou br lures de la peau BND 5 bromo 5 nitro 1 3 dioxane Bromonitrodioxane MIT 2 methyl 2H isothiazol 3 one M thylisothiazolone Remarque Un Standard 0 suppl mentaire peut tre fourni sur demande 4 1 1 Equipement et mat riel requis mais non fournis Un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr 450 10 nm ex le lecteur de microplaques de DRG Instruments GmbH Des micro pipettes de pr cision variables et calibr es Du papier absorbant De l eau bidistillee 42 Stockage et stabilit du kit Les r actifs contenus dans des flacons non ouverts stock s 2 8 C seront stables jusqu la date d expiration inscrite sur l tiquette Ne pas utiliser les r actifs au del de cette date Les r actifs contenus dans des flacons ouverts doivent tre stock s 2 8 C Les micro plaques doivent tre stock es 2 8 C Une fois la capsule d aluminium ouverte attention bien refermer le flacon Les kits ouverts conservent leur activit durant 6 semaines s ils sont stock s comme pr c demment mentionn 4 3 Pr paration des r actifs Amener tous les r actifs et le nombre de barrettes n cessaires au test temp rature ambiante avant utilisation Standards Reconstituer le contenu lyophilis des flacons de standards avec 0 5 mL d eau bidistill e Remarque Les standards reconstitut s sont stables deux mois 2 8 C Pour un stockage pr
3. Le kit DRG AFP ELISA est bas sur une r action immuno enzymatique en sandwich en phase solide Les microplaques sont recouvertes avec un anticorps monoclonal dirig contre un antig ne sp cifique de la mol cule AFP Un aliquot de l chantillon contenant le la AFP endog ne est incub dans un puits avec enzyme conjugu e c est dire un anticorps anti AFP conjugu e avec la peroxidase de Raifort horseradish peroxidase HRP Apres l incubation le conjugu non li est limin durant le lavage des puits La quantit de conjugu HRP li e est proportionnelle la concentration de AFP contenu e dans l chantillon Suite l addition de solution substrat l intensit de la coloration obtenue est proportionnelle la concentration de AFP contenu e dans l chantillon A PRECAUTIONS D UTILISATION e Ce kit est uniquement destin aux tests diagnostiques in vitro e Les informations concernant la toxicit des r actifs contenus dans ce kit sont pr sent es dans la fiche de s curit Material Safety Data Sheets e Tousles r actifs de ce kit contenant du s rum ou du plasma humain ont t test s avec des r sultats n gatifs pour le VIH IIl le HBsAg et le HCV selon les normes FDA en vigueur N anmoins lors de leur utilisation tous les r actifs de ce kit doivent tre manipul s avec pr caution e Eviter les contacts avec la Stop Solution celle ci contient 0 5 M de H S04 Cela pourrait engendrer irritations o
4. Serique Physiologique de l Alpha Foetoproteine chez l Homme et le Rat French in Alpha Feto Protein Masseyeff R ed p 313 INSERM Paris 1974 Silver H K B Gold P Feder S Freedman So O and Shuster J Radioimmunoassay for human alpha fetoprotein Proc Nat Acad Sci U S A 70 526 1973 Waldmann T A and Mclntire K R The use of a radioimmunoassay for alpha fetoprotein in the diagnosis of malignancy Cancer 34 1510 1974 Kohn J Orr A H McElwain T J Bentall M and Peckham M J Serum alpha fetoprotein in patients with testicular tumors Lancet 2 433 1976 Abelev G I Alpha fetoprotein in ontogenesis and its association with malignant tumors Adv Cancer Res 14 295 1971 Scardino P T Cox H D Waldermann T A Melntire K R Mittemeyer B and Javadpour N The value of the serum tumor markers in the staging and prognosis of germ cell tumors of the testis J Urol 118 994 1977 Bosl G J Lange P H Fraley E E Goldman A Nochomovitz L E Rosai J et al Human chorionic gonadotropin and alpha fetoprotein in the staging of nonseminomatous testicular cancer Cancer 47 328 1981 Lange P H McIntire K R and Waldmann T A Hakala T R and Fraley E E Serum alpha fetoprotein and human chorionic gonadotropin in the diagnosis and management of nonseminomatous germ cell testicular cancer Medical Intelligence 259 1237 1976 Javadpour N Mcintre K R and Waldmann T
5. direttamente la ditta DRG 9 CARATTERISTICHE DEL TEST 9 1 Assay Dynamic Range Le concentrazioni determinabili con questo test stanno tra 0 160 IU mL 9 2 Specificit degli anticorpi reazioni ad incrocio Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 9 3 Sensitivita analitica La sensitivit analitica stata calcolata dai valori medi piu due deviazioni standard di venti 20 repliche dello Standard O ed erano 1 78 IU mL Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 21 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 9 4 Precisione Per dettagli piu precisi consultare la metodica in inglese 9 5 Ritrovato Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese 9 6 Linearit Per dettagli piu precisi consultare la metodica in inglese 10 LIMITAZIONE DEL TEST 10 1 Sostanze interferenti Ogni manutenzione impropria dei campioni o modificazione del protocollo pu influenzare risultati Emoglobina fino a 4 mg mL bilirubina fino a 0 5 mg mL e trigliceridi fino a 30 mg mL non influenzano i risultati di questo test 10 2 Droghe interferenti Fino ad oggi nessuna sostanza farmaco conosciuta a noi che abbia influenzato la determinazione di AFPItalien nel campione 10 3 Effetto Hook di alti dosaggi Nessun effetto hook di aglomerazione stato osservato in questo test fino a 1600 IU mL di AFPitalien 11 ASPETTI LEGALI 11 1 Affidabilit dei risultati Il test deve essere eseguito esattamente se
6. AFP ELISA EIA 1468 1 EINLEITUNG Der DRG AFP ELISA wird zur quantitativen Bestimmung von Alfa Fetoprotein AFP in Serum eingesetzt Nur f r In vitro Diagnostik 2 TESTPRINZIP Der DRG AFP ELISA ist ein Festphasen Enzymimmunoassay der auf der Sandwichtechnik basiert Die Wells der Mikrotiterplatten sind mit einem monoklonalen Antik rper beschichtet der gegen eine definierte Antik rper Bindungsstelle des AFP Molek ls gerichtet ist Die Proben werden in die beschichteten Wells gegeben und mit einem Enzymkonjugat inkubiert Das Konjugat enth lt einen anti AFP Antik rper der mit Meerrettichperoxidase konjugiert ist Es wird ein Sandwichkomplex gebildet Das nicht gebundene Konjugat wird durch Waschen der Wells entfernt Anschlie end wird die Substratl sung zugegeben und die Farbentwicklung nach einer definierten Zeit gestoppt Die Intensit t der gebildeten Farbe ist proportional der AFP Konzentration in der Probe Die Extinktion wird bei 450 nm mit einem Mikrotiterplattenleser gemessen 3 VORSICHTSMARNAHMEN e Dieser Kit ist nur zum in vitro diagnostischen Gebrauch geeignet e Informationen zu im Kit enthaltenen gef hrlichen Substanzen entnehmen Sie bitte dem Materialsicherheitsdatenblatt e Alle Bestandteile dieses Testkits die humanes Serum oder Plasma enthalten wurden mit FDA gepr ften Methoden auf HIV I II HbsAg und HCV getestet und als negativ best tigt Jedoch sollten alle Bestandteile im Umgang und bei der Entsorgung wie
7. REFERENCIAS Effective 2008 07 tab 1 INTRODUCTION ni 29 2 PRINCIPE DU TEST 29 3 PRECAUTIONS D UTILISATION 29 4 COMPOSITION DU KIT 30 5 ECHANTILLON iii 31 6 REALISATION DU TEST 31 7 VALEURS ATTENDUES 33 8 CONTROLE DE QUALITE ee 33 9 CARACTERISTIQUES DU TEST 33 10 LIMITES D UTILISATION 34 11 ASPECTSLEGAUX eee 34 12 REFERENCES iritan a as 34 SYMBOLS USED WITH DRG ELISASS 35 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 1 INTRODUCTION 1 1 Intended Use The DRG AFP ELISA is an enzyme immunoassay for the quantitative in vitro diagnostic measurement of alpha fetoprotein AFP in serum 1 2 Summary and Explanation Alpha fetoprotein AFP is a glycoprotein with a molecular weight of approximately 70 KD 1 AFP is normally produced during fetal and neonatal development by the liver yolk sac and in small concentrations by the gastrointestinal tract 2 After birth serum AFP concentrations decrease rapidly and by the second year of life and thereafter only trace amounts are normally detected in serum 3 Elevation of serum AFP to abnormally high values occurs in several malignant diseases 4 7 most notably nonseminomatous testicular cancer and primary hepatocelluar carcinoma In the case of nonseminomatous testicular cancer a direct relationship has been observed between the incidence of elevated
8. a condizioni diverse cosicch le caratteristiche di legame potrebbero divergere leggermente e componenti chimici e reagenti preparati o gi utilizzati devono essere trattati e smaltiti secondo le norme di sicurezza nazionali sulle sostanze nocive e regolamenti di sicurezza di questo prodotto possono essere richiesti direttamente dalla ditta DRG Instruments GmbH regolamenti di sicurezza corrispondono alle norme EU 91 155 EC Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 17 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 4 COMPONENTI DEL KIT 4 1 Contenuto del kit 1 Microtiterwells Micropozetti 12x8 file separatamente staccabili 96 pozzetti Pozzetti ricoperti con l anti AFP anticorpo monoclonale 2 Standard Standard 0 4 5 flaconi liofillizzati 0 5 mL Concentrazione 0 10 40 80 160 IU mL Conversione 11U mL 1 21ng mL Gli standard sono calibrati contro lo Standard Internazionale NIBSC 1 International Standard for Alphafoetoprotein AFP AFP 1st IRP 72 225 Vedi preparazionedei reagenti Contiene 0 03 Proclin 300 0 015 BND e 0 010 MIT come conservante 3 Enzyme Conjugate Tracciante enzimatico 1 flacone 11 mL pronto all uso Anti AFP anticorpo coniugato alla perossidasi di rafano Contiene 0 03 Proclin 300 0 015 BND e 0 010 MIT come conservante 4 Substrate Solution Soluzione di substrato 1 flacone 14 mL pronto all uso TMB benzidine tetrametilico 5 Stop Solution Soluzione d arrest
9. concentraci n de AFP en la muestra Cuando se a ade la soluci n del sustrato de la peroxidasa la intensidad del color desarrollado es proporcional a la concentraci n de AFP en la muestra del paciente 3 PRECAUCIONES e Este kit es solamente para diagn stico in vitro e Para obtener informaci n de las sustancias peligrosas incluidas en el kit por favor mirar las hojas de los datos de seguridad del material e Todos los reactivos en este kit de ensayo que contienen suero o plasma humano se han ensayado y confirmado ser negativos para HIV I II HBsAg y HCV mediante procedimientos aprobados por la FDA Sin embargo todos los reactivos deben ser tratados tanto en su uso como dispensaci n como potencialmente biopeligrosos e Evitar contacto con Stop Solution que contiene H2SO 0 5 M Puede provocar irritaci n y quemaduras en la piel e Nunca pipetear con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y con membranas mucosas e No fumar comer beber o usar cosm ticos en reas donde las muestras o los reactivos del kit est n siendo usados e Usar guantes de l tex cuando se utilicen las muestras y los reactivos La contaminaci n microbiana de los reactivos o las muestras puede dar resultados err neos e El manejo debe realizarse de acuerdo a los procedimientos definidos por las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas e No utilizar los reactivos despu s de su fecha de caducida
10. de laboratorio es solamente una parte del cuadro cl nico de un paciente Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio est n en acuerdo con todo el cuadro cl nico de un paciente se pueden derivar consecuencias terap uticas Nunca deben derivarse consecuencias terap uticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo 11 3 Responsabilidad Cualquier modificaci n del kit y o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes puede afectar negativamente a los resultados esperados y en la validez de todo el test Esas modificaciones y o cambios invalidad cualquier reclamaci n de reposici n Las reclamaciones emitidas debidas a una mala interpretaci n de los resultados de laboratorio por parte del comprador referidos al punto 11 2 son tambi n inv lidas A pesar de todo en el caso de cualquier reclamaci n la responsabilidad del fabricante no excede el valor del kit Cualquier da o provocado al kit durante su transporte no est sujeto a la responsabilidad del fabricante 12 REFERENCIAS Consultar el manual de usuario en ingl s Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 28 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 1 INTRODUCTION Le kit de dosage immuno enzymatique DRG AFP ELISA propose les mat riaux requis pour la mesure quantitative de alpha foetoprot ine AFP dans le s rum Ce kit est utiliser uniquement dans le cadre de tests diagnostiques in vitro 2 PRINCIPE DU TEST
11. m gliche Gefahrenstoffe betrachtet werden e Der Kontakt mit der Stop Solution sollte vermieden werden da sie 0 5 M H2SO enth lt Schwefels ure kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen e Nicht mit dem Mund pipettieren und den Kontakt von Kitbestandteilen und Proben mit Haut und Schleimh uten vermeiden e Inden Bereichen in denen Proben oder Kitbestandteile verwendet werden nicht rauchen essen oder Kosmetika verwenden e Beim Umgang mit Proben oder Reagenzien Einweg Latexhandschuhe tragen Die Verunreinigung von Reagenzien oder Proben mit Mikroben kann zu falschen Ergebnissen f hren e Der Gebrauch sollte gem der Vorschriften einer entsprechenden nationalen Gefahrenstoff Sicherheitsrichtlinie erfolgen e Reagenzien nicht nach dem auf dem Kit Etikett angegebenen Verfallsdatum verwenden e Alle im Kit Protokoll angegebenen Mengen m ssen genau eingehalten werden Optimale Ergebnisse k nnen nur durch Verwendung kalibrierter Pipetten und Mikrotiterplatten Leseger te erreicht werden e Komponenten von Kits mit unterschiedlichen Lotnummern nicht untereinander vertauschen Es wird empfohlen keine Wells von verschiedenen Platten zu verwenden auch nicht wenn es sich um das gleiche Lot handelt Die Kits k nnen unter anderen Bedingungen gelagert oder versendet worden sein so dass die Bindungscharakteristik der Platten leicht unterschiedlich ausf llt e Chemikalien und zubereitete oder bereits benutzte Reagenzien m ssen gem
12. tico Enzymkompleks Enzymkomplex ZUNTT OKO EVZUNOU Complex Substrate Solu o de substrato Substratoplgsning Substratl sning EE Solution UTTOOTPWNATOG Stop Solution Solu o de paragem Stopoplosning Stopp l sning AidAuya TEPNATIOHOU Zero Standard Padr o zero Standard 0 Standard 0 Mp turro Mnd v Standard Calibrador Standard Standard Npotutra Control Controlo Kontrol Kontroll E EYXOS Assay Buffer Tamp o de teste Assay buffer Assay Buffer o Arakupa Wash Solution Solu o de lavagem Vaskebuffer Tv tt l sning AldAuya TA OEWG 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1 N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI Sample Diluent Conjugate Diluent Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 36
13. zu setzen Nur eine solche Vorbereitung garantiert gleiche Zeiten f r jeden Pipettiervorgang ohne Pausen Als generelle Regel gilt dass die enzymatische Reaktion linear proportional zu Zeit und Temperatur ist Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 12 6 2 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 Testdurchf hrung Jeder Lauf muss eine Standardkurve beinhalten 1 2 3 NN 6 3 Die ben tigte Anzahl Wells in der Halterung befestigen Je 25 uL Standards Control und Proben mit neuen Plastikspitzen in die entsprechenden Wells geben 100 uL Enzyme Conjugate in jedes Well geben F r 10 Sekunden gut sch tteln Es ist sehr wichtig in diesem Schritt eine komplette Durchmischung zu erreichen 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren Den Inhalt der Wells kr ftig aussch tteln Wells 5mal mit destilliertem Wasser waschen Verbleibende Fl ssigkeit durch Ausklopfen der Wells auf saugf higem Papier entfernen Achtung Die Sensitivit t und Pr zision dieses Assays wird erheblich beeinflusst von der korrekten Durchf hrung des Waschschrittes 100 uL Substrate Solution in jedes Well geben 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren Die enzymatische Reaktion durch Zugabe von 50 uL Stop Solution in jedes Well abstoppen Die Optische Dichte bei 450 10 nm mit einem Mikrotiterplatten Leseger t innerhalb von 10 Minuten nach Zugabe der Stop Solution bestimmen Ergebnisermittlung Die durchschnittlichen Werte der Optischen
14. A Human chorionic gonadotropin HCG and alpha fetoprotein AFP in sera and tumor cells of patients with testicular seminoma Cancer 42 2768 1978 Waldmann T A and Mcintire K R Serum Alpha Fetoprotein Levels in Patients with Ataxia Telangiectasia Lancet 2 1112 1972 Belanger L Tyrosinemie Hereditaire et Alpha 1 Fetoproteine Il Recherche Tissulaire Comparee de l Alpha Foetoproteine dans Deux Cas de Tyrosineimie Hereditaire Considerations sur l Ontogenese de la Foetoproteine Humain French Pathol Bio 21 457 1973 Kew M C Purves L R and Bersohn l Serum Alpha Fetoprotein Levels in Acute Viral Hepatitis Gut 14 939 1973 Endo Y Kanai K Oda T Mitamura K lino S and Suzuki H Clinical Significance of alpha Fetoprotein in Hepatitis and Liver Cirrhosis Ann N Y Acad Sci 259 234 1975 Purves L R and Purves M Serum Alpha Fetoprotein VI The Radioimmunoassay Evidence for the Presence of AFP in the Serum of Normal People and During Pregnancy S Afr Med J 46 1290 1972 Sepalla M and Ruoslahti E Alpha Fetoprotein Physiology and Pathology During Pregnancy and Application to Antenatal Diagnosis J Perinat Med 1 104 1973 Engvall E Methods in Enzymology Volume 70 Van Vunakis H and Langone J J eds Academic Press New York NY 419 1980 Uotila M Ruoslahti E and Engvall E J Immunol Methods 42 11 1981 Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 9 DRG Alpha Fetoprotein
15. AFP levels and the stage of disease 8 9 Elevated AFP levels have also been observed in patients diagnosed with seminoma with nonseminomatous elements but not in patients with pure seminoma 6 8 10 11 In addition elevated serum AFP concentrations have been measured in patients with other noncancerous diseases including ataxia telangiectasia hereditary tyrosinemia neonatal hyperbilirubinemia acute viral hepatitis chronic active hepatitis and cirrhosis 12 15 Elevated serum AFP concentrations are also observed in pregnant women 16 17 Therefore AFP measurements are not recommended for use as a screening procedure to detect the presence of cancer in the general population 2 PRINCIPLE OF THE TEST The DRG AFP ELISA Kit is a solid phase enzyme linked immunosorbent assay ELISA based on the sandwich principle The microtiter wells are coated with a monoclonal mouse antibody directed towards a unique antigenic site on an AFP molecule An aliquot of patient sample containing endogenous AFP is incubated in the coated well with enzyme conjugate which is an anti AFP antibody conjugated with horseradish peroxidase After incubation the unbound conjugate is washed off The amount of bound peroxidase is proportional to the concentration of AFP in the sample Having added the substrate solution the intensity of colour developed is proportional to the concentration of AFP in the patient sample 3 PRECAUTIONS e This kit is for in vitro diagn
16. Daten zu 9 5 Wiederfindung 9 6 Linearit t entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 10 GRENZEN DES TESTS 10 1 Interferenzen Jede unsachgem e Behandlung von Proben oder Modifikationen dieses Tests k nnen die Ergebnisse beeinflussen H moglobin bis zu 4 mg mL Bilirubin bis zu 0 5 mg mL und Triglyceride bis zu 30 mg mL haben keinen Einfluss auf das Testergebnis 10 2 Beeinflussung durch Medikamente Uns sind bislang keine Stoffe Medikamente bekannt geworden deren Einnahme die Messung des AFP Gehaltes der Probe beeinflussen w rde 10 3 High Dose Hook Effekt Ein Hook Effekt tritt bei Proben mit bis zu 1600 IU mL AFP nicht auf Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 15 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 11 RECHTLICHE GRUNDLAGEN 11 1 Zuverl ssigkeit der Ergebnisse Der Test muss exakt gem der Testanleitung des Herstellers abgearbeitet werden Dar ber hinaus muss der Benutzer sich strikt an die Regeln der GLP Good Laboratory Practice oder andere eventuell anzuwendende Regeln oder nationale gesetzliche Vorgaben halten Dies betrifft besonders den Gebrauch der Kontrollreagenzien Es ist sehr wichtig bei der Testdurchf hrung stets eine ausreichende Anzahl Kontrollen zur berpr fung der Genauigkeit und Pr zision mitlaufen zu lassen Die Testergebnisse sind nur g ltig wenn alle Kontrollen in den vorgegebenen Bereichen liegen und wenn alle anderen Testparameter die vorgegebe
17. Dichte OD f r jedes Set von Standards Controls und Patientenproben bestimmen Eine Standardkurve ermitteln durch Auftragen der mittleren Optischen Dichte jedes Standards gegen die Konzentration wobei der OD Wert auf der vertikalen Y Achse und die Konzentration auf der horizontalen X Achse eingetragen wird Unter Verwendung der mittleren OD wird f r jede Probe die entsprechende Konzentration aus der Standardkurve ermittelt Automatische Methode Die in der Arbeitsanleitung ermittelten Werte wurden automatisch mit Hilfe der 4 Parameter Gleichung 4PL 4 Parameter Logistics 4 Parameter Rodbard bestimmt Andere Auswertungsfunktionen k nnen leicht abweichende Werte ergeben Die Konzentration der Proben kann direkt von der Standardkurve abgelesen werden Proben die eine h here Konzentration als die des h chsten Standards enthalten m ssen verd nnt werden Dieser Verd nnungsfaktor muss bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden 1 Beispiel f r eine Standardkurve Nachfolgend wird ein typisches Beispiel f r eine Standardkurve mit dem DRG AFP ELISA gezeigt Diese Werte sollten nicht zur Berechnung von Patientendaten verwendet werden Standard Optische Dichte 450 nm Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 13 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 7 ERWARTETE WERTE Es wird empfohlen dass jedes Labor seine eigenen normalen und abnormalen Werte ermittelt In einer Studie wurden die Proben von gesunden Erwachsene
18. L per well Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets Important note The sensitivity and precision of this assay is markedly influenced by the correct performance of the washing procedure Add 100 uL of Substrate Solution to each well Incubate for 10 minutes at room temperature Stop the enzymatic reaction by adding 50 uL of Stop Solution to each well Determine the absorbance OD of each well at 450 10 nm with a microtiter plate reader It is recommended that the wells be read within 10 minutes after adding the Stop Solution Calculation of Results Calculate the average absorbance values for each set of standards controls and patient samples Construct a standard curve by plotting the mean absorbance obtained from each standard against its concentration with absorbance value on the vertical Y axis and concentration on the horizontal X axis Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concentration from the standard curve Automated method The results in the IFU have been calculated automatically using a4 PL 4 Parameter Logistics curve fit 4 Parameter Logistics is the preferred method Other data reduction functions may give slightly different results The concentration of the samples can be read directly from this standard curve Samples with concentrations higher than that of the highest standard have to be further diluted For the calculation of the concentrations
19. SA EIA 1468 9 ASSAY CHARACTERISTICS 9 1 Assay Dynamic Range The range of the assay is between 0 160 IU mL 9 2 Specificity of Antibodies Cross Reactivity The following substances were tested for cross reactivity of the assay Produced Color Intensity Equivalent to AFP in serum IU mL 9 3 Analytical Sensitivity The analytical sensitivity was calculated from the mean plus two standard deviations of twenty 20 replicate analyses of Standard 0 and was found to be 1 78 IU mL 9 4 Precision 9 4 1 Intra Assay Variation The within assay variability is shown below 2 105 78 5 39 9 4 2 Inter Assay Variation The inter assay variability between run is shown below N 9 5 Recovery Recovery of the DRG ELISA was determined by adding increasing amounts of the analyte to three sera of pregnant women The percentage recoveries were determined by comparing expected and measured values of the samples samp Sample mge o Range of Recovery Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 7 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 9 6 Linearity Three samples serum containing different amounts of analyt were serially diluted up to 1 16 with zero standard and assayed with the DRG ELISA The percentage recovery was calculated by comparing the expected and measured values for the analyt Samp samme Sompi 2 o Range of Recovery 10 LIMITATIONS OF USE 10 1 Interfe
20. U mL aos ATTENZIONE Per interpretazione clinica consultare la metodica in inglese Capitolo 7 EXPECTED VALUES 8 CONTROLLO QUALIT consigliabile utilizzare i campioni controllo secondo le norme di legge Attraverso l utilizzo dei campioni controllo si pu raggiungere una verifica dei risultati giorno per giorno Dovrebbero essere adoperati campioni controllo sia con un livello normale sia con uno patologico Le referenze con i rispettivi risultati del laboratorio QC sono elencati nel QC certificato che allegato al kit valori riportati nel QC certificato si riferiscono al lotto del kit attuale e dovrebbero essere utilizzati per un raffronto dei risultati altres consigliabile di partecipare a programmi di sicurezza sulla qualit nazionali o internazionali per assicurarsi dell esattezza dei risultati Appropriati metodi statistici per l analisi dei valori controllo e delle rappresentazioni grafici dovrebbero essere adoperati Nel caso che i risultati del test non combaciano con il campo di accettazione indicato dal materiale di controllo i risultati dei pazienti devono essere considerati invalidi In questo caso si prega di controllare i seguenti fattori d errore pipette cronometri fotometro data di scadenza dei reagenti condizione di magazzinaggio e d incubazione metodi di aspirazione e di lavaggio Se dopo il controllo dei suddetti fattori non rilevabile alcun errore si prega di contattare il fornitore o
21. Users Manual Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 96 Wells baal Legal Manufacturer Distributed by DRG DRG Instruments GmbH Germany Division of DRG International Inc Frauenbergstr 18 D 35039 Marburg Telefon 49 0 6421 17000 Fax 49 0 642 1 1700 50 Internet www drg diagnostics de E mail drg drg diagnostics de Ce DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 Contents Inhaltsverzeichnis Contenuti Contenido Contenu 0 d OO MM A da da OI Na 0 JO Om ND A 0 JO Om ND dai dai Na 0 d OO ND A as 3 Vv Na INTRODUCTION PRINCIPLE OF THE TEST PRECAUTIONS KIT COMPONENTS SPECIMEN TEST PROCEDURE EXPECTED VALUES QUALITY CONTROL ASSAY CHARACTERISTICS LIMITATIONS OF USE LEGAL ASPECTS REFERENCES EINLEITUNG TESTPRINZIP VORSICHTSMARNAHMEN BESTANDTEILE DES KITS PROBENVORBEREITUNG TESTDURCHF HRUNG ERWARTETE WERTE QUALIT TS KONTROLLE ASSAY CHARACTERISTIKA GRENZEN DES TESTS RECHTLICHE GRUNDLAGEN REFERENZEN INTRODUZIONE PRINCIPIO DEL TEST PRECAUZIONI COMPONENTI DEL KIT CAMPIONI INTRODUCCI N FUNDAMENTO DEL ENSAYO PRECAUCIONES COMPONENTES DEL KIT MUESTRAS Vers 7 0 ATTUAZIONE DEL TEST VALORI NORMALI CONTROLLO QUALIT CARATTERISTICHE DEL TEST LIMITAZIONE DEL TEST ASPETTI LEGALI BIBLIOGRAFIA PROCEDIMIENTO DE ENSAYO VALORES ESPERADOS CONTROL DE CALIDAD CARACTER STICAS DEL ENSAYO LIMITACIONES DE USO ASPECTOS LEGALES
22. anden sind unterliegen nicht der Haftung des Herstellers 12 REFERENZEN Angaben zu den Referenzen entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 16 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 1 INTRODUZIONE Il test immuno enzimatico DRG AFP ELISA contiene materiale per la determinazione quantitativa di alpha fetoproteina AFP in siero Questo test kit adatto soltanto per uso diagnostico 2 PRINCIPIO DEL TEST Il test kit DRG AFP ELISA un test immunologico in fase solida con enzimi ancorati su un substrato ELISA basato sul principio sandwich micropozzetti sono ricoperti con un anticorpo monoclonale diretto contro un unico sito antigenico su una molecola AFP Un aliquota di un campione di paziente contenente AFP endogeno a viene incubato nel pozzetto ricoperto dell enzima coniugato che un anticorpo anti AFP monoclonale coniugato alla perossidasi di rafano Dopo l incubazione il coniugato non legato eliminato attraverso lavaggi La quantit della perossidasi legata proporzionale alla concentrazione AFP nel campione Dopo l aggiunta della soluzione substrato l intensit del colore sviluppato proporzionale alla concentrazione di AFP nel campione del paziente 3 PRECAUZIONI e Questo kit adatto soltanto per l uso diagnostico in vitro e Informazioni su sostanze pericolose contenute nel kit sono riportate nel regolamento di sicurezza e Tutti i c
23. condo il protocollo dato dal produttore Inoltre l utente deve seguire le regole del GLP Good Laboratory Practice o eventualmente altre regole comportamentali o disposizioni legali Questo vale soprattutto per l uso delle referenze molto importante utilizzare un numero appropriato di referenze in parallelo ai campioni test per poter controllare l esattezza e la precisione del test risultati del test sono validi soltanto se tutte le referenze cadono nei margini prestabiliti e se tutti gli altri parametri del test soddisfano la specificazione per questo test Se esistono dubbi o domande su questi risultati si prega di contattare la ditta DRG 11 2 Conseguenze terapeutiche Soltanto sulla base dei risultati dei laboratori non dovrebbero essere intraprese delle conseguenze terapeutiche di alcun tipo anche se i risultati del test sono d accordo con gli aspetti articolati nel punto 11 1 Ogni risultato di laboratorio soltanto una parte di un quadro clinico completo di un paziente Soltanto in casi in cui i risultati di un test del laboratorio si accordano con il quadro clinico dell ammalato si possono intraprendere delle conseguenze terapeutiche Il risultato del test da solo non base sufficiente per lo stabilimento di una terapia 11 3 Responsabilit legali Ogni cambiamento del protocollo del test e o lo scambio o il mescolamento di componenti provenienti da cariche diverse possono influenzare negativamente i risultati e compromette
24. cuber pendant 10 minutes a temp rature ambiante Stopper la r action enzymatique en ajoutant 50 pL de Stop Solution chaque puits Lire la densit optique a 450410 nm l aide d un spectrophotom tre lecteur de micro plaques dans les 10 minutes apr s avoir ajout la Stop Solution Calcul des r sultats Calculer les valeurs moyennes des densit s optiques pour chaque s rie de standards contr les et chantillons Etablir la courbe talon en reportant la densit optique moyenne de chaque valeur standard en fonction de sa concentration en posant la densit optique en axe des ordonn es et la concentration en axe des abscisses L utilisation de la densit optique moyenne pour chaque chantillon d termine la concentration correspondante partir de la courbe talon M thode automatique Les r sultats dans le IFU ont t calcul s de fa on automatique en utilisant une courbe de r gression 4 PL 4 Parameter Logistics D autres fonctions logistiques peuvent donner des r sultats l g rement diff rents La concentration des chantillons peut tre lue directement partir de cette courbe talon Les chantillons avec une concentration sup rieure celle du plus haut standard doivent tre dilu s de nouveau Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration 1 Exemple typique de courbe talon Ci dessous est repr sent un exemple typique de courbe talon r alis e avec l
25. d que aparece en las etiquetas del kit e Todos los vol menes indicados han de ser realizados de acuerdo con el protocolo Los resultados ptimos del ensayo se obtienen solo cuando se utilizan pipetas y lectores de microplacas calibrados e No mezclar o usar componentes de kits con distinto n mero de lote Se recomienda no intercambiar pocillos de distintas placas incluso si son del mismo lote Los kits pueden haber sido enviados o almacenados bajo diferentes condiciones y las caracter sticas de uni n de las placas pueden resultar diferentes e Los compuestos qu micos y los reactivos preparados o utilizados han de tratarse como residuos peligrosos de acuerdo con las gu as o regulaci n nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas e Las hojas de los datos de seguridad de este producto est n disponibles bajo pedido directamente a DRG Instruments GmbH Las hojas de los datos de seguridad se ajustan a las demandas de las gu a europea EU Guideline 91 155 EC Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 23 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 4 COMPONENTES DEL KIT 4 1 Componentes del Kit 1 Microtiterwells Placas multipocillo 12x8 tiras separables 96 pocillos Pocillos recubiertos con anticuerpo anti AFP monoclonal 2 Standard Standard 0 4 Est ndar 5 viales liofilizados 0 5 mL Concentraciones 0 10 40 80 160 IU mL Conversi n 11U mL 1 21ng mL Los est ndares est n calibrados seg n NIBSC 1 Inter
26. d sollten zum direkten Vergleich der Ergebnisse verwendet werden Es wird ebenfalls empfohlen an nationalen oder internationalen Qualit tssicherungs Programmen teilzunehmen um die Genauigkeit der Ergebnisse zu sichern Es sollten geeignete statistische Methoden zur Analyse von Kontroll Werten und Trends angewendet werden Wenn die Ergebnisse des Assays nicht mit den angegebenen Akzeptanzbereichen des Kontrollmaterials bereinstimmen sollten die Patientenergebnisse als ung ltig eingestuft werden In diesem Fall berpr fen Sie bitte die folgenden Bereiche Pipetten und Zeitnehmer Photometer Verfallsdatum der Reagenzien Lagerungs und Inkubationsbedingungen Absaug und Waschmethode Sollten Sie nach berpr fung der vorgenannten Bereiche keinen Fehler erkannt haben setzen Sie sich bitte mit Ihrem Lieferanten oder direkt mit der Firma DRG in Verbindung Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 14 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 9 ASSAY CHARACTERISTIKA 9 1 Messbereich Der Messbereich des Testes liegt zwischen 0 160 IU mL 9 2 Spezifit t der Antik rper Kreuzreaktivitat Die Daten entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung 9 3 Analytische Sensitivit t Die analytische Sensitivit t definiert als Mittelwert plus der zweifachen Standardabweichung des Standards O n 20 betr gt 1 78 IU mL 9 4 Pr zision Die Daten entnehmen Sie bitte der ausf hrlichen englischen Arbeitsanleitung Die
27. den nationalen Gefahrenstoffvorschriften wie gef hrlicher Abfall behandelt werden e Materialsicherheitsdatenbl tter f r dieses Produkt sind auf Anfrage direkt von der Firma DRG Instruments GmbH erh ltlich Die Materialsicherheitsdatenbl tter entsprechen den Verordnungen der EU Richtlinie 91 155 EC Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 10 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 4 BESTANDTEILE DES KITS 4 1 Kitinhalt 1 Microtiterwells 96 Wells 12x8 Wells einzeln brechbar Mit anti AFP Antik rper monoklonal beschichtet 2 Standard Standard 0 4 5 Fl schchen lyophilisiert je 0 5 mL Konzentrationen 0 10 40 80 160 IU mL Umrechnungsfaktor 1IU mL 1 21ng mL Die Standards sind kalibriert gegen den NIBSC 1 Internationalen Standard f r Alphafoetoprotein AFP AFP stIRP 72 225 Siehe Vorbereitung der Reagenzien Enth lt 0 03 Proclin 300 0 015 BND und 0 010 MIT als Konservierungsstoffe 3 Enzyme Conjugate Enzymkonjugat 1 Fl schchen 11 mL gebrauchsfertig Anti AFP Antik rper mit Meerrettichperoxidase konjugiert Enth lt 0 03 Proclin 300 0 015 BND und 0 010 MIT als Konservierungsstoffe 4 Substrate Solution Substratl sung 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig Substratl sung TMB 5 Stop Solution Stoppl sung 1 Fl schchen 14 mL gebrauchsfertig enth lt 0 5M H2SO Kontakt mit der Stoppl sung vermeiden Kann Hautreizungen und Verbrennungen verursachen BND 5 bromo 5 ni
28. e DRG AFP ELISA Standard Unit s optiques 450 nm Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 32 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 7 VALEURS ATTENDUES Il est fortement recommand chaque laboratoire de d terminer ses propres valeurs normales ou anormales 7 1 Adultes normaux non enceinte 1 10 IU mL 7 2 Valeur durant la grossesse grossesse AFP semaines IU mL 10 9 24 11 10 27 2 10 30 grossesse AFP semaines IU mL 19 32 103 Se 20 4 11 45 15 14 60 16 16 69 17 17 78 18 22 93 13 10 34 REMARQUE pour I importance clinique voir le manuel d utilisateur en version anglaise chapitre 7 EXPECTED VALUES 8 CONTROLE DE QUALITE Il est recommand d utiliser les chantillons contr les selon les r glementations nationales en vigueur L utilisation des chantillons contr les est recommand afin de s assurer jour apr s jour de la validit des r sultats Utiliser les contr les de valeurs normales et pathologiques Les contr les et les r sultats correspondants issus du laboratoire QC sont mentionn s dans le certificat QC fourni avec le kit Les valeurs et les limites mentionn es sur la fiche QC font toujours r f rence au lot de kit courant et doivent tre utilis es pour une comparaison directe avec les r sultats Il est galement recommand d utiliser les programmes d valuation de qualit nationaux ou internationaux afin de s assurer de l exactitude des r s
29. emoglobina hasta 4 mg mL Bilirrubina hasta 0 5 mg mL y Triglic ridos hasta 30 mg mL no influencian los resultados del ensayo 10 2 Interferencias con drogas Hasta ahora no se han encontrado sustancias drogas conocidas por nosotros que tengan influencia en la medida de AFP en una muestra 10 3 Efecto Gancho Dosis Elevada No se ha observado efecto gancho en este ensayo hasta 1600 IU mL de AFP 11 ASPECTOS LEGALES 11 1 Fiabilidad de los Resultados El ensayo debe realizarse exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante Mas a n el usuario debe ajustarse estrictamente a las reglas BPL Buenas Pr cticas de Laboratorio o a otros est ndares y o leyes nacionales aplicables Esto es especialmente relevante para el uso de reactivos control Es importante incluir siempre dentro del procedimiento de ensayo un n mero suficiente de controles para validar la exactitud y la precisi n del ensayo Los resultados del ensayo son v lidos s lo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si todos los otros par metros del ensayo se encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo En cado de alguna duda o inquietud por favor contactar con DRG 11 2 Consecuencias Terap uticas Las consecuencias terap uticas nunca deben basarse s lo en los resultados de laboratorio incluso si todos los resultados del ensayo est n de acuerdo con los asuntos fijados en el punto 11 1 Cualquier resultado
30. ervan su actividad durante 6semanas si se almacenan como se ha descrito arriba 4 3 Preparaci n de los Reactivos Dejar que todos los reactivos y el n mero requerido de tiras alcancen la temperatura ambiente antes de usarse Standards Reconstituir los contenidos liofilizados de los viales de los est ndares con 0 5 mL de agua bidestilada Nota Los est ndares reconstituidos son estables durante 2 meses a 2 8 C Para per odos m s largos congelar a 20 C 4 4 Eliminaci n del Kit La eliminaci n del kit debe realizarse de acuerdo con las leyes nacionales En las hojas de datos de seguridad se proporciona informaci n especial de este producto ver cap tulo 13 4 5 Kits de ensayo da ados En caso de que exista cualquier da o severo del kit de ensayo o de sus componentes ha de informarse por escrito a DRG no mas tarde de una semana despu s de recibir el kit No deben utilizarse componentes da ados para llevar a cabo un ensayo Han de almacenarse hasta que se encuentre una soluci n Despu s de esto deben ser eliminados de acuerdo con las leyes oficiales Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 24 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 5 MUESTRAS En este ensayo pueden usarse suero No usar muestras hemol ticas ict ricas o lip micas Tener en cuenta No deben usarse muestras que contengan acida s dica TENER EN CUENTA If an amniocentesis is necessary the specimen collection has to done before the puncture Afte
31. ezielle Informationen f r dieses Produkt finden Sie im Materialsicherheitsdatenblatt Kapitel 13 4 5 Beschadigte Testkits Im Falle einer starken Besch digung des Testkits oder der Komponenten muss die Firma DRG in schriftlicher Form sp testens eine Woche nach Erhalt des Kits informiert werden Stark besch digte Einzelkomponenten sollten nicht f r den Testlauf verwendet werden Sie m ssen gelagert werden bis eine endg ltige L sung gefunden wurde Danach sollten Sie gem den offiziellen Richtlinien entsorgt werden Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 11 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 5 PROBENVORBEREITUNG Serum sollte in diesem Test als Probenmaterial eingesetzt werden Lip mische ikterische und oder stark h molysierte Proben sollten nicht verwendet werden Achtung Proben die Natriumazid enthalten sollten nicht verwendet werden ACHTUNG Mu eine Amniozentese durchgef hrt werden so sollte die Blutprobe vor der Punktion entnommen werden da nach der Amniozentese erh hte AFP Werte im Serum festgestellt werden 5 1 Probenentnahme Serum Blut durch Venenpunktion entnehmen z B mit Sarstedt Monovette 02 1388 001 gerinnen lassen und das Serum durch Zentrifugation bei Raumtemperatur abtrennen Vor der Zentrifugation muss die Gerinnung vollst ndig abgeschlossen sein Bei Patienten die Antikoagulantien erhalten kann die Gerinnungszeit l nger dauern 5 2 Probenaufbewahrung Proben sollten stets gut versc
32. hlossen sein und k nnen vor Testbeginn bis zu 5 Tage bei 2 8 C gelagert werden F r eine l ngere Aufbewahrung sollten die Proben eingefroren bei 20 C bis zum Testbeginn gelagert werden Nur einmal einfrieren Aufgetaute Proben sollten vor Testbeginn vorsichtig durchmischt werden ohne Schaumbildung 5 3 Probenverd nnung Wenn in einem ersten Testdurchlauf bei einer Probe eine Konzentration h her als der h chste Standard gefunden wird kann diese Probe mit Standard O weiter verd nnt und nochmals bestimmt werden Die Verd nnung muss jedoch bei der Berechnung der Konzentration beachtet werden Beispiel a Verd nnung 1 10 10 uL Serum 90 uL Standard 0 gr ndlich mischen b Verd nnung 1 100 10 uL Verd nnung a 1 10 90 uL Standard O gr ndlich mischen 6 TESTDURCHF HRUNG 6 1 Allgemeine Hinweise Alle Reagenzien und Proben m ssen vor Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht und gut durchgemischt werden Dabei sollte Schaumbildung vermieden werden Wenn die Testdurchf hrung einmal begonnen wurde muss sie ohne Unterbrechung zu Ende gef hrt werden F r jeden Standard jede Kontrolle oder Probe eine neue Plastikspitze verwenden um Verschleppungen zu vermeiden Die Optische Dichte ist abh ngig von Inkubationszeit und Temperatur Deshalb ist es notwendig vor Beginn der Testdurchf hrung alle Reagenzien in einen arbeitsbereiten Zustand zu bringen die Deckel der Fl schchen zu ffnen alle ben tigten Wells in den Halter
33. i standard contro la rispettiva concentrazione dove i valori delle OD si devono trovare sull asse verticale Y e le concentrazioni sull asse orizzontale X 3 Utilizzando il valore medio delle OD per ogni campione si determina la rispettiva concentrazione dalla curva standard 4 Metodo automatico risultati in IFU sono stati calcolati automaticamente usando un fitting avvicinamento con il 4 PL 4 Parameter Logistics Altri funzioni usati per l elaborazioni dei dati possono dare risultati leggermente differenti 5 La concentrazione dei campioni pu essere determinata direttamente dalla curva standard Campioni con una concentrazione piu elevata dello standard piu concentrato devono essere diluiti Di questo fattore di diluizione deve essere tenuto conto per il calcolo della concentrazione NO 6 3 1 Esempio di una curva standard In seguito riportato un esempio di una curva standard con DRG AFP ELISA Standard Densit ottiche 450 nm Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 20 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 7 VALORI NORMALI consigliabile che ogni laboratorio determini i propri valori normali e anormali In uno studio condotto su persone apparentemente sane usando il test DRG AFP ELISA i seguenti valori sono stati ottenuti 7 1 Adulti normali sani non in gravidanza 1 10 IU mL 7 2 Livelli normali di AFP nel siero durante la gravidanza settimana AFP di gravidanza IU mL di gravidanza I
34. it tre en accord avec la r glementation nationale en vigueur concernant l limination des d chets risque biologique e La fiche de s curit concernant ce produit peut tre obtenue en contactant directement DRG Instruments GmbH Les fiches de s curit sont en accord avec les directives europ ennes EU 91 155 EC Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 29 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 4 COMPOSITION DU KIT 4 1 Contenu du kit 1 Microtiterwells Plaques de micro titratio 12x8 d tacher barrettes plaques de 96 puits Les puits sont recouverts avec un anticorps anti AFP monoclonal 2 Standard Standard 0 4 5 flacons lyophilis s 0 5ML Concentrations 0 10 40 80 160 IU mL Conversion 1IU mL 1 21ng mL Les standards ont t calibr s selon le NIBCS 1 International Standard for Alphafoetoprotein AFP AFP 1st IRP 72 225 Voir Pr paration des r actifs contient 0 03 de Proclin 300 0 015 BND et 0 010 MIT comme agent de conservation 3 Enzyme Conjugate Conjugu enzymatique 1 flacon 11 mL pr t l emploi Anticorps anti AFP conjugu la HRP contient 0 03 de Proclin 300 0 015 BND et 0 010 MIT comme agent de conservation 4 Substrate Solution Solution substrat 1 flacon 14 mL pr t l emploi T tram thylbenzidine TMB 5 Stop Solution Solution d arr t 1 flacon 14 mL pr t l emploi contient 0 5M de H2S04 Eviter les contacts avec la solution stop
35. it termin e Les patients sous traitement anti coagulant peuvent demander un temps de coagulation plus important 5 2 Conservation des chantillons Les tubes contenant les chantillons doivent tre ferm s et peuvent tre stock s jusqu cinq jours 2 8 C avant d tre test s Les chantillons stock s pour un temps prolong doivent tre congel s 20 C avant d tre test s Les chantillons d congel s doivent tre retourn s plusieurs fois avant le test 5 3 Dilution de l chantillon Si lors d un test pr liminaire la concentration de l chantillon se r v le tre sup rieure celle du standard le plus concentr alors l chantillon doit tre dilu avec le Standard O et test de nouveau comme d crit dans R alisation du test Pour le calcul des concentrations ce facteur de dilution doit tre pris en consid ration Exemple a dilution 1 10 10 uL Serum 90 uL Standard 0 bien m langer b dilution 1 100 10 uL dilution a 1 10 90 uL Standard O bien m langer 6 R ALISATION DU TEST 6 1 Remarques g n rales Tous les r actifs et chantillons doivent tre amen s temp rature ambiante avant utilisation Tous les r actifs doivent tre m lang s sans formation de mousse Une fois la proc dure engag e toutes les tapes doivent tre r alis es sans interruption Utiliser un nouveau c ne de pipette pour chaque standard contr le ou chantillon ceci afin d vi
36. ity CE Konfirmit ts kennzeichnung Conforme aux normes europ ennes Conformidad europea Conformit europea Consult instructions for use Gebrauchsanweisung beachten Consulter les instructions d utilisation Consulte las Instrucciones Consultare le istruzioni per l uso BE In vitro diagnostic device In vitro Diagnostikum Ussage Diagnostic in vitro Diagn stico in vitro Per uso Diagnostica in vitro Nur f r Seulement dans le S lo para uso en de RUO For research use only Forschungszwecke cadre de recherches investigaci n Solga s opo dinigerca Catalogue number Katalog Nr R f rence N mero de cat logo No di Cat Lot No Batch code Chargen Nr No de lot N mero de lote Lotto no Contains sufficient for lt n gt tests Ausreichend f r n Ans tze Contenu suffisant pour n tests Contenido suficiente para lt n gt ensayos Contenuto sufficiente per n saggi Storage Temperature Lagerungstemperatur Temperature de conservation Temperatura de conservacion Temperatura di conservazione Expiration Date Mindesthaltbarkeits datum Date limite d utilisation Fecha de caducidad Data di scadenza Kr le SIS Legal Manufacturer Hersteller Fabricant Fabricante Fabbricante Distributed by Distributor Vertreiber Distributeur Distribuidor Distributtore Content Content Inhalt Contenu Contenido Conten
37. luci n Diluente del tracciante Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 35 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 Sym bol Portugues Dansk Svenska EAAnvik C Conformidade com as Europaeisk Europeisk Eupwsraikt normas europeias overensstemmelse verensst mmelse Zuup pwon Corisulte as instru es Se brugsanvisning Se bruksanvisningen Eyxeipidio xpnotn de utiliza o BE Diagn stico in vitro In vitro diagnostik Diagnostik in vitro in vitro Siayvwortikd tilsttr kkeligt til n test n tester RUO Cat logo n Katalognummer Katalog nummer ApiBu KataA you No do lote Lot nummer Batch nummer Api816 Naptidoc Indeholder Inneh ller tillr ckligt till Mepiex pevo errapk YIA n EgET GEI RI alla Temperatura de Opbevaringstemperatu F rvaringstempratur OeppoKpacia conserva o r aTTOOMKEUONG Prazo de validade Udigbsdato B st f re datum Hyepopnvia An n Fabricante Producent Tillverkare Kortaokeuaotng Distributed by Content Conte do Indhold Inneh ll Mepiexbpevo Volume No Volume N mero Volumen antal Volym antal Oykoc api H A Alv olos de SE Brunnar i Mnyad xkia Microtiterwells microtitula o Mikrotiterbrande Mikrotiterplatta MIKpOTITAO OT OEWG Antiserum Anti soro Antiserum Antiserum Avtiop Enzy me Conjugado enzim tico Enzymkonjugat Enzymkonjugat 2uZeuyu vo EVZUUO Conjugate Enzyme Complexo enzim
38. mplo t pico de una curva est ndar con el DRG AFP ELISA Est ndar Unidades pticas 450 nm Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 26 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 7 VALORES ESPERADOS Se recomienda encarecidamente que cada laboratorio determine sus valores normales e inusuales En un estudio con adultos aparentemente sanos utilizando el DRG AFP ELISA se observaron los siguientes valores 7 1 Valores con adultos aparentemente sanos 1 10 IU mL 7 2 Valores durante embarazo Semanas AFP de embarazo IU mL de embarazo IU mL Fe Me TENER EN CUENTA Para importancia cl nica consultar el manual de usuario en ingl s Cap tulo 7 EXPECTED VALUES 8 CONTROL DE CALIDAD Se recomienda usar muestras control de acuerdo con las leyes estatales y federales El uso de muestras control ser recomienda para asegurar la validez diaria de los resultados Usar controles tanto a niveles normal como patol gico Los controles y los correspondientes resultados del Laboratorio de control de calidad est n fijados en el certificado de control de calidad que acompa an al kit Los valores y los rangos fijados en la hoja del control de calidad se refieren siempre al kit actual y deben usarse para la comparaci n directa de los resultados Es recomendable tambi n hacer uso de programas de Aseguramiento de la Calidad nacionales o internacionales para asegurar la exactitud de los resultados Utilizar m todos estad sticos ap
39. n untersucht 7 1 Gesunde nicht schwangere Erwachsene 1 10 IU mL 7 2 Serum AFP Werte in der Schwangerschaft woche IU mL Dono sa 12 woche IU mL o sans 21 10 30 ei KLINISCHE BEDEUTUNG Pr natale Diagnostik von Neuralrohrdefekten und Anencephalie In einer Studie wurden bei 88 der Anencephalie F lle und bei 79 der Spina bifida aperta F lle Werte gemessen die gegen ber den Normalwerten um mehr als das 2 5 fache erh ht waren Tumormarker Bei hepatozellul ren Karzinoma und Keimzelltumoren variieren die Werte stark Es wurden Konzentrationen innerhalb des Normalwertbereichs bis hin zu einigen Millionen IU ml festgestellt Nach der operativen Entfernung des Tumorgewebes gehen die Werte der AFP Konzentration auf den Normalwertbereich zur ck AFP im Serum kann auch bei weiteren Erkrankungen nachgewiesen werden z B bei neonataler Hepatitis oder non hepatischen Tumoren 48 139 DA 8 QUALITATS KONTROLLE Es wird empfohlen die Kontrollproben gem R den nationalen gesetzlichen Bestimmungen einzusetzen Durch die Verwendung von Kontrollproben wird eine Tag zu Tag berpr fung der Ergebnisse erzielt Es sollten Kontrollen sowohl mit normalem als auch pathologischem Level eingesetzt werden Die Kontrollen mit den entsprechenden Ergebnissen des QC Labors sind im QC Zertifikat das dem Kit beiliegt aufgef hrt Die im QC Blatt angegebenen Werte und Bereiche beziehen sich stets auf die aktuelle Kitcharge un
40. national Standard parar AFP AFP 1st IRP 72 225 contiene 0 03 Proclin 300 0 015 BND 0 010 MIT como conservante 3 Enzyme Conjugate Conjugado enzim tico 1 vial 11 mL listo para usar Anticuerpo anti AFP conjudado con la Peroxidasa de r bano Contiene 0 03 Proclin 300 0 015 BND 0 010 MIT como conservante 4 Substrate Solution Soluci n de sustrato 1 vial 14 mL listo para usar Tetrametilbencidina TMB 5 Stop Solution Soluci n de parada 1 vial 14 mL listo para usar contiene 0 5M H2SO Evitar el contacto con la Soluci n de parada Puede causar irritaci n y quemaduras en al piel BND 5 bromo 5 nitro 1 3 dioxane Bromonitrodioxano MIT 2 methyl 2H isothiazol 3 one Metilisotiazolona Nota Se puede solicitar el Standard O para la diluci n de la muestra 4 1 1 Equipamiento y material requerido pero no provisto Lectorde microplacas calibrado 450 10 nm ej DRG Instruments Microtiter Plate Reader Micropipetas de precisi n variable calibradas Papel absorbente Agua bidestilada 4 2 Almacenamiento y estabilidad del kit Cuando se almacena a 2 8 C los reactivos sin abrir mantienen su reactividad hasta la fecha de caducidad No utilizar los reactivos m s all de esta fecha Los reactivos abiertos han de almacenarse a 2 8 C Las placas multipocillo han de almacenarse a 2 8 C Una vez se ha abierto la bolsa hay que tener cuidado y cerrarla de nuevo Los kits abiertos cons
41. nen Spezifikationen f r diesen Assay erf llen Wenn Sie bez glich eines Ergebnisses Zweifel oder Bedenken haben setzen Sie sich bitte mit der Firma DRG in Verbindung 11 2 Therapeutische Konsequenzen Therapeutische Konsequenzen sollten keinesfalls nur aufgrund von Laborergebnissen erfolgen selbst dann nicht wenn alle Testergebnisse mit den in 11 1 genannten Voraussetzungen bereinstimmen Jedes Laborergebnis ist nur ein Teil des klinischen Gesamtbildes eines Patienten Nur in F llen in denen die Laborergebnisse in akzeptabler bereinstimmung mit dem allgemeinen klinischen Bild des Patienten stehen sollten therapeutische Konsequenzen eingeleitet werden Das Testergebnis allein sollte niemals als alleinige Grundlage f r die Einleitung therapeutischer Konsequenzen dienen 11 3 Haftung Jegliche Ver nderungen des Testkits und oder Austausch oder Vermischung von Komponenten unterschiedlicher Chargen von einem Testkit zu einem anderen k nnen die gew nschten Ergebnisse und die G ltigkeit des gesamten Tests negativ beeinflussen Solche Ver nderungen und oder Austausch haben den Ausschluss jeglicher Ersatzanspr che zur Folge Reklamationen die aufgrund von Falschinterpretation von Laborergebnissen durch den Kunden gem Punkt 11 2 erfolgen sind ebenfalls abzuweisen Im Falle jeglicher Reklamation ist die Haftung des Herstellers maximal auf den Wert des Testkits beschr nkt Jegliche Sch den die w hrend des Transports am Kit entst
42. neoplasms 8 QUALITY CONTROL Good laboratory practice requires that controls be run with each calibration curve A statistically significant number of controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to assure proper performance It is recommended to use control samples according to state and federal regulations The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results Use controls at both normal and pathological levels The controls and the corresponding results of the QC Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid In this case please check the following technical areas Pipetting and timing devices photometer expiration dates of reagents storage and incubation conditions aspiration and washing methods After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or DRG directly Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 6 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELI
43. ni a 2 8 C Campioni magazzinati per un periodo pi lungo dovrebbero essere congelati solo una volta a 20 C prima dell analisi Congelare soltanto una volta Invertire campioni scongelati alcune volte prima dell uso 5 3 Diluizione dei campioni Se in un campione di siero viene trovata una concentrazione oltre lo standard piu alto questo campione pu essere diluito con lo Standard 0 e nuovamente determinato Della diluizione deve essere per tenuto conto Esempio a diluizione 1 10 10 uL siero 90 uL Standard O agitare bene b diluizione 1 100 10 uL della diluizione a 90 uL Standard O agitare bene 6 ATTUAZIONE DEL TEST 6 1 Indicazioni generali Tutti i reagenti e i campioni devono essere portati a temperatura ambiente e ben mescolati prima dell uso Evitare la formazione di schiume Una volta iniziato il procedimento del test questo deve essere portato alla fine senza interruzione Per ogni componente standard controllo o campione necessario utilizzare una nuova punta monouso per evitare reazioni incrociate La densit ottica dipende dal tempo d incubazione e dalla temperatura Perci si rende necessario di preparare tutti i reagenti di aprire i tappi dei flaconi e di appostare tutti i pozzetti nelle appropriate posizioni Soltanto una tale preparazione garantisce gli stessi tempi per ogni processo di pipettamento Come regola generale vale che la reazione enzimatica si svolge linearmen
44. o 1 flacone 14 mL pronto all uso contiene 0 5M H SO Evitare il contatto con la soluzione d arresto Pu causare irritazioni cutanee e ustioni BND 5 bromo 5 nitro 1 3 dioxane MIT 2 methyl 2H isothiazol 3 one Nota Ulteriore Standard 0 per la diluizione dei campioni pu essere richiesto alla ditta 4 1 1 Materiali richiesti ma non contenuti nel kit Uno spettrofotometro calibrato per micropozzetti 450 10 nm p es il DRG Instruments Microtiterplate Reader Micropipette calibrate di precisione a volume variabile Carta assorbente Acqua bidistillata 4 2 Magazzinaggio e stabilit del kit A 2 8 C i reagenti non aperti rimangono reattivi fino alla data di scadenza indicata Non usare reagenti oltre questa data Tutti i reagenti aperti devono essere magazzinati a 2 8 C micropozzetti devono essere magazzinati a 2 8 C Una volta aperti i pacchi questi devono essere richiusi accuratamente Test kits aperti rimangono attivi per 6 settimane se magazzinati alle condizioni sopra descritte 4 3 Preparazione dei reagenti Prima dell uso portare tutti i reagenti e il numero necessario di pozzetti a temperatura ambiente Standards Ricostituire il contenuto liofillizzato dei flaconi con gli standard con 0 5 mL acqua bidistillata Nota Gli standard ricostituiti sono stabili per 2 mesi a 2 8 C Per periodi piu lunghi congelare a 20 4 4 Smaltimento del kit Lo smaltimento del kit deve avvenire sec
45. olong congeler 20 4 4 Elimination des d chets relatifs au kit L limination des d chets relatifs au kit doit tre r alis e selon les r gles nationales en vigueur Les informations sp cifiques au kit sont pr sent es dans la fiche de s curit voir chapitre 13 4 5 Kits endommag s Dans le cas de dommages importants survenus au kit ou ses composants informer la DRG au plus tard une semaine apr s r ception du kit Les composants endommag s ne doivent pas tre utilis s pour le test Ils doivent tre stock s jusqu ce qu une solution adapt e ait t trouv e Apr s cela ils doivent tre limin s selon les directives officielles en vigueur Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 30 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 5 ECHANTILLON S rum peuvent tre utilis s pour ce test Ne pas utiliser des chantillons h molys s ict riques ou lip miques Remarque Les chantillons contenant de l azide de sodium ne doivent pas tre utilis s pour ce test REMARQUE If an amniocentesis is necessary the specimen collection has to done before the puncture After the amniotic puncture increased AFP values are determined 5 1 Pr l vement et pr paration des chantillons S rum Pr lever le sang par ponction veineuse ex Sarstedt Monovette 02 1388 001 laisser coaguler puis s parer le s rum par centrifugation temp rature ambiante Ne pas centrifuger avant que la coagulation ne so
46. omponenti del kit che contengono siero o plasma umano sono controllati e confermati negativi per la presenza di HIV I II HbsAg e HCV con metodi conformi alle norme FDA Ciononostante tutti i componenti dovrebbero essere trattati come potenziali sostanze nocive nella manutenzione e nello smaltimento e Il contatto con la Stop Solution dovrebbe essere evitato perch contiene 0 5 M H SO L acido solforico pu provocare irritazioni cutanee e ustioni e Non pipettare con la bocca ed evitare il contatto con componenti del kit con la pelle o con le mucose e Nelle aree in cui il test viene utilizzato non fumare mangiare bere o fare uso di prodotti cosmetici e Nella manutenzione dei campioni o reagenti del kit portare guanti di latex monouso La contaminazione dei reagenti o dei campioni con microbi pu dare risultati falsi e L utilizzo dovrebbe avvenire secondo regole che seguono le rispettive norme di sicurezza nazionali sulle sostanze nocive e Non utilizzare i reagenti dopo la scadenza indicata sul kit e Ogni indicazione sulla quantit indicata del protocollo del kit deve essere accuratamente seguito Risultati ottimali possono essere ottenuti soltanto con l uso di pipette calibrate e spettrofotometro calibrato e Componenti del kit con numeri di lotto diversi non devono essere combinati consigliabile di non utilizzare pozzetti di piastre diversi anche se si tratta dello stesso lotto kit potrebbero essere stati magazzinati o spediti
47. on request 4 1 1 Equipment and material required but not provided A microtiter plate calibrated reader 450 10 nm e g the DRG Instruments Microtiter Plate Reader Calibrated variable precision micropipettes Absorbent paper Bidistilled water 4 2 Storage and stability of the Kit When stored at 2 8 C unopened reagents will retain reactivity until expiration date Do not use reagents beyond this date Opened reagents must be stored at 2 8 C Microtiter wells must be stored at 2 8 C Once the foil bag has been opened care should be taken to close it tightly again Opened kits retain activity for six weeks if stored as described above 4 3 Preparation of Reagents Allow all reagents and required number of strips to reach room temperature prior to use Standards Reconstitute the lyophilized contents of the standard vial with 0 5 mL bidistilled water Note The reconstituted standards are stable for 2 months at 2 8 For longer storage freeze at 20 TC 4 4 Disposal of the Kit The disposal of the kit must be made according to the national regulations Special information for this product is given in the Material Safety Data Sheets see chapter 13 4 5 Damaged Test Kits In case of any severe damage of the test kit or components DRG have to be informed written latest one week after receiving the kit Severely damaged single components should not be used for a test run They have to be stored until a final solu
48. ondo le regole a norma di legge Informazioni particolareggiate per questo prodotto si trovano nel regolamento di sicurezza capitolo 13 4 5 Test kits danneggiati Nel caso di gravi danneggiamenti del kit o dei suoi componenti deve avvenire una dichiarazione scritta alla ditta DRG al piu tardi una settimana dopo il ricevimento del kit Componenti danneggiati non dovrebbero essere utilizzati per il test Questi componenti devono essere magazzinati fino ala soluzione del problema Dopo di che essi devono essere smaltiti secondo le norme ufficiali Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 18 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 5 CAMPIONI Siero pu essere usato per questo test Non usare campioni emolitici itterici o lipemici Attenzione Se i campioni contengono sodio azide non devono essere utilizzati per questo test ATTENZIONE If an amniocentesis is necessary the specimen collection has to done before the puncture After the amniotic puncture increased AFP values are determined 5 1 Collezione dei campioni Siero Collezionare sangue tramite puntura venale p es Sarstedt Monovette 02 1388 001 far coagulare e separare il siero centrifugando a temperatura ambiente Non centrifugare prima che la coagulazione sia completata Campioni di pazienti con una terapia anticoagulante possono richiedere pi tempo per la coagulazione 5 2 Magazzinaggio dei campioni campioni dovrebbero essere magazzinati ben chiusi fino a 5 gior
49. ostic use only e For information on hazardous substances included in the kit please refer to Material Safety Data Sheets e All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for HIV I II HBsAg and HCV by FDA approved procedures All reagents however should be treated as potential biohazards in use and for disposal Avoid contact with Stop Solution containing 0 5 M H2SO It may cause skin irritation and burns Never pipet by mouth and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes Do not smoke eat drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents Microbial contamination of reagents or specimens may give false results e Handling should be in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guideline or regulation e Do not use reagents beyond expiry date as shown on the kit labels e All indicated volumes have to be performed according to the protocol Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and microtiterplate readers e Do not mix or use components from kits with different lot numbers It is advised not to exchange wells of different plates even of the same lot The kits may have been shipped or stored under different conditions and the binding characteristics of the plates may result slightly differen
50. r the amniotic puncture increased AFP values are determined 5 1 Toma de muestras Suero Recoger la sangre por punci n en la vena ej Sarstedt Monovette 02 1388 001 permitir coagulaci n y separar el suero por centrifugaci n a temperatura ambiente No centrifugar antes de la coagulaci n completa Las muestras de pacientes que reciben terapia anticoagulante requieren m s tiempo para coagular 5 2 Almacenamiento de las muestras Las muestras deben ser tapadas y pueden ser almacenadas hasta 5 d as a 2 8 C antes del ensayo Las muestras almacenadas por un per odo de tiempo mas largo han de congelarse s lo una vez a 20 C antes del ensayo Las muestras descongeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo 5 3 Dilucion de las muestras Si en un ensayo inicial se encuentra una muestra que presenta valores mayores que el est ndar mas concentrado ha de diluirse con Standard O y volver a ensayarse como se describe en el Procedimiento de Ensayo Para el c lculo de las concentraciones habr que tener en cuenta el factor de diluci n Ejemplo a diluci n 1 10 10 uL Suero 90 uL Standard O mezclar totalmente b diluci n 1 100 10 uL diluci n a 1 10 90 uL Standard O mezclar totalmente 6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 6 1 Consideraciones generales Todos los reactivos y muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso Todos los reactivos deben mezclarse sin formar espuma Una vez se ha comen
51. ratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutic consequences be derived The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutic consequences 11 3 Liability Any modification of the test kit and or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test Such modification and or exchanges invalidate any claim for replacement Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point 11 2 are also invalid Regardless in the event of any claim the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit Any damage caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 8 12 1 2 10 11 12 13 14 15 16 17 18 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 REFERENCES Ruoslahti E and Seppala M Studies of Carcino Fetal Proteins Physical and Chemical Properties of Human Alpha Fetoprotein Int J Cancer 7 218 1971 Gitlin D Perricelli A and Gitlin G M Synthesis of Alpha Fetoprotein by Liver Yolk Sac and Gastrointestinal Tract of the Human Conceptus Cancer Res 32 979 1972 Masseyeff R Gilli G Krebs B Bonet C and Zrihen H Evolution en Fonction de l Age du Taux
52. re des chantillons ou toute modification du test peut influencer les r sultats L h moglobine jusqu 4 mg mL la bilirubine jusqu 0 5 mg mL et les triglyc rides jusqu 30 mg mL n ont aucune influence sur les r sultats du dosage 10 2 Drogues parasites Jusqu pr sent nous ne connaissons aucune substance drogues capable d influencer la mesure de AFP dans un chantillon 10 3 Effet de surdosage Jusqu a 1600 IU mL de AFP aucun effet de surdosage n a t d tect avec ce test 11 ASPECTS LEGAUX 11 1 Fiabilit des r sultats Ce test doit tre exactement utilis selon les instructions d utilisation du fabricant De plus les utilisateurs doivent strictement respecter les r gles de la bonne pratique de laboratoire ou autres lois nationales Cela est sp cialement le cas pour l utilisation des r actifs contr les Pour chaque test il est important d inclure un nombre suffisant de contr les afin de pouvoir valider l exactitude et la pr cision du test Les r sultats du test sont valides si et seulement si tous les contr les sont compris dans les gammes de mesure mentionn es et si tous les autres param tres du test sont galement compris dans les instructions de ce test En cas de doute ou d inqui tude contacter la DRG 11 2 Cons quences th rapeutiques Les suites th rapeutiques ne devront jamais tre bas es sur les r sultats de laboratoire seuls m me si les tous les r sultats du tes
53. re la validit del test Questi cambiamenti e o scambi annullano ogni diritto al risarcimento Si respingano inoltre tutti i richiami risultanti da interpretazioni sbagliate da parte dell utente secondo il paragrafo 11 2 Nel caso di reclamazione la garanzia del produttore limitato al valore massimo del test kit Ogni danno provocato durante il trasporto del kit non sottost alla responsabilit del produttore 12 BIBLIOGRAFIA Per dettagli pi precisi consultare la metodica in inglese Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 22 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 1 INTRODUCCI N El Kit de inmunoensayo enzim tico DRG AFP proporciona los materiales necesarios para la determinaci n cuantitativa del alfa fetoprote na AFP en suero Este ensayo est dise ado solo para diagn stico in vitro 2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO El Kit DRG AFP ELISA es un ensayo en fase s lida de inmunoadsorci n unido a enzimas ELISA basado en el principio del s ndwich Los pocillos de las placas est n recubiertos con un anticuerpo monoclonal policlonal dirigido contra un nico foci antig nico en una mol cula de AFP Se incuba una al cuota de una muestra perteneciente a un paciente que contiene AFP end gena en los pocillos recubiertos con el enzima conjugado que es un anticuerpo anti AFP conjugado con la peroxidasa end gena Despu s de la incubaci n se lava el conjugado que no se ha unido La cantidad de peroxidasa unida es proporcional a la
54. ring Substances Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results Haemoglobin up to 4 mg mL Bilirubin up to 0 5 mg mL and Triglyceride up to 30 mg mL have no influence on the assay results 10 2 Drug Interferences Until today no substances drugs are known to us which have an influence to the measurement of AFP in a sample 10 3 High Dose Hook Effect No hook effect was observed in this test up to 1600 IU mL of AFP 11 LEGAL ASPECTS 11 1 Reliability of Results The test must be performed exactly as per the manufacturer s instructions for use Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP Good Laboratory Practice or other applicable national standards and or laws This is especially relevant for the use of control reagents It is important to always include within the test procedure a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications In case of any doubt or concern please contact DRG 11 2 Therapeutic Consequences Therapeutic consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under point 11 1 Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient Only in cases where the labo
55. ropiados para el an lisis de los valores y tendencia de los controles Si los resultados del ensayo no se ajustan a los rangos aceptables establecidos en los controles los resultados obtenidos de los pacientes han de considerarse inv lidos En este caso por favor comprobar las siguientes reas t cnicas Pipeteo y tiempo empleado fot metro fecha de caducidad de los reactivos condiciones de almacenamiento e incubaci n m todos de aspiraci n y lavado Despu s de comprobar los asuntos mencionados arriba sin encontrar ning n error contactar con su distribuidor o con DRG directamente 9 CARACTER STICAS DEL ENSAYO 9 1 Rango din mico del ensayo El rango del ensayo se encuentra entre 0 160 IU mL 9 2 Especificidad de los Anticuerpos Reactividad Cruzada Consultar el manual de usuario en ingl s 9 3 Sensibilidad Anal tica La sensibilidad anal tica se calcul a partir de la media mas dos desviaciones est ndar de veinte 20 r plicas del Est ndar O y result ser 1 78 IU mL Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 27 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 9 4 Precision Consultar el manual de usuario en ingl s 9 5 Recuperaci n Consultar el manual de usuario en ingl s 9 6 Linealidad Consultar el manual de usuario en ingl s 10 LIMITACIONES DE USO 10 1 Sustancias que pueden interferir Cualquier manipulaci n inadecuada de las muestras o modificaciones del ensayo pueden influenciar los resultados H
56. t e Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according the national biohazard safety guideline or regulation e Safety Data Sheets for this product are available upon request directly from DRG Instruments GmbH The Safety Data Sheets fit the demands of EU Guideline 91 155 EC Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 2 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 4 KIT COMPONENTS 4 1 Contents of the Kit 1 Microtiterwells 12x8 break apart strips 96 wells Wells coated with anti AFP antibody monoclonal 2 Standard Standard 0 4 5 vials lyophilized 0 5 mL Concentrations O 10 40 80 160 IU mL Conversion 11U mL 1 21ng mL The standards are calibrated against NIBSC 1 International Standard for Alphafoetoprotein AFP AFP 1 IRP 72 225 See Preparation of Reagents contain 0 03 Proclin 300 0 015 BND and 0 010 MIT as preservatives 3 Enzyme Conjugate 1 vial 11 mL ready to use Anti AFP antibody conjugated to horseradish peroxidase contains 0 03 Proclin 300 0 015 BND and 0 010 MIT as preservatives 4 Substrate Solution 1 vial 14 mL ready to use Tetramethylbenzidine TMB 5 Stop Solution 1 vial 14 mL ready to use contains 0 5M H2SO4 Avoid contact with the stop solution It may cause skin irritations and burns BND 5 bromo 5 nitro 1 3 dioxane MIT 2 methyl 2H isothiazol 3 one Note Additional Standard O for sample dilution is available up
57. t sont en accord avec les points mentionn s dans le paragraphe 11 1 Tout r sultat n est qu une partie du tableau clinique complet d un patient Les suites th rapeutiques peuvent d couler des r sultats de laboratoire si et seulement si ceux ci sont en accord avec l ensemble du tableau clinique du patient Le r sultat du test en lui m me ne doit en aucun cas tre le seul d terminant des suites th rapeutiques suivre 11 3 Responsabilit Toute modification du kit et ou change ou m lange d un des composants de diff rents lots d un kit un autre pourrait affecter de fa on n gative les r sultats attendus et la validit du test dans son ensemble De telles modifications ou changes invalident toute r clamation pour remplacement Toutes les r clamations soumises relatives au paragraphe 11 2 et dues une mauvaise interpr tation des r sultats de laboratoire de la part du client sont galement invalides N anmoins en cas de r clamation la responsabilit du fabricant n est pas de d passer les limites de la valeur du kit Tout dommage caus au kit lors de son transport n est pas du ressort de la responsabilit du fabricant 12 REFERENCES Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 34 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 SYMBOLS USED WITH DRG ELISA S Symbol English Deutsch Francais Espanol Italiano M MA European Conform
58. te ensayo se ve marcadamente influenciada por la realizaci n correcta del proceso de lavado Adicionar 100 uL de Substrate Solution a cada pocillo Incubar durante 10 minutes a temperatura ambiente Parar la reacci n enzim tica mediante la adici n de 50 L de Stop Solution a cada pocillo Leer la OD a 450 10 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos despu s de la adici n de la Stop Solution C lculo de los Resultados Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de est ndares controles y muestras de pacientes Construir una curva est ndar mediante la representaci n de la absorbancia media obtenida para cada est ndar frente a su concentraci n con el valor de absorbancia en el eje vertical Y y la concentraci n en el eje horizontal X Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentraci n correspondiente a partir de la curva est ndar M todo automatizado Los resultados en la IFU se han calculado autom ticamente usando una curva de regresi n 4 PL 4 Par metros Logisticos Otras funciones de regresi n dar n lugar a resultados sensiblemente diferentes La concentraci n de las muestra puede leerse directamente de la curva de est ndares Las muestras con concentraciones superiores al mayor est ndar han de diluirse Para el c lculo de las concentraciones hay que tener en cuenta el factor de diluci n 1 Ejemplo t pico de una curva est ndar Abajo aparece un eje
59. te proporzionale con il tempo e con la temperatura Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 19 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 6 2 Eseguimento del test Ogni analisi deve includere una curva standard 1 Fissare i pozzetti necessari sul supporto 2 Pipettare 25 uL di ogni Standard Control e campione nei pozzetti cambiando ogni volta la punta monouso 3 Pipettare 100 uL Enzyme Conjugate in ogni pozzetto Agitare bene per 10 secondi E molto importante raggiungere un completo mescolamento 4 Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente 5 Rovesciare la piastra per vuotare i pozzetti Lavare i pozzetti 5 volte con acqua distillata 400 uL in ogni pozzetto Rimuovere le gocce d acqua rimanenti rivoltando la piastra su carta assorbente Importante La sensibilit e la precisazione di questo kit sono fortemente influenzate dal corretto eseguimento del lavaggio Aggiungere 100 uL della Substrate Solution ad ogni pozzetto Incubare per 10 minuti a temperatura ambiente Fermare la reazione enzimatica aggiungendo 50 uL della Stop Solution ad ogni pozzetto Determinare la densit ottica a 450 10 nm con un fotometro per microtiter piastre entro 10 minuti dopo l aggiunta della Stop Solution Ke ca ro 6 3 Rilevamento dei risultati Determinare i valori medi della densit ottica per ogni set di standard controlli e campioni Costruire una curva standard riportare i valori medi della densit ottica OD di ogn
60. ter toute contamination L absorbance est fonction du temps d incubation et de la temp rature Avant de commencer le test il est recommand de pr parer tous les r actifs bouchons ouverts de pr parer les puits des microplaques etc Cela garantira un intervalle de temps quivalent entre chaque tape sans interruption En r gle g n rale la r action enzymatique est lin airement proportionnelle au temps et la temp rature Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 31 6 2 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 R alisation du dosage Chaque test doit inclure une courbe talon 1 2 Oi SOD 6 3 Disposer le nombre de puits de micro titration d sir dans le support D poser 25 uL de chaque Standard Control et les chantillons avec de nouveaux c nes de pipette dans les puits appropri s D poser 100 uL d Enzyme Conjugate dans chaque puits Bien m langer pendant 10 secondes Il est important d obtenir un m lange parfait lors de cette tape Incuber pendant 30 minutes a temp rature ambiante Decanter le contenu des puits et rincer les puits 5 fois avec de l eau distill amp e 400 uL par puits Tapoter les puits sur du papier absorbant afin d liminer les gouttelettes r siduelles Remarque importante La sensibilit et la pr cision de ce test sont fortement d pendantes de la bonne r alisation des tapes de lavage Ajouter 100 uL de Substrate Solution a chaque puits In
61. this dilution factor has to be taken into account 1 Example of Typical Standard Curve The following data is for demonstration only and cannot be used in place of data generations at the time of assay Standard Optical Units 450 nm Standard 4 160 IU mL Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 5 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 7 EXPECTED VALUES It is strongly recommended that each laboratory should determine its own normal and abnormal values In a study conducted using the DRG AFP ELISA the following values are observed 7 1 Normal healthy adults non pregnant The lower limit of AFP concentration in normal serum is less than 1 IU mL the upper limit is about 10 IU mL pregnancy IU mL 32 103 42 121 48 139 56 224 95 357 135 435 141 423 121 380 93 321 7 2 Values during pregnancy Weeks of AFP pregnancy IU mL re te IMPORTANCE Maternal serum containing above 2 5 times the normal median for weeks 16 to 18 of pregnancy was detected in 88 of cases of anencephaly and in 79 of cases of open spina bifida 2 The concentration of AFP in hepatocellular carcinoma and germ cell tumor varies from the normal range up to several million IU ml After surgical resection the serum AFP may drop to normal range or somewhat above it 3 AFP may occur in serum of patients with diseases other than hepatocarcinoma or embryonal carcinoma of the testes such as neonatal hepatitis and nonhepatic
62. tion has been found After this they should be disposed according to the official regulations Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 3 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 5 SPECIMEN Serum should be used in this assay Do not use haemolytic icteric or lipaemic specimens NOTE Samples containing sodium azide should not be used in the assay NOTE If an amniocentesis is necessary the specimen collection has to done before the puncture After the amniotic puncture increased AFP values are determined 5 1 Specimen Collection Serum Collect blood by venipuncture e g Sarstedt Monovette 02 1388 001 allow to clot and separate serum by centrifugation at room temperature Do not centrifuge before complete clotting has occurred Patients receiving anticoagulant therapy may require increased clotting time 5 2 Specimen Storage Specimens should be capped and may be stored for up to 5 days at 2 8 C prior to assaying Specimens held for a longer time should be frozen only once at 20 C prior to assay Thawed samples should be inverted several times prior to testing 5 3 Specimen Dilution If in an initial assay a specimen is found to contain more than the highest standard the specimens can be diluted with Standard O and reassayed as described in Assay Procedure For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account Example a dilution 1 10 10 uL Serum 90 uL Standard 0 mix thoroughly
63. tro 1 3 dioxane MIT 2 methyl 2H isothiazol 3 one Anmerkung Zus tzlicher Standard O zur Probenverd nnung ist auf Anfrage erh ltlich 4 1 1 Nicht im Kit enthaltene aber erforderliche Ger te und Materialien Kalibriertes Mikrotiterplattenleseger t mit 450 10 nm Filter z B das DRG Instruments Mikrotiterplattenleseger t Kalibrierte variable Prazisions Mikropipette Saugf higes Papier Bidestilliertes Wasser 4 2 Lagerung und Haltbarkeit des Kits Die unge ffneten Reagenzien behalten bei Lagerung um 2 8 C ihre Reaktivit t bis zum Verfallsdatum Nach dem Verfallsdatum die Reagenzien nicht mehr verwenden Nach dem ffnen sollten alle Reagenzien bei 2 8 C gelagert werden Die Mikrotiterwells sollten bei 2 8 C gelagert werden Der einmal ge ffnete Folienbeutel sollte stets sehr sorgf ltig wieder verschlossen werden Unter den beschriebenen Lagerbedingungen behalten ge ffnete Kits 6 Wochen ihre Reaktivit t 4 3 Vorbereitung der Reagenzien Alle Reagenzien sowie die ben tigte Anzahl von Wells sollen vor dem Gebrauch auf Raumtemperatur gebracht werden Standards Rekonstituieren Sie den lyophilisierten Inhalt der Standardfl schchen mit 0 5 mL bidestilliertem Wasser Achtung Bei 2 8 C sind die rekonstituierten Standards 2 Monate haltbar F r eine l ngere Aufbewahrung bei 20 C einfrieren 4 4 Entsorgung des Kits Die Entsorgung des Kits muss gem den nationalen gesetzlichen Vorschriften erfolgen Sp
64. u br lures de la peau e Ne jamais pipeter avec la bouche et viter tout contact de la peau ou des muqueuses avec les r actifs ou les chantillons e Ne pas fumer manger boire ou utiliser des produits cosm tiques dans les zones o les chantillons ou le kit ont t mani s e Porter des gants d examen lors de l utilisation des chantillons ou des r actifs Une contamination microbienne des chantillons ou des r actifs pourrait fausser les r sultats e L utilisation de ce kit devra tre en accord avec les normes ou recommandations nationales de s curit en vigueur concernant les produits risque biologique e Ne pas utiliser les r actifs au del de la date d expiration inscrite sur l emballage e Tous les volumes indiqu s doivent tre scrupuleusement respect s comme indiqu dans le protocole exp rimental Seule l utilisation de pipettes calibr es ou d un spectrophotom tre lecteur de micro plaques calibr garantit l obtention de r sultats optimaux ce test e Ne pas m langer ou utiliser des r actifs contenus dans des kits de lots diff rents Il est conseill de ne pas changer les puits de diff rentes plaques m me si celles ci proviennent du m me lot Les kits peuvent avoir t transport s ou stock s diff remment et les caract ristiques de liaison de chaque plaque pourraient ainsi tre modifi es e L elimination des solutions chimiques et des r actifs contenus dans ce kit utilis s ou non do
65. ultats Utiliser les m thodes d analyses statistiques appropri es pour l analyse des valeurs contr les et des tendances Si les r sultats ne correspondent pas aux limites tablies des contr les les r sultats concernant ces patients doivent tre consid r es comme non valides Dans ce cas tester les zones techniques suivantes m canisme de pipettage et temps spectrophotom tre dates d expiration des r actifs conditions de stockage et d incubation m thodes d aspiration et de lavage Apr s avoir tester les points mentionn s si aucune erreur n est d tect e contacter votre distributeur ou directement la DRG 9 CARACTERISTIQUES DU TEST 9 1 Zone de mesure Les limites du dosage sont comprises entre O 160 IU mL 9 2 Sp cificit des anticorps R action crois e Voir le manuel d utilisateur en version anglaise 9 3 Sensibilit de l analyse La sensibilit de analyse a t calcul e partir de la moyenne la plus lev e de deux d viations standards de l analyse de vingt r plicats du Standard 0 et a t mesur e 1 78 IU mL Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 33 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 9 4 Pr cision Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 9 5 Recouvrement Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 9 6 Lin arit Voir le manuel de l utilisateur en version anglaise 10 LIMITES D UTILISATION 10 1 Substances parasites Toute utilisation improp
66. uto olume NO olume No olumen Anza olume Num ro olumen N mero olume Quantit Vol N Vol IN Vol Anzahl Vol Nume Vol N Vol Q ita icrotiterwells icrotiterwells ikrotiterwells RA Ka acas multipocillo icropozzetti M Il M N Mik N ni de micro PI Itipocill M ntiserum ntiserum ntiserum ntis rum ntisuero ntisiero Ant A A A A A nzyme Conjugate nzymkonjugat onjugu enzymatique onjugado enzim tico racciante enzimatico oo E Cori Mere ree asie CARRA E E BEER nzyme Complex nzymkomplex omplex enzim tico omplesso enzimatico si he E Compl Enzymkompl al Sara Compl im ti Compl imati S ubstrate Solution ubstratl sung olution substrat oluci n de sustrato oluzione di substrato a Sub Soluti Sub l Soluti b Soluci n d Soluzi di sub Stop Solution Stop Solution Stoppl sung Solution d arr t Soluci n de parada Soluzione d arresto Zero Standard Zero Standard Nullstandard Standard 0 Estandar 0 Standard zero Standard Standard Standard Standard Estandar Standard Control Control Kontrolle Contr le Control Controllo Assay Buffer Assay Buffer Assaypuffer Tampon d essai Tamp n de ensayo Tampone del test Wash Solution Wash Solution Waschl sung Solution de lavage Soluci n de lavado Soluzione di lavaggio 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH 1N NaOH SARIN drossid di 1 N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI 1N HCI Sample Diluent Sample Diluent mn een ahi dicon Diluente dei campioni SE Conjugate Diluent pn ee dilution LL di
67. zado el ensayo deben completarse todos los pasos sin interrupci n Utilizar puntas de pipeta de pl stico nuevas para cada est ndar control o muestra para evitar combinaciones cruzadas La absorbancia es funci n del tiempo de incubaci n y la temperatura Antes de comenzar el ensayo se recomienda que todos los reactivos est n preparados tapas removidas todos los pocillos que se necesiten asegurados en recipiente etc Esto asegurar un tiempo similar para cada paso de pipeteo sin que haya interrupciones Como regla general la reacci n enzim tica es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura Vers 7 0 Effective 2008 07 tab 25 6 2 DRG Alpha Fetoprotein AFP ELISA EIA 1468 Procedimiento de ensayo Cada uno debe incluir una curva de est ndares 1 2 3 no 6 3 Asegurar el n mero deseado de pocillos en el recipiente Dispensar 25 uL de cada Standard Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos adecuados Dispensar 100 pL de Enzyme Conjugate a cada pocillo Mezclar totalmente durante 10 segundos Es importante mezclar completamente en este paso Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente Sacudir en rgicamente el contenido de los pocillos Lavar los pocillos 5 veces con agua destilada 400 uL por pocillo Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales Nota importante La sensibilidad y la precisi n de es

Alpha Fetoprotein (AFP) ELISA

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