REF 30 420 VIDAS β2 Microglobulin
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1. V rifier la concordance des codes couleurs et lettres entre le c ne et la cartouche 7 D marrer l analyse voir Manuel d Utilisation Toutes les tapes sont alors g r es automatiquement par l instrument 8 Reboucher les flacons et les remettre 2 8 C apr s pipetage 9 Les r sultats sont obtenus en 40 minutes environ A la fin de l analyse retirer les c nes et les cartouches de l instrument 10 Eliminer les c nes et cartouches utilis s dans un r cipient appropri Fran ais 3 VIDAS 82 Microglobulin RESULTATS ET INTERPRETATION D s le test termin les r sultats sont analys s automatiquement par le syst me informatique L instrument effectue deux mesures de fluorescence dans la cuvette de lecture pour chacun des tests La premi re lecture prend en compte le bruit de fond d la cuvette substrat avant mise en contact du substrat avec le c ne La seconde lecture est effectu e apr s incubation du substrat avec l enzyme pr sente dans le c ne Le calcul de la RFV Relative Fluorescence Value est le r sultat de la diff rence des deux mesures Il appara t sur la feuille de r sultats Les r sultats sont calcul s automatiquement par l instrument par rapport une courbe de calibration m moris e mod le math matique mod le logistique 4 param tres et sont exprim s en mg l Remarque 1 IU 1 4 x 102 ug 1st international standard preparation Les chantillons pr sentant de2. 1 x 1ml liquide la mention 1 Carte MLE Rs Lot Entry Concentration en mg l Concentration en mg l Calibrator S1 RFV Range Pr t l emploi Tampon TRIS 0 05 mol l pH 7 4 contenant de la B2 microglobuline d origine humaine albumine bovine azoture de sodium 1 g l l intervalle de confiance est indiqu sur la carte MLE avec Control C1 Dose Value Range Pr t l emploi Tampon TRIS 0 05 mol l pH 7 4 contenant de la B2 microglobuline B2M d origine humaine albumine bovine azoture de sodium 1 g l l intervalle de confiance est indiqu sur la carte MLE avec Control C2 Dose Value Range Sp cifications des donn es usine n cessaires la calibration du test se r f rer au G Utilisateur pour la lecture 1 Notice bioM rieux SA Fran ais 1 VIDAS 2 Microglobulin Le c ne Le c ne est sensibilis au moment de la fabrication par de l anticorps monoclonal anti B2 M BE104 souris Chaque c ne est identifi par le code B2M Utiliser uniquement le nombre de c nes n cessaires et laisser les c nes inutilis s dans leur sachet Refermer compl tement le sachet apr s ouverture Description de la cartouche B2M 07132 I fr 2010 05 La cartouche La cartouche est compos e de 10 puits recouverts d une feuille d aluminium scell e et tiquet e L tiquette comporte un code barres reprenant principalement le code du test le num ro de lot et la date de p remption
3. MAIS NON FOURNIS Pipette embout jetable permettant la distribution de 100 pl Gants non talqu s usage unique Pour d autres mat riels et consommables sp cifiques se r f rer au Manuel Utilisateur de l instrument Instrument de la famille VIDAS PRECAUTIONS D UTILISATION e Pour diagnostic in vitro uniquement e Pour usage professionnel uniquement e Ce coffret contient des composants d origine humaine Aucune des m thodes d analyse actuellement connues ne peut garantir de fa on absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathog ne transmissible Il est recommand de les manipuler avec les pr cautions d usage relatives aux produits potentiellement infectieux se reporter au Manuel de S curit Biologique en Laboratoire OMS Gen ve derni re dition Ce coffret contient des composants d origine animale La ma trise de l origine et ou de l tat sanitaire des animaux ne pouvant garantir de fa on absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathog ne transmissible il est recommand de les manipuler avec les pr cautions d usage relatives aux produits potentiellement infectieux ne pas ing rer ne pas inhaler bioM rieux SA e Ne pas utiliser les c nes dont le sachet est perc e Ne pas utiliser de cartouches visiblement alt r es feuille aluminium ou plastique endommag e Ne pas utiliser les r actifs apr s la date de p remption indiqu e sur l tiquette tu
4. enzymes prot olytiques dans l urine soit neutralis 5 Si le pH _est_ inf rieur 5 5 neutraliser l urine les prot ases urinaires ayant leur maximum d activit un pH de 5 5 et la B2 microglobuline tant instable ce pH Stabilit des chantillons Les s rums et plasma peuvent tre stock s 2 8 C dans des tubes bouch s 5 jours au maximum Au del les congeler 25 6 C une seule cong lation Une tude r alis e sur des s rums congel s pendant douze mois n a montr aucune influence sur la qualit des r sultats Les urines apr s neutralisation peuvent tre stock es congel es 25 6 C bioM rieux SA 07132 I fr 2010 05 MODE OPERATOIRE Pour des instructions compl tes se r f rer au Manuel d Utilisation de l instrument Saisie des donn es MLE A l ouverture d un nouveau lot les sp cifications ou donn es usine doivent tre entr es dans l instrument l aide des donn es MLE Si cette op ration n tait pas effectu e avant de commencer les tests l instrument ne pourrait pas diter de r sultats Ces sp cifications ne sont entr es qu une seule fois pour chaque lot Il est possible de saisir les donn es MLE manuellement ou de fa on automatique en fonction de l instrument se r f rer au Manuel d Utilisation Calibration La calibration l aide du calibrateur fourni dans le coffret doit tre effectu e l ouverture de chaque nouveau lot apr
5. lympho de my lome multiple lymphome cellules B certaines maladies virales h patite ou SIDA chez les patients h mophiles Dans le cas d une infection par le VIH c est un des marqueurs d volution p jorative 4 2 1 C est le param tre le plus performant pour la d tection des dysfonctions tubulaires proximales 2 La d termination du taux urinaire de 2 microglobuline apporte une aide lors du suivi des transplant s r naux 1 COMPOSITION DES REACTIFS DU COFFRET 30 TESTS Pr tes l emploi C nes sensibilis s par de l anticorps monoclonal anti B2 30 cartouches B2M 30 c nes B2M Pr ts l emploi M BE 104 souris Calibrateur B2M 1 x 1 ml liquide De nombreuses m thodes de dosage ont t d crites parmi lesquelles l immunodiffusion radiale l lectro immunodiffusion l immunon ph l m trie l inhibition de la toxicit lymphocytaire et des techniques RIA et ELISA Ces derni res sont les plus couramment utilis es PRINCIPE Le principe du dosage associe la m thode immuno enzymatique sandwich en deux tapes une d tection finale en fluorescence ELFA Le c ne usage unique sert la fois de phase solide et de syst me de pipetage Les autres r actifs de la r action immunologique sont pr ts l emploi et pr r partis dans la cartouche Toutes les tapes du test sont r alis es automatiquement dans l appareil Elles sont constitu es d une succession de cycles d aspi
6. origine de corr lation Sujets normaux 0 97 0 933 Autres patients 1 28 0 995 Intersection Coefficient l origine de corr lation Ce io om ose ELIMINATION DES DECHETS Eliminer les r actifs utilis s ou non utilis s ainsi que les mat riels usage unique contamin s en suivant les proc dures relatives aux produits infectieux ou potentiellement infectieux Il incombe chaque laboratoire de g rer les d chets et les effluents qu il produit selon leur nature et leur dangerosit et d en assurer ou faire assurer le traitement et l limination selon les r glementations applicables Urines Sujets normaux 0 007 Malades Fran ais 5 VIDAS 82 Microglobulin REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1 KARLSSON F A WIBELL L amp EVRIN P E B2 Microglobulin in clinical medicine Scand J Clin Lab Invest 1980 40 suppl 154 VINCENT C ESTEVE J COOPER E H DECONNINCK FORBES M POULIK M D SABLIN G VOKAK B A collaborative study of a preparation of normal human serum for use as a reference in the assay of B2 Microglobulin Journal of Biological standardization 1985 13 185 197 REVILLARD J P La B2 Microglobuline structure fonction et m tabolisme Lyon M dical 1979 241 10 681 690 BELEC L RIPOLL L MATTA F MBOPI KEOU FX COTIGNY S LENGUET MF JACOB A Marqueurs biologiques pr visionnels d volution au cours de l infection par le virus de l immunod ficience humai
7. s entr e des sp cifications du lot puis tous les 14 jours Cette op ration permet d ajuster la calibration chaque instrument et l volution ventuelle du r actif dans le temps Le calibrateur identifi par S1 sera analys en double voir Manuel d utilisation La valeur du calibrateur doit tre comprise dans les limites de RFV Relative Fluorescence Value fix es Si ce n est pas le cas la moyenne ne sera pas m moris e refaire une calibration R alisation du test 1 Sortir uniquement les r actifs n cessaires les laisser 30 minutes temp rature ambiante avant utilisation 2 Utiliser une cartouche B2M et un c ne B2M pour chaque chantillon contr le ou calibrateur tester V rifier que le sachet de c nes a t referm compl tement apr s chaque utilisation 3 Le test est identifi par le code B2M sur l instrument Le calibrateur identifi obligatoirement par S1 doit tre utilis en double Si le contr le positif faible doit tre test il sera identifi par C1 Si le contr le positif fort doit tre test il sera identifi par C2 4 Homog n iser l aide d un agitateur de type vortex le calibrateur les contr les et les chantillons pour s rum plasma ou urine s par du culot 5 La prise d essai du calibrateur du contr le et des chantillons est de 100 ul pour ce test 6 Placer dans l instrument les c nes B2M et les cartouches B2M
8. 30 420 VIDAS 82 Microglobulin 071321 fr 201005 Q VIDAS 2 Microglobulin est un test quantitatif automatis sur les instruments de la famille VIDAS permettant la mesure quantitative de la p2 microglobuline dans le s rum ou le plasma humain h parinate de lithium ou EDTA ainsi que dans les urines par la technique ELFA Enzyme Linked Fluorescent Assay INTRODUCTION ET OBJET DU TEST La B2 microglobuline B2 M est un polypeptide de faible poids mol culaire 11 800 Da 1 2 3 4 Elle est synth tis e par la plupart des cellules nucl es Son turn over correspond une production d environ 150 mg 24h 2 3 4 La moiti de la B2 microglobuline plasmatique renouvel e chaque jour provient des lymphocytes La B2 microglobuline circulante est filtr e au niveau du glom rule r nal pour tre r absorb e par le tube contourn proximal qui en assure la d gradation 1 L augmentation de la B2 microglobuline plasmatique peut donc tre due soit une diminution de la filtration glom rulaire soit une augmentation de sa synth se 1 2 Le taux de 2 microglobuline plasmatique est donc augment chez des patients pr sentant des maladies autres que r nales et particuli rement celles o le syst me immunitaire est impliqu 2 3 Une augmentation significative sera observ e lors de maladies telles que le lupus ryth mateux l arthrite rhumato de le syndrome de Sjogren les maladies malignes du syst me
9. du coffret Le premier puits comporte une partie pr d coup e pour faciliter l introduction de l chantillon Le dernier puits est une cuvette permettant la lecture en fluorim trie Les diff rents r actifs n cessaires l analyse sont contenus dans les puits interm diaires Puits chantillon Diluant chantillon tampon TRIS 0 05 mol l pH 7 4 stabilisants prot iques et chimiques azoture de sodium 1 g l 600 pl Solution de pr lavage tampon TRIS 0 05 mol l pH 7 4 stabilisants prot iques et chimiques azoture de sodium 1 g l 600 ul Solution de lavage tampon TRIS 0 05 mol l pH 7 4 stabilisants prot iques et chimiques azoture de sodium 1 g l 600 pl Conjugu anticorps anti B2 microglobuline mouton marqu la phosphatase alcaline azoture de sodium 1 g l 400 pl Diluant chantillon tampon TRIS 0 05 mol l pH 7 4 stabilisants prot iques et chimiques azoture de sodium 1 g l 400 pl Cuvette de lecture avec substrat 4 M thyl ombelliferyl phosphate 0 6 mmol l di thanolamine DEA 0 62 mol l soit 6 6 pH 9 2 azoture de sodium 1 g l R actif IRRITANT R 36 irritant pour les yeux S 26 sp cialiste en cas de contact avec les yeux laver imm diatement et abondamment avec de l eau et consulter un Pour plus d informations consulter la fiche de donn es s curit disponible sur demande MATERIELS ET CONSOMMABLES NECESSAIRES
10. es r sultats de ce test doivent tre interpr t s en tenant compte du contexte clinique et ventuellement des r sultats d autres tests VALEURS ATTENDUES Ces r sultats sont donn s titre indicatif il est recommand chaque laboratoire d tablir ses propres valeurs de r f rence sur une population rigoureusement s lectionn e bioM rieux SA 07132 I fr 2010 05 Premi re tude La valeur de r f rence pour la concentration en B2 microglobuline dans le s rum ou le plasma a t trouv de 1 50 mg l moyenne obtenue sur 100 adultes pr sum s sains donneurs de sang g s de 18 60 ans Le domaine de r f rence correspondant au 95 me percentile varie de 0 81 2 19 mg l Dans l urine il a t trouv sur une population de 52 adultes jeunes pr sum s sains une valeur moyenne de 0 07 mg l Le domaine de r f rence correspondant au 95 me percentile varie de 0 00 0 15 mg l Deuxi me tude 95 s rums et 47 urines de patients issus d une population hospitali re pour laquelle aucune maladie susceptible d entra ner une augmentation du titre de B2 microglobuline n avait t identifi e ont t test s Valeur moyenne Valeur la plus mg l lev e mg l S rums Tranche Nb d ge de sujets Urines Nb Valeur la plus d ge de sujets fr quente mg l lev e mg l PERFORMANCES Les tudes de VIDAS B2 Microglobulin ont donn les r sultats suivant
11. i e Ne pas m langer les r actifs ou consommables de lots diff rents e Ne pas utiliser de gants talqu s le talc pouvant entra ner de faux r sultats pour certains tests immuno enzymatiques e Les r actifs du coffret contiennent un conservateur azoture de sodium susceptible de r agir avec les tuyauteries en plomb ou en cuivre et de former des azotures m talliques explosifs Il est recommand de rincer l eau tout rejet e Le substrat puits 10 de la cartouche contient un agent irritant di thanolamine 6 6 Prendre connaissance de la phrase de risque R et des conseils de prudence S cit es ci dessus e Les projections doivent tre trait es avec un liquide d tergent ou une solution d eau de Javel contenant au moins 0 5 d hypochlorite de sodium Se r f rer au Manuel d Utilisation pour liminer les projections sur ou l int rieur de l instrument Ne pas autoclaver de produit javellis e L instrument doit tre r guli rement nettoy et d contamin se reporter au Manuel d Utilisation Fran ais 2 VIDAS 82 Microglobulin CONDITIONS DE STOCKAGE e Conserver le coffret VIDAS B2 Microglobulin 2 8 C e Ne pas congeler les r actifs e Laisser 2 8 C les r actifs non utilis s e l ouverture du coffret v rifier l int grit et la bonne fermeture du des sachet s de c nes Dans le cas contraire ne pas utiliser les c nes e Apr s chaque utilisation refermer compl
12. ne Ann Biol Clin 1992 50 621 637 ROMETTE et al f2 microglobuline m tabolisme m thodes de dosage variations pathologiques Feuillets de biologie 1992 vol 33 n 189 07132 I fr 2010 05 TABLE DES SYMBOLES Symbole Signification R f rence du catalogue lt g Dispositif m dical de diagnostic in vitro Fabricant Limites de temp rature Utiliser jusque Code du lot Consulter les instructions d utilisation Contenu suffisant pour n tests lt w Bn E BIOMERIEUX le logo bleu VIDAS et SPR sont des marques utilis es d pos es et ou enregistr es appartenant bioM rieux SA ou Pune de ses filiales Les autres marques et noms de produits mentionn s dans ce document sont des marques commerciales de leurs d tenteurs respectifs D M RIEUX sl bioM rieux SA RCS LYON 673 620 399 69280 Marcy l Etoile France T l 33 0 4 78 87 20 00 Fax 33 0 4 78 87 20 90 www biomerieux com CE Imprim en France
13. ration refoulement du milieu r actionnel Apr s dilution de l chantillon la B2 microglobuline de l chantillon se lie l anticorps monoclonal sp cifique fix sur le c ne Des tapes de lavage liminent les compos s non fix s La B2 microglobuline retenue est r v l e par un anticorps polyclonal de mouton anti B2 microglobuline humaine marqu la phosphatase alcaline Le conjugu non fix est limin par lavage Lors de l tape finale de r v lation le substrat 4 M thyl ombelliferyl phosphate est aspir puis refoul dans le c ne l enzyme du conjugu catalyse la r action d hydrolyse de ce substrat en un produit 4 M thyl ombelliferone dont la fluorescence mise est mesur e 450 nm La valeur du signal de fluorescence est proportionnelle la concentration de la B2 microglobuline pr sente dans l chantillon A la fin du test les r sultats sont calcul s automatiquement par l instrument par rapport une courbe de calibration m moris e puis imprim s Pr t l emploi Tampon TRIS 0 05 mol l pH 7 4 contenant de la B2 microglobuline d origine humaine albumine bovine azoture de sodium 1 g l La concentration en mg l est indiqu e sur la carte MLE avec la mention Calibrator S1 Dose Value L intervalle de confiance en Relative Fluorescence Value est indiqu sur la carte MLE avec la mention Contr le positif faible B2M 1 x 1 ml liquide la mention Contr le positif fort
14. s Domaine de mesure Le domaine de mesure du r actif VIDAS B2 microglobuline s tend de 0 004 4 mg l Limite de d tection analytique D finie de mani re graphique comme tant la plus petite concentration en B2 microglobuline significativement diff rente de la concentration z ro avec une probabilit de 95 0 004 mg l Pr cision Reproductibilit intra essai 5 chantillons ont t dos s 30 fois dans une m me s rie Concentration S rums moyenne mg l CV Concentration moyenne mg l CV Urines o f oa HE HE Fran ais 4 VIDAS 2 Microglobulin Reproductibilit inter essai 3 chantillons s riques et 2 chantillons urinaires ont t dos s en simple dans 7 s ries diff rentes sur un m me instrument VIDAS S rums Concentration CV moyenne mg l C ss s i Urines Concentration CV moyenne mg l EXACTITUDE Test de dilution 3 chantillons ont t dilu s dans du s rum physiologique et dos s en simple dans 3 s ries La concentration moyenne mesur e rapport e la concentration attendue est exprim e en pourcentage de r cup ration moyen Concen Pour tration centage de mesur e r cup ra mg l tion Concen tration attendue mg l Echantillons Facteur dilution bioM rieux SA 07132 I fr 2010 05 Comparaison avec un autre r actif EIA commercialis Intersection Coefficient l
15. s concentrations en B2 microglobuline sup rieures 4 mg l doivent tre redos s apr s dilution au 1 10 dans du s rum physiologique Si le facteur de dilution n a pas t saisi lors de la cr ation de la liste de travail voir Manuel d Utilisation multiplier le r sultat par le facteur de dilution pour avoir la concentration de l chantillon Les r sultats d un dosage de VIDAS B2 Microglobulin doivent tre interpr t s dans le cadre d une valuation clinique et en compl ment d autres m thodes diagnostiques en fonction des pathologies CONTROLE DE QUALITE Un contr le positif faible et un contr le positif fort sont inclus dans chaque coffret VIDAS fB2 Microglobulin Les contr les doivent tre utilis s l ouverture de chaque nouveau coffret afin de v rifier l absence d alt ration des r actifs Chaque calibration doit tre galement v rifi e l aide de ces contr les Pour que l instrument puisse v rifier la valeur des contr les il faut les identifier par C1 et C2 Si les valeurs des contr les s cartent des valeurs attendues les r sultats ne peuvent tre valid s Remarque Il est de la responsabilit de l utilisateur de s assurer que le contr le de qualit est mis en uvre conform ment la l gislation locale en vigueur LIMITE DU TEST Une interf rence peut tre rencontr e avec certains s rums contenant des anticorps dirig s contre des composants du r actif c est pourquoi l
16. tement le sachet avec son d shydratant pour maintenir la stabilit des c nes et replacer la totalit du coffret 2 8 C e Tous les composants sont stables jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette tui s ils sont conserv s dans les conditions pr conis es ECHANTILLONS Nature et pr l vement des chantillons 1 Utiliser des s rums ou plasmas anticoagulants valid s h parinate de lithium EDTA Ne pas utiliser les chantillons contamin s ou d compl ment s le traitement des chantillons 30 min 56 C diminue le taux de B2 microglobuline de 18 50 Les chantillons contenant des impuret s devront tre centrifug s avant analyse Il n a pas t observ pour ce dosage d influence significative de l h molyse apr s surcharge d chantillons en h moglobine 0 300 mol l de monom re de la lip mie apr s surcharge d chantillons en lipides 0 5 mmol l d quivalent triglyc rides de la bilirubin mie apr s surcharge d chantillons en bilirubine O 513 pmol l Il est n anmoins conseill de ne pas utiliser d chantillons visiblement h molys s lip miques ou ict riques et d effectuer si possible un nouveau pr l vement 2 Urines mesurer le pH de l urine tester le plus rapidement possible apr s pr l vement Si le pH est sup rieur 5 5 l chantillon peut tre soit test tel quel mais rapidement malgr l existence d
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