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manuel de sécurité biologique en laboratoire

1. 1 SJAL 9ul 1s S INS 519 IHE10A pinbi OUEN SANOINIHO SANDISAHd Sanosi 539 SALITISIIVANONNT Y SNOILNYIJYd JIGNIONI G 3 0919 31NVS Y1 4 04 SINOSIY 9313144044 ANOIINIHO 1110094 196 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE a1yn0s np no a1oudsoud np wnisgubew np slog ap 0060 np dane afuejaw Jed uolsojdxa p NO UOEWWEe JUI p nbs y 2 ap 90 0 0 519 1 00 ourul p aouasaid ua s sojdx synpoid 9111015504 9802 no aseq ap aouasaid Juahue p gydiogid un juaanad Sa P9EIUOULUE SUONN OS 591 Ulo p ul un s nsuo9 19 nea g Jadu Xn 9 29AP 9P U09 ap sed 3 Je dW09 01 1059 anbsew un 9409U9 NO RI9E ug139 un ja nbysejd no 21021 0 2 ua 51 91091010 1066 sap 1104 asnainobis aualbAy aun 19A49S00 9191595 00 ej ap UOISIAASIP El 19144 9900 150 5 saine p uonsnqulo9 El 911198 Siew lq snqulooul i d i no uonsodx p seo ua nead pi ap zyen lq UO1 10 09 aun y q ols ul b seo Ud 1801102 S UB n 19 39 181120 s ininiq SaAeJB ap 19 Uep 910 aun 1194 suep lqnlos uolinga p 1100 0 212 uolsn ap julod soue g XNE S19 ON V
2. 191104 S UlUIE U02 5911 0 0221 189 99AP UOHX LI S U L 919A S 19 0 uolllnq p SHpIwiny p Jed inajey9 19 JUSW9 eI Pew 1100 9 09 9995910 juawabebap Jane nead uolsn ap ua 2012 Uea yupuodu El 99AP 1981U02 alreuound julod auyoueq Ulhluluunie Sju9618 9p seo ua ulo9p ul un awape un 1191102 xne wu Xn31QUIOU 1 nsuo2 ap alaissnod gj ap syauuoyeq HOM quwou 19 2 0 a JUBWA eIPAWLUI uolyejeyul nead ej 19 no s lilsed SSLJOd UlEH 9 19 5 S XN9 S Xn s l 59110181059 g pnod winissejod un anbeyy 1u tiuislolA 1 9 1981u09 ap 582 uJ S l0A S 1 00 JIS01109 ap 93 0914 5341 SanO1INIH SALITIILVd NOON 3 0 3 4 Y 54011 310N39N1 d 3 0914 JLNVS Y1 4 04 SANDS SANDISAHd 5313144094 ANDIWIHO LINGOYd 192 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE 9 1910 220 un suep SIEI ne 19 aalwin el ap HQE R S pl9 s p 39UP SIP g 19449SU02 Juawepides U910119 9p S sjuejoajulsap alWW0d s s l n s nilp suonn os Sa 98 9010 ua 1n u ej JUaSINpal 2015 l Juepuad 9101U9 ap 9 591 l SJUAJOIA UOI 291 ap nbsil SHSOldX S910 49 S9SOdu102 s p 1310 anod S9
3. IIN 1 81U02 seo ua nead P ap ajuelsisuad H U0I210109 aILUIU9 91107210 anod sanboo g s h un s p anbiisejd no onou9 n0e9 ua sjueb sap 18104 Xn9 9 19e U09 1101 Juawejeba 19149 sunaden Sa NO 050 9 J8JEUULP 1944F 0 66 118199 11100 ajqysnquios 19 a qewwelu apllos aguejno uolesijiqisuas aun Janboaojd n d aajades uonsodx aun nead e 19 59 101010591 S l0A S XN S anod ugua no uons ul sed JI90N nea suep qn os joue ng l SUP 210 e uollnios SNOS 10SO1 E saquioq US MAIT Dol Ve UOISN JUEAB sodulo9 p s Inb aed aunel pilos 9 2 auLpAUUIN 1972 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE X1EI UILI s sodul09 xn lqulou ap dane S lQEISUI juawenbI Way 91190 0 s p no s p awo4 s nbispid anbeny UOlSoldX9 b 19 lpu oul p nbsil dane Sin lonp s nbo g sa jaun s p nb sure S1n8 98 01d 1 9 El 1194 92U919SU02 ded aSSa qIe saasneu S ULU9SSIpinoje Sa 19 sanbiGieue SJU9UI9 9A n lq in lno9 11100 9 9 SJUEPAXO S 29AB sap 19 sjueh sap aun zu uu d nead uolsni ap 1100 JUIWWEIOIA 1155 H 191104 9 101811059 PI 19 59 0 S SalAg 0 019
4. 2 SapAxO uon o d 0 99 Sa 5901010 5 anapo s p USUILUPJOU 19 no 15 99 p 10100 s nbhed u sun S9AISO U09 SinadeA 1590 IhIsodsip 0150 0 19 500159 asourAd ayed unef s p un 334V UOHE U A lp oulp nbsil ap Jngjnoo ZONH 9 uolsnqu109 e7 SNOS 91 PABIL 91015140109 914 9100 0001919 xnajiny pinbi 9 924900 SANDIWIHO SANDISAHd 93 091 5341 S3LTIJILYdINO9NI 3 0 Y SNOILNYIJYd 310430 0 INOSIY JLNYS YT HNOd SINOSIY S3131Hd0Hd ANDINIHO 1110094 198 IQUES DANGERS ET PRECAUTIONS PRENDRE nea p aouasaid ua xnejaw xn lqulou ap enbeny anbluoydsoyd 1SUUOP Jnod nea sane JUSWIWAIOIA 1669 UOISO dXa p no alpusaul p nbsil dare anbiojyoed 29AB 1 1 pegy 11801102 S SEQ Sa JAAP JUBLUWA OIA 19691 101 un 199 asnanbe uoln0s 27 RAR Juepuad Jain no 9100 sed N 91dU109 9110721191 anbsew un no jere ueio9 un sunaj99 0Jd S L A sap sjueh Sap 191104 SinadeA s p uohenoPA p 890 1 5005 un 99AP 1911 5ARAL seo ua s nbixo no Suezu ze6 ap no sanader juawabebag 00190 0 aun no lpu ul un Janbonoid ap sajqudaosns SUOH9691 s sn lquloN sgoueysqns s nne p uolsnqulo9 ej opine 5180 a
5. 59 sayesojyaiad s 19 SUIP IE XNEJAUU Sa Uunisse od ayeueHuewJad a salu sanbiuebo sayqewweyjul s l npul Sap 198 U09 WMO 22198 NO 9118 N90 U0199 01d un nb suie 210121 0 2 ua 51 6 sap apie suep nea 4 sl n siewel ay nea suep aploe 19S19A s nolnol apinb uongo aun no 50011291010 s p a1inpoid s n d 19 in lb ej ap abebap 19 Sa1n 01q nbs nead e ja xnaf s 1100 s tusillil S AL D 191104 SAUILIEU09 Nea SUEP UONNIIP 1005 S nilp SUONNOS uonisoduloo p U L S A Sa JUSUILUPJOU S U9LU9 9A S 19 0 87 SUO1SO X Sa UONPIEUUI P 582 0 0P ap 11100 19 saguejsqns JUSUUSJEIPALULUI s p NO s pu u Ud 59110161099 S OA uolllnq p ne uolllInq9 p s sn lqulou UE1n2 1981009 s p JanboAOJd S 1100 SJISO01109 5911 1100 anbsi nea ap 29AB ap sed U9 ulgapawW 1 An d SUOIIEII 1105 sinadeA Sa 19 2 01 UOISN ap SUPP BSBA JUBLULWAJOIA yiL un s nsuo9 s sn squlou 9q S OSOL P S 591 1110 11100 asopou 159 91 U90U09 inb anbiGieue 19 JUSUISJEIPALULUI lpu ouLp 589 ap asneo 19 910 02 1 aploe queyeipAysep 2 xn s 2948 SanbiXo s n dea 19 50 09 159 GL xnanbsia OS H anbs107 JUPPAXO 98 U09 ap 580 U4 Sap 1n94 9911 99002 UONNIOS E
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9. e lql siLi anbiB1aug 19 5910151400102 91n0 19 Sunaden anbifiaug 580 ua 591 1 0 59 910109U1 Ol9H juepAxg sagen Sa 18 PUUI P 191444 JuepAXO ap asneo JIS01109 apinbiq anbuojyoied ploy SANDIWIHO SANDISAHd Sanosi s3uiny SILIMIGLLVdWOONI Y SNOILNYIJYd JIGNIONI G INOSIY 31NVS Y1 HNOd SANOSIH S3131Hd0Hd ANOIINIHO 1110094 170 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE unel ua nead ej 9410102 s nan pa Sa jualasnasnoblr 116891 1194 qu ul noll ldulls sed 19S014X9 jueAnod winiajed ap ayesaid ap nbsil 0190 np 334e 198 U09 SE uq 1 12 nb s lsoldx snjd 1405 inb xnejaw XnaJquiou ap IIAL 9195 Sap nbilo091 011 05 ua nb s siln u e no nea p uonouofpe Jed 19 S91 Sinof nol 1100 09S R 1SO X4 Xn s anod ugu s snru sap 19 S lPUd sap JanboaoJd 1190 uolsabul7 Juen 9P U09 no uoejeyul uons ul Jed nbixol nea suep ajqnjos juawasabe 0 221 uolsn ap julod 00218 suep snossip no nea ap 29A 591 1010 1 s unel 1910 2 2 10 2400 11011 907 2 anbuold ploy e171 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE s p 1ednid El 19 919592 Jngjeyo aun nea saseq Sa S UlUIE Sa S1Upp4X0 s l s lq snqulo9
10. port s hors du laboratoire l Tenues de protection individuelle pour le stockage eryog nique Gestion des d chets Signes d une vacuation d fectueuse des d chets l D chets tri s et rassembl s dans les r cipients appropri6s l R cipients pour d chets chimiques marqu s tiquet s dat s et ferm s 222 l R cipients pour d chets chimiques correctement manipul s et rang s 2 l R cipients pour objets pointus ou tranchants correctement utilis s et 6limin6s l Pas de d tritus sur le sol l Affichage de la marche suivre pour l limination des deches l Existence de programmes de sant et s curit au travail Communication du risque l Protection respiratoire l Protection auditive l Surveillance du formald hyde l Surveillance de d thyl ne l Surveillance des gaz anesth siants l e 449 8 PRINCIPES DIRECTEURS POUR LAGREMENT DES LABORATOIRES INSTALLATIONS POINTS CONTROLES NOTER LA DATE OUI NON SANS OBJET OBSERVATIONS Syst mes de contr le
11. uolsodx 591181 90 aun nead Lj 19 suep 91415 00100 Xn s anod yue 1100 2 62 uolsn julod 910115119108 g 940102 1 apinb1 49919H9 aua AUJSIOUONL 209 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE WUWOY anod u3 0199ULI 949 peunod u zu q ul 1 gjaunduul augzu9q AU 9 11 9109 1194 Uonlubi p 991105 no QOUPISIP R 19 59 JuauanbIau au Sjua1dI991 Sa 41 9 1 90 u01 29 01d aun 19 21021 1089 ua 5108 sap 191104 XNa Sa 294e 198 U09 1101 194143 Sulpulnu 1 ul ddol A p 19 UOONpodad ej ans s lqeils pul S19H9 Sap 1U9919X9 Sunpoid s anb Jasuad g ll9U1 ajeuiue uonequ uili dx 1 110 Jed sagnboao1d saanipne SUOIS9 59 31410199V n d uorIsodx37 nbil ds uou 119119q uonepidil p aun sanbonod n d bin 1981u09 un Uons ul p 580 Ud H90N 99110181059 5910 Sa 19 Sasnanbnw s nead ej xn s inod 91 JUOS SinadeA s l 19 pinbil sagsneu sap je anbiyey PI ap S uaWassipinoye sap s lpud s p Jed juesinped 99 IE41U92 XNBAJAU awaysAs np s lqnon sap sanboaoud n d 2 c6 112199 p juIod a qewiwejjul p nb q nea suep lqn osul 0 971 961 uolllnq p 1100 0 21 896 uolsn
12. tre limin s seront rebouch s avec leur capuchon et plac s dans un r cipient tanche appropri dans lequel ils seront autoclav s et incin r s Il faut disposer de d sinfectants appropri s pour nettoyer les claboussures ou les liquides r pandus voir chapitre 14 80 12 TECHNIQUES DE LABORATOIRE Utilisation des centrifugeuses ls Le bon fonctionnement m canique des centrifugeuses de laboratoire est un l ment indispensable de la s curit microbiologique 2 La centrifugeuse doit tre utilis e conform ment aux instructions du fabricant 10 11 12 13 14 15 16 La centrifugeuse sera plac e une hauteur telle que l op rateur puisse voir Pin t rieur de la cuve pour disposer correctement les godets ou les pots ou nacelles selon le cas sur les tourillons Les tubes centrifuger ainsi que les r cipients contenant les chantillons devront tre en verre pais ou de pr f rence en mati re plastique et ils devront tre inspec t s avant usage la recherche de d fauts ventuels Il faut que les tubes centrifuger ou les r cipients contenant les chantillons soient bien ferm s si possible avec un bouchon viss Les godets doivent tre remplis quilibr s ferm s et ouverts dans une enceinte de s curit biologique Les pots godets ou nacelles etc fix s sur les tourillons seront appari s d apr s leur poids et corr
13. 34 35 36 37 38 39 40 41 42 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Systemes d alimentation en air pour combinaisons pressuris es Systemes d alimentation en air pour le service et Pappareillage Contr le de la regulation cascade des differences de pression dans les laboratoires et locaux de service R seau informatique local LAN et systemes informatiques d enregistrement et de traitement des donn es Alimentation lectrique par le r seau 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 Groupes lectrog nes de secours Alimentation lectrique sans coupure Eclairage de secours Joints d tanch it des travers es pour Tinstallation lectrique Joints d tanch it des travers es lectriques et m caniques Installation t l phonique Asservissement du verrouillage de la commande des portes des sas air Joints d tanch it des portes Joints d tanch it des fen tres et panneaux d observation Etanch it des travers es des rev tements d isolement Contr le de Pabsence de d fauts dans les elements structuraux de l installation dalles murs et plafonds en b ton Contr le du rev tement d isolement des sols murs et plafonds Contr le du dispositif de mise en pression et d isolement des enceintes de con finement pour le niveau de s curit 4 Enceintes de s curit biologique Autoclaves Installation pour Pazote liquide avec son disp
14. 4 Les appareils lectriques sont ils tous agr s par un laboratoire d essai Les cables d alimentation souples de tous les appareils sont ils aussi courts que possible en bon tat sans usure dommage ou raccord Chaque prise n est elle utilis e que pour un seul appareil pas d adaptateurs Protection individuelle 1 Tous les membres du personnel du laboratoire disposent ils de v tements pro tecteurs dont le modele et Petoffe ou le mat riau sont approuv s tels que blouses sarraus combinaisons tabliers ou gants Le personnel qui travaille sur des produits chimiques dangereux ou sur des sub stances radioactives ou cancerog nes dispose t il d accessoires de protection sup pl mentaires tels que tabliers et gants de caoutchouc pour la manipulation des produits chimiques et le traitement des liquides r pandus ou gants r sistants a la chaleur pour le d chargement des autoclaves et des fours Le personnel dispose t il de lunettes de s curit de lunettes a coques et d ecrans faciaux visi res 4 Existe t il des postes pour le rin age des yeux ul Existe t il des douches d urgence Les mesures de radioprotection sont elles conformes aux normes nationales et internationales et comportent elles la fourniture de dosim tres individuels Le laboratoire dispose t il de masques respiratoires r guli rement nettoy s d s infect s v rifi s et rang s de mani re
15. A rosols projections et renversement de liquides e p rer dans une enceinte de s curit biologique ou une enceinte de confinement primaire sp cialement con ue e Utiliser des flacons culture solides munis d un bouchon vis et dont l ouverture comporte un filtre solidement fix si n cessaire Lyophilisateurs A rosols et contamination par contact direct e Utiliser des raccords circulaires permettant de maintenir l appareil herm tiquement ferm e Utiliser des filtres air pour prot ger le circuit de vide e Utiliser une m thode satisfaisante pour la d contamination par voie chimique par exemple e Pr voir un pi ge humidit enti rement m tallique et un condenseur de vapeur 161 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE APPAREILS ET INSTRUMENTS R SQUES ELIMINATION OU REDUCTION DU RISQUE e V rifier avec soin que les flacons de verre ne sont pas endommag s N employer que des flacons con us sp cialement pour utilisation sous vide Bains marie Prolif ration de e Nettoyer et d sinfecter micro organismes L azoture r guli rement de sodium forme des e Ne pas utiliser d azoture de compos s explosifs avec sodium pour viter la prolif ration certains m taux des germes Outre les risques microbiologiques il faut galement pr voir et viter ceux que com portent les appareils et quipements utilis s Le tableau A4 2 ci dessous num re qu
16. Chlore hypochlorite de sodium Le chlore un oxydant action rapide est un germicide chimique large spectre uni versellement disponible Il est g n ralement vendu sous forme d eau de Javel une solution aqueuse d hypochlorite de sodium NaOCl que Pon peut diluer avec de l eau pour obtenir diff rentes concentrations de chlore actif Tableau 12 Dilutions recommand es pour les compos s lib rant du chlore SITUATION PROPRE SITUATION SALE Chlore actif n cessaire 0 1 1 g l 0 5 96 50 Hypochlorite de sodium 20 ml l 100 ml l 5 de chlore actif Hypochlorite de calcium 1 49 70 70 de chlore actif Dichloroisocyanurate de sodium poudre 1 7 g l 8 5g l 60 de chlore actif Dichloroisocyanurate de sodium comprim s 1 comprim 4 comprim s 1 59 de chlore actif par comprim Chloramine 25 de chlore actif 20 g l 20 g l 3 Apr s enl vement des salissures les plus importantes gt Pour verser directement par ex sur du sang ou avant l limination des salissures les plus importantes 5 Voir texte 949 14 DESINFECTION ET STERILISATION Les solutions d hypochlorite utilis es comme agents de blanchiment sont forte ment alcalines et corrodent les m taux L activit du chlore libre est r duite par la pr sence de mati res organiques prot ines Les solutions m res ou les solutions de travail d hypochlorite stock es dans des r cipients ouverts d gagent du chlore no
17. Geneve Suisse ix Remerciements Nous sommes tr s reconnaissants aux personnes dont les noms suivent et dont les comp tences nous ont t pr cieuses pour la pr paration de cette troisi me dition du Manuel de s curit biologique en laboratoire Dr W Emmett Barkley Howard Hughes Medical Institute Chevy Chase MD Etats Unis d Am rique Dr Murray L Cohen Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA Etats Unis d Am rique retrait Dr Ingegerd Kallings Institut su dois pour la lutte contre les maladies infectieuses Stockholm Su de Mme Mary Fllen Kennedy Consultante en s curit biologique Ashton Ontario Canada Mme Margery Kennett Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory North Melbourne Australie retrait e Dr Richard Knudsen Office of Health and Safety Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA Etats Unis d Am rique Dr Nicoletta Previsani Programme de s curit biologique Organisation mondiale de la Sant Gen ve Suisse Dr Jonathan Richmond Office of Health and Safety Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA Etats Unis d Am rique retrait Dr Syed A Sattar Facult de M decine Universit d Ottavva Ottawa Ontario Canada Dr Deborah E Wilson Division of Occupational Health and Safety Office of Research Services National Institutes of Health Department of Health and Human Services Washington DC Etats Unis d Am riqu
18. Laboratoire pour travaux en combinaison pressuris e Ce laboratoire doit pos seder un syst me special de ventilation et d vacuation de lair vici L alimen tation et l vacuation sont r gl es de mani re que le flux d air qui circule dans la zone o sont port es les combinaisons de protection soit dirig de la zone de moindre danger vers la ou les zones de risque maximal Il faut que les ventilateurs d extraction soient en surnombre de fa on que l installation reste constamment en d pression Les diff rences de pression dans le laboratoire lui m me et entre le laboratoire et les locaux contigus doivent tre surveill es en permanence Ce doit galement tre le cas de Fair qui circule dans les circuits d alimentation et d vacuation du syst me de ventilation et un dis positif de r gulation appropri doit tre install pour viter toute surpression l int rieur du laboratoire L air distribu dans la zone o sont port es les com binaisons de protection la douche de d contamination et les sas ou chambres de d contamination doit passer travers un filtre HEPA Lair qui est vacu du laboratoire doit passer travers deux filtres HEPA successifs avant d tre rejet l ext rieur Une autre possibilit consiste apr s cette double filtration recycler Pair vacu mais uniquement l int rieur du laboratoire Lair vacu d un laboratoire de confinement s curit biologique niveau 4
19. pinbr 900199 nbnseld ua no dnoyaynoes ua 2 91 8 sap 19 l llu auloyesoge inod sanboo g sa jaun sap saiaissnodijue anbsew un nb ISUIE S1n9 99 01d S U L A guena no lin SOP 191104 SinadeA 198 u09 sed ua sap JOON aulejnoseaoipsed n sodsip llaiedde ap 39 P11U39 nea dae 9110 aun no XD AH U BWa SAS suep ajqnjos auuoqgos aun SNOS np aqulany sinpinuin 5911 904 L p jos l Jajndiuew sjaya p nbs UOISN 1100 S UL U9Iq dane UOIJS9BUIp 580 szu s nb j p 202 2011 S1u9141291 59 142 nbixo 1494 520010 191 39424990 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE 2 0ZE P s p xo s p g 39 ainueAd np g aouessieu JUEUUOP ua uohsnqulo9 Jed soduloo p 1U911919A91 ap 19 2 0 211089 ap anbysejd 590 1 surea nbeyy s nbifl u s1uepAxo Sa 99Ab 1I E H sanbixo sinadeA s p ua asnanbe uonjos ua Saseq Sa 19 59 10 S 11 E H onou9 n0e9 ap sjueh Sap 19 91107211dS81 U01198 01d un 131104 sasnanbnw Sa 294e 198 U09 1101 191144 992101 UOIEIUSA SNOS SLUPPAXO sap E 9018 ap n li np 109 5 19 5901 u wanby wa y s u 1d1991 s p suep s sod nuq uolui p 391n0S n0 JULJSIP SANUS siloipu s p suep nb Jasin
20. vapeur pour charge poreuse la temp rature de 134 137 C soit pendant un seul cycle de 18 minutes soit pendant six cycles successifs de 3 minutes chacun puis incin r s Les instruments et le mat riel non jetable comme les gants mailles d acier par exemple doivent tre rassembl s pour tre d contamin s Les d chets liquides infectieux contamin s par des prions doivent tre trait s pendant 1 heure par une solution d hypochlorite de sodium contenant 20 g litre de chlore actif 2 concentration finale Les techniques bas es sur la vaporisation de paraformald hyde ne font pas baisser le titre des prions et ces derniers sont galement r sistants au rayonnement ultra violet Il faut n anmoins continuer d contaminer les enceintes en utilisant les m thodes traditionnelles par ex fumigation au formald hyde pour inactiver les autres agents pathog nes qui seraient pr sents Les enceintes de s curit biologique et autres surfaces contamin es par des prions peuvent tre d contamin es en leur appliquant pendant 1 heure une solution d hypochlorite de sodium 20 g litre de chlore actif 2 90 Les filtres particules de haute efficacit filtres HEPA doivent tre incin r s une temperature minimum de 1000 C une fois retir s Avant d incinerer le filtre il est recommand de proc der comme suit 86 12 TECHNIQUES DE LABORATOIRE A a vaporiser une laque capillaire sur la face e
21. Hl vers double paroi vanne A gt _ vers chambre syst me d alimentation vapeur m deflecteur chambre porte lt vers pompe a vide 1 ou sortie vapeur vanne filtres de vidange purgeurs vapeur gt gt robinet de vidange clapet anti retour Figure 10 Autoclave a vapeur directe Chargement des autoclaves Le mat riel ne doit pas tre entass l int rieur de la chambre pour que la vapeur puisse p n trer sans difficult et que lair puisse tre limin facilement Il faut que la vapeur puisse atteindre le contenu des sacs Pr cautions d utilisation L observation des r gles suivantes permet de r duire les risques que comporte Putili sation d appareils sous pression 1 L utilisation et Pentretien habituels des appareils doivent tre confi s des per sonnes qualifi es 2 Un programme de maintenance pr ventive comprenant un contr le p riodique des joints de la chambre et de la porte ainsi que de tous les manometres et dis positifs de commande doit tre mis sur pied et confi un personnel qualifi 3 La vapeur doit tre satur e et exempte de substances chimiques par ex des inhi biteurs de corrosion qui pourraient contaminer le mat riel st riliser 4 Tout le mat riel autoclaver doit tre plac dans des r cipients qui pe
22. MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE no aJAIND UOJIE ua X Jed s nbillei ul sjuawadinbe p no Sjualdi991 ap Jasin sed aUPUJAUIOIJIU l 19 s lhx 421060 s lq sn qulo2 N UN s l npul QEL PA El ap 1406 19 Sa qewwejul e sled WOupua s pinbil s sas nead p sn nbe un suep sin no xnei ul 07 assedap e 19 591101010591 uonn os 1 sod nuq s p SIDA Sa Xna Ud IA Jualdiogs 2 nbeyy saseq ej IS 120 Sa Jnod 50 11 JUOS e 9101991 suep uolss sd Sa 19 s uep xo U0199 01d aun s nilp suonjos 391 oz 02 2 6Z1 e ajuawbine S JUSLULUPJOU 19 9NOU9N0P9 nead ej 9818 9Buoloid uolilnq b nb 99 19 s nbililu ua sjueb sap Sa qsnquo J2PJU09 ap 582 1100 5900919015 181104 nea s l hbul s p ua 9 oz 02 2 62 jueabebap ua SaSJAAIP g uawa paw dane 1981U02 aiqiey g Juawajeba 19 uolsn 20 H Jasodwooep juawasnainobia Janel nead ej 29948 SE u BIPUBDUI P 09 11100 810joauI 101pAU194 as 1194 pegy 1981u09 582 13 anbsi 2uPp4x0 GUO g 1801102 u folp u p p4Axol q auleuowyjnd sjug neajnd awapa un Janbonod xnejaw ap lou 1190 195 00 no s nblup uo asaissnod PI ap UOIE EUU
23. Nettoyage du mat riel de laboratoire Germicides chimiques D contamination de l environnement local D contamination des enceintes de s curit biologique Lavage et d contamination des mains D sinfection et st rilisation par la chaleur Incin ration Elimination Introduction au transport des mati res infectieuses R glementation internationale relative aux transports Le syst me du triple emballage Consignes pour nettoyer des produits r pandus 79 79 80 80 81 82 82 82 83 83 83 85 88 88 89 92 92 93 93 100 100 101 101 104 105 106 106 107 107 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE PARTIE V Introduction aux biotechnologies 111 16 S curit et technologies de recombinaison de ADN 113 Consid rations bios curitaires applicables aux syst mes d expression biologiques 114 Consid rations bios curitaires applicables aux vecteurs d expression 114 Vecteurs viraux pour le transfert de g nes 114 Animaux transg niques et animaux knock out 115 Plantes transg niques 115 Evaluation du risque dans le cas des organismes g n tiquement modifi s 115 Autres consid rations 117 PARTIE VI S curit chimique lectrique et incendie 119 17 Les risques chimiques 121 Voies d exposition 121 Stockage des produits chimiques 121 R gles g n rales d incompatibilit chimique 121 Toxicit des produits chimiques 121 Produits chimiques explosifs 122 Renversement ac
24. Sa QPIUOLUL E 1 IIAL yOegy nbluluni aploe auaAjgoy 210421 1080 ua 5186 sap 181104 asnainobi 9091 aun 1 M SqQ sjejuaplooe S U L S AU I S 1911A9 D 19940H9 S HM A 910 M lpu un suep no auuoqios aun SNOS Ja eAeIL S UL 1910 5109101294 S 1091 IPUSUI P 582 ua s nbixo no SaJUP UII SINnadeA juswebebeq ajquisnqwoo uoy sjuap sap Jugwassneysap un IPA UI yuawayjuobh un s snpu sap s lpud sap e ap S M L SS L OA sap sanboaold 1190 ll 211U99 XN9AISU 5 5 8 19 SUI91 Sa INS SJIJOU 9 S D n d i d i uonlsodx aun aguen alalueq E 19S19AV1 1194 nea suep lqn osul 90498 uonlnq p uod 2 66 uolsn julod 9SUap 5911 guae pinbi 6H aINJaN 195 91011 05 159 29AV uous p anos SH Qewwe Ul p 99U819SU09 anbnsiayoere9 a slew nea suep lqn os n d 9 90 uollllnq p agueyna wod 2 61 ej 1 UOISN ap utod sunaden 890 9 01 19 8190 LOS sap saugBenu 59191 0010 uolinga p misodsip un S D l9A I 0091190 1 julod N H z shed 3342 no yoy aun no SS A L ap 0 06 4015 aullue Alydeu m xn lqulou auuoqios aun snos
25. il est indispensable d tablir par crit un plan d urgence pour faire face au accidents qui pourraient se produire dans le laboratoire ou Panimalerie Les autorit s sanitaires nationales ou locales doivent tre associ es l laboration de ce plan de pr paration aux situations d urgence Plan d urgence Le plan doit pr voir la conduite tenir dans diff rentes situations 1 Mesures de s curit en cas de catastrophe naturelle ou autre incendie inonda tion s isme ou explosion par exemple Evaluation du risque biologique Mesures prendre d exposition accidentelle et d contamination Evacuation d urgence du personnel et des animaux Traitement m dical d urgence des personnes expos es et des bless s Surveillance m dicale des personnes expos es Prise en charge clinique des personnes expos es Enqu te pid miologique Suivi de la situation apr s Paccident OND UW He D Lors de Pelaboration de ce plan il faudra envisager d inclure les points suivants 1 Identification des micro organismes haut risque 2 Localisation des zones haut risque telles que laboratoires aires de stockage animaleries 3 Idenfication du personnel et des populations risque 4 Identification des responsables et de leurs responsabilit s d l gu la s curit biologique quipe de s curit autorit s sanitaires locales cliniciens microbiolo gistes v t rinaires
26. par le personnel du laboratoire dans l exercice de ses activit s Veiller ce que la d contamination soit correctement effectu e apr s renversement accidentel de liquides ou autres incidents survenus avec du mat riel infectieux Veiller la bonne gestion des d chets 10 Veiller ce que tout appareil ou quipement soit convenablement d contamin avant une r paration ou un contr le Sensibiliser le personnel aux attitudes de la collectivit vis vis des questions touchant la sant et l environnement Etablir la marche suivre appropri e pour Pimportation et l exportation par le laboratoire de mat riel biologique pathog ne en conformit avec la r glementa tion nationale Analyser sous Pangle de la s curit tous les plans protocoles et modes op ratoires utilis s dans les travaux de recherche Etablir un syst me pour faire face aux situations d urgence comit de s curit biologique Il convient de constituer un comit de s curit biologique dont le r le sera de d finir la politique de Petablissement en mati re de s curit biologique et d laborer un code de bonnes pratiques Le comit doit galement examiner les protocoles de recherche comportant la manipulation d agents infectieux l utilisation d animaux la mise en uvre de techniques de recombinaison de l ADN ou Putilisation d organismes g n tiquement modifi s Le comit pourra galement avoir pour
27. sap s l ssnodilup anbsew un 19H0d UolsoldX p juawasnesnobiA nbsii np inod SAn9 9np i S 19 SIUEp XO S 29AB 9UE1n2 1981u02 ap no uonejeyul p uons ul p SE Ud JIDON XN9 s nea suep jqnjos 1 2 002 uolsn ap 11100 96ue10 no 1 2151 0 HNHN 20N H 9 u zu qo nlulp Z OUIZeIPAH 2 5 m a 116691 1194 JUUN 19 gj anod uey YZ L M 21107100 m mod sanboo ce g sayjaun sap 5 19 llillu 9n0U9 N0P9 nead gj 19 Xn9 a ua sjueh sap 181104 0 81 Sa 100 A1SO1102 auu0q10S 5105 118199 159 uonnjos 67 591 9 p 19 PARAL ulgapaw Julod ajqewiwe jul s p 9 9 n d e ql sili 2 un s nsuo9 S91 159 011 05 apided uone1OdeA97 2 2 UOlnq p 5 18 87 1 802 auyeuoluind 1100 0 66 199uL XN un UOISN urod Sa 9 U09 SOHWI 9 92 n d uoneyeyuly 91ubn u d anosa 589 ua uou p 115199 p S91107211dS91 Jnapo un p l 19 SJUEPAXO S 90 05 lno 1100 ajqewiwe jul S l0A Sa 19 XN9 910p IREI0A HN H2 dane 116691 1194 9 ugisip g 1491 1 1 Sa 1100 zue 5911 u nbil 289 us nbiseyd ua no onoyaynoes ua sj
28. 19 91 ze6 no sanader 1 Sed UJ ajqeuwue jul 280 un g abeyneyo Jed aouessieu auuop slew aiqusnquiod UON LOW gj 19 311072114591 oupsiunsul aun a9U819SU09 ap aad aun SUOISINAUOI sap Jaulesjua p lqnd sns 1 0 awapa un Janbonod nad sinaden s p uoejeyul S9110 21IdS91 5910 Sa 19 nead p xn 4 Sa 1100 JURY 5911 Dold nq D juiod 000 UOISN 1100 ajuenbid un p S9 0P sour q no 590 0201 9 2 uo N914 ap sinwolg 179 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE UOISO AXa p 19 lpusoul p nbsii 29AP SASIAIP quawaul xne ul s l 19 nbipul 159 UOHPA SQO Ud 9SILU L 99 ulnipos Sl H b 9111015504 ap aunqieo LOW ej auahoupAy n d 0 OPIUOUULUE 910 aun g UOHISOUX9 S191101190 991 9 sap sunpoid Jaulesjua n d pinbil Sa1ine 51 np apides uoneiodeng 19 9 92190 S UU L PB SIIOA Sap auaipeyng ldul09 UONOUOISAP S H L 19A L 909 192 91101211dS91 anbsew aun aouanbasuod S 19 sanbiuebio un no sanboo g Inod 9348 onoyaynoeo l s sodul09 U01 98 01d ap s n uni aeuowjnd awapa 0 F s nbysejd s l sap s1n
29. Ascenzi JM Handbook of disinfectants and antiseptics New York NY Marcel Dekker 1996 Block SS Disinfection sterilization amp preservation 5th ed Philadelphia PA Lippincott Williams amp Wilkins 2001 Rutala WA APIC guideline for selection and use of disinfectants 1994 1995 and 1996 APIC Guidelines Committee Association for Professionals in Infection Control and Epidemiology INC American Journal of Infection Control 1996 24 313 342 Sattar SA Springthorpe VS Rochon M A product based on accelerated and stabilized hydrogen peroxide evidence for broad spectrum germicidal activity Canadian Journal of Infection Control 1998 13 123 130 Schneider PM Emerging low temperature sterilization technologies In Rutala WA eds Disinfection sterilization in health care Champlain NY Polyscience 1997 79 92 Springthorpe VS New chemical germicides In Rutala WA eds Disinfection sterilization in health care Champlain NY Polyscience 1997 273 280 Steelman VM Activity of sterilization processes and disinfectants against prions In Rutala WA eds Disinfection sterilization in health care Champlain NY Polyscience 1997 255 271 154 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 l BIBLIOGRAPHIE Taylor DM Transmissible degenerative encephalopathies inactivation of the unconven tional causal agents In Russell AD Hugo WB Ayli
30. MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE sabilit s actuelles des pays et des tablissements dans la protection des chantillons des agents pathog nes et des toxines detenus contre toute utilisation abusive Il incombe a chaque laboratoire en fonction de ses besoins de la nature de ses activit s et des conditions locales d elaborer et de mettre en ceuvre un programme de stiret biologique sp cifique Par cons quent les activit s de stiret biologique pratiqu es dans un laboratoire doivent tre repr sentatives des divers besoins de cet tablissement et b n ficier de la contribution ou de l avis des directeurs scientifiques des principaux chercheurs des responsable de la stiret biologique du personnel scientifique du laboratoire du personnel d entretien des responsables administratifs du personnel sp cialis dans les technologies de information et si n cessaire des services de r pression des fraudes et du personnel de s curit Les mesures de stiret biologique en laboratoire doivent s appuyer sur un pro gramme complet de responsabilisation a Pegard des agents pathog nes et des toxines qui comprend un inventaire actualis identifiant l emplacement de ces mati res et du personnel y ayant acc s et indiquant leur utilisation leurs transferts internes l tablissement ou entre tablissements ainsi que toute inactivation et ou limination ventuelles des mati res De m me il convient d tablir
31. air combinaison pressuris e 29 enceintes de s curit biologique 57 62 63 64 voir aussi syst mes de ventilation syst me d emballage 107 108 du triple emballage 107 108 syst me de communication 28 syst me de refroidissement arthropodes 37 syst mes de ventilation animaleries 34 35 36 laboratoire de base 15 de confinement 23 haute s curit 30 31 liste contr les de s curit 144 tablier de laboratoire 72 technologie de recombinaison de l ADN 113 117 tellurite de potassium 205 t trachlorure de carbone 205 t trahydrofuranne 206 t troxyde d osmium 207 tiques 37 tissus contenant des prions 86 pr cautions d usage 85 toilettes 144 tolu ne 208 transfert de g ne 114 transport 12 106 109 chantillons 77 83 84 mat riel infectieux 20 21 24 r glementation internationale 106 107 syst me du triple emballage 107 108 Transport des Marchandises dangereuses Comit d experts de PONU en mati re de UNCEDTG 106 travail en bin me 28 36 trichlor thyl ne 209 triclosan 97 98 2 4 6 trinitroph nol acide picrique 122 171 trousse de premiers secours 156 tubes bouchon viss 17 bris dans les centrifugeuses 90 218 INDEX ultracentrifugeuses 160 laboratoire de confinement 23 24 urgences 88 91 a haute s curit 30 conduite a tenir 89 91 verre 84 plan d 88 89 manipulation de debris de 89 90 109 securit biologique niveau 4 28 31 pr cautions pour l utilisation 80 84 vesti
32. ce que la soupape d chappement des autoclaves de type autocuiseur ne soit pas obtur e par du papier etc pr sent dans la charge Incin ration Lincin ration est une m thode utile pour se d barrasser des carcasses d animaux des pi ces anatomiques ou autres d chets de laboratoire avec ou sans d contamination pr alable voir chapitre 3 Lincineration des mat riels infectieux ne peut se substituer Pautoclavage que si Pincin rateur est plac sous la responsabilit du laboratoire Pour donner satisfaction il faut que l incin rateur comporte un dispositif efficace de r gulation de la temp rature et une chambre de combustion secondaire Un grand nombre d incin rateurs notamment ceux qui ne comportent qu une seule chambre de combustion ne permettent pas de traiter de mani re satisfaisante le mat riel infec tieux les carcasses d animaux et les mati res plastiques En effet la destruction risque de ne pas tre totale et Peffluent qui sort par la chemin e peut polluer l atmosph re du fait de la pr sence de micro organismes ou de substances et fum es toxiques Cela tant il existe pour les chambres de combustion de nombreux types de configura tion qui donnent satisfaction mais Pideal est d obtenir une temp rature dau moins 800 C dans la chambre primaire et d au moins 1000 C dans la chambre secondaire Les mati res et objets incin rer m me 5115 ont t pr alablement d contamin s doivent tre tra
33. clenchement est un signal de danger imm diat pour l op rateur ou pour le produit Si cette alarme retentit il faut interrompre imm diatement la manipulation et pr venir le chef de laboratoire Le manuel d utilisation fourni par le fabricant doit indiquer quelle est ensuite la marche suivre Ces questions doivent tre abord es lors de la formation l utilisation des ESB Informations compl mentaires Le choix de PESB appropri e son installation son utilisation correcte et le contr le annuel de son bon fonctionnement sont des op rations complexes Il est vivement recommand qu elles soient supervis es par un professionnel de la s curit biologique parfaitement form et exp riment Ce sp cialiste doit tr s bien conna tre la litt ra ture correspondante mentionn e dans la bibliographie du pr sent manuel et il doit avoir re u une formation compl te sur la question Les op rateurs doivent galement recevoir une formation en bonne et due forme portant sur le fonctionnement et l utilisation des ESB Pour de plus amples informations le lecteur est pri de se reporter aux r f rences 5 et 7 16 ainsi qu au chapitre 11 67 11 Equipements de s curit Comme les a rosols sont une source importante d infection il faut veiller ce qu il s en forme le moins possible et viter de les disperser Des a rosols dangereux peuvent se former dans de nombreux laboratoires par exemple lorsqu on m lange m
34. confinement primaire 29 conformit quipements 17 212 cong lateurs 82 83 consignes pour nettoyer des produits r pandus 107 109 consommation d aliments 11 15 34 80 conteneurs chantillons 77 84 107 mat riels contamin s 20 21 objets tranchants 20 70 r cipients cass s 89 90 tanches 69 contr les s curit du laboratoire 41 42 formulaires 43 48 cosm tiques 11 coupures 89 cuivre 183 cyanure de sodium 184 cytochalasine 185 d chets 19 21 animaleries 34 36 contamin s par des prions 86 d contamination 19 24 invert br s 36 37 radioactifs 130 s curit biologique niveau 4 31 traitement limination 19 21 24 105 d contamination d chets 19 20 24 d finition 92 des mains 101 effluents liquides 12 31 enceintes de s curit biologique 67 100 101 environnement local 100 liquides biologiques 85 mat riels contamin s par des prions 85 87 voir aussi nettoyage d sinfection d l gu a la s curit biologique 18 90 133 134 d riv s ph noliques 97 98 d sinfectants 93 94 100 d sinfection 92 105 autoclavage 102 104 chimique 93 100 d chets 20 21 INDEX d finition 93 enceintes de s curit biologique 66 67 nettoyage pr alable 93 produits r pandus 107 109 voir aussi d contamination st rilisation dessiccateurs 161 dichloroisocyanurate de sodium NaDCC 94 95 96 di thyl ther 189 3 3 dimethyl 1 1 biphenyl 4 4 diamine 207 dimethylamine 185 dim thylbenz n
35. consulter Le personnel a t il suivi une formation pour le travail avec des mati res radioac tives dans de bonnes conditions de s curit Un registre des stocks et de l utilisation des mati res radioactives existe t il et est il tenu correctement Le laboratoire dispose t il d crans de blindage pour la protection contre la radioactivit La surveillance dosim trique du personnel est elle assur e 150 PARTIE IX Bibliographie annexes et index Bibliographie 10 11 12 13 14 15 Safety in health care laboratories Gen ve Organisation mondiale de la Sant 1997 http whqlibdoc who int hq 1997 WHO_LAB_97 1 pdf Garner JS Hospital Infection Control Practices Advisory Committee Guideline for isolation precautions in hospitals American Journal of Infection Control 1996 24 24 52 http www cdc gov ncidod hip isolat isolat htm Hunt GJ Tabachnick WJ Handling small arbovirus vectors safely during biosafety level 3 containment Culicoides variipennis sonorensis Diptera Ceratopogonidae and exotic bluetongue viruses Journal of Medical Entomology 1996 33 271 277 National Research Council Occupational health and safety in the care and use of research animals Washington DC National Academy Press 1997 Richmond JY Quimby F Considerations for working safely with infectious disease agents in research animals In Zak O Sande MA eds Handb
36. curit Tout le personnel devra imm diatement vacuer la zone touch e et toute personne expos e devra tre adress e un m decin Le chef de laboratoire et le d l gu la s cu rit biologique seront imm diatement inform s de Fincident Personne ne doit entrer dans la pi ce pendant une dur e suffisante par ex 1 h pour permettre l vacuation de Paerosol et le d p t des particules lourdes Si le laboratoire n est pas dot d un syst me central de ventilation la r int gration des locaux sera retard e par ex de 24h Des panneaux doivent tre appos s pour indiquer que l entr e est interdite Au bout d une p riode de temps appropri e on proc dera la d contamination sous la sur veillance du d l gu la s curit biologique Cette op ration doit se faire en portant des v tements protecteurs et une protection respiratoire appropri s R cipients cass s et substances infectieuses r pandues Les r cipients cass s contamin s par des substances infectieuses et les substances infec tieuses r pandues accidentellement devront tre recouverts d un linge ou de papier absorbant sur lesquels on versera un d sinfectant qu on laissera reposer pendant une dur e appropri e Le linge ou le papier absorbant et le mat riel cass pourront ensuite tre enlev s les morceaux de verre seront manipul s avec une pince On passera ensuite une serpilli re impr gn e de d sinfectant sur la zone contamin e
37. dangereux douche la pressuris es biologique 4 sortie et utilis es avec limination une ESB classe sp cifique des l autoclave a dechets deux portes formant sas mural air filtr BTM bonnes techniques microbiologiques ESB enceinte de s curit biologique voir Partie IV de risque Le tableau 2 indique le rapport entre groupe de risque et niveau de s cu rit biologique mais il n assimile pas les groupes de risque au niveau de s curit biologique des laboratoires concus pour travailler sur des micro organismes appar tenant a ces groupes Chaque pays ou r gion devra tablir une classification nationale ou r gionale par groupe de risque des micro organismes Cette classification devra reposer sur les crit res suivants 1 Pathog nicit du germe 2 Mode de transmission et gamme d h tes qui peuvent dependre de Petat immu nitaire de la population locale de la densit et de la mobilit des h tes de la pr sence de vecteurs appropri s et du niveau d hygi ne de l environnement 1 PRINCIPES GENERAUX Tableau 3 Normes applicables aux diff rents niveaux de s curit biologique Isolement du laboratoire Salle tanche pour d contamination Ventilation circulation vers l int rieur syst me de ventilation r gul filtre HEPA sur la sortie d air Double porte d entr e Sas a air Sas a air avec douche Vestibule Vestibule avec douche Traitement des effluen
38. der facilement au nettoyage et la maintenance 13 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 3 LES LABORATOIRES DE BASE S CURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2 Les espaces de rangement doivent pouvoir recevoir le mat riel courant de mani re viter encombrement des paillasses et des zones de passage On pr voira gale ment des espaces pour le stockage de longue dur e qui devront tre commode ment situ s hors des zones de travail On prevoira la place et les moyens mat riels permettant de manipuler et d entreposer sans danger les solvants les substances radioactives ainsi que les gaz comprim s et liqu fi s Les vestiaires pour les v tements de ville et les objets personnels doivent se trouver en dehors des zones de travail Les zones pr vues pour se restaurer boire ou se reposer doivent galement se trouver en dehors des zones de travail On installera des lavabos si possible avec l eau courante dans chaque salle du laboratoire de pr f rence pr s de la porte Les portes doivent tre munies de panneaux transparents avoir une r sistance au feu convenable et comporter de pr f rence un syst me de fermeture automatique Au niveau de s curit biologique 2 il doit y avoir un autoclave ou autre moyen de d contamination distance suffisamment proche du laboratoire Les syst mes de s curit doivent couvrir les risques d incendie les accidents d
39. l objet de contr les de fonctionnement au titre de la mise en service du laboratoire en fonction du niveau de confinement de l installation en construction ou r nova tion Cette liste n est pas exhaustive Le plan de mise en service d pendra Pevidence de la complexit du laboratoire envisag 1 Syst mes automatiques du b timent et notamment les connexions avec les centres de surveillance et de commande distance Syst mes de surveillance et de d tection lectronique Verrouillage lectronique de s curit et lecteurs de proximit Chauffage ventilation alimentation et vacuation et climatisation Filtres particules de haute efficacit HEPA Syst mes de d contamination par filtration HEPA ND 1 He Commandes et asservissements des commandes de chauffage ventilation clima tisation et vacuation de Pair vici 8 Volets d isolement tanches 9 Syst mes de r frig ration 10 Chaudi res et production de vapeur 11 Syst mes de d tection et d extinction des incendies 12 Dispositif anti reflux pour les eaux us es 13 Syst mes de traitement de l eau par ex osmose inverse distillation etc 14 Syst mes de traitement et de neutralisation des effluents liquides 15 Dispositif d amorcage de vidange des eaux us es 16 Syst mes de d contamination chimique 17 Syst mes d approvisionnement en gaz m dicaux de laboratoire 398 18 19 20 21 22
40. pup yuy aILUIUO nea g ap auloyesoqge nod 91010910 9 8 s nbo g sa jeun uollllnq p sap 19 nbiseyd 1100 9 8G ua no 210121 0 2 uolsn ap ua S1uUP sap 191104 1 lod GZ 8 auu0q10S 5105 s nadea xne no 286 uonnjos 0 66 SIISOldX9 19 PAPAL UlO9p ul ne su lul uonsodx p uolllInq p s sodul09 sap un s9 nsuo9 seo ua auleuowynd iod 9 8 JNOd sjas 19 JUSWAa eIPaWW uonsabul p UOISN ap julod Sin 19 91 199UL Xn 4 BZ G sed ua S AHS D 9IUOULUE zef l anb sil spinol Sa J9PJUO9 ap aU IGeWWe JUI p S 10A S 19 ne d e lupnbid in po S SE uJ 9 910 SaJILUI 59110101059 5910 Sa un p 9001 1 05 JUSWWEIOIA 115E H Sjualdi991 S sua zeg S 1 00 901109 010 0901 apinbiq 19 DPIUOWLUY SanOlINIH SANDSIY 5341 S4111g11Vd N09N 1 JYONAYd Y 54011 FIGNAONI G 3 0914 JLNVS Y1 4 04 SANDS SANDISAHd 5313144094 ANDIWIHO 11 0084 174 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE 1 919195 00 ej ap 19 SinadeA sap as 1 00 1 ldul09 10101059 anbsew un no lln s anbuupe apioe s y un s p ja sjueb nbilexo apie Sap 19104 sunaden WNIUOWWEe p S 9S sap uolyendeAg p s l 9 9 199 890
41. renversements 122 123 sp cifiques 163 210 stockage 121 toxicit 121 122 voies d exposition 121 2 propanol 98 202 protection auditive 126 127 de la face 11 72 73 des produits 58 60 des yeux 11 72 73 80 pyridine 203 radionucleides enceintes de s curit biologique 64 r gles de s curit pour le travail avec des 128 130 substitution 128 rayonnements ionisants 21 127 130 effets nocifs 127 INDEX liste contr les de s curit 149 150 paillasses o s effectue la manipulation 129 principes de radioprotection 127 128 r frig rateurs 82 83 162 r glementation internationale relative aux transports 106 107 renversements dans les enceintes de s curit biologique 66 de mat riel infectieux 11 89 90 107 109 de produits chimiques 122 123 de sang 85 representant de Petablissement 39 risques lectriques 21 126 162 liste contr les de s curit 147 salle de repos 15 sang pr cautions d usage 83 85 sas air 29 30 36 s curit biologique 51 52 en laboratoire 51 53 gestion 12 s curit biologique niveau 1 1 2 9 21 animalerie 32 33 classification des micro organismes infectieux 1 4 conception du laboratoire 13 15 formulaire contr les de s curit du laboratoire 43 45 surveillance m dico sanitaire 17 voir aussi laboratoire de base s curit biologique niveau 2 1 2 9 21 animalerie 32 33 34 conception du laboratoire 13 15 formulaire contr les de s curit du laboratoire 46 4
42. s aux manipulations effectu es 4 Le probl me de la d contamination des d chets a t convenablement tudi et que la marche suivre appropri e pour la gestion de ces d chets a t tablie 5 Des r gles de s curit g n rale concernant notamment les risques physiques lectriques et chimiques ont t tablies La proc dure d agrement d un laboratoire diff re du processus de mise en service chapitre 7 sur un certain nombre de points importants Elle consiste en effet exa miner syst matiquement tous les quipements et mesures de s curit qui existent dans le laboratoire syst mes de contr le technique quipements de protection individu elle gestion administrative Les pratiques et proc dures relevant de la s curit biologique sont galement examin es Lagr ment d un laboratoire est un processus continu d assurance de la qualit et de la s curit qui doit tre repris p riodiquement Lagr ment d un laboratoire peut tre confi des professionnels de la sant et de la s curit au travail ou de la s curit biologique convenablement form s Les insti tutions peuvent disposer parmi leur personnel de cadres poss dant l ensemble de comp tences n cessaires pour effectuer des audits des enqu tes ou des inspections 41 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE ces termes sont consid r s comme interchangeables dans le cadre de la procedure d agrement Toujours
43. sap sajndiuew Jnod awaw 1 20 uon oid aun 19 nbnseyd ua no 210121 0 2 ua S1uUP sap 90 108109 ap SLI ua 500159 Janboaosd juaanad xnaX s 1100 sajueylu 1405 S n lp SUOHNIOS 591 a1reuouund SOL Saploe S 19H04 SJUIULJUOI awape un 19 nea suep dane 19 JOURYJIW S UBW9 9A S 991019 0 sauloyeuidsas salonsap ajqnjos 9 061 9U1101010149 1910 19 ap Dane s l hpul SUOIS9 Sap JanboAOJd uolllnq p S UPI UI S JUBLUAJLIPALULU 19AP sap jnad l lssnod ej ap 1100 9 81 juawasnainobiA nead ej Jane J9P U09 Jnod 5 5 UONPIEUUI 9941099002 uolsn nes ap seo ud ul29p ul 9139 nad uonnjos sun no apljos 1100 S810 O9UI 910 29A abuejaw un 15 02 unayeyd 1inpoid Jane sjauuoyeq 910910109 np 501 n lpu 19 JUSUW9JEIPAUUUUI ej lpiulnu p 19 9 1151120 J2E U09 no 59 1560 sap suep 295 ap juawebebap 1 ouli xn S no nea p 9 95910 ap no uolls ul p g pnod apnos ne queyodu 198 U09 ap sed UT u3 NSNQUIOOU SE ua xn s uep S9IL Sayallled LNIPOS ap S nilp 50011 105 Sa Jajndiuew Jnod awaw 99 1910 1 20 1011291010 189 9109101094 sap aun ja SUP s p suep ajqnjos suep
44. sunajonpal sap s1n9 99 01d ap g n ll uuoq ul pa un Janbonod 9498 19 2104211080 19 s lqilsnqulo2 S USWW9 9A 990 8150 5 1190 uonejeuu aun jueabebap ap s l sap 19 5108 sap s nne p 59101810591 99U0 anbijsejd ap 1 19H04 UOHP HUSA uolsnqulo9 SOA S 19 XN9 Sa no uniq s d supu I5e91 nbifl u snos 19 soja PI 911195 srewu 1100 S8AIS01109 1005 Jngjnoo ap ag anbeny juepAxg SPA ua Jasin y lql snqul09 UON SinadeA 597 11801100 apinbiq awolg SANOINIHO SANDISAHd 93 091 5391 S3LTIJILYdINO9NI Y SNOILNYIJYd JIGNIONI G INOSIY JLNYS YT 4 04 SINOSIY S3131Hd0Hd ANDIWIHD 1110094 178 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE nea p aouasaid ua xne ul xn lqulou ap anbeny auaboupAy p np 91NW01q s uuop anod aouaseid ua no nea IIAL UOH9891 ajua7 sanbiBiaug s uepAxo Sa H P H 1IS01109 ap 19 5911 u folp u p 1 dane saploe Sap 1081102 no abeyyneyo sed uonsodulo 4 dul09 auloyesidsay anbsew un no jele ueg un sanboo g s n uni sap s1n3 99 01d S USWW9 9A sap sjueh s p 19H04 UOHP HUSA snos 19 solo SLA Ud 9 PARIL s nbixo
45. tiquement ferm s et tanches conform ment la r glementation nationale ou internationale selon le cas 13 L alimentation en eau sera munie de dispositifs anti retour Les conduites d aspiration circuit de vide devront tre prot g es par des pi ges liquide d sinfectant des filtres HEPA ou des dispositifs quivalents Les pompes vide devront galement tre prot g es par des pi ges et des filtres 14 La conception d un laboratoire de confinement et les techniques mises en uvre dans ce type de laboratoire doivent s appuyer sur une documentation appropri e La figure 4 donne un exemple d am nagement d un laboratoire au niveau 3 de s curit biologique Appareils et quipements de laboratoire Le choix de Pappareillage y compris des enceintes de s curit biologique voir chapitre 10 repose sur les m mes principes que pour les laboratoires de base s curit biologique niveau 2 Toutefois dans un laboratoire de s curit biologique niveau 3 la manipulation de tous les mat riels potentiellement infectieux doit s effectuer dans une enceinte de s curit biologique ou avec tout autre dispositif de confinement primaire Il faut se souvenir que certains appareils tels que les centrifugeuses par exemple n ces sitent des dispositifs de confinement suppl mentaires par exemple utilisation de godets nacelles etc de s curit ou confinement du rotor Certaines centrifugeuses ou d autres appareils com
46. vol NG9 p 1100 2 01 uolsn ap urod ayeoRIUOLUWe aun jueahebep uou xn nbsiA 1010211 p nb 2 2 10UBU1 OUIUIE Z aUILUE OUEU SanO1INIH SANDSIY 5341 SALITIILVdINIOONI JYONAYd Y 54011 310N39N1 d JNOSIY JLNVS Y1 4NOd SANDS SANDISAHd 5313144094 ANDIWIHO 1110084 188 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE S U OIPU S 19 s ugp xo S 29AB JUBWWAIOIA 1191 n q silsoldx sapAxo13d ej g auinpuod ynad IUN El g 19 EE uonisodxa 7 need PI ap uonepidil p ej 19149 inod lli onou9 n0e9 ua 51 8 Sap 19104 UUOQ 0S SNOS nbneis 9119119818 p Sa1PU99p Sa 19149 1 00 9119 Ej 519101091 Sa UOHIUBI p 90 09 no ap JULJSIP R 1091 9 U A 0910 104pu un suep sjuaidi9a Sa 1 sod nuq ot g5 1 9 lqeuluieyulp s l 2 67 115109 p julod agew 1490 l d uoHlsodx p 569 ua lq ssod siolppe 4347 9949199009 ap d aun 19 0 aun 1190 81099 LU918 S l INS UOL 109 59 101810591 SOA Sa 19 xnaA s anod uey nea suep ajqnjos 1 Dov nq p quod 2 911 uolsn ap julod anbiysiajoe1e9 aguons 1n9pP0 R IITET0A 5011 19 940102uUI p nb 7 4 20
47. xneA juswabebap ej 99AP 1981U02 suep lqn os sin 1 in l ni Sa 19 nead 29A lpu ul D 582 ap no S910109U1 H 02270H quaBle sjuepAxQ 1961U02 1101 uJ ajqusnquiog seo ua JIJON xneqsug nbilexo ploy UUOQ10S un SNOS 1 LALI aILUIU 9110 510QP anod s nbo g s n uni s p nbiseid ua 191 qe un 4 ua s ue sap 19H04 S UIUIE u02 SJU9LU9 9A S 1910 anbiya 19 uawa Jnpoid 59048150 5 s ne UE n 1281009 nne no nb s sn squlou ap ap 560 u ul29p ul nea xnajahuep 19 saseq un 19INSU09 lpu oul p Sed u e 9101991 snjd juapual guaboupAy p 19 JUSWISJEIPAUULUI S nbixo sanader aeuowjnd L L 8 ap aunyjns Jaouls xn 4 juswabebap un Jenboaoud uolinga p 9101092515 guoqgieo UIJL 59 49e U0 ap 591015 04109 m d sanader 1100 159 94 U99U09 seo uJ 911018 10591 s l npul s p sap uoejeyu 2 uolsni nbinlu api9e 01991010 29AB 1981U09 S UB n 19 5 ap 1ul0d agd ONH ape anb plop aun sunadea SE Ua 3IPUSUI P Sain n1q sanes6 aunef g loyooul 02 09 SU0119891 597 anba ploy S Jayeyul sed N nbsii juepAxQ ap sne JIS01109 juewny apinbiq ploy 169 MANUEL D
48. 0 SANDSIY 5341 SanO1INIH SALITIILVdINIOONI JYONAYd Y 54011 JIGNAONI G JNOSIY JLNVS Y1 4 04 SANDS SANDISAHd 5313144094 ANDIWIHO 1110084 182 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE UolSoldX p nbsil dae S lPpO1 19 591801010 S E401U9 Sa 19 59101 sjuepAxo S dane 11 E H apAxoled 9 19 Saunjoze S QU9 AY 9 P sanb u91A998 S AL D 591 IIAL JUSWIO 95 5202 xne s lqisu s s sodul09 seq s nbo g s n uni s p 19 Sue Sap 211072114591 40112910 0 aun no uorenor p 1590 Ihisodsip un 99AP 1911 EARAL 01015100100 0 962 1100 0 6801 uolsn 1100 118 uohlsodx Jed H A ne JA anos lqP lleui 19 SAn puo SAP GA PJ 10PT L Q SJOPOUI Jasneo n d l m ap sinadeA ap uonejeyul7 apl os 14 183 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE a Jed 5109 9uuosiodwea sap JUdW9 e1 l Jnod 91895999 un p Jasodsip yop 010 97 Jalal ap 1UPAQ uz Jasodal Jassie 919 g 39W13 19 HM A 620 n suep uuoHppe q sod zyuq nbiseid nea ap no onou nop ua suep 19S19A9P sjue6 s p anb sue Sa 19 SaJUJIU l ll aloyesoge S pII0S 5009 S DaAe
49. 0ZE S ALI D S dane 1 9 1194 sunajonpal s 19 391019100102 S 29A 1 ul sn no lA 9p91 d s plop p aouasaid ua s nbixo s31 286 juswabebaq IWIYD alloyesoge anod 18 190 U0I98 01d aun 19 anbiysejd ua no 9nouonop ua sjueh SOP 19104 RU A u lq 101pu un suep 1918424 211072114S91 uo029 04d aun nade S 1911A4 Nea 29AB yu waLI pg 19AP guena 1061 02 seo ud ul9 p ul un 191119000 19 nea ap 29AB JUIW eI PAW Jaouu xn Sa 1081 09 589 uJ glpuadul p Sed Ua s nbixo sinadeA juswabebep ap anbsiy anbifiaue JUEPAXO aguen9 0 851 1015495 aun Jaulesjua m d a9 9da1 uonsodx auf auleuowjnd awapa un sanbonoid n d uoleyeyu S9 1016 1dS91 19 SaAnsabip S 10A S Nead e xn s l inod 1901102 nea g 910109111 9401U9 ap Jnapo aun jueabebep aed unef g loooul uolnlos 190EN 940109 0 amp UONNIOS 200 193 4 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE s nbixo no suepi 189 286 no sanader suep lqnyosul juswabhebap juswanbijeid OPIUOWWWE lpu oul p 81 19 949 199 seo uy SUO1SOldX9 uollnq p aloydsoyd joueyye s p no s lpu ul plo 4u quiod LE safuejaw sap 1anboao1d PI Ins sajqissod uolsn ap
50. 29 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE 2 R glementation de l acc s Le laboratoire de confinement de haute s curit s cu rit biologique niveau 4 doit tre situ dans un batiment s par ou tout au moins dans une zone clairement d limit e d un b timent s curis L entr e et la sortie du personnel doit se faire a travers un sas ou autre dispositif de ce genre A Pen tr e le personnel doit se changer compl tement avant de sortir il doit prendre une douche avant de remettre ses v tement de ville 3 R gulation de la ventilation Les locaux doivent tre maintenus en d pression Lair doit tre filtr au moyen de filtres HEPA tant Padmission qu Pevacuation Un laboratoire avec enceintes biologiques de s curit classe et un laboratoire pour travaux en combinaison pressuris e sont dot s de systemes de ventilation sensiblement diff rents Laboratoire avec enceintes de classe III Lair destin aux enceintes de s curit biologique classe III peut tre pr lev dans la salle travers un filtre HEPA monte sur Penceinte ou bien amen directement par le systeme de ventilation Avant d tre vacu l ext rieur lair des enceintes de s curit biologique classe HI doit passer travers deux filtres HEPA L enceinte doit toujours tre en d pression par rapport la salle Il est n cessaire que ce laboratoire dispose d un syst me sp cial de ventilation sans recyclage
51. 3 Les syst mes d entreposage et de rangement tag res etc sont ils con us pour que le mat riel entrepos ne puisse ni glisser ni se renverser ni tomber Les aires d entreposage sont elles encombrees de d bris d objets inutiles et inutilisables sur lesquels on pourrait tr bucher qui pourraient prendre feu ou h berger de la vermine Les cong lateurs et aires d entreposage peuvent ils tre ferm s a clef Assainissement et locaux pour le personnel 1 2 3 Les locaux sont ils propres bien tenus et dans de bonnes conditions d hygi ne Dispose t on d eau potable Y a t il des toilettes et les lavabos s par s pour les hommes et les femmes et sont ils satisfaisants et propres Y trouve t on de Peau chaude et froide du savon et des essuie mains Les vestiaires sont ils s par s pour les hommes et pour les femmes Chaque membre du personnel peut il laisser ses v tements de ville dans un endroit pr vu cet effet armoires par ex Une pi ce est elle r serv e au personnel pour le d jeuner etc Le niveau sonore est il acceptable Le ramassage des poubelles contenant les d chets ordinaires est il satisfaisant Chauffage et ventilation 1 La temp rature du lieu de travail est elle confortable 2 Y a t il des stores aux fen tres situ es en plein soleil 3 La ventilation est elle satisfaisante air renouvel par ex au moins six fois par heure e
52. 4010911 p nb q apAyapjewo4 SANDIWIHO SANDISAHd 93 0919 5341 S3LTIJILYdINO9NI 3 0 Y SNOILNYIJYd 310430 0 INOSIY JLNYS YT HNOd SINOSIY S3131Hd0Hd ANDINIHO 1110094 190 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE aun n d 0 0 gueynd 1 81 00 uf sauahoyes9 Sap A I e uohelustili dx 1 Spenna S19H D suep ajqnjos nbsu asaissnod ayue q 09SHEN ej ap no aJOjOIU wnipos ap 4u919S1g 51191091010 no uols ul p 19 2 unIpos SUPPAXO S U U 19A S P 19104 seo ua nbixoL alpnod ap ayua aSOlpAH 0018511015095 aun nea g ej 191019 juaanad sguejnd fql siui 24691 Jnod inippe 101190 401291010 S198 U09 Sap no uolllnq p un 1upu lu09 aun ja nbnseld 91101211dS91 310A e Jed 1100 9oy 4 QEL PA ua no 2 0 2110 2 uonsodx olsn ap 1 100 9 ua sjueh sap 181104 aun sainaledns ajuesjguad sasnanbe sjuepAxo Sa HU A 4910 1101pU9 591101810591 Jnapo g aed 900 1 05 ua jualasnasnobiA un suep no auuoqios S l0A S 19 XNBA S aunel 0 02 OH H2 2H0 QUAI JUSANOS 415691 n d UN SNOS anod uey 1494 uonnlos apAygpleseyn 5 191 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Sa9n Ip 540111 05
53. 5192 99110161059 5910 Sa 19 Sa 1 00 jue 149 164 Dol uolinga p julod 0 121 UOISN ap 1ulod aayindy SanO1INIH SANOSIY 5341 SALMIlLVd NOON 4uqN4ud Y SNOILNYIJYd 310N39N1 4 INOSIY JLNYS YT YN0d SANOSIY ja ajuenbid In9p0 910 O9UI OH9 H9 ze6 no pinbi p u ple v SAN0ISAHd S1131Hd0Hd ANDIWIHO LINGOd ajpuaid g suoljnedasd ja ssaBuep sanbiwiys sjinpolg 1 eV ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE 9911092000 anbuyu 19 anbunyns aploe p 9 1 120 safuejawi s u0129 014 aun dane lqhedulo9ul 31107211dSa1 nbileis 9580 101991010 9119119819 aun p 32uasg1d aun 99110 189 S19H9 Sa Ud BLUJOJOJO YO SinadeA S J9jeyul 9101091 2 99 1100 l 29AB sed N uolubl p EUI09 l 19 2S09JEU uolllnq p singuaju0d 19 nbinl ploe i 901 05 no 05 B ZI Z un syu aw ss p no g 11100 2466 no Sjualdi991 anbiwoiyo 29UP SIP il 9110150 0 s p JanboAoJd 1n d uolsn 1100 spues6 apioe x Jed U A UdIG 1101pPU9 5910 0 91 uoneeuul7 el 8 9119 SJUPPAXO S 29AB un suep siu ldio i 118 99 p 1 10d 19 zau Xna s anod g FH909 H9 PB apay zuawwajo pegy s l Jasodayjuy 5911 uep 149 4 7 02
54. ClO contiennent g n ralement environ 70 de chlore actif Les solutions 1 4 et 7 0 g l pr par es l aide de ces granul s ou comprim s contiendront donc respectivement 1 0 et 5 g l de chlore actif L eau de Javel n est pas recommand e comme antiseptique mais on peut lutiliser comme d sinfectant usage g n ral et pour faire tremper le mat riel contamin non m tallique En cas d urgence elle peut galement tre utilis e pour d sinfecter l eau de boisson la concentration finale de 1 2 mg l de chlore actif Le chlore est extr mement toxique Il ne faut donc entreposer et utiliser les solu tions d hypochlorite que dans des locaux parfaitement ventil s On ne doit pas non plus les m langer des acides pour viter un d gagement rapide de chlore Nombre de d riv s du chlore peuvent se r v ler dangereux pour l organisme humain et pour l environnement aussi faut il viter Pusage inconsid r de d sinfectants chlor s comme l eau de Javel par exemple Dichloroisocyanurate de sodium Le dichloroisocyanurate de sodium se pr sente sous la forme d une poudre contenant 60 de chlore actif Les solutions 1 7 et 8 5 g l pr par es laide de cette poudre ont une teneur respective de 1 et 5 g l en chlore actif Ce produit existe galement sous forme de comprim s contenant l quivalent de 1 5g de chlore actif On obtient 95 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE approximativeme
55. Pampoule le retirer avec des pinces st riles 6 Mettre le lyophilisat en suspension en versant lentement le liquide destin a cet effet de mani re viter la formation de mousse Stockage des ampoules contenant du mat riel infectieux Les ampoules contenant du mat riel infectieux ne doivent jamais tre immerg es dans de Pazote liquide les ampoules mal scell es ou fissur es risquant de se briser ou d ex ploser a la sortie Sil est n cessaire d atteindre des temp ratures tr s basses les ampoules ne seront conserv es que dans la phase gazeuse au dessus de Pazote liquide On peut aussi stocker le mat riel infectieux dans des cryostats ou sur carboglace Le personnel charg de retirer les ampoules cryoconserv es doit se prot ger les yeux et les mains La surface ext rieure des ampoules cryoconserv es sera d sinfect e lorsqu elles seront retir es apr s stockage Pr cautions d usage pour manipuler du sang et autres liquides biologiques des tissus et des excreta Les pr cautions d usage indiqu es ci dessous qui incluent les pr cautions universelles 19 sont destin es r duire le risque de transmission de micro organismes dont l origine est connue ou inconnue 2 R colte tiquetage et transport d chantillons 1 Il faut observer ces pr cautions d usage dans tous les cas et porter des gants quelle que soit la manipulation 83 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE 2 Le
56. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 2002 99 3812 3817 Bartz JC Kincaid AE Bessen RA Rapid prion neuroinvasion following tongue infection Journal of Virology 2003 77 583 591 Thomzig A et al Widespread PrP accumulation in muscles of hamsters orally infected with scrapie EMBO Reports 2003 4 530 533 Glatzel M et al Extraneural pathologic prion protein in sporadic Creutzfeld Jakob disease New England Journal of Medicine 2003 349 1812 1820 Brown P Wolff A Gajdusek DC A simple and effective method for inactivating virus infec tivity in formalin fixed tissue samples from patients with Creutzfield Jakob disease Neurology 1990 40 887 890 Taylor DM etal The effect of formic acid on BSE and scrapie infectivity in fixed and unfixed brain tissue Veterinary Microbiology 1997 58 167 174 Safar J et al Prions In Richmond JY McKinney RW eds Biosafety in microbiological and biomedical laboratories 4th ed Washington DC United States Department of Health and Human Services 1999 134 143 Bellinger Kawahara C et al Purified scrapie prions resist inactivation by UV irradiation Journal of Virology 1987 61 159 166 Health Services Advisory Committee Safe working and the prevention of infection in clini cal laboratories London HSE Books 1991 Russell AD Hugo WB Ayliffe GAJ Disinfection preservation and sterilization 3rd ed Oxford Blackwell Scientific 1999
57. Repr sentation sch matique d une enceinte de s curit biologique de classe II type B1 A ouverture frontale B panneau d observation a guillotine C filtre HEPA d vacua tion D filtre HEPA d admission E gaine d vacuation en d pression F ventilateur G filtre HEPA d admission d air II est n cessaire de raccorder le circuit d vacuation de l enceinte au circuit g n ral d vacuation du b timent Enceintes de s curit biologique de classe II type A2 avec ventilation sur l ext rieur et de classe Il types B1 et B2 Les ESB de classe II type A2 avec ventilation sur Pexterieur et les ESB de classe II types B1 figure 8 et B2 sont des variantes de ESB II type Al Le tableau 9 en donne les caract ristiques avec celles des ESB de classe I et de classe III Chacune de ces variantes correspond un usage particulier voir tableau 8 Elles diff rent les unes des autres plusieurs gards vitesse de Pair travers louverture frontale quantit recycl e sur le plan de travail et vacu e de l enceinte circuit d vacuation qui d termine si lair issu de l enceinte est rejet dans la pi ce ou Texterieur par l interm diaire d un circuit d vacuation sp cial ou par le circuit d vacuation g n ral r glage de la pression enceinte dont les gaines et la chambre de distribution biologiquement contamin es sont en d pression ou d faut sont entour es de volumes en d pression Les r f r
58. Sant de pr f rence d autres de nature analogue Sauf erreur ou omission une majuscule initiale indique qu il s agit d un nom d pos L Organisation mondiale de la Sant a pris toutes les dispositions voulues pour v rifier les informations contenues dans la pr sente publication Toutefois le mat riel publi est diffus sans aucune garantie expresse ou implicite La responsabilit de l interpr tation et de Putilisa tion dudit mat riel incombe au lecteur En aucun cas Organisation mondiale de la Sant ne saurait tre tenue responsable des pr judices subis du fait de son utilisation Conception graphique par Minimum graphics Imprim a Malte Table des matieres Avant propos viii Remerciements X 1 Principes g n raux 1 Introduction 1 PARTIE Les principes directeurs de la s curit biologique 5 2 Evaluation du risque microbiologique 7 Echantillons pour lesquels les informations sont limit es 8 Evaluation du risque et micro organismes g n tiquement modifi s 8 3 Les laboratoires de base S curit biologique niveaux 1 et 2 9 Code de bonnes pratiques 9 Conception et am nagement du laboratoire 12 Appareils et quipements de laboratoire 16 Surveillance m dico sanitaire 17 Formation 18 Traitement des d chets 19 S curit chimique lectrique incendie radioprotection et s curisation de l appareillage 21 4 Le laboratoire de confinement S curit biologique niveau 3 22 Code de bonne
59. Si l on utilise une pelle pour ramasser les morceaux de verre il faudra la passer Pautoclave ou la tremper dans un bain d sinfectant efficace Les linges le papier et les serpilli res uti lis es pour le nettoyage devront tre jet s dans une poubelle pour d chets contamin s Toutes ces op rations doivent tre effectu es avec des gants 89 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Si des documents formulaires ou autres imprim s ou notes sont contamin s ils seront recopi s et les originaux jet s dans une poubelle pour d chets contamin s Bris de tubes contenant du mat riel potentiellement infectieux dans les centrifugeuses d pourvues de pots tanches Si les tubes sont cass s ou pr sum s cass s pendant que la centrifugeuse tourne arr ter le moteur et attendre 30 minutes avant d ouvrir pour laisser reposer les suspensions Si Paccident est d couvert apr s l ouverture de la centrifugeuse refermer imm diate ment le capot et attendre encore une trentaine de minutes Dans les deux cas il faut prevenir le d l gu a la s curit biologique Des gants r sistants par ex en caoutchouc pais couverts si n cessaires avec des gants usage unique doivent tre port s pendant la totalit des op rations suivantes Pour retirer les d bris de verre on utilisera des pinces ventuellement garnies de coton Les tubes cass s les morceaux de verre les pots ou nacelles centrifuger les touril
60. additifs suivants 1 Confinement primaire Le laboratoire doit tre dot d un syst me efficace de con finement primaire respectant une ou plusieurs des conditions suivantes Laboratoire avec enceintes de s curit biologique de classe III Le passage par deux portes au minimum est n cessaire avant de p n trer dans les salles o se trou vent l enceinte ou les enceintes de s curit biologique de classe III salle des enceintes de s curit Dans ce type d am nagement c est Penceinte de s cu rit biologique de classe III qui assure le confinement primaire Le personnel doit disposer d une douche avec un vestiaire int rieur et ext rieur Les fourni tures et le mat riel qui ne sont pas apport s dans la salle des enceintes de s cu rit biologique en passant par le vestiaire ne doivent tre introduits qu apr s passage dans un autoclave double porte ou une chambre de fumigation Une fois la porte ext rieure bien ferm e le personnel qui se trouve dans le labora toire peut ouvrir la porte int rieure pour r cup rer fournitures et mat riel Un syst me de verrouillage asservi doit tre mis en place au niveau des portes de Pautoclave ou de la chambre de fumigation pour viter que la porte ext rieure ne puisse tre ouverte tant que Pautoclave n a pas effectu son cycle de st ri lisation ou que la chambre de fumigation n a pas t d contamin e voir chapitre 10 Laboratoire pour travaux en combin
61. chant les chantillons d expectorations on s efforcera d viter la formation d a rosols Les chantillons et les cultures destin s tre autoclav s ou limin s seront plac s dans des conteneurs tanches par exemple des sacs poubelle de laboratoire Il faut en fermer lextr mit avec du ruban adh sif autoclavable avant de les jeter dans les poubelles 78 5 12 TECHNIQUES DE LABORATOIRE Les zones de travail doivent tre d contamin es avec un d sinfectant appropri la fin de chaque p riode de travail Pour de plus amples informations le lecteur est pri de consulter la r f rence 12 Utilisation des enceintes de s curit biologique 1 L utilisation et les contraintes des enceintes de s curit biologique seront expliqu es tous les utilisateurs potentiels voir chapitre 10 en se r f rant aux normes nationales et la documentation appropri e Des protocoles crits des manuels d hygitne et s curit ou des manuels d utilisation seront remis au personnel Il doit tre clairement expliqu en particulier que Penceinte ne prot ge pas lop rateur contre les claboussures la casse ou les erreurs de manipulation 2 Lenceinte ne doit pas tre utilis e si elle ne fonctionne pas correctement 10 11 12 Le panneau d observation vitr ne doit pas tre ouvert lorsque Penceinte est en fonctionnement Pour travailler on conservera dans Penc
62. courant d air vienne balayer la surface des mains et des bras Il faut galement veiller ne faire qu un minimum de mouve ments travers l ouverture frontale en pla ant tous les instruments et objets n ces saires sur le plan de travail avant de commencer la manipulation Disposition du mat riel La grille de reprise frontale des ESB de classe TI ne doit pas tre obstru e par du papier des appareils ou d autres objets Il faut d sinfecter la surface du mat riel que Pon va disposer l int rieur de l enceinte avec de Palcool 70 On peut travailler sur un linge absorbant impr gn de d sinfectant pour retenir les projections et les clabous sures Tout le mat riel doit tre dispos aussi loin que possible dans le volume de 64 10 ENCEINTES DE SECURITE BIOLOGIQUE travail en se rapprochant au maximum du bord distal du plan de travail mais en vitant d obstruer la grille arri re Les appareils qui produisent des a rosols par ex m langeurs centrifugeuses etc doivent tre plac s vers le fond de Penceinte Le mat riel encombrant comme les sacs de s curit biologique les plateaux pour pipettes utilis es et les fioles vide doivent tre plac s sur un des c t s du volume de travail Sur le plan de travail il faut travailler en allant des zones propres vers les zones contamin es Le sac de s curit autoclavable destin recueillir le mat riel infectieux et les plateaux pipettes
63. curit Dans la mesure du possible on nommera un responsable de la s curit biologique qui sera charg de veiller ce que le r glement et les programmes de s curit soient sys t matiquement respect s partout dans le laboratoire C est le d l gu la s curit qui remplit ces obligations au nom du directeur de Petablissement ou du laboratoire Dans les petites unit s le d l gu la s curit peut tre un microbiologiste ou un membre du personnel technique qui assure ces fonctions temps partiel dans des conditions d termin es Quelle que soit la part d activit consacr e la s curit la personne d sign e doit poss der les comp tences professionnelles requises pour proposer examiner ou approuver les mesures prendre dans le prolongement des op rations de confinement ou de s curit biologiques Le d l gu la s curit doit faire appli quer la r glementation et les directives nationales et internationales en mati re de s curit biologique et aider le laboratoire tablir des m thodes de travail norma lis es Il doit avoir une formation technique en microbiologie et en biochimie avec des connaissances de base en sciences physiques et en biologie Il est galement tout fait souhaitable que le d l gu la s curit connaisse bien les pratiques et les r gles de s curit au laboratoire et dans le domaine clinique notamment en ce qui concerne le confinement du mat riel biologique et
64. d quipements de s curit pour le secouriste ainsi que d un dispositif d irrigation oculaire Trousse de premiers soins Cette trousse doit tre faite d un mat riau qui prot ge le contenu de la poussi re et de l humidit Elle doit tre plac e bien en vue et tre facilement reconnaissable Par convention internationale elle est marqu e d une croix blanche sur fond vert La trousse de premiers soins doit contenir Une fiche d information donnant des conseils g n raux Des pansements adh sifs st riles de diverses tailles en emballage individuel Des tampons oculaires avec leurs bandages de fixation Des bandages triangulaires Des compresses st riles pour couvrir les plaies Des pingles de nourrice Un assortiment de pansements st riles mais non impr gn s Un manuel de premiers soins faisant autorit publi par ex par la Croix Rouge D XI ON Ur HS Qo D Equipement de protection pour le secouriste 1 Une protection buccale pour le bouche bouche 2 Des gants et autres dispositifs de protection m canique pour viter une con tamination par le sang et 3 Un n cessaire pour nettoyer le sang r pandu voir chapitre 14 Il faut galement un dispositif pour Tirrigation oculaire et le personnel doit avoir appris a s en servir Garner JS Hospital Infection Control Practices Advisory Committee Guideline for isolation precautions in hospitals American Journal of Infection Co
65. de Fair l O Protection individuelle Port de blouses ferm es sur le devant dans le laboratoire l O Port des v tements de protection limit aux locaux du laboratoire ass due a Ei l O Lavabo actionn par le pied le coude ou d clenchement automatique l O Protection des mains Port de gants doubles pour le travail avec du mat riel infectieux et des d quipements ou des plans de travail pouvant tre contamin s l O Protection respiratoire Port d une protection respiratoire par l ensemble du personnel du laboratoire lorsque des a rosols ne sont pas confin s de fa on s re dans une ESB O Pratiques Dispositif de protection des muqueuses disposition pour la manipulation de mat riel infectieux hors d une l O Personnel averti des risques particuliers li s Pagent ou aux agents infectieux l O Personnel tenu de lire et d observer toutes les instructions relatives aux pratiques et techniques y compris celles du manuel de s curit biologique ou du manuel de laboratoire l O Mises jour annuelles adress es au personnel ou formation compl mentaire si des changements sont apport s certaines techniques l O Autoclavage de tous les d chets
66. de gaz usage unique e Ne doivent pas tre incin r es a La vanne haute pression principale doit tre ferm e lorsque la bouteille n est pas utilis e et que la salle est inoccup e gt Les pi ces dans lesquelles on utilise ou entrepose des bouteilles de gaz inflammables doivent tre iden tifi es par des panneaux plac s sur les portes Pour plus de plus amples informations le lecteur est pri de consulter les r f rences 1 et 49 51 ainsi que Pannexe 5 124 18 Autres types de risques au laboratoire Le personnel de laboratoire peut tre expos a des dangers li s a diverses formes d nergie et notamment au feu l lectricit aux rayonnements et au bruit On trou vera dans ce chapitre les donn es essentielles concernant chacun d eux Risque d incendie Il est essentiel qu il y ait une collaboration troite entre les d l gu s la s curit et les responsables locaux de la s curit incendie Outre les risques de nature chimique tout incendie pr sente un risque de diss mination de mat riel biologique infectieux qu il faut prendre en compte ventuellement pour d cider sil est pr f rable d eteindre l incendie ou de le circonscrire Il est souhaitable de faire appel aux responsables locaux de la s curit incendie pour la formation du personnel de laboratoire a la pr vention aux mesures imm diates a prendre en cas de sinistre et l utilisation du mat riel de lutt
67. diff rente de la pression ambiante ino culation intranasale d animaux et r colte de tissus infect s sur des animaux ou des ceufs 16 3 LES LABORATOIRES DE BASE S CURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2 3 Anses de transfert jetables en mati re plastique On peut aussi utiliser des in cin rateurs lectriques pour anses de transfert plac s dans une enceinte de s curit biologique en vue de r duire la formation d a rosols Tubes et flacons bouchon viss Autoclaves ou autres dispositifs appropri s pour d contaminer le mat riel infectieux Pipettes Pasteur jetables en plastique si possible plut t qu en verre Il faut v rifier par des essais appropri s que les divers quipements ou appareils tels qu autoclaves ou enceintes de s curit biologique sont conformes aux sp cifi cations et les recontr ler p riodiquement conform ment aux instructions du fabricant voir chapitre 7 ND Un He Surveillance m dico sanitaire Hincombe Pemployeur par Pentremise du directeur du laboratoire de veiller ce que la sant du personnel soit surveill e de facon satisfaisante Cette surveillance a pour objectif de d pister les maladies d origine professionnelle Pour y parvenir il faut 1 Assurer immunisation active vaccination et passive du personnel lorsqu il y a lieu voir annexe 2 2 Faciliter le d pistage pr coce des infections contract es au laboratoire 3 Ne pas confier de ma
68. distance des autres zones de travail Des panneaux portant le symbole international de risque d irradiation doivent tre appos s l entr e de la zone d irradiation figure 12 2 Paillasse o s effectue la manipulation Utiliser des plateaux contenant des mat riaux absorbants jetables pour recueil lir les liquides r pandus Limiter la quantit de radionucl ide utilis e Disposer un cran de protection autour des sources de rayonnement de la pail lasse et des secteurs o sont plac s les d chets radioactifs Marquer le symbole de radioactivit sur les conteneurs de produits radio actifs en indiquant galement la nature du radionucl ide son activit et la date de la mesure 129 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Utiliser des radiodosimetres pour le contr le des zones de travail des v te ments protecteurs et des mains une fois le travail acheve Utiliser des conteneurs de transport correctement blind s 3 D chets radioactifs Eliminer fr quemment les d chets radioactifs de la zone de travail 4 Dossiers et conduite tenir en situation d urgence Tenir un registre exact de l utilisation et de l limination des produits radio actifs Compulser les dossiers dosim triques la recherche d un d passement ventuel de la dose limite pour certains produits Mettre au point des plans d action en cas de situation d urgence et faire
69. e pour pouvoir tre capt es par le courant d air si la centrifugeuse est plac e dans une enceinte de s curit biologique traditionnelle de classe 1 ou II ouverture frontale En pla ant la centrifugeuse dans une enceinte de classe III on vite la trop grande dispersion des a rosols mis par l appareil Toutefois une bonne technique de centrifugation et l utilisation de tubes soigneusement ferm s offrent une protection satisfaisante contre les a rosols infectieux et les particules en suspension 81 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Utilisation des homog n iseurs des agitateurs secoueurs des m langeurs et des g n rateurs d ultrasons 1 Les homog n iseurs domestiques utilises a la cuisine ne seront pas utilis s au laboratoire car ils peuvent fuir ou donner lieu la formation d a rosols Les homog neiseurs m langeurs et broyeurs de laboratoire pr sentent moins de danger Les couvercles bols fioles ou flacons doivent tre en bon tat sans defaut ni d for mation Le couvercle doit tre parfaitement adapte et le joint en bon tat Lorsque les homog n iseurs agitateurs ou g n rateurs d ultrasons sont en marche la pression monte l int rieur du bol Des a rosols contenant des germes infectieux risquent alors de s chapper par l interstice entre le couvercle et le r ci pient Les bols en plastique et particuli rement en polyt trafluor thyl ne PTFE son
70. es seront compl tement immerg es dans un d sinfectant appropri plac dans un r cipient incassable On les laissera tremper suffisamment longtemps avant de les liminer Un r cipient pour les pipettes usag es sera plac l int rieur de Penceinte de s cu rit biologique et non l ext rieur On ne doit pas utiliser de seringue munie d une aiguille hypodermique pour pipetter 10 Il existe des dispositifs qui permettent d ouvrir les flacons capsul s au moyen d une pipette ce qui vite l utilisation des aiguilles hypodermiques et des seringues Pour viter la dispersion du mat riel infectieux qui tomberait accidentellement de la pipette on placera sur le plan de travail un mat riau absorbant qui sera ensuite limin selon la proc dure applicable aux d chets infectieux Comment viter la diss mination de mat riel infectieux 1 Pour eviter que les anses de transfert ne repandent pr matur ment leur contenu il faut que Panneau ait un diam tre de 2 3 mm et qu il soit enti rement ferm Le manche ne doit pas d passer 6 cm de long pour r duire le plus possible les vibrations On vitera le risque de projections de mat riel infectieux par la flamme nue d un q Pro P bec Bunsen en utilisant un micro incin rateur pour steriliser les anses de transfert Toutefois il est pr f rable d utiliser des anses usage unique qui n ont pas besoin d tre rest rilis es En s
71. et enregistr Sil existe pas de service technique interne charg de la maintenance a t on pris contact avec des ing nieurs et des constructeurs du lieu pour les familiariser avec Pappareillage et les activit s du laboratoire Le laboratoire dispose t il d un service de nettoyage L acc s de l quipe de nettoyage aux divers locaux du laboratoire est il r glement et enregistr Existe t il un service informatique et ce service est il s curis S ret biologique en laboratoire 1 A t on proc d une analyse qualitative des risques pouvant peser sur le laboratoire afin de d terminer contre quels risques le laboratoire doit tre prot g A t on d fini les risques acceptables et les param tres pour la planification de la r ponse aux incidents Lorsqu il wy a personne le b timent est il bien totalement ferm clef Les portes et les fen tres sont elles construites pour r sister une effraction Les pi ces contenant des mat riels dangereux et des appareils co teux sont elles ferm es clef lorsqu il n y a personne L acc s ces pi ces appareils et mat riels est il r glement et enregistr Pr vention des incendies et protection contre le feu I 2 3 ND U M Y a t il un syst me d alarme incendie Les portes coupe feu sont elles en bon tat Le laboratoire dispose t il de d tecteurs d incendie et ces d tecteurs sont ils e
72. etc doivent tre clairement tiquet s en indiquant le nom scientifique du contenu la date de stockage et le nom de la personne qui les a stock s Le mat riel ancien ou sans tiquette sera autoclav et limin 3 II faut tenir un inventaire du contenu des cong lateurs 82 12 TECHNIQUES DE LABORATOIRE 4 Les solutions inflammables ne doivent pas tre conserv es dans un r frig rateur qui n est pas antid flagrant Une tiquette de mise en garde sera appos e cet effet sur la porte des r frig rateurs Ouverture des ampoules contenant du mat riel infectieux lyophilis On devra prendre des pr cautions lorsqu on ouvre des ampoules de mat riel lyophilis car Pentr e brutale de Fair alors que l int rieur de ampoule peut se trouver une pression inf rieure risque de disperser une partie de son contenu dans l atmosph re Les ampoules doivent toujours tre ouvertes dans une enceinte de s curit biologique Il est recommande de proc der comme suit 1 D contaminer tout d abord Pexterieur de ampoule 2 Faire un trait de lime sur le tube a peu pr s au milieu du tampon de coton ou de cellulose le cas ch ant 3 Envelopper ampoule avec de Pouate imbib e alcool pour se prot ger les mains avant de la briser au niveau du trait de lime 4 Retirer d licatement la partie sup rieure et traiter comme du mat riel contamin 5 Si le tampon de coton est encore en place au dessus du contenu de
73. exclusive des auteurs et ne repr sentent pas n cessairement le point de vue officiel de POMS Organisation mondiale de la Sant 2005 Tous droits r serv s Il est possible de se procurer les publications de l Organisation mondiale de la Sant aupr s de l quipe Marketing et diffusion Organisation mondiale de la Sant 20 avenue Appia 1211 Gen ve 27 Suisse t l phone 41 22 791 2476 t l copie 41 22 791 4857 adresse lectronique bookorders who int Les demandes relatives la permission de repro duire ou de traduire des publications de l OMS que ce soit pour la vente ou une diffusion non commerciale doivent tre envoy es l unit Marketing et diffusion a Padresse ci dessus t l copie 41 22 791 4806 adresse lectronique permissions who int Les appellations employ es dans la pr sente publication et la pr sentation des donn es qui y figurent n impliquent de la part de l Organisation mondiale de la Sant aucune prise de posi tion quant au statut juridique des pays territoires villes ou zones ou de leurs autorit s ni quant au trac de leurs fronti res ou limites Les lignes en pointill sur les cartes repr sentent des fron ti res approximatives dont le trac peut ne pas avoir fait l objet d un accord d finitif La mention de firmes et de produits commerciaux ne signifie pas que ces firmes et ces pro duits commerciaux sont agr s ou recommand s par l Organisation mondiale de la
74. incendie doit tre envisag e Il est indispensable de renforcer les portes d quiper les fen tres de grillages et de limiter le nombre de cl s Le cas ch ant on devra tudier et mettre en uvre toute autre mesure susceptible d ameliorer la s curit voir chapitre 9 15 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Appareils et quipements de laboratoire Associ e Pobservation de bons protocoles et de bonnes pratiques de laboratoire l utilisation d appareils s curis s et d quipements de s curit permettra de r duire les risques en cas de danger de nature biologique La pr sente section traite des principes de base applicables aux appareils utiliser dans les laboratoires de tous niveaux de s curit biologique Les sp cifications applicables aux appareils destin s a des laboratoires dont le niveau de s curit biologique est plus lev sont abord es dans les chapitres consacr s a ces laboratoires Apr s consultation du comit de s curit et du d l gu la s curit biologique sil a t d sign le directeur du laboratoire s assurera que Pappareillage et Pequipement sont ad quats et correctement utilis s Les appareils seront choisis en fonction d un certain nombre de principes g n raux tels que 1 Etre con us pour emp cher ou limiter les contacts entre Poperateur et le mat riel infectieux 2 Etre faits de mat riaux imperm ables aux liquides r sistants a la corrosion
75. installations et moyens existants ainsi que les pratiques et les modes op ratoires respecter pour que le travail de laboratoire s effectue dans de bonnes conditions de s curit PARTIE Les principes directeurs de la s curit biologique 2 Evaluation du risque microbiologique Dans sa pratique la s curit biologique repose essentiellement sur une valuation du risque On peut s aider de nombreux outils pour proc der cette valuation mais le facteur le plus important reste le jugement professionnel L valuation du risque doit tre confi e ceux qui connaissent le mieux les caract ristiques des micro organismes sur lesquels on se propose de travailler Pappareillage et les modes op ratoires mettre en uvre les mod les animaux qui pourraient tre utilis s ainsi que les syst mes de confinement et les installations disponibles Il incombe au directeur du laboratoire ou au chercheur principal de veiller ce qu une valuation appropri e du risque soit effectu e en temps voulu et de collaborer troitement avec le comit de s curit de l institution et le personnel charg de la s curit biologique pour que les quipements et les installations n cessit s par les travaux envisag s soient mis la disposition du laboratoire Une fois le risque valu on proc dera p riodiquement un r examen syst matique de la situation et on r visera Pevaluation si n cessaire compte tenu d ventuelles do
76. l ann e pr c dente LI Date Nettoyage de la surface de PESB avec un d sinfectant O O appropri au d but et a la fin de chaque Emplacement manipulation L Grille frontale et filtre d vacuation non obstru s 0 g Marque Pr sence de flammes nues dans l enceinte O Oo Conduites d aspiration circuit de vide munies de Type filtres et de pi ges a d sinfectants en tat de fonctionner O C N de s rie Efficacit de ESB compromise par Fair ambiant ou l emplacement s Rens a Oo Utilisation de PESB en pr sence d un risque de formation d a6rOSOIS LL Laboratoire Acc s limit au personnel autoris Et C Entr e limit e au personnel connaissant la totalit D SATISQUESS seasann 0 g Panneau de danger biologique appos si n cessaire sur la porte du laboratoire l e Informations du panneau exactes et jour l e Panneau lisible et en bon tat l Toutes les portes ferm es 22 l D contamination D contaminant sp cifique du ou des micro organismes en CAUSE LL Le chef de laboratoire est pr venu si du mat riel infectieux est r pandu ou impliqu dans un accident O 1 Un d contaminant appropri est utilis pour nettoye
77. l effet d un choc Lacide picrique et les picrates d tonnent sous Peffet de la chaleur et des chocs Renversement accidentel de produits chimiques La plupart des fabricants de produits chimiques pour laboratoires fournissent des affiches indiquant la conduite tenir en cas de renversement de divers produits Ces affiches ainsi que le mat riel et les produits utiliser en pareil cas se trouvent gale ment dans le commerce Elles devront tre appos es bien en vue dans le laboratoire Le mat riel suivant doit galement tre fourni ul 17 LES RISQUES CHIMIQUES 1 Necessaires pour traiter les produits repandus N NY DAU RAU V tements protecteurs tels que gants en caoutchouc pais surchaussures ou bottes en caoutchouc masques respiratoires Pelles et copes Pinces pour saisir les morceaux de verre Serpilli res linges et serviettes en papier Seaux Carbonate de sodium Na CO ou monohydrog nocarbonate de sodium bicar bonate NaHCO pour neutraliser les acides et les produits corrosifs 8 Sable pour recouvrir les bases r pandues 9 En Detergent non inflammable cas de renversement important d un produit chimique proceder de la mani re suivante Bw D ul Pr venir le d l gu a la s curit comp tent Faire vacuer le personnel qui n est pas indispensable Donner des soins aux personnes qui ont pu tre contamin es Si le produit r pandu est in
78. l0q MIOU e anbijeyaw su6 no sjuasedsuel fnol Jngjnoo ap xnejsi9 10u n lq e 99u04 nol uniq aydiowe p jos SAWJOJ SaSJAAIP SNOS 1 1 959 0 as 0 aS winlug as SanOlINIH SANDSIY 5341 SALITIILVdINIOONI 3 0 3 4 Y SNOILNYIJJYd FIGNAONI G 3 0514 JLNVS Y1 YN0d SINOSIY SANDISAHd 5313144094 ANDIWIHO LINGOYd 204 QUIZ 9119 wnisgubew a WNiUILUN e Suea olu 5 150 102 ja s nbixo ZE ap no sinadeA UOHPUL 0 9 Sap no s pneu saaejins Sap 1981U02 Jed asodwosap as ldul09 a1107211dS91 anbsew un no jeie UP199 un nb Isule Sin old S U L 19A Sep ayu 210 91 1080 ua 5186 sap asloyesidsas u01 29 014 aun 19HOd no sanader sap uolyendeAg p 890 isodsip un 29A UOHE HUSA SNOS 1981U02 100 19144 s nbixo no Suezu ze6 ap no sanader juswabebap lpu ul p 582 3 91019100100 UON Rule 1100 aua601g9ue so2 Eu aun 1adde p aun 21991 1369 un s sneu s p s icud sap Jed Juesinpe s xnenu s nbi oyoin u s lqnol s p 19 s lpu i 19 s nbned u SUOISa s p 1194 xnaA s JNOd lulu uonsodx p 589 ud
79. les principes techniques relatifs la con ception au fonctionnement et la maintenance des installations Il doit galement 193 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE tre capable de communiquer efficacement avec le personnel administratif et tech nique ainsi qu avec le personnel de maintenance et de nettoyage L 12 13 14 Le Les taches du d l gu a la s curit consisteront notamment a Proceder des consultations sur la conformit aux r gles de s curit et de s ret biologiques ainsi qu aux imp ratifs techniques 514 q P q Organiser des audits de bios curit internes p riodiques sur les techniques les modes op ratoires et les protocoles les agents biologiques le mat riel et Pequipement Sentretenir avec les personnes concern es des infractions aux consignes et proto coles de s curit biologique V rifier aupr s de tous les membres du personnel que ceux ci ont recu une for mation appropri e en mati re de s curit biologique Assurer une formation continue en mati re de s curit biologique Enqueter apr s tout incident d a la dissemination ventuelle de mat riel poten tiellement infectieux ou toxique rendre compte des r sultats au directeur du la boratoire et au comit de s curit biologique en leur faisant des recommandations appropri es Coop rer avec le service m dical touchant la possibilit d infections contract es
80. lons et le rotor seront plac s dans un bain d sinfectant non corrosif dont l efficacit contre les germes concern s est connue voir chapitre 14 Les tubes intacts et bouch s peuvent tre plac s dans un autre r cipient contenant un d sinfectant et r cup r s ult rieurement La cuve de la centrifugeuse sera nettoy e avec le m me d sinfectant convenable ment dilu apr s quoi on la nettoiera une seconde fois on la rincera l eau et on la s chera Tout le mat riel utilis pour le nettoyage sera consid r comme d chets contamin s Bris de tubes l int rieur de pots ou de nacelles centrifuger tanches de s curit Tous les pots ou nacelles tanches doivent charg s et d charg s dans une enceinte de s curit biologique En cas de bris pr sum dans un pot herm tique il faudra desserrer de bouchon de s curit et passer le pot ou la nacelle autoclave On peut aussi d sinfecter le pot ou la nacelle de s curit au moyen d un d sinfectant chimique Incendies et catastrophes naturelles Les services de secours pompiers notamment doivent participer Pelaboration des plans de pr paration aux situations d urgence Ils doivent conna tre Pavance les pi ces o se trouve du mat riel potentiellement infectieux Il y avantage ce que le personnel de ces services visite le laboratoire pour prendre connaissance de son agencement et de son contenu Apr s une catastrophe naturelle les services
81. ne doit en aucun cas tre recycl vers d autres locaux La plus grande prudence est de rigueur si Pon a opt pour un recyclage de Pair dans un laboratoire o le port de combinaisons pressuris es est impos II convient de prendre en consi deration la nature des recherches effectu es Pappareillage les quipements les produits chimiques et autres substances ainsi que les esp ces animales utilis s pour ces recherches 309 8 Le 5 LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT HAUTE S CURIT S CURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 4 Tous les filtres HEPA doivent tre contr les et certifi s une fois par an Leurs gaines sont concues pour permettre de d contaminer le filtre in situ avant de Penlever On peut aussi enlever le filtre en le pla ant dans un conteneur scell tanche aux gaz en vue de sa d contamination ult rieure ou de sa destruction par incin ration Decontamination des effluents Tous les effluents qui sortent du laboratoire o sont port es des combinaisons pressuris es de la chambre de d contamination de la douche de d contamination ou d une enceinte de s curit biologique classe doivent tre d contamin s avant d tre d finitivement limin s La contami nation par la chaleur est le proc d optimal Il peut tre n cessaire de les amener pH neutre avant de les liminer L eau provenant de la douche du personnel et des toilettes peut tre vacu e directement dans l gout s paratif san
82. ne doivent pas tre plac s hors de Penceinte Les fr quents mou vements de va et vient entre l int rieur et Pexterieur de Penceinte qui sont n cessaires pour utiliser ces r cipients peuvent perturber la veine de garde et par voie de con s quence nuire la protection du personnel et du produit manipul Utilisation et maintenance La plupart des ESB sont con ues pour une utilisation 24h sur 24 et les chercheurs estiment que cette utilisation ininterrompue facilite la r duction du taux de poussi res et de mati res particulaires pr sentes dans le laboratoire Les enceintes de classe et 2 dont lair est vacu dans la pi ce ou dans un circuit d vacuation sp cial au moyen d un manchon de raccordement peuvent tre d branch es lorsqu elles ne sont pas utilis es Dans d autres types d enceinte comme les ESB de classe IIB1 et IIB2 qui sont directement connect es aux gaines d vacuation par un raccordement tanche lair doit circuler en permanence pour que Fair de la pi ce reste en tat d quilibre Il faut brancher les enceintes au moins 5 minutes avant de commencer travailler et attendre galement 5 minutes une fois la manipulation achev e pour purger le volume de travail c est dire pour que Pair contamin ait le temps d tre vacu de Penceinte Toute r paration effectu e sur une ESB doit tre confi e un technicien qualifi Si un dysfonctionnement se produit pendant l utilisat
83. organes et tissus peuvent tre touch s et m me subir de graves l sions Parmi toutes ces substances toxiques certaines sont reconnues comme tant teratogenes ou canc rog nes Les vapeurs de certains solvants sont toxiques lorsqu elles sont inhal es Outre les effets plus graves indiqu s ci dessus Pexposition peut entrainer une atteinte sans retentissement visible imm diat sur la sant mais qui peut se traduire par un d faut de coordination une somnolence et des sympt mes du m me ordre qui augmentent le risque d accident Une exposition r p t e ou prolong e a la phase liquide d un grand nombre de solvants organiques peut tre l origine de l sions cutan es r sultant de la dissolu tion des graisses par les solvants ou bien encore d une action corrosive ou allergique Des informations d taill es sur les effets toxiques des produits chimiques sont donn es l annexe 5 Produits chimiques explosifs Les azotures qui entrent souvent dans la composition des solutions antibact riennes ne doivent en aucun cas entrer en contact avec le cuivre ou le plomb canalisation d vacuation et plomberie car les azotures de ces m taux explosent violemment au moindre choc Les thers conserv s depuis longtemps et qui ont cristallis sont extr mement insta bles et peuvent exploser Lacide perchlorique qui s che sur des surfaces de bois sur des mat riaux de cons truction ou du tissu explose et s enflamme sous
84. origine lectrique et comporter une douche de s curit ainsi qu un rince yeux On pr voira des zones ou des salles de premiers soins convenablement quip es et facilement accessibles voir annexe 1 Dans le plan de toute nouvelle installation il faudra pr voir un syst me de venti lation m canique assurant un flux d air dirig vers l int rieur sans recyclage A d faut les fen tres doivent pouvoir s ouvrir et tre munies d un grillage anti arthropodes Il est indispensable que Palimentation en eau soit fiable et de bonne qualit Il ne doit y avoir aucune interconnexion entre les branchements destin s au travail du laboratoire et le r seau d eau potable Le r seau public d adduction doit tre prot g par un dispositif anti retour L alimentation lectrique doit tre fiable et de puissance suffisante il faut pr voir un clairage de secours permettant de sortir en cas de n cessit Il serait souhaitable de disposer d un groupe lectrog ne de secours pour l alimentation des quipements indispensables tels qu incubateurs enceintes de s curit biologique cong lateurs etc et pour la ventilation des cages de l animalerie L alimentation en gaz de ville doit tre fiable et suffisante Il est imp ratif d assurer le bon entretien de cette installation Il arrive que les laboratoires et les animaleries soient la cible de vandales L installation de syst mes de protection physique et de s curit anti
85. place ou prendre d autres dispositions en consultation avec les autorit s concern es Les cages des animaux porteurs de micro organismes appartenant au groupe de risque 3 doivent tre plac es dans des isolateurs ou tre dispos es devant des ven tilateurs d extraction Il faut veiller un d poussi rage maximum des liti res Tous les v tements de protection devront tre d contamin s avant de passer au blanchissage Les fen tres doivent tre herm tiquement ferm es et r sister aux chocs Le cas ch ant une vaccination sera propos e au personnel Animalerie S curit biologique niveau 4 Le travail dans cette animalerie sera normalement associ aux manipulations du la boratoire de confinement haute s curit s curit biologique niveau 4 et les dis positions r glementaires nationales et locales devront tre harmonis es pour pouvoir s appliquer aux deux Si des travaux doivent tre effectu s dans un laboratoire o le port de combinaisons pressuris es est obligatoire un certain nombre d autres pratiques et proc dures sont respecter en sus de celles qui sont d crites ici voir chapitre 5 1 Toutes les exigences relatives aux animaleries niveaux de s curit 1 2 et 3 doivent tre respect es 2 L acc s sera strictement r glement seul le personnel d sign par le directeur de P tablissement doit tre autoris entrer 35 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORA
86. pr l vement de sang sur des malades ou des animaux doit tre effectu par du personnel exp riment 3 Pour les ponctions veineuses on remplacera la seringue classique par un dispositif de s curit usage unique tube pr l vement sous vide qui permet de pr lever le sang directement dans un tube de transport ou de culture ferm qui met ensuite l aiguille automatiquement hors d usage par obturation ou r traction 4 Les tubes devront tre plac s dans des conteneurs appropri s pour tre transport s jusqu au laboratoire voir le chapitre 15 pour les conditions observer durant le transport ou dans les locaux m mes se reporter la section du pr sent chapitre consacr e au transport des chantillons l int rieur de l tablissement Les for mulaires de demande devront tre plac s dans des sacs ou des enveloppes s par s r sistants l eau 5 Le personnel qui r ceptionne les chantillons ne doit pas ouvrir ces sacs Ouverture des tubes chantillon et chantillonnage 1 Les tubes chantillon seront ouverts dans une enceinte de s curit biologique 2 Le port de gants est obligatoire Il est galement recommand de se prot ger les yeux et les muqueuses au moyen de lunettes coque ou d un cran facial 3 Les v tements protecteurs seront compl t s par un tablier en plastique 4 Pour viter claboussures ou projections le bouchon sera saisi avec une feuille de papier ou un morce
87. proc der r guli rement des exercices En cas d urgence s occuper en premier lieu des accident s Nettoyer fond les zones contamin es En cas de n cessit demander l aide des services de s curit R diger un rapport en cas d incident et Parchiver 130 PARTIE VII La s curit organisation et formation 19 Le responsable de la s curite et le comit de s curit Il est indispensable que tout laboratoire ait un r glement de s curit d taill un manuel de s curit et un programme pour leur mise en application La responsabi lit en incombe normalement au directeur ou au chef de Petablissement ou du labo ratoire lequel peut cependant d l guer certaines t ches un responsable de la s cu rit d l gu la s curit ou d autres membres comp tents du personnel La s curit au laboratoire est galement l affaire de tous qu il s agisse des chefs de service ou de leurs subordonn s et chaque membre du personnel est responsable de sa s curit et de celle de ses coll gues Chacun est tenu de travailler dans le respect des r gles de s curit et doit rendre compte son sup rieur hi rarchique de toute action ou situation qui y contreviendraient ainsi que de tout incident Il est souhaitable de charger des consultants ext rieurs ou des membres du per sonnel de proc der des audits p riodiques sur les conditions de s curit Le d l gu la s
88. provenant de sujets humains ou d animaux potentiellement infect s Lorsqu on envisage des travaux sur du mat riel biologique susceptible de contenir un agent associ des EST le choix du niveau de s curit biologique va d pendre de la nature de l agent et des chantillons tudier et il doit se faire en consultation avec les autorit s nationales comp tentes C est dans les tissus du syst me nerveux central que l on trouve les concentrations les plus lev es de prions Les tudes effectu es sur Panimal indiquent toutefois qu il est probable que de fortes concentrations de prions soient galement pr sentes dans la rate le thymus les ganglions ymphatiques et les poumons Selon des travaux r cents des prions presents dans les muscles squelet tiques et dans les tissus musculaires de la langue pourraient galement constituer un risque de contamination 20 23 Comme il est difficile d inactiver compl tement les prions il convient d insister sur la n cessiter d utiliser autant que possible des instruments jetables et de prevoir un dispositif de protection galement jetable pour couvrir le plan de travail de Penceinte de s curit biologique 85 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE La principale pr caution observer par Poperateur consiste viter Pingestion de mat riel contamin ainsi que toute piq re cutan e Ces agents n tant pas d truits par les proc d s habituels de d s
89. re ce qui assure une protection maximale du produit manipul Lair s chappe ensuite par la chambre de distribution situ e l arri re pour aboutir dans l espace qui se trouve au sommet de l enceinte entre le filtre d admission et le filtre d vacuation Compte tenu des dimensions relatives de ces deux filtres environ 70 de lair est recycl travers le filtre d admission pour revenir sur le plan de travail les 30 restants sont rejet s dans la pi ce ou l ex t rieur apr s avoir travers le filtre d vacuation Lair rejet par une enceinte de s curit biologique de classe II type Al peut tre recycl dans la pi ce ou vacu Pexterieur du b timent en raccordant Penceinte une conduite d vacuation sp ciale l aide d un manchon ou en le faisant passer par le circuit d vacuation g n ral Le recyclage de Pair dans la pi ce a Pavantage de r duire les d penses en com bustible de l tablissement car lair chauff ou refroidi ne s chappe pas l ext rieur Le raccordement par une gaine tanche de Penceinte au circuit d vacuation permet galement d utiliser certaines ESB pour travailler sur des radionucl ides et des pro duits chimiques toxiques volatils tableau 8 60 10 ENCEINTES DE SECURITE BIOLOGIQUE coupe de face coupe lat rale FA air ambiant air potentiellement contamin air filtr par le filtre HEPA Figure 8
90. riel pr sentant un risque biologique ou encore avant de quitter le laboratoire Dans la plupart des cas un lavage soigneux des mains a Peau et au savon est suf fisant pour les d contaminer mais Pusage de savons germicides est recommande dans les situations haut risque Il faut bien se savonner les mains en frottant soigneuse ment pendant au moins une dizaine de secondes puis les rincer a Peau claire et les s cher avec du papier ou une serviette propre on peut ventuellement utiliser un s choir a air chaud Il est recommand de disposer de robinets command s avec le pied ou le coude Dans le cas contraire on fermera le robinet en le saisissant avec une serviette en papier ou en tissu afin de ne pas se recontaminer les mains Comme indiqu plus haut les produits pour friction a base d alcool peuvent tre utilis s pour se nettoyer les mains si celles ci ne sont que l g rement souill es et que Pon ne peut pas se les laver convenablement D sinfection et st rilisation par la chaleur La chaleur est Pagent physique le plus couramment utilis pour liminer les germes pathog nes La chaleur s che qui mest absolument pas corrosive est utilis e pour traiter de nombreux instruments et accessoires de laboratoire qui sont capables de supporter une temp rature de 160 C ou davantage pendant 2 a 4 h Le br lage et 101 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Pincineration voir ci dessous sont galement
91. tranger code t il pour un facteur de pathog nicit appartenant un autre organisme 4 Si l ADN tranger contient un tel facteur de pathog nicit peut on envisager que cela ait des cons quences pour la pathog nicit de POGM 5 Existe t il un traitement 6 La modification g n tique aura t elle des cons quences pour la sensibilit de POGM aux antibiotiques ou d autres types de th rapeutique 7 L radication de POGM est elle possible 116 16 S CURIT ET TECHNOLOGIES DE RECOMBINAISON DE Autres consid rations Lutilisation d animaux ou de v g taux entiers a des fins exp rimentales demande galement m re r flexion Les chercheurs doivent respecter la r glementation les restrictions et les prescriptions relatives au travail sur les OGM en vigueur dans les pays ou les institutions dans lesquels ils exercent leur activit Il peut exister dans certains pays une autorit nationale charg e d tablir des direc tives concernant le travail sur les OGM et celle ci peut aider les scientifiques d ter miner quel est le niveau de s curit biologique requis par leurs travaux Ce niveau peut parfois varier d un pays a l autre et il peut aussi arriver qu un pays d cide d abaisser ou d lever le niveau de s curit exig pour tel ou tel syst me vecteur h te la lumi re de donn es nouvelles L valuation du risque est un processus dynamique qui volue avec les nouvelles avan
92. un protocole de s ret biologique pour le laboratoire destin guider l identification le signalement l tude et l limination des failles dans la s ret biologique de cet tablissement y compris les incoherences dans les r sultats d inventaire La participation les r les et les respon sabilit s des autorit s de sant et de s curit publiques en cas d entorse la s ret doivent tre clairement d finis Une formation la s ret biologique en laboratoire distincte de la formation la s curit biologique en laboratoire doit tre dispens e tout le personnel Une telle formation devrait aider les membres du personnel comprendre les besoins en mati re de protection de ces mati res et les raisons des diff rentes mesures de s curit biologique Elle devrait aussi inclure un examen des normes nationales pertinentes et des proc dures propres l tablissement Au cours de cette formation il convient de pr senter galement les proc dures pr cisant les r les et les responsabilit s du per sonnel en mati re de s ret en cas d infraction dans ce domaine Laptitude professionnelle et morale travailler avec des agents pathog nes dan gereux de l ensemble du personnel disposant d un acc s autoris r gulier aux mati res sensibles joue galement un r le determinant dans efficacit des activit s concernant la s ret en laboratoire En r sum les pr cautions de s ret doivent deven
93. uoll llnq p 1100 2 66 uolsn julod nbrsii bib Jnapo un p 940102uUI apinb1 2420 u zu ql ul iq u nioL SanOlINIH SANDSIY 5341 SALITIEILVdINIOONI 340 3 4 Y SNOILNVOFYd FIGNAONI G 3 0914 JLNVS Y1 4NOd SANDS SANDISAHd 5313144094 ANDIWIHO 1110084 208 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE anbupAysojya aploe p UOHPUL0 dane 9JIPILUNU P aouasaid uollsoduloo p u 2u9lni ind 1819 8 GURL 91 19 nisaubew a unAieq ef LNIUILUNIE nb 5191 S 29AB 91U9101A UII 99 190 40 4910 S HO S UIIPOTP saseq ap 99495910 ud 011500410990 211049 SJISO1109 s nbixo 286 s p 1ups npold ua 99 aun no s pnru S PLS sap dae 198 u09 sed uq ldulo9 anbsew un no 1016 1059 u01 99 01d aun 9118 N90 1011091010 ap adA azine no 9 un s ap s n uni sap S1UP sap 181104 uoHendeng p 890 misodsip un daAe NO UOHE RU A SNOS aULUOU anod aug60199ur9 14901910800 4 19 s nbned u s jqno1 ap 9111015504 0 5 s p g JUPSINPUO9 en 19 5 np s lqno s p 19 aun ynad SUOI IPUOD
94. vacu e Pas de protection du produit e Flux entrant minimal vitesse frontale Bonne filtration de l air vacu Assure la protection du produit Confinement haute s curit e Assure la protection du produit si flux laminaire Isolateur a d pression en feuille de plastique souple A rosols et projections Confinement a haute s curit Ecran anti projections Projections de produits chimiques Constitue un cran entre Pop rateur et la manipulation Pipetteurs Risques dus au pipettage a la e Facilit d utilisation bouche ingestion de germes e Pas de contamination de pathog nes inhalation des l extr mit pour l aspiration a rosols produits par la succion protection du pipetteur de exerc e sur la pipette expulsion l utilisateur et du circuit de de liquide ou chute de gouttes vide conduites d aspiration contamination de l extr mit de la St rilisation possible pipette servant a aspirer e Pas de fuite par la pointe de la pipette Anse Projections provenant des anses e Protection par un tube ferm micro incin rateurs Anses jetables de transfert une extr mit en verre ou en c ramique chauff au gaz ou l lectricit e Jetables chauffage inutile R cipients tanches pour recueillir et transporter le mat riel infectieux st riliser dans une installation appropri e de l tablissement A rosols produits r pandus par suite de renversements ou de fu
95. 0 0 19 s nbixo Sal 2786 ap juawabebap apioe un p 990959 0 uq SIISOldX sainjoze Sap Jnod 91n9Jeuu 9 19 qwuojd l JAMI spanoj xne ul Sa 1 05 ye 9 2 ap 31N10 U9 l 19 9000 5 l 90 0 0 9 IIAL NSOl X U0ILJY 1 90 un nb isule anbiysejd ua no onou9 n0e9 ua sjueb sap 181104 asgissnod PI Jajeuu sed N U9 l ypip ulull 19API nead ej 106109 ap SE uy n un lp l anod Jasin sed au S nbixo1 sanader juswabebap un anboaod abeyneyo 97 UOISN ap julod np snssap ne afeyneyo sed aAlso dxa 319IUEUU ap as 1 9 9191110 ej 9 1190 need ej 19 xn s l inod 9011 100S 0 05 El 19 9191SSnOd e7 991 1010 sap 1 SNLI n d un 19P U09 ap no uons ul p Se9 ua nbixo 591 nea suep lqnlos 0 006 uolsn ap 11100 asojoou ullfE1SH9 09 eNEN ulnipos anjozy 9919195 anbsew un no 000 05 5105 19 1 8AZIL Ary auloyesoqe 100 s nbo g s n uni s p 19 nbilseyd ua no dsnoyaynoea ua sjueb sap 191104 949 0 9 949 WENO Ub n9 011211 1 aun 1194 nead gj 1981U02 nea suep jqnjosu 0 921 919195 00 e
96. 02 20 18U191AU191q nb l ul9 3913 189 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE S991 U89U09 suonn os s nb sanbsu ap juejne 5910 n d 1 9195910 92 59 S391JU39U09 au960192UP9 919 yu wauu ow PENOd 1991015 1 19 G 1 SJIDOU 5 s nilp anbsiy gueynd 49e U09 suonn os Jed uolyesi igisuas s3 0092 yeuye aun s ulpnu 1194 19 12 aqua AUJ9LW010 U9 sIq luouln udououo4q S AH SU02 4upssind aun no lu uo q 9119 HU A 910 aun aybuAse 9U0p JUaAIOp un nod un suep no un yAn uoluo9 S ll 0 17 nbup uolu uu0q40S aun 5105 un ap SUIOW aploe 191 PAPAL 1 1 s ulg dul4s g 9A19SU02 daAe nb Isule ap auloyesoqge inod sap 1anboao1d S uo IS 51190 0 synpoid s nbo9 g s n uni n d sinaden xne nea g OH9H 1 lqnol 95 s p Jauuop nod anbnseid uonisodx 0 9291 0 96 loupui uu apAyapyewo 9 19 Ua NO noy ynoeL aun 591101810591 uollnq p PILE SJUPPAXO Sa 9aAe sjue6 ap nbnseld Sal0A S 1100 JURY juiod ajuenbid dane p U D PUL O 99 U99U09 juatuasnasnobln U9 191148 un p 100 0 09 nead gj 19 xn s In8POJ g ap 6 uonnjos 500111105 s37 116691 1194 a Jed 0 s 115199 D 1104 1nod JURY 1494 110
97. 16 99 p 10100 ue ns bul p 9 0p 940102U1 HO H9 H9 JUS OA pegy s u 1d1991 S Ua 0 1 591 580 ud JIDON IHE10A apinbiq 1013 aunyjns l 19 uludsoud S ll ul9 p PI uP l i ou s id ua a OPIUOWWE no S20U2 ap seo ganbipul 159 ajnos du109 ua arejos 101 je p u wnissejod 9110j211dS91 anbsew ej Uollsodx Ud SILI L Sapseyad 0 01 p xol u un no Sanbo9 abeuneyo S19H9 D 9lIlIqISSOd nqe p asoydsoyd 9 g 91119295 s n uni Jed 1 soldx aeuowjnd 1100 s4n Np91 s l 19 sap Sunajaajoud 1190 5990 150 15 un Janbonojd nad 0 69 UOISN 591015100102 s S U L 19A Sep s nne p 286 np uonejeyul 1 lod unig DAAC JUIWIWWA OIA 19 986 sap 191104 0150 100 99110101059 5910 apinbi pe anbiflaug UOHP U A snos sojo ej 911195 sew S 19 ne d ej Xn9 s no 2019 juepAxg SLA Ud 19 PAEIL e qSNQUON uoy nod JUEJIII 19 4 g aunel 285 9401U9 apAxoig 187 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE s nbifl u s uepAxo S dane 1I E H 9alelno0 U0128101d aun nbysejd ua no 9nou nop ua sjueb sap 191104 0 98 41 99 1104 9 ubin UONESI IQISUS aun JanboAo1d 1190 nead ej 19 S31101211dS31 SAIOA S xn sa inod 1901102 nea g lqlosiul 02121
98. 206 de t tram thyl ne 206 oxygene 199 panneau de danger biologique 9 22 33 paraformald hyde 97 100 peau contact avec la 79 80 coupure inoculation et rosion 89 voir aussi blessures pentoxyde de phosphore 199 peracides 99 100 p riode de garantie mat riel de laboratoire 38 39 permanganate de potassium 200 peroxyde d hydrogene 99 100 200 personnel d entretien et de maintenance 136 formation voir formation gestion de la s curit biologique 12 locaux liste de contr le 144 objets v tements personnels 15 r gles de s curit 51 52 responsable de la s curit 133 135 surveillance m dico sanitaire voir surveillance m dico sanitaire vaccination 157 ph nol 201 photometre a flamme 162 pipettage 78 la bouche 11 70 dispositif 16 17 70 71 78 216 pipettes 17 78 plafonds 14 23 plans d urgence 88 89 plans de travail animaleries 34 laboratoire 12 plantes transgeniques 113 115 plasmide pUC18 114 portes animaleries 34 laboratoire 15 23 29 pr cautions d usage 83 86 pr lavage 93 premiers secours 15 156 primates 33 principes directeurs laboratoires installation 38 40 prises reli es la terre 126 produit blanchissant hypochlorite de sodium 94 95 100 193 produit pour friction des mains a base d alcool 98 99 101 produits chimiques risques 21 121 123 enceinte de s curit biologique 64 explosifs 122 162 incompatibles 122 listes controle de s curit 149 150
99. 51150 0 anod sanboo S JUaW s uri ul g s n uni s p nea asnaublos Sap 19H04 S UIUIE U02 suep ajqnjos Jaejeg 1194 nbixo S H L A 9919091 5911 0 967 upg Jasodas Sa 1910 19 ap uoHlsodx p 569 ua uolllnq p Jassie xn ze 2 AR 91019500 auuaipiosAy juiod Jane UE1n 99 0911 69S 4015 ud LUNIPOS 1061 09 ap seo ej 19S ABI ulod quae 91 0 200 juawabebap ua nead ej xn 4 n q xn z s apuewe p SNOSSIP 9000 S JAAP 1981102 1101 Jnod Jugy 1 anapo dane aayono ap p xolp 19HA4 911078114891 lpu oul D 582 ua gUeIND 19581U09 un 02 P 191181 np 1upu lu09 U0n99 01d sanbIXo sanader ap no ayour q UaWasIaAgp NO s p oe p aun aaissnod juawebebap un uolsabul p seo ua aUIR1S119 N9PN ap seo ug 90495910 uq P 19443 8 Na JaUUOP 1194 nbi xo 1 Ulnipos ap ainues9 SINOINIHI SANDISAHd Sanosiy 5341 S31T11811Yd41N09N1 Y SNOLLNWOIYd JIGNIONI G 310919 31NYS YT 4 04 SANDSIY S3131Hd0Hd ANDINIHO 1110094 184 9119 aloyesoge anod sanboo g s nh uni s p anbiisejd ua no onou9 n0e9 ua 51 8
100. 7 surveillance m dico sanitaire 17 18 voir aussi laboratoire de base s curit biologique niveau 3 1 2 22 26 animalerie 32 34 35 conception du laboratoire 23 24 formulaire contr les de s curit du laboratoire 48 voir aussi laboratoire de confinement 217 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE s curit biologique niveau 4 1 2 28 31 animalerie 32 35 36 conception du laboratoire 29 31 voir aussi laboratoire de confinement a haute s curit s l nium 204 seringues 11 20 s rum s paration du 80 service d entretien des b timents 136 services de secours 91 sols 14 23 souris susceptibles d tre porteuses de poliovirus 115 sporocide 93 st rilisation 31 92 105 chaleur 101 104 d finition 93 mat riel contamin par des prions 86 87 nettoyage avant 92 93 voir aussi d contamination d sinfection stockage ampoules contenant du mat riel infectieux 83 espace laboratoire 15 gaz comprim s et liqu fi s 123 146 147 liquides inflammables 146 locaux liste des contr les de s curit 143 144 produits chimiques 121 sulfure d hydrogene 205 surveillance medico sanitaire laboratoire de base 17 18 laboratoire de confinement 25 26 27 liste contr les de s curit 148 symbole international indiquant un risque d irradiation 129 130 systeme d expression biologique 114 systeme de chauffage ventilation et air conditionn 23 24 liste contr les de s curit 144 systeme de circulation d
101. 73 boissons 11 15 34 80 bonnes techniques microbiologiques 9 12 77 87 brome 178 bromure de cyanog ne 179 broyeurs de tissus 82 161 bruit 126 127 cages 34 35 36 animaux 34 35 insectes volants 37 carbonate de sodium 123 4 4 carbonoimidoylbis N N dim thylbenzamine 176 carte de surveillance m dicale 25 26 27 catastrophes naturelles 88 90 91 centres collaborateurs de POMS pour la s curit biologique 158 centrifugeuses 81 160 appareils confinement 24 25 bris des tubes 90 160 utilisation incorrecte 162 chaleur d sinfection et st rilisation 101 104 humide 102 s che 101 chaussures 11 22 28 73 chef du laboratoire 12 133 programme de formation 18 137 139 chloramines 94 96 chlore 94 95 180 chloroforme 181 chlorure d hydrog ne 182 circulation de Pair alarmes 23 67 animalerie 34 35 36 enceintes de s curit biologique 59 60 61 s curit biologique niveau 3 23 s curit biologique niveau 4 30 code de bonnes pratiques s curit biologique niveaux 1 et 2 9 12 s curit biologique niveau 3 22 23 s curit biologique niveau 4 28 combinaisons de laboratoire 72 73 comit de s curit biologique 134 135 compos s chlor s 94 95 compos s d ammonium quaternaire 98 conception laboratoire principes directeurs 38 39 s curit biologique niveaux 1 et 2 12 15 s curit biologique niveau 3 23 24 25 s curit biologique niveau 4 29 31 conduite d aspiration circuit de vide 24 70
102. 9 01d dane SJUPPAXO SIN sinaden S 9ane 1I E H S 18 PUUI P 191144 9 1 94l GeWWe JUL p 0 09 118199 P JUIOd aun n d nilp uognjos aun 931e 0 0 1981U02 un S8112N90 sJngjnop ucin SaayseIp S USLUASSILUOA sayeulwuopqe sunajnop sawgydwAs s nbned u 19 59 8 9 SU01S97 6102 ne Jnoqe jueAnod 81092 9 5 np 59 0 ubn L n q 591 100 sanes6 Jasned jusAnad 511 Sa1107211dS91 SOA S 19 nead p xn s Jnod SJISO1109 JUOS S4N dLA S S 19 9 1 05 971 nea suep lqnlos 9 281 uollillnq b 1100 0 7 uolsn ap 1ulod 91019 910 8 aun jueahebep ajed 9501 no s solo9ul 9 9 HO H 9 100944 201 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE 99 N0S 202 SIN 2179 sed yop au 19 UOHPUULUPLHULD anbsu EU102 un awiglu ap a18ILUN L g Hlplnoo u01 39 01d 19 S M L SS L OA 189 1101 91495910 19 112 R aun sagasneu 0101991 2 28 1 p o9 UlS D uonISOdXa p 9nou no6 ua 51 8 SJUAUIASSIPINO 9 uolllnq p josouge 580 Ud Sa qE SUI Sap 181104 UUOQ10S sagjeydea 11100 9 68 ua s lln s p xol d aun SNOS 05 Zigg JueNboAo
103. 9 98 01d un 19 luouln ud uongo p nbeyy nea p ap ja saseq S S USWW9 9A 990 150 5 gun 3nad 1100 2 101 99959 0 1 1 sap S1UPTOSI s nne p 286 np uonejeyul UOISN ap julod ua apioe 9066 sap 1 04 uolsnqulo9 891101010591 9499 INapo xn lqulou un 159 asnanbe snos sojo PI 911195 srew S 0A Sa 19 pi R IEPIIA 9 ap anbeny uolnjos 27 SLA Ud PAEIL lql snqul09 uoy Xn Z Sa nod JIS01109 aunel 285 9101u2 SANDIWIHO SANDISAHd Sanosiy 5341 SALITISILVANONN 3 0 Y SNOLLNWOIYd FIGNIONI G 3 0919 JLNYS V1 4 04 SANOSIY S3131Hd0Hd ANDINIHO 1110094 180 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE 9n0u9 n089 l s nbysejd s nbeniy u fsoud np ua sodulo99p as abeljneyo Jed s nbif l u s1uepAxo s l QUIZ e winisaubew 9 19 WNIUIWNye xne ul 54181190 S HO saseg 9 000 05 SNOS 8118 Nn90 10119910 0 aun llnlu onou9 n0e9 ua sjueh s p sinejo9 01d SJU9LU99A SAP 91104 WWOU Jnod u fol oup 9119 penod yewiue 2949 5 90 uonluedde i uonsodx auf asooJeu aun 19dde p aun 91910 1969 un aasneu PI ap s lpud sap sed jue
104. 91 U99U09 ap aouasad g sayjaun s p 1100 s sn nbe u nb ISuIe nbnseld ua no 9 86 UOISN SUOIIN OS 5971 8PAXOJINSIAUJAUIP 9NOUNOEI ua SJUE lpu oul D 582 u S 101841dS91 Sal0A 1100 ajuenbid 99S opua s p nead s nbixo sinadeA s p ya nead ej xn 4 g un suep S UPI LI Sa 29AB ej no xn s ae s p nad sap sainjoig 59 s nbidooso 54u H009 199 4 sod zquq 40 9 9 10 100 1101 19443 lqnsnqulooul ap asned 1801100 souejq XNEJSH9 0 121 1 aploy 1732 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE nea p 904959 0 ua xn lqulou ap anbeny sgsodwoo s s xn lqulou 06 EOL Z ap 39 591 0 9 1q18014X9 D S SEQ Sa SaUILUE S lli 9 681 S S009 Q 6i 41E199 D uoll l nq9 p s 59101 1890 1ulod p S D E191 JUaAnad iod 2 s uepAxo ej no xn s l Dave seo ua s nbixo S19H9 597 2AISO1109 uolsn Sa nea p snaden 198 U09 100 194143 no s upiil 286 uoljoe sainaladns 1 lod 816IEUIA P aJURIINOG awn onolpl yul sap no sinadeA 5921018 1059 S TOA ap 9 98 19 ne9 2918 S ll ul19 p IU s p Sa 19 Sa nod ayo in po l g 07 027H2 JUSWWAJOIA 1689 Sanu sawl ap Sed a QeWWe JU yugu 1094 310 09U1 apinbiq anbijgoe
105. Depuis sa premi re dition publi e il y a plus de vingt ans en 1984 le Manuel de s curit biologique en laboratoire est toujours le guide pratique auquel les laboratoires de tous niveaux se r f rent en mati re de s curit biologique Une bonne technique microbiologique et une utilisation judicieuse des quipements de s curit par un personnel convenablement form sont toujours des l ments fondamentaux de la s curit biologique en laboratoire Cela tant la mondialisation les progr s importants r alis s par la technologie l apparition de maladies nouvelles et les s rieuses menaces que repr sentent les agents ou les toxines microbiologiques d tourn s de leur usage normal et d lib r ment introduitstdans environnement appellent un r examen des techniques actuellement utilis es dans les laboratoires C est pourquoi le manuel a t largement remani et d velopp a occasion de cette nouvelle dition Le manuel aborde maintenant la question de l valuation du risque et les r gles de s curit a observer dans la mise en uvre desitechnologies de recombinaison de l ADN en outre il propose un certain nombre de principes directeurs pour la mise en service des laboratoires et leur agr ment Les diff rents concepts de la s curit biologique sont expos s de m me que la r glementation internationale la plus r cente relative au transport des substances infectieuses Diverses consid rations de s curit bi
106. Du fait de la multiplicit des crit res de mesure des r sul tats il est rare qu une valuation conduise la conclusion que le programme de formation est un succ s ou un chec total En g n ral les r sultats de l valuation indiquent que certaines parties du cours ont t mieux comprises retenues ou 138 21 PROGRAMMES DE FORMATION appliqu es que d autres Si la suite d un programme de formation on constate des hauts et des bas ou des lacunes dans les connaissances ou les comp tences souhait es c est peut tre le signe qu il faut envisager de prolonger la formation de changer de m thodes p dagogiques ou de recruter des formateurs plus comp tents LOMS peut fournir divers outils pour la formation la s curit microbiologique 139 PARTIE VIII Liste des contr les de s curit D 22 Liste des contr les de s curit Cette liste est destin e faciliter valuation du degr de s curit et de s ret micro biologiques dans les laboratoires biom dicaux Locaux 1 COND U1 HS W 10 11 12 19 14 15 16 Les principes directeurs relatifs a la mise en service et a Pagrement du laboratoire ont ils t pris en compte pour la construction des installations ou les expertises ult rieures Les locaux sont ils conformes a la r glementation nationale et locale en mati re de travaux publics notamment en ce qui concerne la r sistance aux catastrophe
107. E SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE 8118 Nn90 10119910 0 sun llnlu 210421 0 2 ua 51 8 Sap 191104 Ul 9p ul un s nsuoo glpuadUul p 580 s nbixo sunaden juswabebap nea suep lqnlos Q E12 uollillnq p julod np snoss p U9 98 Jogy uolsn ap 1ulod s nbidoosol54q S9UPIQ XnE1s119 ja nea juawabefap dane Saulejndo no 02 Jaouu XN S 29A xn lqulou 19 Saguejno s lniniq Xn nbsiA Od H 1981u09 582 UZ ap nbeyy Sap asned JIS01109 apinbiq nbuoudsoud ploy S90U2 xne 1990 0 yu anad nbuoluol d aploe ap Jed sajjinos 9104 aun no 9100 ua auuogos aun SNOS S SSP IIIEd no s pneu suol nlos Siauyoued S Sa Jajndiuey y sanbiuebi0 yeloe UN no no xneJsaulw sanblue610 aulejndo U0198 01d Sasodu09 s l mpul un nb 9416 auleuowjnd sap sauyne 19 5100 ayu INOYIMOLI w pa un s nbonosd 1981U02 aided xnp ul ua s ug s p sagueysqns n d uoleyeyuly ap sed jooaye sabeije 19 isure 51 10910 0 sane p 9911010110591 ua s lsoldx 11 0 910 anbij90e S U L 19A Sap uonsnqulo9 S 10A S nead P Synpoid sap aplpAyue Jayod uonisodx p ej seu Say J9PJUO9 nea 1190 sunayonpal alqusnquioou no
108. I no xne ulu ap uononpoid S9110 21IdS91 5910 nea Sasoduu09 e IIS Sapnomed Sa 19 sa Jnod suep lqn os xn lqulou un p tunu S lqi snqulo9 JURY 4uawa wax 1 90 aouasad anbsew un nb sure s l npul sap 912195100 uonsoduloo p ud aAlSso dxa g leynoo UO I9 OId UOHEL L PHULD ej ap 9 072 OUINY 9410A 1 aun 19 s n o d nbsii anbibseua no uons ul p uolsni ap urod ulnisse od alaluew ap egy SIU9U1919A S P 19104 JUEPAXO 982 U9 11501109 S19101A XnE1S12 ayeueBuewad SANDIWIHS SANOSIY 5341 SALMIILVd NOON 3 0 3 4 Y SNOILNY JYd 310N39N1 4 ANDSIY 31NVS YT 4 04 Safiosiu SANDISAHd 8211Hd0Hd AN0INIH9 LINGOYd 200 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE 189 g yuawwepuoqe 1904 sind 06 91NEU9P 009 E P 19 02 pinbil 109416 eugl u13410d upi ul un no 00 109 16 u 4u19 10d np 10199416 np 334e a949n0 01 ej JauUOaHIpeq 19 S9UlLUE1U02 S U9W9 9A S SNO 1910 UE1n9 1981U02 ap sed u UID3pauu un s nsuo9 19 puawai pg Xn9 Sa 19E U09 ap 589 43 9 18 120 401199100 aun llnlu 910121 0 2 ua sjueh Sap 19104 94100 05 SNOS JAa IeAPIL S 19 nead El 1981102 1101 UOlSO1dX9 D 19 19HA4 9 101011059 pu u p nbsil u01 9
109. ITE Les rotors et les pots centrifuger sont ils r guli rement inspect s Les filtres HEPA sont ils r guli rement chang s Utilise t on des aiguilles hypodermiques au lieu de pipettes La verrerie f l e ou br ch e est elle toujours jet e et non r utilis e Existe t il des conteneurs de s curit pour le verre cass 10 Existe t il des conteneurs sp ciaux pour les objets tranchants ou pointus et sont Utilise t on du plastique plut t que du verre lorsque c est possible ils effectivement utilis s Mat riel infectieux 1 2 3 10 11 12 13 Re oit on les chantillons dans de bonnes conditions de s curit Tient on un registre des arriv es de mat riel biologique Lemballage des chantillons est il ouvert avec soin et prudence en pr vision d une casse ou d une fuite possibles Porte t on des gants ou tout autre type de protection pour d faire l emballage des chantillons Le personnel a t il t form pour exp dier les substances infectieuses conform ment la r glementation nationale ou internationale Les paillasses et plans de travail sont ils propres et en ordre Le mat riel infectieux jet est il limin tous les jours ou plus souvent et confor m ment aux normes de s curit Tous les membres du personnel sont ils inform s des m thodes utiliser pour le nettoyage apr s casse ou renversement accidentel de r ci
110. Inisodsip dane a qiyedwioou UN 1911 5APAL BIO ULI un nb sure 0129100 S U LI919A sap 19 5186 sap Jaod auloyesidsas uon old aun NO 1800 99210 UOHP HUSA SNOS Xn s no nead El 1981U02 1101 19144 SJUPPAXO sap juawgsedas 59 SOL sapioe juawanbiyewsay 19 s nbif u Sjua1d1991 SJUPPAXO 5 SUP 18A19SU09 no 01 11500 seo ua nead PI ap Zau np xna s p n lq S1J6 U0 1210 09 10 A m d seseuowjnd awapea un 19 SUOIS9 Sap auamigand n d juaBie p sanader snos nes ajueLOdw aqjUeNb aiqusnquioou un p uole eyul7 001511015095 aun juaanad 59919091 suonsodx sap aguejno LICE P 1 S19ALI 9 lIq1S014X9 p 1194 P 19 s li 9 02 xn s 1100 uez 118 99 p Julod nbili ulqol olu ul ul lqnsnqul02 asouerh Dob LES Hllnq p wod 9 296 uolsn ap 11100 adjnos ne no u bolp u p nilns ne uozo I g uonlsodx Jed 1UPSS QU OSSE S 0020 IRIN 2681 uoll l nq9 p wod 0 9 UOISN ap 1ulod anbiyewose agulwe un p unig g lolo9ul xn linu pinbi 1 175 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE 9 19
111. RITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE a la recherche des ant c dents medicaux et un examen physique destine a v rifier si la personne est m dicalement apte exercer ce type d activit professionnelle Si le bilan m dical est satisfaisant l int ress recevra une carte m dicale du genre de celle qui est reproduite a la figure 5 attestant quril est employ dans un tablissement o se trouve un laboratoire de confinement s curit biologique niveau 3 Cette carte que le titulaire devra toujours porter sur lui comportera la photographie du titulaire et devra pouvoir tre rang e dans un portefeuille ou un porte cartes Elle devra galement indiquer le nom de la ou des personnes a contacter en cas de probl me lesquelles seront d sign es localement mais qui pourraient tre par exemple le directeur du laboratoire le conseiller m dical ou le d l gu a la s curit biologique 26 A Recto SURVEILLANCE MEDICALE photographie Nom 05 du titulaire L INTENTION DE L EMPLOYE Conserver cette carte sur vous En cas d acc s f brile inexpliqu pr senter cette carte votre m decin et indiquer les personnes joindre dans l ordre de la liste Dr T l professionnel T l personnel Dr T l professionnel T l personnel B Verso L INTENTION DU M DECIN Le titulaire de cette carte est employ au 9090909090 Dans une zone o sont pr sents des
112. S199UB9 Sap julod eydje g Ausud y suep 591100100 2940 anb1s119198189 z 10 ej Jed s4n 99 01d S 9UE1n 1981102 un p aulwue Ajydeu gjuawia be S UaWa 9A Sep uons ul uorejeuul S3 0P 9501 g 0 Auaud f m no Jauod 0111500 Jed s nbixo s34 1008 y uejq 119 109 0190 19 eydye 5 9110 19144 ajqusnquoy SaJaWOs 5971 19 9 aulwue Ayyden aulejndo oh old aguen UL010401U9 aun anbisejd 9491150 E ii 9 19 s nbifl u ua no 2 09110 2 n q n p aun m s uepAxo ua sjueh sap 191104 Janboaosd n d nead el Sa 9 150 0 1 910 1101pU9 dane 0 0 198 U09 an aun n suep no 000 05 un nbudo jeu np neal e 19 1 SNOS 19 9UH91 B 5001599 9101991 0 69 1 n d 1951002 sap sanboaoud nad uolinga p u01 9891 ej 1101 19 9 anbiuojyo uonsodx quiod 9 86 9l no wnisaubew S 19 PUUI P 191144 06 ZE auf s sn nbnul s p uolsni ap 1100 sjuepAxo S 2318 91n0 ap aouR sip s l 0 91 aun jueulesjua anapo un p y vl sn lnoblA 0 19 SAW 1910 118 99 p 10100 1 9 0P 910 O9UI HO H9 116691 1194 5109101294 S 19
113. SIUEp XO dane 198 u02 1101 191149 nin S rl uHl p IU s nu 0 sed 91 0 sojdx p Sayuul 0 8 221 115199 p u10d QEWIWe JU SZIL uonpolxolul aun 19 9009109 00 aad g SUOISINAUOI sap ined 4011500 9 1 nead ej 19 S3110 211dS31 S 0A Sa xn s 1100 jue uoll llnq p 1100 597 uolsn julod anbiyewose g 940102UI apinbiq NO HO ruuo oy SanOlINIH SANDSIY 5341 SALITIEILVdINIOONI 340 3 4 Y 54011 310 30 0 3 0914 JLNVS Y1 4 04 SINOSIY SANDISAHd 5313144094 ANDIWIHO 11 0084 166 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE SIUEp XO Sa JAAP AISO X 9 9110A 0 9 120 U0199 01d aun 19 uzu 210421 1099 ua 5186 sap 19H04 Ulo9p ul un 1 4 nsu09 19 ap 29AB 1U Ul YP p U UI XN Sa I3AL 9P U09 ap seo uJ sanader Sa Jajeyul sed N 91 9 0207 112199 p iod ajqewwe su S p E191 9119 JUaAnad S1 H 591 S lUB LLU SinadeA saun oig sanes6 ap JIS01109 1896 9101051 9 811 julod 9o44 UOISN 1100 ajuenbid Jnapo g aJojoou pinbr H209 H9 anb1 998 ploy S90U2 xne s lqisu s Sasod
114. SUOIJ2E91 0 01251 1015495 uolsn ap s l s lq snqulo9 UN 29A UOHP HUSA s sn qulou aun no senbiwoiyd julod asnanbe S 99Ae SNOS rpu oul p S31991N s p uonn os p anbifiaus 9 nbsu jueuoduul aun Janbonod ua s ll n 019 juepAxg saseq 19 Saul sasaissnod dane auaBAxo n d 0 0 1 9 1095 aou0 anbiwoiy9a Sa dane yHead Inb ap UOHEJEUUI 19 I AWOIU9 no 9 9d91 J2PJU09 102 apupAyuy JIS01109 404 aploe nb Isulp xna p xo 1 uf sasloyesidsad s sopoul IA un 159 asnanbe Sa 19 nead ej ud 9 062 S l0A Sa 19 ej apAxQ uolnjos 27 1961U02 1101 184143 g 1011900010990 xn9 s anod uey no sayayied anbILUOJU9 ploy SANDIWIHO SANDISAHd sanosiy 5391 SILITIGLLWAWOONI Y SNOLLNVOIYd 310030 0 3 0919 31NVS Y1 4 04 53 0919 S3131H40Hd JNOINIHI 1110094 168 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE S Ub1n9 Sain qig s p Jasned 1 Sa 1100 591 1 1 1105 SUOINIOS s XN9 Uollisoduloo p SJUP UI Sa 19 591101010591 dae sjueh sap no s nbixo Sal0A S anod 9064 Uolsn 19 aulejnd0 0112910 0 286 ap no sanader 159 guaissnod e7 ap julod nea aun 191104
115. T p nb anbunyns ploy SANDIWIHO SANDISAHd 93 091 5341 S3LTIJILYdINO9NI 3 0 Y SNOLLNWOIYd JIGNIONI G 3 0919 31NYS YT 4 04 53 0914 S3131Hd0Hd ANDINIHO 1110094 172 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE S9049 xne s lqisu s s p xol d s p sdul np sino ne 13w10 1194 juawgue UOds aslgwAjod as uoulnbolp u ap SapiP 91 9119 JuaAned 2465 uollnq p 00 9 8 Inayqiyul p UOHP USA S19H9 5971 asuajul UOISN ap 1100 9949950 9000 aun ok 18 822 uollsodx p 592 aiqeaibesap 3 S UILIE no auuoqios aun sojdxa p awapa ajueljguad gelUOWWe SNOS Xn 4 s lli 0 92 Sauloyesldsai S T0A S un p sauljeoje S SEQ Sa 19 ej 334e 118 99 p JUIOd anod puey 1090191104 910p sunel g OHIHI HI saploe SJUPPAXO 198 u09 100 191 A4 a QeuWe JU 5911 JuaWalOWe aojoou apinbiq 019 0 9 un s nsuo9 19 1u9Ul9yP p U U 190014 59 1981U02 ap seo uJ 91101810591 LunlulLiniE l 40119910 0 19 91 1 no 2412 l 49 un nb sure joueuja nea uonsodulo29p l 9 yeioe ue199 un no suep jqnjos un ja sanbiGieug ap auloyesoge 19 0 6L Jiqns 1094194 syuepA xo p saseq anod sanboo uolinga p 9
116. TOIRE Personne ne doit travailler seul la regle du travail en bin me doit tre appliqu e 4 Le personnel devra avoir recu la formation de microbiologiste la plus pouss e pos 10 11 12 13 14 15 sible et bien conna tre les risques li s son travail et les pr cautions observer Les secteurs o sont h berg s des animaux porteurs d agents pathog nes du groupe de risque 4 doivent r pondre en tout temps aux crit res de confinement qui s appliquent aux laboratoires de confinement haute s curit s curit biologique niveau 4 L entr e dans Panimalerie doit se faire par un vestibule formant sas air dont le c t propre doit tre s par du c t acc s r glement par un vestiaire et des douches Le personnel doit retirer ses v tements de ville en entrant et mettre des v tements protecteurs sp ciaux Apr s le travail il doit enlever les v tements protecteurs pour que ceux ci soient pass s Pautoclave puis se doucher avant de partir 4 Lanimalerie doit tre ventil e au moyen d un systeme d evacuation d air muni de yi y filtres HEPA qui soit con u pour cr er une d pression circulation de Pair vers Pint rieur Le syst me de ventilation doit tre con u pour emp cher une inversion du sens de circulation de Pair et toute surpression dans les locaux de animalerie Il faut disposer d un autoclave deux portes pour Pechange de mat ri
117. UCTION DU RISQUE Avant de retirer une aiguille plant e dans un bouchon de caoutchouc fermant un flacon envelopper l aiguille et le bouchon dans un tampon de coton impr gn d un d sinfectant appropri Rejeter l exc s de liquide et les bulles d air en tenant la seringue verticalement dans un tampon de coton impr gn d un d sinfectant appropri ou dans un petit flacon contenant du coton Utiliser une enceinte de s curit biologique pour toutes les manipulations sur du mat riel biologique infectieux Placer les animaux dans un dispositif de contention pour les inoculer Utiliser des aiguilles ou des canules mousses pour Pinoculation intranasale ou orale Employer une enceinte de s curit biologique Apr s usage autoclaver et veiller liminer convenablement Si on utilise un ensemble jetable aiguille seringue ne pas les d solidariser avant l autoclavage Centrifugeuses de tubes A rosols projections et bris Utiliser des pots centrifuger de s curit ou des rotors scell s N ouvrir les pots ou les rotors qu apr s les avoir laiss reposer pendant 30 min ou le faire dans une enceinte de s curit biologique Ultracentrifugeuses de tubes A rosols projections et bris Monter un filtre HEPA entre la centrifugeuse et la pompe vide Tenir un registre d utilisation pour chacun des rotors et mettre en uvre un programme de maintenance pr vent
118. URITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE 3 Les femmes en age de procr er devront tre informees du danger que represente pour Penfant a naitre Pexposition professionnelle a certains micro organismes comme le virus de la rubeole par exemple Les mesures sp cifiques 4 prendre pour assurer la protection du foetus varient selon la nature du germe auquel la future m re peut tre expos e Formation Les mesures de s curit et les appareils et dispositifs de protection si efficaces soient ils risquent toujours d tre pris en d faut par Perreur humaine et la m diocrit de la technique La base de la pr vention des accidents des incidents et des infections d origine professionnelle est que le personnel se sente concern par la s curit et sache identifier et ma triser les risques qui existent dans le laboratoire C est pourquoi la for mation continue sur le tas aux mesures de s curit est indispensable Ce proces sus commence au niveau de la direction du laboratoire qui doit faire en sorte que la s curit des pratiques et des protocoles soit incorpor e la formation de base du per sonnel Les mesures de s curit doivent toujours faire partie int grante de V initiation des nouveaux membres du personnel au fonctionnement du laboratoire Il faut fami liariser les nouveaux employ s avec les dispositions du code de bonnes pratiques et leur indiquer les directives locales et notamment leur pr senter le manuel de labora toi
119. Un panneau briser en cas d urgence peut tre pr vu La surface des murs des sols et des plafonds doit r sister l eau et tre facile nettoyer Les orifices m nag s dans ces surfaces pour la tuyauterie par exemple doivent tre scell s pour faciliter la d contamination des salles Le laboratoire doit pouvoir tre ferm herm tiquement pour tre d contamin Des gaines seront install es pour permettre une d sinfection gazeuse Les fen tres doivent tre ferm es herm tiquement et r sister aux chocs Un lavabo pouvant tre command sans l aide des mains sera plac pr s de chaque porte de sortie Le syst me de ventilation doit cr er un courant d air dirig de la zone d acc s vers l int rieur de la salle Un dispositif de contr le visuel muni ou non d une alarme doit tre install de mani re que le personnel puisse s assurer que le flux d air est toujours correctement dirig Le syst me de ventilation doit tre construit de mani re ce que Fair qui sort du laboratoire de confinement s curit biologique niveau 3 ne soit pas recycl dans d autres zones du b timent Lair peut tre filtr au moyen d un filtre particules de haute efficacit HEPA reconditionne et recycl l int rieur de ce laboratoire 239 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Lair vacu du laboratoire autre que celui qui sort des enceintes de s curit
120. W09 sap 1100 s s sin no l QJAIND l IIAL p uN El ap 019 snos 9101U9 9 19 JON a 334V nb isule SjuepAxo S JAAP 1 1 19691 nbif l u 4n onp u sjueibeyepnue JU8AIOP 90118199 19 Sanb1119819 sil redde Sa 999401 UOHE U A 1890 misodsip UN 99AP lini n rpl lul 9 99UI 9 lu Sanu s wwejy ap Seq I ug139 un no sanboo g sa jaun s p anb sure saunja6 s 9 1u02 51081051 sjueb sap 1auod nead e Ja6a o1d as 1n04 001 92 9 QEWWWe JUI p 9 LUI g qew welu need El 1981U02 SLI ua 59 190 jueIXAUdSY 2 Y8 2 90 10 5 S 0 18 uolsn ap julod 3U0 99P suep 0111 05 ua UOISSa1d snos 05 199001 2 no 3919419 un p 9 0 02 1 280 HO H9 aualAjsoy 167 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE XDE UI s 9901102 18 anbysejd ulnlullunie alunos 4104 rded sajqepAxo u w 92 xnengyew sane 911018 10591 101991010 sasnaiabuep 9 10 1100 49 0 980 Ud lPSEU 10510 0 PI ap NO 590 5 sanblueBio gun no uoendLng p juos gsodwoa 50019 9 ap anbsiy 9 261 s sodul09 890 misodsip 99 ap
121. aison pressuris e Sur le plan de la concep tion et de Pamenagement un laboratoire pour travaux en combinaison pres suris e diff re sensiblement d un laboratoire de confinement s curit biologique niveau 4 dot d enceintes de s curit biologique de classe III Dans ce type de laboratoire les salles sont dispos es de mani re que le personnel passe par le vestiaire et la salle de d contamination avant d entrer dans le secteur o du mat riel biologique infectieux est manipul Une douche pour la decontamination des combinaisons doit tre install e et le personnel doit l utiliser avant de quitter les locaux du laboratoire de confinement Le per sonnel doit galement disposer d une douche avec un vestiaire int rieur et ext rieur Le personnel qui p n tre dans la zone o l on travaille en combi naison pressuris e est tenu de rev tir une combinaison d une seule pi ce en surpression avec filtre HEPA et alimentation en air L alimentation en air de la combinaison doit tre assur e par un syst me 100 de redondance avec une alimentation en air ind pendante utilisable en cas d urgence On entre dans le laboratoire travers un sas air dot de portes tanches Pair Le per sonnel qui travaille dans ce type de laboratoire doit disposer d un syst me d alarme qu il pourra utiliser dans l ventualit d une panne m canique ou d une d faillance de l alimentation en air voir chapitre 10
122. annexe les donn es de sant et de s curit conna tre au sujet d un certain nombre de produits chimiques couramment utilis s dans les laboratoires d analyses biologiques et de recherche accompagnees de quelques donn es g n rales et des pr cautions a observer 163 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE S UIUIE Sa 19 nblinilns aploe sauahojey sa sanbiue610 59500 00 SISAIP SIUPPAXO 59 DAAC 1 1 Jnayonpay S nbille ul S3981 ap aouasad ua no 5901 82 S32UE SqNs ap saploe sap 0196 snos as 1194 18 1951U02 Jed s p xol d sap g aguessieu Jauuop i d 2110 211dS81 U0199 01d aun Sanbo9 g s n uni s p onoyajnoea sjueh s p 19H04 UOHP HUSA ap suoHlpuo9 s uuoq ap suep no uuoq10s aun suep SIN 99110915 189 1inpoid a IS nb s sod n u SLUPPAXO syinpold 11899 e 59900911 590 1 91 9101294 sap suep 19449SU02 sapneyo S ILJNS sap IAL 198 u02 N0 awun U01 31p13 U1 S ll u p U s nu SaUULUE Sed 45 0 Sail 0 66 118198 P qulod sjisojdxa 1005 SunadeA ap saburjaw Sa lqpuluiPIuI 1490 90960190 WENO 191 8 19 10161099 jlasedde E41U92 90 915 5 INS
123. ans n gliger le risque d apparition de souches pharmacor sistantes Pour d terminer quel niveau de s curit biologique en laboratoire s applique un agent donn il faut proc der une valuation du risque Pour cela on doit prendre en compte non seulement le groupe de risque mais aussi un certain nombre d autres facteurs Par exemple un agent inclus dans le groupe de risque 2 n cessite g n ralement une installation un appareillage des pratiques et des modes op ratoires correspondant au niveau de s curit 2 si l on veut que le travail s effectue avec le minimum de risques Par contre si certaines manipulations impliquent la production d a rosols tr s concentr s il vaudra mieux passer au niveau 3 pour que les conditions MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE de s curit soient remplies car a ce niveau un meilleur confinement des a rosols sera assur dans le laboratoire La d termination du niveau de s curit biologique exig par une manipulation donn e consiste donc a appr cier le risque en professionnel plut t qu a adopter automatiquement le niveau de s curit correspondant au groupe de risque auquel appartient agent pathog ne en cause voir chapitre 2 Le tableau 3 r capitule les installations et moyens n cessaires chaque niveau de s curit biologique Pour d terminer le niveau de s curit biologique on prend donc en compte le micro organisme agent pathog ne les
124. ation comme un processus consistant proc der un ensemble de contr les et tablir des dossiers en vue d attester que les l ments de la structure des locaux ainsi que tout ou partie des systemes dont est quip le laboratoire ont t install s inspect s soumis a des essais de fonctionnement et constat s conformes aux normes nationales ou interna tionales selon le cas Ces prescriptions se fondent sur les crit res de conception et sur les fonctions respectives des divers systemes dont sera quip le laboratoire En d autres termes la mise en service d un laboratoire ne comportera pas les m mes exi gences pour tous les niveaux de s curit biologique 1 a 4 et elle sera d autant plus complexe que le niveau de s curit sera plus lev Des conditions climatiques comme des temp ratures tr s lev es ou tr s basses ou encore des valeurs extr mes de Phy grom trie de m me que des particularit s g omorphologiques comme la pr sence de lignes de faille peuvent galement influer sur la conception du laboratoire et par con s quent sur les exigences de mise en service Une fois la mise en service achev e les l ments structuraux importants du laboratoire et les divers quipements annexes auront t contr l s dans diverses conditions d exploitation et de d faut de fonction nement raisonnablement pr visibles et d clar s conformes Le processus de mise en service et les contr les de conformit doiv
125. atoire doit tre tenu propre et en ordre et exempt de tout produit ou objet non n cessaire aux travaux Les plans de travail doivent tre d contamin s 5 15 ont t souill s par des produits potentiellement dangereux ainsi qu la fin de la journ e de travail Tout les mat riels chantillons et cultures contamin s doivent tre d contamin s avant d tre jet s ou nettoy s pour tre r utilis s Lemballage et le transport des chantillons sont soumis a la r glementation nationale ou internationale pertinente Si les fen tres peuvent tre ouvertes elles doivent tre munies de grillages pour emp cher la p n tration des arthropodes Gestion de la s curit biologique 1 Il incombe au directeur la personne qui a la responsabilit directe du laboratoire de faire pr parer et adopter un plan de gestion de la s curit biologique ainsi qu un manuel pratique un guide de laboratoire ou un guide d hygi ne et s curit Le chef de laboratoire qui rel ve directement du directeur du laboratoire doit veiller ce que le personnel re oive une formation r guli re en mati re de s curit au laboratoire Le personnel doit tre averti des risques particuliers aux activit s du laboratoire et tenu de lire le manuel Il doit galement suivre les instructions et les protocoles normalis s Le chef de laboratoire devra s assurer de la bonne compr hension de ces instructions Le labo
126. au de gaze Verre et objets tranchants ou pointus 1 Dans la mesure du possible le verre sera remplac par du plastique Seul le verre de qualit laboratoire au borosilicate devra tre utilis et le mat riel br ch ou f l sera jet 2 Il ne faut pas utiliser des aiguilles hypodermiques en guise de pipettes voir gale ment dans le pr sent chapitre la section intitul e Comment viter l inoculation accidentelle de mat riel infectieux Frottis gouttes paisses La fixation et la coloration des chantillons de sang d expectorations et de selles aux fins d examen microscopique ne tuent pas obligatoirement tous les micro organismes ou les virus qu ils contiennent Il faut donc manipuler les frottis et les gouttes paisses avec des pinces les conserver de mani re appropri e et les d contaminer ou les auto claver avant limination Appareils automatiques g n rateurs d ultrasons agitateurs vortex 1 Il faut utiliser des appareils confin s pour viter la diss mination de gouttelettes ou d a rosols 2 Les effluents seront recueillis dans des r cipients ferm s pour autoclavage ult rieur et limination e 84 12 TECHNIQUES DE LABORATOIRE 3 Lappareillage doit tre d sinfect Pissue de chaque s ance de travail en suivant les instructions du fabricant Tissus 1 Il faut utiliser des fixateurs formol s 2 Les coupes a la cong lation doivent tre vit es Si n cessaire on
127. avant limination 1 L1 Signature du contr leur Date d ach vement du contr le 48 PARTIE Il S ret biologique en laboratoire 0 Principes de la s ret biologique en laboratoire Tusqu ici le contenu du Manuel de s curit biologique en laboratoire a surtout consist dans un expos des principes classiques de la s curit biologique en laboratoire Les pr c dentes ditions montrent combien il est important que les laboratoires aient recours a de bonnes techniques microbiologiques disposent de systemes de confine ment appropri s et d installations bien con ues et agenc es avec des quipements correctement utilis s et entretenus et qu en outre les services administratifs veillent a r duire au minimum les risques de lesions ou de maladie chez le personnel Si les laboratoires suivent ces recommandations ils seront galement 4 m me de r duire au minimum les risques pour l environnement et la collectivit dans son ensemble Divers v nements survenus ces derni res ann es dans le monde mettent en lumi re la n cessit de prot ger les laboratoires et les mati res qu ils d tiennent contre un certain nombre de p rils susceptibles d entra ner des dommages pour la population le b tail l agriculture ou l environnement Avant de voir quels peuvent tre les besoins des laboratoires en mati re de s ret biologique il convient de d finir clairement ce que
128. biologique sera rejet directement 3 Pexterieur du batiment de fa on a tre dis pers loin des b timents occup s et des prises d air Selon les agents utilis s on pourra vacuer cet air en le faisant passer au pr alable a travers des filtres HEPA On pourra installer un systeme de r gulation du chauffage de la ventilation et de la climatisation de qui vite toute surpression permanente dans le laboratoire On peut envisager installation d un dispositif d alarme acoustique ou visuelle parfaitement distinct pour pr venir le personnel en cas de panne du syst me de r gulation 9 Les filtres HEPA doivent tous tre install s de mani re permettre la d contami nation gazeuse ou les essais de fonctionnement 10 Les enceintes de s curit biologique doivent tre situ es hors des zones de passage et des courants d air entre les portes et les systemes de ventilation 11 Lair qui sort des enceintes de s curit de classe I et II voir chapitre 10 apr s passage au travers des filtres HEPA doit tre vacu sans perturber le flux d air ni dans Tenceinte ni dans le syst me d a ration du b timent 12 Il faut disposer dans la salle m me du laboratoire d un autoclave pour la d con tamination des d chets Si des d chets infectieux doivent tre transport s Pex t rieur du laboratoire de confinement pour d contamination et limination le transport doit s effectuer dans des conteneurs incassables herm
129. bo tes anti piques munis de couvercles et trait s comme du mat riel infectieux 19 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE 3 Mat riel contamin destin tre d contamin par passage Pautoclave puis lav et r utilis ou recycl 4 Mat riel contamin destin tre autoclav puis limin XA 5 Mat riel contamin destin a tre directement incin r Objets pointus ou tranchants Apr s usage les aiguilles hypodermiques ne doivent pas tre recapuchonn es cass es ou d sadapt es des seringues jetables L ensemble complet devra tre plac dans un collecteur sp cialement destin ce type d objet Les seringues jetables utilis es seules ou avec une aiguille devront tre plac es dans des collecteurs sp ciaux pour objets pointus ou tranchants puis incin r es apr s autoclavage pr alable si n cessaire Les collecteurs pour objets pointus ou tranchants doivent tre imperforables ou du moins r sistants la perforation et ne pas tre compl tement remplis Une fois remplis aux trois quarts ils seront plac s dans d autres conteneurs pour d chets infectieux et incin r s apr s passage pr alable Pautoclave si la pratique du laboratoire l exige Les collecteurs d objets pointus ou tranchants ne doivent en aucun cas tre jet s dans des d charges Mat riel contamin potentiellement infectieux destin tre autoclav et recycl Il ne faut tenter aucu
130. bono1d ua agUe ND El 19S19APJ 1194 999199009 ap d aun 19 1 95 un s snpu Sap 91490 991 sap S lpud s p juenbonoid Ud 9ul 1s S l ins WHY sil inq p 00 9 27 uolsn ap julod 910191910 82 un p 910 09UI apinb1 N H 9 UIPH d 2039 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE QUIZ 91 19 ulnipos unpid 9 wunissejod l yU 9 50 904959 0 ua abeyneyo Jed aouaasapueou dane 11 E9H Xn lU919S ple 19 jqewwe u ap JURWWJO 9 06 e nea dane yWHeay SOL S D P Sa 19 S UePAXO S 29AB JUSLWWAIOIA yiegy aena 019910 0 un nb ISUIE s1na 99 01d sap 19 5108 Sap 191104 SinadeA sap uolen PA p 890 Inisodsip UN 1911 PARAL asnainof li aualbAy aun 13119500 asaissnod ej ap UOISJACSIP El 191144 seo ua s nbixo no 91 2186 ap no sinadeA 1 lq snqulo9 l d uoHsodx p 582 ua 1199111 0 156 5910 0 1 19 s lbuo s p 91nu 2 9 16 001 04 un m d aaissnod ap uonejeyu T nead ej 19 Xn s anod uey 00589 Inga p julod 0 112 0 0 1 uolsn ap 1
131. bules 23 35 36 vaccination du personnel 157 v tements de protection 29 vecteurs 114 combinaisons 29 d expression 114 pressuris es 29 30 viraux 114 ventilation xyl ne 210 animaleries 34 enceintes de s curit biologique 24 30 zone d irradiation 128 129 58 60 62 63 zones de travail laboratoire 11 12 219
132. c es et les nouveaux progr s de la science Si ces valuations sont men es cor rectement elles permettront l humanit de continuer tirer profit du g nie g n tique dans les ann es venir Pour de plus amples informations le lecteur est pri de consulter les r f rences 17 et 46 48 117 PARTIE VI S curit chimique alectrique et incendie 17 Les risques chimiques Le personnel des laboratoires de microbiologie est expos a des produits chimiques dangereux tout autant qu des germes pathog nes Il est donc primordial qu il ait une bonne connaissance des effets toxiques de ces produits de leurs voies d exposition et des risques que comportent leur manipulation et leur stockage voir annexe 5 On peut obtenir aupr s des fabricants ou des fournisseurs des fiches de s curit chimique ou d autres types d information sur les risques de nature chimique Le personnel des laboratoires o de tels produits sont employ s doit avoir acc s cette documentation sous une forme ou une autre qui peut par exemple tre incluse dans le manuel de laboratoire ou le guide d hygi ne et de s curit Voies d exposition On peut tre expos des produits chimiques dangereux par 1 Inhalation 2 Contact 3 Ingestion 4 Piq re d aiguille 5 L sion cutan e Stockage des produits chimiques Il ne faut conserver au laboratoire que la quantit de produits n cessaire pour l usage quotid
133. cidentel de produits chimiques 122 Gaz comprim s et liqu fi s 123 18 Autres types de risques au laboratoire 125 Risque d incendie 125 Risques lectriques 126 Bruit 126 Rayonnements ionisants 127 PARTIE VII La s curit organisation et formation 131 19 Le responsable de la s curit et le comit de s curit 133 Le d l gu la s curit 133 Le comit de s curit biologique 134 20 La s curit du personnel de maintenance et d entretien 136 Services de maintenance des appareils et des b timents 136 Nettoyage 136 21 Programmes de formation 137 evi TABLE DES MATIERES PARTIE VIII Liste des contr les de s curit 141 22 Liste des contr les de s curit 143 Locaux 143 Entreposage 144 Assainissement et locaux pour le personnel 144 Chauffage et ventilation 144 Eclairage 144 Services 144 S ret biologique en laboratoire 145 Pr vention des incendies et protection contre le feu 145 Stockage des liquides inflammables 146 Gaz comprim s et liqu fi s 146 Risques lectriques 147 Protection individuelle 147 Sant et s curit du personnel 148 Appareils et quipements de laboratoire 148 Mat riel infectieux 149 Produits chimiques et mati res radioactives 149 PARTIE IX Bibliographie annexes et index 151 Bibliographie 153 Annexe 1 Premiers secours 156 Annexe 2 Vaccination du personnel 157 Annexe 3 Centres collaborateurs de l OMS pour la s curit biologique 158 Annexe 4 S curit d emploi des appareils
134. cidentellement dans une ESB il faut nettoyer immediatement le volume de travail pendant que Penceinte con tinue fonctionner On utilisera cet effet un d sinfectant efficace que Pon devra appliquer en s effor ant de produire le moins d a rosols possible Tout ce qui entre en contact avec le produit r pandu doit tre d sinfect ou pass a Pautoclave Agr ment La proc dure d agrement stipule qu un contr le doit tre effectu sur chaque ESB pour v rifier quelle fonctionne conform ment aux sp cifications nationales et inter nationales et ne pr sente pas de d faut Ce contr le doit tre pratiqu lors de Finstal lation puis p riodiquement par des techniciens qualifi s conform ments aux instructions du fabricant Pour valuer Pefficacit du confinement assur par une enceinte il faut proc der aux contr les suivants int grit de la structure pr sence eventuelle de fuites au niveau des filtres HEPA parametres velocimetriques du flux d air descendant vitesse frontale du courant d air contr le manom trique de la d pression debit des ventilateurs essai au fumigene pour contr ler le flux d air alarmes et asservissement du verrouillage On peut galement effectuer d autres con tr les facultatifs d fauts d isolation lectrique intensit de TPeclairage intensit du rayonnement UV niveau de bruit et vibrations Une formation des comp tences et des quipements sp cialis s sont indispen
135. citer Paide Les risques chimiques lectriques radiologiques et incendie sont examin s plus en d tail dans la partie VI du pr sent manuel chapitres 17 et 18 Des informations compl mentaires sur les quipements de s curit sont donn es au chapitre 11 21 4 Le laboratoire de confinement S curite biologique niveau 3 Le laboratoire de confinement s curit biologique niveau 3 est con u et pr vu pour les travaux faisant intervenir des micro organismes du groupe de risque 3 et des volumes importants ou de fortes concentrations de micro organismes du groupe de risque 2 dont la manipulation risque davantage de provoquer la diffusion d a rosols Le degr de confinement qu implique le niveau de s curit 3 exige le renforcement des programmes de travail et de s curit par rapport a ceux des laboratoires de base s curit biologique niveaux 1 et 2 expos s au chapitre 3 Les recommandations qui figurent dans le pr sent chapitre sont pr sent es sous la forme d additifs a celles qui concernent les laboratoires de base niveaux de s curit 1 et 2 lesquelles doivent donc tre appliqu es avant les recommandations particuli res aux laboratoires de confinement s curit biologique 3 Les additions et modifications les plus importantes concernent 1 Le code de bonnes pratiques 2 La conception et l am nagement du laboratoire 3 La surveillance m dico sanitaire Les laboratoires de cette cat go
136. cologique reconnue qui pourrait se r v ler nocive par exemple si on a affaire des Toxines Cytokines Hormones R gulateurs de l expression g nique Facteurs de virulence ou d accroissement de la virulence S quences oncog nes Facteurs d antibior sistance Allerg nes Qo XI OX Ur HS Qo D Dans chaque cas il faut valuer le niveau d expression n cessaire pour qu une acti vit biologique ou pharmacologique se manifeste Dangers li s au receveur ou a Vh te 1 Sensibilit de Ph te 2 Pathog nicit de la souche h te et notamment sa virulence son infectiosit et sa production de toxines 3 Modification de la gamme d h tes 4 Etat immunitaire du receveur 5 Cons quences d une exposition Dangers li s a la modification de certains facteurs de pathog nicit Il y a beaucoup de modifications qui n impliquent pas de g nes dont les produits sont intrins quement nocifs mais des effets ind sirables peuvent se produire par suite de la modification des facteurs pathog nes ou non pathog nes existants La modification d un g ne normal peut avoir des r percussions sur la pathog nicit Pour reconna tre ces dangers potentiels il faut se poser les questions suivantes liste non exhaustive 1 Y a t il augmentation de l infectiosit ou de la pathog nicit 2 L insertion du g ne tranger peut elle compenser une mutation incapacitante chez le receveur 3 Le g ne
137. combinaison de protection pressuris e Enceinte de s curit biologique de classe II type A1 La figure 7 repr sente une enceinte de s curit biologique de classe II type Al Un ventilateur plac a Pinterieur de Penceinte aspire Pair par Pouverture frontale et le fait passer travers la grille avant Au niveau de louverture frontale Pair doit tre aspir a la vitesse minimum de 0 38 m s Lair traverse ensuite un filtre HEPA avant de se diriger vers le bas pour passer sur le plan de travail Au cours de son mouvement descendant le courant d air se divise une distance d environ 6 18cm du plan de travail pour former deux courants secondaires l un qui passe travers la grille avant 59 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE aa ad M A coupe de face coupe lat rale Bi air ambiant air potentiellement contamin air filtr par le filtre HEPA Figure 7 Repr sentation sch matique d une enceinte de s curit biologique de classe 11 type A1 A ouverture frontale B panneau d observation a guillotine filtre HEPA d vacua tion D chambre de distribution arri re E filtre HEPA d admission F ventilateur et l autre travers la grille arri re Toutes les particules d a rosol qui se forment au niveau du plan de travail sont imm diatement pi g es par ce courant descendant et entra n es travers les grilles avant ou arri
138. conference on recombinant DNA molecules Science 1975 188 991 994 Union Europ enne Directive 98 81 CE du Conseil du 26 octobre 1998 modifiant la direc tive 90 219 CEE relative l utilisation confin e de micro organismes g n tiquement modifi s Journal officiel des Communaut s europ ennes 1998 L330 13 31 O Malley BW Jr et al Limitations of adenovirus mediated interleukin 2 gene therapy for oral cancer Laryngoscope 1999 109 389 395 Organisation mondiale de la Sant Maintenance and distribution of transgenic mice sus ceptible to human viruses memorandum from a WHO meeting Bulletin of the World Health Organization 1993 71 497 502 Furr AK CRC handbook of laboratory safety 5th ed Boca Raton FL CRC Press 2000 Lenga RE The Sigma Aldrich Library of Chemical Safety Data 2nd ed Milwaukee WI Aldrich Chemical Company 1988 Lewis RJ Sax s dangerous properties of industrial materials 10th ed Toronto John Wiley and Sons 1999 155 ANNEXE 1 Premiers secours Les premiers secours consistent dans Papplication immediate par des personnes qualifi es de principes m dicaux reconnus sur le lieu d un accident C est la m thode admise pour traiter un accident en attendant qu il puisse tre pris en charge par un m decin en vue du traitement d finitif de ses l sions Le mat riel minimum pour les premiers secours se compose d une trousse de premiers soins de v tements de protection et
139. ctieux sont transport s hors d une ESB dans des conteneurs approuv s conform ment la r glementation relative au transport de ce type de produit Q C Commodit s Lavabo install pr s de la sortie du laboratoire El 1 Signature du contr leur 2 Date d ach vement du contr le 47 Tableau 7 Laboratoire de confinement S curit biologique niveau 3 contr le de s curit Ce formulaire est a utiliser avec les formulaires de contr le bios curitaire pour les laboratoires s curit biologique niveau 1 et s curit biologique niveau 2 POINTS CONTROLES NOTER LA DATE OUI NON SANS OBJET OBSERVATIONS Etablissement Laboratoire s par des points de passage normaux du batimelitczzz ARR ui nat l O Acc s au laboratoire par un vestibule dot de portes fermeture automatique l O Des joints d tanch it sont pos s ou peuvent F tre au niveau de toutes les travers es en vue de la d contamination du laboratoire l O Air du local non recycl et vacu hors des secteurs l O Syst me de ventilation r gul permettant le contr le du sens de circulation
140. d entrer ESB de classe 11 ou combinaisons pressuris es Douche avant de sortir D contamination de tous les d chets avant sortie de l installation NSBA niveau de s curit biologique de l animalerie ESB enceinte de s curit biologique Comme les laboratoires les animaleries peuvent tre concues en fonction du groupe de risque auquel les micro organismes tudi s appartiennent ou de Pevalua tion du risque qu ils repr sentent et correspondre aux niveaux de s curit biologique 1 2 3 ou 4 329 6 ANIMALER ES Eu gard aux agents utilis s dans un laboratoire d experimentation animale les facteurs suivants sont a prendre en consideration 1 La voie normale de transmission 2 Les volumes et concentrations qui seront utilis s 3 La voie d inoculation 4 La voie possible d excretion Eu gard aux animaux d exp rience utilis s au laboratoire les facteurs suivants sont a prendre en consid ration 1 La nature des animaux savoir leur agressivit et leur tendance mordre ou griffer 2 La nature de leurs ecto ou endoparasites 3 Les zoonoses auxquelles ils sont sensibles 4 La propagation possible d allergenes Comme dans le cas des laboratoires les exigences relatives a la conception a Pequipement et aux pr cautions observer sont d autant plus rigoureuses que le niveau de s curit biologique est plus lev Elles sont expos es ci dessous et r sum es dans le tabl
141. d ua jeapuao UOISN 10100 20 0 s p 1910 1 00 uolui p 391n0S 9UIIQUUULUEIUIP XnNaAsJau 15 5 ins anb joogje ez jouedoid S UEp XO sa 28e 91no p S2UEJSIP SOUUWI 0 211 L 1194 591101010591 HOH92 8H9 asnanbe juawasnainobin 19 5901 1910 115199 p 1 10d S 10A S 19 un p 340p loupdoldosi uonnjos 27 116691 1194 5109101291 S 19 1 SZAL Xn Sa anod 81 09 pinbi 2 10000 4 9 SANDISAHd sanosi 5391 S31TT1811Yd41N09N1 Y SNOILNYIJYd 310030 1 0 3 0919 JLNYS YT 4 04 53 0918 S3131Hd0Hd ANDIWIHD 1110094 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE SOL sapioe Sa 19 s nb 1 u SJUPPAXO S JUSWWAIOIA yiegy 91 9109100 S U U 919A sap 19 Sl1UP sap asloyesdsas u01 99 01d aun Jayod no sanader sap 890 11150051 UN UOIJP USA SNOS 191 PABAL SIISO dX 1405 sinadeA 1re s upi ul s alpuadul p seo ua sanbixo no suepi ze6 no sanader juswabebaq 96 zl 9110150 0 5910 2 02 118 99 p 10100 QEL L EHU 5911 xneuas 19 s nb yed y s lqno s p JenboaoJd m d i d i uonsodx aun assa qiey P S UBWASSILUOA s p ej ap sayeulwopqe singjnop s p guledjua uons ul 1 a1n 01Q ap uoljesuas aun 19 sunabnos s p juen
142. de secours locaux ou nationaux doivent tre inform s des dangers potentiels qui existent l int rieur ou au voisinage des b timents Ils ne pourront y p n trer qu accompagnes d un membre exp riment du personnel Le mat riel infectieux devra tre recueilli dans des conteneurs tanches ou des sacs jetables en mat riau r sistant Il appartient l quipe de s curit de 90 13 PLANS D URGENCE ET CONDUITE TENIR EN CAS D URGENCE d terminer en fonction de la r glementation locale ce qui peut tre r cup r et ce qui doit tre jet Services de secours qui s adresser Les num ros de t l phone et adresses suivantes seront plac s bien en vidence dans les locaux de l tablissement 1 Nm He D o N Nom adresse et plan d acc s de Petablissement ou du laboratoire pas n cessaire ment connus par la personne qui appelle ou le service appel Directeur de l tablissement ou du laboratoire Chef de laboratoire D l gu la s curit biologique Service incendie pompiers H pitaux ambulances personnel m dical nom des divers centres de soins cli niques services ou du personnel m dical si possible Police M decin 9 10 Technicien responsable Services des eaux du gaz et de l lectricit Equipement et mat riel de secours Les quipements de secours suivants doivent tre disponibles 1 2 Trousse de premiers secours compo
143. des formes de traitement par la chaleur s che Lautoclavage est la mani re la plus efficace d utiliser la chaleur humide L bullition ne tue pas n cessairement tous les micro organismes et les germes pathog nes mais on peut y recourir comme traitement sterilisateur minimum lorsque d autres m thodes d sinfection ou d contamination chimique autoclavage ne sont ni utilisables ni disponibles Les objets st rilis s doivent tre manipul s et rang s de mani re a rester st riles jusqu au moment de leur utilisation Autoclavage Le traitement par la vapeur saturante sous pression autoclavage constitue le moyen le plus efficace et le plus fiable pour st riliser le mat riel de laboratoire Dans la plupart des cas les cycles suivants assurent la st rilisation si autoclave a t correctement charg 1 Temps de palier de 3 min a 134 C 2 Temps de palier de 10 min a 136 C 3 Temps de palier de 15min a 121 C 4 Temps de palier de 25 minutes a 115 C Parmi les divers types d autoclaves on peut citer les suivants Autoclaves vapeur directe Le sch ma d un de ces autoclaves est repr sent la figure 10 La vapeur p n tre dans la chambre sous pression et d place Pair plus lourd vers le bas celui ci passe ensuite dans la vanne d vacuation de la chambre a travers un filtre HEPA Autoclaves a extraction d air Dans ces appareils Pair est extrait de la chambre avant admission de la va
144. du bicarbonate d ammonium gazeux pour neutraliser le formald hyde La fumigation de petits volumes avec du peroxyde d hydrog ne en phase gazeuse est galement efficace mais il faut un appareillage sp cial pour la production du gaz D contamination des enceintes de s curit biologique Pour d contaminer les enceintes de s curit biologique de classes 1 et TI il existe un appareillage qui permet de produire de faire circuler et de neutraliser ind pendam ment le formald hyde On peut aussi mettre la quantit d sir e de paraformald hyde pour une concentration finale de 0 8 de formaldehyde dans lair dans une po le frire que l on place ensuite sur une plaque chauffante lectrique On introduit gale ment dans l enceinte une autre po le contenant une quantit de bicarbonate d am monium de 10 sup rieure celle de paraformald hyde et on la place sur une autre plaque chauffante Les prises d alimentation des plaques chauffantes doivent se trouver hors de l enceinte de mani re pouvoir r gler les plaques depuis l ext rieur 100 14 DESINFECTION ET STERILISATION en les branchant ou en les d branchant selon le cas Si Phumidite relative est inf rieure 70 06 il faut galement placer dans Penceinte un r cipient ouvert contenant de l eau chaude avant de fermer herm tiquement le panneau frontal avec du ruban pais par exemple du ruban adh sif entoil Une paisse feuille de plastique est ensui
145. e 93 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Beaucoup de germicides peuvent tre nocifs pour l homme et l environnement Il faut donc les choisir les stocker les manipuler les utiliser et les liminer avec le plus grand soin en respectant les instructions du fabricant Lorsqu on pr pare des dilu tions de germicides chimiques il est recommand pour des raisons de s curit indi viduelle de porter des gants un tablier et une protection oculaire Il n est g n ralement pas n cessaire d utiliser un germicide chimique pour le net toyage habituel des sols des murs des quipements et du mobilier On peut toutefois avoir avantage le faire dans certains cas par exemple pour juguler une flamb e pid mique Une utilisation judicieuse des germicides chimiques contribue la s curit du lieu de travail en r duisant le risque de contamination par des agents infectieux Dans la mesure du possible on s efforcera d utiliser un nombre limit de produits pour faire des conomies faciliter l inventaire des stocks et r duire la pollution de l environnement On trouvera ci apr s une description des divers types de germicides chimiques avec des informations g n rales sur leurs applications et leur s curit d emploi Sauf indication contraire les concentrations sont donn es en poids par unit de volume p v Le tableau 12 r capitule les dilutions recommand es pour les compos s lib rant du chlore
146. e Dr Riccardo Wittek Institut de biologie animale Universit de Lausanne Lausanne Suisse Nous exprimons galement notre gratitude aux personnes suivantes pour l aide qu elles nous ont apport e Mme Maureen Best Bureau de la s curit des laboratoires Sant Canada Ottawa Canada Dr Mike Catton Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory North Melbourne Australie REMERC EMENTS Dr Shanna Nesby Office of Health and Safety Centers for Diseases Control and Prevention Atlanta GA Etats Unis d Amerique Dr Stefan Wagener Canadian Science Centre for Human and Animal Health Winnipeg Canada Les auteurs et les membres du comit de lecture souhaitent galement exprimer leur gratitude aux nombreux sp cialistes qui ont contribu a la premi re et a la seconde dition du present manuel ainsi qu la r daction de la publication de POMS intitul e Safety in health care laboratories 1997 1 xi 1 Principes g n raux Introduction Dans tout le manuel il est fait r f rence au danger relatif que repr sentent les micro organismes infectieux au moyen d une classification par groupe de risque groupes de risque de POMS 1 2 3 et 4 Cette classification par groupe de risque n est appli cable qu aux travaux de laboratoire Ces groupes de risque sont explicit s dans le tableau 1 Tableau 1 Classification des micro organismes infectieux par groupe de risque Groupe de risque 1 risque fa
147. e Toutefois en l ab sence de telles prescriptions c est la r glementation internationale qu il convient de se conformer Il importe de noter que le transport international des mati res infectieuses est galement soumis la r glementation nationale relative l import export Le syst me du triple emballage La figure 11 donne un exemple de triple emballage qui constitue le meilleur syst me pour le transport des mati res infectieuses ou potentiellement infectieuses Cet embal lage comporte trois couches successives un r cipient primaire un emballage se condaire et un emballage ext rieur Le r cipient primaire qui contient l chantillon doit tre herm tique parfaitement tanche et son contenu doit tre indiqu sur une tiquette Ce premier r cipient est envelopp dans un volume suffisant de mat riau absorbant pour qu en cas de bris ou de fuite tout le liquide de l chantillon soit absorb Le r cipient primaire est plac dans un deuxi me emballage galement herm tique et tanche qui sert de protection Plusieurs r cipients primaires envelopp s de mat riau absorbant peuvent tre plac s dans un m me emballage secondaire Certains textes r glementaires indiquent la limite de poids ou de volume autoris e pour les colis de mati res infectieuses La troisi me couche qui constitue Pemballage ext rieur prot ge d emballage se condaire contre les dommages mat riels qui pourraient se prod
148. e 210 2 4 dinitroph nylhydrazine 185 dioxane 186 dioxyde de carbone solide 186 de chlore 96 187 de di thyl ne 186 directeur du laboratoire 12 133 disjoncteurs 126 dispositif anti retour 15 24 diss mination de mat riel infectieux viter la 78 79 douches 29 35 bullition 102 chantillons 77 78 conteneurs 77 84 107 tiquetage 83 84 ouverture des colis 77 78 des tubes et chantillonnage 84 pour lesquels les informations sont limit es 8 pr cautions d usage 83 85 r ception 77 r colte 83 84 syst me du triple emballage 107 108 transport 77 84 clairage 14 144 coulement laboratoire de confinement 31 cran anti projections 69 crans faciaux visi res 11 72 73 effluents liquides contamin s 11 12 31 enceinte vacuation totale 64 213 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE enceinte de laboratoire de classe III 29 30 r gulation de la ventilation 30 31 enceintes de s curit biologique ESB 57 67 69 agr ment 66 animaleries 34 35 choix 58 63 64 classe I 58 62 classe II 59 62 type Al 59 60 62 types A2 B1 et B2 61 62 classe III 62 laboratoire 29 30 contamination par des prions 86 d contamination 67 100 emplacement 24 64 raccordements pour l vacuation de Pair 62 63 utilisation et maintenance 65 syst matique 16 23 24 sans risque 64 67 79 enc phalopathie spongiforme bovine ESB 85 enfants 10 quipement et v tements de protection individuelle 72 74 animale
149. e biblioth ques d ADN g nomique provenant de micro organismes pathog nes 3 Les produits g niques peuvent avoir une activit pharmacologique 4 Les produits g niques codent pour des toxines Vecteurs viraux pour le transfert de g nes On utilise certains virus des ad novirus par exemple pour transf rer des g nes dans d autres cellules Ces vecteurs sont d pourvus des g nes qui commandent la r plica tion et on les cultive dans des lign es cellulaires capables de compenser ce d faut Il peut arriver que ces vecteurs soient contamin s par des virus capables de se r pli quer virus qui apparaissent dans la lign e cellulaire la faveur de rares recombinaisons spontan es ou peuvent aussi tre pr sents en raison d une purification insuffisante Ces vecteurs doivent tre manipul s au m me niveau de s curit biologique que les ad novirus dont ils d rivent 114 16 SECURITE ET TECHNOLOGIES DE RECOMBINAISON DE LADN Animaux transg niques et animaux knock out Les animaux porteurs de g nes trangers animaux transg niques doivent tre mani pul s a un niveau de confinement correspondant aux caract ristiques des produits de ces g nes Les animaux chez lesquels on a proc d la d l tion de certains g nes particuliers animaux knock out ne pr sentent g n ralement pas de danger sur le plan biologique Parmi ces animaux transg niques figurent ceux qui expriment les r cepteurs de vir
150. e confinement s curit biologique niveau 3 laboratoire de confinement haute s curit s curit biologique niveau 4 Le niveau de s curit biologique est un indice composite bas sur le type d organisation le mode de construction les moyens de confinement et Pappareillage du laboratoire ainsi que sur les pratiques et modes op ratoires observer pour travailler sur des agents appartenant aux divers groupes MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Tableau 2 Rapport entre groupe de risque et niveau de s curit biologique pratiques et appareillage GROUPE DE NIVEAU DE TYPE DE PRATIQUES APPAREILLAGE DE RISQUE SECURITE LABORATOIRE DE PABORATOIRE SECURITE 1 De base niveau Enseignement BTM Aucun de s curit de base paillasse sans biologique 1 protection 2 De base niveau Services de BTM et Paillasse sans de s curit sant primaires v tements protection et biologique 2 laboratoire protecteurs ESB contre le d analyses ou logo de risque risque de recherche biologique d a rosols 3 Confinement Diagnostic Comme niveau ESB ou autres niveau de sp cialis 2 plus moyens de s curit recherche v tements confinement biologique 3 Sp ciaux acc s primaire pour r glement et l ensemble des flux d air dirig activit s 4 Confinement Manipulation Comme niveau ESB classe III haute s curit de germes 3 plus sas a air ou niveau de pathog nes l entr e combinaisons s curit
151. e contre les incendies Des panneaux judicieusement plac s bien en vidence dans chaque salle dans les couloirs et les halls devront mettre en garde le personnel et indiquer la conduite a tenir ainsi que les issues de secours a emprunter Les causes les plus courantes d incendie au laboratoire sont les suivantes 1 La surcharge lectrique 2 Le mauvais entretien du circuit lectrique par ex une isolation d fectueuse ou en mauvais tat 3 La longueur excessive des tuyaux de gaz et des rallonges lectriques 4 Les appareils laiss s allum s inutilement 5 Des appareils ou quipements qui n ont pas t con us pour une utilisation en laboratoire 6 Les flammes nues 7 Des tuyaux de gaz endommag s 8 Des n gligences dans la manipulation et Pentreposage des produits inflammables ou explosifs 9 Des n gligences dans la s paration des substances chimiques incompatibles 10 La pr sence d appareils ou d quipements produisant des tincelles proximit de produits ou de vapeurs inflammables 11 Une ventilation mal adapt e ou insuffisante 125 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Tableau 15 Les divers types d extincteurs et leur usage TYPE UTILISER SUR NE PAS UTILISER SUR Eau Papier bois tissu Feux d origine lectrique liquides inflammables m taux incandescents Dioxyde de carbone C03 Liquides et gaz M taux alcalins papier Gaz extincteurs inflammables feux d orig
152. e gaz Toutes les bouteilles arrim es Bouteilles de r serve munies de bouchons Gaz asphyxiants ou toxiques pr sents uniquement dans les salles ventil es 22 Pr sence de bouteilles vides ou en 065 Produits chimiques Produits inflammables rang s dans Farmoire 22528 ayan u l lal Double datage des produits g n rateurs de peroxydes r ception et ouverture 222222226 Bonne s paration des produits Produits dangereux rang s au dessus du niveau des N ES RE Produits rang s au 301 5 2 2 2222 R cipients de produits chimiques rest s ouverts Bon tiquetage de toutes les solutions Utilisation de thermom tres mercure 2 R frig rateurs cong lateurs chambres froides Pr sence d aliments pour la consommation humaine Produits inflammables dans des unit s l preuve des explosions ou s curis es Pr sence de substances canc rog nes radioactives ou d un risque biologique indiqu e par une marque ext rieure Syst me d ouverture d urgence des chambres froides 439 Niveau de s curit biologique Joindr
153. e le formulaire de contr le bios curitaire correspondant MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE POINTS CONTROLES NOTER LA DATE OUI Equipement lectrique NON SANS OBJET OBSERVATIONS Pr sence de rallonges 222 l Prises femelles la terre et avec la polarit appropri e Branchements proximit des viers sous les douches ete n eas a E l Appareils avec fils effiloch s ou endommag s l Prises surcharg es ou plaquettes connexions l Plaquettes connexions non pos es sur le 501 l Fusibles appropri s dans les gaines l Les prises proches de l alimentation en eau sont conformes la r glementation locale l C bles lectriques la terre l Radiateurs portables l Equipement de protection individuelle Rince yeux dans le laboratoire Douche de s curit lt 2 nanas l Equipement de protection individuelle gants blouses lunettes de s curit lunettes coques etc l Personnel portant des v tements appropri s l Blouses combinaisons sarraus gants et autres v tements ou accessoires de protection non
154. e plus possible la dur e d exposition 2 Se tenir le plus loin possible de la source de rayonnement 3 Disposer un blindage autour de la source de rayonnement 4 Substituer aux radionucl ides d autres techniques non radiom triques Les mesures de protection sont les suivantes 1 Dur e d exposition On peut r duire la dur e d exposition au cours des manipula tions de substances radioactives En s exer ant pratiquer les techniques nouvelles et non famili res sans utiliser de radionucl ide jusqu ce qu on les ma trise parfaitement 127 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE En utilisant les radionucl ides en temps voulu avec prudence et sans pr cipi tation En veillant a ce qu une fois utilis es toutes les sources radioactives soient imm diatement replac es dans leur lieu de stockage En liminant fr quemment du laboratoire les d chets radioactifs En passant le moins de temps possible dans la zone ou dans le laboratoire o il y a risque irradiation En s exer ant bien g rer et planifier les manipulations de substances radio actives et leur dur e Moins on passe de temps dans le champ d irradiation plus la dose re ue indi 4 viduellement est faible comme le montre Pequation suivante Dose D bit de dose x temps 2 Distance la source Pour la plupart des rayonnements y ou X le debit de dose varie comme Pinverse du carr de la distance
155. eau 4 Ces directives sont cumulatives c est dire qu chaque niveau de s curit s appliquent toutes celles qui valent pour les niveaux inf rieurs Animalerie S curit biologique niveau 1 C est le niveau qui convient pour conserver la plupart des animaux d levage apr s la quarantaine Pexception des primates propos desquels il convient de consulter les autorit s nationales et les animaux inocul s volontairement avec des agents du groupe de risque 1 Une bonne technique microbiologique est indispensable Le responsable de l animalerie doit d terminer la ligne de conduite g n rale les proc dures et les protocoles applicables l ensemble des op rations et en ce qui concerne l acc s au vivarium Une surveillance m dicale appropri e du personnel doit tre insti tu e Un guide d hygi ne et s curit ou un manuel pratique doivent tre r dig s et le personnel doit s y conformer Animalerie S curit biologique niveau 2 C est le niveau qui convient pour le travail sur les animaux inocul s volontairement avec des agents appartenant au groupe de risque 2 Les mesures de s curit suivantes sont applicables 1 Toutes les exigences relatives aux animaleries s curit biologique niveau 1 doivent tre respect es 2 Des panneaux de danger biologique voir figure 1 seront appos s sur les portes et autres endroits appropri s 3 Lanimalerie doit tre con ue de mani re pouvoir
156. ectement quilibr s une fois les tubes en place Le volume laisser libre entre la surface du liquide et le bord du tube centrifuger doit tre indiqu dans les instructions du fabricant Pour Pequilibrage des pots vides on utilisera de Peau distill e ou de Palcool propanol 70 Les solut s salins ou les solutions d hypochlorite sont viter car ils corrodent les m taux Des pots centrifuger fermant herm tiquement pots de s curit doivent tre utilis s pour les micro organismes appartenant aux groupes de risque 3 et 4 Si l on utilise des rotors angulaires il faut veiller ce que les tubes ne soient pas trop remplis pour viter le risque de fuite L int rieur de la cuve de la centrifugeuse sera inspect tous les jours la recherche de taches ou de souillures au niveau du rotor En pr sence de salissures manifestes les protocoles de centrifugation seront r examin s Les godets pots ou nacelles ainsi que le rotor seront inspect s chaque jour la recherche de signes de corrosion ou de fissures si fines soient elles Les godets pots ou nacelles le rotor et la cuve de la centrifugeuse seront d con tamin s apr s chaque usage Apr s utilisation les pots seront retourn s et conserv s ainsi pour que le liquide d quilibrage puisse s cher Des particules infectieuses a roport es sont parfois ject es la centrifugation Ces particules se d placent une vitesse trop lev
157. ection et dans quelle proportion les animaux infect s excr tent le virus En outre il faut prendre toutes les mesures n cessaires pour assurer un confinement rigoureux des souris transg niques porteuses du r cepteur viral Plantes transg niques Dans de nombreuses r gions du monde les plantes trang niques exprimant des g nes qui leur conf rent une tol rance aux herbicides ou une r sistance aux insectes sont aujourd hui au centre d une vive controverse Le d bat porte essentiellement sur la s curit sanitaire de ces plantes en tant qu aliments et sur les cons quences cologiques que leur culture pourrait avoir long terme On utilise des plantes transg niques exprimant des g nes d origine humaine ou animale pour obtenir des produits d int r t m dical ou nutritionnel Il convient de proc der une valuation du risque pour d terminer quel niveau de s curit biologique ces plantes doivent tre produites Evaluation du risque dans le cas des organismes g n tiquement modifi s Dans le cas de travaux sur des OGM l valuation du risque doit prendre en compte les caract ristiques des organismes donneurs et receveurs On en trouvera ci apr s quelques exemples 115 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Dangers directement li s au g ne ins r organisme donneur Une valuation du risque est n cessaire dans le cas o le produit du g ne ins r poss de une activit biologique ou pharma
158. einte le moins possible d appareils et de mat riel Il ne faut pas bloquer la circulation de Pair dans le volume ou la gaine arri re de Penceinte Il ne faut pas utiliser de becs Bunsen dans Tenceinte En effet la chaleur d gag e d vierait le flux laminaire et pourrait endommager les filtres On peut se servir d un micro incin rateur mais les anses jetables st riles sont pr f rables La totalit des op rations seront r alis es au centre ou dans la partie arri re du plan de travail et devront tre visibles par le panneau d observation Il faut viter qu il y trop de passages derri re Poperateur Lop rateur ne doit pas perturber le flux laminaire en passant les bras dans Pen ceinte ou en les retirant a plusieurs reprises Il ne faut pas bloquer les grilles en entassant des notes des pipettes ou d autres objets car cela a pour effet de perturber la circulation de Fair et risque d exposer Poperateur et le mat riel 4 une contamination Une fois la manipulation achev e et a la fin de la journ e de travail il faut d sin fecter la surface de Penceinte avec un produit appropri Le ventilateur de Penceinte doit continuer fonctionner au moins 5 minutes apr s la fin de la manipulation I ne faut jamais introduire de paperasse dans une enceinte de s curit biologique Des informations compl mentaires sur les enceintes de s curit biologique sont donn es au chapitre 10 Comment viter
159. el le c t propre s ouvrant dans une pi ce ext rieure aux salles de confinement Lechange de mat riel non autoclavable doit se faire travers un sas air dont le c t propre doit s ouvrir dans une pi ce situ e en dehors des salles de confinement Toutes les manipulations sur des animaux porteurs d agents pathog nes appar tenant au groupe de risque 4 doivent s effectuer dans des conditions de s curit correspondant celles dun laboratoire de confinement haute s curit s cu rit biologique niveau 4 Tous les animaux doivent tre h berg s dans des isolateurs La totalit des liti res et des d chets doit tre pass e a Pautoclave avant de sortir de animalerie Le personnel doit tre plac sous surveillance m dicale Invert br s Comme pour les vert br s le niveau de s curit de Panimalerie est d termin par le groupe de risque auquel appartiennent les agents pathog nes tudi s toutefois une valuation du risque peut conduire en d cider autrement Des pr cautions compl mentaires sont n cessaires avec certains arthropodes notamment les insectes volants 1 2 3 Les invert br s infect s et ceux qui ne le sont pas doivent tre log s dans des pi ces distinctes Les pi ces doivent pouvoir tre ferm es herm tiquement pour fumigation Des pulv risateurs d insecticides doivent tre mis disposition 369 10 11 12 13 6 ANIMALER ES De
160. elques causes courantes d accidents Tableau A4 2 Causes courantes d accidents avec des appareils ou quipements ACCIDENT CAUSE DE L ACCIDENT REDUCTION OU ELIMINATION DU RISQUE D faut de conception ou de construction Feu d origine lectrique Pas d interrupteur de e Respect des normes dans un incubateur surcharge nationales Electrocution Pas de mise a la terre Utilisation incorrecte Accident de centrifugeuse D faut d quilibrage des e Former et encadrer le pots centrifuger sur les personnel rotors oscillation libre Explosion d un incubateur e Former et encadrer le ana robie personnel Equipement mal adapt Explosion dans une fiole Mauvaises conditions de e Utiliser du mat riel vide usage domestique transport de l azote liquide sp cialement con u Explosion dans un Produit chimique dangereux e ranger les solvants et r frig rateur usage domestique non plac dans un conteneur anti tincelles et antid flagrant par exemple de Pether thylique dans un flacon dont le bouchon fuit les extraits a bas point d clair que dans des r frig rateurs ou des enceintes anti tincelles et antid flagrants Maintenance d fecteuse Feu dans un photom tre flamme Mauvais remontage des pi ces du photom tre pendant la maintenance Former et encadrer le personnel 162 ANNEXE 5 Produits chimiques dangers et precautions a prendre On trouvera dans cette
161. ences bibliographiques 7 et 8 ainsi que les brochures disponibles aupr s des fabricants donnent une description compl te des diverses ESB de classe ITA et IIB 61 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Tableau 9 Diff rences entre les enceintes de s curit biologique ESB des classes 1 Il et III ESB VITESSE L ENTR E m s COURANT D AIR CIRCUIT D VACUATION RECYCLE EVACUE Classe 0 36 0 100 Jonction rigide tanche Classe IIA1 0 38 0 51 70 30 Evacuation dans la pi ce ou manchon de raccordement Classe IIA2 avec 0 51 70 30 Evacuation dans la ventilation sur pi ce ou manchon de l ext rieur raccordement Classe 11B1 0 51 30 70 Jonction rigide tanche Classe 11B2 0 51 0 100 Jonction rigide tanche Classe III Sans objet 0 100 Jonction rigide tanche Toutes les gaines et tous les conduits potentiellement contamin s sont en d pression ou sont entour s de gaines et de volumes en d pression Enceinte de s curit biologique de classe III Ce type d enceinte figure 9 qui assure au personnel la protection maximale est utilis pour travailler sur des agents infectieux du groupe de risque 4 Toutes les tra vers es sont dot es de joints tanches aux gaz Lair admis dans l enceinte passe travers un filtre HEPA et Pair qui en sort a travers deux filtres HEPA La circulation de lair est assur e par un circuit d evacuation sp cial situ a Pexterieur de Penceinte qui en maint
162. ent tre organi 565 de bonne heure de pr f rence lorsqu on programme la construction ou la r no vation d un laboratoire En prenant acte de la mise en place du processus de mise en service d s les premiers stades du projet les architectes les ing nieurs les respon sables s curit le personnel sanitaire et au final le personnel du laboratoire lui m me vont r aliser ce que l on attend du laboratoire en question sur le plan de l efficacit et exprimer de mani re coh rente leurs attentes cet gard Le processus de mise en service constitue pour Pinstitution et la collectivit locale une meilleure garantie de voir les l ments structuraux l installation lectrique les dispositifs m caniques la plomberie les syst mes de confinement et de d contamination ainsi que les disposi tifs d alarme et de s curit fonctionner comme pr vu et emp cher la propagation de tout micro organisme potentiellement dangereux sur lesquels on travaille dans le laboratoire ou l animalerie Le processus de mise en service commence en g n ral lors de la phase de pr para tion du projet et se poursuit pendant la construction et durant la p riode de garantie ult rieure La p riode de garantie doit en g n ral se prolonger un an apr s la r cep 38 7 PRINCIPES DIRECTEURS POUR LA MISE EN SERVICE DES LABORATOIRES OU INSTALLATIONS tion de l installation Il est souhaitable pour la mise en service de ne retenir que des organ
163. ent donc tre dispos s vers le fond du plan de travail de Tenceinte Equipements et vetements de protection individuelle Les quipements et v tements destin s a la protection individuelle constituent une barri re mat rielle qui r duit le risque d exposition aux a rosols aux claboussures ou encore le risque d inoculation accidentelle Ces quipements ou v tements doivent tre port s pour travailler au laboratoire Avant de quitter le laboratoire il faut les ter puis se laver les mains Le tableau 11 d crit succintement quelques types d quipement de protection utilis s au laboratoire et les risques contre lesquels ils prot gent Blouses sarraus combinaisons et tabliers de laboratoire Il est pr f rable que les blouses de laboratoire soient enti rement boutonn es Cela tant les sarraus ou les combinaisons manches longues boutonn es sur l arri re pro t gent mieux que les blouses de laboratoire et ont la pr f rence dans les laboratoires de microbiologie ou pour travailler avec une enceinte de s curit biologique Si n ces saire on peut porter un tablier sur la blouse ou le sarrau pour mieux se prot ger en cas de renversement de produits chimiques ou de mat riel biologique comme le sang ou les milieux de culture liquides L tablissement doit disposer d un service de blan chisserie sur place ou proximit Les blouses de laboratoires sarraus combinaisons ou tabliers ne doivent pas tre port s ho
164. erre de pr f rence La totalit des appareils et circuits lectriques du laboratoire doit tre conforme aux normes nationales de s curit lectrique Bruit Les effets d une exposition durable un bruit excessif sont insidieux Certains appareils de laboratoire comme par exemple certains types de lasers ou encore les installations qui abritent des animaux peuvent entra ner une importante exposition de ce genre On peut proc der des mesures acoustiques pour d terminer le risque d exposition au bruit Si les donn es obtenues le justifient on pourra envisager des 126 18 AUTRES TYPES DE RISQUES AU LABORATOIRE mesures techniques telles que l encoffrage des quipements bruyants ou la pose de barri res ou d crans anti bruit autour de ces quipments ou entre les zones bruyantes et les autres zones de travail Si Pon ne peut pas r duire le niveau de bruit et que le personnel soit expos en permanence a un bruit excessif il faudra mettre en place un programme de protection auditive prevoyant le port d oreillettes de protection pour les travaux en ambiance bruyante ainsi qu une surveillance m dicale du personnel pour d terminer les effets de cette nuisance Rayonnements ionisants La radioprotection a pour but de mettre les sujets humains Pabri des effets nocifs des rayonnements ionisants effets qui consistent notamment 1 En effets somatiques par ex des sympt mes cliniques observables chez les suje
165. es du mat riel potentiellement infectieux ou des animaux infect s Apr s usage on devra se d ganter aseptiquement et se laver les mains Le personnel doit se laver les mains apr s avoir manipul du mat riel infectieux ou des animaux contagieux et avant de quitter le laboratoire Le port de lunettes de s curit d un cran facial visi re ou d un autre dispositif de protection est obligatoire quand il est n cessaire d assurer la protection des yeux ou du visage contre les projections de liquides l impact d objets ou le rayon nement ultraviolet artificiel Il est interdit de porter les v tements protecteurs hors du laboratoire comme par exemple la cantine la caf t ria dans les bureaux la biblioth que la salle du personnel ou les toilettes On ne doit pas porter de chaussures bout ouvert dans le laboratoire Il est interdit de manger de boire de fumer de se maquiller ou de manipuler des lentilles de contact dans les zones de travail du laboratoire Il est galement interdit d entreposer des aliments ou des boissons en quelque point que ce soit des zones de travail du laboratoire Les v tements de protection qui ont t port s au laboratoire ne doivent pas tre rang s dans les m mes vestiaires ou armoires que les v tements de ville Modes op ratoires 1 2 le pipettage a la bouche est rigoureusement interdit Aucun objet ou mat riel ne doit tre port a
166. es v tements de ville Tabliers de plastique Contamination des v tements e Etanches l eau Chaussures Chocs et claboussures e Bout ferm Lunettes coques Chocs et claboussures e Verres antichocs doivent tre correcteurs ou port s par dessus les lunettes de vue Lunettes de s curit Ecrans faciaux Appareils et masques respiratoires Chocs e Verres antichocs doivent tre correcteurs e Ecrans lat raux Chocs et claboussures e Prot gent enti rement le visage e S enl vent facilement en cas d accident Inhalation d a rosols Diff rents mod les jetable usage unique avec masque complet ou demi masque et cartouche d puration de lair adduction d air filtr pression positive intermittente adduction d air Gants Contact direct e Jetables certifi s de qualit avec des micro microbiologique en PVC organismes latex ou polyacrylonitrile e Protection des mains Coupures e A mailles Appareils respiratoires Une protection respiratoire peut se r v ler n cessaire lorsqu on proc de des mani pulations particuli rement dangereuses par ex le nettoyage d une surface o du mat riel infectieux a t r pandu Le choix de tel ou tel appareil d pend de la nature du danger Certains de ces appareils sont munis de filtres interchangeables pour la protection contre les gaz les vapeurs les particules et les micro organismes Il est imp rat
167. est il que ces institutions peuvent galement envisager d en gager ou tre tenues d engager des tiers pour effectuer ce service Les centres de recherche biom dicale ou de biologie m dicale peuvent laborer des outils destin s a ces audits enqu tes ou inspections afin d assurer la coh rence du processus d agrement de leurs divers laboratoires Ces outils doivent pr senter une adaptabilit suffisante pour tenir compte des diff rences mat rielles ou op ra tionnelles entre laboratoires quimplique la nature des travaux effectu s tout en assu rant une approche uniforme a Pinterieur de chaque institution Il faut veiller 3 ce que ces outils ne soient utilis s que par un personnel convenablement form et qu ils ne se substituent pas une bonne valuation bios curitaire conduite par des profession nels Les tableaux 5 7 en donnent quelques exemples Les r sultats des audits enqu tes ou inspections doivent tre discut s avec le per sonnel et la direction du laboratoire Dans chaque laboratoire il faut d signer une personne qui sera charg e de veiller ce que des mesures soient prises pour rem dier toutes les d fectuosit s relev es au cours de ces contr les Le processus d agr ment n est pas achev et le laboratoire ne peut tre consid r comme op rationnel tant que ces d fectuosit s mont pas t corrig es En raison de leur caract re complexe les activit s des laboratoires s curit b
168. et conformes aux normes de solidit 3 Etre d pourvus d asp rit s de bords tranchants et d l ments mobiles non prot g s 4 Etre con us r alis s et install s de fagon a tre faciles a utiliser a r viser a net toyer d contaminer et soumettre aux essais de conformit Dans la mesure du possible on evitera d utiliser de la verrerie et autres materiaux fragiles Des specifications d taill es portant sur la construction et les caracteristiques de fonc tionnement sont parfois n cessaires pour que les appareils soient conformes aux normes de s curit voir galement les chapitres 10 et 11 Appareils et instruments de s curit biologique essentiels 1 Dispositifs de pipettage pour remplacer le pipettage la bouche Il en existe de nombreux mod les 2 Enceintes de s curit biologique a utiliser syst matiquement dans les situations suivantes manipulation de mat riel infectieux Ce mat riel peut tre centrifug nor malement si la centrifugeuse est munie de godets de s curit tanches remplis et vid s dans une enceinte de s curit biologique existence d un risque accru d infection a roport e techniques comportant un risque lev de formation d a rosols par exemple centrifugation broyage m lange agitation ou mixage nergiques d sagr ga tion par ultra sons ouverture de r cipients contenant du mat riel infectieux lorsque la pression int rieure peut tre
169. et instruments 159 Appareils et instruments dont l utilisation peut comporter un risque 159 Annexe 5 Produits chimiques dangers et pr cautions a prendre 163 Index 211 Avant propos LOrganisation mondiale de la Sant OMS a pris conscience depuis longtemps que la s curit et en particulier la s curit biologique constitue une question importante au plan international VOMS a en effet publi la premi re dition de son Manuel de s curit biologique d s 1984 Ce manuel a constitu pour les pays une incitation a accepter et 3 appliquer les concepts de base de la s curit biologique et 4 mettre au point des recueils nationaux de directives pratiques ou codes de bonnes pratiques destin s aux laboratoires de leur territoire o sont manipul s des micro organismes pathog nes Depuis cette poque de nombreux pays se sont inspir s des indications du manuel pour laborer ces recueils ou codes Une deuxi me dition en a t publi e en 1997 En publiant cette troisi me dition du manuel consacr e aux questions de s ret et de s curit biologiques qui se posent nous en ce troisi me mill naire POMS continue de jouer un r le pilote dans le domaine de la s curit biologique au niveau international Dans la pr sente dition l importance d une attitude responsable du personnel est constamment soulign e De nouveaux chapitres ont t ajout s ils portent sur valuation du risque les mesures de s curit da
170. et par les normes nationales dans ce domaine 539 PARTIE Ill Equipements de laboratoire D 10 Enceintes de s curit biologique Les enceintes de s curit biologique ESB appel es aussi postes de s curit microbi ologique PSM sont con ues pour viter que Poperateur le local du laboratoire et le mat riel de travail ne soient expos s aux a rosols ou claboussures infectieux qui pourraient se produire lors de la manipulation de mat riels biologiques contenant des agents pathog nes comme les cultures primaires les souches pour les cultures et les chantillons destin s au diagnostic Des a rosols se produisent lors de toute manipu lation qui communique de Penergie un produit liquide ou semi liquide par exemple lorsqu on secoue verse agite ou fait tomber un liquide goutte goutte sur une surface ou dans un autre liquide D autres op rations par exemple ensemencer en stries une plaque de g lose inoculer des flacons pour culture cellulaire l aide d une pipette utiliser une pipette multivoies pour d livrer une suspension liquide d agents infectieux sur une plaque de microculture homog n iser et m langer du mat riel biologique infectieux centrifuger un liquide ou travailler sur un animal peuvent provoquer la for mation d a rosols infectieux Les particules d a rosol de moins de 5 um de diam tre ou les gouttelettes de diam tre compris entre 5 et 100 um ne sont pas visibles
171. ff rer par ses aptitudes son 137 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE bagage sa culture la langue dans laquelle il s exprime et son niveau de comp tence avant formation La m thode utilis e pourra tre dict e par le jugement que les personnes en formation portent sur la mani re dont le programme peut am liorer leur comp tence professionnelle et leur s curit personnelle Par exemple certains individus ont une approche visuelle ou plut t pratique de Pap prentissage alors que d autres pr f rent travailler sur des documents crits Il faut galement tre l coute de tout besoin particulier exprim par les personnes en formation par exemple adapter les cours pour les malentendants Outre la prise en compte de tous ces aspects il est recommand toute personne qui pr pare un programme de formation la s curit de se familiariser avec les principes de la formation des adultes Pr ciser les conditions de Papprentissage Aucun l ment de la formation qu il s agisse d un cours d une vid ocassette que Pon visionne ou de documents crits que l on consulte ne doit tre en contradiction ou sans rapport avec Papprentis sage de la technique ou de la question enseign e ou encore provoquer un blocage de cet apprentissage Par exemple si le but de la formation est d am liorer Papti tude r soudre des probl mes la m thode p dagogique doit privil gier la r fle xion et le raisonneme
172. ffe GAJ eds Disinfection preservation and sterilization 3rd ed Oxford Blackwell Scientific 1999 222 236 Guide de pr vention des infections lavage des mains nettoyage d sinfection et st rilisation dans les tablissements de sant 2 d Ottawa Laboratoire de lutte contre la maladie Bureau des maladies infectieuses Sant Canada 1998 Springthorpe VS Sattar SA Chemical disinfection of virus contaminated surfaces CRC Critical Reviews in Environmental Control 1990 20 169 229 Recommandations relatives au transport des marchandises dangereuses treizi me dition r vis e New York et Gen ve Nations Unies 2003 http www unece org trans danger publi unrec rev13 13files_f html Instructions techniques pour la s curit du transport a rien des marchandises dangereuses dition de 2003 2004 Montr al Organisation de l Aviation civile internationale 2002 Comit des Transports Int rieurs de la Commission conomique pour l Europe ADR restructur en vigueur le 1 Janvier 2003 New York et Gen ve Nations Unies 2002 http www unece org trans danger publi adr adr2003 ContentsE html Infectious substances shipping guidelines Montreal International Air Transport Association 2003 http www iata org ads issg htm Transport des substances infectieuses Gen ve Organisation mondiale de la Sant 2004 http www who int csr resources publications WHO_CDS_CSR_LYO_2004_9Fr en Berg P et al Asilomar
173. flammable teindre toutes les flammes nues fermer Parriv e de gaz dans la salle et les zones voisines ouvrir les fen tres si possible et d brancher les appareils lectriques susceptibles de produire des tincelles Eviter de respirer les vapeurs mises par le produit r pandu Ventiler les locaux en chassant Fair vers l ext rieur si l op ration est sans danger Se procurer le mat riel n cessaire pour nettoyer voir ci dessus Gaz comprim s et liqu fi s Le tableau 14 donne des conseils pour le stockage des gaz liqu fi s et comprim s 1238 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Tableau 14 Stockage des gaz liqu fi s et comprim s BOUTEILLE CONSEILS POUR LE STOCKAGE Bouteilles de gaz comprim s et conteneurs de gaz liqu fi s e Doivent tre solidement attach es avec une cha ne par ex un mur ou une paillasse solide de fa on a ne pas tre d plac es par inadvertance Doivent tre transport es munies de leur bouchon protecteur au moyen d un chariot Si elles sont en grande quantit doivent tre entrepos es dansun b timent appropri distance du laboratoire Cette r serve doit tre ferm e clef et identifi e par un panneau Ne doivent pas tre plac es proximit d un radiateur de flammes nues ou d autres sources de chaleur ni de mat riel lectrique producteur d tincelles ni directement expos es au soleil Petites cartouches
174. fonctions d valuer les risques d laborer un nouveau r glement en mati re de s curit biologique et d ar bitrer les conflits sur les questions de s curit e 134 19 LE RESPONSABLE DE LA SECURITE ET LE COMITE DE SECURITE La composition d un comit de s curit doit tre repr sentative des diverses branches professionnelles de Petablissement ainsi que de ses sp cialit s scientifiques La composition d un comit de s curit devrait au minimum tre la suivante 1 Un ou plusieurs d l gu s a la s curit 2 Des scientifiques 3 Du personnel m dical 4 Un ou plusieurs v t rinaires en cas d experimentation animale 5 Des repr sentants du personnel technique 6 Des repr sentants de la direction du laboratoire Le comit de s curit biologique doit galement prendre conseil aupr s des d l gu s a la s curit des divers services et des sp cialistes de la s curit par ex de la radio protection de hygi ne et s curit industrielles de la lutte contre incendie etc et il pourra a Poccasion faire appel a des sp cialistes exterieurs de diff rents domaines apparent s aux autorit s locales et aux organismes nationaux de r glementation Lorsqu un protocole particuli rement sensible ou litigieux est en discussion il peut galement tre utile d avoir lavis de membres de la communaut 1354 20 La s curit du personnel de maintenance et d entretien Le bon fonctionne
175. ge de procr er que si elles sont enceintes ou pensent l tre elles doivent pr venir le membre responsable du service m dical ou du per sonnel scientifique de fa on que des mesures concernant leur travail puissent tre prises si n cessaire Existe t il un programme de vaccination adapt au travail du laboratoire 10 Peut on pratiquer des tests cutan s ou existe t il un service de radiologie pour la surveillance m dicale du personnel qui travaille sur des mat riels contenant des bacilles tuberculeux ou d autres mat riels justifiant ce genre de contr le Existe t il un registre bien tenu des accidents et des maladies Des panneaux de pr vention des accidents et de mise en garde sont ils utilis s pour r duire les accidents du travail Le personnel est il entra n suivre les instructions appropri es pour la s curit biologique Le personnel du laboratoire est il invit signaler les risques d exposition Appareils et quipements de laboratoire 1 2 Tous les appareils sont ils agr s sur le plan de la s curit Existe t il des protocoles pour la d contamination du mat riel avant la maintenance Les enceintes de s curit biologique et les hottes ou sorbonnes sont elles r guli re ment v rifi es et r vis es Les autoclaves et autres appareils fonctionnant sous pression sont ils r guli re ment inspect s 148 ON O UI 22 LISTE DES CONTROLES DE SECUR
176. hygi nique dans un endroit propre Les masques respiratoires sont ils dot s des cartouches filtrantes de mod le appro pri notamment de filtres HEPA pour retenir les micro organismes et de filtres sp ciaux pour les gaz ou les particules 147 9 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE V rifie t on si les masques respiratoires sont bien adapt s aux personnes qui doivent les porter Sant et s curit du personnel 1 2 11 12 13 14 Existe t il un service de medecine du travail Y a t il des armoires pharmacie ou trousses de premiers soins aux endroits ad quats Y a t il des secouristes qualifi s Ces secouristes sont ils form s pour les premiers soins correspondant aux dangers propres au laboratoire contact avec des produits chimiques corrosifs ingestion accidentelle de toxiques ou de mat riel biologique infectieux Le personnel qui ne travaille pas dans le laboratoire nettoyage et administration est il inform des risques que repr sente le mat riel biologique manipul Des affiches judicieusement plac es indiquent elles o se trouvent les postes de premiers secours les num ros de t l phone des services d urgence etc Les femmes en ge de procr er sont elles inform es des cons quences que peut avoir la manipulation de certains micro organismes substances canc rog nes mutag nes ou t ratog nes A t on dit aux femmes en
177. i miques ou radioactifs dangereux 029 14 DESINFECTION ET STERILISATION D sinfectant Substance chimique ou m lange de substances chimiques utilis s pour tuer des micro organismes mais pas n cessairement les spores Les d sinfectants sont g n ralement appliqu s sur des surfaces ou objets inanim s D sinfection Destruction par des moyens physiques ou chimiques de germes mais pas n cessairement de leurs spores Germicide chimique Substance chimique ou m lange de substances utilis s pour tuer les micro organismes Microbicide Substance chimique ou m lange de substances chimiques destin s tuer les micro organismes Ce terme est souvent utilis la place de biocide ger micide ou anti infectieux dont il est synonyme Sporocide Substance chimique ou m lange de substances chimiques destin s tuer les micro organismes et leurs spores St rilisation Processus par lequel on tue ou limine les micro organismes et les spores de toute nature Nettoyage du mat riel de laboratoire Le nettoyage consiste enlever les souillures les mati res organiques et les taches On peut proc der par brossage aspiration d poussi rage sec lavage l eau ou avec une ponge humide impr gn e d eau savonneuse ou additionn e d un d tergent La crasse les excr ments et les mati res organiques peuvent abriter des micro organismes et g ner l action microbicide des d contaminants a
178. i constituent un minimum pour les laboratoires de tous niveaux de s curit biologique s appliquent aux micro organismes des groupes de risque 1 4 Si certaines pr cau tions peuvent sembler inutiles pour quelques germes du groupe de risque 1 elles sont n anmoins souhaitables a titre d entrainement 4 l observation de bonnes techniques microbiologiques BTM c est dire de techniques qui assurent la s curit Les laboratoires d analyses ou ceux qui sont attach s a un tablissement de soins laboratoires de sant publique laboratoires d analyses biologiques ou laboratoires hospitaliers doivent tous tre am nag s au minimum conform ment au niveau 2 de s curit biologique Etant donn qu aucun laboratoire n a la ma trise totale des chan tillons qu il re oit il n est pas exclu que le personnel soit expos des micro organismes appartenant un groupe de risque plus lev que pr vu Cette possibilit doit tre prise en compte dans Pelaboration des politiques et des plans de s curit Dans certains pays les laboratoires d analyses biologiques sont soumis un agr ment officiel Partout dans le monde les pr cautions habituelles 2 de s curit doivent tre adopt es et observ es Les principes directeurs applicables aux laboratoires de base niveaux de s curit biologique 1 et 2 expos s ici sont aussi d taill s et complets que possible car ils sont essentiels pour tout laboratoire quel que
179. ible ou nul pour les individus ou la collectivit Micro organisme qui selon toute probabilit ne peut causer de maladie humaine ou animale Groupe de risque 2 risque mod r pour les individus faible pour la collectivit Germe pathog ne capable de provoquer une maladie humaine ou animale mais qui ne pr sente vraisemblablement pas un s rieux danger pour le personnel de laboratoire la collectivit le b tail ou l environnement Une exposition en laboratoire est susceptible d entra ner une infection grave mais qui peut tre trait e ou pr venue efficacement par ailleurs le risque de propagation de l infection est limit Groupe de risque 3 risque important pour les individus faible pour la collectivit Germe pathog ne qui cause habituellement une grave maladie humaine ou animale mais qui ne se transmet g n ralement pas d un individu l autre Il existe un traitement et des mesures pr ventives efficaces Groupe de risque 4 risque important pour les individus comme pour la collectivit Germe pathog ne qui cause habituellement une grave maladie humaine ou animale et peut se transmettre facilement d un individu l autre soit directement soit indirectement II n existe g n ralement ni traitement ni mesures pr ventives efficaces Les laboratoires sont d sign s comme suit laboratoire de base s curit biologique niveau 1 laboratoire de base s curit biologique niveau 2 laboratoire d
180. ien Les stocks doivent tre entrepos s dans une r serve constitu e d une pi ce ou d un b timent sp cialement destin s cet effet Les produits chimiques ne doivent pas tre rang s par ordre alphab tique R gles g n rales d incompatibilit chimique Pour pr venir tout risque d incendie ou d explosion les produits qui figurent dans la colonne de gauche du tableau 13 doivent tre entrepos s et manipul s de fa on viter tout contact avec avec les substances plac es en regard dans la colonne de droite Toxicit des produits chimiques Certains produits chimiques peuvent avoir des effets ind sirables sur la sant des per sonnes qui les manipulent ou en inhalent les vapeurs Outre les poisons notoires un certain nombre de produits chimiques sont connus pour leurs divers effets toxiques 121 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Tableau 13 R gles g n rales d incompatibilit chimique TYPE DE SUBSTANCE SUBSTANCES INCOMPATIBLES M taux alcalins comme le sodium le Dioxyde de carbone hydrocarbures chlor s eau potassium le c sium ou le lithium Halog nes Ammoniac ac tyl ne hydrocarbures Acide ac tique sulfure d hydrog ne aniline Oxydants comme l acide chromique l acide hydrocarbures acide sulfurique nitrique les peroxydes ou les permanganates Le syst me respiratoire le sang les poumons le foie les reins et le tube digestif ainsi que d autres
181. ien l int rieur en d pression environ 124 5 Pa Pour acc der au plan de travail on utilise des gants en caoutchouc tr s r sistant fix s des orifices frontaux Les ESB de classe II doivent tre quip es d un sas de passage susceptible d tre st ri lis et dot d un syst me d vacuation avec filtre HEPA Les enceintes de classe HI peuvent tre raccord es un autoclave double porte pour la d contamination de tout ce qui entre ou sort de l enceinte Pour disposer d un plan de travail plus vaste on peut adjoindre plusieurs bo tes gants Les ESB de classe conviennent pour les manipulations effectu es dans les laboratoires de s curit biologique niveau 3 ou 4 Raccordements pour l vacuation de lair des enceintes de s curit biologique Il existe des manchons de raccordement ou des hottes que l on peut utiliser avec les ESB de classe TIA1 ou 11A2 avec ventilation ext rieure Le manchon de raccordement s adapte sur le bo tier d vacuation de Penceinte et permet aspirer lair pour Pamener jusqu aux gaines d vacuation du b timent Un petit espace g n ralement de 2 5cm de diam tre est m nag entre le bo tier d vacuation de Penceinte et le raccord ce qui permet d aspirer Pair de la pi ce pour l amener galement dans le circuit d vacuation du b timent Le manchon doit tre amovible ou tout au moins 62 10 ENCEINTES DE SECURITE BIOLOGIQUE coupe de face coupe lat
182. if d utiliser un filtre adapt au type d appareil respiratoire utilis Pour une protection optimale il faut veiller bien adapter le masque la face de l utilisateur et proc der un essai Il existe galement des appareils respiratoires totalement 739 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE autonomes aliment s en air par un syst me int gr ces dispositifs assurent une pro tection totale Pour choisir Pappareil qui convient il est prudent de s adresser un sp cialiste qualifi par exemple un ing nieur hygi ne et s curit Les masques chirur gicaux n ont d autre but que de prot ger le patient et ne conf rent aucune protection respiratoire ceux qui les portent Il existe des appareils respiratoires jetables usage unique ISO 13 340 30 qui sont con us pour prot ger contre l exposition aux agents biologiques Les appareils respiratoires ne doivent pas tre port s hors des locaux du laboratoire Gants Les mains peuvent tre contamin es au cours de certaines manipulations Elles sont galement expos es aux coupures et aux piq res Les gants de type chirurgical certi fi s de qualit microbiologique en latex PVC ou polyacrylonitrile sont tr s utilis s pour les travaux de laboratoire en g n ral comme pour la manipulation d agents infectieux ou de sang et de liquides organiques contamin s On fait galement usage de gants r utilisables mais il faut veiller les ter correc
183. imale contre le mat riel biologique dan gereux Il peut tre mont sur un support mobile Le volume de travail est compl te ment ferm par une enveloppe transparente en chlorure de polyvinyle PVC suspendue un cadre en acier La pression l int rieur de Pisolateur est maintenue une valeur inf rieure celle de la pression atmosph rique Ladmission de Fair se fait travers un filtre HEPA et son extraction travers deux filtres du m me type plac s en s rie ce qui vite d avoir installer une gaine pour l vacuer l ext rieur du b ti ment On peut quiper Pisolateur d un incubateur d un microscope ou d autres types d objets ou d instruments tels que centrifugeuses cages pour animaux enceintes chauffantes etc Tous ces objets ou ces mat riels sont introduits ou retir s par des ori fices destin s l un Pinstrumentation et l autre aux chantillons sans risque pour la s curit microbiologique Les manipulations se font l aide de manchons dont 8 11 EQUIPEMENTS DE SECURITE Tableau 10 Equipemenis et instruments de s curit biologique EQUIPEMENTS ET INSTRUMENTS Enceinte de s curit biologique Classe Classe Il Classe Ill RISQUES A rosols et projections A rosols et projections A rosols et projections CARACTERISTIQUES DE SECURITE e Flux entrant minimal vitesse frontale au niveau de Pouverture frontale Bonne filtration de lair
184. ine lectrique Poudre Liquides et gaz Instruments et mat riel inflammables m taux r utilisables car les r sidus alcalins feux d origine sont tr s difficiles lectrique liminer Mousse Liquides inflammables Feux d origine lectrique Le mat riel de lutte anti incendie doit tre plac proximit des portes des salles et en divers points strat giques des couloirs et des halls Ce mat riel peut consister en tuyaux souples seaux eau ou sable et extincteurs Les extincteurs doivent tre r guli rement v rifi s et entretenus et on veillera ce qu ils ne soient pas p rim s Les divers types d extincteurs et leur usage sont indiqu s dans le tableau 15 Pour de plus amples informations le lecteur est pri de consulter la r f rence 49 Risques lectriques Il est essentiel que toutes les installations et Pappareillage lectriques soient v rifi s et contr l s r guli rement y compris la mise la terre Des disjoncteurs et notamment des disjoncteurs diff rentiels doivent tre install s sur les circuits lectriques des laboratoires Les disjoncteurs ne prot gent pas les personnes leur r le est de prot ger les circuits d une surcharge et par cons quent d viter les incendies Les disjoncteurs diff rentiels sont eux destin s prot ger les personnes des chocs lectriques Tout l appareillage lectrique du laboratoire doit tre reli la terre au moyen de prises de t
185. infection et de st rilisation utilis s au laboratoire il con vient de prendre les pr cautions compl mentaires suivantes 1 10 11 12 13 14 x Il est vivement recommande d utiliser des quipements sp cialement d di s a ces travaux Cest a dire qui ne sont pas partag s avec les autres laboratoires de Petablissement Le port de v tements protecteurs sarraus et tabliers et de gants gants d autop sie compl t s par des gants en mailles d acier est obligatoire Il est vivement recommande d utiliser du mat riel jetable en mati re plastique qui puisse tre trait et limin comme d chets secs Les appareils automatiques de traitement des tissus ne seront pas utilis s en raison des difficult s de d sinfection On utilisera la place des bocaux et des b chers Toutes les manipulations seront effectu es dans une enceinte de s curit biologique On veillera scrupuleusement a viter la formation d a rosols ainsi que les coupures et les piq res cutan es Les tissus fix s au formol seront consid r s comme encore infectieux m me apr s fixation prolong e Les chantillons histologiques contenant des prions sont largement inactiv s par un traitement de 1h l acide formique 96 24 25 Les d chets r sultant de la manipulation y compris les gants les sarraus et les tabliers jetables devront tre autoclav s dans un st rilisateur
186. iologique niveau 4 ne peuvent tre envisag es dans cet ouvrage Pour plus de d tails et des informations plus compl tes le lecteur est invit s adresser au Programme de s curit biologique de POMS voir galement l annexe 3 Programme de s curit biologique D partement maladies transmissibles surveillance et action Organ isation mondiale de la Sant 20 Avenue Appia 1211 Gen ve Suisse http www who int csr s 429 8 PRINCIPES DIRECTEURS POUR L AGR MENT DES LABORATOIRES INSTALLATIONS Tableau 5 Laboratoire de base s curit biologique niveau 1 contr le de s curit POINTS CONTROLES NOTER LA DATE NON SANS OBJET OBSERVATIONS Laboratoire Signalisation appropri e UV laser substances radioactives etc Directives bios curitaires existantes et suivies Appareils de laboratoire correctement marqu s danger biologique radioactivit TOXICE ECS bo a oe Conception du laboratoire Facile a hattoyer a interna Lampes UV dot es d un interrupteur d interdiction Etag res solidement assujetties Rev tement des paillasses tanche et r sistant aux acides aux bases aux solvants organiques et la chaleur Eclairage SUffISANT Espace de rangement suffisant et correctement utilis Bouteilles d
187. ion biologiques Les syst mes d expression biologiques sont constitu s par les vecteurs de clonage et les cellules h tes Pour que ces syst mes soient efficaces et puissent tre utilis s sans danger ils doivent r pondre un certain nombre de crit res Prenons titre d exem ple un de ces syst mes le plasmide pUC18 Souvent utilis comme vecteur de clonage avec des bact ries Escherichia coli K12 ce plasmide a t enti rement s quenc Tous les g nes n cessaires son expression dans d autres bact ries ont t supprim s de son plasmide pr curseur le pBR322 E coli K12 est une souche non pathog ne de coli bacilles qui est incapable de coloniser de fa on permanente l intestin des tres humains ou des animaux en bonne sant Les techniques habituelles de g nie g n tique peuvent tre utilis es sans risque sur le syst me E coli pUC18 au niveau 1 de s curit biologique aussi longtemps que les produits exprim s par l ADN tranger ins r dans la bact rie ne n cessitent pas le passage un niveau sup rieur Consid rations bios curitaires applicables aux vecteurs d expression Un niveau sup rieur de s curit biologique peut tre n cessaire lorsque 1 L expression des s quences d ADN provenant de germes pathog nes sont suscep tibles d augmenter la virulence de POGM 2 Les s quences ins r es ne sont pas parfaitement caract ris es comme c est par exemple le cas lors de la pr paration d
188. ion de l enceinte il faut le si gnaler et y rem dier avant de r utiliser l enceinte Lampes UV Il n est pas n cessaire d quiper les ESB de lampes ultraviolets Si toutefois on utilise de telles lampes il faut les nettoyer chaque semaine pour liminer la poussi re et les salet s qui pourraient r duire l action germicide du rayonnement Lintensit du rayonnement ultraviolet doit tre mesur e lors de chaque nouvel agr ment de Pen ceinte afin de v rifier que Pemission de la lampe est satisfaisante Les lampes UV doivent tre teintes quand des personnes sont pr sentes dans la pi ce afin de prot ger leurs yeux et leur peau contre toute exposition accidentelle Flammes nues II faut viter la pr sence de toute flamme nue dans l environnement quasi st rile qui existe l int rieur de l enceinte En effet les flammes perturbent la circulation de Pair et peuvent tre dangereuses si Pon utilise galement des substances volatiles 65 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE inflammables Pour steriliser les anses bacteriologiques il existe des microbr leurs et des fours lectriques qui sont preferables aux flammes nues Produits r pandus accidentellement Il faut afficher dans le laboratoire un exemplaire de la conduite a tenir si des produits sont r pandus accidentellement et veiller 4 ce chacun lise et assimile ces instructions Si un produit pr sentant un danger biologique est r pandu ac
189. ipet teurs permet donc d eviter ingestion de germes pathog nes Des a rosols peuvent galement se former lorsqu une goutte de liquide tombe sur un plan de travail lorsqu on m lange une culture par aspirations et refoulements suc cessifs et lorsqu on souffle pour vacuer la derni re goutte de la pipette On peut viter Vinhalation des a rosols qui se forment in vitablement au cours du pipettage en tra vaillant dans une enceinte de s curit biologique Les pipetteurs seront choisis avec soin Ils seront con us et utilis s de mani re ne pas cr er de risque suppl mentaire d infection et ils doivent pouvoir tre nettoy s et st rilis s facilement Des pipettes dont la pointe est munie d un embout anti a rosols doivent tre utilis es pour la manipulation des micro organismes et des cul tures cellulaires Les pipettes dont l extr mit d aspiration est br ch e ou f l e ne seront pas uti lis es car elles endommagent le joint tanche des dispositifs de pipettage et compor tent donc un risque Homog n iseurs agitateurs secoueurs m langeurs et g n rateurs d ultrasons Les homog n iseurs domestiques utilis s la cuisine ne sont pas herm tiques et lib rent des a rosols On utilisera exclusivement des homog n iseurs con us pour les laboratoires Ils sont construits de mani re r duire ou emp cher la lib ration d a rosols Les broyeurs que l on peut utiliser maintenant pour trai
190. iqusnquioou SJUSWSSILUOA S D 19 Sa9BuAR sinajnop s p agy eip ej ap 1 1 0 ap uoljesuas aun s jeuruopqe sunajnop s p ned uolsebul7 aeuowjnd awepea un Jaulesjua n d sinaden s p uonejeuul T 90 591 100 sap 19 S9U 19 1Ud 984 sasnainojnop s ubin 59111040 ap anbsu Juawaljnossa un 19 aun qug ap uonesuas aun xno gj ap 36106 xnew s p 591101010591 5910 S 19 xn sa nead ej ins 8AIS01109 UOS 2 09 uoneulqns ulod 0 07 uolsn ap julod ayourlq 1n9 n09 ap no 99 10100290 9 9 9024 a1oydsoud apAxojuad ANNEXE 5 PRODUITS CHI S QPLULUE U Sapl os s pinbil ze6 Sa 19 aUaHOUpAY sasses6 Sa S lihu Sa H P H uorsojdxa p 9151 sunajonpal s 19 5910051401002 9 Sa ins yeg nb anbi6sau9 yuepAxQ 9019 Sap 29AB 1981u02 1101 194149 Yawn ap uonolp yul Sa l89U19 p IU Sanu sed Jug W9 e 99 p anbsiJ dane lll moq PI SUEP 0155910 P 1SJUOUI ye abeyneyo 97 saoue sqns s nne p uolsnqulo9 El opine srewu lq snqulo2ul 9 5911 Sa1107211dSa1 S 10A S 1 00 JULI uolsn ap 1ulod 109 9 0 0201 280 20 909 199
191. ir des l ments de routine du travail de laboratoire l gal des mesures d asepsie ou de s curit microbiologique Les mesures de s ret biologique en laboratoire ne doivent pas faire obstacle un partage efficace des mati res de r f rence des chantillons cliniques et pid mio logiques et des informations qui s y rapportent n cessaires aux enqu tes cliniques ou de sant publique Un programme de s ret bien g r ne devrait pas entraver outre mesure les activit s quotidiennes du personnel scientifique ni faire obstacle la r alisation des recherches Un acc s l gitime aux recherches et aux mati res cliniques 52 9 PRINCIPES DE LA SURETE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE importantes doit tre pr serv L valuation de Paptitude des membres du personnel Papport ces membres d une formation sp cifique la s ret et un respect rigoureux des proc dures de protection des agents pathog nes constituent des moyens raisonnables pour am liorer la s ret biologique en laboratoire La mise en place et le maintien de tous ces efforts passe par la r alisation d valuations des risques et des menaces et par la r vision et la mise a jour des proc dures sur une base r guli re Des contr les du respect de ces proc dures s appuyant sur des instructions claires quant aux r les aux responsabilit s et aux mesures correctives doivent tre pr vus par les programmes de s ret biologique en laboratoire
192. ismes ou entreprises nayant aucun lien avec les bureaux d architectes et d ing nieurs ou l entreprise de g nie civil qui ont con u et construit le laboratoire Cet organisme ou son repr sentant devra agir en tant que porte parole de Finstitu tion ou de Petablissement qui construit ou renove le laboratoire et tre consid r comme un membre de Pequipe charg e de la conception des installations il est capital qu il soit present d s les premiers stades de la pr paration du projet Parfois c est Pins titution qui assume elle m me ce r le Dans le cas de projets de laboratoires plus complexes niveaux de s curit biologique 3 ou 4 elle pourra s assurer les services d un organisme ou d une entreprise ext rieurs qui ont fait la preuve de leur exp rience et de leur comp tence dans la mise en service de laboratoires ou d animaleries posant des problemes complexes sur le plan de la s curit biologique M me si Pins titution choisit un agent ext rieur pour assurer la mise en service elle doit malgr tout rester membre de l quipe qui assume cette charge Il est recommand en outre que le d l gu la s curit de Pinstitution le responsable du projet le directeur du programme ainsi qu un repr sentant de la direction et de l quipe de maintenance en fasse galement partie aux c t s de l agent charg de la mise en service On trouvera ci dessous la liste des syst mes et appareillages qui pourraient faire
193. it tre install soit sur place soit proximit Lorsqu on retire la liti re des animaux il faut viter au maximum la formation d a rosols et de poussi res Tous les d chets et les liti res doivent tre d contamin s avant limination Autant que possible on limitera l utilisation d instruments pointus ou tranchants Ces instruments doivent toujours tre ramass s dans des conteneurs r sistants munis d un couvercle bo tes anti piques et trait s comme du mat riel infectieux Le mat riel destin a Pautoclavage ou l incin ration doit tre transport en toute s curit dans des conteneurs ferm s Les cages des animaux doivent tre d contamin es apr s utilisation Les cadavres des animaux seront incin r s Le port de v tements et d quipements de protection est obligatoire dans lani malerie Il devront tre retir s au moment du d part Un lavabo doit tre install Le personnel doit se laver les mains avant de quitter Paimalerie Toute blessure m me mineure doit tre trait e de mani re appropri e Elle doit tre signal e et enregistr e Il est interdit de manger de boire de fumer et de se maquiller dans Panimalerie Tous les membres du personnel doivent recevoir une formation appropri e Animalerie S curit biologique niveau 3 C est le niveau qui convient pour le travail avec des animaux inocul s volontairement avec des micro organismes appartenant au groupe de risque 3 o
194. ites e Construction tanche munie d un couvercle e R sistance l usure e Autoclavables 69 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE EQUIPEMENTS ET INSTRUMENTS RISQUES CARACTERISTIQUES DE SECURITE Conteneurs pour objets pointus ou tranchants Piq res et coupures e Autoclavables e Anti piques robustes Conteneurs de transport d un laboratoire ou d un tablissemement a l autre Lib ration de micro organismes dans l environnement e Robustes Conteneurs primaires et secondaires tanches l eau antifuites Mat riau absorbant retenant les liquides Autoclaves manuels ou automatiques Objets et mat riel contamin s s curis s en vue de leur limination ou r utilisation Mod les agr s Efficacit de la st rilisation par la chaleur Flacons bouchon viss Protection du circuit de vide ou conduites d aspiration A rosols et produits r pandus Contamination du circuit de vide ou des conduites d aspiration par des a rosols ou le d bordement de liquides Confinement efficace Un filtre cartouche arr te les a rosols diam tre des particules 0 45 um La fiole trop plein contient un d sinfectant appropri On peut utiliser un flotteur en caoutchouc pour couper automatiquement la d pression quand la fiole est pleine Le syst me peut tre enti rement autoclav Pextr mit est munie de gants jetables Liso
195. ive pour r duire le risque de pannes m caniques Remplir et vider les pots centrifuger dans une enceinte de s curit biologique Jarres ana robies Explosion dispersion de mat riel infectieux V rifier que le panier m tallique qui renferme le catalyseur est en bon tat APPAREILS ET INSTRUMENTS RISQUES ELIMINATION OU REDUCTION DU RISQUE Dessiccateurs Implosion dispersion de morceaux de verre et de mat riel infectieux e A placer dans une cage m tallique solide Homog n isateurs et broyeurs de tissus A rosols fuites et casse e Faire fonctionner et ouvrir dans une enceinte de s curit biologique e Utiliser des mod les sp cialement con us pour viter les fuites au niveau des paliers des rotors et des joints circulaires ou utiliser un broyeur de type stomacher e Attendre 30 min avant d ouvrir le bol de l homog n iseur pour que l a rosol ait le temps de se d poser R frig rer pour condenser l a rosol e Si Pon utilise un broyeur manuel tenir le tube dans un tampon de mat riau absorbant Sonificateurs nettoyeurs ultrasons A rosols l sions de l appareil auditif dermite e Faire fonctionner et ouvrir l appareil dans une enceinte de s curit biologique e isoler l appareil pour le prot ger des ultrasons e Porter des gants pour prot ger les mains contre les effets chimiques des d tergents M langeurs de cultures agitateurs
196. ixe broie secoue agite traite aux ultrasons ou centrifuge du mat riel biologique infectieux M me en utilisant un appareillage qui r pond aux normes de s curit il est pr f rable d effectuer autant que possible ces op rations dans une enceinte de s curit biologique agr e Les diff rents types d enceintes de s curit biologique ainsi que leur utilisa tion et leur contr le sont trait s au chapitre 10 Lutilisation d quipements de s cu rit ne garantit pas la protection de Poperateur si celui ci n est pas form et utilise pas les techniques appropri es Ces quipements doivent subir des contr les p rio diques afin de s assurer qu ils continuent fonctionner en toute s curit Le tableau 10 donne la liste des quipements et instruments de s curit con us pour liminer ou r duire certains risques et indique bri vement les caract ristiques qui con tribuent leur s curit d utilisation Des pr cisions sont donn es par la suite sur une bonne partie de cet appareillage Des informations compl mentaires sur la mani re de bien les utiliser sont galement donn es au chapitre 12 Lannexe 4 donne un certain nombre de renseignements sur les quipements et les op rations ou manipulations qui comportent un danger Isolateurs d pression en film ou feuille de plastique souple Lisolateur d pression en film souple est un dispositif de confinement primaire autonome qui assure une protection max
197. j Jayeyul no UONEJEUUI P UOISN utod 2 89101 sed au nead ej Jane uons ul p seunef aipnod SIqJAOPILUIOUOUUE9 yy SJUEPAXO 198 U09 1101 191144 580 Ud SJIDOU S 9 11 no s n lllbd aUILUEINY SANDIWIHO SANDISAHd Sanosi 5391 9 Y SNOLLNVOIYd JIGNIONI G 3 0919 31NVS YT 4 04 SANOSIY S3131Hd0Hd ANDINIHO LINGOHd 176 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE sanbiuebo SJUPAIOS a 19 SHPI9 S suep lqn os Sau Slew suep ajqnjos 992101 UOHP U A 1490 dane 00 5 9000 SNOS lpu oul p UoHlsodx uollllnq p s ed 19 91 PN90 seo ua s nbixo 9110 191144 SS A 100 xn lqulou ap 019910 0 sun 206 sinadeA ej ap nbsiv 02821 UON AUILUEIP suep 19H04 UOHlSOdX juswabebap UE n ap 1100 gjo y y IKu udiq no jpsajul abesp 91n0 191144 aiqusnquiog El 19S19APJ 1194 aunel u p zu g 9419 EI 8 ague n9 asiw Jed s nbi l B 18S18APJ 59 8 9 ap 1194 anbiuosyo El OAd ua no no juy u Onoysynoes ua uoHlsodx p 560 ua Sue sap anb isule s nbned u 500159 ap uon old elLu99na ap anbise de sun 19404
198. jets trait s M lang d autres agents Palcool est plus efficace que lorsqu il est seul c est le cas par exemple de l alcool 70 contenant 100g de formaldehyde par litre ou de l alcool contenant 2g par litre de chlore actif On peut utiliser une solution aqueuse d alcool 70 96 pour d sinfecter la peau les paillasses et les enceintes de s curit biologique ou encore pour y faire tremper de petits instruments chirurgicaux Comme Pethanol dess che la peau il est souvent additionn d emollients Les produits pour 98 14 DESINFECTION ET STERILISATION friction a base d alcool sont recommand s pour la d contamination des mains si celles ci ne sont que l g rement souill es dans les cas o il est malcommode ou impossible de se les laver correctement Il ne faut cependant pas perdre de vue que Pethanol est sans effet sur les spores et peut ne pas d truire tous les types de virus non lipidiques Les alcools sont volatils et inflammables aussi ne faut il pas les utiliser proximit de flammes nues Les solutions de travail doivent tre entrepos es dans des r cipients appropri s pour viter Pevaporation Les alcools peuvent provoquer un durcissement du caoutchouc et dissoudre certains adh sifs II est tr s important de proc der un inventaire minutieux et un entreposage ad quat des r serves d alcool pour viter qu il ne soit utilis d autres fins que la d sinfection Les flacons ou boutei
199. julod anbiyewore aun 810 09UI apinbiq 42 9 2 y S 1 WOSI p sabuejgw aua AX 93 0914 5341 SanOlINIH SALITIGILWdIIOONT 340N38d Y SNOILAVOSYd 310N39N1 d 3 0914 JLNVS Y1 4 04 SANDS SANDISAHd 5313144094 ANDIWIHO 11 0084 210 index acariens 37 acc s animaleries 32 33 34 35 laboratoire 11 23 29 30 accidents 11 appareils 6quipements 162 voir aussi premiers secours blessures renversement ac tald hyde 164 ac tate de thallium 165 ac tone 165 ac tonitrile 166 acetylene 167 acide ac tique 167 chromique 168 nitrique 169 oxalique 169 perchlorique 122 170 phosphorique 170 picrique 122 171 sulfurique 172 acrol ine 173 a rosols activit s g n rant des 57 enceinte de s curit biologique 16 57 equipement de s curit 68 potentiellement dangereux 89 risques dus au pipettage 70 agitateurs secoueurs 71 82 agr ment enceintes de s curit biologique 66 laboratoires installation 41 42 aiguilles hypodermiques 11 84 160 limination 19 21 pour injection viter Pinoculation 80 alarmes 23 67 alcools 98 99 alimentation lectrique 15 31 en eau 15 24 aliments 11 allergie au latex 74 amenagement du laboratoire classification par groupe de risque 1 s curit biologique niveaux 1 et 2 13 15 s curit biologique niveau 3 23 24 25 s curit biologique niveau 4 29 31 ammoniac et solutions 174 ampou
200. l il nu Lorsque des a rosols se forment l op rateur ne s en rend g n ralement pas compte et il n a pas conscience non plus qu ils peuvent tre inhal s ou provoquer la contamina tion crois e des plans de travail On a montr qu une ESB convenablement utilis e est capable de r duire tr s efficacement le nombre d infections contract es au laboratoire ou les contaminations crois es cons cutives une exposition des a rosols infectieux Les ESB contribuent galement la protection de l environnement Au cours des ann es la conception de base des ESB a subi un certain nombre de modifications Lune des plus importantes a t le montage d un filtre particules de haute efficacit filtre HEPA sur le syst me d vacuation Ce filtre est capable r ter 99 97 des particules de 0 3um de diam tre et 99 99 06 de celles dont le diam tre se situe de part et d autre de cette valeur Un filtre HEPA peut donc arr ter efficacement tous les agents infectieux connus et l on peut donc tre certain que Pair qui sort de l enceinte est exempt de germes pathog nes Une deuxi me modification a consist diriger lair filtr sur le plan de travail ce qui permet d viter la conta mination de ce plan et de ce qui s y trouve On parle souvent de protection du produit pour d signer cette caract ristique Le tableau 8 indique le type de protection conf r dans chaque cas Remarque Les hottes fl
201. l ingestion de mat riel infectieux et le contact avec la peau et les yeux 1 Les particules et les gouttelettes de grande taille gt 5um form es pendant les manipulations de microbiologie se d posent rapidement sur la paillasse et les s 79 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE mains de Poperateur aussi celui ci doit il porter des gants jetables et viter de porter ses mains a son visage a sa bouche et a ses yeux Il ne faut pas consommer ou conserver de la nourriture ou des boissons dans le laboratoire Il ne faut pas mettre dans sa bouche des objets tels que crayons ou stylos ni m cher du chewing gum lorsqu on se trouve dans le laboratoire 4 II ne faut pas se maquiller dans le laboratoire Il convient d utiliser un dispositif pour se prot ger le visage la bouche et les yeux P P proteg 8 cran facial ou autre pendant toute operation risquant de donner lieu a des pro jections de mat riel infectieux Comment viter inoculation accidentelle de mat riel infectieux l Si Pon effectue les diff rentes manipulations et op rations avec le soin voulu on peut viter de s inoculer accidentellement du mat riel infectieux avec des d bris de verre De toute fa on il est pr f rable de remplacer le verre par du plastique lorsque cela est possible Un accident avec des aiguilles ou seringues hypodermiques des pipettes Pasteur en verre ou du verre bris peut entra ner l inoc
202. l on entend par s curit et s ret biologique et en quoi ces deux notions se distinguent La s curit biologique consiste dans la mise en uvre d un certain nombre de principes de techniques et de pratiques de confinement visant pr venir le risque accidentel d exposition du personnel des agents pathog nes ou des toxines ou encore de lib ration de telles substances La s ret biologique elle consiste dans la mise en place d un certain nombre de mesures d ordre administratif et de gestion du per sonnel en vue de r duire le risque de perte de vol d utilisation mauvais escient de d tournement ou de lib ration d lib r e d agents ou de toxines Le v ritable fondement de la s ret biologique r side dans Papplication en la boratoire des pratiques de s curit biologique En effet gr ce aux valuations du risque pratiqu es dans le cadre du programme bios curitaire de tablissement on peut recueillir des informations sur la nature des micro organismes d tenus sur l emplacement de ces micro organismes sur le personnel qui demande pouvoir en disposer et sur l identit de la personne responsable de ces germes On peut alors exploiter ces informations pour d terminer si un tablissement d tient des mati res biologiques susceptibles d attirer des personnes envisageant d en faire un usage crimi nel Il convient d laborer des normes nationales identifiant et examinant les respon 518
203. l otidique compl te du g nome humain Des dizaines de milliers de g nes dont on ignore encore la fonction vont ainsi pouvoir tre tudi s gr ce au g nie g n tique La th rapie g nique pourrait tre couramment utilis es pour traiter certaines maladies et il est probable que les tech niques de g nie g n tique vont nous permettre de disposer de nouveaux vecteurs de clonage Les plantes transgeniques cr es par recombinaison de l ADN pourraient galement prendre une place de plus en plus importante dans l agriculture moderne On ne doit proc der une exp rience comportant l laboration ou l utilisation qu apr s une valuation ou une analyse du risque biologique quelle com porte Il est possible que la pathog nicit et les dangers que peuvent comporter ces organismes pr sentent des caract ristiques nouvelles et plus ou moins bien d finies MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Il faut donc tudier les propri t s de Porganisme donneur et celles de Porganisme receveur la nature des s quences d ADN qui seront transf r es et les caract ristiques de Penvironnement La connaissance de tous ces facteurs devrait permettre de d ter miner plus facilement le niveau de s curit biologique n cessaire pour la manipula tion sans danger de OGM obtenu et les syst mes de confinement biologique et physique 3 mettre en ceuvre Consid rations bios curitaires applicables aux syst mes d express
204. la bouche les etiquettes ne doivent pas tre humect es avec la langue Toutes les techniques mises en ceuvre doivent r duire au minimum la formation d a rosols et de gouttelettes L emploi d aiguilles et de seringues hypodermiques doit tre limit Elles ne doivent en aucun cas remplacer les dispositifs de pipettage ou servir une autre fin que les injections par voie parent rale ou le pr l vement de liquides biologiques sur les animaux de laboratoire Si des liquides sont r pandus accidentellement en cas d accident d exposition patente ou possible 4 du mat riel infectieux le chef de laboratoire doit toujours tre imm diatement avis Les accidents et incidents survenus doivent tre con sign s et le rapport archiv elle MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Il est n cessaire d etablir par crit une marche suivre pour le nettoyage des produits de toute nature qui viendraient a tre r pandus Les liquides contamin s doivent tre d contamin s par voie physique ou chimique avant d tre jet s dans le r seau d gouts s paratif Selon le r sultat de P valuation du risque que repr sentent le ou les agents manipul s il pourra tre n cessaire de disposer d un syst me de traitement des effluents Si des documents doivent sortir du laboratoire ils devront avoir t prot g s de toute contamination Zones de travail du laboratoire Le labor
205. ladies transmissibles sur veillance et action Organisation mondiale de la Sant 20 Avenue Appia 1211 Gen ve 27 Suisse http www who int csr WHO Collaborating Centre for Biological Safety Swedish Institute for Infectious Disease Control Nobels Vag 18 S 171 82 Solna Su de http www smittskyddsinstitutet se English english htm WHO Collaborating Centre on Biosafety Technology and Consultative Services Bureau de la s curit des laboratoires Sant Canada 100 Colonnade Road Loc 6201A Ottawa Ontario Canada K1A 0K9 http www hc sc gc ca pphb dgspsp ols bsl WHO Collaborating Centre for Applied Biosafety Programmes and Training Office of Health and Safety Centers for Disease Control and Prevention 1600 Clifton Road Mailstop F05 Atlanta GA 30333 Etats Unis d Amerique http www cdc gov WHO Collaborating Centre for Applied Biosafety Programmes and Research Division of Occupational Health and Safety Office of Research Services National Institutes of Health Department of Health and Human Services 13 3K04 13 South Drive MSC 5760 Bethesda MD 20892 5760 Etats Unis Am rique http www nih gov WHO Collaborating Centre for Biosafety Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory 10 Wreckyn St Nth Melbourne Victoria 3051 Australie Adresse postale Locked Bag 815 PO Carlton Sth Victoria 3053 Australie http vvvvvv vidrl org au 158 ANNEXE 4 S curit d emploi des a
206. langeurs et g n rateurs d ultrasons 71 Anses a usage unique 71 Micro incin rateurs 72 Equipements et v tements de protection individuelle 72 PARTIE IV Bonnes techniques microbiologiques 75 12 Techniques de laboratoire 77 R gles de s curit pour la manipulation des chantillons au laboratoire 77 Utilisation des pipettes et des dispositifs de pipettage 78 Comment viter la dissemination de mat riel infectieux ive 78 13 14 15 TABLE DES MATIERES Utilisation des enceintes de s curit biologique Comment viter l ingestion de mat riel infectieux et le contact avec la peau et les yeux Comment viter l inoculation accidentelle de mat riel infectieux S paration du s rum Utilisation des centrifugeuses Utilisation des homog n iseurs des agitateurs secoueurs des m langeurs et des g n rateurs d ultrasons Utilisation des broyeurs de tissus Entretien et utilisation des r frig rateurs et cong lateurs Ouverture des ampoules contenant du mat riel infectieux lyophilis Stockage des ampoules contenant du mat riel infectieux Pr cautions d usage pour manipuler du sang et autres liquides biologiques des tissus et des excreta Pr cautions prendre avec le mat riel pouvant contenir des prions Plans d urgence et conduite tenir en cas d urgence Plan d urgence Conduite tenir en cas d urgence dans un laboratoire de microbiologie D sinfection et st rilisation D finitions
207. lateur est quip d un manometre pour la surveillance de la pression l int rieur de Penveloppe plastique Les isolateurs en film souple sont utilis s pour manipuler les micro organismes haut risque groupes de risque 3 ou 4 sur le terrain dans des conditions o il serait impossible ou imprudent d installer et d utiliser des enceintes de s curit biologique classiques Pipetteurs Le pipettage doit toujours se faire au moyen de pipetteurs Le pipettage la bouche est absolument interdit On ne saurait trop insister sur l importance des dispositifs de pipettage Les acci dents les plus courants li s au pipettage sont dus au pipettage la bouche Paspira tion par la bouche et Pingestion de produits dangereux sont responsables d un grand nombre d infections et d accidents de laboratoire 70 11 EQUIPEMENTS DE SECURITE Des germes pathog nes peuvent galement tre v hicul s jusqu a la bouche si le doigt avec lequel on ferme la pipette a t contamin Le pipettage a la bouche pr sente un autre danger beaucoup moins connu savoir Pinhalation des a rosols qui se forment pendant Paspiration Le cotonnage des pipettes n assure pas une filtration microbiologique satisfaisante en pression positive ou n gative et des particules peuvent traverser le coton Si celui ci est tr s serr on risque d aspirer fortement et en cons quence d aspirer le coton Paerosol et m me le liquide L utilisation de p
208. le contient avant de la d brancher d finitivement D contamination Lenceinte doit tre d contamin e avant de changer les filtres ou avant de la d placer La m thode la plus courante consiste en une fumigation au formald hyde La d con tamination des enceintes doit tre effectu e par un professionnel qualifi Equipements de protection individuelle Des v tements protecteurs doivent tre port s chaque fois que l on utilise une ESB Les blouses de laboratoire sont acceptables pour le travail aux niveaux de s curit biologique 1 ou 2 Aux niveaux 3 ou 4 il faut utiliser des blouses boutonnage dans le dos qui assurent une meilleure protection sauf dans un laboratoire o le port d une combinaison pressuris e est obligatoire Les gants doivent tre bien tir s de mani re passer par dessus les poignets et non pas en dessous Pour se prot ger les poignets on peut ajouter des manches lastique Certaines manipulations n cessitent le port d un masque ou de lunettes de protection Alarmes Les ESB peuvent tre quip es d un ou deux types d alarme Certaines alarmes n equipent que les enceintes dot es d un panneau d observation guillotine Ces alarmes se d clenchent si l op rateur place le panneau dans une mauvaise position et ne s arr tent que lorsqu il a remis le panneau correctement en place Un autre type d alarme est destin avertir d une perturbation dans la circulation de Pair Son d
209. les contenant du mat riel infectieux ouverture 83 stockage 83 anhydride ac tique 174 aniline 175 animaleries 11 32 37 invert br s 36 37 niveau de confinement 32 s curit biologique niveau 1 33 s curit biologique niveau 2 33 34 s curit biologique niveau 3 34 35 s curit biologique niveau 4 35 36 animaux limination des carcasses 34 ne servant pas aux exp riences 11 33 transg niques et knock out 115 anses de transfert usage unique 17 69 71 micro incin rateurs 69 72 utilisation sans risque 78 antimicrobiens 92 antiseptiques 92 97 98 99 appareils respiratoires quipement de protection 23 73 74 211 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE argent 175 arthropodes animaleries 37 lutte contre les 12 34 Association du Transport a rien international IATA 106 audit 41 42 auramine 176 autoclavage 19 102 104 autoclaves 70 102 104 deux portes 31 extraction d air 102 animaleries 34 36 source de chauffage ext rieure 102 vapeur directe 102 chargement 103 conformit 17 disponibilit 15 17 24 31 pr cautions d utilisation 103 104 azoture 122 176 azoture de sodium 176 bains marie 162 bec Bunsen 78 79 benz ne 177 benzidine 177 bicarbonate 123 d ammonium 100 biocide 92 1 1 Biph nyl 4 4 diamine 177 bis l nite de sodium 191 blessures conduite a tenir en cas d urgence 89 personnel de Panimalerie 34 pr vention 80 blouses de laboratoire 72
210. lles con tenant des solutions d alcool doivent tre clairement tiquet s pour viter tout auto clavage intempestif Iode et iodophores L action de ces d sinfectants est comparable celle du chlore encore qu ils puissent tre l g rement inhib s par les mati res organiques Liode peut tacher le tissu et les surfaces environnantes aussi n est il g n ralement pas utilisable comme d sinfectant Par contre Piode et les iodophores sont de bons antiseptiques La polyvidone iod e est un antiseptique s r et efficace pour le lavage chirurgical des mains et pour Pan tisepsie de la peau du champ op ratoire Les antiseptiques base d iode ne convien nent g n ralement pas pour la d sinfection du mat riel m dical ou dentaire Liode ne doit pas tre utilis sur Paluminium ou le cuivre Liode peut tre toxique Les compos s organiques iod s doivent tre conserv s 4 10 C pour viter que des bact ries potentiellement dangereuses ne s y d veloppent Peroxyde d hydrog ne et peracides Comme le chlore le peroxyde d hydrog ne eau oxyg n e H202 et les peracides sont des oxydants nergiques et peuvent constituer de puissants germicides large spectre Ils sont galement moins nocifs que le chlore pour Porganisme humain et pour l environnement Le peroxyde d hydrog ne est fourni soit la sous forme d une solution 3 pr te Pemploi soit en solution aqueuse 30 que l on dilue dans 5 10 f
211. me les trieurs de cellules qui sont pr vus pour travailler sur des 249 4 LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT SECURITE BIOLOGIQUE NIVEAU 3 Figure 4 Laboratoire classique au niveau 3 de s curit biologique figure aimablement communiqu e par CUH2A Princeton NJ Etats Unis d Am rique Le laboratoire est s par du lieu de passage g n ral et accessible par un vestibule qui peut tre soit une entr e double porte soit le laboratoire de base niveau de s cu rit 2 ou par un sas a air Le laboratoire est quip d un autoclave pour la d conta mination des d chets avant leur limination ainsi que d un vier a commande mains libres L air circule de Fexterieur vers l int rieur et toutes les manipulations sur du mat riel biologique infectieux sont effectu es dans une enceinte de s curit biologique cellules infect es peuvent n cessiter P installation d une ventilation suppl mentaire avec filtres HEPA pour un confinement efficace Surveillance m dico sanitaire Les objectifs des programmes de surveillance m dico sanitaire des laboratoires de base s curit biologique niveaux 1 et 2 s appliquent galement aux laboratoires de con finement s curit biologique niveau 3 moyennant les modifications suivantes 1 La visite m dicale est obligatoire pour tout le personnel de laboratoire qui travaille dans le laboratoire de confinement Elle devra comporter une anamn se 25 MANUEL DE SECU
212. me susceptible d etendre sa gamme d h tes ou de modifier sa sensibilit aux traitements reconnus comme efficaces voir chapitre 16 11 La possibilit d intervenir localement titre prophylactique ou curatif En s appuyant sur les informations recueillies lors de Pevaluation du risque il est possible de d terminer quel est le niveau de s curit requis pour les travaux envisag s de choisir les quipements de protection individuelle et d etablir des modes op ratoires normalis s MON comportant d autres mesures de s curit labor es en vue d assurer un maximum de s curit pendant les travaux Echantillons pour lesquels les informations sont limit es La proc dure d crite plus haut pour Pevaluation du risque donne satisfaction lorsqu on dispose d informations suffisantes Il y a cependant des cas o Pon ne dispose pas de donn es suffisantes pour appr cier correctement le risque par exemple lorsqu on a affaire des chantillons cliniques ou pid miologique pr lev s sur le terrain En pareil cas il est plus prudent de manipuler ces chantillons avec pr caution 1 Les pr cautions habituelles 2 doivent toujours tre prises et des dispositifs m caniques de protection gants blouses lunettes utilis s lors du pr l vement d chantillons sur des malades 2 Confinement de base les pratiques et modes op ratoires pr vues au niveau de s curit biologique 2 constituent un minimum pour la manipulati
213. ment d un laboratoire et sa s curit reposent dans une large mesure sur le personnel de maintenance et d entretien et il est donc essentiel qu il recoive la formation voulue aux questions de s curit Services de maintenance des appareils et des batiments Les ing nieurs et les ouvriers qualifi s qui assurent la maintenance et la r paration des batiments des installations et de Pappareillage doivent avoir une certaine connais sance des activit s du laboratoire ainsi que des r gles et consignes de s curit Lessai des appareils apr s r vision par exemple les contr les d efficacite des enceintes de s curit biologique apr s le remplacement des filtres pourra tre confi au d l gu a la s curit biologique ou effectu sous sa direction Les tablissements et laboratoires qui ne disposent pas de leurs propres services techniques de maintenance doivent entretenir de bonnes relations avec les prestataires de services locaux et les familiariser avec leurs quipements et leurs activit s Les ing nieurs et le personnel de maintenance ne doivent pas p n trer dans des laboratoires de confinement s curit biologique niveaux 3 ou 4 sans une autorisa tion d livr e par le d l gu a la s curit ou le chef de laboratoire ou sans leur sur veillance Nettoyage Dans les laboratoires de confinement s curit biologique niveau 3 ou de confine ment de haute s curit s curit biologique niveau 4 le netto
214. mpr visibles et ind sirables susceptibles de les rendre dangereux 5 15 venaient s chapper des labo ratoires Ces inqui tudes ont constitu le th me central des d bats qui se sont d roul s lors de la conf rence scientifique tenue en 1975 Asilomar en Californie Erats Unrs d Amerque 45 Les discussions qui ont eu lieu lors de cette r union au sujet des prob l mes de s curit biologique ont abouti Penonce des premiers principes directeurs concernant les technologies de recombinaison de l ADN L exp rience acquise apr s 25 ans de recherches montre que les travaux de g nie g n tique peuvent tre effectu s dans de bonnes conditions de s curit pour peu que l on value correctement le risque et que des mesures suffisantes de s curit soient prises Les premiers travaux de g nie g n tique avaient pour but de cloner des fragments d ADN dans des h tes bact riens afin d obtenir la surexpression de certains produits g niques en vue d tudes ult rieures Des mol cules d ADN recombinant sont gale ment utilis es pour cr er divers types d OGM comme les animaux ou plantes trans g niques ou les animaux knock out c est dire dont certains g nes sont inactiv s ou supprim s Les technologies de recombinaison de PADN ont d ores et d j des retomb es con sid rables en biologie et en m decine et leur influence va probablement encore s ac centuer maintenant que l on conna t la s quence nuc
215. n bon tat de marche et r guli rement v rifi s Les postes d alarme incendie sont ils accessibles Les sorties sont elles toutes indiqu es par un panneau lumineux ad quat L acc s aux sorties est il indiqu lorsqu il n est pas directement visible Toutes les sorties sont elles d gag es et non dissimul es ou encombr es par des l ments d coratifs du mobilier ou des appareils et les portes sont elles d ver rouill es lorsque le b timent est occup L acc s aux sorties est il pr vu pour que Pon puisse fuir sans avoir traverser une zone haut risque Les sorties d bouchent elles toutes l ext rieur 145 10 11 12 13 14 15 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Les couloirs d gagements passages etc sont ils libres et d gag s pour permettre la circulation du personnel et du mat riel de lutte anti incendie Le mat riel et les quipements de lutte anti incendie sont ils facilement identi fiables par un code de couleur appropri Existe t il des extincteurs portatifs toujours pleins en bon tat et ala place pr vue Les salles du laboratoire o existe un risque d incendie sont elles quip es d extincteurs et de couvertures anti feu utilisables en cas d urgence Si des gaz ou des liquides inflammables sont utilis s dans une pi ce la ventilation m canique est elle suffisante pour liminer les vapeurs avant qu elles n atteigne
216. n laboratoire 2 d Ottawa Ministre des Approvisionnements et Services Canada 1996 Biological safety cabinets biological safety cabinets Class I for personnel and environment protection Sydney Standards Australia International 1994 Standard AS 2252 1 1994 Biological safety cabinets laminar flow biological safety cabinets Class II for personnel envi ronment and product protection Sydney Standards Australia International 1994 Standard AS 2252 2 1994 1538 16 17 18 19 20 21 22 29 24 25 26 27 28 29 30 31 22 22 34 35 36 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Standards Australia Standards New Zealand Biological safety cabinets installation and use Sydney Standards Australia International 2000 Standard AS NZS 2647 2000 Advisory Committee on Dangerous Pathogens Guidance on the use testing and maintenance of laboratory and animal flexible film isolators London Health and Safety Executive 1990 Standards Australia Standards New Zealand Safety in laboratories microbiological aspects and containment facilities Sydney Standards Australia International 2002 Standard AS NZS 2243 3 2002 Centers for Disease Control and Prevention Recommendations for prevention of HIV transmission in health care settings Morbidity and Mortality Weekly Report 1987 36 Suppl 2 1S 18S Bosque PJ et al Prions in skeletal muscle
217. n nettoyage pr alable de mat riels contamin s potentiellement infectieux destin s passer Pautoclave en vue d une r utilisation Le nettoyage ou les r parations n cessaires ne doivent tre effectu s qu apr s Pautoclavage ou la d sinfection Mat riel contamin potentiellement infectieux destin tre limin A part les objets pointus ou tranchants dont le cas est examin plus haut tous les mat riels contamin s potentiellement infectieux doivent tre autoclav s dans des r cipients tanches par exemple des sacs en plastique autoclavables avec code de couleur avant d tre limin s Apr s passage l autoclave ils pourront tre plac s dans un conteneur pour le transport jusqu Pincinerateur Autant que possible le mat riel dont les tablissements de soins ou de sant se d barrassent ne doit pas tre jet dans des d charges m me une fois d contamin Si le laboratoire dispose d un incin rateur sur place on peut se dispenser du passage l autoclave les d chets contamin s seront plac s dans des collecteurs destin s cet usage sacs avec code de couleur par exemple et transport s directement jusqu l incin rateur Les conteneurs de transport r utilisables doivent tre tanches et ferm s hermetiquement Il faudra les d sinfecter et les nettoyer avant de les ramener au laboratoire et de les r utiliser Chaque poste de travail doit disposer de conteneurs pots cuve
218. n particulier dans les pi ces o elle est m canique 4 Le syst me de ventilation est il muni de filtres HEPA 5 La ventilation m canique perturbe t elle les flux laminaires l int rieur et autour des enceintes de s curit biologique et des hottes ou sorbonnes Eclairage 1 L clairage g n ral est il satisfaisant par ex 300 400 lux 2 Un clairage local est il fourni au dessus des paillasses 3 Les pi ces sont elles partout bien clair es ou subsiste t il des coins sombres dans les pi ces et les couloirs 4 Les tubes fluorescents sont ils parall les la surface des paillasses et des plans de travail 5 Les tubes fluorescents ont ils un spectre quilibr Services 1 Chaque salle du laboratoire est elle quip e avec suffisamment d viers de robinets d eau et de gaz et de prises de courant pour que Pon puisse travailler sans danger 144 22 LISTE DES CONTROLES DE SECURITE A t on mis en place un programme convenable d inspection et de maintenance pour les fusibles les lampes et tubes les cables les canalisations etc Les pannes sont elles r par es dans un delai raisonnable Existe t il un service technique interne charg de la maintenance avec des ing nieurs et des ouvriers comp tents ayant une certaine connaissance des travaux qui sont effectu s dans le laboratoire Lacc s de ce personnel technique de maintenance aux locaux du laboratoire est il reglemente
219. ne association de d sinfectants liquides et gazeux Les surfaces peuvent tre d contamin es au moyen d une solution d hypochlorite de sodium NaOCl une solution contenant 1 g de chlore actif par litre peut convenir pour Pas sainissement g n ral des locaux mais des solutions plus concentr es sont recom mand es en cas de situation haut risque Pour la d contamination des locaux du laboratoire les solutions pr tes l emploi contenant 3 de peroxyde d hydrog ne H0 peuvent parfaitement remplacer les solutions d hypochlorite On peut galement decontaminer les salles et Pequipement par fumigation au formald hyde produit en chauffant du paraformald hyde ou en faisant bouillir du formol Ce proc d est extr mement dangereux et doit tre mis en uvre par du per sonnel qualifi Toutes les ouvertures de la pi ce fen tres portes etc doivent tre herm tiquement ferm es avec du ruban adh sif par exemple avant le d gagement du gaz La fumigation doit tre effectu e une temp rature ambiante d au moins 21 C et une humidit relative de 70 voir plus loin dans ce chapitre la section consacr e la d contamination des enceintes de s curit biologique Une fois l op ration achev e il faut ventiler abondamment les locaux avant d au toriser entr e du personnel Le personnel oblig de p n trer dans la salle avant l a ra tion doit porter un masque respiratoire appropri On peut utiliser
220. nipulations haut risque aux personnes particuli rement vuln rables par ex les femmes enceintes ou les sujets immunod prim s 4 Prendre des mesures de protection efficaces et veiller Pefficacit des dispositifs de protection Lignes directrices pour la surveillance des travailleurs qui manipulent des micro organismes au niveau 1 de s curit biologique Il appara t la lumi re de Pexperience pass e que les micro organismes manipul s ce niveau n ont gu re de chances de provoquer de maladies d importance m dicale ou v t rinaire L id al serait cependant que tous les candidats un poste dans un laboratoire passent une visite m dicale d embauche au cours de laquelle on recherchera leur ant c dents m dicaux Il est souhaitable que toute pathologie ou accident de laboratoire soit signal sans d lai et que tous les membres du personnel mesurent combien il est important de maintenir la qualit des techniques microbiologiques Lignes directrices pour la surveillance des travailleurs qui manipulent des micro organismes au niveau 2 de s curit biologique 1 Une visite d embauche s impose avant l affectation un poste dans un laboratoire Cet examen comportera une anamn se la recherche des ant c dents m dicaux et un bilan m dical sp cifique de l aptitude professionnelle sera effectu 2 La direction du laboratoire devra tenir un registre des absences et des maladies du personnel 17 MANUEL DE SEC
221. nn es nouvelles susceptibles d avoir des incidences sur le degr de risque et de toute nouvelle information utile tir e de la litt rature scientifique L tablissement de groupes de risque applicables aux diff rents agents microbiens constitue l un des outils les plus utiles pour Pevaluation du risque microbiologique voir chapitre 1 Toutefois il ne suffit pas de conna tre le groupe de risque auquel appartient un agent pathog ne donn pour valuer le risque effectif D autres l ments d appr ciation doivent galement tre pris en compte en tant que de besoin savoir 1 La pathog nicit du germe et la dose infectieuse 2 Lissue vraisemblable d une exposition au germe 3 Le mode de contamination naturel 4 Les autres voies ou modes de contamination r sultant de manipulations en laboratoire voie parent rale particules a roport es voie digestive La stabilit du germe dans l environnement ul 6 La concentration du germe et le volume de mat riel biologique concentr a manipuler 7 La pr sence dun h te appropri humain ou animal 8 Les informations tir es de l exp rimentation animale les rapports faisant tat d infections contract es en laboratoire ou les rapports m dicaux 9 Le type d op rations envisag es traitement par les ultra sons production d a rosols centrifugation etc MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE 10 Toute manipulation g n tique du micro organis
222. nneaux indiquant la pr sence de produits inflammables et un risque d incendie Le personnel a t il appris transporter et a utiliser correctement les liquides inflammables Gaz comprim s et liqu fi s 1 2 Chaque bouteille de gaz portable est elle tiquet e correctement code de couleur et contenu Le bon tat des bouteilles de gaz et de leurs manod tendeurs est il r guli rement verific 146 22 LISTE DES CONTROLES DE SECURITE Les manodetendeurs sont ils r guli rement entretenus Quand une bouteille est utilis e se sert on d un manod tendeur Quand les bouteilles ne sont pas utilis es ou sont transport es sont elles ferm es par un bouchon protecteur Toutes les bouteilles de gaz comprim s sont elles rang es de mani re ne pas pouvoir tomber notamment en cas de catastrophe naturelle Les bouteilles et les f ts de gaz de p trole liqu fi sont ils plac s loin des sources de chaleur Le personnel a t il appris utiliser et transporter correctement les gaz com prim s ou liqu fi s isques lectriques Toutes les installations neuves remplac es modifi es ou r par es sont elles con formes aux normes nationales en mati re de s curit lectrique et maintenues telles 2 Le cablage interieur des batiments est il reli a la terre Tous les circuits du laboratoire sont ils munis de disjoncteurs et de disjoncteurs diff rentiels
223. ns la mise en uvre de techniques utilisant de l ADN recombinant et le transport d chantillons biologiques infectieux Des v nements r cents ont mis en lumi re les nouvelles menaces que l on pourrait faire peser sur la sant publique en d tournant d lib r ment des agents ou des toxines biologiques de leur usage normal pour les lib rer dans l environnement La troisi me dition constitue donc galement une introduction la notion de s ret biologique notamment en ce qui concerne la protection des ressources biologiques contre le vol la perte ou le d tournement de ces agents qui pourraient d boucher sur une utilisation mauvais escient dommageable pour la sant publique Le nouveau manuel contient galement des informations de nature s curitaire tir es d une pu blication de POMS intitul e Safety in health care laboratories 1 Cette troisi me dition du Manuel de s curit biologique en laboratoire constituera un ouvrage de r f rence et un guide utile aux pays d sireux de s attaquer la t che difficile que repr sentent l laboration et l tablissement de recueils nationaux de directives pratiques ou de codes de bonnes pratiques pour une s curisation des viii AVANT PROPOS ressources microbiologiques qui n entrave pas leur utilisation en clinique dans la recherche et en pid miologie Dr A Asamoah Baah Sous directeur g n ral Maladies transmissibles Organisation mondiale de la Sant
224. nsport s dans des sacs de pr f rence des sacs plastiques Le personnel pr pos a Tincineration doit avoir re u des instructions appropri es concernant le chargement et le r glage de la temperature de l incin rateur A noter que le bon fonc tionnement d un incin rateur depend tr s largement d un panachage judicieux des mati res et objets trait s 104 14 DESINFECTION ET STERILISATION Ces incin rateurs existants ou en projet continuent a susciter des inqui tudes quant aux effets n gatifs qu ils pourraient avoir sur l environnement et les tudes se poursuivent pour mettre au point des appareils plus respectueux de l environnement et consommant moins d nergie Elimination Lelimination des d chets de laboratoire ou des d chets m dicaux est soumise diverses dispositions r glementaires r gionales nationales ou internationales et les versions les plus r centes de ces documents doivent tre consult es avant d laborer et de mettre en uvre un programme portant sur la manipulation le transport et l limination des d chets qui pr sentent un risque biologique En r gle g n rale les cendres extraites des incin rateurs peuvent tre trait es comme des cendres domes tiques et prises en charge par les services locaux d enl vement des ordures Les d chets autoclav s peuvent tre limin s par incin ration sur un site hors de la zone du la boratoire ou enfouis dans une d charge autoris e v
225. nt une concentration dangereuse A t on appris au personnel comment se comporter en cas d incendie Stockage des liquides inflammables 1 Est ce que les r serves de liquides inflammables sont stock es dans un endroit separ du batiment principal 2 Un panneau de risque incendie est il visiblement appos Pentree du local 10 11 12 13 Le local est il quip d un syst me de ventilation naturelle ou forc e distinct du b timent principal Les interrupteurs lectriques sont ils antid flagrants ou plac s a Pexterieur du batiment Le syst me d eclairage du local est il antid flagrant pour que les vapeurs ne risquent pas de s enflammer au contact des tincelles Les liquides inflammables sont ils conserv s dans des r cipients ventil s appro pri s fabriqu s avec des mat riaux incombustibles Le contenu des r cipients est il correctement indiqu sur Petiquette Des extincteurs ou des couvertures anti feu appropri s sont ils plac s a Pexterieur mais proximit de la r serve de liquides inflammables Des panneaux D fense de fumer sont ils appos s bien visiblement l int rieur et Texterieur de la r serve Est ce que la quantit de produits inflammables conserv s dans les salles du laboratoire est la plus faible possible Ces produits sont ils conserv s dans des armoires de s curit anti feu Ces armoires portent elles des pa
226. nt infectieux doivent normalement tre mani pul s dans une enceinte de s curit biologique ou tout autre dispositif de con finement primaire voir galement le chapitre 10 4 Le port d un masque respiratoire peut tre n cessaire pour certaines manipula tions ou lorsque on travaille sur des animaux porteurs de certains germes pathog nes voir chapitre 11 Conception et am nagement du laboratoire Les recommandations relatives la conception et Pam nagement des laboratoires de base niveaux de s curit biologique 1 et 2 s appliquent moyennant les modifica tions suivantes il Le laboratoire doit tre s par des zones de passage non r glement l int rieur du b timent On peut compl ter l isolement en pla ant le laboratoire au fond d un couloir sans ouverture sur l ext rieur en construisant une cloison munie d une porte ou encore en n ouvrant l acc s que par un vestibule par exemple un sas a double entr e ou le laboratoire de base s curit biologique niveau 2 d limitant une zone sp cialement con ue pour maintenir une diff rence de pression entre le laboratoire et les espaces contigus Le vestibule doit tre am nag pour la s paration des v tements protecteurs sales et propres et disposer d une douche si n cessaire Les portes du vestibule doivent tre fermeture automatique et verrouillage asservi de sorte qu une seule porte puisse tre ouverte la fois
227. nt la concentration n cessaire de 1 ou 5 g l en dissolvant 1 ou 4 com prim s dans 1 litre d eau En poudre ou en comprim s le dichloroisocyanurate de sodium est facile conserver dans de bonnes conditions de s curit En pr sence de sang ou d autres liquides infectieux accidentellement r pandus on applique le produit sous forme solide et on le laisse agir pendant au moins 10 minutes avant de Pelim iner On peut ensuite proc der au nettoyage de la zone touch e Chloramines Les chloramines existent sous forme de poudres contenant environ 25 de chlore actif Dans la mesure ot le chlore est lib r plus lentement quavec les hypochlorites la concentration initiale doit tre plus lev e pour que Pefficacit soit comparable celle des hypochlorites En revanche les chloramines en solution sont moins inac tiv es par les mati res organiques que les hypochlorites et elles sont recommandees a la concentration de 20g l que la situation soit propre ou sale Les solutions de chloramines sont pratiquement inodores Il faut toutefois rincer abondamment les objets qui y ont t plong s pour liminer tout r sidu de Pagent gonflant ajout aux poudres de chloramine T tosylchloramide sodique Dioxyde de chlore Le dioxyde de chlore est un germicide un d sinfectant et un oxydant puissant et rapide qui agit des concentrations plus faibles que le chlore sous forme d hypochlorite Sous forme gazeuse le di
228. nt plut t que la m morisation pure et simple La formation dispens e doit requ rir des apprenants qu ils se montrent productifs et r agissent de mani re appropri e r ponse positive exacte ou cr dible En outre tout l ment de la formation qui fournit une occasion d application pratique dans des conditions analogues celles du poste de travail facilitera la mise en uvre en si tuation r elle de la comp tence acquise par Papprenant Evaluer la formation Elle a pour but de fournir des informations qui permet tront de savoir si l instruction dispens e a atteint son but Cette valuation se fait g n ralement de quatre mani res mesure de la r action de Papprenant la formation dispens e mesure du degr de restitution dont l apprenant est capable ou de ses r sultats appr ciation des changements de comportement dans le poste de travail recherche et valuation de r sultats tangibles par rapport aux buts et objectifs de Petablissement Pour proc der une valuation exhaustive de la formation il faut r pondre ces quatre points Le mode d valuation le moins efficace consiste ne prendre en consid ration que les r actions de Papprenant l instruction dispens e car elles peuvent tre sans v ritable rapport avec ce qui a t effectivement appris Il ne faut en aucun cas utiliser cette m thode comme seule mesure de l efficacit de la formation R viser la formation
229. ntiseptiques germicides chi miques ou d sinfectants Un nettoyage pr alable est n cessaire pour assurer une bonne d sinfection ou une bonne st rilisation Beaucoup de produits germicides ne sont actifs qu la condition d tre appliqu s des objets pr lablement nettoy s Ce pr nettoyage doit tre effec tu avec pr caution pour viter de s exposer aux agents infectieux Il faut qu il y ait compatibilit chimique entre le mat riel utilis et les germicides qui seront utilis s ult rieurement pour le d sinfecter Il est assez courant d utiliser le m me germicide chimique pour le nettoyage pr alable et la d sinfection Germicides chimiques De nombreuses substances chimiques peuvent tre utilis es comme d sinfectants ou antiseptiques Chaque pr paration doit toutefois tre choisie avec soin en fonction des besoins sp cifiques du laboratoire parmi des produits commerciaux toujours plus nombreux et divers L activit germicide de nombreux produits chimiques s acc l re et s am liore lorsque la temp rature s l ve D un autre c t une temp rature lev e peut provoquer une vaporation plus rapide et entra ner galement la d composition du produit C est pourquoi des pr cautions particuli res doivent tre prises pour le stockage et l utilisation de ces produits dans les r gions tropicales o leur dur e de conservation risque de se trouver r duite en raison de la forte temp rature ambiant
230. ntrol 1996 24 24 52 http www cdc gov ncidod hip isolat isolat htm 156 ANNEXE 2 Vaccination du personnel Il faut s entretenir en d tail avec chaque chercheur des risques que comporte le travail sur tel ou tel agent infectieux Avant de commencer a travailler sur ces agents il con vient de se renseigner sur la possibilit de se procurer localement des vaccins et des m dicaments par ex des antibiotiques sur leur autorisation de mise sur le march et sur leur utilit Certains membres du personnel peuvent tre d j immunis s en raison d une vaccination ou d une maladie infectieuse ant rieures Si un vaccin ou une anatoxine appropri s sont autoris s la vente sur le march local et que l on puisse se les procurer il faut en proposer l administration si une valuation du risque et l examen clinique de la personne en cause concluent la possibilit d une exposition Il faut galement que Petablissement dispose d une installation o les personnes victimes d une contamination accidentelle puissent b n ficier de la prise en charge clinique correspondant leur cas 157 ANNEXE 3 Centres collaborateurs de l OMS pour la s curit biologique Pour obtenir des renseignements sur les cours outils et mat riels p dagogiques dans le domaine de la s curit biologique le lecteur peut s adresser par crit aux organismes suivants Programme de s curit biologique D partement ma
231. oir le chapitre 3 Pour de plus amples informations le lecteur peut consulter les r f rences 13 et 29 39 105 15 Introduction au transport des mati res infectieuses Le transport des mati res infectieuses ou potentiellement infectieuses est soumis une r glementation nationale et internationale rigoureuse Cette r glementation pr cise comment utiliser les mat riaux d emballage selon les formes prescrites et num re galement les autres dispositions respecter pour les exp ditions Le personnel du laboratoire doit exp dier les mati res infectieuses en respectant la r glementation applicable leur transport L observation de ces r gles permet 1 De r duire le risque de d t rioration ou de fuite des colis et par voie de cons quence 2 de r duire l exposition une ventuelle infection et 3 d am liorer les conditions de livraison des colis R glementation internationale relative aux transports La r glementation relative aux transports de mati res infectieuses quel qu en soit le moyen repose sur le R glement type des Nations Unies pour le transport des mati res dangereuses 40 Ces recommandations manent du Comit d experts de PONU en mati re de transport des marchandises dangereuses UNCEDTG Pour avoir force de loi les dispositions du R glement type des Nations Unies doivent tre incorpor es dans la r glementation nationale et internationale par les autorit s comp tentes pa
232. ois son volume d eau st rilis e En fait ces solutions 3 6 de peroxyde d hydrog ne ont une action relativement lente et leur pouvoir germicide est limit Il existe maintenant des solutions contenant d autres substances destin es stabiliser la teneur en peroxyde d hydrog ne Ces produits ont une action germicide plus rapide et sont moins corrosifs On peut utiliser le peroxyde d hydrog ne pour d contaminer les paillasses et les enceintes de s curit biologique et les solutions les plus concentr es peuvent convenir pour la d sinfection du mat riel m dical ou dentaire qui ne supporte pas la chaleur La vaporisation de peroxyde d hydrog ne ou d acide perac tique CH COOOH pour s 99 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE decontaminer le mat riel medical ou chirurgical non r sistant a la chaleur exige un appareillage special Le peroxyde d hydrog ne et les peracides peuvent corroder les m taux comme Pa luminium le cuivre le laiton et le zinc et ils sont galement capables de d colorer les tissus le systeme pileux la peau et les membranes Tout objet trait avec ces produits doit tre rinc fond avant d tre mis en contact avec les yeux ou les muqueuses Le stockage doit toujours se faire Pabri de la chaleur et de la lumi re D contamination de l environnement local La d contamination des locaux du laboratoire de son mobilier et de son quipement n cessite l emploi d u
233. oivent tre activ s alcalinis s avant usage par addition de bicarbonate livr avec le produit Une fois activ e la solution peut tre r utilis e pendant 1 4 semaines selon le type de pr paration et son mode ou sa fr quence d utilisation Les bandelettes r actives fournies avec certains produits ne donnent qu une indication approximative de la concentration en glutarald hyde actif pr sent dans la solution utilis e La solution doit tre jet e si elle se trouble Le glutarald hyde est toxique et irritant pour la peau et les muqueuses aussi faut il viter tout contact avec ce compos On doit l utiliser sous une sorbonne ou dans une zone parfaitement ventil e Il n est pas recommand sous forme de pulv risations ou de solution pour d contaminer les surfaces d un local Dans tous les cas on se con formera la r glementation nationale en mati re de s curit chimique D riv s ph noliques Les d riv s ph noliques constituent un vaste groupe d agents qui ont compt parmi les premiers germicides utilis s Toutefois leur s curit d emploi ayant t r cemment mise en doute leur emploi s est restreint Ils sont actifs contre les bact ries v g ta tives les virus lipidiques et sous une forme appropri e galement contre les mycobact ries Ils sont sans effet sur les spores et leur activit contre les virus non lipidiques est variable De nombreux compos s ph noliques sont utilis s po
234. ologique applicables aux laboratoires des tablissements de soins qui figuraient dans d autres publications de POMS sont galement reprises dans le manuel Le manuel devrait continuer tre pour les pays un encouragement a mettre en uvre des programmes de s curit biologique ainsi que des codes nationaux de bonnes pratiques pour la manipulation dans de bonnes conditions de s curit de mat riels biologiques potentiellement infectieux ISBN 92 4 254650 X 9 789242 546507 2 z 4 SWO NOILIQ3 JW931S1041 44101V408V1 N3 1101801018 4114n193 30 TANNVIN WJ MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Troisi me dition Organisation mondiale de la Sant L DE SECURITE UE EN LAB OIRE reste Et AL m ORGANISATION MONDIALE DE LA SANTE M BIOL i S 2005 Catalogage la source Bibliotheque de POMS Organisation mondiale de la Sant Manuel de s curit biologique en laboratoire 3 d 1 Maitrise risque biologique methodes 2 Laboratoire normes 3 Infection laboratoire pr vention et contr le 4 Manuel I Titre ISBN 92 4 254650 X Classification LC NLM QY 25 Cette publication a b n fici d une subvention Grant Cooperative Agreement Number U50 CCU012445 08 des Centers for Disease Control and Prevention CDC Atlanta G orgie Etats Unis d Am rique Les informations qu elle contient sont publi es sous la responsabilit
235. olution d hypochlorite 5 fait Paffaire toutefois si l accident survient bord d un aeronef il faut utiliser un compos d ammonium quaternaire Appliquer le d sinfectant par zones concentriques en commen ant par les bords du secteur contamin et en se dirigeant vers le centre Au bout d une dur e appropri e par ex 30min liminer les produits En pr sence de d bris de verre ou autres objets pointus ou tranchants se servir d une pelle ou dun morceau de carton rigide pour les rassembler et les placer dans un r cipient imperforable en vue de leur limination Nettoyer et d sinfecter Pemplacement o le liquide a t r pandu si n cessaire r p ter les op rations 2 5 Jeter les mat riaux et produits contamin s dans une poubelle tanche et imperforable Une fois la d sinfection achev e informer les autorit s comp tentes que le site est d contamin 109 PARTIE V Introduction aux biotechnologies 16 S curit et technologies de recombinaison de Les technologies de recombinaison de l ADN galement connues sous la d nomi nation de g nie g n tique consistent a associer du mat riel g n tique de diverses origines pour cr er des organismes g n tiquement modifi s OGM qui n ont pro bablement jamais exist dans la nature Au d but les sp cialistes de la biologie mol cu laire craignaient que ces organismes ne soient dot s de propri t s i
236. on des chantillons 3 Le transport des chantillons doit s effectuer conform ment la r glementation nationale ou internationale Certaines donn es peuvent apporter un compl ment d information utile P valuation du risque que repr sente la manipulation de ces chantillons savoir 1 Le dossier m dical du malade 2 Les donn es pid miologiques statistiques de morbidit et de mortalit mode de transmission pr sum autres donn es fournies par l tude de la flamb e pid mique 3 Donn es relatives l origine g ographique de l chantillon Lorsqu clatent des flamb es d une maladie dont on ignore Petiologie les autorit s comp tentes l OMS ou les deux la fois peuvent tre amen es laborer des direc tives sp ciales et les diffuser sur le r seau internet comme cela a t le cas en 2003 lors de l apparition du syndrome respiratoire aigu s v re SRAS le but tant d indi quer comment pr parer les chantillons pour Pexpedition et de pr ciser quel niveau de s curit biologique les analyses doivent tre effectu es Evaluation du risque et micro organismes g n tiquement modifi s On trouvera au chapitre 16 une tude d taill e de l valuation du risque dans le cas d organismes g n tiquement modifi s OGM 3 Les laboratoires de base S curit biologique niveaux 1 et 2 Aux fins du present manuel les indications et recommandations qu il contient et qu
237. ook of animal models of infection London Academic Press 1999 69 74 Biosafety in microbiological and biomedical laboratories 4th ed Washington DC United States Department of Health and Human Services Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health 1999 Class II laminar flow biohazard cabinetry Ann Arbor MI National Sanitation Founda tion 2002 NSF ANSI 49 2002 Richmond JY McKinney RW Primary containment for biohazards selection installation and use of biological safety cabinets 2nd ed Washington DC United States Department of Health and Human Services Centers for Disease Control and Prevention National Insti tutes of Health 2000 Microbiological safety cabinets Recommendations for information to be exchanged between purchaser vendor and installer and recommendations for installation London British Stan dards Institution 1992 Standard BS 5726 2 1992 Microbiological safety cabinets Recommendations for selection use and maintenance London British Standards Institution 1992 Standard BS 5726 4 1992 Biological containment cabinets Class I and II installation and field testing Toronto Canadian Standards Association 1995 Standard Z316 3 95 R2000 Collins CH Kennedy DA Laboratory acquired infections history incidence causes and pre vention 4th ed Oxford Butterworth Heinemann 1999 Sant Canada Lignes directrices en mati re de bios curit e
238. ormald hyde 96 14 DESINFECTION ET STERILISATION presente en paillettes ou en comprim s ou encore sous forme de gaz dissous dans Peau raison d environ 370 g l 37 96 additionn de m thanol 100 ml l comme stabilisateur formol Par chauffage ces deux formes lib rent du formaldehyde que Pon utilise pour d contaminer et d sinfecter les espaces clos locaux ou enceintes de s curit biologique par exemple voir ce sujet la section consacr e la d contamination de Penviron nement local dans ce m me chapitre On peut galement Putiliser comme d sinfectant liquide formol a 5 dans Teau On suspecte le formaldehyde d tre canc rog ne C est de toute fa on un gaz dan gereux aux propri t s irritantes dot d une odeur cre Ses vapeurs peuvent irriter les yeux et les muqueuses Il faut donc Pentreposer et Putiliser sous une hotte ou dans une zone bien ventil e Il faut se conformer la r glementation nationale en mati re de s curit chimique Glutarald hyde Comme le formald hyde le glutarald hyde OHC CH CHO est galement actif contre les bact ries v g tatives les spores les champignons ou les virus lipidiques et non lipidiques Il n est pas corrosif et agit plus rapidement que le formald hyde Il lui faut toutefois plusieurs heures pour venir bout des spores bact riennes Il est g n ralement fourni sous forme de solution environ 20 g l 2 et certains produits d
239. ositif d alarme Syst me de d tection des fuites d eau par ex en cas d inondation dans la zone de confinement Douche de d contamination et syst me de distribution d additifs chimiques Installation de lavage des cages et de neutralisation des eaux de lavage Gestion des d chets 40 6 Principes directeurs pour l agr ment des laboratoires installations Un laboratoire est un environnement complexe et dynamique Aujourd hui les laboratoires de recherche biom dicale et de biologie m dicale doivent tre capables de 5 rapidement aux exigences et aux contraintes sans cesse croissantes de la sant publique C est ainsi par exemple que les laboratoires doivent repenser leurs priorit s pour faire face 4 la menace que repr sentent la r apparition de certaines maladies infectieuses ou Pemergence de pathologies nouvelles C est pour faire en sorte que cette adaptation et les mesures de maintenance correspondantes s effectuent avec la promptitude voulue que tous les laboratoires de recherche biologique et de biologie m dicale sont soumis a un agr ment p riodique Cette proc dure contribue garantir que 1 Le laboratoire est dot de syst mes de contr le technique appropri s et que ceux ci fonctionnent conform ment aux previsions 2 Des moyens de contr le sp cifiques du site et des protocoles utilis s ont t mis en place 3 Les quipements de protection individuelle sont adapt
240. our microscopie 84 fumigation 100 gants 11 67 73 74 gaz alimentation du laboratoire 15 comprim s et liqu fi s 123 146 147 g n rateurs d ultrasons 71 82 84 85 161 214 genie genetique 113 germicides chimiques 93 100 glutarald hyde 97 191 gouttes paisses 84 grillages emp chant le passage des arthropodes 37 groupes de risque microbiologique 9 classification 1 2 laboratoire de base 9 niveau de s curit biologique 2 3 homog n isateurs et broyeurs de tissus 161 hotte a flux laminaire horizontal ou vertical 57 1 hydrazino 2 4 dinitrobenz ne 185 hydroselenite de sodium 191 hydroxyde de potassium 192 de sodium 192 hypochlorite de calcium 94 95 de sodium 94 95 100 193 incendies 21 125 126 listes contr les pour la pr vention et la protection 145 146 proc dures d urgence 90 91 risques 125 162 incidents voir accident renversements incin rateurs 104 105 incin ration 21 104 105 ing nieurs 136 ingestion de mat riel infectieux 79 80 89 inoculation accidentelle 80 insectes volants 37 inspection du laboratoire 41 42 interdiction de fumer 11 34 invert br s 36 37 iode 99 194 iodophores 99 isolateurs d pression en film ou feuille de plastique souple 68 69 70 isopropanol propanol 2 98 202 jarres incubateurs ana robie 160 162 INDEX laboratoire agr ment 41 42 formulaire contr les de s curit 43 48 locaux liste de contr le 143 principes direc
241. oxyde de chlore est instable et se dissocie exothermiquement en chlore CL et en oxyg ne O Par contre il se dissout dans l eau pour donner des solutions aqueuses stables On peut Pobtenir de deux mani res 1 sur place par action de Pacide chlorhydrique HCl sur le chlorite de sodium NaClO 2 en le commandant sous forme stabilis e que l on active ensuite sur place selon les besoins De tous les oxydants biocides le dioxyde de chlore est le plus s lectif Dozone et le chlore sont beacoup plus r actifs et agissent sur la plupart des compos s organiques Le dioxyde de chlore en revanche ne r agit que sur les compos s soufr s r duits les amines tertiaires et secondaires ou encore sur certains d riv s organiques r actifs ou fortement r duits On peut donc obtenir avec des doses beaucoup plus faibles de dioxyde de chlore un r sidu plus stable qu avec le chlore ou l ozone S il est conve nablement pr par la s lectivit de ce produit permet de Futiliser plus efficacement que l ozone ou le chlore en pr sence d une forte teneur en mati res organiques Formald hyde Le formald hyde HCHO est un gaz capable de tuer tous les micro organismes y compris les spores aux temp ratures sup rieures 20 C Par contre il est inactif contre les prions L action du formald hyde est relativement lente et n cessite une humidit relative d environ 70 Il est commercialis sous forme de polym re solide le paraf
242. p 1ulod sunod sna p In9p0 ao 910102U1 280 92 aunyjns u bolpAH aunyjns 205 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE SUOlSOldX9 sap 1anboAo1d n d wnio ap apAxoupAy ap 29AB g abeyyneyo 97 sanbiuolyeo uonesugwAjod SINSJENIU D 99095910 ua JasiiawiAjod as n d 191 91 S V L 919A91 19 sonouo nop ap anbysejd s d 4 surea anbeyy Uolsoldx p 19 lpu oul p nbsil dane S nbille ul sainugboyey sule ISUIE Sayoy saseq Sa 19 s nbif u S UBPAXO S 29AB JUSWIWAIOIA 115E H 911 299 ap s n uni s p nb Isulp sue sap 211012114591 U0199101d aun jueJ10d ua no 9 sap uolenoeng p 890 inisodsip UN 29AR UOIJP USA SNOS naj ne sasodxa 5109101291 Sa 11p101431 Jnod JIAJas U9 S 1190 uo siew guUeINJOIPAYes 9 ap sap yeqwos 99821H Ul as jnad nea ri 118 99 P qulod sjisojdxa sapAxoJad s p 13110 nad QEWIWE JU 5911 99110181059 S OA Sa 19 nead ej xn s anod ugua sooipu aun g juesinpuod I541U92 9 5 5 np uolssaidaq uod 9 G 801 uolsn julod anbns119 92189 991919 1N9pO un p 940102uUI apinb1 u l ul ul p419 9p4X0 u l u p p xo 07H 0
243. peur Lair est vacu par une vanne munie d un filtre HEPA A la fin du cycle la vapeur est automatiquement vidang e Ces autoclaves peuvent fonc tionner 134 C et le cycle de st rilisation peut donc tre r duit 3 minutes Ils cons tituent le systeme id al pour les charges poreuses mais en raison du vide qui est fait dans la chambre ils ne peuvent pas tre utilis s pour traiter des liquides Autoclaves de type autocuiseur source de chauffage ext rieure Ces autoclaves ne seront utilis s que si Pon ne dispose pas d un autoclave 3 vapeur directe Ils sont charg s par le haut et chauff s au gaz P lectricit ou d une autre mani re La vapeur est pro duite en chauffant Peau plac e au fond du r cipient et Pair se d place vers le haut avant de sortir par la soupape d chappement Lorsque Pair a t vacu en totalit on ferme la soupape d chappement et on baisse le chauffage La pression et la tem p rature augmentent jusqu a une valeur donn e a laquelle la soupape de s curit com mence a fonctionner Le temps de palier se compte a partir de ce moment A la fin du cycle on coupe le chauffage et on laisse la temp rature descendre 4 80 C ou moins avant le couvercle 102 14 DESINFECTION ET STERILISATION soupape de manom tre soupape de filtre coton manom tre s curit chambre s curit d d H tof double parois robinet d entr e d air
244. pi ce ou qui sont reli es au circuit d vacuation au moyen d un manchon ou d une hotte Choix d une enceinte de s curit biologique Le choix d une ESB doit reposer avant tout sur le type de protection n cessaire protec tion du produit manipul protection du personnel contre des micro organismes des groupes de risque 1 4 protection du personnel contre des radionucl ides ou des 63 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE produits chimiques toxiques et volatils protection simultan e contre plusieurs de ces risques Le tableau 8 indique quel modele d ESB utiliser pour chaque type de protection Il ne faut pas utiliser de produits chimiques toxiques ou volatils dans les enceintes avec recyclage de Fair dans la pi ce a savoir les enceintes de classe I qui ne sont pas rac cord es au circuit d evacuation du b timent ou les enceintes de classe ITA1 ou ITA2 Les enceintes de classe IIB1 peuvent convenir pour des manipulations sur de tr s petites quantites de produits chimiques ou de radionucl ides volatils Lorsque Pon travaille sur des quantit s plus importantes de radionucl ides ou de produits chimiques volatils il faut utiliser une enceinte vacuation totale c est dire une ESB de classe IIB2 Utilisation des enceintes de s curit biologique au laboratoire Emplacement La vitesse de Pair qui traverse ouverture frontale d une ESB est d environ 0 45 m s A cette vitesse le flux d air en
245. pid miologistes pompiers et police 5 Liste des moyens disponibles pour assurer le traitement et Pisolement des per sonnes expos es ou contamin es 88 13 PLANS D URGENCE ET CONDUITE A TENIR EN CAS D URGENCE 6 Transport des personnes expos es ou contamin es 7 Liste des sources d immuns rums de vaccins de m dicaments de mat riel et de fournitures sp cialis s 8 Approvisionnement en quipements et mat riel de secours par exemple v te ments protecteurs d sinfectants mat riel et fournitures pour la d contamination Conduite a tenir en cas d urgence dans un laboratoire de microbiologie Accidents par inoculation coupure et rosion La personne accident e doit enlever ses v tements de protection laver ses mains ainsi que la ou les zone s atteinte s appliquer un d sinfectant cutan appropri et si n cessaire consulter un m decin Un rapport indiquant la cause de la l sion et la nature du micro organisme en cause sera adress qui de droit et un dossier m dical complet sera tabli de mani re appropri e Accidents par ingestion de mat riel potentiellement infectieux Il faut ter ses v tements protecteurs et consulter un m decin Un rapport indiquant la nature du mat riel ing r et les circonstances de Paccident sera adress qui de droit et un dossier m dical complet sera tabli de mani re appropri e Formation d a rosols potentiellement dangereux hors d une enceinte de s
246. pients contenant des cul tures ou du mat riel biologique infectieux Le fonctionnement des st rilisateurs est il v rifi au moyen d indicateurs chimiques physiques ou biologiques Est il pr vu de d contaminer les centrifugeuses r guli rement Dispose t on de pots tanches pour les centrifugeuses Utilise t on les bons d sinfectants Sont ils utilis s correctement Y a t il une formation sp ciale pour le personnel qui travaille dans les laboratoires de confinement s curit biologique niveau 3 et les laboratoires de confinement haute s curit s curit biologique niveau 4 Produits chimiques et mati res radioactives 1 Les produits chimiques incompatibles sont ils bien entreposes ou manipules separement les uns des autres Les produits chimiques sont ils tous correctement tiquet s avec nom et mise en garde Les panneaux de risque chimique sont ils bien en vidence Existe t il des n cessaires contenant le mat riel voulu pour nettoyer les liquides r pandus accidentellement 149 10 11 12 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Le personnel connait il la conduite 4 tenir en cas de renversement accidentel Les produits inflammables sont ils entrepos s correctement et en petite quantit dans des armoires agr es Dispose t on de portoirs pour les bouteilles Y a t il un responsable de la radioprotection ou un manuel que Pon puisse
247. ppareils et instruments L utilisation de certains appareils et instruments peut comporter un risque micro biologique D autres au contraire sont sp cialement con us pour pr venir ou r duire les risques biologiques voir chapitre 11 Appareils et instruments dont l utilisation peut comporter un risque Le tableau A4 1 donne la liste des appareils instruments et manipulations qui com portent un risque et fournit des indications sur la mani re d liminer ou de r duire ce risque Tableau A4 1 Appareils instruments et manipulations comportant des risques APPAREILS ET INSTRUMENTS RISQUES ELIMINATION OU REDUCTION DU RISQUE Aiguilles hypodermiques Inoculation accidentelle Ne pas recapuchonner ni casser a rosols renversements les aiguilles e Utiliser des aiguilles avec syst me de blocage pour viter la S paration accidentelle de Faiguille et de la seringue ou utiliser un syst me jetable dans lequel l aiguille et la seringue sont indissociables Appliquer de bonnes techniques de laboratoire Remplir soigneusement la seringue pour r duire la formation de bulles et de mousse Eviter d utiliser des seringues pour m langer des liquides infectieux si on ne peut faire autrement veiller ce que l extr mit de l aiguille soit sous la surface du liquide qui se trouve dans le r cipient et viter d exercer trop de pression 159 APPAREILS ET INSTRUMENTS R SQUES ELIMINATION OU RED
248. prot gera le cryo stat au moyen d un cran et Poperateur devra porter un cran facial Pour la d contamination on remontera la temp rature de l appareil a 20 C D contamination Les hypochlorites et les d sinfectants puissants sont recommandes pour la d conta mination Une solution d hypochlorite fraichement pr par e doit contenir 1g litre de chlore actif lorsqu elle est destin e Pusage g n ral et 5g litre si elle est utilis e pour nettoyer du sang r pandu Le glutarald hyde peut tre utilis pour d contaminer les surfaces voir chapitre 14 Pr cautions a prendre avec du mat riel pouvant contenir des prions Les prions galement d sign s sous le nom de virus lents sont associ s aux enc phalopathies spongiformes transmissibles EST en particulier a la maladie de Creutzfeldt Jakob MCJ y compris la nouvelle variante la maladie de Gertsmann Str ussler Scheinker Pinsomnie fatale familiale et au kuru chez l homme la trem blante chez les ovins et les caprins Pencephalopathie spongiforme bovine ESB chez les bovins et d autres encephalopathies transmissibles des cervid s de lan et du vison Si l on conna t des cas de transmission l homme de la maladie de Creutzfeldt Jakob il semble qu il n y ait pas de cas prouv d infection acquise au laboratoire La prudence impose n anmoins d observer certaines pr cautions lors de la manipulation de mat riel biologique
249. pter dans son travail Pissue de sa formation Ces objectifs pourront tre fix s en tenant compte des conditions dans lesquelles le personnel effectue certaines activit s ou adopte certaines attitudes et du niveau de comp tence exig 3 Pr ciser le contenu de la formation et les moyens p dagogiques utilis s On entend par contenu de la formation les connaissances ou comp tences que le per sonnel doit acqu rir pour atteindre les objectifs fix s en mati re de comportement Ce sont les personnes qui connaissent le type de travail et ses exigences qui sont le mieux m me de d finir le contenu du programme de formation la s curit biologique On peut galement insister sur les r sultats d exercices consistant r soudre divers probl mes ou mettre au point un syst me d apprentissage pour corriger les erreurs commises par le personnel dans l utilisation d une technique donn e Il n est pas certain qu il existe une m thode p dagogique conf rences enseignement t l vis enseignement assist par ordinateur vid o interactive etc qui soit meilleure que les autres Les besoins particuliers du personnel en forma tion la composition du groupe etc jouent cet gard un r le tr s important 4 Prendre en compte les aptitudes individuelles Papprentissage Une formation bien pens e doit prendre en compte les caract ristiques et particularit s des indi vidus Chaque individu ou groupe d individus peut di
250. qe NSOl X U0ILJY SJUPPAXO Sap 334e 3 191149919 p singjnop s p S911U99U09 1981U02 110 191149 19 sabseyo 96J06 ap xnew s p SHO sapioe lin on lpl lul P xno ap s snpu 9101 s l 19 s nbif u S ll uh9 p 1SUIBIJU9 zu an d s p s jeyd sap Jed sjuepAxo S lu SONU SaULUE 019 anpe as n d je1zuao 1100 9 21 juawasnainoblA Seq UOHED PA D 1 9 1099 awaysAs np UOISN 1100 H P H sjisojdxa 15901 pysodsip 21019500 souejsip 5910181059 01 91 208H 9 sapAxolad un 99A UOHP RU A g UOIEWWE JU S 10A S 19 Jnapo auajAyjeIp p xolq Sap 1194 SNOS 1 SJL xn s 1nod uez 02 apinbiq 10 SANDINIHI SANOSIY 5341 S31NI4ILYANOONI 0 3 4 Y SNOILNYIJYd 310N39N1 4 3 0518 JLNYS Y1 4 04 SINOSIY SANDISAHd 8211Hd0Hd AN0INIH9 11NG04d 186 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE 189 lql sili 9462 uollillnq p wod 9 11 xnejuad uolsn ap julod 0 61 sanbiBojoinau nbnsil cic uolui p 391n0S yu qewwejur p S lqno s p s nboAoid 19 3199 s nbifl u 9 no ap 99UPISIP SOUWI 221 n q xn z Sa unod Jnapo SJUPPAXO S 29AB 19 99 U31q
251. r un produit r pandu L LI Les plans de travail sont nettoy s avant et apr s chaque manipulation quotidiennement ou si un produit a t 0 g Manipulation des d chets contamin s Bon usage des conteneurs de d chets contamin s O O Pas de conteneurs remplis a ras bords 0 g Conteneurs correctement tiquet s et ferm s LI Cultures et autres d chets soumis r glementation d ment d contamin s avant limination Oh oO Transport dans des conteneurs ferm s solides et tanches du mat riel d contamin hors du laboratoire conform ment a la r glementation JOGA GS ss E Oh 46 POINTS CONTROLES NOTER LA DATE OUI NON SANS OBJET OBSERVATIONS D contamination biologique des d chets mixtes avant limination sous la forme de d chets chimiques ou radiologiques 11 43 Protection individuelle Vaccinations ou examens n cessaires rappel s au personnel selon les agents infectieux manipul s O LI Services m dicaux comp tents contact s pour les bilans de sant la surveillance m dicale et le traitement en cas d exposition professionnelle O Port de gants pour la manipulation de mat
252. r ex les Instructions techniques pour la s curit du transport a rien des marchandises dangereuses de l Organisation de l Aviation civile internationale OACI ou l Accord europ en relatif au transport international des marchandises dangereuses par route ADR 42 L Association du Transport a rien international IATA publie chaque ann e des directives concernant le transport des mati res infectieuses 43 auxquelles les com pagnies a riennes qui en sont membres doivent se conformer Comme le R glement type des Nations Unies pour le transport des mati res dan gereuses est un ensemble de recommandations qui est revu tous les deux ans le lecteur est pri de se reporter aux tout derniers textes r glementaires nationaux et interna tionaux en la mati re LOMS intervient titre consultatif aupr s du Comit d experts des Nations Unies en mati re de transport des marchandises dangereuses Un certain nombre de modi fications importantes concernant la r glementation relative au transport des mati res 106 15 INTRODUCTION AU TRANSPORT DES MATIERES INFECTIEUSES infectieuses figurent dans la 13 dition 2003 du R glement type des Nations Unies 40 Des indications sur les tenants et aboutissants de ces modifications peuvent tre obtenues aupr s de TOMS 44 La r glementation internationale relative aux modes de transport n est pas destin e se substituer aux prescriptions locales ou nationales en la mati r
253. r utilisation 20 contact avec la peau et les yeux 79 80 d contamination voir d contamination limination 19 20 24 viter la diss mination 78 79 ingestion 79 80 89 liste contr les de s curit 149 lyophilis ouverture des ampoules 83 projections 11 12 89 90 107 109 m langeurs 71 82 161 mercure 194 mesures de s curit 15 145 146 m thanol 97 196 m thylbenz ne 208 meubles laboratoire 14 15 microbicide 93 micro incin rateurs 69 72 microscope frottis et gouttes paisses 84 murs 14 23 naphthylamine 196 nettoyage enceintes de s curit biologique 66 67 quipe de 136 mat riel de laboratoire 93 r frig rateurs et cong lateurs 82 83 nettoyeurs ultrasons 161 ninhydrine 197 nitrate d argent 197 nitrobenzene 198 niveau de confinement animaleries 32 niveau de s curit biologique de Panimalerie NSBA 32 N phenyl o naphthylamine 196 N phenyl B naphthylamine 196 objets tranchants 20 animaleries 34 conteneurs pour Pelimination 20 70 viter les blessures 74 80 84 BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE OGM voir organismes g n tiquement modifi s Organisation de l Aviation civile internationale OACI 106 Organisation mondiale de la Sant OMS centres collaborateurs pour la s curit biologique 158 Programme de s curit biologique 28 organismes g n tiquement modifi s OGM 113 117 autres consid rations 117 valuation du risque 115 116 o Tolidine 207 oxyde de chrome VI 168 de di thyl ne
254. ra dans le pr sent chapitre un recueil de techniques destin es a viter ou a r duire au minimum les problemes de cette nature qui surviennent le plus fr quemment Regles de s curit pour la manipulation des chantillons au laboratoire Si le pr l vement le transport et la r ception des chantillons au laboratoire ne sont pas effectu s correctement il existe un risque d infection pour le personnel Conteneurs a chantillons Les conteneurs a chantillons peuvent tre en verre ou de pr f rence en mati re plas tique Ils doivent tre solides et ne pas fuir lorsque le bouchon ou le capuchon est plac correctement L ext rieur du conteneur doit tre propre sans trace de mat riel Les conteneurs doivent tre correctement tiquet s pour faciliter identification Les formulaires de demandes d chantillons ou les fiches techniques ne doivent pas servir a emballer les conteneurs mais seront plac s dans des enveloppes s par es de pr f rence r sistantes l eau Transport des chantillons l int rieur de l tablissement Pour viter qu il y ait des fuites ou du mat riel r pandu accidentellement on utili sera des conteneurs secondaires des bo tes par exemple munis de portoirs de fa on que le r cipient contenant l chantillon ne se renverse pas Les conteneurs secondaires peuvent tre en m tal ou en mati re plastique mais doivent tre autoclavables ou r sistants aux d sinfectants chimique
255. rale ERTE air ambiant air potentiellement contamin _ air filtr par le filtre HEPA Figure 9 Repr sentation sch matique d une enceinte de s curit biologique de classe 111 bo te gants A orifices de fixation des manchons gants B panneau d observation a guillotine C deux filtres HEPA d vacuation mont s en s rie D filtre HEPA d admission E autoclave deux portes ou sas de passage F cuve de d sinfection chimique Il est n cessaire de raccorder le circuit d vacuation de l enceinte a un circuit d vacuation du b timent ind pendant tre con u pour permettre de contr ler le fonctionnement de l enceinte En r gle g n rale les fluctuations du debit de Pair dans le circuit de ventilation du b timent n ont gu re d influence sur le fonctionnement d une ESB raccord e au circuit par un manchon de ce genre Les ESB de classe IIB1 ou IIB2 sont dot es de jonctions rigides tanches c est dire qu elles sont raccord es directement sans laisser aucun espace au circuit d va cuation du b timent ou de pr f rence un circuit d vacuation sp cial Il faut que le circuit d vacuation du b timent soit parfaitement adapt aux sp cifications indiqu es par le fabricant tant en ce qui concerne le volume d air que la pression sta tique Le processus d agr ment des ESB jonction rigide tanche est plus long que dans le cas des enceintes avec recyclage de Pair dans la
256. ratoire doit disposer d un exemplaire du manuel de laboratoire ou du guide d hygi ne et s curit 4 Il doit exister un programme de lutte contre les arthropodes et les rongeurs Si n cessaire tous les membres du personnel doivent tre examin s par un m decin tre suivis m dicalement ou subir un traitement et un dossier m dical doit tre ouvert pour chacun d entre eux Conception et am nagement du laboratoire La conception d un laboratoire et la d finition des t ches qui lui sont assign es doivent tenir compte des situations connues pour engendrer des probl mes notamment 129 3 LES LABORATOIRES DE BASE S CURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2 Figure 2 Laboratoire classique au niveau de s curit 1 figure aimablement communiqu e par CUH2A Princeton NJ Etats Unis d Am rique 1 La formation d a rosols 2 Le travail sur des volumes importants ou des concentrations lev es de micro organismes 3 Un personnel ou des appareils trop nombreux eu gard la place disponible 4 Linfestation par des rongeurs ou des arthropodes 5 Entr e interdite 6 Lordonnancement des t ches utilisation d chantillons et de r actifs particuliers Les figures 2 et 3 donnent des exemples d am nagement de laboratoires aux niveaux de s curit biologique 1 et 2 Conception d un laboratoire 1 Le laboratoire doit tre suffisamment spacieux pour qu on puisse travailler en toute s curit et proc
257. re ou le guide d hygi ne et s curit Certaines mesures propres garantir que les employ s ont bien lu et compris les directives devront tre prises elles pourront par exemple consister leur faire signer certaines pages Le r le des chefs de laboratoire dans la formation du personnel directement sous leurs ordres est fondamental pour l acquisition d une bonne technique Le d l gu la s curit peut aider la forma tion du personnel et l laboration de mat riels p dagogiques et autres documents pour cette formation voir galement le chapitre 21 La formation du personnel doit syst matiquement inclure les pr cautions observer lors de l utilisation de certaines techniques particuli rement dangereuses couramment employ es dans un laboratoire savoir 1 Techniques comportant un risque d inhalation c est dire qui conduisent la formation d a rosols telles que l utilisation d anses Pensemencement en stries de la g lose en bo te le pipettage la r alisation de frottis Pouverture des cultures le pr l vement de sang ou de s rum la centrifugation etc 2 Techniques comportant un risque d ingestion telles que la manipulation des chantillons des frottis ou des cultures 3 Techniques comportant un risque d inoculation percutanee telles que Pemploi de seringues et d aiguilles 4 Manipulation d animaux avec le risque de morsures ou de griffures que cela comporte 5 Manipula
258. rgence des h pitaux y participent 31 6 Animaleries Lorsque des animaux sont utilis s a des fins experimentales ou de diagnostic Puti lisateur a Pobligation morale de prendre toutes les mesures n cessaires pour viter des souffrances inutiles Les animaux doivent tre install s de mani re confortable et hygi nique et recevoir de Peau et des aliments de bonne qualit en quantit suffisante A la fin de Pexperience ils devront tre trait s avec humanit Pour des raisons de s ret Panimalerie doit tre ind pendante s par e du labora toire Si elle est accol e un laboratoire elle sera con ue de mani re pouvoir tre isol e des zones publiques du laboratoire et pouvoir tre d contamin e et d parasit e Tableau 4 Niveaux de confinement des animaleries pratiques et quipements de s curit GROUPE DE RISQUE NIVEAU DE CONFINEMENT PRATIQUES DE LABORATOIRE ET EQUIPEMENTS DE S CURIT 1 NSBA 1 Acc s limit v tements protecteurs et gants 2 NSBA 2 Pratiques comme pour NSBA 1 en plus panneaux de danger biologique ESB de classe ou l pour les activit s g n ratrices d a rosols D contamination des d chets et des cages avant le lavage 3 NSBA 3 Pratiques comme pour NSBA 2 en plus acc s r glement ESB et v tements protecteurs sp ciaux pour toutes les activit s 4 NSBA 4 NSBA 3 avec en plus acc s strictement limit Changement de v tements avant
259. rie doivent tre homologu s et r pertori s par les autorit s sanitaires comp tentes nationales ou autres Code de bonnes pratiques Le code de bonnes pratiques d fini pour les laboratoires de base s curit biologique niveaux 1 et 2 s applique moyennant les modifications suivantes 1 Le panneau de danger biologique voir figure 1 appos sur la porte du labora toire doit indiquer le niveau de s curit biologique et le nom du chef de labora toire responsable de l acc s aux locaux et pr ciser en outre les conditions particuli res d entr e dans la zone vaccination par exemple 2 Les v tements protecteurs porter obligatoirement au laboratoire doivent tre du type suivant tabliers blouses sarraus tenues de nettoyage combinaisons coiffes et le cas ch ant couvre chaussures et chaussures sp ciales Les blouses ordinaires de laboratoire qui boutonnent devant ne conviennent pas de m me que les manches qui ne couvrent pas enti rement les avant bras Les v tements de labo ratoire ne doivent pas tre port s l ext rieur et seront d contamin s avant le blanchissage Il peut tre justifi d ter ses v tement de ville pour rev tir une tenue 22 3 4 LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT S CURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 3 de laboratoire appropri e lorsqu on travaille sur certains agents pathog nes ravageurs ou agents responsables de zoonoses par exemple Tous les mat riels potentielleme
260. riel biologique infectieux ou d quipements CONTAMINGS 22e nina oO Protection faciale lors de travaux sur du mat riel infectieux en dehors d une ESB 0 Oo Lavage des mains une fois les gants enlev s et avant de sortir du laboratoire en cas de travaux sur des agents infectieux 0 Possibilit d administrer un anti infectieux titre de premier SECOUTS 2 O Pratiques Utilisation d une ESB s il y a possibilit de projections ou de formation d a rosols de mat riel infectieux O LI Un manuel de s curit biologique a t pr par et l El L Le personnel lit tudie et suit les instructions relatives aux pratiques et techniques et en particulier celles qui figurent dans le manuel de s curit ou le manuel de laboratoire obligatoire une fois par an pour tout le personnel m 0O Les manipulations sont effectu es de mani re produire le moins possible d a rosols ou d eclaboussures 0 g Des seringues autobloquantes ou jetables sont utilis es pour les travaux sur agents infectieux O O Les godets et les rotors des centrifugeuses ne sont ouverts qu l int rieur d une ESB O Oo Les chantillons infe
261. ries 34 36 enceinte de s curit biologique 67 laboratoire de base 11 laboratoire de confinement 22 23 haute s curit 29 30 liste de contr le 148 prions 86 quipement et mat riel de secours 91 de s curit 21 68 74 liste des contr les 148 149 laboratoire de base 16 17 confinement 24 25 risques 159 162 rosion 89 Escherichia coli K12 114 thanol alcool thylique 98 187 thanolamine 188 thanolamine 2 amino thanol 188 thers 122 tiquetage mod le 83 84 valuation du risque microbiologique 1 2 7 8 animalerie 32 33 organismes g n tiquement modifi s 115 117 excr ta pr cautions d usage 83 85 extincteurs 126 femmes en ge de procr er 18 148 fen tres animaleries 34 35 laboratoire 12 15 23 locaux pour invert br s 37 filtres air voir filtres HEPA filtres particules de haute efficacit HEPA animalerie 34 contamination par des prions 86 enceinte de s curit biologique 57 58 59 60 62 63 s curit biologique niveau 3 23 24 25 s curit biologique niveau 4 29 30 31 fioles vide 162 fixateurs formol s 85 flacons bouchon viss 17 70 flamb es tiologie de maladies inconnues 8 flammes nues 66 78 formald hyde 96 97 190 formation 137 139 personnel d animaleries 34 36 de laboratoire 18 s curit biologique 51 52 utilisation des enceintes de s curit biologique 67 formol 97 friction base d alcool pour le lavage des mains 98 99 101 frottis p
262. rit biologique restent valables moyennant les modifications suivantes 1 La r gle du travail en bin me doit tre appliqu e autrement dit personne ne doit jamais travailler seul dans le laboratoire Cette r gle prend toute son importance dans un laboratoire s curit biologique niveau 4 o le port de combinaisons pressuris es est obligatoire 2 Le personnel doit doit changer compl tement de v tements et de chaussures avant de p n trer dans le laboratoire et avant de sortir 3 Le personnel doit s entra ner la conduite tenir pour Pevacuation d urgence de personnes bless es ou prises de malaise 4 Il faut mettre au point un syst me de communication entre les membres du per sonnel qui travaillent dans un laboratoire de confinement haute s curit s cu rit biologique niveau 4 et le personnel ext rieur que ce soit pour les contacts habituels ou en situation d urgence Programme de s curit biologique D partement maladies transmissibles surveillance et action Organ isation mondiale de la Sant 20 Avenue Appia 1211 Gen ve 27 Suisse http www who int csr 28 5 LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT A HAUTE SECURITE SECURITE BIOLOGIQUE NIVEAU 4 Conception et am nagement du laboratoire Les caract ristiques du laboratoire de confinement s curit biologique niveau 3 s appliquent au laboratoire de confinement haute s curit s curit biologique niveau 4 moyennant les
263. rmettent une vacuation facile de Pair et une bonne p n tration de la chaleur La chambre 103 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE ne doit pas tre encombr e afin que la charge puisse baigner de mani re uniforme dans la vapeur 5 Si Pautoclave n est pas muni d un dispositif de s curit qui emp che Pouverture de la porte tant que la chambre est sous pression il est indispensable que la soupape principale soit ferm e et qu on laisse retomber la temp rature de la chambre en dessous de 80 C avant d ouvrir la porte 6 Si on autoclave des liquides il faut utiliser un systeme d evacuation a faible vitesse pour viter qu en raison de la surchauffe ceux ci se mettent bouillir lorsqu on les retire 7 Les op rateurs doivent porter des gants et un cran facial pour se prot ger lors de l ouverture de l autoclave m me si la temp rature est retomb e moins de 80 C 8 Pour tout contr le de routine du fonctionnement de l autoclave il faut placer un indicateur biologique ou un thermocouple au centre de chaque charge Il est vive ment conseill de contr ler r guli rement la temp rature au moyen de thermo couples et d appareils enregistreurs en utilisant la pire charge possible ce qui permettra de d terminer ce que doit tre le d roulement du cycle 9 Le filtre de vidange plac en bas de la chambre s il y en a un doit tre retir et nettoy tous les jours 10 On veillera
264. rs des locaux du laboratoire Lunettes coques lunettes de s curit et crans faciaux Le choix d un quipement destin prot ger les yeux et la face contre les clabous sures les projections ou les chocs d pend de la nature des activit s auxquelles se livre l op rateur Il existe des lunettes de vue ou des lunettes non correctrices en mat riau incassable dont la monture est sp cialement con ue pour que les verres soient mont s par l avant et qui sont incurv es ou dot es d crans lat raux lunettes de s curit Ces lunettes de s curit ne prot gent pas tr s bien contre les claboussures ou projections m me quand elles sont dot es d crans lat raux Pour se prot ger contre les projections et les chocs il faut porter des lunettes coques le cas ch ant par dessus les lunettes de vue ou les lentilles de contact lesquelles ne prot gent pas des risques chimiques ou biologiques Les crans faciaux visi res sont en plastique incassable ils s adaptent sur le visage et sont maintenus au moyen de sangles ou d un serre t te Les lunettes coques et les lunettes de s curit ne doivent pas tre port es hors des locaux du laboratoire 729 11 EQUIPEMENTS DE SECURITE Tableau 11 Les quipements de protection individuelle EQUIPEMENT RISQUE EVITE CARACTERISTIQUES DE SECURITE Blouses et sarraus de laboratoire Contamination des v tements e Boutonnage par l arri re e Couvrent l
265. rtant des antidotes universels et specifiques Extincteurs appropri s et couvertures anti feu La liste complementaire ci apr s donn e a titre indicatif pourra tre adapt e a la situation locale 1 V tements de protection totale combinaisons gants et cagoules pour les acci dents impliquant des micro organismes appartenant aux groupes 3 et 4 Masques respiratoires complets avec cartouche filtrante contre les produits chimiques et les particules Mat riel pour la d sinfection des salles pulv risateurs et vaporisateurs de formald hyde par exemple 4 Civi re 5 6 Outils marteaux haches cl s tournevis chelles cordages par exemple Mat riel de signalisation et de balisage Pour de plus amples informations le lecteur est pri de se reporter aux r f rences 12 et 28 Ql 14 D sinfection et st rilisation La connaissance des principes de base de la d sinfection et de la sterilisation est d une importance cruciale pour la s curit biologique au laboratoire Comme des objets tr s souill s ne peuvent pas tre d sinfect s et st rilis s rapidement il est tout aussi important de conna tre les l ments de base du nettoyage pr alable la d sinfection pr nettoyage Sous ce rapport les principes g n raux expos s dans le pr sent chapitre sont applicables toutes les cat gories de germes pathog nes connus C est la nature du travail exp rimental et des agent
266. s naturelles Les locaux sont ils g n ralement en bon ordre et non encombr s Sont ils propres Ya t il des d fauts de structure au niveau des sols Les sols et les marches d escaliers sont ils reguliers et antid rapants Est ce que l espace est suffisant pour pouvoir travailler sans danger Est ce que les d gagements et les couloirs sont assez larges pour le passage du per sonnel et des gros appareils Les paillasses et autres plans de travail le mobilier et les installations sont ils en bon tat La surface des paillasses et autres plans de travail est elle r sistante aux solvants et aux produits chimiques corrosifs Y a t il un lavabo dans chaque salle du laboratoire Est ce que la construction et Pentretien des locaux permettent d emp cher l entr e et l installation de rongeurs ou d arthropodes Est ce que toutes les conduites d eau chaude ou de vapeur apparentes sont isol es ou prot g es pour que le personnel ne se br le pas Le laboratoire dispose t il d un groupe lectrog ne pour assurer le relais en cas de panne lectrique L acc s aux locaux du laboratoire peut il tre limit aux seules personnes autoris es A t on proc d une valuation du risque pour s assurer que le laboratoire dispose des installations et quipements voulus pour Pexecution de ses t ches 143 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Entreposage iF 2
267. s et le couvercle doit de pr f rence tre muni d un joint d tanch it Ils seront r guli rement d contamin s R ception des chantillons Les laboratoires qui re oivent un grand nombre d chantillons devront r server une pi ce ou une zone particuli re cet effet Ouverture des colis Le personnel qui re oit et d fait Pemballage des chantillons doit conna tre les risques qu il court et on doit lui avoir appris respecter les pr cautions d usage 2 773 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE notamment en pr sence d un conteneur bris ou qui fuit Les conteneurs primaires doivent tre ouverts dans une enceinte de s curit biologique Le personnel doit avoir des d sinfectants a sa disposition Utilisation des pipettes et des dispositifs de pipettage 1 11 On utilisera toujours un dispositif de pipettage pipetteur propipette Le pipet tage a la bouche doit tre interdit Toutes les pipettes doivent tre cotonn es pour r duire la contamination du dispositif Ne jamais souffler dans une pipette plac e dans un liquide contenant des agents infectieux Les mat riels infectieux ne seront jamais m lang s par aspirations et refoulements successifs Ne pas souffler dans les pipettes pour en chasser le liquide Les pipettes deux traits sont pr f rables aux autres puisqu on n est pas oblig de souffler pour les vider Les pipettes contamin
268. s pathog nes manipul s qui d ter mine les besoins particuliers en mati re de d contamination Les indications g n rales qui sont donn es dans la suite de ce chapitre peuvent servir mettre au point des fa ons de proc der normalis es ou plus sp cifiques face aux dangers de nature biologique qui existent dans un laboratoire donn Le temps de contact n cessaire avec un d sinfectant donn est propre chaque sub stance et chaque fabricant C est pourquoi toutes les recommandations relatives l utilisation des d sinfectants doivent tre conformes aux sp cifications indiqu es par le fabricant D finitions Dans le domaine de la d sinfection et de la st rilisation on a recours une termi nologie tr s vari e Les termes suivants sont parmi les plus couramment employ s en s curit biologique Anti infectieux Agent qui tue les micro organismes ou en inhibe la croissance et la multiplication Antimicrobien Terme souvent employ comme synonyme d anti infectieux Antiseptique Substance qui inhibe la croissance et le d veloppement des micro organismes sans n cessairement les tuer On applique en g n ral les antiseptiques sur le rev tement cutan Biocide Terme g n ral qui d signe tout agent capable de tuer des micro organismes D contamination Tout processus destin liminer ou tuer des micro organismes Ce terme d signe galement Pelimination ou la neutralisation de produits ch
269. s plus importants sont indiqu s ci dessous Acc s 1 Le pictogramme international de danger biologique figure 1 doit tre appos sur les portes des salles o des micro organismes appartenant au groupe de risque 2 ou aux groupes sup rieurs sont manipul s 2 Aucune personne trang re au service ne doit tre autoris e p n trer dans les zones de travail du laboratoire 3 Les portes du laboratoire doivent rester ferm es 4 Les enfants ne doivent pas tre autoris s entrer dans les zones de travail du laboratoire ACCES RESERVE AU PERSONNEL AUTORISE Heveau de sueur Cherchour responsable _ En cas d urgence appeler Telephone de jour Telephone pris L autorisation d entrer doit blie demand e au chercheur responsable d sign ilesti Figure 1 Panneau de mise en garde apposer sur les portes des laboratoires 10 5 6 3 LES LABORATOIRES DE BASE S CURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2 Tout acc s a Panimalerie doit tre subordonn a une autorisation sp ciale La pr sence dans le laboratoire d animaux qui ne servent pas aux exp rimenta tions doit tre interdite Protection individuelle 1 Le port de combinaisons blouses sarraus ou uniformes est obligatoire pour le travail au laboratoire Le port de gants appropri s est obligatoire chaque fois qu un geste comporte un risque de contact accidentel direct avec du sang ou autres liquides biologiqu
270. s pratiques 22 Conception et am nagement du laboratoire 23 Appareils et quipements de laboratoire 24 Surveillance m dico sanitaire 25 5 Le laboratoire de confinement haute s curit S curit biologique niveau 4 28 Code de bonnes pratiques 28 Conception et am nagement du laboratoire 29 iii MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE 6 Animaleries 32 Animalerie S curit biologique niveau 1 33 Animalerie S curit biologique niveau 2 33 Animalerie S curit biologique niveau 3 34 Animalerie S curit biologique niveau 4 35 Invert br s 36 7 Principes directeurs pour la mise en service des laboratoires ou installations 38 8 Principes directeurs pour l agr ment des laboratoires installations 41 PARTIE II S curit biologique en laboratoire 49 9 Principes de la s ret biologique en laboratoire 51 PARTIE III Equipements de laboratoire 55 10 Enceintes de s curit biologique 57 Enceinte de s curit biologique de classe 58 Enceinte de s curit biologique de classe II 59 Enceinte de s curit biologique de classe III 62 Raccordements pour F vacuation de Fair des enceintes de s curit biologique 62 Choix d une enceinte de s curit biologique 63 Utilisation des enceintes de s curit biologique au laboratoire 64 11 Equipements de s curit 68 Isolateurs a d pression en film ou feuille de plastique souple 68 Pipetteurs 70 Homog n iseurs agitateurs secoueurs m
271. s syst mes de refroidissement doivent tre pr vus pour r duire si n cessaire l activit des invert br s L acc s se fera par un vestibule comportant des pi ges insectes et dont les portes seront munies de grillages pour emp cher le passage des arthropodes Tous les conduits de sortie de ventilation et les fen tres susceptibles d tre ouvertes seront obtur s par un grillage emp chant le passage des arthropodes Le siphon des viers et des gouts ne doit jamais s ass cher Tous les d chets seront d contamin s par passage Pautoclave car certains invert br s r sistent tous les d sinfectants On contr lera le nombre de formes larvaires et adultes des arthropodes volants rampants et sauteurs Les cages des tiques et des acariens seront plac es sur des plateaux contenant du p trole Les insectes volants infect s ou qui pourraient Petre doivent tre confin s dans des cages double grillage Les arthropodes infect s ou qui pourraient Petre doivent tre manipul s dans des enceintes biologiques de s curit ou des isolateurs On peut galement manipuler les insectes infect s ou qui pourraient P tre sur des plateaux refroidis Pour plus ample information se reporter aux r f rences 3 6 de la bibliographie 37e 1 Principes directeurs pour la mise en service des laboratoires ou installations On peut d finir la mise en service d un laboratoire ou d une install
272. s traitement St rilisation des d chets et des mat riels est indispensable de disposer d un autoclave deux portes formant sas Toutefois d autres m thodes de d conta mination doivent tre utilis es pour traiter les quipements appareils instruments ou objets divers qui ne resisteraient pas une st rilisation la vapeur Sas d entr e air pour les chantillons les mat riels et les animaux Ils sont n cessaires pour ce type d installation Un groupe lectrog ne de secours et une alimentation sp ciale en air sont n cessaires Le confinement des coulements doit tre assur calcul la conception et la construction des installations de confinement haute s curit biologique niveau 4 qu elles soient dot es d enceintes de s curit biologique ou de zones avec port obligatoire de combinaisons pressuris es sont tellement com plexes que les auteurs ont renonc faire figurer dans le pr sent manuel des repr sen tations sch matiques de ces installations En raison de la grande complexit du travail dans ce genre de laboratoire un manuel d taill sera pr par et test l occasion d exercices de formation Un plan d urgence sera galement labor voir chapitre 13 en collaboration active avec les autorit s sanitaires nationales et locales Il est galement souhaitable que d autres services de secours tels que les pompiers la police et les services d u
273. sables pour effectuer ces contr les et il est vivement recommand de les faire ex cuter par un professionnel qualifi Nettoyage et d sinfection Tout ce qui se trouve l int rieur de Penceinte y compris Pappareillage doit faire l objet d une d contamination en surface et tre retir du volume de travail une fois la manipulation achev e car un reste de milieu de culture peut permettre la pro lif ration des micro organismes Les surfaces int rieures de l enceinte doivent tre d contamin es avant et apr s chaque utilisation Les plans de travail et les parois int rieures doivent tre pass s au d sinfectant de mani re tuer tous les micro organismes pr sents A la fin de la journ e de travail on proc dera une d contamination finale consistant passer au desinfectant le plan de travail les parois lat rales le fond ainsi que la face arri re du panneau d observation A cet effet on peut utiliser une solution d hypochlorite ou de l alcool 70 si ces produits sont efficaces contre les germes que l on cherche a li miner Si on utilise un d sinfectant corrosif comme l hypochlorite par exemple il faudra encore rincer les surfaces avec de l eau st rile 66 10 ENCEINTES DE SECURITE BIOLOGIQUE Il est recommand de proc der cette d sinfection pendant que l enceinte est en marche Si elle a t arr t e on la remettra en marche pendant 5 minutes pour la purger de Pair qu el
274. sinpe s xnenu sanbibojoineu no sanbiyedey S19H9 Sap 1194 nead ej 98 U09 no uons ul p uogejeyur p 980 H90N 189 suep ajqnjos juawasebe 2 19 1100 0 69 uolsn 1 100 anbisii9 9e1e9 Jnapo e 910109U1 Ine104 pinbi 49 0 181 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE aIPUSAUI P seo ua sanbixo 5911 sinaden ap juawabebeq xn lqulou ap aouasad ud SIISOl X no s nbixo 286 juswabebeq apljos winissejod ap l 29AB 9AISO X S3911U99U09 suonn os s pilos saseq 59 IIAL JUSWIWEIOIA 1 9 s nbo g s n uni no un s ap s n uni aulejndo uon old aun anbijsejd ua no 210121 0 2 ua sjueh sap 18104 UU0Q010S 5105 1918ARAL nea g uawa Jane nead El 198 U02 seo ua ulgapaw un 19 INSU09 19 ap 394V JUSW9 eI PAW 199uL XNA Sa 1981U02 ap seo uy 9110101059 uolj09 01d aun s yod sineden Sa Jajeyul sed N anbiuosyo ajlyouosg aun sasneo n d SinadeA sap l d i uolejeyul nead ej Ja 591101010591 5910 S xn s l nod 1901102 nea g 910 09 1 quewn pinbi 6 01 aploy 9H auabopAy p 1 0
275. snos 540111105 s uonsnqulo9 9410A 1 9110 UOISN ap julod 19 p jos 9 18 NdIUEN ej 9111195 dane gULJNI 1081 00 ubn u d IUSA 1910 jeso sew 910105100102 no uons ul p Jnapo aun un suep s ull l uslq uoy nbifl u uonejeyul p p p p ajed roso pAxon L 207 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE S1UPp4XO S 294e nb ISUIE SAO Saseq Sa 19 S D P S dane 116691 1194 Onoyoynoea ua s ug sap 19H04 U A UaIq h sp un suep no uu0q40S aun Snos 911012114591 u01 99 014d aun s od sinaden Sa 19lPUUL D 191144 anbiqeys 9 911 99 9 p Sa 19149 1100 3119 1 51190101091 S UOHIUBI p 991 05 no QOUPISIP R 19 SOWA 1 5109101294 S 1091 2 y u 266 no nea p UOIESILUNIQ assnouw enbluoqie9 apupAyue soas sjinpod 9llull n ap SE UOHDUHX p s npold Z Y s lli Doh 412199 julod guejueysul juaWasequia un Jasneo juaAnad sinaden S QEWIWe JU SZIL surewny 1u ul ddol A p 9 19 U n npold l ej ans Sa qe1IS9pUI S19H9 Sap JIOAe 1n d 2919091 uonsodx aun nead ej 19 sasnanbnw s l xn sa Jnod yue 241099 XN M U 90 5 5 np uolss ld q nea 91019510 uou Jok LL
276. soit le moins p n trant ou le moins nerg tique possible Il y a quatre types de r gles pour le travail avec des substances radioactives savoir 1 Celles qui concernent la zone irradiation 128 R gles de s curit pour le travail avec des radionucl ides 18 AUTRES TYPES DE RISQUES AU LABORATOIRE Figure 12 Symbole international indiquant un risque ATTENTION A RADIOACTIVITE 2 Celles qui concerne la paillasse o s effectue la manipulation 3 Celles qui concernent la gestion des d chets 4 Celles qui concernent les dossiers et la conduite a tenir en situation d urgence Parmi les r gles les plus importantes on peut citer les suivantes 1 Zone d irradiation N utiliser de substances radioactives que dans les zones sp cialement destin es a cet usage Seul le personnel indispensable doit tre pr sent Porter un quipement protecteur individuel notamment une tenue de labo ratoire appropri e des lunettes de s curit et des gants jetables Porter un dosim tre personnel pour la surveillance de Pexposition au rayon nement Les laboratoires o sont manipul s des radionucl ides doivent tre con us de mani re ce que le confinement le nettoyage et la d contamination soient sim plifi s La zone de travail sur les radionucl ides doit tre situ e dans une pi ce de petites dimensions contigu au laboratoire principal ou dans un secteur sp cial de celui ci
277. soit soit son niveau de s curit biologique En ce qui concerne les laboratoires de confinement s curit biologique niveau 3 et les laboratoires de confinement haute s curit s curit biologique niveau 4 les principes directeurs expos s plus loin chapitres 4 et 5 constituent des variantes ou des compl ments des principes de base applicables aux travaux sur des agents pathog nes particuli rement dangereux Code de bonnes pratiques Ce code est une liste des m thodes et techniques de laboratoire les plus importantes pouvant constituer la base d une bonne technique microbiologique Dans beaucoup de laboratoires ou programmes nationaux relatifs aux laboratoires ce code peut tre utilis pour mettre par crit des pratiques et des modes op ratoires destin s assurer la s curit du travail en laboratoire Tout laboratoire doit disposer d un manuel ou d un guide manuel pratique manuel de bonnes pratiques guide de s curit au laboratoire manuel de s curit etc MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE dans lequel sont repertori s les dangers effectifs et potentiels et qui indique comment proc der pour les liminer ou du moins les r duire au minimum Les bonnes techniques microbiologiques sont un l ment essentiel de la s curit au laboratoire L emploi d quipements et d appareils de s curit ne sauraient s y substituer et ne peut intervenir qu a titre compl mentaire Les principes le
278. t rilis ce dispositif ne prot ge pas coup s r le produit manipul 589 10 ENCEINTES DE SECURITE BIOLOGIQUE 4 air ambiant air potentiellement contamin air filtr par le filtre HEPA coupe lat rale Figure 6 Repr sentation sch matique d une enceinte de s curit biologique de classe 1 A ouverture frontale B panneau d observation a guillotine C filtre HEPA mont sur la conduite d vacuation D gaine d vacuation Enceinte de s curit biologique de classe Il Les cultures cellulaires et tissulaires tant de plus en plus utilis es pour la culture des virus on a estim qu il n tait plus acceptable de faire passer de Pair non st rilis provenant de la pi ce sur le plan de travail Les ESB de classe II ont t con ues non seulement pour assurer la protection du personnel mais galement pour viter que le mat riel biologique pr sent sur le plan de travail ne soit contamin par Pair de la pi ce Les ESB de classe II dont il existe quatre types Al A2 B1 et B2 se diff ren cient des ESB de classe I par le fait qu elles ne laissent passer sur le plan de travail que de Pair st rile c est dire ayant travers un filtre HEPA Les ESB de classe II peuvent tre utilis es pour travailler sur des agents infectieux des groupes de risque 2 et 3 Elles peuvent galement tre utilis es pour travailler sur des agents infectieux du groupe de risque 4 si Poperateur porte une
279. t recommand s car le verre peut se briser lib rant le mat riel infectieux et risquant de blesser Poperateur Pendant l utilisation ces appareils doivent tre couverts d un bo tier transparent robuste en mati re plastique qui sera d sinfect apr s usage Si possible on fera fonctionner Pappareil recouvert de son bo tier en plastique l int rieur d une enceinte de s curit biologique L op ration termin e le conteneur sera ouvert dans une enceinte de s curit biologique Une protection auditive doit tre fournie au personnel qui utilise des g n rateurs d ultrasons Utilisation des broyeurs de tissus 1 Les broyeurs en verre seront envelopp s dans un tampon de mat riau absorbant et tenus par un operateur gant Les broyeurs en mati re plastique PTFE sont plus s rs 2 Les broyeurs de tissus seront utilis s et ouverts dans une enceinte de s curit biologique Entretien et utilisation des r frig rateurs et cong lateurs 1 Les r frig rateurs les cong lateurs et les enceintes a dioxyde de carbone solide carboglace seront d givr s et nettoy s p riodiquement et les ampoules les tubes etc cass s pendant la conservation retir s On portera une protection faciale et des gants en caoutchouc r sistants pour effectuer ce travail Apr s nettoyage les surfaces interieures de Penceinte seront d sinfect es Tous les r cipients conserv s dans les r frig rateurs
280. tam ment a temp rature lev e ce qui r duit leur pouvoir germicide La fr quence de rem placement des solutions de travail hypochlorite d pend de leur concentration initiale des conditions ambiantes ainsi que du type avec ou sans couvercle et de la taille des r cipients dans lesquels elles sont conservees A titre indicatif les solutions dans lesquelles on met a tremper plusieurs fois par jour du mat riel fortement souill par des mati res organiques doivent tre remplac es tous les jours au minimum celles dont la fr quence utilisation est moindre pouvant tre conserv es jusqu a une semaine Comme d sinfectant g n ral on utilisera une solution 1 g l de chlore actif Pour nettoyer un produit r pandu qui pr sente un risque biologique ou en pr sence de grandes quantit s de mati res organiques il est recommand d utiliser une solution plus concentr e contenant 5 g l de chlore actif Les solutions d hypochlorite de sodium usage domestique eau de Javel contiennent habituellement 50 g l de chlore actif et doivent donc tre dilu es au 1 50 ou au 1 10 avant d tre utilis es pour obtenir une concentration finale respectivement gale 1 g l et 5g l Les solutions d hypochlorite de sodium usage industriel ont souvent une concentration de pr s de 120 g l et doivent donc galement tre dilu es pour obtenir les valeurs indiqu es ci dessus Les granul s ou comprim s d hypochlorite de calcium Ca
281. te scotch e contre louverture frontale et la sortie de la gaine d vacuation de fa on que le gaz ne p n tre pas dans la pi ce Les travers es des fils d alimentation qui passent travers le panneau frontal doivent galement tre tanch ifi es avec du ruban adh sif entoile On branche la plaque lectrique qui chauffe le paraformald hyde Une fois que celui ci s est enti rement vaporis on la debranche On ne touche plus alors Pen ceinte pendant au moins 6h Pass ce temps on branche la deuxi me plaque chauf fante et on laisse se vaporiser tout le bicarbonate d ammonium On d branche ensuite la plaque et on met en marche le ventilateur de Penceinte pendant deux intervalles de 2 secondes environ chacun pour faire circuler la vapeur de bicarbonate d ammonium Lenceinte est laiss e telle quelle pendant 30 minutes avant d ouvrir le panneau frontal ou d enlever la feuille de plastique et de degager la sortie de la gaine d evacuation Avant de se servir de Penceinte il faut Pessuyer pour en liminer les r sidus Lavage et d contamination des mains Dans la mesure du possible il faut porter des gants chaque fois que Pon manipule du mat riel pr sentant un risque biologique Toutefois cette mesure ne remet pas en cause la n cessit pour le personnel de laboratoire de se laver r guli rement et con venablement les mains Le lavage des mains est indispensable lorsque Pon a mani pul des animaux ou du mat
282. technique Locaux du laboratoire en d pression par rapport aux autres locaux occup s les couloirs et les bureaux Eviers ou conduites d vacuation jouant le r le d vents AVA sree A l El ments m caniques expos s poulies engrenages Conduite d aspiration circuit de vide avec filtres et pi ges au niveau des paillasses Risque de reflux dans le r seau d alimentation en eau Appareil a distiller l eau en bon tat l Programme actif et efficace de lutte contre les arthropodes et les rongeurs 22 Pratiques et r gles g n rales Aliments destin s a la consommation humaine conserv s en dehors du laboratoire l Avertissement du genre D fense d introduire des aliments r serv au travail de laboratoire clairement marqu sur les fours micro ondes On mange boit fume ou se maquille dans le laboratoire R cipients en verre sous pression scotch s ou prot g s par ex pi ges vide Pipettage la bouche interdit l Dispositifs de pipettage m caniques propipettes etc fournis et utilis s Rangement distinct pour les tenues de laboratoire et les v tements de ville Tenue g n rale du laboratoire R cipients en verre rang s s
283. tement et les laver nettoyer et d sinfecter scrupuleusement Lorsqu on a manipul du mat riel infectieux travaill avec une enceinte de s cu rit biologique ou qu on s appr ter quitter le laboratoire il faut ter les gants et se laver soigneusement les mains Les gants jetables qui ont t utilis s doivent tre limin s avec les d chets infectieux Des cas de r actions allergiques telles que dermatites ou hypersensibilisation imm diate ont t observ s chez certains personnels de laboratoire ou d autres travailleurs qui avaient port des gants en latex notamment des gants poudr s On devrait pouvoir disposer d autres gants que des gants poudr s en latex Lorsqu il y a risque de coupure comme cela peut tre le cas l occasion d une autopsie il faut porter des gants en mailles d acier inoxydable Il est toutefois noter que ces gants prot gent contre les coupures ou les entailles mais pas contre les piq res Les gants ne doivent pas tre port s hors des locaux du laboratoire Pour de plus amples informations le lecteur est pri de se reporter aux r f rences 12 17 et 18 e 74e PARTIE IV Bonnes techniques microbiologiques 12 Techniques de laboratoire Lerreur humaine une mauvaise technique et le mauvais usage des quipements et de Pappareillage sont l origine de la plupart des l sions et infections attribuables aux activit s exerc es dans un laboratoire On trouve
284. tenu Emballage ext rieur FROM SHIPPER Etiquette de sens de la mauntention facultative lorsque le volume du r cipient primaire ne d passe pas 50 ml INFECTIOUS SUBSTA N AFFECTING HUMANS A TT 82314 N t Qty 10 mt TO consicnee RESPONSIBLE Person re JOHN DoE 000 Etiquetage UN Emballage et tiquetage des substances infectieuses de cat gorie B R cipient primaire l preuve des fuites aou non tamisant Bouchon tanche l eau Support de type porte tubes 2 mousse de polystyr ne Mat riel plastique a alv oles ouvertes d emballage absorbant Liste d taill e du contenu fiche de suivi de Pechantillon Emballage ext rieur rigide Emballage secondaire l preuve des fuites ou non tamisant Nom de transport UN Num ro d identification UN Etiquettes indiquant l exp diteur et le destinataire Figure 11 Exemples d emballages triples figures aimablement communiqu es par l IATA Montr al Canada 108 15 INTRODUCTION AU TRANSPORT DES MATIERES INFECTIEUSES Porter des gants et des v tements protecteurs y compris une protection oculaire et faciale si n cessaire Recouvrir le liquide avec des serviettes en tissu ou en papier pour viter qu il ne continue a se r pandre Verser un d sinfectant appropri sur les serviettes et la zone environnante en g n ral une s
285. ter de petits ou de gros volumes de mat riel biologique peuvent galement entra ner la formation d a rosols Lorsque des homog n iseurs sont utilis s pour traiter du mat riel contenant des micro organismes du groupe de risque 3 ils doivent toujours tre charg s et r ou verts dans une enceinte de s curit biologique Les g n rateurs d ultrasons peuvent entra ner la formation d a rosols Ils seront utilis s dans des enceintes de s curit biologique ou couverts par un cran protecteur pendant l utilisation L cran et Pexterieur du g n rateur d ultrasons seront d conta min s apr s usage Anses usage unique L avantage des anses usage unique tient ce qu elles n ont pas besoin d tre pass es la flamme et qu elles peuvent donc tre utilis es dans des enceintes de s curit biologique o les becs Bunsen et les micro incin rateurs perturberaient le flux lami naire Ces anses seront mises tremper dans un d sinfectant apr s usage et limin es selon la proc dure applicable aux d chets contamin s voir chapitre 3 71 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Micro incin rateurs Les micro incinerateurs fonctionnant au gaz ou l lectricit comportent une pro tection en verre au borosilicate ou en ceramique qui r duit les projections et la dis persion du mat riel infect lorsque les anses sont st rilis es Ils peuvent cependant perturber le flux laminaire et doiv
286. teurs 38 40 s curit biologique 51 53 services listes contr les de s curit 144 145 techniques 77 87 zones de travail 12 voir aussi laboratoire de base laboratoire de confinement laboratoire de confinement haute s curit laboratoire de base niveaux de s curit 1 et 2 1 9 21 code de bonnes pratiques 9 12 conception et amenagement 12 15 16 quipement 13 17 formation 18 formulaires contr les de s curit 43 48 s curit chimique lectrique incendie radioprotection et s curisation de Pappareillage 21 surveillance medico sanitaire 17 traitement des d chets 19 21 laboratoire de confinement s curit biologique niveau 3 1 2 22 26 appareils et quipement 24 25 code de bonnes pratiques 22 23 conception 23 24 formulaire contr les de s curit 48 surveillance m dico sanitaire 25 26 laboratoire de confinement haute s curit s curit biologique niveau 4 1 2 28 31 code de bonnes pratiques 28 conception et am nagement 29 31 lavage des mains 11 74 101 animaleries 34 lavabos 15 23 34 lentilles de contact 11 liquides biologiques pr cautions d usage 83 85 liste des contr les de s curit 143 150 liti re animaux 34 35 lumi res ultraviolets 65 215 MANUEL DE SECURITE lunettes coque 71 lutte contre les rongeurs 12 34 lyophilisateurs 161 162 maladie de Creutzfeldt Jakob MCJ 85 mat riel contamin voir mat riel infectieux mat riel infectieux autoclavage et
287. tion de sang et de mat riel biologique pouvant pr senter un danger 6 D contamination et limination des d chets infectieux 18 3 LES LABORATOIRES DE BASE S CURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2 Traitement des d chets On entend par d chets tout ce dont on doit se d barrasser Dans les laboratoires la decontamination et Pelimination d finitive des d chets sont troitement li es Dans la pratique quotidienne il n y a toutefois gu re de mat riels contamin s qui devront tre vacu s hors du laboratoire ou d truits La majeure partie de la verrerie des instruments et des v tements de laboratoire sera recycl e et r utilis e Le principe essentiel c est que tous les mat riels infectieux doivent tre d contamin s pass s l autoclave ou incin r s dans le laboratoire Les principales questions qu il faut se poser avant d liminer un objet ou du mat riel biologique provenant d un laboratoire qui travaille sur des microorganismes ou des tissus animaux potentiellement dangereux sont au nombre de trois 1 Ces objets ou ce mat riel biologique ont ils t st rilis s ou d sinfect s effi cacement par Pun des proc d s approuv s 2 Dans la n gative ont ils t emball s selon une m thode agr e en vue de leur incin ration imm diate sur place ou de leur transport vers un autre tablisse ment capable d effectuer cette op ration 3 L limination des objets ou du mat riel biologiq
288. trant est facilement perturb par les courants d air pro duits par les personnes qui se d placent proximit de ESB les fen tres ouvertes les registres d admission de Pair ou encore louverture ou la fermeture des portes Il faut donc installer les ESB dans des emplacements qui soient loign s des points de passage et des courants d air qui pourraient perturber leur fonctionnement Dans la mesure du possible il faudrait pr voir un d gagement d une trentaine de centim tres derri re Penceinte et sur chacun de ses c t s pour faciliter Pacces en cas d op rations de main tenance Il peut galement s av rer n cessaire de pr voir un d gagement d environ 30 35 cm au dessus de l enceinte afin que l on puisse mesurer exactement la vitesse de Pair travers le filtre d vacuation et le cas ch ant changer le filtre Op rateurs Si les enceintes de s curit biologique ne sont pas utilis es correctement la protection conf r e risque d tre consid rablement r duite L op rateur doit veiller ne pas per turber le flux d air entrant lorsqu il passe les bras dans le volume de travail ou les en retire Il faut d placer les bras tr s lentement en avant ou en arri re perpendiculaire ment l ouverture frontale Avant de manipuler du mat riel dans le volume de travail d une ESB il faut attendre environ 1 minute une fois que Pon a pass les bras Pin t rieur pour que Penceinte s adapte et que le
289. tre nettoy e et entretenue facilement 33 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE 4 Les portes doivent s ouvrir vers l int rieur et se fermer automatiquement 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 Les locaux doivent tre convenablement chauff s ventil s et clair s Si la ventilation est m canique le flux d air doit tre dirig vers Pinterieur Lair vici est vacu a l ext rieur et ne doit en aucun cas tre recycl o que ce soit dans le batiment L acc s doit tre limit aux personnes autoris es A part les animaux destin s Pexperimentation aucun autre animal ne doit tre introduit dans les locaux Un programme de lutte contre les arthropodes et les rongeurs doit tre mis en place Sil y a des fen tres elles doivent tre s curis es r sister aux chocs et si elles sont susceptibles d tre ouvertes comporter des grillages pour emp cher le passage des arthropodes Les plans de travail seront d contamin s avec des d sinfectants efficaces apr s utilisation voir chapitre 14 Des enceintes de s curit biologique classe 1 ou IT ou des isolateurs disposant d une alimentation sp ciale en air et d une vacuation de Pair vici apr s filtra tion sur filtre HEPA doivent pouvoir tre utilis s pour les activit s susceptibles d entra ner la formation d a rosols Un autoclave do
290. ts Autoclave sur place dans une salle du laboratoire deux portes formant sas Enceinte de s curit biologique Syst me de surveillance de la s curit du personnel NIVEAU DE SECURITE BIOLOGIQUE 1 Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non Non 2 Non Non Souhaitable Souhaitable Non Non Non Non Non Non Non Souhaitable Non Non Souhaitable Non 3 Oui Oui Oui Oui Oui Non Oui Non Non Oui Oui Non Oui Non Oui Souhaitable Souhaitable Oui Souhaitable Oui Oui Oui Oui Oui Oui Oui Oui Non Oui Oui Oui Oui Oui Oui Isolement environnemental et fonctionnel par rapport aux points de passage gt Selon la situation de la sortie d air voir chapitre 4 Selon le ou les agents qui sont manipul s 4 Par exemple fen tre t l vision en circuit ferm metteur r cepteur 3 Possibilit de prendre localement des mesures pr ventives efficaces lesquelles peuvent comprendre une prophylaxie par vaccination ou administration d immuns rums immunisation passive des mesures sanitaires concernant par exemple l hygi ne des aliments et de l eau l limination des r servoirs animaux ou des arthropodes vecteurs 4 Possibilit de dispenser localement un traitement efficace immunisation passive vaccination post exposition utilisation d anti infectieux et d agents chimio th rapiques ou antiviraux s
291. ts expos s Il s agit en particulier de cancers radio induits par exemple des leuc mies ou encore des cancers osseux pulmonaires ou cutan s qui peuvent n appara tre que plusieurs ann es apr s Pirradiation D autres effets moins graves peuvent con sister en petites l sions cutan es alop cie anomalies sanguines l sions des voies digestives ou cataracte 2 En effets h r ditaires par ex des sympt mes qui s observent dans la descendance des sujets expos s Les effets h r ditaires de l irradiation des gonades consistent notamment en anomalies chromosomiques ou mutations g niques Lirradiation forte dose des cellules germinales pr sentes dans les gonades peut galement entra ner la mort cellulaire avec pour cons quence des troubles de la fertilit chez les deux sexes et une modification du cycle menstruel chez la femme Une exposi tion du f tus pendant son d veloppement en particulier entre la huiti me et la quinzi me semaine de la grossesse peut accro tre le risque de malformations con g nitales d arri ration mentale ou de cancers radio induits plus tard dans la vie Les principes de la radioprotection contre les rayonnements ionisants Pour limiter les effets nocifs des rayonnements ionisants il faut r glementer l utilisa tion des radio isotopes qui doit toujours respecter les normes nationales en la mati re La mise en uvre de la radioprotection repose sur quatre principes 1 R duire l
292. ttes bocaux etc d chets de pr f rence incassables en mati re plastique par exemple Si Pon utilise un d sinfectant les d chets doivent rester en contact intime avec le produit c est dire en vitant qu ils soient prot g s par des bulles d air pendant une dur e suffisante 20 3 LES LABORATOIRES DE BASE S CURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2 selon la nature du d sinfectant utilis voir chapitre 14 Les pots d chets seront d contamin s et lav s avant d tre r utilis s Lincineration des d chets contamin s doit recevoir l agr ment des autorit s de sant publique et de l organisme charg de la lutte contre la pollution atmosph rique ainsi que du d l gu la s curit biologique d sign par le laboratoire voir au chapitre 14 la section consacr e l incin ration S curit chimique lectrique incendie radioprotection et s curisation de Pappareillage Un incendie un accident d origine chimique ou lectrique ou encore une irradiation accidentelle peuvent provoquer indirectement une solution de continuit dans le con finement des germes pathog nes C est pourquoi il est imp ratif dans tout laboratoire de microbiologie de bien respecter les r gles de s curit pour pr venir de tels acci dents Ces accidents doivent normalement faire l objet d une r glementation officielle manant de Pautorit locale ou nationale comp tente dont il faut au besoin solli
293. u si une valuation 349 6 ANIMALERIES du risque Pindique pour une autre raison Chaque ann e tous les syst mes pratiques et modes op ratoires doivent tre r examin s et faire l objet d un contr le de confor mit Les r gles de s curit suivantes sont applicables 1 Toutes les exigences relatives aux animaleries niveaux de s curit 1 et 2 doivent etre respectees 2 L acc s sera strictement r glement L installation doit tre s par e des autres laboratoires et animaleries par une pi ce formant vestibule dot e d une entr e double porte 4 Un lavabo doit tre install dans ce vestibule 10 11 12 13 Le vestibule doit galement comporter une douche Les locaux doivent tre dot s d une ventilation m canique assurant une circula tion continue de Pair dans toutes les salles Lair vici doit tre vacu travers des filtres HEPA avant d tre rejet sans recyclage dans l atmosph re ext rieure Le syst me doit tre con u de mani re emp cher une inversion du sens de circula tion de Pair et toute surpression dans les locaux de Panimalerie Un autoclave doit tre install en un endroit commode de Panimalerie o se trou vent les quipements de confinement Les d chets infectieux doivent tre pass s a Pautoclave avant d tre transport s dans d autres locaux de l installation Il faut disposer d un incin rateur sur
294. ue st rilis s ou d sinfect s comporte t elle des risques suppl mentaires biologiques ou autres pour le personnel charg de Pelimination immediate sur place ou pour les personnes susceptibles d tre en contact avec ces d chets en dehors du laboratoire D contamination Le passage dans un autoclave vapeur est la m thode de choix chaque fois que Pon doit proc der une d contamination Le mat riel destin tre d contamin et limin sera plac dans des r cipients par exemple des sacs en plastique autoclavables comportant le code couleur qui indique si leur contenu doit tre autoclav ou incin r D autres proc d s ne peuvent tre envisag s que s ils sont capa bles d liminer ou de tuer les micro organismes pour plus de d tails se reporter au chapitre 14 Manipulation et limination du mat riel et des d chets contamin s Il faut instituer un syst me d identification et de tri des mat riels infectieux et de leurs r cipients en respectant la r glementation nationale et internationale en la mati re Les diff rentes cat gories sont les suivantes 1 D chets non contamin s non infectieux pouvant tre r utilis s recycl s ou jet s avec les d chets m nagers ordinaires 2 Objets piquants ou tranchants contamin s infectieux aiguilles hypodermiques scalpels couteaux verre bris ces objets doivent toujours tre rassembl s dans des collecteurs imperforables
295. ue6 sap anb isule sayeytugbu09 9119 aloyesoge anod sanboo sap 5 9 1194 g s h uni s p agueynd uondios l QELPA 19H0d S U9U 919A S ap no uolsn ap sanbifjaua no nead p n z s urod ayoueyq SJUEPAXO 98AP 1961002 8 19144 seo ua nbixoL a1pnod T V aulseyeyao1A9 185 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE YANO ju81d1991 saunja6 s p 1UPIQLUE un suep no U A 998 600 2 gej 9348 aunyesad W9 o id aun suep 1 1 02 l S RU A ej g w jqns 209 nb s sod nu N 1201 no S UlUO 99 9 6 99p180q19 S HO Saseq SJUPIOSI Sin 29 0id xne20 s supp g plonisuri 5 Suede sjue6 sap 191104 alxAydse p anbsiy 2010 9pilos auoqed ap p xolq 91dU109 3110 211dS31 anbsew un no jere ug139 un S1N9 98 01d 901 10 SIU U 919A anod u fol oup sap 19 sjueb sap 11901910800 4 19H0d 159 92019 s nbned u SIIIDo s p 19 Sa PU91 SUOIS97 Jasin uonejndiuew 99 1 2 2191110 s nbiseid gj no PI 1 1194 xn lqulou ej abessijdwas 9949129002 aed enbeny 9 anod llidulo9 aun 19 51 9 sunas jeyeo Jasin sed sap 32U9 OULIOS suleuad N Sapneyd 5928 1 5 ap S HH A ap 904959 0 ua sap no sanbifuaue anbiyels s p s jeurwop
296. uire en cours de trans port Il faut galement produire des formulaires contenant des donn es sur l chantillon des documents ou autres types d information qui en indiquent la nature en donnent la description avec mention du nom de l exp diteur et du destinataire ainsi que tout document compl mentaire conform ment aux derniers textes r gle mentaires en vigueur Le R glement type des Nations Unies pr conise l utilisation de deux mod les dif f rents de triple emballage Le mod le de base convient pour le transport de diverses mati res infectieuses mais les prescriptions concernant le transport des micro organismes haut risque sont plus rigoureuses Pour plus de d tails sur Putilisation des diff rents types d emballage en fonction de la nature des mati res transport es il est conseill de se reporter aux textes r glementaires nationaux ou internationaux relatifs aux diff rents modes de transport Consignes pour nettoyer des produits r pandus Au cas o du mat riel biologique infectieux ou potentiellement infectieux viendrait tre r pandu on appliquera les consignes suivantes 1072 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Emballage et tiquetage des substances infectieuses de cat gorie A Mat riau absorbant R cipient primaire tube a essai Emballage secondaire tanche a l eau Fiche de suivi de l chantillon y compris liste d taill e du con
297. ulation de mat riel infectieux Les piq res d aiguille peuvent tre vit es a en limitant au minimum n cessaire Putilisation des seringues et des aiguilles il existe des dispositifs simples qui per mettent d ouvrir les flacons capsules et d utiliser alors une pipette plut t qu une seringue b en utilisant des dispositifs sp ciaux de protection lorsque Pemploi d une seringue est n cessaire Il ne faut jamais remettre embout sur l aiguille Le mat riel usage unique doit tre jet dans des conteneurs sp ciaux imperforables anti piques munis d un couvercle On remplacera les pipettes Pasteur en verre par leur quivalent en mati re plastique S paration du s rum 1 2 Cette operation ne sera effectu e que par personnel specialement forme Il faut porter des gants ainsi qu un dispositif pour proteger les yeux et les muqueuses Les projections et les a rosols ne peuvent tre vit s ou r duits qu au moyen d une bonne technique Le sang et le serum seront pipett s avec soin et non vers s d un r cipient dans Pautre Le pipettage a la bouche est interdit Apr s usage les pipettes seront plong es compl tement dans un bain d sinfectant appropri Il faut les laisser tremper pendant une dur e suffisante avant limina tion ou lavage et st rilisation en vue de leur r utilisation Les tubes a chantillons contenant des caillots de sang ou autre et destin s
298. une source ponctuelle D bit de dose Constante x 1 distance On voit donc que si on double la distance entre la source de rayonnement et l op rateur l exposition sera divis e par quatre au cours de la m me dur e On utilise divers dispositifs et syst mes m caniques pour augmenter la distance entre l op rateur et la source par ex des pinces de divers types et notamment long manche ainsi que des dispositifs pour le pipettage distance A noter qu une petite augmentation de la distance peut se traduire par une r duction non n gligeable du d bit de dose 3 Blindage En pla ant entre la source et op rateur ou les autres membre du per sonnel des crans capables d absorber Penergie rayonn e ou de l att nuer on peut limiter leur exposition Le choix du type d cran et de son paisseur d pend de la capacit de p n tration du rayonnement c est a dire de sa nature et de son nergie Des crans en r sine acrylique en bois ou en m tal l ger d une pais seur de 1 3 1 5 cm prot gent contre les particules f tr s nerg tiques mais pour prot ger contre le rayonnement y ou X de haute nergie il est n cessaire d utiliser des crans au plomb de densit lev e 4 Substitution Il ne faut pas utiliser de radionucleides s il existe d autres techniques Si Pon ne peut pas substituer une autre technique une m thode radio isotopique il faudra utiliser le radionucl ide dont le rayonnement
299. ur la d contamination des surfaces et certains d entre eux comme le triclosan et le chlorox yl nol comptent parmi les antiseptiques les plus courants Les produits destin s au lavage des mains contiennent fr quemment du triclosan Il est surtout actif contre les bact ries v g tatives et n est pas agressif pour la peau et 97 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE les muqueuses Des tudes en laboratoire ont cependant montr que les bact ries de venues r sistantes au triclosan sous faible concentration se montrent galement r sis tantes a Pegard de certains types d antibiotiques On ignore si cette observation peut avoir des cons quences sur le terrain Un certain nombre de compos s ph noliques sont sensibles a la duret de Peau et une eau trop dure peut les inactiver c est pourquoi il faut les diluer avec de Peau dis till e ou d sionis e Il n est pas recommand d utiliser des d riv s ph noliques pour traiter des surfaces pouvant se trouver en contact avec des produits alimentaires ni des locaux fr quen t s par de jeunes enfants Ils sont susceptibles d tre absorb s par le caoutchouc et de franchir la barri re cutan e Dans tous les cas on se conformera la r glementation nationale en mati re de s curit chimique Compos s d ammonium quaternaire On utilise toutes sortes de compos s d ammonium quaternaire sous forme de m langes et souvent aussi en association avec d a
300. ur le 501 l Risques de tr buchement manifestes l Lingettes absorbantes propres sur les plans de travail Manipulation m canique des d bris de verre pelle et brosse pinces CC S curit incendie Pommes des asperseurs d gag es et non obstru es Pas de joints d tanch it au niveau des travers es des murs plafonds planchers etc l Passage de fils et de tuyaux dans l ouverture des portes All es de circulation de 1m de largeur au minimum l Objets rang s sur des conduites ou sur des appareils lectriques Combustibles exc dentaires stock s dans le laboratoire 1 Bains chauffants a temp rature constante Avec faible niveau d eau et interrupteur de surchauffe Construits en mat riau non combustible l 458 Tableau 6 Laboratoire de base S curit biologique niveau 2 contr le de s curit Ce formulaire est utiliser avec le formulaire de contr le bios curitaire pour le laboratoire de base s curit biologique niveau 1 POINTS CONTROLES NOTER LA DATE OUI NON SANS OBJET OBSERVATIONS Enceinte de s curit biologique ESB Agr ment au cours de
301. urod Sa juganad 540110 9 JUOS 519 19 Seq 2 191910 isule LUNIPOS ajzu s sn qwou Jueyn 10151 1015095 91 19 Wnissejod 9noydjnoed 5186 aq saouejsqns aun sun l WNiuILUN e Sap 181104 XN9 n d uonlsodx alyenalq JUSLULUEJOU 19 9 1081000 0150 0100 un nead ej 19 119 102 xne aW Sa 1101 19149 sunadea ej 911195 518 5 101 1099 S TOA 59 59991 215 0 l 1 115 E H Sa Jajeyul sed N 9 0115 09 UON xn s Jnod JU 99191 184 SANDIWIHO SANDISAHd 93 091 5341 SFLITISLYdWOON 3 0 Y SNOLLNWOIYd FIGNIONI G ANOSIY JLNYS YT 4 04 SINOSIY S3131Hd0Hd ANDINIHO 1110094 194 ANNEXE 5 PRODUITS CHIMIQUES DANGERS ET PRECAUTIONS A PRENDRE auuebjewe un 191110 1100 3012 ap pnod gj ap dane npuedes 159 5 np no SJIOIPUS s 134121 aduod aun g 391 31 19 un p aplA g ae un p aple g s gju u eI s n l nnob Sa 1911056 apuedal S au Pau anb anod sp10q31 g xneayeld ap snss p NE 191115A24 19 s u 1d1994 s Jabuey xne aw ap 9aAe s wefjewe sap 8104 9 00 9 JAAP JUIWIWWA OIA H P H sjisojdxa 59500 02 s p 1310 Jnod u l un p 19 591 02
302. us normalement incapables d infecter l esp ce en question S il arrivait que de tels animaux s chappent d un laboratoire et transmettent leurs g nes trangers leurs cong n res sauvages il pourrait th oriquement se constituer au sein de la population animale un r servoir pour ces virus Cette possibilit a t voqu e dans le cas du virus poliomyelitique et elle prend toute son importance dans le contexte de l radication de la poliomy lite Des souris transg niques exprimant le r cepteur au virus poliomy litique humain et produites par diff rents laboratoires ont pu tre infect es par ce virus en utilisant diverses voies d inoculation et la maladie r sultante s est r v l e cliniquement et histopathologique ment analogue la poliomyelite humaine Toutefois le mod le murin diff re de Por ganisme humain en ce sens que le virus poliomy litique administr par voie orale se r plique mal ou pas du tout dans les voies digestives Il est donc tr s peu probable que dans l ventualit o ces souris transg niques s chapperaient pour retourner l tat sauvage elles soient en mesure de constituer un nouveau r servoir animal du virus poliomy litique Cet exemple montre n anmoins que pour chaque nouvelle lign e d animaux transg niques il faut proc der des tudes minutieuses pour d terminer par quelles voies ces animaux peuvent tre infect s quel est le volume d inoculum n cessaire Pinf
303. utres germicides comme les alcools par exemple Ces compos s ont une activit satisfaisante contre les bact ries v g ta tives et les virus lipidiques Certains d entre eux comme le chlorure de benzalkonium sont utilis s comme antiseptiques La pr sence de mati res organiques ou de d tergents anionique et aussi la duret de l eau r duisent fortement le pouvoir germicide de certains compos s d ammonium quaternaire Il faut donc choisir avec soin ceux que l on envisage d utiliser comme d sinfectants pour le nettoyage pr alable la d contamination Certaines bact ries potentiellement dangereuses peuvent se d velopper dans les solutions de sels d am monium quaternaire Par ailleurs ces compos s peuvent s accumuler dans Penviron nement du fait de leur faible biod gradabilit Alcools Lethanol alcool thylique C H OH et le propanol 2 alcool isopropylique CH CHOH ont des propri t s d sinfectantes similaires Ils sont actifs contre les bact ries v g tatives les champignons et les virus lipidiques mais sans effet sur les spores Leur activit contre les virus non lipidiques est variable Pour que l efficacit soit maximale la concentration utilis e doit tre voisine de 70 v v dans l eau les concentrations sup rieures ou inf rieures risquent de ne pas avoir un pouvoir germi cide aussi lev Les solutions aqueuses d alcools ont le grand avantage de ne pas laisser de r sidus sur les ob
304. ux laminaire horizontal ou vertical ne sont pas des enceintes de s curit biologiques et ne doivent pas tre utilis es comme telles 57 MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE Tableau 8 Choix d une enceinte biologique de s curit ESB en fonction du type de protection recherch TYPE DE PROTECTION ESB UTILISER Protection du personnel micro organismes Classe Classe II Classe III des groupes de risque 1 3 Protection du personnel micro organismes Classe III du groupe de risque 4 laboratoire avec bo te gants Protection du personnel micro organismes Classe Classe II du groupe de risque 4 port obligatoire de combinaisons pressuris es Protection du produit Classe II Classe III uniquement si flux laminaire Protection contre les radionucl ides volatils Classe IIB1 Classe IIA2 vacuation ext rieure protection chimique quantit s minimes Protection contre les radionucl ides volatils Classe Classe 11B2 Classe III protection chimique Enceinte de s curit biologique de classe Le sch ma d une enceinte de s curit biologique de classe I est repr sent sur la figure 6 Lair est aspir par l ouverture frontale la vitesse minimale de 0 38 m s et passe sur le plan de travail avant d tre vacu par une conduite munie d un filtre Le courant d air entra ne hors de la zone de respiration de l op rateur les particules d a rosol qui pourraient se former au ni
305. veau du plan de travail et les dirige vers la conduite d va cuation L op rateur peut passer les bras par ouverture frontale pour atteindre le plan de travail situ l int rieur de Penceinte tout en observant ce plan travers un panneau de verre Ce panneau peut galement tre compl tement lev ce qui permet d acc der plus facilement au plan de travail pour le nettoyer ou pour toute autre raison L air de Penceinte est vacu par une conduite munie d un filtre HEPA a dans le laboratoire puis Pexterieur du b timent par le circuit d vacuation de ce dernier b l ext rieur par le circuit d vacuation du b timent c directement Pexterieur Le filtre HEPA peut tre mont sur la gaine d vacuation de PESB ou sur le circuit d vacuation du b timent Certaines ESB de classe I sont quip es d un filtre HEPA int gr les autres utilisent le ventilateur d extraction qui quipe le circuit d vacua tion du b timent LESB de classe I a t la premi re enceinte de ce type tre agr e et du fait de la sim plicit de sa conception elle est encore tr s largement utilis e dans le monde Elle pr sente l avantage d assurer la protection du personnel et de l environnement et peut galement tre utilis e pour travailler sur des radionucl ides ou des produits chimiques volatils et toxiques Toutefois comme lair aspir par l ouverture frontale passe sur le plan de travail sans tre s
306. virus des rickettsies des bact ries des protozoaires ou des helminthes pathog nes En cas d acc s f brile inexpliqu pri re de prendre contact avec l employeur pour obtenir des informations sur les agents auxquels l employ a pu tre expos Nom du laboratoire Adresse T l Figure 5 Mod le propos de carte m dicale 279 5 Le laboratoire de confinement a haute s curit S curit biologique niveau 4 Le laboratoire de confinement a haute s curit s curit biologique niveau 4 est concu pour les travaux sur des micro organismes du groupe de risque 4 Avant de construire et de mettre en service un tel laboratoire il convient d ouvrir des consul tations approfondies avec des institutions ayant l exp rience du fonctionnement de ce genre d installation Les laboratoires de confinement haute s curit op rationnels s curit biologique niveau 4 doivent tre plac s sous le contr le des autorit s sani taires comp tentes nationales ou autres Les informations qui suivent sont une simple introduction Toute personne ou institution qui souhaiterait mettre en place un lab oratoire de confinement haute s curit s curit biologique niveau 4 est invit e prendre contact avec le Programme sur la s curit biologique de POMS pour plus de renseignements Code de bonnes pratiques Les dispositions du code de bonnes pratiques relatives au niveau 3 de s cu
307. xpos e du filtre avant de P ter b c ensacher le filtre pour Penlever c retirer le filtre du volume du travail en veillant ce que la chambre de distri bution et les gaines inaccessibles ne soient pas contamin es 15 Les instruments doivent tre immerg s pendant une heure dans une solution d hypochlorite de sodium 20 g litre de chlore actif 2 96 puis bien rinc s l eau avant Pautoclavage 16 Les instruments qui ne peuvent pas tre autoclav s peuvent tre nettoyes en les trempant a plusieurs reprises pendant 1 heure dans une solution d hypochlorite de sodium a 20 g litre de chlore actif 2 Un rin age soigneux est ensuite n ces saire pour liminer les r sidus d hypochlorite Pour de plus amples informations sur la conduite a tenir avec les agents non conven tionnels le lecteur est pri de se reporter aux r f rences 12 26 et 27 87 13 Plans d urgence et conduite tenir en cas d urgence Tous les laboratoires qui travaillent sur des micro organismes infectieux doivent instituer les mesures de s curit qu exigent les risques pr sent s par les germes et les animaux manipul s Chaque fois qu un tablissement manipule ou conserve des micro organismes des groupes de risque 3 ou 4 laboratoire de base s curit biologique niveau 2 labora toire de confinement s curit biologique niveau 3 et laboratoire de confinement haute s curit s curit biologique niveau 4
308. yage doit tre fait par le personnel du laboratoire Dans le cas contraire Pequipe de nettoyage ne doit inter venir dans ces laboratoires qu avec l autorisation du d l gu a la s curit biologique ou du chef de laboratoire ou sous leur surveillance 136 21 Proqrammes de formation Une formation continue en cours d emploi est indispensable pour maintenir la sen sibilisation aux questions de s curit parmi le personnel de laboratoire et le person nel de maintenance ou d entretien Il appartient aux chefs de laboratoire avec l aide du d l gu a la s curit et d autres personnes competentes d assurer la formation du personnel L efficacit de cette formation comme d ailleurs de toute formation en sant et s curit au travail depend d un certain nombre de facteurs engagement de la Direction motivations des uns et des autres bonne formation professionnelle ini tiale bonne communication interpersonnelle et en fin de compte buts et objectifs de Petablissement Les points ci dessous sont essentiels pour lefficacit du programme de formation a la s curit biologique 1 Evaluer les besoins Il s agit par l de d finir les t ches accomplir par ordre d importance eu gard leur fr quence n cessit et complexit et d tail des op rations n cessaires leur r alisation 2 Fixer les objectifs de la formation C est dire les comportements observables que le personnel est suppos ado

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