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Human IgA2 Kit for use on SPAPLUS For in

1. 8 3 Vorbereitung der Reagenzien Die Reagenzien vorsichtig sch tteln bevor sie ins Ger t gestellt werden Dabei Schaum und Blasenbildung vermeiden da dies St rungen beim Pipettieren verursachen kann 8 4 Testdurchf hrung Der Anwender sollte mit dem SPAPLUS vertraut sein bevor der Test durchgef hrt wird Das Ger t wie im Handbuch des Herstellers beschrieben vorbereiten Die Tesparameter werden wie nachfolgend aufgef hrt eingegeben Eine ausf hrliche Beschreibung entnehmen Sie der SPAPLUS Bedienungsanleitung FINO12 die mit dem Ger t geliefert wird 8 4 1 Test Parameter Die Testparameter werden unter Item Nummer 12 eingeben Item Name 12 IgA2 Units mg L Type Logit2W Decimals 1 Standard 1 4 ANALYSIS 2 5 Type End Y 3 6 Main W Length 1 600 w NORMAL RANGE Sub W Length v MALE FEMALE Menos LOW HIGH LOW HIGH Serum Il 11 Il FE oe de Une u Bl O AS Y 1 X 0 Plasma Il li IT 7 CSF Il r Il Dialysis 11 I Il Other IL I t it Page 1 Print Hard Copy Next Page Save Return ItemName 12 IgA2 DATA PROCESS READ ABSORBANCE LIMIT ASPIRATION START END KIND o Single e Double MAIN 53 54 LOW 3 0 VOLUME SUB 35 36 HIGH 3 0 nn VOL uL FACTOR Reaction Check REAGENT2 VOL 80 Blank correction 1 o ON e OFF ENDPOINT LIMIT 2 0 CHECK POINT LINEAR CHECK 0 LOW 3 Third mix e OFF o ON HIGH 3 R1 Blank e Water Blank DILUTION Diluent e 99 Dil 1 0100 Dil 2 Pre D
2. Human IgA2 Kit for use on SPAPLUS For in vitro diagnostic use Product Code LK088 S Product manufactured by The Binding Site Group Ltd PO Box 11712 Birmingham B14 4ZB UK www bindingsite co uk Telephone 44 0 121 436 1000 Fax 44 0 121 430 7061 E mail info bindingsite co uk FDA USA Information Analyte Name Immunoglobulins A subclasses Complexity Category Moderate CE 1 INTENDED USE This kit is intended for quantifying human IgA subclass 2 IgA2 in serum using the Binding Site SPAPLUS turbidimetric analyser Measurement of this immunoglobulin aids in the diagnosis of abnormal protein metabolism and the body s lack of ability to resist infectious agents The test result is to be used in conjunction with other clinical and laboratory findings 2 SUMMARY AND EXPLANATION Two classes of IgA have been identified in humans IgA1 which accounts for 80 90 of total serum IgA and IgA2 which is the major subclass in secretions such as milk The two subclasses appear to be regulated independently Antigenic sites on the IgA subclasses are responsible for the anaphylactic transfusion reactions experienced by some patients totally deficient in either IgA1 or IgA2 After repeated transfusion such patients may produce antibodies to these antigens IgA subclasses are of further importance in that certain pathogenic microorganisms including Haemophilus influenzae are capable of enzymic cleavage of IgA1 leading to p
3. Bilirubin Hb Chyle Mean IgA2 mg L 19 2 19 4 19 7 interference 0 93 0 7 1 0 12 6 Antigen excess No antigen excess was observed to a level of five times the top point of the assay approximately 6 55g L 13 1 2 3 4 BIBLIOGRAPHY Protein Reference Unit Handbook of Clinical Immunochemistry 1990 Ed A Milford Ward Publ PRU Publications Sheffield 133 134 Mestecky J et al 1989 Comparative studies of the biological properties of human IgA subclasses Protides of the Biol Fluids 36 179 182 Conley M E et al 1983 Serum levels of IgA1 and IgA2 in children and in patients with IgA deficiency Mol Immunol 20 977 981 Tang LX Showell P Carr Smith HD Mead GP Drew R and Bradwell AR 2000 Evaluation of F ab based latex enhanced nephelometric reagents for free immunoglobulin light chains on the Behring Nephelometer II Clin Chem 46 6 Suppl 2000 705 pA181 Insert Code SIN179 Version 18 August 2010 Page 2 of 8 Human IgA2 Kit zur Verwendung auf dem SPAPLUS Nur zur in vitro Diagnostik Bestell Nr LK088 S Hergestellt von The Binding Site Group Ltd PO Box 11712 Birmingham B14 4ZB UK www bindingsite co uk Vertrieb in Deutschland und sterreich durch The Binding Site GmbH Robert Bosch StraBe 2A D 68723 Schwetzingen Deutschland Telefon 49 0 6202 92 62 0 Fax 49 0 6202 92 62 222 e mail office bindingsite de CE 1 VERWENDUNGSZWECK Zur q
4. do not allow to warm to room temperature 11 EXPECTED VALUES The ranges provided have been obtained from a limited number of samples and are intended for guidance purposes only Wherever possible it is strongly recommended that ocal ranges are generated Adult serum ranges These ranges were obtained using this kit by measuring the IgA2 concentration of sera aken from healthy adult UK blood donors The reference interval was calculated using non parametric statistics and represents the central 95 of the population Number n Mean mg L Median mg L 95 Percentile Range mg L IgA2 120 392 5 321 9 68 9 1142 5 12 PERFORMANCE CHARACTERISTICS 12 1 Precision A study was performed following CLS Evaluation of Precision Performance of Clinical Quantitative Measurement Methods Approved Guideline CLSI Document EP5 A2 The study was performed over 21 working days with two runs per day One user assessed hree different samples using three different reagent lots on three analysers IgA2 Precision summar Mean Within run Between run Between day Total mg L SD_ CV SD CV SD CV SD CV Serum 1 1121 47 31 14 2 8 16 43 1 5 68 36 6 1 76 89 6 9 Serum 2 684 56 15 46 2 3 10 92 1 6 25 95 3 8 32 11 4 7 Serum 3 79 93 3 37 4 2 3 01 3 8 6 00 75 7 51 9 4 12 2 Comparison A correlation study was performed on 89 samples 26 normal serum an
5. Kontakt mit Haut v a bei Verletzungen oder Schleimh uten vermeiden Nach Kontakt Hautstelle mit viel Wasser absp len und rztlichen Rat einholen Natriumazid kann mit Blei oder Kupferrohren explosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung mit ausreichender Menge Wasser nachsp len um Azidablagerungen zu vermeiden Dieser Test sollte nur f r den angegebenen Verwendungszweck von entsprechend geschultem Laborpersonal durchgef hrt werden Die Einhaltung der Arbeitsanleitung bei allen Arbeitsschritten ist dringend notwendig Bei Verwendung von abge nderten Testparametern kann die Richtigkeit der Ergebnisse nicht garantiert werden Reagenzien unterschiedlicher Chargen d rfen NICHT untereinander gemischt oder ge meinsam verwendet werden Bei gro em Testdurchsatz muss darauf geachtet werden dass alle Reagenzien der gleichen Charge entstammen ME LAGERUNG UND STABILIT T Die unge ffneten Kits sind bei 2 8 C bis zum auf dem Au enetikett angegebenen Verfallsdatum haltbar NICHT EINFRIEREN Nach dem ffnen sind das Human IgA2 Latex Reagenz der Reaktionspuffer die Kalibratoren und Kontrollen f r 3 Monate im K hlschrank bei 2 8 C stabil vorausgesetzt die Gef e werden nach jeweiligem Gebrauch wieder mit Deckel verschlossen um Verdunstung oder Verunreinigung zu vermeiden Das Human IgA2 Latex Reagenz und der Reaktionspuffer k nnen auch ohne Deckel bei 8 12 C bis zu 30 Tage im SPAPLUS Analyser gelagert werden solange die K hlung
6. SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION Use fresh or deep frozen serum samples Blood samples should be collected by venepuncture allowed to clot naturally and the serum separated as soon as possible to prevent haemolysis The serum may be stored at 2 8 C for up to 48 hours prior to assay or for prolonged storage kept at 20 C or below Repeated freezing and thawing should be avoided Microbially contaminated haemolysed and lipaemic serum and samples containing particulate matter should not be used 8 METHODOLOGY 8 1 Materials provided 8 1 1 1 x 50 Tests Human IgA2 Latex SPAPLUS 8 1 2 1 x Human IgA2 SPAPLUS Calibrator set 1 6 6 x 1 0mL 8 1 3 2 x 1 2mL Human IgA Subclass SPAPLUS High Control 8 1 4 2 x 1 2mL Human IgA Subclass SPAPLUS Low Control 8 1 5 1 x 50 Tests gA2 Reaction Buffer SPAPLUS 8 2 Materials required but not provided 8 2 1 Equipment for collection and preparation of test samples e g sample tubes centrifuge etc 8 2 2 A fully operational and equipped SPAPLUS analyser 8 2 3 Current analyser operating instructions SPAPLUS Reference Guide Insert Code FINO12 8 2 4 Sample Diluent 99 Dil 1 Product Code SN080 S 8 3 Reagent preparation Before loading gently mix by inversion ensuring no foam or bubbles are generated or remain on the surface as these may interfere with reagent aspiration 8 4 Test procedure The user should be familiar with the operation of the SPAPLUS analyser before attempting to carry out th
7. angeschaltet ist Hauptsromschalter bleibt immer auf Position an 7 PROBENENTNHAME UND VORBEREITUNG Immer frisches oder tiefgefrorenes Serum verwenden Blutproben ber Venenpunktur sammeln und auf nat rliche Weise gerinnen lassen Serum so schnell wie m glich vom Gerinnsel trennen um eine H molyse zu vermeiden Die Proben k nnen bei 2 8 C bis zu 48 Stunden vor dem Test gelagert werden F r eine l ngere Lagerung wird empfohlen die Proben unverd nnt bei mindestens 20 C einzufrieren Wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermeiden Keine mikrobiell oder mit Partikeln verunreinigte Proben oder h molytische oder lip mische Seren verwenden 8 TESTDURCHFUHRUNG 8 1 Gelieferte Materialien 8 1 1 1 x 50 Tests Human IgA2 Latex SPAPLUS Human IgA2 Antiserum f r den SPAPLUS 2 1 x Human IgA2 SPAPLUS Calibrator set 1 6 6 x 1 0mL Kalibrator Set f r IgA2 3 2 x 1 2mL Human IgA Subclass SPAPLUS High Control IgA2 Kontrolle High Level 4 2x 1 2mL Human IgA Subclass SPAPLUS Low Control IgA2 Kontrolle Low Level 5 1 x 50 Tests gA2 Reaction Buffer SPAPLUS IgA2 Reaktionspuffer Ben tigte nicht im Kit enthaltene Materialien a Laborausstattung zum Sammeln und Vorbereiten der Proben Probenr hrchen Zentrifugen etc 8 2 2 Einen vollausgestatteten und funktionsf hrigen SPAPLUS Analyser 8 2 3 Aktuelle Ger te Bedienungsanleitung SPAPLUS Bedienungsanleitung FINO12 8 2 4 Probendiluens 99 Dil 1 Bestell Nr SN080 S
8. de la muestra a una soluci n que contiene el anticuerpo adecuado Se hace pasar un haz de luz a trav s de la cubeta de reacci n donde a medida que tiene lugar la reacci n ant geno anticuerpo se forman complejos inmunes que dispersan la luz La luz dispersa se monitoriza midiendo la disminuci n de la intensidad del haz de luz incidente El anticuerpo est en exceso en la cubeta por lo que la cantidad de complejos inmunes formados es proporcional a la concentraci n de ant geno Una serie de calibradores de concentraci n de ant geno conocida se ensaya inicialmente para preparar una curva de calibraci n de la luz dispersa medida frente a la concentraci n de ant geno De este modo pueden ensayarse muestras de concentraci n desconocida de ant geno y determinarse dicha concentraci n utilizando la curva de calibraci n La sensibilidad de los tests turbidim tricos puede aumentar con el uso de part culas de l tex ref 4 Esto comporta la uni n del anticuerpo a una part cula de tama o adecuado para obtener el aumento de la difusi n del rayo de luz durante la reacci n antigeno anticuerpo 4 4 1 Reactivo de L tex IgA2 Humana Consiste en anticuerpo monoespecifico de oveja unido a l tex poliestireno y se suministra en forma l quida estable Conservantes 0 099 de azida s dica 0 1 de cido E amino N caproico EACA 0 01 de Benzamidina 0 05 de ProClin 300 y 1 de Protease Inhibitor Cocktail 1 No 539131 del cat logo de C
9. de la plus petite valeur en premier IMPORTANT l automate va automatiquement calculer et rentrer les gammes de mesures correctes dans les cases correspondantes des pages 3 et 4 si la touche ENTER est cliqu e apr s avoir rentrer les valeurs des 6 calibrateurs sur la Page 1 Il est possible de voir les param tres rentr s page 4 pour s assurer du bon param trage 8 4 2 Volumes des contr les Pour chaque contr le d poser 120uL 30uL pour chaque test r aliser sur ce contr le dans une cupule chantillon et la placer sur le portoir Par exemple si les contr les des deux sous classes et des IgA doivent tre r alis s alors le volume requis est 120uL 90uL 210uL NB Ceci ne peut tre effectu que si les lots de contr les fournis dans les coffrets IgA et sous classes sont les m mes Si diff rents lots de contr les sont utilis s des contr les suppl mentaires doivent tre param tr s 8 4 Gamme de mesure La gamme approximative de mesure pour le test IgA2 la dilution standard au 1 10 est de 50 1250mg L 9 CONTROLE QUALITE Les contr les fournis doivent tre utilis s dans chaque s rie Les concentrations des contr les sont indiqu es sur le certificat de contr le de qualit du coffret SIN179 QC Les r sultats obtenus pour les chantillons ne doivent tre accept s que si les contr les sont dans une gamme de 15 par rapport la concentration cible LU LIMITATIONS 10 1 Les tests en turbidi
10. guardada se debe recalibrar el ensayo Si tras la recalibraci n los valores de control medidos con la nueva curva quedan todav a fuera de rango se debe revisar el instrumento y los par metros de ensayo antes de repetir el ensayo Si los problemas contin an contacte con su proveedor 10 4 No debe realizarse el diagn stico ni iniciarse un tratamiento bas ndose nicamente en la medida de la IgA2 deben tenerse en cuenta tambi n la historia cl nica y resultados de otras pruebas de laboratorio 10 5 Las variaciones en la temperatura del reactivo puede afectar a los resultados Aseg rese de que los reactivos se transfieran directamente desde el refrigerador al compartimento refrigerado para reactivos del analizador no deje que pasen a temperatura ambiente 11 VALORES ESPERADOS Los rangos indicados se han obtenido a partir de un n mero limitado de muestras y son nicamente una gu a Siempre que sea posible es muy recomendable que se establezcan rangos de normalidad en cada laboratorio Rangos en sueros de adultos Se obtuvieron estos rangos utilizando este kit midiendo la concentraci n de IgA2 de sueros omados de donantes de sangre adultos sanos UK El intervalo de referencia se calcul utilizando estad stica no param trica y representa el 95 central de la poblaci n 12 3 L mite del blanco y l mite de detecci n Basado en CLSI document EP17 A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits Quantitation App
11. 099 d azide sodium 0 1 d acide E amino n caproique EACA 0 01 de benzamidine 0 05 de ProClin 300 et 1 de cocktail 1 inhibiteur de la prot ase Calbiochem catalogue No 539131 4 2 Calibrateurs et contr les Ils consistent en des m langes de s rums humains et sont fournis sous forme liquide stable lls contiennent 0 099 d azide de sodium 0 1 d EACA et 0 01 de benzamidine comme conservateurs La concentration en IgA2 inscrite sur le certificat de contr le de qualit a t obtenue par comparaison avec la pr paration de r f rence international CRM470 4 3 Tampon de r action Contient 0 099 d azide de sodium comme conservateur ProClin est une marque d pos e de Rohm et Haas Corp Philadelphie PA 5 PRECAUTIONS Tous les s rums humains fournis dans ce coffret ont t test s et trouv s n gatifs pour l antigene de surface de l h patite B Ag HBs pour le virus de l h patite C et pour les anticorps anti virus de l immunod ficience humaine HIV1 and HIV2 Les tests utilis s ont soit t approuv s par la FDA USA soit accept s pour un usage en diagnostic in vitro par l union europ enne Directive 98 79 EC Annexe Il n anmoins ces tests ne peuvent garantir absence d agents infectieux Tous les chantillons doivent donc tre manipul s comme des produits potentiellement infectieux Seul un personnel qualifi dans la manipulation d chantillons potentiellement infectieux est autoris ut
12. Save Return Automatically calculated Item Name 12 IgA2 Auto Rerun SW Auto Rerun Condition Absorbance e On o Off Auto Rerun Range Result Absorbance Range e On oOf oOn e Off Lower e On o Off Lower Higher Higher o On e Off feu ads a Prozone Range o On e Off rine Plasma CSF Dialysis Other Bottle Size ml 24 Items 36 Items Reagent1 60 Reagent Reagent2 R1 7 75 Reagent2 R1 Reagent2R2 4 5 Reagent2 R2 Page 3 Print Prev Page Save Return Insert Code SIN179 Version 18 August 2010 Page 1 of 8 NB The calibrator Standard values to be entered on Page 1 are found on the quality control certificate and should be entered in ascending order i e lowest value first IMPORTANT the analyser will automatically calculate and enter the correct measuring ranges on ltem pages 3 and 4 providing the ENTER button is pressed after typing the value for calibrator 6 on Page 1 You may view ltem parameter page 4 to ensure correct value entry 8 4 2 Control volumes For each control transfer 120uL plus 30uL for each assay that requires the control into a sample cup and place on the rack E g if both subclasses and IgA require control measurements then 120uL 90uL 210uL will be required NB This can only be done if the control batches supplied in the IgA and IgA subclass kits are the same If different control batches are in use extra controls should be set up 8 5 Measuring range The approximate measuring range of
13. UTION Diluent e 99 Dil1 0100 Dil 2 Pre Dilution Rate 10 v Auto Rerun Dilution Rate High v Auto Rerun Dilution Rate Low v MONITOR PROZONE CHECK 0 LEVEL SPAN 1 START END LIMIT SPAN 3 0 FIRST pr El SECOND Low e High THIRD LI olw e High Page 2 Print Hard Copy Prev Page Next Page Save Return calcula autom ticamente Insert Code SIN179 Version 18 August 2010 Page 7 of 8 Item Name 12 IgA2 Auto Rerun SW Auto Rerun Condition Absorbance eOn o Off Auto Rerun Range Result Absorbance Range e On oOff oOn e Off Lower e On o Off Lower Higher Higher o On e Off Serum Cal1 Cal 6 Prozone Range o On e Off Urine Plasma CSF Dialysis Other Bottle Size ml 24 ltems 36 Items Reagent 60 Reagent Reagent2R1 7 75 Reagent2 R1 Reagent2R2 4 5 Reagent2 R2 Page 3 Print Prev Page Save Return Nota Los valores de calibrador Standard que se han de introducir en Page 1 se encuentran en el certificado de control de calidad y han de introducirse en orden ascendente primero el valor inferior IMPORTANTE el analizador calculara y entrara autom ticamente los rangos de medida correctos en Item p ginas 3 y 4 siempre que se presione el bot n ENTER tras escribir el valor para el calibrador 6 en Page 1 Se puede visualizar el par metro del Item de la pagina 4 para asegurar la introducci n del valor correcto 8 4 2 Vol menes de control Para cada control Para cada ensayo que requiera control tr
14. albiochem 4 2 Calibradores y controles Se trata de suero humano seleccionado suministrado en forma l quida estable Conservantes 0 099 de azida s dica 0 1 de EACA y 0 01 de benzamidina La concentraci n de IgA2 que aparece en el certificado de control de calidad se ha obtenido por comparaci n con el material de referencia internacional CRM470 4 3 Buffer de reacci n Contiene azida s dica 0 099 como conservante ProClin es una marca de Haas Corp Philadelphia PA 5 PRECAUCIONES Los sueros humanos suministrados en el kit han sido sometidos a screening para donantes resultando negativos a la presencia del antigeno de superficie de la hepatitis B y a la presencia de los anticuerpos de la ante los virus HIV1 HIV2 y HCV Las t cnicas usadas est n aprobadas por la FDA USA o para el diagn stico in vitro por la UE Directiva 98 79 EC Anexo Il Sin embargo los sobredichos ensayos no garantizan la ausencia de agentes infecciosos Por lo tanto deben tratarse los reactivos como potencialmente infecciosos Tanto la manipulaci n como los m todos de eliminaci n de desechos deber n realizarse conforme a la normativa de materiales infecciosos y solo personal adecuadamente instruido deber efectuar el test Los componentes del kit contienen azida s dica y ProClin 300 y deben ser manipulados con precauci n use guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto No trague ni permita el contacto
15. alogue No 539131 4 2 Kalibratoren und Kontrollen Sie werden aus normalem gepooltem Humanserum hergestellt und liegen als stabilisierte Fl ssigkeiten vor Enthaltene Konservierungsmittel 0 099 Natriumazid 0 1 EACA und 0 01 Benzamidin Die auf dem QC Zertifikat angegebene IgA2 Konzentration wurde durch Vergleich mit dem Internationalen Referenzmaterial CRM470 erhalten 4 3 Reaktionspuffer Enthaltene Konservierungsmittel 0 099 Natriumazid ProClin ist ein Warenzeichen von Rohm and Haas Corp Philadelphia PA 5 WARNUNGEN UND VORSICHTSMABNAHMEN Jede Einzelspende von humanem Serum wurde untersucht und bez glich Antik rper gegen das Human Immunschw che Virus HIV 1 amp 2 das Hepatitis C Virus und gegen das Hepatitis B Oberfl chenantigen HBsAG als negativ befunden Die hierf r verwendeten Tests sind entweder von der FDA USA zugelassen oder f r den Gebrauch in der in vitro Diagnostik in der EU freigegeben Directive 98 79 EC Annex Il Es gibt aber zur Zeit keine absolut sicheren Testmethoden zum Auschluss dieser und anderer Infektionstr ger Um gangs und Entsorgungsmethoden sollten denen f r potentiell infekti sem Material entsprechen inklusive dem Tragen entsprechender Schutzkleidung Der Test sollte nur von entsprechend geschultem Personal durchgef hrt werden Achtung Dieses Produkt enth lt Natriumazid und ProClin 300 und muss mit den ent sprechenden Vorsichtsma nahmen behandelt werden Verschlucken sowie
16. ansfiera 120uL m s 30uL de fluido a un tubo de muestras y col quelo en rack Ejemplo Si tanto las subclases como la IgA requieren mediciones de control entonces se necesitar n 120uL 90uL 210pL Nota Esto s lo puede hacerse si los lotes de control suministrados con los kits de IgA y de subclases IgA son los mismos Si hay distintos lotes de control en uso se deben establecer controles extra 8 4 Rango de medida El rango de medida aproximado del ensayo IgA2 cuando se utilizan diluciones de muestra est ndar de 1 10 es 50 1250mg L 9 CONTROL DE CALIDAD Los controles suministrados se deben incluir en todas las ejecuciones del ensayo La concentraci n de IgA2 correspondiente est indicada Certificado de control de calidad adjunta SIN179 QC Los resultados obtenidos s lo pueden aceptarse si los resultados de los controles entran dentro del 15 de las concentraciones indicadas 10 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO 10 1 Los ensayos turbidim tricos no son adecuados para la medida de muestras con niveles elevados de complejos inmuno circulantes CIC s o para muestras hemolizadas o altamente lip micas debido al impredecible grado de dispersi n inespec fica que pueden generar estas muestras Resultados inesperados deben confirmarse mediante un m todo alternativo 10 2 No se ha validado el uso de muestras pedi tricas en este ensayo 10 3 Si una medida de control queda fuera de rango cuando se ensaya con una curva de calibraci n
17. ario valor res muestras distintas utilizando tres lotes distintos de reactivo en tres analizadores IgA2 Resumen de precisi n Media Intra ensayo Inter ensayo Inter d a Total mg L SD_ CV SD CV SD CV SD CV Suero 1 1121 47 31 14 2 8 16 43 1 5 68 36 6 1 76 89 6 9 Suero 2 684 56 15 46 2 3 10 92 1 6 25 95 3 8 32 11 4 7 Suero 3 79 93 3 37 4 2 3 01 3 8 6 00 7 5 7 51 9 4 12 2 Estudio comparativo Se llev a cabo un estudio de correlaci n con 89 muestras 26 normales 64 de suero cl nico utilizando este kit y un kit IgA2 alternativo disponible en el mercado en un SPAPLUS El estudio demostr una excelente correlaci n con el siguiente ajuste Passing Bablok y 0 99x 1 16 mg L y IgA2 SPAPLUS x kit alternativo coeficiente de correlaci n r 0 994 calculado por regresi n lineal 4 83g L de hemoglobina a la diluci n de muestra m nima 1 1 Bilirrubina Hb Quilo Media IgA2 mg L 19 2 19 4 19 7 interferencia 0 93 0 7 1 0 12 6 Exceso de ant geno No se observ exceso de ant geno al nivel de cinco veces el punto m s alto del ensayo aproximadamente 6 55g L 13 BIBLIOGRAFIA 1 Protein Reference Unit Handbook of Clinical Immunochemistry 1990 Ed A Milford Ward Publ PRU Publications Sheffield 133 134 2 Mestecky J et al 1989 Comparative studies of the biological properties of human IgA subclasse
18. artial inactivation of this subclass Recurrent sinopulmonary infections may therefore be related to deficiency of IgA2 which is resistant to these organisms refs 1 2 amp 3 3 PRINCIPLE Evaluating the concentration of a soluble antigen by turbidimetry involves the addition of the test sample to a solution containing the appropriate antibody in a reaction vessel or cuvette A beam of light is passed through the cuvette and as the antigen antibody reaction proceeds the light passing through the cuvette is scattered increasingly as insoluble immune complexes are formed Light scatter is monitored by measuring the decrease in intensity of the incident beam of light The antibody in the cuvette is in excess so the amount of immune complex formed is proportional to the antigen concentration A series of calibrators of known antigen concentration are assayed initially to produce a calibration curve of measured light scatter versus antigen concentration Samples of unknown antigen concentration can then be assayed and the results read from the calibration curve The sensitivity of turbidimetric assays can be increased by the use of particle enhancement ref 4 This entails linking the antibody to a suitably sized particle that increases the relative light scattering signal of the antigen antibody reaction 4 REAGENTS 4 1 Human IgA2 Latex Reagent Consisting of monospecific sheep antibody coated onto polystyrene latex and is supplied in stabilised
19. bilirubine et 4 83g L d h moglobine la dilution minimum 1 1 Bilirubine Hb Chyle Moyenne IgA2 mg L 19 2 19 4 19 7 interf rence 0 93 0 7 1 0 Nombre Moyenne M diane Gamme 95 Percentile n mg L mg L mg L IgA2 120 392 5 321 9 68 9 1142 5 12 PERFORMANCES et CARACTERISTIQUES 12 1 Pr cision Une tude a t r alis e en suivant CLSI Evaluation of Precision Performance of Clinical Quantitative Measurement Methods Approved Guideline CLSI Document EP5 A2 L tude a dur 21 jours avec deux s ries jour Une utilisateur a test trois chantillons diff rents en utilisant 3 lots diff rents de produits et trois automates diff rents galement R sum pr cision IgA2 Inter test Intra tests Inter jours Total Moyenne Ecart o Ecart o Ecart 5 Ecart 3 mg L type CV type CV type CV type CV S rum 1 1121 47 31 14 2 8 16 43 1 5 68 36 6 1 76 89 6 9 S rum 2 684 56 15 46 2 3 10 92 1 6 25 95 3 8 32 11 4 7 S rum 3 79 93 3 37 4 2 3 01 3 8 6 00 7 5 7 51 9 4 12 2 Comparaison Une tude de corr lation a t effectu e sur 89 chantillons 26 s rums normaux et 64 cliniques en utilisant ce coffret sur le SPAPLUS et un coffret IgA2 concurrent disponible Le r sultat a d montre une excellente corr lation avec l quation suivante Passing amp Bablok fit y 0 99
20. con la piel o las mucosas especialmente si hay heridas En caso de contacto lave con abundante agua y consulte a un m dico Con el plomo y el cobre pueden formarse azidas met licas explosivas Cuando se elimine el reactivo lave con mucha agua los recipientes para evitar la acumulaci n de azida El presente producto debe ser utilizado por personal especializado Se recomienda observar estrictamente el procedimiento indicado No se garantizan resultados v lidos obtenidos utilizando par metros diferentes que los indicados Los reactivos de diferentes lotes NO son intercambiables En caso de realizar un n mero elevado de tests averigue que todos los reactivos sean del mismo lote 6 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Los kits no abiertos deben conservarse a 2 8 C y se pueden usar hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta de la caja NO CONGELAR El reactivo l tex IgA2 humana buffer de reacci n calibradores y controles pueden conservarse tras abrirlos hasta tres meses a 2 8 C en un refrigerador tomando precauciones para evitar la evaporaci n El reactivo l tex IgA2 y el Buffer de reacci n se pueden conservar a 8 12 C sin proteger hasta 30 d as en el analizador SPAPLUS siempre y cuando se deje encendido el interruptor de alimentaci n situado en la parte posterior del panel izquierdo 7 OBTENCION DE MUESTRAS Y PREPARACION Utilizar siempre suero fresco o congelado Las muestras de sangre deben proceder de extracciones
21. d 64 clinical serum using this kit on a SPAPLUS and an alternative commercially available IgA2 assay The study demonstrated excellent agreement with the following Passing Bablok plot y 0 99x 1 16 mg L y SPAPLUS IgA2 x alternative assay correlation coefficient r 0 994 calculated by linear regression 12 3 Limit of Blank and Limit of Detection Based on CLSI document EP17 A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits Quantitation Approved Guideline the limit of detection represents the lowest measurable analyte level that can be distinguished from zero This has been estimated at 1 87 mg L n 60 The limit of quantitation for this assay is defined as the lowest point of the calibration curve i e 4 9mg L based upon measuring neat sample 12 4 Linearity A linearity study was performed based on NCCLS Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures NCCLS Document EP6 A One user assessed the linearity of a pool of high samples using one lot of reagent on one analyser This gave a regression plot of y 1 023x 1 296 y measured IgA2 concentration x theoretical concentration over the range of 73 77 1250mg L using the analyser s 1 10 sample dilutions 12 5 Interference No significant assay interference by 1530 formazine turbidity units FTU of chyle 200mg L bilirubin 4 83g L haemoglobin has been demonstrated at the minimum sample dilutio 1 1 D
22. e test procedures The analyser should be prepared for use according to the manufacturer s instructions and the assay protocol entered as described below For full details of analyser operation refer to the SPAPLUS Reference Guide FINO12 supplied with the analyser 8 4 1 Test parameters Assay parameters are entered into item number 12 ItemName 12 IgA2 DATA INFORMATION CALIBRATION i Type Logit2 Units mel Standard Decimals 1 1 4 ANALYSIS 24 5 Type End Y 3 6 Main W Length 1 600 w NORMAL RANGE Sub W Length v MALE FEMALE Method LOW HIGH LOW HIGH Serum Il II Il CORR Urine Es Sul IL IL SLOPE INTER Plasma I IE Jl Y 1 X 0 CSF I 1 IL Dialysis I 1 II Other 11 Lil JL Page 1 Print Hard Copy Next Page Save Return ItemName 12 IgA2 DATA PROCESS READ ABSORBANCE LIMIT ASPIRATION START END KIND o Single e Double MAIN 53 54 LOW 3 0 VOLUME SUB 35 36 HIGH 3 0 SAMPLE 3 a FACTOR Reaction Check REAGENTI VOL 1 ul Blank correction 1 o ON e OFF REAGENT2 VOL 180 ENDPOINT LIMIT 20 CHECK POINT LINEAR CHECK 0 LOW 3 Third mix e OFF o ON nena R1 Blank e Water Blank DILUTION Diluent e 99 Dil 1 0100 Dil 2 Pre Dilution Rate 10 v Auto Rerun Dilution Rate High v Auto Rerun Dilution Rate Low v PROZONE CHECK MONITOR START END LIMIT O LEVEL SPAN 1 FIRST 1 SPAN 3 0 SECOND o Low e High THIRD LT EFE Low _e High Page 2 Print Hard Copy Prev Page Next Page
23. en chargen auf drei verschiedenen Geraten gemessen IgA2 Prazision Zusammenfassung Mittelwert Intra Assay Inter Assay Tag zu Tag Gesamt mg L SD VK SD VK SD VK SD VK Serum 1 1121 47 31 14 2 8 16 43 1 5 68 36 6 1 76 89 6 9 Serum 2 684 56 15 46 2 3 10 92 1 6 25 95 3 8 32 11 4 7 Serum 3 79 93 3 37 42 3 01 3 8 6 00 7 5 7 51 9 4 12 2 Methodenvergleich Es wurde eine Vergleichsstudie mit 89 Serumproben 26 normale 64 Proben aus der Klinik zwischen diesem Kit auf dem SPAPLUS Analyser und einem anderen kommerziellen IgA2 Test durchgef hrt Die Studie ergab eine gute Ubereinstimmung und folgende Regressionsgleichungen Passing 8 Bablok und Korrelationskoeffizienten wurden erhalten y 0 99x 1 16 mg L y SPAPLUS IgA2 x alternativer Test Korrelationskoeffizient r 0 994 Berechnung durch lineare Regression 12 3 Untere Nachweisgrenze Laut dem CLS document EP17 A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits Quantitation Approved Guideline handelt es sich bei der unteren Nachweisgrenze um die niedrigste gemessene Analytkonzentration die sich vom Leerwert abhebt Sie wird auf 1 87mg L n 60 gesch tzt Die untere Me grenze dieses Tests bezieht sich auf den niedrigsten Punkt der Kalibrationskurve z B 4 9mg L bei einer unverd nnten Probe Bilirubin Hb Chylus Mittelwert IgA2 mg L 19 2 19 4 19 7 Interfer
24. enz 0 93 0 7 1 0 12 6 Antigen berschuss Es wurde bei einer Konzentration die 4 fach h her als die obere Messbereichsgrenze liegt ca 6 559 L kein Antigen berschuss beobachtet REM REFERENZEN 1 Protein Reference Unit Handbook of Clinical Immunochemistry 1990 Ed A Milford Ward Publ PRU Publications Sheffield 133 134 2 Mestecky J et al 1989 Comparative studies of the biological properties of human IgA subclasses Protides of the Biol Fluids 36 179 182 3 Conley M E et al 1983 Serum levels of IgA1 and IgA2 in children and in patients with IgA deficiency Mol Immunol 20 977 981 4 Tang LX Showell P Carr Smith HD Mead GP Drew R and Bradwell AR 2000 Evaluation of F ab based latex enhanced nephelometric reagents for free immunoglobulin light chains on the Behring Nephelometer II Clin Chem 46 6 Suppl 2000 705 pA181 Insert Code SIN179 Version 18 August 2010 Page 4 of 8 Coffrets IgA2 humaines pour utilisation sur SPAPLUS Pour un usage en diagnostic in vitro Reference LK088 S Produit fabriqu en Angleterre par la soci t The Binding Site Group Ltd PO Box 11712 Birmingham B14 4ZB UK www bindingsite co uk Distribu s en France par la soci t The Binding Site France 14 rue des Glairaux BP226 38522 Saint Egr ve Cedex T l phone 04 38 02 19 19 Fax 04 38 02 19 20 E mail info bindingsite fr 1 Ce coffret est destin au dosage quantitati
25. f des sous classes 2 d IgA humaines IgA2 dans le s rum en utilisant le turbidim tre SPAPLUS de la soci t Binding Site La mesure de ces immunoglobulines apporte une aide dans le diagnostic d un m tabolisme anormal des prot ines et des probl mes de l organisme r sister aux agents infectieux Les r sultats de ce test sont utilis s en conjonction avec les autres donn es cliniques et de laboratoire 2 PRESENTATION GENERALE Deux sous classes d IgA ont t identifi es chez l homme l IgA1 qui repr sente 80 90 des IgA du s rum et I lgA2 qui est la principale sous classe des s cr tions telles que le lait Les deux sous classes semblent tre r gul es ind pendamment Les sites antig niques des sous classes d IgA sont responsables des chocs anaphylactiques lors de transfusion Ces r actions sont observ es chez des patients totalement d ficients en IgA1 ou en IgA2 Apr s des transfusions r p t es ces patients produisent des anticorps contre ces antig nes Les sous classes d IgA sont tr s importantes au cours de la r ponse certains microorganismes pathog nes comme Haemophilus influenzae qui sont capables d un clivage enzymatique de I lgA1 induisant une inactivation partielle de cette sous classe Des infections r currentes sino pulmonaires semblent tre corr l es une d ficience en IgA2 qui offre une r sistance ces organismes r fs 1 2 et 3 3 PRINCIPE L valuation de la concentrati
26. ge 1 Print Hard Copy Next Page Save Return Item Name 12 IgA2 DATA PROCESS READ ABSORBANCE LIMIT ASPIRATION START END KIND o Single e Double MAIN 53 54 LOW 3 0 VOLUME SUB 35 36 HIGH 3 0 SAMPLE 3 REAGENT1 VOL 145 pL FACTOR Reaction Check REAGENT2 VOL 80 Blank correction 1 o ON e OFF ENDPOINT LIMIT 2 0 CHECK POINT LINEAR CHECK 0 LOW 3 Third mix e OFF o ON HIGH 3 R1 Blank e Water Blank DILUTION Diluent e 99 Dil 1 0100 Dil 2 Pre Dilution Rate 10 v Auto Rerun Dilution Rate High v Auto Rerun Dilution Rate Low v MONITOR PROZONE CHECK O LEVEL SPAN 1 START END LIMIT SPAN 3 0 FIRST Cat SECOND Low e High THIRD I olw e High Page 2 Print Hard Copy Prev Page Next Page Save Return Automatiquement calcul Insert Code SIN179 Version 18 August 2010 Page 5 of 8 Item Name 12 IgA2 Auto Rerun SW Auto Rerun Condition Absorbance eOn o Of Auto Rerun Range Result Absorbance Range e On oOf oOn e Off Lower e On o Off Lower Higher Higher o On e Off Serum Cal1 Cal 6 Prozone Range o On e Off Urine Plasma CSF Dialysis Other Bottle Size ml 24 ltems 36 Items Reagent1 60 Reagent1 Reagent2 R1 7 75 Reagent2 R1 Reagent2R2 4 5 Reagent2 R2 Page 3 Print Prev Page Save Return N B Les valeurs des calibrateurs Standard rentrer sur la Page 1 sont trouv es sur le Certificat de Contr le Qualit du coffret et doivent tre rentr es en ordre ascendant c est dire
27. i 8 2 1 Mat riel pour le pr l vement et la pr paration des chantillons ex tubes chantillons centrifugeuse etc 8 2 2 Un automate SPAPLUS fonctionnel et quip 8 2 3 Les instructions d utilisation de l appareil Manuel d utilisation SPAPLUS Insert Code FINO12 8 2 4 Diluant chantillon Sample Diluent 99 Dil 1 R f rence SN080 S 8 3 Pr paration du r actif Avant de charger le r actif le m langer doucement par retournement en s assurant de ne pas g n rer de mousse ou de bulles qui pourraient interf rer avec son aspiration 8 4 Proc dure de test L utilisateur doit tre form pour l utilisation du SPAPLUS avant l utilisation des procedures de test Pr parer l automate comme indiqu dans le manuel d utilisation du fabricant Le protocole de test doit tre param tr comme indiqu ci dessous Se r f rer au Manuel d Utilisation SPAPLUS FINO12 fourni avec l appareil pour plus de d tails sur son utilisation 8 4 1 Param tres du test Les param tres de test sont entrer dans l Item num ro 12 ItemName 12 IgA2 DATA INFORMATION CALIBRATION Units mg L Type Logit2 Decimals 1 Standard 1 4 ANALYSIS 2 5 Type End Y 3 6 Main W Length 1 600 w Sub W Length v NORMAL RANGE Method MALE FEMALE LOW HIGH LOW HIGH CORR Serum I II Il SLOPE INTER Urine ll J a ll Y 1 X 0 Plasma ll lot ll CSF olf l I Il Dialysis Il I I 11 Other IL 11 IL Pa
28. iliser ce coffret Ce produit contient de l azide de sodium et ProClin 300 et doit tre manipul avec pr caution des gants appropri s et d autres v tements de protection doivent tre port s lors de toutes manipulation Ne pas ing rer ou avoir de contact avec la peau sp cialement sur les zones abim es ou des muqueuses S il y a contact laver abondamment avec de l eau et demander un avis m dical Des azides de m taux explosifs peuvent se former par contact prolong entre de l azide de sodium et les tuyauteries en plomb et cuivre pour liminer les r actifs rincer avec un large volume d eau pour pr venir tout d g t Ce produit ne doit tre utilis que par du personnel entrain Le suivi de ces instructions est essentiel Les r sultats seront consid r s comme invalides si d autres param tres sont utilis s Les r actifs de diff rents lots NE SONT PAS interchangeables Si un nombre important de tests est r alis des pr cautions doivent tre prises pour s assurer que les r actifs utilis s sont issus du m me lot 6 STOCKAGE ET STABILITE Le coffret non ouvert doit tre stock 2 8 C et ce jusqu la date de p remption figurant sur son tiquette NE PAS CONGELER Le r actif latex calibrateurs et les contr les du IgA2 peuvent tre conserv s jusqu trois mois apr s ouverture condition qu ils soient correctement ferm s pour viter l amp vaporation et conserv s 2 8 C Le r actif
29. ilution Rate 10 v Auto Rerun Dilution Rate High v Auto Rerun Dilution Rate Low v en PROZONE CHECK 0 LEVEL SPAN 1 START END LIMIT SPAN 3 0 FIRST 111 SECOND Low e High THIRD I LIL J Low e High Page 2 Print Hard Copy Prev Page Next Page Save Return Automatisch berechnet Item Name 12 IgA2 Auto Rerun SW Auto Rerun Condition Absorbance e On o Off Auto Rerun Range Result Absorbance Range e On oOf oOn e Of Lower e On o Off Lower Higher Higher_o On e Of Serum Cal 1 Cal6 Prozone Range o On e Off Urine Plasma CSF Dialysis Other Bottle Size ml 24 Items 36 Items Reagent1 60 Reagent1 Reagent2 R1 7 75 Reagent2 R1 Reagent2R2 4 5 Reagent2 R2 Page 3 Print Prev Page Save Return Insert Code SIN179 Version 18 August 2010 Page 3 of 8 Hinweis Die Kalibratorwerte Standard die auf Page 1 Seite 1 eingegeben werden sind auf dem jeweiligen Zertifikat der Qualit tskontrolle angegeben Die Eingabe erfolgt in aufsteigender Reihenfolge D h der niedrigste Wert wird zuerst eingegeben WICHTIG Das Ger t berechnet automatisch die korrekten Messbereiche die auf der 3 und 4 Item Seite erscheinen Dazu muss nach Eingabe von Kalibrator 6 auf Seite 1 die ENTER Taste gedr ckt werden Die Richtigkeit der Eingaben k nnen auf der Parameter Seite 4 berpr ft werden 8 4 2 Volumen der Kontrollen Pro Kontrolle f r jeden Test bei dem eine Kontrolle eingesetzt werden soll werden 120uL plus 30uL in ein P
30. ine gespeicherte Kalibrationskurve verwendet und eine der Kontrollen liegt nicht im Vertrauensbereich sollte die Messung der Kontrolle unter Verwendung der gleichen Kalibrationskurve wiederholt werden Liegt die Kontrolle immer noch auBerhalb des Vertrauensbereichs sollte der Test neu kalibriert und die Kontrollen erneut gemessen werden Weicht die Kontrolle nach Neu Kalibration mehr als 15 vom Sollwert ab sollte vor einer erneuten Testdurchf hrung das Ger t und die Testparameter berpr ft werden Kann das Problem so nicht gel st werden wenden Sie sich bitte an Ihre Lieferfirma 10 4 Die Diagnose und die Einleitung einer Therapie d rfen nicht ausschlieBlich auf der IgA2 Bestimmung basieren Das klinische Bild und andere serologische Befunde m ssen ebenfalls ber cksichtigt werden 10 5 Temperaturschwankungen der Reagenzien k nnen die Ergebnisse beeinflussen Stellen Sie sicher dass die Reagenzien unmittelbar aus dem K hlschrank in den gek hlten Reagenzienbereich des Ger tes berf hrt werden Vermeiden Sie unbedingt dass sich die Reagenzien auf Zimmertemperatur erwarmen 11 ERWARTETE WERTE Die unten aufgef hrten Normalbereiche basieren auf der Untersuchung einer begrenzten Zahl von Proben und dienen nur zur Orientierung Es wird empfohlen eigene Normal bereiche zu bestimmen Erwachsene Dieser Normalbereich basiert auf der Messung von IgA2 mit dem hier beschriebenen Kit in einem gesunden Blutspenderkollektiv aus GroBbri
31. latex IgA2 Humain et le tampon de r action peuvent tre conserv s 8 12 C ouverts bord du SPAPLUS jusqu 30 jours condition que l interrupteur principal situ du c t gauche arri re de l appareil reste sous tension 7 PRELEVEMENT ET PREPARATION DE PECHANTILLON Utiliser des chantillons frais ou congel s Les s rums doivent tre pr lev s par ponction veineuse en laissant le caillot se former puis en s parant le s rum d s que possible afin d viter l h molyse Les chantillons peuvent tre conserv s 2 8 C jusqu 48 heures avant les tests ou congel s 20 C minimum pour une conservation plus longue Les cong lations d cong lations successives doivent tre vit es Les chantillons de s rums contamin s par des bact ries ou contenant des particules des lipides ou de l h moglobine ne doivent pas tre utilis s 8 METHODOLOGIE 8 1 Mat riel fourni 8 1 1 1 x 50 Tests Human IgA2 Latex SPAPLUS R actif latex IgA2 humaines pour SPAPLUS 8 1 2 1 x Human IgA2 SPAPLUS Calibrator set 1 6 Ensemble de calibrateurs IgA2 humaines SPAPLUS 6 x 1 0mL 8 1 3 2 x 1 2mL Human IgA Subclass SPAPLUS High Control Contr le haut sous classe IgA humaine SPAPLUS 8 1 4 2 x 1 2mL Human IgA Subclass SPAPLUS Low Control Contr le bas sous classe IgA humaine SPAPLUS 8 1 5 1 x 50 Tests IgA2 Reaction Buffer SPAPLUS Tampon de r action IgA2 pour SPAPLUS 8 2 Mat riel requis mais non fourn
32. liquid form Preservatives 0 099 sodium azide 0 1 E amino n caproic acid EACA 0 01 Benzamidine 0 05 ProClin 300 and 1 Protease Inhibitor Cocktail 1 Calbiochem Catalogue No 539131 4 2 Calibrator and Controls These consist of pooled human serum and are supplied in stabilised liquid form They contain 0 099 sodium azide 0 1 EACA and 0 01 benzamidine as preservatives The concentration of IgA2 given on the quality control certificate has been obtained by comparison with the CRM470 international reference material 4 3 Reaction Buffer Containing 0 099 sodium azide as a preservative ProClin is a trademark of Rohm and Haas Corp Philadelphia PA 5 All donors of human serum supplied in this kit have been serum tested and found negative for hepatitis B surface antigen HBsAg and antibodies to human immunodeficiency virus HIV1 and HIV2 and hepatitis C virus The assays used were either approved by the FDA USA or cleared for in vitro diagnostic use in the EU Directive 98 79 EC Annex Il however these tests cannot guarantee the absence of infective agents Proper handling and disposal methods should be established as for all potentially infective material including but not limited to users wearing suitable gloves protective equipment and clothing at all times Only personnel fully trained in such methods should be permitted to perform these procedures This product contains sodium azide and ProClin 300 and mu
33. m trie ne sont pas applicables pour des chantillons hautement lipidiques h molys s ou pour des chantillons contenant des taux lev s de complexes immuns circulants CIC cause du degr impr visible de d viation de lumi re non sp cifique que de tels chantillons peuvent g n rer Des r sultats inattendus doivent tre confirm s en utilisant une autre m thode 10 2 Ce test n a pas t valid en utilisant des chantillons p diatriques 10 3 Si lors d un contr le la valeur est en dehors des gammes acceptables en utilisant une courbe de calibration en m moire il est n cessaire de faire une nouvelle calibration Si apr s une nouvelle calibration les valeurs du contr le sont toujours en dehors des gammes les param tres du protocole doivent tre v rifi s et le test r p t Si le probl me persiste contacter le fournisseur 10 4 Un diagnostic ne peut tre fait et un traitement donn uniquement sur la base des mesures d IgA2 L historique clinique du patient ainsi que d autres analyses doivent tre pris en consid ration 10 5 Des variations de temp rature peuvent affecter les r sultats S assurer que les r actifs soient transf r s directement du r frig rateur au compartiment r frig r de l automate ne pas ramener temp rature ambiante 11 VALEURS ATTENDUES Les gammes de valeurs indiqu es ci dessous ont t obtenues partir d un nombre limit d chantillons et sont donn es
34. momento de la aspiraci n del reactivo 8 4 Procedimiento de la prueba El usuario ha de estar familiarizado con el funcionamiento del analizador SPAPLUS antes de intentar llevar a cabo ensayos de muestras El analizador ha de estar preparado para su utilizaci n tal como indican las instrucciones del fabricante y el protocolo del ensayo ha de estar introducido como se indica a continuaci n Consulte informaci n m s detallada sobre el funcionamiento del analizador en el Manual del usuario SPAPLUS FINO12 suministrado junto con el analizador 8 4 1 Programaci n de la prueba Los par metros del ensayo est n introducidos en el Item No 12 ItemName 12 IgA2 DATA INFORMATION CALIBRATION Units mg L Type Logit2 Decimals 1 Standard 1 4 ANALYSIS 2 5 Type End Y 3 6 Main W Length 1 600 7 Sub W Length v NORMAL RANGE Method MALE FEMALE LOW HIGH LOW HIGH CORR Serum M 1t II SLOPE INTER Urine Pra li H Y 1 X 0 Plasma I 1 II CSF I 1 Il Dialysis Il Ju Il Other it IL Page 1 Print Hard Copy Next Page Save Return Item Name 12 IgA2 DATA PROCESS READ ABSORBANCE LIMIT ASPIRATION START END KIND o Single e Double MAIN 53 54 LOW 3 0 VOLUME SUB 35 36 HIGH 3 0 SAMPLE 3 REAGENT1 VOL 145 yL FACTOR Reaction Check REAGENT2 VOL 80 Blank correction 1 o ON e OFF ENDPOINT LIMIT 2 0 CHECK POINT LINEAR CHECK 0 LOW 3 Third mix e OFF o ON HIGH 3 R1 Blank e Water Blank DIL
35. ntigenen beruht auf der Reaktion zwischen einem Antigen und einem spezifischen Antiserum in einem Reaktionsgef oder K vette wodurch unl sliche Immunkomplexe gebildet werden Wird Licht durch die K vette gestrahlt wird das Licht mit zunehmender Konzentration an Immunkomplexen gestreut Die Lichtstreuung wird bestimmt indem die Intensit tsabnahme des einfallenden Lichtstrahls gemessen wird Da der Antik rper sich im berschuss in der K vette befindet ist die Menge an Immunkomplexen direkt proportional zur Antigenkonzentration Eine Reihe von Kalibratoren mit bekannter Antigenkonzentration werden gemessen und anhand der Messsignale wird eine Kalibrationskurve berechnet Die Antigenkonzentration von unbekannten Proben wird automatisch nach der Messung direkt an Hand der im Ger t gespeicherten Kalibrationskurve berechnet Die Empfindlichkeit der turbidimetrischen Tests kann durch eine Partikelverst rkung erh ht werden Ref 4 Dazu wird der Antik rper an einen Partikel geeigneter Gr e gekoppelt und dadurch wird das relative Streulichtsignal w hrend der Antigen Antik rper Reaktion verst rkt 4 1 Human IgA2 Latex Reagenz Besteht aus monospezifischen Schaf Antik rpern die an Polysteren Latexpartikel gekoppelt wurden Liegt als stabilisierte Fl ssigkeit vor Enthaltene Konservierungsmittel 0 099 Natriumazid 0 1 E amino N caprons ure EACA 0 01 Benzamidin 0 05 ProClin 300 und 1 Protease Inhibitor Cocktail 1 Calbiochem Cat
36. omo objetivo la cuantificaci n en suero de subclase humana IgA2 IgA2 en el analizador turbidim trico SPAPLUS de The Binding Site El an lisis de estas inmunoglobulinas es de gran ayuda en el diagn stico de la metabolizaci n anormal de prote nas y la falta de resistencia del cuerpo humano a los agentes infecciosos El resultado del test se debe tener en cuenta junto con otras determinaciones cl nicas y de laboratorio 2 RESUMEN Y EXPLICACI N Se han identificado dos clases de IgA en humanos IgA1 que representa el 80 90 del total de IgA en suero e IgA2 que es la principal subclase en secreciones como la leche Las dos subclases parecen ser reguladas de forma independiente Los puntos antig nicos en las subclases IgA son los generadores de las reacciones anafil cticas a transfusiones que experimentan algunos pacientes con deficiencias totales de IgA1 o IgA2 Tras repetidas transfusiones estos pacientes podr an producir anticuerpos contra estos ant genos Las subclases IgA son adem s de importancia ya que ciertos microorganismos patog nicos incluyendo Haemophilus influenzae causan fragmentaci n enzim tica de la IgA1 ocasionando una inactivaci n parcial de esta subclase Las infecciones sinopulmonares recurrentes pueden por lo tanto estar relacionadas con la deficiencia de IgA2 que es resistente a estos organismos refs 1 2 amp 3 La evaluaci n de la concentraci n de un ant geno soluble por turbidimetr a supone la adici n
37. on d un antig ne soluble par turbidim trie n cessite l ajout de chantillon une solution d anticorps appropri dans une cuvette Un faisceau de lumi re raverse la cuvette et comme la r action antig ne anticorps se produit la diffusion de la umi re augmente au cours de la formation des complexes immuns insolubles La lumi re diffus e est mesur e par de la diminution de l intensit lumineuse de la lumi re incidente L anticorps dans la cuvette est en exc s pour que la quantit de complexes immuns form s soit proportionnelle la concentration d antigene Une s rie de calibrateurs dont la concentration en antig ne est connue est utilis e pour construire une courbe de calibration avec la lumi re diffus e versus la concentration en antig ne Les chantillons de concentration inconnue sont test s et leur r sultat est d termin partir de la courbe de calibration La sensibilit des tests en turbidim trie peut tre augment e par l utilisation des particules de latex r f 4 Si l antig ne est coupl des particules latex de taille suffisante la dispersion de la lumi re par les complexes immuns form s avec l anticorps est suffisamment am lior e pour permettre une d tection en turbidim trie 4 REACTIFS 4 1 Antis rum latex IgA2 humaine Contiennent des anticorps monosp cifiques de mouton fix s sur des billes de polystyr nes et de latex et est sous forme liquide stabilis e avec comme conservateurs 0
38. robengef B pipettiert und auf das Rack platziert Wenn z B Kontrollmessungen sowohl f r die IgA Subklassen als auch f r IgA durchgef hrt werden sollen werden entsprechend 120uL 90uL 210uL angesetzt Anmerkung Dies ist nur m glich wenn die Chargen der Kontrollen in den IgA bzw IgA Subklassen Kits identisch sind Falls verschiedene Kontrollchargen in Gebrauch sind m ssen entsprechend zus tzliche Kontrollen angesetzt werden 8 5 Messbereich Der ungef hre Messbereich des IgA2 Tests liegt bei Verwendung der Standardverd nnung von 1 10 zwischen 50 1250mg L 9 QUALITATSKONTROLLE Die im Kit enthaltenen Kontrollen sollten in jedem Testansatz mitgef hrt werden Die IgA2 Konzentration ist auf dem im Kit mitgelieferten Kalibrator Kontrolldatenblatt Zertifikat Qualit tskontrolle SIN179 QC angegeben Probenergebnisse sollten nur dann verwendet werden wenn die Kontrollergebnisse innerhalb des 15 Bereichs der angegeben Konzentrationen liegen 10 GRENZEN DES TESTS 10 1 Turbidimetrische Tests sind nicht f r die Bestimmung von lip mischen oder h molysierten Proben oder Proben die Rheumafaktoren Paraproteine oder andere zirkulierende Immunkomplexe CIC enthalten geeignet da diese Proben einen nicht vorhersagbaren Anteil an unspezifischer Tr bung erzeugen k nnen Ungew hnliche Ergebnisse sollten mit einer alternativen Methode berpr ft werden 10 2 Dieser Test wurde nicht mit p diatrischen Seren validiert 10 3 Wird e
39. roved Guideline El l mite de detecci n representa el nivel inferior medible de analito que puede ser diferenciado de cero Ha sido estimado en 1 87mg L n 60 El l mite de cuantificaci n de este ensayo se define como el punto inferior de la curva de calibraci n ej 4 9mg L basado en una diluci n de muestra de 1 10 12 4 Linearidad Se llev a cabo un estudio de linearidad siguiendo la CLSI Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures CLSI Documento EP6 A Un usuario analiz la linearidad de una serie de muestras altas diluidas en una serie de muestras bajas usando un solo lote de reactivo en un nico analizador Se obtuvo una curva de regresi n y 1 023x 1 296 y concentraci n de IgA2 medida x concentraci n te rica sobre el rango de 73 77 1250mg L usando los analizadores con muestras diluciones al 1 10 12 5 Sustancias interferentes No se observ una interferencia significativa por 1530 FTU de quilo 200mg L de bilirrubina N mero n Media mg L Mediana mg L Rango Percentil 95 mg L IgA2 120 392 5 321 9 68 9 1142 5 12 CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO 12 1 Precisi n Se llev a cabo el estudio siguiendo la CLSI Evaluation of Precision Performance of Clinical Quantitative Measurement Methods Approved Guideline CLSI Documento EP5 A2 El estudio se realiz durante 21 d as laborables con dos ensayos por d a Un usu
40. s Protides of the Biol Fluids 36 179 182 3 Conley M E et al 1983 Serum levels of IgA1 and IgA2 in children and in patients with IgA deficiency Mol Immunol 20 977 981 4 Tang LX Showell P Carr Smith HD Mead GP Drew R and Bradwell AR 2000 Evaluation of F ab based latex enhanced nephelometric reagents for free immunoglobulin light chains on the Behring Nephelometer II Clin Chem 46 6 Suppl 2000 705 pA181 Insert Code SIN179 Version 18 August 2010 Page 8 of 8
41. st be handled with caution Do not ingest or allow contact with the skin particularly broken skin or open wounds or mucous membranes If contact does occur wash with a large volume of water and seek medical advice Explosive metal azides may be formed on prolonged contact of sodium azide with lead and copper plumbing on disposal of reagent flush with a large volume of water to prevent azide build up This product should only be used by suitably trained personnel for the purposes stated in the Intended Use Strict adherence to these instructions is essential at all times Results are likely to be invalid if parameters other than those stated in these instructions are used Reagents from different batch numbers of kits are NOT interchangeable If large numbers of tests are performed care should be taken to ensure that all the reagents are from the same batch 6 STORAGE AND STABILITY The unopened kit should be stored at 2 8 C and can be used until the expiry date shown on the kit box label DO NOT FREEZE The Human IgA2 Latex Reagent Reaction Buffer Calibrators and Controls may be stored for up to three months after opening provided that they are capped to avoid evaporation and kept at 2 8 C in a refrigerator The Human IgA2 Latex Reagent and Reaction Buffer may be stored at 8 12 C uncapped on the SPAPLUS analyser for up to 30 days provided that the main power switch located at the rear of the left hand panel is left switched on 7
42. tannien Der Normalbereich wurde unter Verwendung von nicht parametrischer Statistik berechnet und repr sentiert die zentralen 95 der Normalbev lkerung 12 4 Linearit t Die Linearit tsstudie wurde gem der Richtline NCCLS Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures NCCLS Document EP6 A durchgef hrt Die Linearit tsmessungen wurden von einem Anwender mit einem Probenpool mit hoher Antigenkonzentration unter Verwendung einer Reagenzcharge durchgef hrt Folgende Regressionsgleichung wurden erhalten y 1 023x 1 296 y gemessene IgA2 Konzentration x theoretische Konzentration Uberpr fter Messbereich 73 77 1250mg L Verwendete Probenverd nnung 1 10 12 5 Interferenzen Durch Zugabe von Chylus 1530 FTU 200mg L Bilirubin oder 4 83g L H moglobin wurde keine signifikante Interferenz festgestellt Alle Messungen wurden bei der minimalen Probenverd nnung 1 1 durchgef hrt Anzahl n Mittelwert mg L Median mg L Bereich 95 Percentile mg L IgA2 120 392 5 321 9 68 9 1142 5 12 LEISTUNGSDATEN 12 1 Prazision Die Pr zisionsstudie wurde gem der Richtline NCCLS Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Approved Guideline NCCLS Document EP5 A durchgef hrt Wahrend dieser Studie wurden an 21 Arbeitstagen je 2 Testans tze pro Tag durchgef hrt Es wurden 3 verschiedene Proben mit drei verschiedenen Reagenzi
43. the IgA2 assay when using the standard 1 10 sample dilution is 50 1250 mg L 9 QUALITY CONTROL The controls provided should be included in all assay runs The IgA2 concentration is stated on the accompanying QC certificate SIN179 QC Sample results obtained should only be accepted if the control results are within 15 of the concentration s stated 10 LIMITATIONS 10 1 Turbidimetric assays are not suitable for measurement of highly lipaemic or haemolysed samples or samples containing high levels of circulating immune complexes CICs due to the unpredictable degree of non specific scatter these sample types may generate Unexpected results should be confirmed using an alternative assay method 10 2 This assay has not been validated using paediatric samples 10 3 Should a control measurement be out of range when assayed with a stored curve the assay must be recalibrated If on recalibration the control values measured with the new curve are still out of range the instrument and the assay parameters should be checked before repeating the assay If problems persist refer to supplier 10 4 Diagnosis cannot be made and treatment must not be given on the basis of IgA2 measurements alone Clinical history and other laboratory findings must be taken into account 10 5 Variation in reagent temperature may affect results Ensure that reagents are transferred directly from the refrigerator to the refrigerated reagent compartment of the analyser
44. titre indicatif Il est fortement recommand d tablir ses propres normes Gammes adulte s rique Ces gammes ont t obtenues en utilisant ce coffret et en mesurant les concentrations d IgA2 de s rums de donneurs de sang sains britanniques adultes L intervalle de r f rence a t calcul en utilisant des statistiques non param triques et repr sente 95 de la population 12 3 Limite du blanc et limite de d tection Bas sur CLSI document EP17 A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits Quantitation Approved Guideline la limite de d tection correspond la plus petite concentration d analyte mesurable distinct de z ro Elle a t estim e 1 87mg L n 60 La limite de quantification de ce test est d finie comme le point le plus bas de la courbe de calibration par ex 4 9mg L en utilisant la dilution pure 12 4 Linearit Une tude de lin arit a t r alis e partir de NCCLS Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures NCCLS Document EP6 A Un utilisateur a test la lin arit sur un pool d chantillon fort en utilisant un lot de r actif sur un automate Ceci donne une courbe de r gression y 1 023x 1 296 y concentration IgA2 mesur e x concentration th orique sur une gamme de 73 77 1250mg L en utilisant la dilution au 1 10 12 5 Interf rence Pas d interf rence significative avec 1530 unit s de turbidit formazine FTU de chyle 200mg L de
45. uantitativen Bestimmung der Human IgA Subklasse 2 IgA 2 im Serum unter Verwendung des Binding Site SPAPLUS Analysers Die Bestimmung dieses Immunglobulins hilft bei der Diagnose eines abnormalen Proteinmetabolismus und das Unverm gen des K rpers auf infekti se Erreger zu reagieren Die Testergebnisse sollten immer im Zusammenhang mit anderen klinischen Befunden oder Laborbefunden interpretiert werden 2 EINLEITUNG Beim Menschen sind zwei IgA Subklassen bekannt IgA1 das ca 80 90 des gesamten Serum IgA ausmacht und IgA2 welches haupts chlich in K rpersekreten wie z B Muttermilch gefunden wird Man vermutet dass die beiden IgA Subklassen unabh ngig voneinander reguliert werden Auf den IgA Subklassen Molek len gibt es antigene Bereiche die bei Patienten mit totaler IgA1 oder IgA2 Defizienz zu anaphylaktischen Transfusionsreaktionen f hren Nach wiederholter Transfusion k nnen solche Patienten Antik rper gegen diese antigenen Bereiche produzieren Die Wichtigkeit der IgA Subklassen zeigt sich auch in folgenden Beispiel einige pathogene Mikroorganismen wie z B Haemophilus influenzae sind in der Lage IgA1 zu spalten Dies f hrt zu einer teilweisen Inaktivierung dieser Subklasse Wiederholte Infektionen im Nasen Rachen Raum k nnen daher auf eine IgA2 Defizienz hindeuten denn diese Subklasse ist gegen diesen Organismus resistent Ref 1 2 amp 3 3 TESTPRINZIP Die turbidimetrische Bestimmung der Konzentration von l slichen A
46. venosas dejadas coagular naturalmente Separe el suero lo m s r pidamente posible para evitar hem lisis El suero debe conservarse a 2 8 C hasta 48 horas antes del ensayo para per odos m s largos se debe conservar a 20 C o a temperatura inferior No congelar y descongelar los sueros m s de una vez Evitar el uso de sueros lip micos hemolizados o contaminados por microbios 8 METODOLOGIA 8 1 Material suministrado 8 1 1 1 x 50 Tests Human IgA2 Latex SPAPLUS Reactivo de Latex IgA2 Humana para SPAPLUS 8 1 2 1 x Human IgA2 SPAPLUS Calibrator set 1 6 6 x 1 0mL Conjunto de calibradores 8 1 3 2 x 1 2mL Human IgA Subclass SPAPLUS High Control Control Alto subclase IgA Humana para SPAPLUS 8 1 4 2 x 1 2mL Human IgA Subclass SPAPLUS Low Control Control Bajo subclase IgA Humana para SPAPLUS 8 1 5 1 x 50 Tests gA2 Reaction Buffer SPAPLUS Buffer de reacci n IgA2 para SPAPLUS 8 2 Materiales necesarios no suministrados con el kit 8 2 1 Equipamiento de laboratorio para la recolecci n y preparaci n de muestras probetas para las muestras centr fuga etc 8 2 2 Un analizador SPAPLUS completamente equipado 8 2 3 Las instrucciones actuales de funcionamiento del analizador Manual del usuario SPAPLUS C digo FINO12 8 2 4 Diluci n de muestra 99 Dil 1 C digo de Producto SN080 S 8 3 Preparaci n de los reactivos Mezclar por inversi n evitando la formaci n de espuma o burbujas que podr an interferir en el
47. x 1 16 mg L y SPAPLUS IgA2 x coffret concurrent Coefficient de corr lation r 0 994 calcul par r gression lin aire 12 6 Exc s d antig ne Pas d exces d antigene a t observ pour un taux sup rieur 4 fois le plus haut point de calibration environ 6 55g L 13 BIBLIOGRAPHIE 1 Protein Reference Unit Handbook of Clinical Immunochemistry 1990 Ed A Milford Ward Publ PRU Publications Sheffield 133 134 2 Mestecky J et al 1989 Comparative studies of the biological properties of human IgA subclasses Protides of the Biol Fluids 36 179 182 3 Conley M E et al 1983 Serum levels of IgA1 and IgA2 in children and in patients with IgA deficiency Mol Immunol 20 977 981 4 Tang LX Showell P Carr Smith HD Mead GP Drew R and Bradwell AR 2000 Evaluation of F ab based latex enhanced nephelometric reagents for free immunoglobulin light chains on the Behring Nephelometer II Clin Chem 46 6 Suppl 2000 705 pA181 Insert Code SIN179 Version 18 August 2010 Page 6 of 8 Kit IgA2 Humana para uso en SPAPLUS Para uso diagn stico in vitro C digo de Producto LK088 S Fabricado por The Binding Site Group Ltd PO Box 11712 Birmingham B14 4ZB UK www bindingsite co uk The Binding Site Spain S L U C Balmes 243 4 3 08006 Barcelona Tel fono 902027750 Fax 902027752 e mail info bindingsite es web www bindingsite es 1 Estos kits tienen c

Human IgA2 Kit for use on SPAPLUS For in

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