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PLATELIA™ CMV IgG

1. Beliko TOU Tn 4 96 MT PLATE 12 8 C
2. 5 1 0 1 30 6 1 0 To
3. WG Greek 1 va 18 30 C OUVIOTWHEVN 35 C 39 C 72 2
4. BAOMONOMHTEZ 5x 7 6 mL anti CMV IgG 0 01 mol L 1 BSA 0 09 OI IU ml EU ml 11 O 2 1 IU ml 10 EU mL va Or 0 5 1 5 10 20 IU mL
5. TTITTETAP O MATOS TOU ZKOUTTIOTE Travi TO TIG un
6. FDA HbsAg anti HIV 1 anti HIV 2 anti HCV 1 POP TE 2
7. 264 47 217 100 To kit Platelia CMV IgG 100 Greek 15 AKPIBEIA 2 n 21 N 104 N 105 N 106 nta 0 453 0 374 0 433 4 62 4 73 4 07 3 EU ml I II Ill s 96 ap 1 12 6 17 5 17 6 18 ap 2 78 5 87 5 96 3 10 Greek 16
8. CO 10 11 H 12 7
9. anti Cytomegalovirus IgG 3 AOKIMHX H ELISA EV ULIK G 1 7 8 Ol TO TO IgG
10. 7 8 TOU 9 37 C TUV Ol
11. va 3 OUVIOTWHEVOUG 4 2M 5 ETTWAONG 6 va
12. TOV TOU anti CMV IgG TO anti CMV IgM IgM KIT Platelia CMV IgM TO 8 14 IgG 13 23 CMV IgG Epstein Barr Herpes Simplex 14
13. 45 37 C 30 300 100 UL 45 37 C HE 4 100 uL 15 100 UL O D 450 nm 450 620 nm 30 min 2 000 ora 405 nm 9 KYTTAPOMETAAO O IgG 1 100 pL
14. op O 4 2 8 C 20 C va H 0 45 um H
15. H 4 silica gel TOU UTTOOTPWHATOG
16. O 2 0 405 nm 3 To anti Cytomegalovirus IgG EU mL IU mL via anti CMV IgG 6 OD Greek 1 EU mL IU mL 0 0 si 5 0 5 ne 10 1 P 50 5 an 100 10 200 20 O avoo ag
17. a B y 0 09 TOV TO ME ra 3 ETTAVAXPNOINOTTOIOUVTAI H 1 h 121 C 4 To Belik
18. 8 10x 100 mL 900 mL H20 1 50x 49 TOU 2 mL 98 mL Greek 1 101 10 pL 1 mL 100 pL MH 100 UL pia 100 UL
19. CONJ 2YZYTE2 1x 16 mL HE 0 05 0 02 Bronidox Greek CONTROL IgG APNHTIKOZ MAPTYPAZ IgG PF93910 1 x 1 6 mL ME ZE anti CMV IgG 0 01 mol L 1 BSA 0 09 0 2 8 C ASH BUF 10x 10X PF93603 1 x 100 mL ME 10
20. 45 min 37 C 4 300 2 100 uL 45 min 37 C 4 300 3 100 UL 15 min 4 100 uL 450 nm 30 min 10 1 0 lt 0 6 2 2 H 2 gt 0 2 450 nm gt 0 16 450 620 nm 3 H TOU 5 1 2 11 EPMHNEIA OD OD
21. 0 05 mol L pH 3 8 H SO 0 3 M PF93602 1 x 16 mL H2SO 0 3 mol L 2 1 37 C 450 450 620 nm 405 nm TTUKV TNTAC OD gt 2000 225 375 ul ATTEOTOYM VO Mikporrrrrr reg 10 100 1000 590
22. anti Cytomegalovirus IgG gt 12 EU mL 1 2 IU mL anti Cytomegalovirus IgG lt 8 EU mL lt 0 8 IU mL 2 1 2 gt 0 8 lt 1 2 lt 0 8 12 IgM H
23. 0 5 Brij 1 10 37 C SAMP DIL 50x 50X PF93601 1 4 5 mL 50 0 05 0 02 Bronidox 1 50 SUBS TMB PF93619 12 mL 0 26 mg mL 0 01
24. Greek 5 KAI TON Ta va 2 8 C 6 2 8 C 6 2 8 C 6 2 8 C 2 8 C 1 15 30 C 2 2 8 C 2 2 8 C 5 15 30 C 2 8 C 6 IN VITRO TO
25. CINTA ADHESIVA 2 BOLSA DE PL STICO 1 MATERIALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS ncubador a 37 C Lector de Microplacas longitud de onda 450 o 450 620 nm e 405 nm con linealidades hasta OD gt 2 000 por lo menos Lavador de Microplacas no indispensable para dispensar volumenes entre 225 375 ul Agua Destilada o desionizada Guantes de un solo uso Cron metro Soluci n de hipoclorito del sodio 5 Envases para la colecci n de materiales potencialmente infecciosos Papel absorbente Micropipetas de precisi n para extraer 10 100 1000 uL de soluci n 5 CONSERVACI N Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS Los reactivos deben ser conservados a 2 8 C La fecha de caducidad est impresa en cada uno de los componentes y en la etiqueta exterior de la caja Los reactivos tienen una estabilidad limitada despu s de la abertura y o de la preparaci n REACTIVO CONDICIONES MICROPLACA 6 SEMANAS 2 8 C bolso de pl stico CALIBRADORES 6 SEMANAS 2 8 C CONJUGADO 6 SEMANAS 2 87C SUBSTRATO hasta la caducidad a 2 8 C 1 semana a 15 30 C en ambiente oscuro DILUYENTE MUESTRAS listo para su uso 2 semanas 2 8 C SOLUCI N DE LAVADO listo para su uso 2 semanas 2 8 C 5 d as a 15 30 C SOLUCI N BLOQUEANTE hasta la caducidad a 2 8 C 6 PRECAUCIONES DE USO SOLAMENTE PARA USO EN DIAGN STICO IN VITRO CONSERVAR A 2 8 C Cuidado Este kit contiene materiales de origen humano que han sido testados
26. UTTOOTPWNATOG 17 1 G B Wisdom Enzyme Immunoassay Clin Chem 22 1243 1976 2 H O Kangro Cytomegalovirus serology does Immunotherapy 1 91 1987 3 Grint P C A et al Screening tests for antibodies to cytomegalovirus an evaluation of five commercial products J Clin Pathol 38 1059 1985 4 M Musiani et al Rapid detection of antibodies against cytomegalovirus induced immediate early and early antigens by an enzyme linked immunosorbent assay J Clin Pathol 37 122 1984 5 F de Ory et al Serological diagnosis of cytomegalovirus infections comparison of six commercial methods of ELISA Serodiagnosis and Immunotherapy 2 423 1988 No it give the answer Serodiagnosis and P Dal Monte et al Cytomegalovirus umano Diagnosis 2 67 1990 R Ziegalmaier et al ELISA la Ricerca Clin Lab 10 83 1980 Greek The other languages which are reguired in conformity to the European Directive can be obtained from your local Bio Rad agent Les autres langues reguises par la Directive Europ enne sont disponibles aupr s de votre repr sentant Bio Rad local Los otros idiomas gue se reguiren para la conformidad de la Directiva Europea puede ser obtenida en su oficina local Biorad Die anderen Sprachen die in bereinstimmung mit der europ ischen IVD Direktive be
27. TIA TON IgG 2 AOKIMH O 95 va IKTEPO
28. Nedostato n odsatie jamiek Skontrolujte i spr vne funguje prem va ka Chyba pri pipetovan Skontrolujte funkciu pipety Pr li pomal napipetovanie reagencie Zabr te vyschnutiu platni ky po prem vacom kroku Reagencie pridajte ihne Pr tomnos bubl n Zabr te vzniku vzduchov ch bubl n pri pipetovani Zne istenie optickej dr hy Skontrolujte i nie je zne isten sveteln zdroj alebo detektor pr stroja M kkou tkaninou otrite spodn as platni ky Neadekv tne vyv janie farby Nespr vna d ka alebo teplota inkub cie Skontrolujte zariadenie na regul ciu teploty a merania asu Presne dodr te doporu en n vod na pou itie Pridanie nespr vneho objemu substr tu na platni ku Skontrolujte funkciu pipety 17 LITERAT RA Vi anglick verziu 3 boulevard Raymond Poincar 92430 Marnes la Cocugette France Tel 33 0 1 47 95 60 00 Fax 33 0 1 47 41 91 33 ces 12 2004 Slovensky CIL NN PLATELIA CMV IgG 96 TESZT 72680 CITOMEGALOVIRUS ELLENI IgG OSZTALYU ELLENANYAGOK KVALITATIV ES KVANTITATIV KIMUTATASA HUMAN SZERUMBAN ENZIM IMMUNASSAY MODSZERREL Minden ltalunk gy rtott s forgalomba hozott term k min segbiztosit si rendszer keret n bel l k sz lt a nyersanyag tv tel t l kezdve a term k forgalmaz s ig Minden egyes gy rt si sorozat min s g t ellen rizz k s c
29. Die anderen Sprachen die in bereinstimmung mit der europ ischen IVD Direktive ben tigt werden erhalten Sie ber Ihre lokale Bio Rad Niederlassung Le altre lingue che sono richieste in conformita con le Direttive Europee possono essere ottenute dal locale agente Bio Rad As restantes l nguas obrigat rias em conformidade com a Directiva Europeia podem ser obtidas atrav s da subsidi ria Bio Rad mais pr xima de si vriga spr k som kr vs i enlighet med EG direktivet kan erh llas fr n din lokala Bio Rad representant De ovrige sprog som kraeves i henhold til EU direktiv kan f s ved henvendelse til den lokale Bio Rad leverandor Bio Rad 0459 3 boulevard Raymond Poincar 12 2004 92430 Marnes la Coquette France Tel 33 0 1 47 95 60 00 Fax 33 0 1 47 41 91 33 Ref 91010 BRD Deutsch CI w PLATELIA CMV IgG 96 TESTS 12680 TROUSSE POUR LA DETECTION QUALITATIVE ET QUANTITATIVE DES ANTICORPS IgG ANTI CYTOMEGALOVIRUS DANS LE SERUM HUMAIN PAR TECHNIQUE IMMUNOENZYMATIQUE Ref 91010 BRD Frangais 10 11 12 13 14 15 16 17 Ref 91010 BRD SOMMAIRE BUT DU DOSAGE INTERET CLINIQUE PRINCIPE DU TEST COMPOSITION DE LA TROUSSE ET PREPARATION DES REACTIFS C
30. Positiv Hvis forholdet er gt 1 2 Tvivlsom Hvis forholdet er gt 0 8 lt 1 2 Negativ Hvis forholdet er lt 0 8 Hvis resultatet er tvivlsomt bor testen gentages Hvis det fortsat er tvivlsomt bor der tages en ny serumprove 12 PROCEDURENS BEGR ENSNINGER En serumprove der er indsamlet under en akut infektion n r der kun er forekomst af IgM antistoffer kan veere negativ med denne procedure Varmeinaktivering at testserum giver ikke fejlagtige resultater ved bestemmelse af anti CMV IgG som det er tilf ldet med anti CMV IgM Cytomegalovirus IgM niveauet bar bestemmes ved hj lp af Platelia CMV IgM seettet Alternativt kan en anden serumprove der er indsamlet 8 14 dage senere testes parallelt for at se om IgG antistofniveauet er steget Testresultaterne skal anvendes sammen med oplysninger fra evalueringen af sygdomshistorien eller andre diagnostiske procedurer 13 ANALYTISK SPECIFICITET Der blev testet 23 prover som blev fundet negative for CMV men som indeholdt IgG antistoffer mod vira s som r de hunde Epstein Barr Herpes Simplex m slinger og faresyge Forekomsten af disse antistoffer p virkede ikke testen Dansk 14 DIAGNOSTISK SENSITIVITET OG SPECIFICITET forbindelse med en klinisk undersggelse pa et hospitalslaboratorium blev 264 prover analyseret Af disse var 47 negative og 217 var positive Pr verne blev analyseret med en anden kommerciel enzymimmunmetode Der var 100 overensstemmelse mell
31. Messen Sie die Extinktion bei 450 nm innerhalb von 30 Min Ref 91010 BRD Deutsch 10 TESTVALIDIERUNG 1 CONTROL Calibrator 0 Die optische Dichte OD der Negativkontrolle muss lt 0 6fache der OD des Calibrator 2 sein 2 Die OD des Calibrator 2 muss gt 0 2 sein bei 450 nm gt 0 16 bei 450 620 nm 3 Die OD des Calibrator 5 muss gt 1 2 sein 11 AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE QUANTITATIVE ERGEBNISSE Tragen Sie die ODs der Kalibratoren nach Abzug der Blank ODs lt 0 150 auf Millimeterpapier auf Die dazugeh rigen Titer der Probe k nnen durch Extrapolation abgelesen werden HINWEIS F r jeden Testansatz muss eine Eichkurve erstellt werden Falls die ODs irgendeiner Probe oder eines Kalibrators ber 2 0 liegen messen Sie diese nochmals bei 405 nm und multiplizieren Sie den Wert mit 3 Umrechnung der OD in IU ml Die Anti Cytomegalovirus IgG k nnen in EU ml willk rlich festgelegte Einheiten oder IU ml von der WHO vorgeschlagener Anti CMV IgG Standard angegeben werden durch Interpolation der ODs der 6 Calibrators und deren Vergleich in der Eichkurve mit den ODs der Proben EU mL IU mL Calibrator 0 0 0 Calibrator 1 5 0 5 Calibrator 2 10 1 Calibrator 3 50 5 Calibrator 4 100 10 Calibrator 5 200 20 Der Grad der Immunit t kann folgenderma en interpretiert werden Immun wenn die Anti Cytomegalovirus IgG Konzentration gt 12 EU ml oder 1 2 IU ml ist Nichtimmun wenn die Anti Cytomegalovirus IgG Konzentration
32. 122 1984 5 F de Ory et al Serological diagnosis of cytomegalovirus infections comparison of six commercial methods of ELISA Serodiagnosis and Immunotherapy 2 423 1988 No P Dal Monte et al Cytomegalovirus umano Diagnosis 2 67 1990 R Ziegalmaier et al ELISA la Ricerca Clin Lab 10 83 1980 CE jelz s Eur pai direkt va 98 79 CE az in vitro diagnosztikai c l orvosi eszk z kr l M M Csak in vitro diagnosztikai felhaszn l sra lt S Gy rt T rol si h m rs kleti hat rok L sd a haszn lati utas t st E E ud Bio Rad 3 boulevard Raymond Poincar 92430 Marnes la Coquette France Tel 133 0 1 47 95 60 00 Fax 133 0 1 47 41 91 33 C 12 2004
33. 91010 BRD Italiano 15 PRECISIONE Tab 2 Precisione all interno della seduta eseguita su 3 lotti diversi Cut Off Batch Batch Batch n 21 N 104 N 105 N 106 O D 0 453 0 374 0 433 CV 4 62 4 73 4 07 Tab 3 Precisione tra sedute EU ml Campione I run Il run run CV n 1 12 6 17 5 17 6 18 n 2 78 5 87 5 96 3 10 16 GUIDA DEI PROBLEMI DI UTILIZZO PROBLEMA POSSIBLI FONTI DI ERRORE AZIONI DA INTRAPRENDERE Seduta invalida tutti negativi Uno o pi reagenti non sono stati aggiunti oppure sono stati aggiunti in ordine errato Controllare nuovamente la procedura Controllare se qualche reagente non stato aggiunto Ripetere il test Piastra non reattiva Controllare il codice sulla busta della piastra vedi istruzioni per l uso punto 4 per il codice corretto Controllare la presenza di umidit nella piastra inutilizzata Il gel di silice deve essere giallo pallido Ripetere il test Seduta invalida tutti positivi Inquinamento del substrato Prelevare una nuova aliquota del substrato Lavaggio inadeguato Assicurarsi del buon funzionamento del lavatore Scarsa precisione Aspirazione inadeguata dei pozzetti Assicurarsi del buon funzionamento del lavatore Aspirazione inadeguata dei pozzetti Assicurarsi del buon funzionamento del lavatore Errore del pipettamento Controllare il funzionament
34. Do not blow out from microplates Enzyme immunoassays can occasionally exhibit an edge effect which must be minimised by increasing the humidity during incubation steps Plates must be covered with their covers and incubated at 37 C either in a water bath with a rack or float to support the plates if necessary or in an incubator Alternatively plates can be incubated in an approved analyser See the appropriate operating manual for further details CO incubators must not be used Ensure that the bottom of the plate is clean and dry and that no bubbles are present on the surface of the liquid before reading the plate Use of highly hemolyzed samples incompletely clotted sera or samples with microbial contamination may give rise to erroneous results For each instrument used read the manufacturer s instructions manual carefully to obtain additional information on the following points installation and particular requisites operating principles instructions precautions and risks manufacturer s specifications and instrument performance servicing and maintenance Ref 91010 BRD English 7 TYPE AND STORAGE OF SAMPLE The sample is composed of serum collected in the normal manner from the vein and handled with all precautions dictated by good laboratory practice The fresh serum may be stored for 4 days at 2 8 C or frozen for longer periods at 20 C and can be thawed a maximum of 3 times Defrosted samples must be shak
35. II siero fresco pu essere mantenuto per 4 giorni a 2 87C per periodi maggiori a 207C pu subire fino ad un massimo di 3 scongelamenti I campioni scongelati devono essere agitati con cura prima del dosaggio La gualita del campione pu essere seriamente influenzata dalla contaminazione microbica che pu portare a risultati erronei Campioni fortemente lipemici itterici emolizzati o inquinati non dovrebbero essere utilizzati campioni possono essere chiarificati mediante filtrazione 0 45 um o centrifugazione II test non applicabile a plasma umano 8 PROCEDIMENTO Tecnica manuale Preparare le strip necessarie Preparare il tampone di lavaggio diluendo il Rinsing Buffer 10x 100 mL 900 mL H20 Preparare il volume richiesto di diluente dei campioni aggiungendo una parte del Diluent 50x a 49 parti del tampone di lavaggio diluito esempio 2 mL 98 mL Diluire i campioni 1 101 dispensando 10 uL di siero in 1 mL di diluente distribuire 100 uL di ciascun campione diluito per pozzetto preferibile effettuare l analisi in duplicato In uno strip porre i calibratori possibilmente in duplicato 100 uL per pozzetto Prevedere un pozzetto libero per effettuare il bianco usando solo 100 pL del substrato Si coprono i pozzetti con la pellicola protettiva e si pone ad incubare per 45 min a 37 C Dopo 4 lavaggi della durata di 30 secondi ciascuno 300 pl si aggiungono 100 uL del coniugato per ciascun pozzetto e si po
36. Je d le it aby pracovn postup prebiehal pri spr vnej teplote Skontrolujte i v termostate nie je teplota ni ia ne 35 C alebo vy ia ne 39 C S ok so stripmi ponechajte pred otvoren m najmenej 30 min t pri izbovej teplote Nepou vajte reagencie po d tume exspir cie Je nutn zabr ni mikrobiologickej kontamin cii reagenci ktor by mohla skr ti ivotnos v robku a vies ku chybn m v sledkom Neupravujte pracovn postup a nepou vajte reagencie in ch v robcov alebo reagencie z inej ar e pokia nie je pri danej reagencii uveden e je zamenite n medzi r znymi ar ami Neskracujte iadnu predp san dobu inkub cie V etko laborat rne sklo ktor bude pou it na reagencie mus by d kladne umyt 2 M kyselinou chlorovod kovou a potom vypl chnut destilovanou vodou alebo kvalitnou deionizovanou vodou V priebehu uchov vania a po as inkuba n ch krokov nevystavujte reagencie p sobeniu siln ho svetla alebo v parom chl rnanu Jednotliv jamky nesm v priebehu uskuto ovania testu vyschn Dbajte na to aby nedo lo ku kr ovej kontamin cii reagenci Je d le it aby pre r zne reagencie boli vyhraden pipety na v lu n pou itie Dbajte na to aby nedo lo ku kontamin cii alebo preliatiu okraja jamiek konjug tom Neodstra ujte ho z platni ky f kan m Pri enz movej imunoanal ze m e pr le itostne doch dza k okrajov mu efektu ktor je
37. div ch l tek a Prom vac roztok obsahuje detergenty b Konjug t obsahuje fenol c Substr t je kyselina d Kontroly obsahuj jako konzerva n inidlo 0 09 azidu sodn ho kter m e reagovat s m d a olovem v odpadn m potrub za vzniku vysoce v bu n ch azid kov V p pad jejich odlo en do v levky vypl chn te laboratorn potrub velk m mno stv m vody V p pad kontaktu jak koliv reagencie s k nebo o ima omyjte posti enou oblast velk m mno stv m vody Za zen kter nejsou po pou it ur ena k likvidaci mus b t po pou it sterilizov na Up ednost ovanou metodou je autokl vov n po dobu jedn hodiny p i 121 C materi ly ur en k likvidaci mus b t autokl vov ny nebo sp leny Kyselina s rov obsa en v zastavovac m roztoku a kyselina chlorovod kov pou van k myt laboratorn ho skla jsou leptav kyseliny a je nutn s nimi zach zet s n le itou opatrnost V p pad kontaktu s k nebo o ima d kladn omyjte zasa en m sto velk m mno stv m vody Neutralizovan kyseliny a ostatn tekut odpad mus b t dekontaminov ny p id n m dostate n ho mno stv chlornanu sodn ho tak aby kone n koncentrace chlornanu sodn ho inila minim ln 1 0 Pro zaji t n inn dekontaminace je zapot eb aby 1 chlornan sodn p sobil 30 minut V p pad rozlit je nutn potenci ln infek n materi l ihned odstranit abs
38. ho ozna enia p smeno C a slo ar e ktor sl i na identifik ciu vyberte r mik a stripy z f liov ho obalu vlo te nepou it stripy do polyetyl nov ho s ku so silikag lom zo s ku vytla te vzduch a nepriedu ne ho uzavrite pritla en m uz veru CAL KALIBR TORY 5 x 1 6 ml Obsah Narieden udsk s rum obsahuj ce zn me koncentr cie anti CMV IgG protil tok v 0 01 mol l fosf tovom pufri s 1 BSA a 0 09 azidu sodn ho tekut pripraven na pou itie bez al ieho riedenia Hodnoty mo no vyjadri bu v jednotk ch IU ml alebo EU ml vid prevodn tabu ka v kapitole 11 Kalibr tor 2 1 IU ml alebo 10 EU ml odpoved hodnote cut off a m e by pou it v kvalitat vnom teste Kalibr tory maj nasleduj ce hodnoty 0 5 1 5 10 20 IU ml S pripraven titr ciou pod a Proposed International Standard WHO Farba farba kalibr torov je mern relat vnemu titru protil tok CONJ KONJUG T 1 x 16 ml Obsah monoklon lne protil tky ozna en peroxid zou vo fosf tovom pufri obsahuj com 0 05 fenolu a 0 02 Bronidoxu Pripraven na pou itie bez al ieho riedenia CONTROL IgG IgG NEGAT VNA KONTROLA PF93910 1 x 1 6 ml IZAMENITE N MEDZI AR AMI Obsah udsk s rum bez obsahu anti CMV IgG protil tok narieden v 0 01 mol l vo fosf tovom pufri s 1 BSA a 0 09 9 azidu sodn ho tekut pripraven na pou itie bez al ieho ri
39. m k dov m ozna en jsou uvedeny v bod 4 pribalov hoi let ku Zkontrolujte vlhkost nepou it desti ky silikagelov desikant mus b t svetle lut Zopakujte test Neplatn test v echny v sledky pozitivn Kontaminace substr tu Pou ijte novou alikv tn st substr tu Spatn p esnost Nedostate n promyti Ne pln promyt jamek Zkontrolujte zda prom va ka funguje spr vn Zkontrolujte zda prom va ka funguje spr vn Nedostate n ods ti jamek Zkontrolujte zda promyvacka funguje spr vn Chyba pfi pipetov ni Zkontrolujte funkci pipety Prilis pomal napipetovani reagencie Zamezte vyschnut desti ky po prom vac m kroku Reagencie pfidejte ihned Pr tomnost bublin Zamezte vzniku vzduchov ch bublin pri pipetovani Zne i t n optick dr hy Zkontrolujte zda nen zne i t n sv teln zdroj nebo detektor p stroje Ot ete spodn st desti ky m kkou tkaninou Neadekv tn vyv jen barvy Nespr vn doba nebo teplota inkubace Zkontrolujte za zen pro regulaci teploty a m en asu Dodr te p esn doporu en n vod k pou it P id n nespr vn ho objemu substr tu na desti ku Zkontrolujte funkci pipety 17 LITERATURA Viz anglick verze f z Bio Rad 3 boulevard Raymond Poincar 92430 Marnes la Cocugette France Tel 33 0 1
40. placa ver qual o c digo correcto no par grafo 4 do folheto de instru es Verificar se a placa n o usada apresenta humidade o dessecante de s lica gel deve ser de cor amarela clara Repetir o teste S rie n o v lida totalmente positiva Contamina o do substrato Tirar nova al quota do substrato Lavagem inadequada Verificar se o aparelho de lavagem est a funcionar correctamente Fraca precis o Lavagem incompleta dos po os Verificar se o aparelho de lavagem est a funcionar correctamente Aspira o incorrecta dos po os Verificar se o aparelho de lavagem est a funcionar correctamente Erro de pipetagem Verificar o funcionamento da pipeta Adi o de reagente demasiado lenta Evitar deixar secar a placa ap s a opera o de lavagem Adicionar imediatamente os reagentes Presen a de bolhas Evitar a forma o de bolhas durante a pipetagem Passagem ptica n o limpa Verificar se a fonte de luz e o detector do aparelho est o sujos Limpar o fundo da placa com um tecido macio Revela o de cor inadequada Tempos de incuba o ou temperatura incorrectos Verificar os controlos de temperatura e tempo Respeitar as instru es de utiliza o recomendadas Volume incorrecto de substrato adicionado placa Verificar o funcionamento da pipeta Portugu s 17 REFER NCIAS BIBLIOGR FICAS 1 2 ND G B
41. 000 Laveur de microplaques recommand capable de dispenser des volumes de 225 375 pl Eau distill e Verrerie normale de laboratoire prouvette pipette etc Micropipette capable de pr lever 10 100 1000 ul de solution Gants a usage unique Minuteur Solution hypochlorure de sodium 5 R cipients pour les mat riaux potentiellement infectieux Papier absorbant 5 CONSERVATION ET STABILITE DES REACTIFS Conserver les r actifs a 2 8 C La date de p remption est imprim e sur chaque flacon et sur tiguette du coffret Stabilit des r actifs apr s ouverture et ou reconstitution REACTIF STABILITE MICROPLAQUE 6 semaines a 2 8 C dans le sachet en poly thyl ne CALIBRATEURS 6 semaines a 2 8 C apr s ouverture CONJUGUE 6 semaines a 2 8 C apr s ouverture SUBSTRAT jusqu a la date de p remption a 2 8 C 1 semaine 15 30 C obscurit DILUANT dilu 2 semaines 2 8 C TAMPON DE LAVAGE dilu 2 semaines 2 8 C 5 jours 1530 C SOLUTION D ARRET jusqu a la date de p remption 2 8 C Ref 91010 BRD Fran ais 6 PRECAUTIONS D UTILISATION TOUS LES REACTIFS SONT DESTINES A L USAGE EXCLUSIF DU DIAGNOSTI IN VITRO ATTENTION Ce coffret contient des mat riaux d origine humaine Les r actifs contenant du mat riel d origine humaine ont t contr l s et trouv s n gatifs en anticorps anti VIH 1 VIH 2 anti VHC et en antig ne HBs selon la m thode
42. 02 Beredning Spad nskad volym 1 50 i tvattbufferten f r att erhalla ett bruksfardigt utsp dningsmedel SUBS TMB SUBSTRAT PF93619 12 ml F rdigt att anv nda UTBYTBAR MELLAN PARTIER Inneh ll Tetrametylbensidin 0 26 mg ml och v teperoxid 0 01 stabiliserat i citratbuffert 0 05 mol l pH 3 8 H SO 0 3 STOPPL SNING PF93602 1 x 16 ml UTBYTBAR MELLAN PARTIER H2SO 0 3 mol l i bruksf rdig l sning SJ LVH FTANDE FOLIE 2 POLYETENP SE 1 N DV NDIGT MEN EJ BIFOGAT MATERIAL Inkubator 37 C Avl sare f r mikroplattor vaglangd 450 eller 450 620 och 405 nm med linjaritet upp till OD gt 2 000 Tv ttanordning f r mikroplattor rekommenderas f r f rdelning av 225 375 ul Destillerat eller avjoniserat vatten Normala laboratorieglasvaror m tglas provr r osv Mikropipetter for exakta volymer 10 100 och 1 000 ul Eng ngshandskar Timer Natriumhypokloritl sning 5 Beh llare f r potentiellt smittfarligt material Absorberande pappersduk 5 REAGENSF RVARING OCH H LLBARHET Reagenserna m ste f rvaras vid 2 8 C Utg ngsdatumet anges angivet p f rpackningens etikett och p varje komponent i f rpackningen Reagenserna har begr nsad h llbarhet sedan de ppnats och eller beretts REAGENS H LLBARHET Mikroplatta 6 veckor vid 2 8 C polyetenp se Kalibratorer 6 veckor vid 2 8 C Konjugat 6 veckor vid
43. 1 0 Det kan v re n dvendigt at uds tte materialet i 30 minutter for 1 natriumhypochlorit for at sikre en effektiv dekontaminering Hvis der spildes potentielt inficeret materiale skal dette straks fjernes med sugende papir og det kontaminerede omr de bor torres efter med f eks 1 0 natriumhypochlorit for arbejdet forts ttes Natriumhypochlorit bor ikke anvendes pa syreholdige veesker der spildes medmindre det omr de der er spildt p forst torres grundigt De materialer der bruges til rengoring af spildte veesker heriblandt ogsa handsker skal bortskaffes som potentielt biologisk farligt materiale Materialer der indeholder natriumhypochlorit ma ikke autoklaveres Forholdsregler ved analyse 1 ONDA 10 11 12 Lad alle reagenser og prover stabilisere sig ved stuetemperatur 18 til 30 C for de anvendes Set reagenserne til opbevaring ved den anbefalede opbevaringstemperatur straks efter brug Det er vigtigt at arbejde ved de korrekte temperaturer Kontroller at termostaten ikke viser under 35 C eller over 39 C Abn f rst konvolutten med stripsene efter mindst 30 minutter ved stuetemperatur Brug ikke reagenserne efter den angivne udl bsdato Mikrobiologisk kontaminering af reagenser bor undgas da dette kan reducere produktets levetid og fremkalde fejlagtige resultater Undga at aendre testproceduren eller bruge reagenser fra andre producenter eller andre partier medmindre reagenset er anfgrt som anvendeligt med
44. 2 8 C Substrat fram till utg ngsdatumet vid 2 8 C 1 vecka vid 15 30 C f rvaras m rkt Provutsp dningsmedel f rdigt att anv nda 2 veckor vid 2 8 C Tv ttbuffert 2 veckor i 2 8 C 5 dagar vid 15 30 C Stoppl sning fram till utg ngsdatumet vid 2 8 C 6 F RSIKTIGHETS TG RDER ENDAST F R IN VITRO DIAGNOSTISK ANV NDNING Testkitet inneh ller material av humant ursprung som har testats med FDA godk nda metoder och gett negativt svar f r f rekomst av HbsAg och f r anti HIV 1 anti HIV 2 och anti HCV antikroppar Eftersom inget diagnostiskt test med s kerhet kan garantera fr nvaro av smittsamma mnen m ste allt material av humant ursprung hanteras som potentiellt smittsamt Alla normala f rsiktighets tg rder enligt god laboratoriesed ska f ljas n r material av humant ursprung hanteras Svensk H lso och s kerhetsinformation 1 2 Pipettera inte med munnen B r eng ngshandskar och gonskydd nar du hanterar prover och utf r analys Tv tta h nderna noga n r du r klar F ljande reagenser inneh ller laga koncentrationer av skadliga eller irriterande mnen a Tv ttbufferten inneh ller reng ringsmedel b Konjugatet inneh ller fenol c Substratet r surt d Kontrollerna inneh ller 0 09 natriumazid Spola med stora m ngder vatten om kontrollerna h lls ut i avloppet eftersom natriumazid kan reagera med bly och kopparr r och bilda explosiva metallazider Om n gon av reagenserna
45. 2 8 C on t rolva a szavatoss gi ideig 15 30 C on 1 h t s t tben t roljuk Mintah g t Felhaszn l sra k sz 2 8 C on t rolva 2 h t Mos puffer 2 8 C on t rolva 2 het 15 30 C on 5 nap Le ll t oldat 2 8 C on t rolva a szavatoss gi id lej rt ig 6 KEZEL SI S MUNKAV DELMI EL R SOK KIZ R LAG IN VITRO LABORAT RIUMI C LOKRA HASZN LHAT A tesztkit FDA aj nl sok szerint bevizsg lt s HbsAg re anti HIV1 anti HIV2 s anti HCV antitestekre negat vnak tal lt hum n eredet anyagokat is tartalmaz Mivel azonban egyetlen diagnosztikai m dszer sem garant lja t k letesen hogy nincsenek jelen fert z gensek ez rt minden hum n eredet anyagot fert z betegs g k zvet t s re k pes anyagnak kell tekinteni Hum n eredet anyagok kezel sekor minden szok sos laborat riumi v rendszab lyt be kell tartani Eg szs g gyi s biztons gi el r sok 1 2 Ne pipett zzunk sz jjal A reagensek s a mint k kezel sekor viselj nk v d szem veget s eldobhat v d keszty t Munka ut n alaposan mossunk kezet Az al bbi reagensek kis koncentr ci ban k ros vagy irrit l anyagokat tartalmaznak a a mos puffer detergenseket tartalmaz b akonjug t fenolt tartalmaz c a szubsztr t savas k mhat s d a kontrollok tart s t szerk nt 0 09 n trium azidot tartalmaznak amely a v zvezet kek lom vagy r z fal val reakci ba l pve robban svesz lyes
46. 47 95 60 00 Fax 33 0 1 47 41 91 33 Ref 91010 BRD CE 12 2004 Cesky CL IE PLATELIA CMV IgG 96 TESTOV 72680 IMUNOENZYMATICKA METODA NA KVALITATIVNE A KVANTITATIVNE STANOVENIE PROTILATOK TRIEDY IgG PROTI CYTOMEGALOV RUSU V UDSKOM S RE Ref 91010 BRD Slovensky 10 11 12 13 14 16 17 OBSAH POUZITIE KLINICKY VYZNAM PRINCIP TESTU OBSAH S PRAVY A PR PRAVA REAGENCI UCHOV VANIE A STABILITA REAGENCI BEZPE NOSTN OPATRENIA A OCHRANA ZDRAVIA TYP AUCHOV VANIE VZORIEK PRACOVN POSTUP SCH MA PRACOVN HO POSTUPU VALID CIA TESTU INTERPRET CIA V SLEDKOV OBMEDZENIA TESTU ANALYTICK PECIFICITA DIAGNOSTICK CITLIVOS A PECIFICITA PRESNOS POM CKA NA RIE ENIE PROBL MOV LITERAT RA Ref 91010 BRD Slovensky 1 POUZITIE IMUNOENZYMATICKA METODA NA KVALITATIVNE A KVANTITATIVNE STANOVENIE PROTILATOK TRIEDY IgG PROTI CYTOMEGALOVIRUSU V LUDSKOM SERE 2 KLINICKY VYZNAM Cytomegalovirus je herpes v rus pren an bl zkym kontaktom medzi u mi Vo v ine pr padov nie s zjavn iadne pr znaky infekcie V rus je v ak ve mi nebezpe n a m e by fat lny u imunodeprimovan ch pacientov S ronegat vne eny ktor sa infikuj v priebehu tehotenstva m u pren a ochorenie na plod V95 pr padov prebehne tento proces bez pr znakov u niektor ch novorodencov sa v ak m e objavi lta ka hepatosplenomeg lia a retard cia
47. 620 nm 3 OD vaerdien for Kalibrator 5 skal v re over 1 2 Dansk 11 FORTOLKNING AF RESULTATER KVANTITATIVE RESULTATER Angiv OD veerdien for kalibratorerne i en graf efter at have trukket OD vaerdien fra blindproven Den tilsvarende titer fra testpraven kan opn s ved ekstrapolation BEM ERK Der skal udregnes en standardkurve for hver kgrsel Hvis OD vaerdien for en prove eller kalibrator er over 2 0 skal afleesningen foretages ved 405 nm og veerdien ganges med 3 Konvertering af OD vaerdien til enheder ml Anti Cytomegalovirus IgG kan udtrykkes i EU ml arbitrare enheder eller i IU ml foresl et anti CMV IgG WHO standard ved ekstrapolation af resultaterne af de 6 kalibratorer og sammenligning af provens OD veerdi med den opn ede kurve Tabel 1 Kalibratorvaerdier i arbitreere og internationale enheder EU ml IU ml Kalibrator 0 0 0 Kalibrator 1 5 0 5 Kalibrator 2 10 1 Kalibrator 3 50 5 Kalibrator 4 100 10 Kalibrator 5 200 20 Graden af immunitet kan fortolkes som falger IMMUN Hvis koncentrationen af anti Cytomegalovirus IgG i proven er gt 12 EU ml eller 1 2 IU ml IKKE IMMUN Hvis koncentrationen af anti Cytomegalovirus er lt 8 EU ml eller lt 0 8 IU ml TVIVLSOM Hvis resultatet ligger mellem de to v rdier dette tilf lde anbefales det at teste igen i en dobbeltkorsel KVALITATIVE RESULTATER Beregn forholdet mellem provens OD v rdi og v rdien for cut off proven Kalibrator 2 Pr ven betragtes som
48. A mint t az al bbiak szerint soroljuk be Pozit v ha az ar ny gt 1 2 K tes ha 0 8 c OD c 1 2 Negat v ha az ar ny c 0 8 Ha az eredm ny k tes ism telj k meg a m r st Ha m g ezut n is k tes akkor vegy nk jabb v rmint t 12 AZ ELJ R S KORL TAI A fert z s akut st dium ban vett sz rumminta negat vnak bizonyulhat ezzel a teszttel mivel ekkor m g csak IgM ellenanyag van jelen Ellent tben az anti CMV IgM mel az anti CMV IgG meghat roz sn l a vizsg lati minta h inaktiv l sa nem okoz hamis eredm nyt Fi A Cytomegalov rus elleni IgM szintet Platelia CMV IgM tesztkittel hat rozzuk meg Egy m sik lehet s g ha 8 14 nappal k s bb m sodik v rmint t is vesz nk ezt az els mint val p rhuzamosan lem rj k s meg llap tjuk az IgG ellenanyag szintj nek n veked s t A vizsg lat eredm ny t a k rel zm nnyel s egy b diagnosztikai elj r sok eredm nyeivel sszevetve kell felhaszn lni 13 ANALITIKAI SPECIFICIT S 23 Rubeola Epstein Barr Herpes simplex kanyar vagy mumpsz elleni IgG ellenanyagot tartalmaz CMV negat v minta vizsg lata sor n a fenti ellenanyagok egyike sem befoly solta az eredm nyt 14 DIAGNOSZTIKAI RZ KENYS G S SPECIFICIT S Egy k rh zi laborat riumban lefolytatott klinikai vizsg lat sor n 264 k zt k 47 negat v s 217 pozit v mint t vizsg ltak egy m sik kereskedelmi forgalomban kaphat enzim immunassay vel sszehasonl t
49. BETWEEN LOTS Contents Phosphate buffered saline concentrated 10 times contains Brij 0 5 Preparation dilute the required volume 1 10 with distilled water in order to obtain the washing buffer ready for use If crystals are present they should be dissolved at 37 C before dilution SAMP DIL 50x DILUENT 50X PF93601 1 x 4 5 mL For dilution of serum samples INTERCHANGEABLE BETWEEN LOTS Contents Proteic solution concentrated 50 times with added phenol 0 05 and Bronidox 0 02 Preparation Dilute the required volume 1 50 in the washing buffer to obtain the diluent ready for use SUBS TMB SUBSTRATE PF93619 12 mL Ready for use INTERCHANGEABLE BETWEEN LOTS Contents Tetramethylbenzidine 0 26 mg mL and hydrogen peroxide 0 01 stabilised in citrate buffer 0 05 mol L pH 3 8 H SO 0 3 M STOP SOLUTION PF93602 1 x 16 mL INTERCHANGEABLE BETWEEN LOTS H2SO 0 3 mol L in solution ready for use ADHESIVE FILMS 2 POLYTHENE BAG 1 MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED Incubator at 37 C Microplate reader wave length 450 or 450 620 nm and 405 nm with linearity up to OD gt 2000 Microplate washer preferable able to dispense volumes ranging between 225 375 ul Distilled or deionized water Normal laboratory glassware cylinders test tubes etc Micropipettes for the accurate collection of 10 100 1000 ul solution Disposable gloves Timer
50. DVENDIGE MATERIALER DER IKKE MEDF LGER Inkubator ved 37 C Mikropladel ser b lgel ngde 450 eller 450 620 nm og 405 nm med linearitet op til OD gt 2000 Mikropladevasker anbefales som kan fordele maengder p mellem 225 375 ul Destilleret eller deioniseret vand Normalt laboratorieglasudstyr Cylindere testrgr osv Mikropipetter til udtagning af 10 100 1000 ul oplasning Engangshandsker Timer Natriumhypochloritoplosning 5 Beholdere til pr cis af potentielt smittefarligt materiale Sugende papir 5 OPBEVARING OG STABILITET AF REAGENSER Reagenser skal opbevares ved 2 til 8 C Udigbsdatoen er trykt p hver komponent og p skens etiket Reagenserne har en begrenset stabilitet efter bning og eller klargoring REAGENS BETINGELSER Mikroplade 6 uger ved 2 til 8 C plastpose Kalibratorer 6 uger ved 2 til 8 C Konjugat 6 uger ved 2 til 8 C Substrat op til udlobsdatoen ved 2 til 8 C 1 uge ved 15 30 p et m rkt sted Provefortynder brugsklar 2 uger ved 2 til 8 C Rensebuffer 2 uger ved 2 til 8 C 5 dage ved 15 30 C Stopoplasning op til udlabsdatoen ved 2 til 8 C 6 FORHOLDSREGLER KUN TIL IN VITRO DIAGNOSTICERING Dette seet indeholder materiale af human oprindelse som er testet negativt vha FDA godkendte metoder for forekomsten af HbsAg og for anti HIV 1 anti HIV 2 og anti HCV antistoffer Da ingen diagnosticeringstest kan give fuld garanti for fraveer af smitsomme stoff
51. F RSIKTIGHETS TG RDER PROVTYPER OCH F RVARING TESTPROCEDUR SCHEMA OVER TESTPROCEDUR TESTVALIDERING UTVARDERING AV RESULTATEN TESTETS BEGRANSNINGAR ANALYTISK SPECIFICITET DIAGNOSTISK KANSLIGHET OCH SPECIFICITET PRECISION FELSOKNING REFERENSER Svensk 1 ANV NDNINGSOMR DE IMMUNOENZYMATISK METOD F R KVALITATIV OCH KVANTITATIV BEST MNING AV IgG ANTIKROPPAR MOT CYTOMEGALOVIRUS I HUMANT SERUM 2 VERSIKT AV TEST Cytomegalovirus r ett herpesvirus som verf rs vid n ra kontakt mellan m nniskor de flesta fall visas inga symtom pa infektion Viruset ar emellertid mycket farligt och kan vara livshotande hos patienter med nedsatt immunf rsvar Serumnegativa kvinnliga patienter som infekteras under graviditeten kan verf ra sjukdomen till fostret 95 av fallen intr ffar det utan symtom men vissa nyf dda far gulsot hepatosplenomegali och f rsenad psykomotorisk utveckling D rf r r det mycket viktigt att bestamma patientens immunstatus och detektera eventuell serokonversion En signifikant 6kning av anti cytomegalovirus IgG titern tyder pa en nyligen f rv rvad infektion eller ateraktivering av en latent infektion 3 TESTPRINCIP Testet baseras pa ELISA teknik enzymlankade immunologiska matmetoder 1 7 Antigenet som bestar av delvis renat och inaktiverat cytomegalovirus binds till den fasta fasen remsor med 8 brunnar De specifika immunoglobulinerna binds till antigenet genom inkubering med utspatt hum
52. P Dal Monte et al Cytomegalovirus umano Diagnosis 2 67 1990 7 R Ziegalmaier et al ELISA la Ricerca Clin Lab 10 83 1980 Ref 91010 BRD Italiano Marguage CE Directive europ enne 98 79 CE relative aux dispositifs m dicaux de diagnostic in vitro C Marcado CE Directiva europea 98 79 CE sobre productos sanitarios para diagn stico in vitro Marchiatura CE Direttiva europea 98 79 CE relativa ai dispositivi medico diagnostici in vitro Pour diagnostic in vitro IVD Para diagn stico in vitro Per uso diagnostico in vitro Fabricant Fabricante Produttore Consulter le mode d emploi Consulte la instrucci n para el uso Consultare le istruzioni per uso Limites de temp ratures de stockage Temperatura limite Limiti di temperatura di conservazione The other languages which are required in conformity to the European Directive can be obtained from your local Bio Rad agent Les autres langues requises par la Directive Europ enne sont disponibles aupr s de votre repr sentant Bio Rad local Los otros idiomas que se requiren para la conformidad de la Directiva Europea puede ser obtenida en su oficina local Biorad Die anderen Sprachen die in bereinstimmung mit der europ ischen IVD Direktive ben tigt werden erhalten Sie ber Ihre lokale Bio Rad Niederlassung Le altre lingue che sono richieste in conformit con le Direttive Europee possono essere
53. Rinsing Buffer 10x 100 mL 900 mL H20 Preparar el volumen requerido de diluyente para las muestras a adiendo 1 parte de Diluent 50x a 49 partes del tamp n de lavado diluido ejemplo 2 mL 98 mL Diluir las muestras 1 101 poniendo 10 uL de suero en 1 mL de diluyente dispensar 100 uL de cada muestra diluida para cada pocillo se recomienda efectuar una doble prueba Colocar los calibradores SIN DILUIR en una tira preferiblemente por duplicado 100 uL para cada pocillo Dejar un pocillo libre para efectuar el blanco utilizando s lo 100 uL de la mezcla substrato Cubrir los pocillos con la cinta protectora e incubar 45 minutos a 37 C Lavar 4 veces dejando la soluci n de lavado en el pocillo 30 segundos cada ciclo 300 ul A adir 100 pL de conjugado a cada pocillo e incubar de nuevo 45 minutos a 37 C cubriendo los pozos con la cinta protectora Lavar la placa otra vez 4 veces como se describi anteriormente Finalmente distribuir el Substrato 100 uL pozo Despu s de 15 minutos a temperatura ambiente parar la reacci n enzim tica con 100 uL de Soluci n Bloqueante Leer la Absorbancia DO a 450 nm o 450 620 nm dentro de 30 min Leer otra vez a 405 nm si est n OD superiores a 2 000 9 Procedimiento de la prueba para CYTOMEGALOVIRUS IgG M todo Manual STEP 1 Poner 100 uL de la muestra diluida calibradores en los pocillos Incubar 45 min a 37 C Lavar 4 veces 300 ul STEP 2 A adir 100 uL de conjugado a
54. Sodium Hypochlorite solution 5 Containers for collection of potentially infectious materials Absorbent tissue 5 STORAGE AND STABILITY OF REAGENTS Reagents must be stored at 2 8 C The expiry date is printed on each component and on the box label Reagents have a limited stability after opening and or preparation REAGENT CONDITIONS Microplate 6 weeks at 2 8 C polythene bag Calibrators 6 weeks at 2 8 C Conjugate 6 weeks at 2 8 C Substrate up to the expiry date at 2 8 C 1 week at 15 30 C store in the dark Sample Diluent ready for use 2 weeks at 2 8 C Rinsing Buffer 2 weeks at 2 8 C 5 days at 15 30 C Stop Solution up to the expiry date at 2 8 C 6 PRECAUTIONS FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE ONLY This kit contains materials of human origin which have been tested and gave a negative response by FDA approved methods for the presence of HbsAg and for anti HIV 1 anti HIV 2 and anti HCV antibodies As no diagnostic test can offer a complete guarantee regarding the absence of infective agents all material of human origin must be handled as potentially infectious All precautions normally adopted in laboratory practice should be followed when handling material of human origin Ref 91010 BRD English Health and Safety Information 1 2 Do not pipette by mouth Wear disposable gloves and eye protection while handling specimens and performing the assay Wash hands thoroughly when finished The following reagents
55. Wisdom Enzyme Immunoassay Clin Chem 22 1243 1976 H O Kangro Cytomegalovirus serology does it give the answer Serodiagnosis and Immunotherapy 1 91 1987 Grint P C A et al Screening tests for antibodies to cytomegalovirus an evaluation of five commercial products J Clin Pathol 38 1059 1985 M Musiani et al Rapid detection of antibodies against cytomegalovirus induced immediate early and early antigens by an enzyme linked immunosorbent assay J Clin Pathol 37 122 1984 F de Ory et al Serological diagnosis of cytomegalovirus infections comparison of six commercial methods of ELISA Serodiagnosis and Immunotherapy 2 423 1988 P Dal Monte et al Cytomegalovirus umano Diagnosis 2 67 1990 R Ziegalmaier et al ELISA la Ricerca Clin Lab 10 83 1980 R Ziegalmaier et al ELISA la Ricerca Clin Lab 10 83 1980 Portugu s C 4 Directiva europeia 98 79 CE relativa aos dispositivos m dicos de diagn stico in vitro Para uso em diagn stico in vitro Fabricante Consulte o folheto informativo X Limites de temperatura de armazenamento The other languages which are required in conformity to the European Directive can be obtained from your local Bio Rad agent Les autres langues requises par la Directive Europ enne sont disponibles aupres de votre repr sentant Bio Rad local Los otros idiomas que se requiren para la confo
56. de Substrato em cada poco Incubar durante 15 min temperatura ambiente PASSO 4 Adicionar 100 ul de Solu o de Paragem Proceder a leitura da absorv ncia a 450 nm no prazo de 30 min Portugu s 10 VALIDAC O DO TESTE 1 CONTROL Calibrador 0 a D O do controlo negativo deve ser lt 0 6 vezes a D O do Calibrador 2 2 AD O do Calibrador 2 deve ser gt 0 2 a 450 nm gt 0 16 a 450 620 nm 3 A D O do Calibrador 5 deve ser superior a 1 2 11 INTERPRETAC O DOS RESULTADOS RESULTADOS QUANTITATIVOS Registar a D O dos calibradores num gr fico depois de subtrair a D O do elemento vazio O t tulo correspondente da amostra de teste pode ser obtido por extrapolac o NOTA necess rio efectuar uma curva standard para cada execuc o Se a D O de qualquer amostra ou calibrador se situar acima de 2 0 efectuar a leitura a 405 nm e multiplicar o valor por 3 Convers o da D O em unidades ml O anti citomegalov rus IgG pode ser expresso em EU ml unidades arbitr rias ou em IU ml anti CMV IgG standard proposto pela OMS extrapolando os resultados dos 6 calibradores e comparando a D O da amostra com a curva obtida Quadro 1 Valores dos Calibradores em unidades arbitr rias e unidades internacionais EU ml IU ml Calibrador 0 0 0 Calibrador 1 5 0 5 Calibrador 2 10 1 Calibrador 3 50 5 Calibrador 4 100 10 Calibrador 5 200 20 O grau de imunidade pode ser interpretado da seguinte forma IMUNE guando o t tul
57. forskellige partier Afkort ikke de anbefalede inkubationstider Glas der bruges med reagenserne bor vaskes grundigt med 2M saltsyre og derefter skylles med destilleret eller deioniseret vand af hgj kvalitet Uds t ikke reagenserne for kraftigt lys eller hypochlorit dampe under opbevaring eller inkubation Brondene ma ikke udtgrre under analyseproceduren Veer omhyggelig med at undg krydskontaminering af reagenser Brug en ny pipette for hver reagens Udvis forsigtighed s konjugatet ikke rgrer ved eller sprgjter ud p brandens kant Undg blow out fra mikropladerne Enzymimmunanalyser kan fra tid til anden udvise en edge effect kanteffekt som skal minimeres ved at ge fugtigheden i l bet af inkubationstrinnene Pladerne skal v re d kket med l g og skal inkuberes ved 37 C enten i et vandbad med stativ eller en flydende holder for at stotte pladerne hvis det er ngdvendigt eller i en inkubator Pladerne kan ogsa inkuberes i et godkendt analyseinstrument Se den p g ldende betjeningsvejledning for at fa yderligere oplysninger Der ma ikke anvendes CO inkubatorer Kontroller at bunden af pladen er ren og tor og at der ikke er bobler p overfladen af v sken for afleesning af pladen Brug af steerkt heemolyserede prover ikke fuldsteendigt koagulerede sera eller prover med mikrobiel kontamination kan give fejlagtige resultater Det er vigtigt at l se producentens brugervejledning grundigt hver gang et instrument tages i brug f
58. i en inkubator Plattorna kan ocksa inkuberas ett godk nt analysinstrument respektive anvandarmanual finns mer information CO inkubatorer far inte anv ndas F rs kra dig om att plattans botten r ren och torr och att inga bubblor f rekommer p v tskeytan innan plattan l ses av Anv ndning av starkt hemolyserade prover ofullst ndigt koagulerat serum eller prover som r mikrobiellt kontaminerade kan ge felaktiga resultat L s noggrant tillverkarens anvisningar f r instrumentet f r att f mer information om f ljande Installation och s rskilda krav Driftsprinciper instruktioner f reskrifter och risker Tillverkarens specifikationer och instrumentets funktion Service och underhall Svensk 7 PROVTYPER OCH F RVARING Provet best r av serum som tagits p normalt s tt fr n en ven och hanterats enligt god laboratoriesed F rskt serum h ller 4 dagar vid 2 8 C Det kan frysas under l ngre perioder i 20 C och tinas h gst 3 g nger Tinade prover m ste skakas f rsiktigt innan de anv nds Provets kvalitet kan p verkas allvarligt av mikrobiell kontaminering vilket leder till felaktiga resultat Starkt lipemiska ikteriska eller kontaminerade prover ska undvikas Om ett nytt prov inte kan erh llas ska s dana prover renas genom filtrering 0 45 um eller centrifugering Human plasma f r inte anv ndas i testet 8 TESTPROCEDUR Manuell metod F rbered nskat antal remsor Bere
59. iu dobu pri 20 C pri om m e by zmrazen a rozmrazen maxim lne 3x Rozmrazen vzorky je nutn pred pou it m d kladne pretrepa Kvalitu vzoriek m e v znamne ovplyvni mikrobi lna kontamin cia ktor m e sp sobi chybn v sledky Nesm sa pou va silno lipemick ikterick alebo kontaminovan vzorky Ak nie je mo n z ska nov vzorku musia by tak vzorky vy ren filtr ciou 0 45 um alebo centrifug ciou Test nie je mo n robi s udskou plazmou 8 PRACOVN POSTUP Manu lna technika Pripravte si po adovan po et stripov Pripravte prem vac roztok o pracovnej koncentr cii narieden m 10x koncentrovan ho prem vacieho roztoku 100 ml 900 ml H20 Pripravte po adovan riediaci roztok na vzorky zmie an m 1 dielu 50x koncentrovan ho riediaceho roztoku a 49 dielov narieden ho prem vacieho roztoku pr klad 2 ml 98 ml narieden ho prem vacieho roztoku Narie te vzorky v pomere 1 101 pridan m 10 ul s ra do 1 ml riediaceho roztoku Do jednotliv ch jamiek napipetujte po 100 ul z ka d ho riedenia vzorky doporu uje sa vzorky testova dvojmo Do jedn ho stripu napipetujte pokia mo no dvojmo NERIEDEN kalibr tory 100 ul do ka dej jamky Nechajte jednu jamku pr zdnu na slep pokus tvoren 100 pl substr tov ho roztoku Jamky zakryte ochrannou f liou a inkubujte 45 min t pri 37 C Premyte tyri kr t po dobu 30 sek nd 300 ul napipetujt
60. kommer i kontakt med huden eller gonen ska omr det tv ttas mycket noga med vatten Utrustning som inte r eng ngsutrustning ska steriliseras efter anv ndning Autoklav 1 timme vid 121 C r den metod som rekommenderas eng ngsutrustning ska autoklaveras eller f rbr nnas Svavelsyra som kr vs f r stoppl sning och saltsyra som anv nds vid tv ttning av glasvaror ar fr tande och ska hanteras varsamt Tv tta noggrant med vatten om de kommer i kontakt med huden eller gonen Neutraliserad syra och annat v tskeavfall ska dekontamineras genom tillsats av natriumhypoklorit i s dan m ngd att en slutlig koncentration p minst 1 0 erh lls En effektiv dekontaminering kan kr va 30 minuters exponering f r 1 procentig natriumhypoklorit Utspillt material som ar potentiellt smittfarligt ska omedelbart avl gsnas med en absorberande pappershandduk och omr det d refter torkas av med exempelvis 1 procentig natriumhypoklorit Natriumhypoklorit far inte anvandas pa spill som inneh ller syra om inte omr det f rst torkas torrt Material som anv nds f r upptorkning av spill inklusive handskar ska hanteras som potentiellt smittfarligt avfall Material som inneh ller natriumhypoklorit f r inte autoklaveras Analytiska f rsiktighets tg rder 1 10 11 12 L t reagenserna och proverna uppna rumstemperatur 18 30 C f re anv ndning Stall tillbaka reagenserna i rekommenderad f rvaringstemperatur direkt efter anv ndni
61. langsom tilfojelse af Undga at torre pladen efter vasketrinnet reagenser Tilsaet straks reagenser Forekomst af bobler Undga luftbobler under pipettering Optisk bane ikke ren Kontroller om der er snavs pa udstyrets lyskilde og detektor Tor bunden af pladen med en blgd klud Utilstraekkelig farveudvikling Forkerte inkubationstider eller temperaturer Kontroller temperaturindstilling og tidsmonitorering Se den anbefalede brugsvejledning Utilstreekkelig maengde substrat tilsat pladen Kontroller pipettefunktionen Dansk 17 REFERENCER 1 2 3 No G B Wisdom Enzyme Immunoassay Clin Chem 22 1243 1976 H O Kangro Cytomegalovirus serology does it give the answer Serodiagnosis and Immunotherapy 1 91 1987 Grint P C A et al Screening tests for antibodies to cytomegalovirus an evaluation of five commercial products J Clin Pathol 38 1059 1985 M Musiani et al Rapid detection of antibodies against cytomegalovirus induced immediate early and early antigens by an enzyme linked immunosorbent assay J Clin Pathol 37 122 1984 F de Ory et al Serological diagnosis of cytomegalovirus infections comparison of six commercial methods of ELISA Serodiagnosis and Immunotherapy 2 423 1988 M Musiani et al Cytomegalovirus umano Diagnosis 2 67 1990 R Ziegalmaier et al ELISA la Ricerca Clin Lab 10 83 1980 Dansk C E CE m rkningen
62. lt 8 EU ml oder 0 8 IU ml ist Zweifelhaft Ein Ergebnis zwischen diesen beiden Werten In diesem Falle sollte die Probenbestimmung in Doppelbestimmung wiederholt werden QUALITATIVE ERGEBNISSE Berechnen Sie das Verh ltnis zwischen Extinktionsmittelwert der Probe und dem des Cut Off Calibrator 2 Die Probe ist Positiv gt 1 2 Zweifelhaft 20 des Cut off Negativ lt 0 8 Falls das Ergebnis zweifelhaft ist wiederholen Sie den Test Wiederholen Sie den Test mit einer neuen Probe falls das Ergebnis zweifelhaft bleibt 12 GRENZEN DES VERFAHRENS Eine Serumprobe die in der akuten Phase einer Infektion entnommen wurde wenn nur IgM Antik rper vorhanden sind kann in diesem Test negativ ausfallen Cytomegalovirus IgM Werte sollten mit dem Testsatz Cytomegalovirus IgM bestimmt werden Alternativ k nnen Sie auch nach 8 14 Tagen erneut IgG bestimmen um einen Anstieg zu berpr fen Zur Erstellung der Diagnose sollte die Bestimmung von Cytomegalovirus immer nur in Verbindung mit anderen Laborwerten und klinischen Informationen verwendet werden Die Arbeitsanleitung ist genau zu beachten eine sorgf ltige Arbeitstechnik ist f r korrekte Ergebnisse erforderlich Eine nderung der Testdurchf hrung kann zu falschen Ergebnissen f hren 13 ANALYTISCHE SPEZIFIT T Es wurden 23 Proben gestestet die negative f r CMV waren aber IgG Antik rper gegen Rubella Epstein Barr Herpes Simplex Masern und Mumps enthielten In keinem Fall
63. meio de papel absorvente e a rea contaminada dever ser lavada com por exemplo hipocloreto de s dio 1 0 antes de se prosseguir com a actividade N o aplicar hipocloreto de s dio sobre zonas derramadas com cido antes de secar primeiro toda a rea Os materiais utilizados para a limpeza de derramamentos incluindo as luvas devem ser eliminados em contentor de res duos biol gicos potencialmente perigosos N o esterilizar materiais que contenham hipocloreto de s dio Precau es anal ticas 1 Todos os reagentes e amostras dever o ser estabilizados temperatura ambiente 18 30 C antes de serem usados Imediatamente ap s a utiliza o levar de novo os reagentes temperatura de conserva o recomendada importante trabalhar temperatura correcta O term stato n o dever situar se abaixo de 35 C ou acima de 39 C O envelope contendo as tiras s deve ser aberto depois de pelo menos meia hora temperatura ambiente N o utilizar os reagentes ap s o prazo de validade indicado A contamina o microbiol gica dos reagentes deve ser evitada j que pode reduzir o tempo de vida til do produto e dar origem a resultados err neos N o modificar o Procedimento de Teste ou substituir reagentes de outros fabricantes ou outros lotes a menos que o reagente apresente a indica o de intermut vel N o reduzir qualquer dos tempos de incuba o recomendados Os recipientes em vidro utilizados com os reagentes dever
64. nm et en d duire la valeur de la D O du blanc lt 0 150 Construire un graphique avec ces valeurs On obtient le titre de chaque chantillon en extrapolant les D O NOTE II faut construire une courbe standard pour chaque plaque Si la D O d un s rum ou d un chantillon est sup rieure 2 0 lire la D O 405 nm et multiplier la valeur par 3 Conversion des D O en unit ml Les IgG anti CMV de chaque s rum peuvent tre exprim es en unit s arbitraires UE ml ou en Ul ml proposed anti CMG IgG WHO Standard en extrapolant les valeurs de DO des 6 calibrateurs et en comparant la valeur de D O de l chantillon avec la courbe ainsi obtenue Tableau 1 Valeur des calibrateurs en unit s arbitraires et internationales UE ml Ul ml Calibrateur 0 0 0 Calibrateur 1 5 0 5 Calibrateur 2 10 1 Calibrateur 3 50 5 Calibrateur 4 100 10 Calibrateur 5 200 20 Le niveau immunit peut tre interpr t comme suit IMMUNISE quand la concentration des IgG anti CMV dans l chantillon est gt 12 UE ml ou 1 2 Ul ml NON IMMUNISE quand la concentration des IgG anti CMV est lt 8 UE ml ou lt 0 8 Ul ml DOUTEUX quand la valeur est comprise entre les deux valeurs Dans ce cas il faut retester chantillon en double Ref 91010 BRD Frangais RESULTATS QUALITATIFS Calculer le rapport ratio entre la valeur d absorption de chantillon et celle du seuil Calibrateur 2 L chantillon est consid r comme Posit
65. o ser meticulosamente lavados com cido clor drico 2M e depois enxaguados com gua destilada ou gua desionizada de alta qualidade N o expor os reagentes a uma luz intensa ou a vapores de hipocloreto durante o armazenamento ou durante as opera es de incuba o N o permitir que os po os sequem durante o procedimento de teste Evitar cuidadosamente qualquer contamina o cruzada dos reagentes importante que as pipetas sejam exclusivamente dedicadas ao uso de cada um dos reagentes Evitar tocar ou salpicar o rebordo do po o com conjugado N o tentar eliminar soprando sobre as microplacas Os imunoensaios enzim ticos podem ocasionalmente exibir um efeito de orla que deve ser minimizado aumentando a humidade durante as opera es de incuba o As placas devem ser cobertas com a respectiva tampa e incubadas a 37 C em banho de gua com um suporte ou flutuador para suportar as placas se necess rio ou numa incubadora Em alternativa as placas podem ser incubadas num analisador aprovado Para mais informa es favor consultar o manual de instru es apropriado N o devem ser utilizadas incubadoras de 10 Assegurar que o fundo da placa se apresenta limpo e seco e que n o s o vis veis quaisquer bolhas 11 superficie do liquido antes de proceder a leitura da placa O uso de amostras altamente hemolizadas soros nao completamente coagulados ou amostras com contaminag o microbiana pode dar origem a res
66. of the patient and check for serum conversion A significant increase in the anti Cytomegalovirus IgG titer is indicative of a recent infection or reactivation of a latent infection 3 PRINCIPLE OF THE TEST The test is based on the ELISA technique Enzyme linked Immunosorbent Assay 1 7 The antigen composed of partially purified and inactivated Cytomegalovirus is bound to the solid phase 8 well strips The specific immunoglobulins are bound to the antigen through incubation with dilute human serum After washings to eliminate the proteins which have not reacted incubation is performed with the conjugate composed of human IgG monoclonal antibodies conjugated to horseradish peroxidase The unbound conjugate is eliminated and the peroxidase substrate added The blue colour which develops is proportional to the concentration of specific antibodies present in the serum sample When the enzymatic reaction is interrupted by the addition of a sulphuric acid solution the yellow colour which develops can be easily read using a microplate reader 4 KIT CONTENTS AND REAGENT PREPARATION Reagents are sufficient for 96 determinations Bring to room temperature before use MT PLATE MICROPLATE 12 x 8 wells coated with Cytomegalovirus Use open the package on the opposite side from the code C plus lot number which is useful for identification purposes remove the support and strips to be used from the foil package and place the unuse
67. parer la solution tamponn e de lavage Diluer la solution de lavage concentr e par exemple 100 ml 900 ml d eau distill amp e Pr parer le diluant chantillon Pour un volume de diluant concentr 50X ajouter 49 volumes de tampon de lavage dilu exemple 2 ml dans 98 ml de tampon de lavage dilu Ex cution Diluer les chantillons au 1 1016 en distribuant 10ul de s rum dans 1 ml de diluant Distribuer 100 ul des contr les NON dilu s puis 100 ul de chaque chantillon dilu dans les puits il est conseill d effectuer l analyse en double Utiliser un puits pour effectuer le blanc en ajoutant seulement 100 yl de substrat par puits PROCEDURE QUALITATIVE II est indispensable d avoir au minimum 1 n gatif calibrateur 0 2 cut off calibrateur 2 et 1 contr le positif calibrateur 5 Couvrir les puits avec la feuille de protection Incuber pendant 45 minutes 37 C 2 C Laver 4 fois temps de contact de 30 secondes 300 ul Ajouter 100 ul du conjugu dans chaque puits Couvrir les puits avec la feuille de protection Incuber pendant 45 minutes 37 C 2 C Laver la plaque encore 4 fois comme mentionn pr c demment Distribuer 100 yl de substrat dans chaque puits Incuber 15 minutes temp rature ambiante 18 30 C l obscurit Ajouter 100 ul de solution d arr t Lire la densit optique 450 nm ou 450 620 nm dans les 30 minutes Lire la D O de nouveau 405 nm S il y a des D O sup ri
68. pozzetto con il coniugato Non soffiare sulle micropiastre dosaggi immunoenzimatici possono talvolta presentare un particolare effetto sul bordo edge effect si pu minimizzare tale effetto aumentando l umidit durante le fasi di incubazione Le piastre devono essere coperte con i copripiastre ed incubate a 37 C o in bagnomaria usando un sostegno per le piastre o in incubatore In alternativa le piastre si possono incubare in un analizzatore adatto Per ulteriori dettagli consultare l apposito manuale operativo dello strumento Non si possono utilizzare incubatori a CO2 Prima di leggere la piastra assicurarsi che il fondo della piastra sia pulito ed asciutto e che non ci siano bolle d aria sulla superficie del liquido Pu essere fonte di errori l uso di campioni fortemente emolizzati siero non completamente coagulato o campioni che presentano inquinamento microbico Leggere il manuale operativo relativo a qualsiasi strumento utilizzato ed in particolare con riferimento ai seguenti punti installazione e requisiti particolari principio operativo istruzioni precauzioni rischi specifiche del produttore e performance dello strumento manutenzione e assistenza tecnica Ref 91010 BRD Italiano 7 TIPO DI CAMPIONE E CONSERVAZIONE II tipo di campione amp rappresentato da siero ottenuto da sangue prelevato per normale venipuntura e maneggiato con appropriati accorgimenti come richiesto nelle procedure standard di laboratorio
69. psychomotorick ho v voja Preto je ve mi d le it stanovi imunitn stav pacientky a kontrolova s rokonverziu V razn zv enie titra IgG protil tok proti cytomegalov rusu signalizuje prebiehaj cu infekciu alebo reaktiv ciu latentnej infekcie 3 PRINC P TESTU Test je zalo en na technike ELISA enz mov imunosorb n anal za 1 7 Antig n zlo en z iasto ne purifikovan ho a inaktivovan ho cytomegalov rusu je naviazan na pevn f zu 8 jamkov stripy pecifick imunoglobul ny sa via u k antig nu po as inkub cie s narieden m udsk m s rom Po premyt ktor m sa odstr nia nereaguj ce prote ny sa uskuto uje inkub cia s konjug tom tvoren m monoklon lnou protil tkou proti udsk mu IgG ozna enou chrenovou peroxid zou Nenaviazan konjug t sa odstr ni a prid sa substr t pre peroxid zu Modr sfarbenie ktor sa vyvinie je mern koncentr cii pecifick ch protil tok pr tomn ch vo vzorke s ra Po preru en enzymatickej reakcie pridan m roztoku kyseliny s rovej je mo n lt sfarbenie ktor vznikne ahko vyhodnoti pomocou spektrofotometra na mikrotitra n platni ky 4 OBSAH S PRAVY A PR PRAVA REAGENCI Reagencie posta uj na 96 stanoven Pred pou it m nechajte ust li na izbov teplotu MTPLATE MIKROTITRA N PLATNI KA 12 x 8 jamiek potiahnut ch cytomegalovirusom Pou itie otvorte obal na proti ahlej strane k dov
70. ripetere il prelievo 12 LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA Sieri prelevati durante la fase acuta dell infezione quando sono presenti solamente anticorpi della classe IgM potrebbero risultare negativi con questa tecnica L inattivazione al calore del siero in esame non produce risultati erronei nella determinazione delle IgG anti Cytomegalovirus a differenza di quanto accade nella determinazione delle IgM II livello delle IgM anti Cytomegalovirus dovrebbe essere determinato usando il kit Platelia CMV IgM Alternativamente si analizzer un secondo campione prelevato 8 14 giorni pi tardi per verificare un eventuale aumento delle IgG Il risultato del test deve essere comunque valutato insieme a dati provenienti dalla storia del paziente e o da altre indagini diagnostiche 13 SPECIFICITA ANALITICA Sono stati testati 23 campioni negativi al Cytomegalovirus contenenti anticorpi IgG contro virus quali quello della Rubella Epstein Barr Herpes Simplex Morbillo Parotite In nessun caso la presenza di tali anticorpi influenzava il test 14 SENSIBILITA E SPECIFICITA DIAGNOSTICA In una sperimentazione clinica eseguita in un laboratorio ospedaliero sono stati analizzati 264 campioni di cui 47 risultavano negativi e 217 positivi campioni sono stati analizzati con un altro metodo immunoenzimatico commerciale si trovato un accordo del 100 fra i due metodi Il kit Platelia CMV IgG ha specificit e sensibilit del 100 Ref
71. sans autre dilution Calibrateur 0 Ref 91010 BRD Fran ais WASH BUF 10x TAMPON DE LAVAGE 10X PF93603 1 x 100 ml INTERCHANGEABLE ENTRE LOTS Composition Solution saline tamponn e concentr e 10 fois contient 0 5 de brij Pr paration Diluer au 1 10 avec de eau distill e pour obtenir un tampon de lavage pr t l emploi En pr sence de cristaux chauffer la solution 37 C pour les solubiliser puis r aliser la dilution SAMP DIL 50x DILUANT ECHANTILLON 50X PF93601 1 x 4 5 ml INTERCHANGEABLE ENTRE LOTS Composition Solution prot ique concentr e 50 fois additionn e de 0 05 de ph nol et 0 02 de bronidox Pr paration Diluer au 1 50 dans le tampon de lavage dilu pour obtenir une solution de diluant pr te l emploi SUBS TMB SUBSTRAT PF93619 1 x 12 ml Pr t l emploi INTERCHANGEABLE ENTRE LOTS Composition T tram thylbenzidine 0 26 mg ml et du peroxyde d hydrog ne H202 0 01 stabilis dans un tampon citrate 0 05 mol l pH 3 8 H SO 0 3 M SOLUTION DARRET PF93602 1 x 16 ml INTERCHANGEABLE ENTRE LOTS Composition H SO 0 3 mol l dans une solution pr te l emploi SACHET EN POLYETHYLENE 1 FEUILLES ADHESIVES 2 MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI ncubateur 37 C Lecteur de microplaques longueur d onde 450 ou 450 620 nm et 405 nm avec une lin arit jusqu 2
72. virus es particularmente grave en los pacientes inmunodeprimidos en los cuales puede causar la muerte Las mujeres sueronegativas que contraen esta enfermedad durante el embarazo pueden transmitirla al feto En 95 de los casos esto sucede sin consecuencias pero en los neonatos sintomaticos puede causar ictericia epato esplenomegalia y retraso psicomotor Por esta raz n es importante determinar el titulo del anticuerpo de la paciente y observar la eventual sueroconversi n Un aumento significativo en el titulo de IgG anti Cytomegalovirus sugiere una reci n infecci n o una reactivaci n de una infecci n latente 3 PRINCIPIO DEL METODO El test se basa en la t cnica ELISA Enzyme linked Immunosorbent Assay El antigeno constituido por cytomegalovirus parcialmente purificado e inactivo esta unido a la fase s lida tiras con 8 pocillos Despu s de la incubaci n con suero humano diluido las inmunoglobulinas especificas se unen al antigeno Despu s de varios lavados para eliminar las proteinas que no han reaccionado tiene lugar la incubaci n con el conjugado compuesto de anticuerpos monoclonales humanos IgG marcados con peroxidasa de rafano El conjugado que no se ha unido es eliminado y se a ade el substrato peroxidasa El color azul que se desarrolla es proporcional a la concentraci n de anticuerpos espec ficos presentes en la muestra de suero Cuando la reacci n enzim tica est interrumpida despu s de la adici n de una soluci n
73. 1 5 10 20 IU ml erhalten durch Titration gegen den Proposed International Standard WHO Farbe Die Farbintensit t der Kalibratoren ist proportional zum relativen Antik rpertiter CONJ KONJUGAT 1 x 16 ml Inhalt monoklonale Antik rper gekoppelt mit Peroxidase in Phosphatpuffer mit 0 05 Phenol und 0 02 Bronidox Gebrauchsfertig ohne weitere Verd nnung CONTROL IgG IgG NEGATIVKONTROLLE PF93910 1 x 1 6 ml Chargen untereinander austauschbar Inhalt Humanserum das keine Anti CMV IgG Antik rper enth lt verd nnt mit 0 01 mol l Phosphatpuffer mit 1 BSA und 0 09 Natriumazid fl ssig gebrauchsfertig ohne weitere Verd nnung Calibrator 0 Stabilitat Das Produkt ist ungedffnet bei 2 8 C bis zum angegebenen Verfallsdatum haltbar Ref 91010 BRD Deutsch WASH BUF 10x WASCHPUFFER 10X PF93603 1 x 100 ml Chargen untereinander austauschbar Inhalt Phosphatgepufferte Kochsalzl sung 10fach konzentriert enth lt 0 5 Brij Vorbereitung Verd nnen Sie die ben tigte Menge 1 10 mit destilliertem Wasser um den gebrauchsfertigen Waschpuffer herzustellen Falls Kristalle vorhanden sind sollten Sie vor der Verd nnung bei 37 C gel st werden DILUENT 50X PF93601 PROBENVERD NNUNGSL SUNG 1 x 4 5 ml F r die Verd nnung von Serumproben Chargen untereinander austauschbar Inhalt Proteinl sung 50fach konzentriert mit 0 05 Phenol und 0 02
74. 1 1987 3 Grint P C A et al Screening tests for antibodies to cytomegalovirus an evaluation of five commercial products J Clin Pathol 38 1059 1985 4 M Musiani et al Rapid detection of antibodies against cytomegalovirus induced immediate early and early antigens by an enzyme linked immunosorbent assay J Clin Pathol 37 122 1984 5 F de Ory et al Serological diagnosis of cytomegalovirus infections comparison of six commercial methods of ELISA Serodiagnosis and Immunotherapy 2 423 1988 6 P Dal Monte et al Cytomegalovirus umano Diagnosis 2 67 1990 7 R Ziegalmaier et al ELISA la Ricerca Clin Lab 10 83 1980 Ref 91010 BRD Deutsch CE marking European directive 98 79 CE on in vitro diagnostic medical devices EG Markierung Europ ische Richtlinie 98 79 EG ber In vitro Diagnostika For in vitro diagnostic use In vitro Diagnostikum Manufacturer Hersteller Consult Instruction for use Storage temperature limitation Lagerungstemperatur Siehe Gebrauchsanweisung The other languages which are reguired in conformity to the European Directive can be obtained from your local Bio Rad agent Les autres langues reguises par la Directive Europ enne sont disponibles aupres de votre repr sentant Bio Rad local Los otros idiomas gue se reguiren para la conformidad de la Directiva Europea puede ser obtenida en su oficina local Biorad
75. 3 50 5 Calibrador 4 100 10 Calibrador 5 200 20 El grado de inmunidad puede ser interpretado como sigue INMUNE cuando la concentraci n de IgG Cytomegalovirus en la muestra es gt 12 EU mL o 1 2 IU mL NO INMUNE cuando la concentraci n de IgG anti Cytomegalovirus es lt lt 8 EU mL o lt 0 8 IU mL DUDOSO cuando la concentraci n est entre los dos valores En este caso se aconseja repetir el test por duplicado Si el resultado permanece dudoso recoger otra muestra de sangre despu s de 2 semanas Resultados Cualitativos Calcular la proporci n entre el valor de la D O de la muestra y la del Cut off Calibrador 2 La muestra se considera Positiva cuando la proporci n es gt 1 2 Dudosa gt 0 8 lt 1 2 Negativa cuando la proporci n es lt 0 8 Si el resultado es dudoso repetir el test Si el resultado continua siendo dudoso recoger una nueva muestra de sangre 12 LIMITACIONES Las muestras recogidas la durante la fase aguda de la infecci n cuando est n presentes solamente los anticuerpos IgM podr an resultar negativas con este procedimiento La inactivaci n al calor del suero examinado no produce resultados erroneos en la determinaci n de las IgG anti Cytomegalovirus a diferencia de cuanto pasa con la determinaci n de las IgM el nivel de las IgM anti Cytomegalovirus tendr a que ser determinado usando el kit Platelia CMV IgM Alternativamente se analizar una segunda muestra de suero recogida
76. 4 5 mL INTERCAMBIABILE FRA LOTTI Da utilizzare per la diluizione dei campioni Contenuto Soluzione proteica concentrata 50x con fenolo 0 05 e Bronidox 0 02 Preparazione Diluire il volume richiesto 1 50 nel tampone di lavaggio per avere il diluente pronto all uso SUBS TMB SUBSTRATO PF93619 12 mL Pronto all uso INTERCAMBIABILE FRA LOTTI Contenuto Tetrametilbenzidina 0 26 mg mL ed H20 0 01 stabilizzati in tampone citrato 0 05 mol L pH 3 8 H2SO 0 3 SOLUZIONE BLOCCANTE PF93602 1 x 16 mL INTERCAMBIABILE FRA LOTTI Soluzione di H2SO 0 3 mol L pronta all uso PELLICOLA PROTETTIVA 2 BUSTA DI POLIETILENE 1 ALTRO MATERIALE RICHIESTO MA NON FORNITO Incubatore a 37 C Lettore di micropiastre lunghezza d onda 450 o 450 620 nm e 405 nm con linearit fino ad OD gt 2 000 Lavatore di micropiastre non indispensabile capace di dispensare volumi compresi tra 225 375 pl Acqua distillata o deionizzata Guanti mono uso Contaminuti Soluzione al 5 di sodio ipoclorito Contenitori per la raccolta di materiali potenzialmente infetti Carta assorbente Normale vetreria di laboratorio cilindri provette ecc Micropipette capaci di prelevare accuratamente 10 100 1000 UL di soluzione 5 MODALITA DI CONSERVAZIONE E STABILITA DEI RAGENTI reagenti devono essere conservati a 2 8 C La data di scadenza stampata su ogni componente e sull etiche
77. 6 Wochen bei 2 8 C im Polyethylenbeutel KALIBRATOREN 6 Wochen bei 2 8 C KONTROLLSEREN KONJUGAT 6 Wochen bei 2 8 C SUBSTRAT bis zum Verfallsdatum bei 2 8 C bzw 1 Woche bei 15 30 C im Dunkeln STOPPL SUNG bis zum Verfallsdatum bei 2 8 C DILUENT 2 Woche bei 2 8 C gebrauchsfertig WASCHPUFFER 2 Wochen bei 2 8 C bzw 5 Tage bei 15 30 C 6 WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN NUR ZUR IN VITRO DIAGNOSTIK Achtung Dieser Kit enth lt Bestandteile humanen Ursprungs das mit einer FDA gepr ften Methode f r HbsAg Anti HIV 1 Anti HIV 2 und Anti HCV Antik rper negativ war Da keine Testmethode mit v lliger Sicherheit ausschlie en kann dass Produkte humanen Ursprungs infekti se Agentien enthalten sollten alle Materialien humanen Ursprungs als potentiell infekti s betrachtet werden Alle Materialien sollten gem GLP Gute Laborpraxis behandelt werden Gesundheits und Sicherheitsinformationen 1 Nicht mit dem Mund pipettieren Tragen Sie Einweg Handschuhe und einen Augenschutz w hrend des Umgangs mit Proben und der Testdurchf hrung Waschen Sie sich danach gr ndlich die H nde Ref 91010 BRD Deutsch 2 Die folgenden Reagenzien enthalten geringe Konzentrationen von sch dlichen oder reizenden Substanzen a Der Waschpuffer enth lt Detergenzien b Das Konjugat und die Kontrollen enthalten Phenol c Das Substrat ist eine S ure d Die Kontrollen enthalten 0 09 Natriumazid Natriumazid kann mit Blei
78. 7 Lassen Sie die Wells w hrend der Testdurchf hrung nicht trocken werden 8 Vermeiden Sie Verschleppungen beim Pipettieren Es ist wichtig dass die Pipetten nur f r den alleinigen Gebrauch der verschiedenen Reagenzien eingesetzt werden 9 Das Ber hren oder Bespritzen des Randes der Wells mit Konjugat sollte sorgf ltig vermieden werden Versch tten Sie keine Fl ssigkeit aus den Wells 10 Enzymimmunoassays k nnen gelegentlich einen Edge Effect zeigen der durch eine Steigerung der Luftfeuchtigkeit w hrend der Inkubationsschritte minimiert werden muss Die Platten m ssen mit Film abgedeckt und bei 37 C entweder im Wasserbad mit einem Rack oder einem Schwimmer um die Platten zu halten sofern n tig oder in einem Inkubator inkubiert werden Alternativ k nnen die Platten in einem berpr ften Analysengerat inkubiert werden Weitere Details entnehmen Sie bitte der entsprechenden Gebrauchsanweisung des Ger tes Verwenden Sie keine CO Inkubatoren 11 Stellen Sie sicher dass der Boden der Platte sauber und trocken ist und dass vor dem Lesen der Platte keine Blasen auf der Oberfl che der Fl ssigkeit vorhanden sind 12 Die Verwendung von stark h molysierten Proben unvollst ndig geronnenen Seren oder mikrobiell kontaminierten Proben f hrt zu falschen Ergebnissen Ref 91010 BRD Deutsch 13 Lesen Sie vor der Verwendung eines Ger tes sorgf ltig die Gebrauchsanweisung des Herstellers damit Sie zu folgenden Punkten Zusatzinfor
79. 8 14 d as despu s para determinar un eventual incremento del nivel de anticuerpos IgG El resultado de test tendr a que ser evaluado conjuntamente con otros resultados procedentes de la historia del paciente u de otros procedimientos de diagn stico 13 ESPECIFICIDAD ANAL TICA Se analizaron 23 muestras negativas al Cytomegalovirus contenentes anticuerpos IgG contra virus como lo de la Rubella Epstein Barr Herpes Simplex Sarampi n Mumps En ning n caso la presenzia de tales anticuerpos afectaba el test 14 SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DE DIAGN STICO En una prueba cl nica ejecutada en un laboratorio hospitalario se analizaron 264 muestras 47 de las cuales fueron negativas y 217 positivas Las muestras fueron analizadas con otro m todo inmunoenzim tico comercial se encontr un acuerdo del 100 entre los dos m todos El kit Platelia CMV IgG ofrece el 100 de sensibilidad y especificidad Ref 91010 BRD Espa ol 15 PRECISI N Tab 2 Reproducibilidad intra ensayo realizada sobre 3 lotes distintos Cut Off Lote Lote N Lote N n 21 N 104 105 106 O D 0 453 0 374 0 433 CV 4 62 4 73 4 07 Tab 3 Ensayos realizados en series EU ml Muestra serie II serie III serie CV n 1 12 6 17 5 17 6 18 n 2 78 5 87 5 96 3 10 16 GU A DE RESOLUCI N DE PROBLEMAS PROBLEMA POSSIBLES FUENTES DE ERROR PRUEBA U ACCIONES negativos Serie no valida t
80. BSA 1 e sodio azide 0 09 liquido pronto all uso senza ulteriore diluizione valori possono essere espressi sia come Ul ml che come EU ml vedere punto 11 per tabella di conversione Il Calibratore 2 1 Ul ml o 10 EU mL corrisponde al cut off e pu essere usato per l analisi qualitativa valori dei calibratori sono 0 5 1 5 10 20 Ul ml ottenuti per titolazione contro il Proposed International Standard WHO Colore il colore proporzionale al titolo anticorpale CONJ CONIUGATO 1 x 16 mL Contenuto una soluzione di anticorpi monoclonali anti IgG umane marcati con perossidasi in tampone fosfato contenente fenolo 0 05 e Bronidox 0 02 Pronto all uso senza ulteriore diluizione IgG CONTROLLO NEGATIVO PF93910 1 x 1 6 mL INTERCAMBIABILE FRA LOTTI Contenuto Siero umano privo di anticorpi anti CMV IgG diluito in tampone fosfato 0 01 mol L contenente BSA 1 e sodio azide 0 09 liquido pronto all uso senza ulteriore diluizione Calibratore 0 WASH BUF 10x TAMPONE DI LAVAGGIO 10X PF93603 1 x 100 mL INTERCAMBIABILE FRA LOTTI Contenuto Soluzione salina tamponata PBS concentrata 10 volte contenente Brij 0 5 Preparazione Diluire il volume richiesto 1 10 con acqua distillata per ottenere il tampone di lavaggio pronto all uso Se sono presenti cristalli discioglierli a 37 C prima di diluire Ref 91010 BRD Italiano SAMP DIL 50x DILUENTE 50X PF93601 1 x
81. Bronidox Vorbereitung Verd nnen Sie die ben tigte Menge 1 50 mit Waschpuffer um das gebrauchsfertige Diluent herzustellen SUBS TMB SUBSTRAT PF93619 1x12 ml Gebrauchsfertig Chargen untereinander austauschbar Inhalt 0 26 mg ml Tetramethylbenzidin und 0 01 Wasserstoffperoxid stabilisiert in 0 05 mol l Zitratpuffer pH 3 8 H SO 0 3 STOPPLOSUNG PF93602 1 x 16 ml Chargen untereinander austauschbar Inhalt H2SO4 0 3 mol l in gebrauchsfertiger L sung KLEBEFOLIE 2 POLYTHENBEUTEL 1 ZUS TZLICH BEN TIGTE MATERIALIEN Inkubator bei 37 C Mikrotiterplatten Reader Wellenl nge 450 oder bei 450 620 nm mit einer OD Linearit t bis 22 000 Washer f r Mikrotiterplatten empfehlenswert f r ein Dispensiervolumen zwischen 225 375 ul Destilliertes oder deionisiertes Wasser Normale Laborgl ser Zylinder Testr hrchen etc Mikropipetten f r die exakte Pipettierung von 10 100 1000 ul Einweg Handschuhe Timer Natriumhypochlorid L sung 5 Beh lter zum Sammeln von potentiell infekti sem Material Saugf higes Papier 5 LAGERUNG UND STABILIT T DER REAGENZIEN Die Reagenzien m ssen bei 2 8 C gelagert werden Das Verfallsdatum ist auf allen Kitkomponenten und dem Packungsetikett angegeben Die Reagenzien haben nach dem ersten ffnen und oder der Vorbereitung eine begrenzte Stabilit t REAGENZ KONDITIONEN MIKROTITERPLATTE
82. CID waww PLATELIA CMV IgG 96 TESTS 72680 IMMUNOENZYMATIC METHOD FOR THE QUALITATIVE AND QUANTITATIVE DETERMINATION OF IgG CLASS ANTIBODIES TO CYTOMEGALOVIRUS IN HUMAN SERUM Ref 91010 BRD English 10 11 12 13 14 15 16 17 Ref 91010 BRD TABLE OF CONTENTS INTENDED USE SUMMARY AND EXPLANATION OF THE TEST PRINCIPLE OF THE TEST KIT CONTENTS AND REAGENT PREPARATION STORAGE AND STABILITY OF REAGENTS PRECAUTIONS TYPE AND STORAGE OF SAMPLE TEST PROCEDURE SCHEME OF TEST PROCEDURE TEST VALIDATION INTERPRETATION OF RESULTS LIMITATIONS OF THE PROCEDURE ANALYTICAL SPECIFICITY DIAGNOSTIC SENSITIVITY AND SPECIFICITY PRECISION TROUBLE SHOOTING REFERENCES English 1 INTENDED USE IMMUNOENZYMATIC METHOD FOR THE QUALITATIVE AND QUANTITATIVE DETERMINATION OF IgG CLASS ANTIBODIES TO CYTOMEGALOVIRUS IN HUMAN SERUM 2 SUMMARY AND EXPLANATION OF THE TEST Cytomegalovirus is a herpes virus transmitted by close human contact No symptoms of infection are apparent in the majority of cases However the virus is very dangerous and may be fatal in immuno depressed patients Serum negative female patients who become infected during pregnancy may transmit the disease to the fetus In 95 of cases this occurs without symptoms but some neonates may present jaundice hepato splenomegaly and retarded psycho motorial development For this reason it is of great importance to determine the immune state
83. EZEN TESTU ANALYTICKA SPECIFICNOST DIAGNOSTICKA CITLIVOST A SPECIFICNOST PRESNOST POMUCKA PRO RESEN PROBLEMU LITERATURA Ref 91010 BRD Cesky 1 POUZITI IMUNOENZYMATICK METODA KE KVALITATIVN MU A KVANTITATIVN MU STANOVEN PROTILATEK TRIDY IgG PROTI CYTOMEGALOVIRU V LIDSKEM SERU 2 KLINICKY VYZNAM Cytomegalovirus je herpes virus pren seny blizkym kontaktem mezi lidmi Ve v tSin pripad nejsou zjevn dn symptomy infekce Virus je v ak velmi nebezpe n a m e b t fat ln u imunodeprimovanych pacient S ronegativn eny kter se infikuj b hem t hotenstv mohou p en et onemocn n na plod V 95 p padech toto prob hne bez symptom u n kter ch novorozenc se v ak m e objevit loutenka hepatosplenomegalie a retardace psychomotorick ho v voje Z uveden ho d vodu je velmi d le it stanovit imunitn stav pacientky a kontrolovat s rokonverzi Signifikantn zv en titru IgG protil tek proti cytomegaloviru signalizuje prob haj c infekci nebo reaktivaci latentn infekce 3 PRINCIP TESTU Test je zalo en na technice ELISA enzymov imunosorb ni anal za 1 7 Antigen slo en z ste n purifikovan ho a inaktivovan ho cytomegaloviru je nav z n na pevnou f zi stripy po 8 jamk ch Specifick imunoglobul ny se v k antigenu b hem inkubace s na ed n m lidsk m s rem Po promyti kter m se odstran nereaguj c proteiny se prov d inku
84. Epstein Barrov Herpes simplex virus spalni ek nebo p u nic P tomnost uveden ch protil tek neovliv ovala v dn m p pad test 14 DIAGNOSTICKA CITLIVOST A SPECIFI NOST V klinick m hodnocen proveden m v nemocni n laborato i bylo analyzov no celkem 264 vzork z nich 47 bylo shled no jako negativn a 217 jako pozitivn Vzorky byly analyzov ny pomoc jin komer n dostupn imunoenzymatick metody mezi ob ma metodami byla zji t na 100 shoda jak u pozitivn ch tak i u negativn ch vzork Souprava Platelia CMV IgG vykazuje 100 senzitivitu a specifi nost Ref 91010 BRD esky 15 PRESNOST Tabulka 2 Opakovatelnost testu stanoven na t ech r zn ch Sarzich Cut Off Sarze Sarze Sarze n 21 104 105 106 OD 0 453 0 374 0 433 CV 4 62 4 73 4 07 Tabulka 3 Reprodukovatelnost testu EU ml Vzorek B hl Beh Il Beh III CV C 1 12 6 17 5 17 6 18 C 2 78 5 87 5 96 3 10 16 POMUCKA PRO RESEN PROBLEMU PROBLEM MOZNY ZDROJ KONTROLA NEBO NAPRAVNA AKCE Neplatny test vSechny vysledky negativni Vynechani jedn reagencie i v ce reagenci nebo p id n jedn reagencie i v ce reagenci ve patn m pofadi Zkontrolujte pracovn postup Zkontrolujte nepou it roztoky Zopakujte test Desti ka nevykazuje reakci Zkontrolujte k d na obale pou it desti ky informace o spr vn
85. Europa direktiv 98 79 EF om medicinsk udstyr til in vitro diagnostik In vitro diagnose Fremstillet af Se instruktion f r brug I Temperaturbegreensning The other languages which are required in conformity to the European Directive can be obtained from your local Bio Rad agent Les autres langues requises par la Directive Europ enne sont disponibles aupr s de votre repr sentant Bio Rad local Los otros idiomas que se requiren para la conformidad de la Directiva Europea puede ser obtenida en su oficina local Biorad Die anderen Sprachen die in bereinstimmung mit der europ ischen IVD Direktive ben tigt werden erhalten Sie ber Ihre lokale Bio Rad Niederlassung Le altre lingue che sono richieste in conformit con le Direttive Europee possono essere ottenute dal locale agente Bio Rad As restantes l nguas obrigat rias em conformidade com a Directiva Europeia podem ser obtidas atrav s da subsidi ria Bio Rad mais pr xima de si vriga spr k som kr vs i enlighet med EG direktivet kan erh llas fr n din lokala Bio Rad representant De gvrige sprog som kraeves i henhold til EU direktiv kan f s ved henvendelse til den lokale Bio Rad leverandgr Bio Rad asdl Bio Rad C 0459 3 boulevard Ra
86. FDA Cependant ils doivent tre consid r s comme potentiellement infectieux et par cons guent manipul s avec pr caution CONSIGNES D HYGIENE ET SECURITE 1 Ne pas pipeter avec la bouche Utiliser des gants usage unique et des lunettes de protection lors de la manipulation des chantillons et pendant la r alisation du test Se laver soigneusement les mains apr s la manipulation Les r actifs suivants contiennent de faibles concentrations en substances nocives ou irritantes a le tampon de lavage contient des d tergents b le conjugu contient du ph nol c le substrat est acide d les calibrateurs et contr les contiennent de azide de sodium 0 09 Les azides peuvent r agir avec les m taux cuivre et plomb des canalisations pour former des compos s explosifs Lors de limination des r actifs ne pas jeter dans un vier sans rincer abondamment En cas de contact avec la peau ou les yeux laver abondamment eau Tout mat riel non jetable doit tre st rilis apres utilisation de pr f rence en autoclave a 121 C pendant 1 h Tout mat riel jetable doit tre autoclav ou incin r apr s utilisation L acide sulfurique contenu dans la solution d arr t et l acide chlorhydrique utilis pour laver la verrerie sont corrosifs ces substances doivent tre utilis es avec pr caution En cas de contact avec la peau ou les yeux laver abondamment avec de eau Les acides neutralis s e
87. HIV 2 a HCV pomocou met d schv len ch FDA Vzh adom na to e iadny diagnostick test nem e poskytn pln istotu o nepr tomnosti infek n ch zlo iek je nutn zaobch dza so v etk mi materi lmi udsk ho p vodu ako by boli potenci lne infek n Pri pr ci s materi lmi udsk ho p vodu musia by dodr ovan v etky bezpe nostn opatrenia ktor sa be ne pou vaj v laborat rnej praxi Ref 91010 BRD Slovensky Bezpe nostn predpisy a ochrana zdravia 1 2 Nepipetujte stami Pri zaobch dzan so vzorkami a uskuto ovan testu pou vajte jednor zov rukavice a ochrann okuliare Po skon en pr ce si d kladne umyte ruky Nasleduj ce reagencie obsahuj n zke koncentr cie kodliv ch alebo dr div ch l tok a Prem vac roztok obsahuje detergenty b Konjug t obsahuje fenol c Substr t je kyselina d Ako konzerva n inidlo obsahuj kontroly 0 09 azidu sodn ho ktor m e reagova s me ou a olovom vodpadovom potrub za vzniku vysoko v bu n ch azidov kovov V pr pade ich vyliatia do v levky vypl chnite laborat rne potrubie ve k m mno stvom vody V pr pade kontaktu akejko vek reagencie s ko ou alebo o ami omyte postihnut oblas ve k m mno stvom vody Zariadenia ktor nie s po pou it ur en nalikvid ciu musia by po pou it sterilizovan Uprednost ovanou met dou je autokl vovanie po dobu jednej hodiny pri 121 C materi ly u
88. IBILIDADE DO DIAGNOSTICO PRECISAO RESOLUGAO DE PROBLEMAS REFER NCIAS BIBLIOGR FICAS Portugu s 1 FINALIDADE DO DISPOSITIVO DETERMINA O QUALITATIVA E QUANTITATIVA DE ANTICORPOS DE CLASSE IgG AO CITOMEGALOVIRUS NO SORO HUMANO PELO METODO IMUNOENZIM TICO 2 RESUMO E EXPLICAGAO DO TESTE O citomegalov rus um v rus de herpes transmitido por contacto humano pr ximo Na maioria dos casos n o s o visiveis quaisquer sintomas de infecc o No entanto o virus muito perigoso podendo revelar se fatal em doentes imunodeprimidos As doentes seronegativas que sejam infectadas durante a gravidez podem transmitir a doenca ao feto Em 95 dos casos tal infecc o ocorre sem sintomas mas alguns rec m nascidos podem apresentar ictericia hepatosplenomegalia e atraso no desenvolvimento psicomotor Por esta raz o de grande import ncia determinar o estado imune do doente e detectar qualquer seroconversao Um aumento significativo no t tulo de IgG anti citomegalov rus indicador de infec o recente ou reactivac o de uma infecc o latente 3 PRINC PIO DO TESTE O teste baseia se na t cnica ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay 1 7 O antig nio composto de citomegalov rus inactivado e parcialmente purificado liga se fase s lida tiras de 8 pocos As imunoglobulinas espec ficas ligam se ao antig nio por incubac o com o soro humano dilu do Ap s lavagens para eliminar as prote nas que n o reagiram proce
89. IU ml NEIMUNN jestli e je koncentrace IgG protil tek proti Cytomegaloviru lt 8 EU ml nebo lt 0 8 IU ml NEJIST pokud je v sledek mezi t mito dv ma hodnotami V takov m p pad se doporu uje zopakovat test dvojmo KVALITATIVN V SLEDKY Vypo tejte pom r mezi hodnotou OD vzorku a OD cut off kontroly kalibr tor 2 Vzorek se hodnot jako Pozitivn pokud je pom r gt 1 2 Nejist gt 0 8 a lt 1 2 Negativn pokud je pom r lt 0 8 Pokud je v sledek nejist prove te test znovu Pokud pochybnosti p etrv vaj odeberte nov vzorek s ra 12 OMEZEN TESTU Vzorek s ra z skan ho b hem akutn f ze infekce kdy jsou p tomn pouze protil tky t dy IgM m e b t negativn p i pou it tohoto testu Tepeln inaktivace testovan ho s ra nevede k chybn m v sledk m p i stanoven anti CMV IgG jako je tomu v p pad anti CMV IgM Hladiny IgM proti cytomegaloviru musi byt stanoveny pomoci soupravy Platelia CMV IgM Alternati n je mo n soub n vy et it druh vzorek sera odebran p ibli n o 8 14 dn pozd ji ke stanoven n r stu hladin protil tek IgG V sledek testu se mus posuzovat v kombinaci s informacemi z skan mi vyhodnocen m anamn zy a ostatn ch diagnostick ch postup 13 ANALYTICK SPECIFI NOST Bylo testov no 23 vzork negativn ch na CMV av ak obsahuj c ch protil tky IgG proti vir m jako jsou nap virus zard nek virus
90. J Clin Pathol 38 1059 1985 4 M Musiani et al Rapid detection of antibodies against cytomegalovirus induced immediate early and early antigens by an enzyme linked immunosorbent assay J Clin Pathol 37 122 1984 5 F de Ory et al Serological diagnosis of cytomegalovirus infections comparison of six commercial methods of ELISA Serodiagnosis and Immunotherapy 2 423 1988 NO Ref 91010 BRD it give the answer Serodiagnosis and P Dal Monte et al Cytomegalovirus umano Diagnosis 2 67 1990 R Ziegalmaier et al ELISA la Ricerca Clin Lab 10 83 1980 English CINE PLATELIA CMV IgG 96 TESTS 72680 ENZYMIMMUNOASSAY ZUR QUALITATIVEN UND QUANTITATIVEN BESTIMMUNG VON IgG ANTIK RPERN GEGEN DAS CYTOMEGALOVIRUS IN HUMANEM SERUM Ref 91010 BRD Deutsch 10 11 12 13 14 15 16 17 Ref 91010 BRD INHALTSVERZEICHNIS VERWENDUNGSZWECK KLINISCHE BEDEUTUNG TESTPRINZIP INHALT DES KITS UND VORBEREITUNG DER REAGENZIEN LAGERUNG UND STABILIT T DER REAGENZIEN WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN ART UND LAGERUNG DER PROBEN TESTDURCHF HRUNG TESTSCHEMA TESTVALIDIERUNG AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE GRENZEN DES VERFAHRENS ANALYTISCHE SPEZIFIT T DIAGNOSTISCHE SENSITIVIT T UND SPEZIFIT T PR ZISION TROUBLE SHOOTING PROBLEML SUNGEN LITERATUR Deutsch 1 VERWENDUNGSZWECK ENZYMIMMUNOASSAY ZUR QUALITATIVEN UND QUANTITATIVEN BESTIMMUNG VON IgG ANTIK
91. LITA DI CONSERVAZIONE E STABILITA DEI REAGENTI PRECAUZIONI TIPO DI CAMPIONE E CONSERVAZIONE PROCEDIMENTO SCHEMA DEL SAGGIO VALIDAZIONE DEL TEST INTERPRETAZIONE DEL TEST LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA SPECIFICITA ANALITICA SENSIBILITA E SPECIFICITA DIAGNOSTICA PRECISIONE GUIDA DEI PROBLEMI DI UTILIZZO BIBLIOGRAFIA Italiano 1 UTILIZZAZIONE KIT IMMUNOENZIMATICO PER LA DETERMINAZIONE QUALITATIVA E QUANTITATIVA DEGLI ANTICORPI IgG ANTI CYTOMEGALOVIRUS NEL SIERO UMANO 2 INTRODUZIONE Il cytomegalovirus amp un herpes virus che si trasmette in stretto contatto interumano La maggior parte dei soggetti risulta infettata in modo asintomatico II virus al contrario molto pericoloso nei pazienti immunodepressi nei quali pud provocare la morte Le donne sieronegative che contraggono la malattia durante la gravidanza la possono trasmettere al feto Nel 95 dei casi questo avviene senza conseguenze ma nei neonati sintomatici si pu avere ittero epato splenomegalia e ritardo psicomotorio Per questo molto importante conoscere lo stato immunitario della paziente ed osservare l eventuale sieroconversione Un aumento significativo nel titolo di IgG anti Cytomegalovirus suggerisce una infezione recente o una riattivazione di una infezione latente 3 PRINCIPIO DEL METODO Il test basato sul principio ELISA Enzyme linked Immunosorbent Assay L antigene costituito da cytomegalovirus parzialmente purificato ed inatti
92. NG AF REAGENSER Der er reagenser nok til 96 bestemmelser Lad materialet n stuetemperatur f r anvendelse MT PLATE MIKROPLADE 12 x 8 br nde d kket med Cytomegalovirus Anvendelse bn pakken p den modsatte side af koden C plus partinummer som er nyttig i forbindelse med identifikation Tag st tterammen og de strips der skal bruges ud af foliepakningen og placer de ubrugte strips i plastposen med kiselgel Pres luften ud og forsegl posen ved at trykke p lukkemekanismen CALIBRATORS 5x1 6 ml Indhold Fortyndet humant serum der indeholder kendte koncentrationer af anti CMV IgG antistoffer i 0 01 mol l fosfatbuffer med 1 BSA og 0 09 natriumazid flydende klar til brug uden yderligere fortynding Veerdierne kan udtrykkes i IU ml eller EU ml se konverteringstabellen i kapitel 11 Kalibrator 2 1 IU ml eller 10 EU ml svarer til cut off v rdien og kan anvendes i den kvalitative test Kalibratorerne har f lgende v rdier 0 5 1 5 10 20 IU ml der er opn et ved titrering mod WHOs Anbefalede Internationale Standard Farve Kalibratorfarven er proportional med den relative antistof titer CONJ KONJUGAT 1x 16 ml Indhold Monoklonale antistoffer som er m rket med peroxidase i fosfatbufferopl sning med 0 05 fenol og 0 02 Bronidox Klar til brug uden yderligere fortynding CONTROL IgG gG NEGATIV KONTROLPR VE PF93910 1 x 1 6 ml KAN BRUGES MED FLERE FORSKELLIGE PAR
93. ONSERVATION ET STABILITE DES REACTIFS PRECAUTIONS D UTILISATION ECHANTILLONS MODE OPERATOIRE RESUME DU MODE OPERATOIRE CRITERES DE VALIDATION DU TEST INTERPRETATION DES RESULTATS LIMITES DE LA METHODE SPECIFICITE ANALYTIQUE SENSIBLITE ET SPECIFICITE DIAGNOSTIQUES PRECISION EXPERTISE DES CAUSES D ERREUR REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES Frangais 1 BUT DU DOSAGE PLATELIA CMV IgG EST UNE TROUSSE IMMUNOENZYMATIQUE POUR LA DETERMINATION QUALITATIVE ET QUANTITATIVE DES ANTICORPS IgG ANTI CYTOMEGALOVIRUS DANS LE SERUM HUMAIN 2 INTERET CLINIQUE Le Cytom galovirus CMV appartient a la famille des herpesvirus et se transmet par contact humain troit La majorit des infections a CMV sont asymptomatiques Mais quand le syst me immunitaire est immature ou compromis les infections primaires r activations ou r infections peuvent tre extr mement severes Chez la femme enceinte le CMV est transmis via le placenta ou a la naissance Dans 95 des cas la transmission est asymptomatique mais certains nouveaux n s peuvent pr senter une jaunisse une h pato spl nom galie ou un retard du d veloppement psychomoteur La recherche des anticorps anti CMV permet de d finir le statut immunitaire du patient Une augmentation significative du titre des IgG anti CMV indique une infection r cente ou la r activation d une infection ancienne 3 PRINCIPE DU TEST Le principe du test est un dosage immuno enzymatique de type Elisa indi
94. RPERN GEGEN DAS CYTOMEGALOVIRUS IN HUMANEM SERUM 2 KLINISCHE BEDEUTUNG Cytomegalovirus ist ein Herpesvirus das durch engen menschlichen Kontakt bertragen wird In den meisten Infektionsf llen treten keine Symptome auf Das Virus ist aber durchaus gef hrlich und kann f r immunsupprimierten Patienten t dlich sein Serum negative weibliche Patienten die w hrend der Schwangerschaft infiziert werden k nnen die Erkrankung auf den Foetus bertragen In 95 der F lle bleibt dies symptomlos jedoch entwickeln einige Neugeborene eine Gelbsucht oder Hapato Splenomegalie bzw weisen eine verz gerte psycho motorische Entwicklung auf Daher ist es von gro er Wichtigkeit den Immunstatus der Patientinnen vor Eintritt einer Schwangerschaft zu ermitteln und auf eine Serokonversion zu berpr fen Ein signifikanter Anstieg des Anti Cytomegalovirus IgG Titers ist ein Anzeichen f r eine k rzlich durchgemachte Infektion oder eine Reaktivierung einer latenten Infektion 3 TESTPRINZIP Der Test basiert auf der ELISA Technik Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay 1 7 Das Antigen teilweise gereinigtes und inaktiviertes Cytomegalovirus ist an eine Festphase Streifen mit je 8 Vertiefungen gebunden Die spezifischen Immunglobuline werden bei der Inkubation mit verd nntem Patientenserum an das Antigen gebunden Die ungebundenen Proteine die nicht reagiert haben werden aus den Wells gewaschen danach folgt eine Inkubation mit dem Konjugat aus monoklonale
95. STEG 3 Tillsatt 100 pl substrat i varje brunn Inkubera i 15 minuter i rumstemperatur STEG 4 Tills tt 100 pl stoppl sning L s av absorbansen vid 450 nm inom 30 minuter 10 TESTVALIDERING 1 CONTROL kalibrator 0 Den negativa kontrollens O D varde maste vara lt 0 6 g nger h gre an O D v rdet f r kalibrator 2 2 O D v rdet f r kalibrator 2 m ste vara gt 0 2 vid 450 nm och gt 0 16 vid 450 620 nm 3 O D vardet f r kalibrator 5 m ste vara h gre an 1 2 Svensk 11 UTV RDERING AV RESULTATEN KVANTITATIVA RESULTAT Rapportera kalibratorernas OD v rde pa ett diagram sedan blankens OD v rde subtraherats Motsvarande titer f r provet kan erh llas genom extrapolation ANM RKNING En standardkurva m ste g ras f r varje k rning Om O D v rdet f r ett av proverna kalibratorerna r h gre an 2 0 ska avl sningsv rdet vid 405 nm multipliceras med 3 Omvandling av O D v rdet till enheter ml Anti cytomegalovirus IgG kan uttryckas i EU ml arbitr ra enheter eller i IU mL enligt WHO standard f r anti CMV IgG genom att resultaten av de 6 kalibratorerna extrapoleras Provets OD v rde j mf rs sedan med den kurva som erhalls Tabell 1 Kalibratorvarden i arbitrara och internationella enheter EU ml IU ml Kalibrator 0 0 0 Kalibrator 1 5 0 5 Kalibrator 2 10 1 Kalibrator 3 50 5 Kalibrator 4 100 10 Kalibrator 5 200 20 Graden av immunitet kan tolkas p f ljande s tt IMMUN n r provets konce
96. TIER Indhold Humant serum uden anti CMV IgG antistoffer fortyndet i 0 01 mol l fosfatbuffer med 1 BSA og 0 09 natriumazid flydende klar til brug uden yderligere fortynding Kalibrator 0 Stabilitet Produktet er stabilt indtil udlabsdatoen ved opbevaring u bnet ved 2 til 8 C Dansk WASH BUF 10x VASKEBUFFER 10X PF93603 1 x 100 ml KAN BRUGES MED FLERE FORSKELLIGE PARTIER Indhold Fosfatbufret saltvand koncentreret 10 gange indeholder 0 5 Brij Klarg ring Fortynd den nskede m ngde i forholdet 1 10 med destilleret vand for at fa en brugsklar vaskebuffer Ved forekomst af krystaller ber disse opl ses ved 37 C for fortyndingen SAMP DIL 50x FORTYNDER 50X PF93601 1 x 4 5 ml Til fortynding af serumprover IKAN BRUGES MED FLERE FORSKELLIGE PARTIER Indhold Proteinoplasning der er koncentreret 50 gange og tilsat 0 05 fenol og 0 02 Bronidox Klarg ring Fortynd den nskede m ngde i forholdet 1 50 i vaskebufferen for at f en brugsklar fortynder SUBS TMB SUBSTRAT PF93619 12 ml Klar til brug KAN BRUGES MED FLERE FORSKELLIGE PARTIER Indhold 0 26 mg ml tetramethylbenzidin og 0 01 hydrogenperoxid stabiliseret i 0 05 mol l citratbuffer pH 3 8 H SO 0 3 STOPOPLOSNING PF93602 1 x 16 ml KAN BRUGES MED FLERE FORSKELLIGE PARTIER H2SO4 0 3 mol l brugsklar opl sning SELVKLAEBENDE FILM 2 PLASTPOSE 1 N
97. Z EREDM NYEK KI RT KEL SE KVANTITAT V EREDM NYEK A kalibr tor oldatok OD rt k b l vonjuk ki a vak referencia rt k t 20 150 majd br zoljuk az eredm nyeket diagramon A vizsg lati mint nak megfelel titert a g rb r l olvashatjuk le MEGJEGYZ S a kalibr ci s g rb t minden vizsg lathoz vegy k fel Ha b rmely minta vagy kalibr tor OD rt ke nagyobb mint 2 0 m rj k jra 405 nm en majd a kapott rt ket szorozzuk meg 3 mal Az OD rt k tsz m t sa egys g ml re Az anti cytomegalov rus IgG mennyis g t EU ml ben nk nyesen v lasztott egys g vagy lU ml ben fejezhetj k ki javasolt WHO standard anti CMV IgG re a minta eredm ny t a 6 kalibr torral felvett g rb r l leolvasva 1 t bl zat a kalibr torok rt kei nk nyes s nemzetk zi egys gben EU ml IU ml 0 kalibr tor 0 0 1 kalibr tor 5 0 5 2 kalibr tor 10 1 3 kalibr tor 50 5 4 kalibr tor 100 10 5 kalibr tor 200 20 Az immunit s m rt ke az al bbiak szerint fejezhet ki IMMUNIZALT ha a minta anti Cytomegalov rus IgG koncentr ci ja gt 12 EU ml vagy gt 1 2 IU ml NEM IMMUNIZ LT ha a minta anti cytomegalovirus IgG koncentr ci ja lt 8 EU ml vagy gt 0 8 IU ml K TES ha az eredm ny a fenti k t rt k k z esik Ekkor aj nlatos a vizsg latot k t p rhuzamossal megism telni KVALITAT V EREDM NYEK Sz m tsuk ki a minta s a cut off 2 es kalibr tor OD rt k nek ar ny t
98. a de los reactivos debe ser evitada ya que esta puede acortar la vida del producto y causar resultados err neos No modificar el m todo ni reemplazar los reactivos con los de otros fabricantes o de otros lotes a no ser que est especificamente indicado que el reactivo es intercambiable No reducir los tiempos de incubaci n recomendados Lavar con cido hidrocl rico 2M todos los materiales de laboratorio que se utilizan en las pruebas y aclarar con agua destilada o desionizada No exponer los reactivos a fuerte iluminaci n ni a humos de hipoclorito durante la conservaci n o las fases de incubaci n Evitar que los pocillos se sequen durante el ensayo Evitar la contaminaci n cruzada entre reactivos Es importante usar pipetas exclusivas para cada reactivo Evitar de tocar el borde del pocillo con el conjugado No salpicar sobre las microplacas Las titulaciones inmunoenzim ticas de vez en cuando pueden presentar un particular efecto llamado edge effect efecto filo que debe reducirse al m nimo aumentando el valor de la humedad durante las fases de la incubaci n Las placas se deben cubrir con sus tapas y deben ser incubadas a 377C en un ba o de agua usando un soporte para placas o un incubador Alternativamente incubar las placas en un analizador aprobado Para m s informaci n consultar el manual de usuario del equipo No utilizar incubadores de 10 Asegurarse de que el fondo de la placa est limpio y seco y de qu
99. a nem megfelel Gondoskodjunk a mos berendez s j m k d s r l A tesztlyukak ki r t se nem megfelel Gondoskodjunk a mos berendez s j m k d s r l Pipett z si hiba Ellen rizz k a pipetta m k d s t A reagens adagol sa t l lass Vigy zzunk hogy a mos s ut n ne sz radjon be a lemez Azonnal m rj k be a reagenseket Bubor kok jelenl te Pipett z s sor n ker lj k el a bubor kk pz d st A f ny t nem szabad Ellen rizz k a k sz l k f nyforr s t s a detektort hogy nincsenek e elszennyez dve Puha ronggyal t r lj k le a lemez alj t El gtelen sz nk pz d s Pontatlan inkub l si id vagy h m rs klet Ellen rizz k a h m rs klet s az id be ll t s t Ragaszkodjunk az aj nlott utas t sokhoz El gtelen szubsztr t bem r s Ellen rizz k a pipetta m k d s t 17 HIVATKOZASOK 1 G B Wisdom Enzyme Immunoassay Clin Chem 22 1243 1976 2 H O Kangro Cytomegalovirus serology does it give the answer Serodiagnosis and Immunotherapy 1 91 1987 3 Grint P C A et al Screening tests for antibodies to cytomegalovirus an evaluation of five commercial products J Clin Pathol 38 1059 1985 4 M Musiani et al Rapid detection of antibodies against cytomegalovirus induced immediate early and early antigens by an enzyme linked immunosorbent assay J Clin Pathol 37
100. ague soit propre et sec et qu il ny ait aucune bulles d air la surface du liquide 11 Les chantillons fortement h molys s les s rums incompl tement coagul s les plasmas contenant de la fibrine ou les chantillons pr sentant une contamination microbienne peuvent causer des r sultats erron s 12 Lire attentivement le manuel d utilisation des instruments utilis s en particulier les chapitres concernant l installation et les pr cautions sp cifiques le principe les instructions les pr cautions et risques d utilisation les sp cifications du fabricant et les performances de instrument la maintenance 7 ECHANTILLONS Utiliser des chantillons de s rum frais ou d congel Les chantillons peuvent tre stock s 2 8 C pendant 4 jours Pour un stockage plus long congeler les s rums 20 C Il ne faut pas les d congeler et recongeler plus de 3 fois Les s rums d congel s doivent tre bien agit s avant utilisation Les chantillons qui pr sentent une contamination microbienne peuvent alt rer les r sultats Ceux qui sont fortement lip miques ict rigues ou contamin s ne doivent pas tre utilis s S il n est pas possible de pr lever un autre chantillon il faut le clarifier par filtration 0 45 um ou par centrifugation 3000 tpm pendant 10 minutes Ne pas utiliser d chantillon de plasma humain 8 MODE OPERATOIRE Pr paration Pr parer le nombre n cessaire de barrettes Pr
101. ako u pozitivnych tak aj u negativnych vzoriek S prava Platelia CMV IgG vykazuje 100 senzitivitu a Specificitu 15 PRESNOST Tabu ka 2 Opakovate nos testu stanoven pre tri r zne ar e Cut Off ar a ar a ar a n 21 104 105 106 OD 0 453 0 374 0 433 CV 4 62 4 73 4 07 Tabulka 3 Reprodukovatelnost testu EU ml Vzorka Beh Beh Il Beh Ill CV C 1 12 6 17 5 17 6 18 6 2 78 5 87 5 96 3 10 16 POM CKA NA RIESENIE PROBLEMOV PROBLEM MOZNY ZDROJ KONTROLA ALEBO N PRAVN AKCIA Neplatny test vSetky vysledky negativne Vynechanie jednej alebo viacerych jednej viacerych reagencii alebo pridanie reagencie pr padne reagenci v chybnom porad Skontrolujte pracovn postup Skontrolujte nepou it roztoky Zopakujte test Platni ka nevykazuje reakciu Skontrolujte k d na obale pou itej platni ky inform cie o spr vnom k dovom ozna en s uveden v bode 4 pr balov ho let ku Skontrolujte vlhkos nepou itej platni ky silikag lov absorbent mus by svetlo it Zopakujte test Neplatn test v etky v sledky pozit vne Kontamin cia substr tu Pou ite nov alikvotn as substr tu Nedostato n premytie Skontrolujte i spr vne funguje prem va ka Zl presnos Ne plne premytie jamiek Skontrolujte i spr vne funguje prem va ka
102. ant serum Efter tvattning da proteiner som inte har reagerat avl gsnas utf rs inkubering med konjugatet som bestar av pepparrotsperoxidas konjugerade humana IgG monoklonala antikroppar Det obundna konjugatet elimineras och peroxidassubstrat tillsatts Den bla f rg som framtrader ar proportionell till koncentrationen av specifika antikroppar som f rekommer i serumprovet Nar den enzymatiska reaktionen avbryts vid tillsats av svavelsyral sning lases den framtr dande gula fargen av med en avl sare f r mikroplattor 4 INNEHALL OCH REAGENSBEREDNING Reagenserna racker till 96 bestamningar Lat uppna rumstemperatur fore anvandning MT PLATE MIKROPLATTA 12 x 8 brunnar belagda med cytomegalovirus Anv ndning Oppna f rpackningen i motsatt nde i f rh llande till koden C f ljt av partinumret eftersom den beh vs vid identifiering Ta ut st dramen och de remsor som ska anvandas ur folief rpackningen och l gg de oanv nda remsorna i polyetenp sen med kiselgel pressa ut luften och f rslut p sen CALIBRATORS 5 x 1 6 ml Inneh ll Utsp tt humant serum som inneh ller k nda koncentrationer av anti CMV IgG antikroppar i fosfatbuffert 0 01 mol l med BSA 1 och natriumazid 0 09 flytande form bruksf rdigt beh ver inte sp das ytterligare V rdet kan uttryckas i IU ml eller EU ml en omvandlingstabell finns i avsnitt 11 Kalibrator 2 1 IU ml eller 10 EU ml motsvarar gr nsv rdet och kan anv nda
103. as 23 amostras gue eram negativas a CMV mas continham anticorpos IgG contra v rus tais como Rub ola Epstein Barr Herpes Simplex Sarampo ou Papeira Em nenhum caso a presenca destes anticorpos influenciou o teste 14 SENSIBILIDADE E ESPECIFICIDADE DO DIAGN STICO Num ensaio cl nico realizado num laborat rio hospitalar foram analisadas 264 amostras das guais 47 comprovadas negativas e 217 positivas As amostras foram analisadas com outro m todo imunoenzim tico existente no mercado registou se uma concord ncia de 10096 entre os dois m todos tanto no caso das amostras positivas como nas negativas O dispositivo Platelia CMV IgG oferece 10096 de sensibilidade e especificidade 15 PRECIS O Quadro 2 Precis o intra s rie efectuada em 3 lotes diferentes Cut Off Lote Lote N Lote N n 21 N 104 105 106 D O 0 453 0 374 0 433 CV 4 62 4 73 4 07 Quadro 3 Precis o inter s ries EU ml Amostra s rie s rie II s rie Ill CV n 1 12 6 17 5 17 6 18 n 2 78 5 87 5 96 3 10 16 GUIA DE RESOLU O DE PROBLEMAS PROBLEMA POSSIVEL ORIGEM TESTE OU AC O Serie n o v lida totalmente negativa Um ou mais reagentes n o adicionados ou incluidos na sequ ncia errada Verificar de novo o procedimento Verificar se existem solu es que n o tenham sido utilizadas Repetir o teste Placa n o reactiva Verificar o c digo da embalagem que cont m a
104. b ljuk 45 percig 37 C on Ezut n mossuk n gyszer 30 m sodpercig 300 ul m rj nk 100 ul konjug tot minden tesztlyukba majd inkub ljuk jb l 45 percig 37 C on ntapad f li val lefedve a lemezt V gezz nk tov bbi n gy mos st fentiek szerint V g l m rj nk 100 ul szubsztr tot be minden tesztlyukba Hagyjuk 15 percig llni szobah m rs kleten majd 100 ul le ll t oldattal ll tsuk le az enzimes reakci t Az abszorbanci t OD 450 nm en vagy 450 620 nm en olvassuk le 30 percen bel l Ha az OD 2 000 n l nagyobb akkor m rj k jra 405 nm en 9 AZ ELJ R S SSZEFOGLAL SA Manu lis technika 1 L P S M rj nk 100 ul h g tott mint t kontrollt a tesztcs kok tesztlyukaiba Inkub ljuk 45 percig 37 C on Mossuk n gyszer 300 ul 2 L P S M rj nk 100 ul konjug tot minden tesztlyukba Inkub ljuk 45 percig 37 C on Mossuk n gyszer 300 ul 3 L P S M rj nk 100 ul szubsztr tot minden tesztlyukba Inkub ljuk 15 percig szobah m rs kleten 4 L P S M rj nk 100 ul le ll t oldatot 30 percen bel l olvassuk le az abszorbanci t 450 nm en 10 A VIZSG LAT VALID L SA 1 NEGAT V KONTROLL Kalibr tor 0 A negat v kontroll OD rt ke legyen 0 6 szer kisebb mint a Kalibr tor 2 OD rt ke 2 Kalibr tor 2 OD rt ke 450 nm en legyen gt 0 2 m rve 450 620 nm en legyen gt 0 16 3 Kalibr tor 5 OD rt ke legyen nagyobb mint 1 2 11 A
105. bace s konjug tem kter je tvo en monoklon ln protil tkou proti lidsk mu IgG zna enou k enovou peroxid zou Nenav zan konjug t se odstran a p id se substr t pro peroxid zu Modr zbarven kter se vyvine je m rn koncentraci specifick ch protil tek p tomn ch ve vzorku s ra Po p eru en enzymatick reakce p id n m roztoku kyseliny s rov je mo no snadno vyhodnotit lut zbarven kter vznikne pomoc spektrofotometru pro mikrotitra n desti ky 4 OBSAH SOUPRAVY A P PRAVA REAGENCI Reagencie posta uj pro 96 stanoven P ed pou it m nechte ust lit na pokojovou teplotu MT PLATE MIKROTITRA N DESTI KA 12 x 8 jamek pota en ch cytomegalovirem Pou it otev ete obal na stran protilehl ke k dov mu ozna en p smeno C a slo ar e kter slou k identifikaci vyjm te r me ek a stripy z foliov ho obalu vlo te nepou it stripy do polyethylenov ho s ku se silikagelem vytla te ze s ku vzduch a neprody n jej uzav ete p itla en m uz v ru CAL KALIBR TORY 5 1 6 ml Obsah Na ed n lidsk s rum obsahuj c zn m koncentrace anti CMV IgG protil tek v 0 01 mol l fosf tov m pufru s 1 BSA a 0 09 azidu sodn ho tekut hotov k pou it bez dal ho ed n Hodnoty lze vyj d it bu v jednotk ch IU ml nebo EU ml viz p evodn tabulka v kapitole 11 Kalibr tor 2 1 IU ml nebo 10 EU ml odpov
106. cada pocillo Incubar 45 min a 37 C Lavar 4 veces 300 ul STEP 3 A adir 100 uL de Substrato a cada pocillo Incubar 15 min a T A STEP 4 A adir 100 uL de Soluci n Bloqueante Leer la absorbancia a 450 nm dentro de 30 min 10 VALIDACI N DEL TEST 1 Calibrador 0 Control Negativo la densidad ptica DO del control negativo debe ser lt 0 6 veces la D O del Calibrador 1 2 La D O del Calibrador 2 debe ser gt 0 2 a 450 nm gt 0 16 a 450 620 nm 3 La D O del Calibrador 5 debe ser m s de 1 2 Ref 91010 BRD Espa ol 11 INTERPRETACI N DE RESULTADOS Resultados Cuantitativos Poner en el gr fico las D O de los calibradores restando la D O del blanco lt 0 150 en funci n del t tulo de cada un calibrador Obtener el titulo correspondiente de la muestra examinada por interpolaci n NOTA Hay que hacer una curva estandar por cada ciclo Si la D O de una muestra u calibrador es mas de 2 0 leer a 405 nm y multiplicar el valor por 3 Conversi n de las D O en IU mL El IgG anti CMV de cada muestra puede ser expresado en unidades arbitrarias EU mL o en IU mL anti CMG IgG WHO standard interpolando los valores en DO de los 6 calibradores y comparando el valor en DO de la muestra con la curva obtenida La Tabla 1 indica la conversi n entre EU ml y Ul ml Tab 1 Valor de los calibradores en unidades arbitrarias e internacionales EU mL IU mL Calibrador 0 0 0 Calibrador 1 5 0 5 Calibrador 2 10 1 Calibrador
107. ciones adicionales IgG CONTROL NEGATIVO PF93910 1 x 1 6 mL INTERCAMBIABLE ENTRE LOTES Contenido Suero humano sin anticuerpos anti CMV IgG diluido en tamp n fosfato 0 01 mol L con BSA 1 y zida s dica al 0 09 l quido listo para su uso sin diluci n adicional Calibrador 0 WASH BUF 10x TAMP N DE LAVADO 10X PF93603 1 x 100 mL INTERCAMBIABLE ENTRE LOTES Contenido Soluci n salina fosfato tamponada concentrada 10 veces contiene Brij al 0 5 Preparaci n Diluir el volumen requerido 1 10 con agua destilada con el fin de obtener el tamp n de lavado listo para su uso Si hay cristales presentes disolverlos a 37 C antes de diluir Ref 91010 BRD Espa ol SAMP DIL 50x DILUYENTE 50X PF93601 1 x 4 5 mL INTERCAMBIABLE ENTRE LOTES Para la diluci n de las muestras de suero Contenido Soluci n de prote nas concentrada 50x con fenol al 0 05 adicional y Bronidox 0 02 Preparaci n Diluir el volumen requerido 1 50 en el tamp n de lavado para obtener el diluyente listo para su uso SUBS TMB SUBSTRATO PF93619 12 mL Listo para su uso INTERCAMBIABLE ENTRE LOTES Contenido Tetrametilbenzidina 0 26 mg mL y per xido de hidr geno al 0 01 estabilizados en tamp n citrato 0 05 mol L pH 3 8 250 0 3 SOLUCI N BLOQUEANTE PF93602 1 x 16 mL INTERCAMBIABLE ENTRE LOTES Soluci n de H SO 0 3 mol L lista para su uso
108. contain low concentrations of harmful or irritant substances a the Rinsing Buffer contains detergents b the conjugate contains phenol c the substrate is acid d the controls contain 0 09 Sodium Azide which can react with lead and copper in plumbing forming highly explosive deposits of metal azides dilute with large amounts of water to eliminate If any of the reagents come into contact with the skin or eyes wash the area extensively with water Non disposable apparatus should be sterilised after use The preferred method is to autoclave for 1 h at 121 C disposables should be autoclaved or incinerated Sulphuric acid required for the Stop Solution and hydrochloric acid used for washing glassware are corrosive and should be handled with appropriate care If they come into contact with the skin or eyes wash thoroughly with water Neutralised acids and other liquid waste should be decontaminated by adding a sufficient volume of sodium hypochlorite to obtain a final concentration of at least 1 0 A 30 minute exposure to 1 sodium hypochlorite may be necessary to ensure effective decontamination Spillage of potentially infectious materials should be removed immediately with absorbent paper tissue and the contaminated area swabbed with for example 1 0 sodium hypochlorite before work is continued Sodium hypochlorite should not be used on acid containing spills unless the spill area is first wiped dry Materials used to clean spills including
109. d hodnot cut off a m e b t pou it v kvalitativn m testu Kalibr tory jsou o n sleduj c ch hodnot ch 0 5 1 5 10 20 IU ml p ipraven titrac podle Proposed International Standar WHO Barva barva kalibr tor je m rn relativn mu titru protil tek CONJ KONJUGAT 1 x 16 ml Obsah monoklon ln protil tky zna en peroxid zou ve fosfatov m pufru obsahujicim 0 05 fenolu a 0 02 Bronidoxu Hotov k pou it bez dal ho ed n CONTROL IgG IgG NEGATIVNI KONTROLA PF93910 1 x 1 6 ml IZAM NITELN MEZI SARZEMI Obsah Lidsk s rum neobsahujici anti CMV IgG protil tky nafed n v 0 01 mol l ve fosf tov m pufru s 1 BSA a 0 09 azidu sodn ho tekut hotov k pou it bez dal ho ed n kalibr tor 0 Stabilita neotev en v robek ulo en pri teplot 2 8 C je stabiln a do data exspirace Ref 91010 BRD esky WASH BUF 10x PROM VAC ROZTOK 10X PF93603 1x 100 ml IZAM NITELN MEZI SARZEMI Obsah 10x koncentrovany fyziologicky roztok pufrovany fosf ty obsahuje 0 5 Brij Pr prava Promyvaci roztok o pracovn koncentraci pripravte nafed nim pr slu n ho objemu v pom ru 1 10 Jestli e jsou pfitomny krystaly rozpustte je pri 37 C SAMP DIL 50x ED C ROZTOK 50X PF93601 1 x 4 5 ml Pro ed n vzork s ra ZAMENITELNE MEZI SARZEMI Obsah 50x koncentrovan roztok obsahujici 0 05 fenolu a 0 02 Bron
110. d strips in the polythene bag with the silica gel expel the air and seal by pressing the closure CAL CALIBRATORS 5 x 1 6 mL Contents Diluted human serum containing known concentrations of anti CMV IgG antibodies in Phosphate buffer 0 01 mol L with BSA 1 and sodium azide 0 09 liquid ready for use without further dilution The values can be expressed in IU ml or EU ml see section 11 for conversion table Calibrator 2 1 IU ml or 10 EU mL corresponds to the cut off value and can be used in the qualitative test The calibrators have the following values 0 5 1 5 10 20 IU mL obtained by titration against the Proposed International Standard WHO Colour the colour of the calibrators is proportional to the relative antibody titer CONJ CONJUGATE 1x 16 mL Contents monoclonal antibodies labelled with Peroxidase in phosphate buffer solution containing phenol 0 05 and Bronidox 0 02 Ready for use without further dilution CONTROL IgG IgG NEGATIVE CONTROL PF93910 1x 1 6 mL INTERCHANGEABLE BETWEEN LOTS Contents Human serum not containing anti CMV IgG antibodies diluted in Phosphate buffer 0 01 mol L with BSA 1 and sodium azide 0 09 liquid ready for use without further dilution Calibrator 0 Stability The product is stable up to the expiry date when stored unopened at 2 8 C Ref 91010 BRD English WASH BUF 10x WASH BUFFER 10X PF93603 1 x 100 mL INTERCHANGEABLE
111. d tv ttbufferten genom att spada tv ttbuffertl sningen 10x 100 ml 900 ml H20 Bered nskat sp dningsmedel f r prover genom att blanda 1 del utsp dningsmedel 50x med 49 delar utsp dd tvattbuffert till exempel 2 ml 98 ml utsp dd tv ttbuffert Sp d proverna 1 101 genom att tills tta 10 ul serum i 1 ml utsp dningsmedel F rdela 100 ul av varje utsp tt prov per brunn test med dubbelprover rekommenderas Placera OUTSP DDA kalibratorer i dubbelprover om m jligt i en remsa 100 ul i varje brunn L mna en brunn tom f r blanken tills tt sedan endast 100 ul substratblandning Brunnarna t cks med skyddsfilm och inkuberas i 45 minuter vid 37 C Tv tta fyra g nger i 30 sekunder 300 ul Tills tt d refter 100 pl konjugat i varje brunn tack med skyddsfilm och inkubera pa nytt i 45 minuter vid 37 C Plattan tv ttas pa nytt 4 g nger enligt beskrivningen ovan Till sist f rdelas substratet 100 ul brunn Efter 15 minuter i rumstemperatur stoppas den enzymatiska reaktionen med 100 pl stoppl sning Absorbansen 0 D avl ses vid 450 eller 450 620 nm inom 30 minuter L s av igen vid 405 nm om OD vardet ar h gre an 2 000 9 Testschema f r Platelia CMV IgG Manuell metod STEG 1 Tillsatt 100 ul utsp dda prover kontroller i remsans brunnar Inkubera i 45 minuter vid 37 C Tvatta 4 g nger 300 pl STEG 2 Tillsatt 100 pl konjugat i varje brunn Inkubera i 45 minuter vid 37 C Tvatta 4 g nger 300 pl
112. dade est indicado em cada componente e na etiqueta da respectiva embalagem Os reagentes t m uma estabilidade limitada ap s abertura e ou prepara o REAGENTE CONDI ES Microplaca 6 semanas a 2 8 C saco de polietileno Calibradores 6 semanas a 2 8 C Conjugado 6 semanas a 2 8 C Substrato at ao termo do prazo de validade a 2 8 C 1 semana a 15 30 C guardar ao abrigo da luz Diluente de Amostras pronto a usar 2 semanas a 2 8 C Tamp o de Lavagem 2 semanas a 2 8 C 5 dias a 15 30 C Solu o de Paragem at ao termo do prazo de validade a 2 8 C 6 PRECAU ES PARA UTILIZA O EXCLUSIVA NO DIAGN STICO IN VITRO Este dispositivo cont m materiais de origem humana que foram testados e forneceram uma resposta negativa pelos m todos aprovados pela FDA quanto presen a de HbsAg e anticorpos anti HIV 1 anti HIV 2 e anti HCV Uma vez que nenhum teste de diagn stico pode fornecer garantia absoluta quanto aus ncia de agentes infecciosos todo o material de origem humana dever ser considerado como potencialmente infeccioso No manuseamento de materiais de origem humana todas as precau es normalmente adoptadas na pr tica laboratorial dever o ser cumpridas Portugu s Informac es guanto Sa de e Seguranca 1 2 N o pipetar com a boca Usar luvas descart veis e culos de protecc o durante o manuseamento de amostras e a realizac o do ensaio Lavar cuidadosamente as m os quando terminar Os segui
113. dadosamente las instrucciones Volumen inadecuado de substrato a adido a la placa Controlar el funcionamiento de la pipeta Ref 91010 BRD Espa ol 17 BIBLIOGRAF A 1 2 3 4 Q0 7M G B Wisdom Enzyme Immunoassay Clin Chem 22 1243 1976 H O Kangro Cytomegalovirus serology does it give the answer Serodiagnosis and Immunotherapy 1 91 1987 Grint P C A et al Screening tests for antibodies to cytomegalovirus an evaluation of five commercial products J Clin Pathol 38 1059 1985 M Musiani et al Rapid detection of antibodies against cytomegalovirus induced immediate early and early antigens by an enzyme linked immunosorbent assay J Clin Pathol 37 122 1984 F de Ory et al Serological diagnosis of cytomegalovirus infections comparison of six commercial methods of ELISA Serodiagnosis and Immunotherapy 2 423 1988 P Dal Monte et al Cytomegalovirus umano Diagnosis 2 67 1990 R Ziegalmaier et al ELISA la Ricerca Clin Lab 10 83 1980 Ref 91010 BRD Espafiol c gt E PLATELIA CMV IgG 96 TESTS 72680 KIT IMMUNOENZIMATICO PER LA DETERMINAZIONE QUALITATIVA E QUANTITATIVA DEGLI ANTICORPI IgG ANTI CYTOMEGALOVIRUS NEL SIERO UMANO Ref 91010 BRD Italiano 10 11 12 13 14 15 16 17 Ref 91010 BRD SOMMARIO UTILIZZAZIONE INTRODUZIONE PRINCIPIO DEL METODO COMPOSIZIONE DEL KIT E PREPARAZIONE DEI REAGENTI MODA
114. de cido sulf rico la coloraci n amarilla resultante puede ser facilmente le da con un lector para microplacas ELISA 4 COMPONENTES DEL KIT Y PREPARACI N DEL REACTIVO Reactivos suficientes para 96 determinaciones Poner los reactivos a temperatura ambiente de su uso MT PLATE MICROPLACA 12 x 8 pocillos recubiertos de ant genos Cytomegalovirus Uso Abrir el envase de la placa desde el lado opuesto del c digo C seguido por el n mero de lote que sirve para su identificaci n retirar el soporte y las tiras necesarias Colocar las tiras no utilizadas en la bolsa de pl stico con el gel de s lice extraer el aire y cerrar fuertemente CAL CALIBRADORES 5 x 1 6 mL Contenido Suero humano diluido a concentraci n conocida de anticuerpos anti CMV IgG en tampon fosfato 0 01 mol L con BSA 1 y azida sddica al 0 09 liquido liquido listo para su uso sin diluciones adicionales El Calibrador 2 10 EU mL corresponde al valor del cut off y puede ser usado en el test cualitativo Los calibradores tienen los valores siguientes 0 5 1 5 10 20 Ul ml obtenidos por titulaci n contra el proposed International Standard WHO Color el color de los calibradores es proporcional a la relativa titulaci n del anticuerpo CONJ CONJUGADO 1 x 16 mL Contenido anticuerpos monoclonales marcados con peroxidasa en una soluci n fosfato tamponada conteniendo fenol al 0 05 y Bronidox al 0 02 Listo para su uso sin dilu
115. de se incubac o com o conjugado composto de anticorpos monoclonais IgG humanos conjugados com peroxidase de r bano O conjugado n o ligado eliminado e o substrato de peroxidase adicionado A cor azul que se desenvolve proporcional ao t tulo de anticorpos espec ficos presentes na amostra de soro Quando a reac o enzim tica interrompida por adi o de uma solu o de cido sulf rico a cor amarela que se desenvolve pode ser facilmente lida utilizando um leitor de microplacas 4 CONTE DO DO DISPOSITIVO E PREPARA O DO REAGENTE O dispositivo cont m reagentes suficientes para 96 determina es Estabilizar temperatura ambiente antes de usar MT PLATE MICROPLACA 12 x 8 po os revestidos com citomegalov rus Utilizac o abrir a embalagem do lado oposto ao c digo C mais n mero de lote que pode ser til para fins de identifica o retirar da embalagem de alum nio o suporte e as tiras a usar e colocar as tiras nao utilizadas no saco de polietileno contendo silica gel expelir o ar e selar pressionando o fecho CALIBRATORS 5x 1 6 ml Conte do Soro humano diluido contendo t tulos espec ficos de anticorpos IgG anti CMV em tamp o fosfato 0 01 mol l com BSA 1 e azida de s dio 0 09 l quido pronto a usar sem diluig o adicional Os valores podem ser expressos em IU ml ou EU ml ver tabela de convers o no par grafo 11 O calibrador 2 1 IU ml ou 10 EU ml corresponde ao valor de c
116. dpovedaj ci titer testovanej vzorky mo no z ska extrapol ciou POZN MKA Pre ka d beh testu je potrebn vytvori tandardn krivku Ak je OD niektorej vzorky alebo kalibr tora vy ia ne 2 0 urobte meranie pri 405 nm a vyn sobte hodnotu tromi Konverzia OD na jednotky ml IgG protil tky proti cytomegalov rusu mo no vyjadri v jednotk ch EU ml arbitr ne jednotky alebo v IU ml navrhovan tandard WHO pre anti CMV IgG na z klade extrapol cie v sledkov 6 kalibr torov a porovnania OD vzorky so z skanou krivkou Tabu ka 1 Hodnoty kalibr torov v arbitr nych a medzin rodn ch jednotk ch EU ml IU ml Kalibr tor 0 0 0 Kalibr tor 1 5 0 5 Kalibr tor 2 10 1 Kalibr tor 3 50 5 Kalibr tor 4 100 10 Kalibr tor 5 200 20 Stav imunity mo no interpretova takto IM NNY ak je koncentr cia IgG protil tok proti Cytomegalov rusu vo vzorke gt 12 EU ml alebo 1 2 IU ml NEIM NNY aj je koncentr cia IgG protil tok proti Cytomegalov rusu lt 8 EU ml alebo lt 0 8 IU ml NEIST v pr pade e v sledok je medzi t mito dvomi hodnotami V takom pr pade sa doporu uje test zopakova dvojmo KVALITAT VNE V SLEDKY Vypo tajte pomer medzi hodnotou OD vzorky a OD cut off kontroly kalibr tor 2 Vzorka sa hodnot ako Pozit vna ak je pomer gt 1 2 Neist gt 0 8 a lt 1 2 Negat vna ak je pomer lt 0 8 Ak je v sledok neist urobte test znovu V pr pade e pochybnosti pre
117. e do ka dej jamky 100 ul konjug tu zakryte jamky ochrannou f liou a inkubujte znovu po dobu 45 min t pri 37 C Platni ky znovu tyri kr t premyte pod a vy ie uveden ho postupu Potom do ka dej jamky napipetujte 100 ul substr tu Po 15 min tach pri izbovej teplote zastavte enzymatick reakciu pridan m 100 ul zastavovacieho roztoku Absorbancia OD sa meria do 30 min t pri 450 nm alebo pri 450 620 nm Ak je OD vy ia ne 2 000 urobte meranie znovu pri 405 nm 9 Sch ma pracovn ho postupu pre s pravu CYTOMEGALOVIRUS lgG Manu lna technika KROK 1 Do jednotliv ch jamiek platni ky napipetujte po 100 pl nariedenej vzorky alebo kontroly Inkubujte 45 min t pri 37 C Premyte 4x 300 ul KROK 2 Do ka dej jamky napipetujte 100 ul konjug tu Inkubujte 45 min t pri 37 C Premyte 4x 300 ul KROK 3 Do ka dej jamky napipetujte 100 ul substr tu Inkubujte 15 min t pri izbovej teplote KROK 4 Napipetujte 100 ul zastavovacieho roztoku Do 30 min t zmerajte absorbanciu pri 450 nm 10 VALID CIA TESTU 1 KONTROLA Kalibr tor 0 OD negat vnej kontroly mus by ni ia ne 0 6 x OD kalibr tora 2 Ref 91010 BRD Slovensky 2 OD kalibr tora 2 musi byt gt 0 2 pri 450 nm gt 0 16 pri 450 620 nm 3 OD kalibr tora 5 mus by vy ia ne 1 2 11 INTERPRET CIA V SLEDKOV KVANTITAT VNE V SLEDKY Vyneste do grafu hodnoty OD kalibr torov zmen en o OD blanku lt 0 150 O
118. e no haya burbujas presentes en la superficie del l quido antes de leer la placa 11 Puede ser fuente de error el uso de muestras altamente hemolizadas suero no coagulado en su totalidad o muestras que presentan contaminaci n micr biana 12 Leer el manual de usuario de cada equipo y en especial si desea obtener informaci n sobre los puntos siguientes instalaci n y requisitos espec ficos principios operativos instrucciones precauciones y riesgos especificaciones del fabricante y rendimiento del equipo mantenimiento y servicio t cnico Ref 91010 BRD Espa ol 7 TIPO DE MUESTRA Y CONSERVACI N EI tipo de muestra est representado por el suero recogido normalmente de la vena y manejado con apropiadas precauciones como reguerido por la buena pr ctica de laboratorio El suero fresco se puede conservar a 2 8 C Para conservaciones m s largas congelar 20 C y deshelar hasta un maximo de veces La calidad de la muestra puede ser seriamente afectada por la contaminaci n microbiana gue conduce a resultados err neos No utilizar muestras muy lip micas ict ricas hemolizadas o contaminadas Si no es posible recoger una muestra nueva las muestras pueden ser aclaradas por medio de filtraci n 0 45 um o centrifugaci n 3000 rpm x 109 EI test no se puede aplicar a plasma humano 8 PROCEDIMIENTO DEL TEST M todo Manual Preparar el n mero requerido de tiras Preparar el tamp n de lavado diluyendo el
119. e testet i nagot av fallen 14 DIAGNOSTISK KANSLIGHET OCH SPECIFICITET Vid en klinisk studie som genomf rdes i ett sjukhuslaboratorium analyserades 264 prover varav 47 var negativa och 217 positiva Proverna analyserades med en annan kommersiell immunoenzymatisk metod Metoderna uppvisade 100 verensst mmelse bade f r positiva och negativa prover Testkitet Platelia CMV IgG ger 100 kanslighet och specificitet Svensk 15 PRECISION Tabell 2 Precision inom k rning utf rt p 3 olika partier Gr nsv Partinr Partinr Partinr rde 104 105 106 n 21 OD 0 453 0 374 0 433 CV 4 62 4 73 4 07 Tabell 3 Precision mellan k rningar EU ml K rning Prov K rning I K rning Il 111 CV nr 1 12 6 17 5 17 6 18 nr 2 78 5 87 5 96 3 10 16 FELS KNING PROBLEM M JLIG ORSAK ATGARD Ogiltig k rning alla negativa Ett eller flera reagenser har inte tillsatts eller tillsattes i fel ordning Kontrollera testforfarandet Se efter om det finns oanvanda l sningar Upprepa testet Icke reaktiv platta Kontrollera koden p plattans f rpackning r tt kod anges under punkt 4 i bipacksedeln Kontrollera om den oanv nda plattan har utsatts f r fukt Torkmedlet kiselgel maste vara ljust gult Upprepa testet Ogiltig k rning alla positiva Kontaminering av substrat Ta nytt substrat Bristf llig tv ttning Kontrollera att t
120. edenia kalibr tor 0 Stabilita neotvoren v robok ulo en pri teplote 2 8 C je stabiln a do exspir cie Ref 91010 BRD Slovensky WASH BUF 10x PREM VAC ROZTOK 10X PF93603 1 x 100 ml IZAMENITE N MEDZI SARZAMI Obsah 10x koncentrovan fyziologick roztok pufrovany fosfatmi obsahuje 0 5 Brij Pr prava Prem vac roztok o pracovnej koncentr cii pripravte narieden m pr slu n ho objemu v pomere 1 10 Ak s pr tomn kry t ly rozpustite ich pri 37 C SAMP DIL 50x RIEDIACI ROZTOK 50X PF93601 1 x 4 5 ml Na riedenie vzoriek s ra ZAMENITE N MEDZI SARZAMI Obsah 50x koncentrovan roztok s obsahom 0 05 fenolu a 0 02 Bronidoxu Pr prava Riediaci roztok o pracovnej koncentr cii pripravte narieden m pr slu n ho objemu v pomere 1 50 v prem vacom roztoku SUBS TMB SUBSTR T PF93619 12 ml Pripraven na pou itie ZAMENITE N MEDZI AR AMI Obsah Tetramethylbenzid n 0 26 mg ml a peroxid vod ka 0 01 stabilizovan v citr tovom pufri 0 05 mol l pH 3 8 H S0 0 3 M ZASTAVOVAC ROZTOK PF93602 1 x 16 ml ZAMENITE N MEDZI AR AMI 0 3 mol l H2SO v roztoku pripravenom na pou itie SAMOLEPIACA F LIA 2 POLYETYL NOV S OK 1 MATERI L POTREBN NA USKUTO NENIE TESTU KTOR NIE JE S AS OU DOD VKY Inkub tor s regul ciou teploty na 37 C Spektrofotometer na mikrotitra n platni ky vlno
121. em de to metoder b de for de positive og de negative prover S ttet med Platelia CMV IgG tilbyder 100 sensitivitet og specificitet 15 PR CISION Tabel 2 Pr cision under testkorsel udfort p 3 forskellige partier Cut off Parti Parti Parti n 21 N 104 N 105 N 106 O D 0 453 0 374 0 433 VK 4 62 4 73 4 07 Tabel 3 Preecision mellem testkorsler EU ml Prove k rsel korsel ll k rsel Ill VK n 1 12 6 17 5 17 6 18 n 2 78 5 87 5 96 3 10 16 HJZELP TIL FEJLFINDING PROBLEM MULIG KILDE TEST ELLER HANDLING Ugyldig kersel alle negative En eller flere reagenser blev ikke tilfojet eller blev tilfojet i forkert reekkefolge Kontroller proceduren igen Kontroller om der er ubenyttede oplgsninger Gentag testen Ikke reaktiv plade Kontroller koden pa pakken med pladen se den korrekte kode i afsnit 4 pa pakkens indlaegsseddel Kontroller om der er fugtigt pa den ubrugte plade kiselgelen skal vaere lysegul Gentag testen Ugyldig korsel alle positive Kontamination af substrat Tag ny maengde substrat Utilstreekkelig vask Kontroller at vaskeudstyret fungerer korrekt D rlig praecision Ufuldstaendig vask af brande Kontroller at vaskeudstyret fungerer korrekt Utilstreekkelig opsugning af Kontroller at vaskeudstyret fungerer brande korrekt Pipetteringsfejl Kontroller pipettefunktionen For
122. en carefully before use The guality of the sample can be seriously affected by microbial contamination which leads to erroneous results Strongly lipemic icteric or contaminated samples should be avoided If a new sample cannot be obtained such samples should be clarified by filtration 0 45 um or centrifugation Human plasma cannot be used in the test 8 TEST PROCEDURE Manual Technique Prepare the required number of strips Prepare the washing buffer by diluting the Rinsing Buffer 10x 100 mL 900 mL H20 Prepare the required diluent for samples by adding 1 part of Diluent 50x to 49 parts of the diluted washing buffer example 2 mL 98 mL of diluted washing buffer Dilute samples 1 101 distributing 10 uL of serum into 1 mL of diluent Dispense 100 uL of each diluted sample per well duplicate testing is recommended Place UNDILUTED calibrators if possible in duplicate in a strip 100 pL in each well Leave one well for the blank performed using 100 HL of the substrate mixture Wells are covered with protective film and incubated for 45 minutes at 37 C After washing four times for 30 seconds 300 ul add 100 uL of conjugate to each well and incubate again for 45 minutes at 37 C covering the wells with the protective film The plate is washed again 4 times as described above Finally the substrate is distributed 100 uL well After 15 minutes at room temperature the enzymatic reaction is stopped with 100 pL of Stop So
123. ent Aspiration insuffisante des puits S assurer que le laveur fonctionne correctement Erreur du pipetage S assurer que la pipette fonctionne correctement Addition des r actifs trop longue Eviter le dess chement de la plaque apr s la phase de lavage Ajouter imm diatement les r actifs Pr sence de bulles d air Eviter la formation des bulles d air pendant le pipetage Parcours optique pas propre Contr ler la source lumineuse pour la pr sence d impuret s Essuyer le fond de la plaque avec du papier D veloppement de la couleur insuffisante Temps ou temp rature d incubation pas correcte V rifier le contr le de la temp rature et du temps d incubation Suivre attentivement les instructions d utilisation Volume incorrect de substrat additionn la plague Contr ler le fonctionnement de la pipette 17 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1 G B Wisdom Enzyme Immunoassay Clin Chem 22 1243 1976 H O Kangro Cytomegalovirus serology does Immunotherapy 1 91 1987 3 Grint P C A et al Screening tests for antibodies to cytomegalovirus an evaluation of five commercial products J Clin Pathol 38 1059 1985 4 M Musiani et al Rapid detection of antibodies against cytomegalovirus induced immediate early and early antigens by an enzyme linked immunosorbent assay J Clin Pathol 37 122 1984 5 F de Ory et al Serological diagnosis of cyt
124. er skal materiale af human oprindelse altid handteres som potentielt smittefarligt Alle forholdsregler som normalt er en del af god laboratoriepraksis bor folges ved handtering af materiale af human oprindelse Dansk Sundheds og sikkerhedsmeessige oplysninger 1 2 Undg at pipettere med munden Anvend engangshandsker og ojenbeskyttelse ved h ndtering af prover og ved udf relse af analyser Vask h nderne grundigt bagefter F lgende reagenser indeholder en lav koncentration af skadelige eller lokal irriterende stoffer a Rensebufferen indeholder vaskemidler b Konjugatet indeholder fenol c Substratet er en syre d Kontrolprgverne indeholder 0 09 natriumazid som kan reagere med bly eller kobberrgr og danne hojeksplosive metalazider Fortynd med store maengder vand for at undg dette Hvis reagenserne kommer i kontakt med huden eller gjnene skal omr det vaskes grundigt med vand Varigt udstyr skal steriliseres efter brug Den foretrukne metode er autoklavering i en time ved 121 C Engangsudstyr ber autoklaveres eller destrueres Svovlsyre der kr ves til stopoplasningen og saltsyre til afvaskning af glas er tsende og ber derfor h ndteres med den nodvendige forsigtighed Vask grundigt med vand hvis disse v sker kommer i kontakt med huden eller gjnene Neutraliseret syre og andet flydende affald skal dekontamineres ved at tilfaje en tilstreekkelig maengde natriumhypochlorit for at opn en slutkoncentration p mindst
125. erd nnter Waschpuffer Verd nnen Sie die Proben 1 101 indem Sie 10 ul der Probe 1 0 ml verd nntes Diluent zuf gen Lassen Sie eine Vertiefung well f r den Substratleerwert frei 100 ul der Kalibratoren in je eine Vertiefung pipettieren 100 pl der verd nnten Proben in je ein Well Doppelbestimmung pipettieren Die Wells mit Folie abdecken und 45 Minuten bei 37 C inkubieren 4 mal mit 0 3 ml verd nntem Waschpuffer waschen mit jeweils 30 Sekunden Einwirkzeit 100 ul Konjugat in alle Wells pipettieren au er Substratleerwert Die Wells mit Folie abdecken und 45 Minuten bei 37 C inkubieren 4 mal mit 0 3 ml verd nntem Waschpuffer waschen mit jeweils 30 Sekunden Einwirkzeit 100 ul Substrat in alle Wells pipettieren auch Substratleerwert 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren 100 pl Stop Solution in alle Wells pipettieren auch Substratleerwert Die Extinktion bei 450 nm oder 450 620 innerhalb von 30 Minuten messen Wiederholen Sie die Messung bei 405 nm falls einige ODs ber 2 000 liegen 9 TESTSCHEMA CYTOMEGALOVIRUS IgG SCHRITT 1 100 ul der verd nnten Probe Blank Reagenz Kalibratoren in die entsprechenden Wells pipettieren 45 Min bei 37 C inkubieren 4 mal waschen 300 ul SCHRITT 2 100 uL Konjugat in alle Wells pipettieren 45 Min bei 37 C inkubieren 4 mal waschen 300 ul SCHRITT 3 100 ul Substrat in alle Wells pipettieren 15 Min bei Raumtemperatur SCHRITT 4 100 uL Stoppl sung hinzuf gen
126. eures 2 000 PROCEDURE QUANTITATIVE Pour la proc dure quantitative il faut utiliser les 6 calibrateurs calibrateurs 0 5 0 0 5 1 5 10 et 20 Ul ml si possible en double Distribuer 100 ul de chaque calibrateur non dilu dans la microplaque puis 100 pl des chantillons dilu s Le reste de la proc dure est identique celle du test qualitatif Ref 91010 BRD Francais 9 RESUME DU MODE OPERATOIRE PLATELIA CMV IgG 1 re tape Mettre 100 ul de s rum dilu ou de contr les calibrateurs dans les puits de la microplaque Incuber pendant 45 mn 37 C Laver 4 fois pendant 30 secondes 300 yl g me tape Mettre 100 pl du conjugu dans les puits Incuber pendant 45 mn 37 C Laver 4 fois pendant 30 secondes 300 ul geme tape Mettre 100 ul du substrat dans les puits Incuber pendant 15 mn T A qeme tape Ajouter la solution d arr amp t 100 ul dans chaque puits Lire la densit optique 450 nm ou 450 620 nm dans les 30 minutes 10 CRITERES DE VALIDATION DU TEST 1 CONTROL Calibrateur 0 la D O du contr le n gatif doit tre inf rieure a 0 6 fois la D O du Calibrateur 2 2 La D O du Calibrateur 2 doit tre gt 0 2 450 nm La DO du Calibrateur 2 doit tre sup rieure ou gale 0 160 450 620 nm 3 La D O du Calibrateur 5 doit tre sup rieure 1 2 11 INTERPRETATION DES RESULTATS RESULTATS QUANTITATIFS Lire les absorptions des calibrateurs 450
127. f mazidokat k pezhet Ki nt s ut n b v zzel mossuk t a lefoly t Ha b rmelyik reagens a b rre vagy a szembe ker l azonnal mossuk le az rintett ter letet b v zzel A t bbsz r felhaszn lhat eszk z ket alkalmaz suk ut n sterilezni kell Javasolt m dszer autokl vozzuk 1 r n t 121 C on Az eldobhat eszk z ket autokl vozzuk vagy gess k el A le ll t oldatban tal lhat k nsav s az veg ru mos s hoz alkalmazott s sav korroz v ez rt el vigy zattal kezelj k Ha szembe vagy b rre ker lnek az rintett testr szt azonnal mossuk le alaposan b v zzel A semleges tett savakat s egy b folyad kokat olyan mennyis g n trium hipoklorit hozz ad s val dekontamin ljuk hogy annak v gs koncentr ci ja legal bb 1 0 os legyen 30 perces 1 os hypos ztat s elegend lehet a hat sos fert tlen t shez A ki ml tt potenci lisan fert z anyagokat sz r pap rral azonnal fel kell itatni s az elszennyez d tt fel leteket pl 1 0 os n trium hipokloritos szivaccsal le kell t r lni a munka folytat sa el tt Savas folyad kok fert tlen t s hez ne haszn ljunk n trium hipokloritot csak a fel letet sz razra t rl se ut n A ki ml tt folyad kok eltakar t s hoz haszn lt eszk z ket bele rtve a v d keszty t is mint biol giailag potenci lisan vesz lyes hullad kot rtalmatlan tani kell N trium hipokloritot tartalmaz anyagokat ne autokl vozzunk Analit
128. gloves should be disposed of as potentially biohazardous waste Do not autoclave materials containing sodium hypochlorite Analytical precautions 1 11 12 Allow all reagents and samples to come to room temperature 18 30 C before use Immediately after use return reagents to the recommended storage temperature It is important to work at the correct temperature Check that the thermostat does not go below 35 C or over 39 C Open the envelope containing the strips after at least Y hr at room temperature Do not use the reagents beyond the stated expiry date Microbiological contamination of reagents must be avoided as this may reduce the life of the product and cause erroneous results Do not modify the Test Procedure or substitute reagents from other manufacturers or other lots unless the reagent is stipulated as interchangeable Do not reduce any of the recommended incubation times Any glassware to be used with the reagents should be thoroughly washed with 2M hydrochloric acid and then rinsed with distilled water or high quality deionized water Do not expose reagents to strong light or hypochlorite fumes during storage or during incubation steps Do not allow wells to become dry during the assay procedure Care must be taken not to cross contaminate reagents It is important that pipettes are dedicated for exclusive use with the various reagents Care should be taken to avoid touching or splashing the rim of the well with conjugate
129. icionando 1 parte de Diluente 50x a 49 partes da solu o tamp o de lavagem dilu da exemplo 2 ml 98 ml do tamp o de lavagem dilu do Diluir as amostras 1 101 distribuindo 10 uL de soro em 1 ml de diluente Distribuir 100 ul de cada amostra dilu da por po o recomenda se a realiza o do teste em duplicado Colocar os calibradores N O DILU DOS se poss vel em duplicado numa tira 100 ul em cada po o Deixar um po o vazio preparado utilizando 100 pl da mistura de substrato Cobrir os pogos com fita adesiva e incubar durante 45 minutos a 37 C Depois de quatro lavagens durante 30 segundos 300 ul adicionar 100 ul do conjugado a cada po o e incubar de novo durante 45 minutos a 37 C cobrindo os pogos com a pelicula de protecc o A placa novamente lavada 4 vezes como acima descrito Finalmente distribuir o substrato 100 ul poco Ap s 15 minutos temperatura ambiente parar a reac o enzim tica com 100 pl de Solu o de Paragem A absorv ncia D O lida a 450 nm ou 450 620 nm no prazo de 30 min Repetir a leitura a 405 nm caso existam DO superiores a 2000 9 Esquema do Procedimento de Teste para o CITOMEGALOVIRUS IgG T cnica Manual PASSO 1 Colocar 100 ul de amostra diluida controlos nos po os das tiras Incubar durante 45 min a 37 C Lavar 4 vezes 300 ul PASSO 2 Adicionar 100 ul de conjugado em cada pogo Incubar durante 45 min a 37 C Lavar 4 vezes 300 ul PASSO 3 Adicionar 100 ul
130. idoxu P prava Redici roztok o pracovn koncentraci p ipravte na ed n m p slu n ho objemu v pom ru 1 50 v prom vac m roztoku SUBS TMB SUBSTR T PF93619 12 ml Hotov k pou it ZAM NITELN MEZI SARZEMI Obsah Tetramethylbenzidin 0 26 mg ml a peroxid vod ku 0 01 stabilizovan v citr tov m pufru 0 05 mol l pH 3 8 H2SO40 3M ZASTAVOVAC ROZTOK PF93602 1 x 16 ml ZAM NITELN MEZI AR EMI 0 3 mol l H2SO4 v roztoku hotov m k pou it P ILNAV F LIE 2 _ POLYETHYLENOVY SACEK 1 MATERI L NUTN K PROVEDEN TESTU KTER NEN SOUC ST DOD VKY Inkub tor s regulaci teploty na 37 C Spektrofotometr pro mikrotitra n desti ky vlnov d lka 450 nm nebo 450 620 nm a 405 nm s linearitou do OD gt 2 000 Prom va ka mikrotitra n ch desti ek p ednostn pro promyvani o objemech 225 375 ul Destilovan nebo deionizovan voda Obvykl laboratorn sklo v lce zkumavky atd Mikropipety pro p esn pipetov n 10 100 a 1000 pl roztoku Rukavice na jedno pou it Stopky Roztok chlornanu sodn ho 5 N doby na odkl d n potenci ln infek n ho materi lu Absorp n pap r 5 UCHOV V N A STABILITA REAGENCI Reagencie mus b t uchov v ny pfi 2 8 C Datum exspirace je uvedeno na ka d slo ce a na t tku krabice Po otevreni nebo po priprav maj reagencie omezen
131. if si le ratio est sup rieur a 1 2 Douteux si le ratio est compris entre 0 8 et 1 2 N gatif si le ratio est inf rieur a 0 8 Si le r sultat est douteux r p ter le test Si le r sultat est de nouveau douteux r aliser le test sur un nouveau pr l vement de sang 12 LIMITES DE LA METHODE Un s rum obtenu pendant la phase aigu de l infection quand seulement les anticorps IgM sont pr sents peut tre n gatif avec cette m thode A la difference du test en IgM inactivation par la chaleur du s rum en examen ne donne pas lieu a des r sultats erron s Le niveau des IgM anti Cytom galovirus doit tre d termin en utilisant le coffret Platelia CMV IgM Alternativement un deuxi me chantillon pr lev 8 14 jours plus tard devrait tre contr l en parall le pour valuer l volution du titre des anticorps IgG Le diagnostic ne doit pas se fonder seulement sur les r sultats biologiques mais doit aussi prendre en compte ensemble des donn es cliniques 13 SPECIFICITE ANALYTIQUE 23 chantillons de s rum n gatifs en anticorps anti CMV contenant des IgG anti Rub ole Epstein Barr Herpes Simplex Rougeole et Oreillons ont t test s Aucune interf rence n a t observ e 14 SENSIBILITE ET SPECIFICITE DIAGNOSTIQUES Les performances de Platelia CMV IgG ont t valu es dans un laboratoire hospitalier sur 264 chantillons 47 n gatifs et 217 positifs et compar es a une autre trousse imm
132. ikai el r sok 1 Haszn latba v tel el tt hagyjuk szobah m rs kletre 18 30 C melegedni a reagenseket s a mint kat K zvetlen l a felhaszn l s ut n tegy k vissza a reagenseket az aj nlott t rol si h m rs klet helyre Nagyon fontos hogy a megfelel h m rs kleten dolgozzunk Biztos tsuk hogy az inkub tor h m rs klete ne cs kkenjen 35 C al s ne emelkedjen 39 C f l A tesztcsikokat tartalmaz tasakot csak az ut n bontsuk fel hogy az m r legal bb 75 r t allt szobah m rs kleten Ne haszn ljunk lej rt szavatoss g reagenseket gyelj nk arra hogy a reagensekbe ne ker lhessenek mikroorganizmusok mert ez ler vid theti a term k lettartam t s hamis eredm nyeket okozhat Ne v ltoztassunk a tesztprotokollon s ne p toljuk a reagenseket m s gy rt t l sz rmaz vagy m s gy rt si sorozatba tartoz term kekkel kiv ve ha azok kifejezetten csereszabatoss ga garant lt Ne r vid ts k le az inkub l si id ket A reagensekhez haszn lt b rmilyen veg rut 2M s savval alaposan t kell mosni majd desztill lt v zzel vagy j min s g ionmentes v zzel ki bl teni gyelj nk arra hogy t rol skor vagy inkub l s sor n a reagenseket ne tegy k ki er s f ny hat s nak vagy hipoklorit g z knek 6 Ne hagyjuk besz radni a tesztlyukakat a m veletek sor n 7 gyelj nk arra hogy ne k vetkezhessen be keresztszennyez d s a reagensek k z tt Fo
133. j c informace o n sleduj c ch bodech instalace a specifick pot eby z sady pokyny upozorn n a rizika souvisej c s pou it m Ref 91010 BRD esky specifikace v robce a innost pristroj servis a dr ba 7 A UCHOV V N VZORK Jako vzorek se pou v s rum odebran b n m zp sobem z ly a zpracovan za dodr en v ech pravidel kter vy aduje spr vn laboratorn praxe S rum m e b t uchov v no bu erstv po dobu a 4 dn p i 2 8 C nebo zamra en po del dobu p i 20 C p i em m e b t zamra eno a rozmra eno maxim ln 3 x Rozmra en vzorky je nutn p ed pou it m pe liv prot epat Kvalita vzork m e b t v znamn ovlivn na mikrobi ln kontaminac kter vede k chybn m v sledk m Siln lipemick ikterick nebo kontaminovan vzorky se nesm pou vat Jestli e nen mo n z skat nov vzorek mus b t takov vzorky vy e eny filtrac 0 45 um nebo centrifugac Test nelze prov d t s lidskou plazmou 8 PRACOVN POSTUP Manu ln technika P ipravte si po adovan po et strip P ipravte prom vac roztok o pracovn koncentraci na ed n m 10x koncentrovan ho prom vac ho roztoku 100 ml 900 ml H20 P ipravte po adovan ed c roztok pro vzorky sm ch n m 1 d lu 50x koncentrovan ho ed c ho roztoku a 49 d l na ed n ho prom vac ho roztoku p klad 2 ml 98 m
134. j v s rga sz n intenzit s t lemezleolvas fotom terrel hat rozzuk meg 4 AKIT TARTALMA S A REAGENSEK ELK SZ T SE A reagensek mennyis ge 96 meghat roz sra elegend Haszn latba v tel el tt hagyjuk szobah m rs kletre melegedni a reagenseket MT PLATE MICROPLATE Cytomegalov russal bevont tesztcs kok 12x8 tesztlyuk Alkalmaz s Az azonos t st szolg l k dsz mmal C majd lotsz m ellent tes oldal n nyissuk fel a csomagot Vegy k ki a keretet s a sz ks ges sz m tesztcs kot a f li b l A f l sleges cs kokat tegy k vissza a szilikag lt tartalmaz polietil n tasakba nyomjuk ki bel le a leveg t majd a z r r sz sszenyom s val l gmentesen z rjuk le CAL KALIBR TOR OLDATOK 5 x 1 6 ml Tartalma ismert koncentr ci j Anti CMV IgG t tartalmaz h g tott hum n sz rum 0 01 mol l foszf t pufferben amely 1 BSA t s 0 09 n trium azidot tartalmaz H g t s n lk l azonnal felhaszn lhat Az rt keket IU ml ben vagy EU ml ben I 11 fejezet tsz m t si t bl zat fejezhetj k ki A 2 es kalibr tor oldat 1 IU ml vagy 10 EU ml felel meg a cut off rt knek s a kvalitat v kimutat sn l is haszn lhatjuk A kalibr tor sorozat rt kei a k vetkez k 0 5 1 5 10 20 IU ml a WHO ltal javasolt nemzetk zi standarddal titr lva Sz ne a kalibr tor oldatok sz nintenzit sa ar nyos a megfelel ellenanyag titerrel CONJ KONJUG T 1x 16 ml Tartalma pero
135. l na ed n ho prom vac ho roztoku Na e te vzorky v pom ru 1 101 p id n m 10 ul s ra do 1 ml ed c ho roztoku Do jednotliv ch jamek napipetujte po 100 ul od ka d ho ed n vzorku doporu uje se testovat vzorky dvojmo Do jednoho stripu napipetujte pokud mo no dvojmo NE ED N kalibr tory 100 ul do ka d jamky Ponechte jednu jamku pr zdnou pro slep pokus tvo en 100 pl substr tov ho roztoku Jamky zakryjte ochrannou f li a inkubujte 45 minut p i 37 C Promyjte ty ikr t po dobu 30 sekund 300 ul napipetujte do ka d jamky 100 pl konjug tu zakryjte jamky ochrannou f li a inkubujte znovu po dobu 45 minut p i 37 C Desti ky znovu ty ikr t promyjte dle v e uveden ho postupu Pot napipetujte do ka d jamky 100 ul substr tu Po 15 minut ch p i pokojov teplot zastavte enzymatickou reakci p id n m 100 pl zastavovac ho roztoku Absorbance OD se m do 30 minut p i 450 nm nebo p i 450 620 nm Jestli e je OD vy ne 2 000 prove te m en znovu p i 405 nm 9 Sch ma pracovn ho postupu pro soupravu CYTOMEGALOVIRUS IgG Manu ln technika KROK 1 Do jednotliv ch jamek desti ky napipetujte po 100 ul na ed n ho vzorku nebo kontroly Inkubujte 45 minut p i 37 C Promyjte 4krat 300 ul KROK 2 Do ka d jamky napipetujte 100 ul konjug tu Inkubujte 45 minut p i 37 C Promyjte 4 x 300 ul KROK 3 Do ka d jamky napipetujte 100 pl subst
136. ld til EU direktiv kan fas ved henvendelse til den lokale Bio Rad leverandgr Bio Rad Ml Bio Rad C 0459 3 boulevard Raymond Poincare 12 2004 92430 Marnes la Coquette France Tel 33 0 1 47 95 60 00 Fax 33 0 1 47 41 91 33 Svensk CID m PLATELIA CMV IgG 96 TESTS 72680 ENZYMIMMUNMETODE TIL KVALITATIV OG KVANTITATIV BESTEMMELSE AF IgG ANTISTOFFER MOD CYTOMEGALOVIRUS HUMANT SERUM Dansk 10 11 12 13 14 15 16 17 INDHOLDSFORTEGNELSE FORM L OPSUMMERING OG FORKLARING AF TESTEN TESTPRINCIP INDHOLDET AF S TTET OG KLARG RING AF REAGENSER OPBEVARING OG STABILITET AF REAGENSER FORHOLDSREGLER TYPER OG OPBEVARING AF PR VER TESTPROCEDURE SKEMA OVER TESTPROCEDUREN VALIDERING AF TEST FORTOLKNING AF RESULTATER PROCEDURENS BEGR NSNINGER ANALYTISK SPECIFICITET DIAGNOSTISK SENSITIVITET OG SPECIFICITET PR CISION FEJLFINDING REFERENCER Dansk 1 FORM L ENZYMIMMUNMETODE TIL KVALITATIV OG KVANTITATIV BESTEMMELSE AF IgG ANTISTOFFER MOD CYTOMEGALOVIRUS HUMANT SERUM 2 OPSUMMERING OG FORKLARING AF TESTEN Cytomegalovirus er en herpesvirus der overfgres ved test menneskelig kontakt de fleste tilfeelde er der ingen synlige infektionssymptomer Virussen er dog yderst farlig og ka
137. lo c II substrato acido d calibratori contengono Sodio Azide 0 09 che con piombo e rame pu formare depositi altamente esplosivi di metallo azidi diluire con molta acqua per la sua eliminazione Se un reagente viene a contatto con la pelle o con gli occhi lavare abbondantemente con acqua Le apparecchiature non disposable devono essere sterilizzate dopo l uso ponendo preferibilmente in autoclave per 1 h a 121 C i disposables devono essere autoclavati o inceneriti L acido solforico contenuto nello Stop Solution e l acido cloridrico usato per lavare la vetreria sono corrosivi tali sostanze devono essere adoperate con cautela In caso di contatto con la pelle o gli occhi lavare abbondantemente con acqua Acidi neutralizzati ed altri rifiuti liquidi devono essere disinfettati aggiungendo sodio ipoclorito in un volume sufficiente da ottenere una concentrazione finale almeno dell 1 Un esposizione al sodio ipoclorito all 1 per 30 minuti dovrebbe essere sufficiente per garantire una disinfezione efficace Eventuali versamenti di materiali potenzialmente infetti devono essere rimossi immediatamente con carta assorbente e la zona inquinata dovr essere pulita per esempio con sodio ipoclorito all 1 prima di proseguire il lavoro Se presente un acido il sodio ipoclorito non deve essere usato prima che la zona sia stata asciugata Tutti i materiali utilizzati per pulire eventuali versamenti accidentali compresi guanti devono essere scar
138. lts of the 6 calibrators and comparing the OD of the sample with the curve obtained Table 1 Calibrator Values in arbitrary and international units EU mL IU mL Calibrator 0 0 0 Calibrator 1 5 0 5 Calibrator 2 10 1 Calibrator 3 50 5 Calibrator 4 100 10 Calibrator 5 200 20 The degree of immunity can be interpreted as follows IMMUNE when the anti Cytomegalovirus IgG concentration in the sample is gt 12 EU mL or 1 2 IU mL NON IMMUNE when the anti Cytomegalovirus concentration is lt 8 EU mL or lt 0 8 IU mL DOUBTFUL if the result is between the two values In this case it is advisable to repeat the test in duplicate QUALITATIVE RESULTS Calculate the ratio between the O D value of the sample and that of the Cut off Calibrator 2 The sample is considered Positive if the ratio is gt 1 2 Doubtful gt 0 8 c 1 2 Negative if the ratio is c 0 8 If the result is doubtful repeat the test If it remains doubtful collect a new serum sample 12 LIMITATIONS OF THE PROCEDURE A serum sample obtained during the acute phase of infection when only IgM antibodies are present may be negative by this procedure Heat inactivation of the test serum does not give rise to erroneous results in the determination of anti CMV IgG as in the case of anti CMV IgM The Cytomegalovirus IgM level should be determined using the Platelia CMV IgM kit Alternatively a second serum sample obtained 8 14 days later should be tested in parallel
139. lution The absorbance O D is read at 450 nm or 450 620 nm within 30 min Take the reading again at 405 nm if there are OD higher than 2 000 9 Scheme of Test Procedure for CYTOMEGALOVIRUS IgG Manual Technique STEP 1 Place 100 uL of diluted samples calibrators to the wells of the strips Incubate for 45 min at 37 C Wash 4 times 300 pl STEP 2 Add 100 uL of conjugate to each well Incubate for 45 min at 37 C Wash 4 times 300 pl STEP 3 Add 100 uL of Substrate to each well Incubate for 15 min at R T STEP 4 Add 100 uL of Stop Solution Read absorbance at 450 nm within 30 min 10 TEST VALIDATION 1 CONTROL Calibrator 0 the O D of the negative control must be lt 0 6 times the O D of Calibrator 2 2 The O D of Calibrator 2 must be 2 0 2 at 450 nm gt 0 16 at 450 620 nm 3 The O D of Calibrator 5 must be over 1 2 Ref 91010 BRD English 11 INTERPRETATION OF RESULTS QUANTITATIVE RESULTS Report the OD of the calibrators on a graph after subtracting the OD of the blank lt 0 150 The corresponding titer of the test sample can be obtained by extrapolation NOTE A standard curve must be performed for each run If the O D of any sample or calibrator is over 2 0 take the reading at 405 nm and multiply the value by 3 Conversion of the O D into units mL The anti Cytomegalovirus IgG can be expressed in EU mL arbitrary units or in IU mL proposed anti CMV IgG WHO standard by extrapolating the resu
140. mationen erhalten Installation und besondere Bedarfsartikel Arbeitsprinzip Hinweise zur Testdurchf hrung Vorsichtsma nahmen und Risiken Vorgegebene Spezifikationen des Herstellers und Arbeitsweise des Ger tes Service und Wartung 7 ART UND LAGERUNG DER PROBEN Als Probenmaterial wird Serum eingesetzt das auf die bliche Art aus der Vene unter Ber cksichtigung der Guten Laborpraxis entnommen wird Das frische Serum kann 4 Tage bei 2 8 C oder f r einen l ngeren Zeitraum bei 20 C gelagert werden Die Proben d rfen maximal 3 mal aufgetaut werden Aufgetaute Proben m ssen vor Gebrauch sorgf ltig gesch ttelt werden Die Qualit t einer Probe kann durch mikrobielle Kontamination ernsthaft beeinflusst werden und f hrt zu falschen Ergebnissen Stark lip mische ikterische oder kontaminierte Proben sollten nicht in diesen Assay eingesetzt werden Falls keine neue Probe verf gbar ist sollten solche Proben durch Filtration 0 45 um gekl rt oder zentrifugiert 3000 rpm x 10 werden Es d rfen keine Plasmaproben in diesen Assay eingesetzt werden 8 TESTDURCHF HRUNG Bereiten Sie die ben tigte Anzahl von Teststreifen vor Doppelbestimmung wird empfohlen Bereiten Sie den Waschpuffer vor Verd nnen Sie den Rinsing Buffer 1 10 Beispiel 10 ml 90 ml H20 Bereiten Sie die ben tigte Menge Diluent vor Verd nnen Sie 1 Teil Diluent 50x mit 49 Teilen verd nntem Waschpuffer Beispiel 2 ml Diluent 98 ml v
141. me per interpolazione NOTA Deve essere eseguita una curva standard per ogni seduta Se la D O di un campione o calibratore superiore a 2 0 leggere a 405 nm e moltiplicare il valore per 3 Conversione delle D O in unita mL Le IgG anti CMV di ciascun campione possono essere espresse in unit arbitrarie EU mL o in IU mL anti CMG IgG WHO standard interpolando i valori in D O dei 6 calibratori e confrontando il valore in D O del campione con la curva cos ottenuta La Tabella 1 riporta la conversione tra EU ml e Ul ml Tab 1 Valore dei calibratori in unita arbitrarie e internazionali EU mL IU mL Calibrator 0 0 0 Calibrator 1 5 0 5 Calibrator 2 10 1 Calibrator 3 50 5 Calibrator 4 100 10 Calibrator 5 200 20 II grado di immunit pu essere interpretato come segue IMMUNE quando la concentrazione di IgG Cytomegalovirus nel campione gt 12 EU mL o 1 2 IU mL NON IMMUNE quando la concentrazione di IgG anti Cytomegalovirus lt 8 EU mL o lt 0 8 IU mL DUBBIO quando il valore compreso fra i due valori In tal caso consigliabile ripetere la determinazione in duplicato RISULTATI QUALITATIVI Calcolare il rapporto fra il valore della D O del campione in esame e quello del Cut Off Calibratore 2 Il campione sar giudicato Positivo quando il rapporto gt 1 2 Dubbio gt 0 8 lt 1 2 Negativo quando il rapporto lt 0 8 In caso di risultato dubbio ripetere il test Se il risultato rimane dubbio
142. n tigt werden erhalten Sie ber Ihre lokale Bio Rad Niederlassung Le altre lingue che sono richieste in conformita con le Direttive Europee possono essere ottenute dal locale agente Bio Rad As restantes linguas obrigat rias em conformidade com a Directiva Europeia podem ser obtidas atraves da subsidi ria Bio Rad mais pr xima de si Ovriga spr k som kr vs i enlighet med EG direktivet kan erh llas fran din lokala Bio Rad representant De gvrige sprog som kraeves i henhold til EU direktiv kan f s ved henvendelse til den lokale Bio Rad leverandgr Bio Rad mal Bio Rad C 0459 3 boulevard Raymond Poincar 12 2004 92430 Marnes la Coquette France Tel 33 0 1 47 95 60 00 Fax 33 0 1 47 41 91 33 Greek Cl li PLATELIA CMV IgG 96 TESTU 72680 IMUNOENZYMATICKA METODA KE KVALITATIVNIMU A KVANTITATIVNIMU STANOVEN PROTIL TEK TR DY IgG PROTI CYTOMEGALOVIRU V LIDSKEM S RU Ref 91010 BRD Cesky 10 11 12 13 14 16 17 OBSAH POUZITI KLINICKY VYZNAM PRINCIP TESTU OBSAH SOUPRAVY A PRIPRAVA REAGENCII UCHOVAVANI A STABILITA REAGENCI BEZPECNOSTNI OPATREN A OCHRANA ZDRAV TYP A UCHOVAVANI VZORK PRACOVNI POSTUP SCHEMA PRACOVNIHO POSTUPU VALIDACE TESTU INTERPRETACE VYSLEDKU OM
143. n humanen IgG Antik rpern die mit Meerrettichperoxidase gekoppelt sind Das ungebundene Konjugat wird entfernt und das Peroxidase Substrat zugegeben Die blaue Farbe die sich entwickelt ist proportional zur Konzentration von spezifischen Antik rpern die in der Probe vorhanden sind Wenn die enzymatische Reaktion durch die Zugabe von Schwefels urel sung gestoppt wird kann die entstandenen gelbe Farbe einfach mit einem Mikrotiterplatten Reader gemessen werden 4 INHALT DES KITS UND VORBEREITUNG DER REAGENZIEN Die Reagenzien sind ausreichend f r 96 Bestimmungen Vor Gebrauch auf Raumtemperatur bringen MT PLATE MIKROTITERPLATTE 12x8 Vertiefungen beschichtet mit Cytomegalovirus Gebrauch Die Verpackung an der gegen berliegenden Seite des Codes C plus Chargennummer ffnen und die nicht ben tigten Streifen im beigef gten Plastikbeutel mit dem Silica Gel lagern die Luft herausdr cken und gut verschlie en CAL KALIBRATOREN 5 x 1 6 ml Inhalt Verd nntes Humanserum mit bekannten Konzentrationen von Anti CMV IgG Antik rpern in 0 01 mol l Phosphatpuffer mit 1 BSA und 0 09 Natriumazid fl ssig gebrauchsfertig ohne weitere Verd nnung Die Werte k nnen in IU ml oder EU ml angegeben werden s Umrechnungstabelle Abschnitt 11 Calibrator 2 1 IU ml or 10 EU ml entspricht dem Cut off und kann fur die qualitative Testdurchfuhrung verwendet werden Die Kalibratoren enthalten folgende Konzentrationen 0 5
144. n nem j r t netekkel Mindazon ltal nagyon vesz lyes s legyeng lt immunrendszer emberek eset ben hal los is lehet A terhess g sor n megfert z d tt szeronegat v asszonyok tvihetik a betegs get a magzatra Az esetek 95 aban ez t netmentesen t rt nik de egyes jsz l ttekben s rgas got m j s l pmegnagyobbod st s pszihomotoros retard ci t id zhet el Ez rt nagyon fontos a beteg immunst tusz nak meghat roz sa s a szerokonverzi vizsg lata Az anti Cytomegalov rus IgG titer szignifik nsan emelked se a k zelm ltban bek vetkezett fert z sre vagy lappang fert z s ki jul s ra utal 3 AVIZSG LAT ALAPELVE A teszt ELISA technik n Enzyme linked Immunosorbent Assay alapul 1 7 A szil rd f zis r szlegesen tiszt tott s inaktiv lt cytomegalov rusb l ll antig nnel bor tott 8 tesztlyukas tesztcsik A specifikus immunglobulinok a h g tott hum n sz rummal egy tt t rt n inkub l s sor n kapcsol dnak az antig nhez A nem k t d tt feh rj k elt vol t s ra alkalmazott mos s ut n torma peroxid zzal jel lt hum n IgG monoklon lis antitesteket tartalmaz konjug ttal inkub ljuk A szabadon maradt konjug tot elt vol tjuk majd bem rj k a peroxid z szubsztr tj t A kifejl d k k sz n intenzit sa ar nyos a sz rummint ban tal lhat specifikus antitestek koncentr ci j val Az enzimreakci t k nsav oldat hozz ad s val le ll tjuk s a l tre
145. n vaere dodbringende for patienter med nedsat immunforsvar Serum negative kvindelige patienter som inficeres under en graviditet kan overf re sygdommen til fosteret 95 af tilf ldene sker dette uden symptomer men hos nogle nyf dte kan det f re til gulsot hepatosplenomegali lever og miltforst rrelse og retarderet psykomotorisk udvikling Det er derfor uhyre vigtigt at vurdere patientens immunforsvar og kontrollere for serumkonversion En markant stigning i titeren for anti Cytomegalovirus IgG indikerer en nylig p draget infektion eller genaktivering af en latent infektion 3 TESTPRINCIP Testen er baseret p ELISA teknikken Enzyme linked Immunosorbent Assay 1 7 Antigenet der best r af delvist renset og inaktiveret Cytomegalovirus bindes til den faste fase strips med 8 br nde De specifikke immunglobuliner bindes til antigenet via inkubation med fortyndet humant serum Efter afvaskninger for at fjerne de proteiner der ikke har reageret udf res inkubationen med konjugatet der best r af humane monoklonale IgG antistoffer konjugeret til peberrod peroxidase Det ubundne konjugat fjernes og peroxidasesubstratet tilf res Den bl farve der udvikles er proportional med koncentrationen af specifikke antistoffer i serumpr ven N r den enzymatiske reaktion afbrydes ved at tils tte en svovlsyreoplesning kan den gule farve der udvikles let afl ses ved hj lp af en mikropladeafl ser 4 INDHOLDET AF S TTET OG KLARG RI
146. ne di nuovo ad incubare per 45 min a 37 C coprendo i pozzetti con la pellicola protettiva Si lava di nuovo la piastra per 4 volte come descritto sopra quindi si distribuisce il Substrato 100 uL pozzetto Dopo 15 min a temperatura ambiente si blocca la reazione enzimatica con 100 uL di Stop Solution Si legge la Assorbanza O D a 450 nm o 450 620 nm entro 30 min Rileggere a 405 nm se ci sono OD superiori a 2 000 9 Schema del protocollo di prova per CYTOMEGALOVIRUS IgG Tecnica manuale STEP 1 Mettere 100 uL di siero diluito calibratori nei pozzetti dello strip Incubare 45 min a 37 C Lavare 4 volte 300 pl STEP 2 Mettere 100 uL di coniugato per pozzetto Incubare 45 min a 37 C Lavare 4 volte 300 ul STEP 3 Mettere 100 uL di Substrato per pozzetto Incubare 15 min a t a STEP 4 Aggiungere 100 pL di Stop Solution Leggere la D O a 450 nm entro 30 min 10 VALIDAZIONE DEL TEST 1 CONTROL Calibratore 0 la densit ottica D O del controllo negativo deve essere lt 0 6 volte la D O del Calibratore 2 2 La D O del Calibratore 2 deve essere gt 0 2 a 450 nm gt 0 16 a 450 620 nm 3 La D O dello Calibratore 5 deve essere superiore a 1 2 Ref 91010 BRD Italiano 11 INTERPRETAZIONE DEL TEST RISULTATI QUANTITATIVI Riportare in grafico le D O dei calibratori sottratte dalla D O del bianco lt 0 150 in funzione del titolo di ciascun calibratore Ottenere il titolo corrispondente del campione in esa
147. ng Det r viktigt att arbeta i r tt temperatur Kontrollera att termostaten inte st r l gre n 35 C eller h gre n 39 C ppna f rpackningen med remsor efter minst en halvtimme i rumstemperatur Anv nd inte reagenserna efter utgangsdatumet Mikrobiologisk kontaminering av reagenser m ste undvikas eftersom det kan minska produktens livsl ngd och orsaka felaktiga resultat G r inga ndringar i testproceduren och anv nd inte reagenser fran andra tillverkare eller andra partier om inte reagenset uttryckligen ar utbytbart F rkorta inte n gon av de rekommenderade inkuberingstiderna Alla glasvaror som ska anv ndas till reagenserna ska tv ttas noggrant med 2M saltsyra och d refter sk ljas med destillerat vatten eller h gkvalitativt avjoniserat vatten Reagenserna far inte exponeras f r starkt ljus eller hypoklorit nga vid f rvaring eller nar de inkuberas Lat inte brunnarna torka medan analysen pagar Se till att reagenserna inte korskontamineras Det r viktigt att varje pipett anv nds till endast ett reagens Se till att konjugat inte kommer i kontakt med eller spills p brunnens kant Bl s inte p mikroplattorna Vid immunologiska enzymanalyser kan brunnarna l ngst ut p mikroplattan ibland ge felaktiga resultat Effekten kan minimeras genom att fuktigheten kas under inkuberingen Plattorna m ste t ckas ver med lock och inkuberas i 37 C antingen i vattenbad med rack eller fl te som h ller plattorna vid behov eller
148. ntes reagentes cont m baixas concentrac es de subst ncias perigosas ou irritantes a a Solu o Tamp o de Lavagem cont m detergentes b o conjugado cont m fenol c o substrato cido d os controlos cont m 0 09 de Azida de S dio que podem reagir com o chumbo e o cobre das canaliza es formando dep sitos altamente explosivos de azidas met licas diluir com gua abundante para eliminar Se qualquer dos reagentes entrar em contacto com a pele ou os olhos lavar a zona afectada com gua abundante Os dispositivos n o descart veis devem ser esterilizados ap s a utiliza o O m todo preferencialmente recomendado a esteriliza o em autoclave durante 1 h a 121 C os elementos descart veis devem ser esterilizados em autoclave ou incinerados O cido sulf rico necess rio para a Solu o de Paragem e o cido clor drico utilizado na lavagem dos recipientes de vidro s o corrosivos e dever o ser manuseados com os devidos cuidados Em caso de contacto com a pele ou os olhos lavar com gua abundante Os cidos neutralizados e outros res duos l quidos dever o ser descontaminados adicionando um volume de hipocloreto de s dio suficiente para obter uma concentra o final de pelo menos 1 0 Para assegurar uma descontamina o eficaz poder ser necess ria uma exposi o de 30 minutos ao hipocloreto de s dio a 1 Qualquer derramamento de materiais potencialmente infecciosos dever ser eliminado imediatamente por
149. ntos hogy az egyes reagensek bem r s hez k l n pipett t jel lj nk ki 8 Vigy zzunk arra hogy a konjug t ne rjen vagy ne ker lj n a tesztlyuk sz l re Vigy zzunk hogy bepipett z skor ne spricceljen ki az oldat 9 Enzim immunassay sor n olykor fell phet az n peremhat s jelens g amelyet a p ratartalom n vel s vel kell minim lisra cs kkenteni az inkub l s sor n A lemezeket z rjuk le takar f li val s 37 C on inkub ljuk inkub torban vagy megfelel lemeztart val ell tott v zf rd ben Az inkub l s megfelel microplate analiz torban is v gezhet L sd a megfelel berendez s haszn lati tmutat j t Sz ndioxid inkub torokat nem szabad haszn lni 10 A leolvas s el tt gy z dj nk meg arr l hogy a lemez alja tiszta s sz raz s hogy nincsenek bubor kok a folyad k felsz n n 11 Er sen hemoliz lt el gtelen l megalvadt v rb l sz rmaz sav vagy mikroorganizmusokkal szennyezett mint k eset n hib s eredm nyeket kaphatunk 12 Minden alkalmazott k sz l k haszn lati utas t s t alaposan olvassuk el az al bbiak tekintet ben install l s s sz ks ges eszk z k m k d si elv tmutat biztons gi rendszab lyok s kock zatok gy rt specifik ci ja s teljes tm ny adatok jav t s s karbantart s 7 FELDOLGOZHATO MINT K S T ROL SUK Az aj nlott minta rutin elj r s szerint vett v n s v rb l sz rmaz
150. ntration av anti cytomegalovirus IgG gt 12 EU ml eller 1 2 IU ml ICKE IMMUN nar koncentrationen anti cytomegalovirus lt 8 EU ml eller c 0 8 IU ml TVEKSAMT om resultatet ligger mellan de tv v rdena det har fallet rekommenderas att testet upprepas med dubbelprover KVALITATIVA RESULTAT Ber kna kvoten mellan provets och gr nsv rdets OD v rde kalibrator 2 Provet anses som positivt om kvoten r gt 1 2 tveksamt gt 0 8 c 1 2 negativt om kvoten r lt 0 8 Upprepa testet om resultatet r tveksamt Om det fortfarande r tveksamt ska ett nytt serumprov tas 12 TESTETS BEGR NSNINGAR Ett serumprov som tas under infektionens akuta fas n r endast IgM antikroppar r f rekommer kan vara negativt med det h r testet Varmeinaktivering av testserum leder inte till felaktiga resultat vid best mning av anti CMV IgG till skillnad fran best mning av anti CMV IgM Nivan f r cytomegalovirus IgM b r bestammas med testkitet Platelia CMV IgM Alternativt kan ett andra serumprov tas 8 14 dagar senare och testas parallellt f r att p visa en kning i IgG antikroppsniv n Nar testresultatet tolkas b r hansyn tas till patientens historik och information som erhalls med andra diagnostiska metoder 13 ANALYTISK SPECIFICITET 23 prover som var negativa f r CMV men inneh ll IgG antikroppar mot virus som rubella Epstein Barr herpes simplex massling och passjuka testades F rekomst av dessa antikroppar paverkade int
151. nutn minimalizova zv en m vlhkosti v priebehu inkub cie Platni ky musia by zakryt vie kom a inkubovan pri 37 C bu vo vodnom k peli so stojanom alebo plav kom sl iacim pre pr pad potreby na stabiliz ciu platni ky alebo v inkub tore Platni ky je alternat vne mo n inkubova vo schv lenom analyz tore V pr pade z ujmu o z skanie podrobnej ch inform ci si pre tajte pr slu n n vod na pou itie Nesm sa pou va COz inkub tory Dbajte na to aby dno platni ky bolo ist a such a aby pred meran m platni ky neboli na povrchu kvapaliny pr tomn iadne vzduchov bubliny Pou itie silno hemolyzovan ch vzoriek ne plne zrazen ho s ra alebo vzoriek s mikrobiologickou kontamin ciou m e vies ku chybn m v sledkom Ku ka d mu pou van mu n stroju si podrobne pre tajte n vod na pou itie dan ho v robcu ktor v m poskytne dopl uj ce inform cie o nasleduj cich bodoch in tal cia a pecifick potreby Ref 91010 BRD Slovensky z sady pokyny upozornenia a rizik ktor s visia s pouzit m pecifik cia v robcu a innos pr strojov servis a dr ba 7 A UCHOV VANIE VZORIEK Ako vzorka sa pou va s rum odobrat be n m sp sobom zo ily a spracovan pri dodr an v etk ch pravidiel ktor vy aduje spr vna laborat rna prax S rum m e by uchov van bu erstv po dobu a 4 dn pri 2 8 C alebo zamrazen po dlh
152. o clorh drico usado para limpiar la cristaler a son corrosivos utilizar estos materiales con cuidado En caso de contacto con la piel u ojos limpiar con mucha agua Los cidos neutralizados y la otros residuos l quidos se deben disinfectar a adiendo hipoclorito de sodio en un volumen suficiente para obtener una concentraci n final por lo menos del 1 0 Se requiere una exposici n al hipoclorito de sodio al 1 durante 30 minutos para garantizar una desinfecci n eficaz El derrame de materiales potencialmente infecciosos se debe eliminar inmediatamente con papel absorbente y el rea contaminada tendr que ser limpiada por ejemplo con hipoclorito de sodio al 1 0 antes de se que se contin e el trabajo El hipoclorito de sodio no se debe utilizar en derrames que contengan cido antes de que la zona sea limpiada Todos los materiales utilizados para limpiar derrames incluidos los guantes se deben desechar como residuos potencialmente infecciosos No autoclavar materiales que contengan hipoclorito de sodio Precauciones anal ticas 1 Poner todos los reactivos y las muestras a temperatura ambiente 18 30 C antes de su uso Inmediatamente despu s del uso poner los reactivos a la temperatura de conservaci n recomendada Es importante trabajar a la temperatura correcta Compruebe que el termostato no est por debajo de 35 C por encima de 39 C No usar los reactivos despu s de la fecha de caducidad La contaminaci n microbiol gic
153. o de anti citomegalov rus IgG na amostra gt 12 EU ml ou 1 2 IU ml N O IMUNE guando o t tulo de anti citomegalov rus lt 8 EU ml o c 0 8 IU ml DUVIDOSO se o resultado se situa entre os dois valores Neste caso aconselha se repetir o teste em duplicado RESULTADOS QUALITATIVOS Calcular a raz o entre o valor de D O da amostra e o valor cut off Calibrador 2 A amostra considerada Positiva se a raz o for gt 1 2 Duvidosa gt 0 8 lt 1 2 Negativa se a raz o for c 0 8 Em caso de um resultado duvidoso o teste deve ser repetido Se mesmo assim se mantiver duvidoso recolher uma nova amostra de soro 12 LIMITA ES DO PROCEDIMENTO Uma amostra de soro obtida durante a fase aguda da infecc o quando existirem apenas anticorpos IgM pode ser negativa segundo este procedimento A inactivac o t rmica do soro de teste nao da origem a resultados err neos na determinac o de anti CMV IgG como acontece com o anti CMV IgM O titulo de citomegalovirus IgM deve ser determinado utilizando o dispositivo Platelia CMV IgM Alternativamente uma segunda amostra de soro obtida 8 14 dias mais tarde dever ser testada em paralelo para determinar um aumento no t tulo de anticorpos IgG O resultado do teste deve ser utilizado em conjunto com as informa es dispon veis a partir da avalia o da hist ria do processo ou de outros procedimentos de diagn stico Portugu s 13 ESPECIFICIDADE ANAL TICA Foram testad
154. o della pipetta Aggiunta dei reagenti troppo lenta Evitare l essiccamento della piastra dopo il lavaggio Aggiungere i reattivi immediatamente Presenza di bolle d aria Evitare la formazione di bolle d aria durante il pipettamento Percorso ottico non limpido Controllare la fonte luminosa per la presenza di sporco Pulire il fondo della piastra con fazzoletto di carta Insufficiente sviluppo di colore Tempo o temperatura di incubazione non corretto Verificare il monitoraggio della temperatura ed il tempo di incubazione Seguire attentamente le istruzioni per l uso Substrato aggiunto in volume inadeguato Controllare il funzionamento della pipetta Ref 91010 BRD Italiano 17 BIBLIOGRAFIA 1 G B Wisdom Enzyme Immunoassay Clin Chem 22 1243 1976 2 H O Kangro Cytomegalovirus serology does it give the answer Serodiagnosis and Immunotherapy 1 91 1987 3 Grint P C A et al Screening tests for antibodies to cytomegalovirus an evaluation of five commercial products J Clin Pathol 38 1059 1985 4 M Musiani et al Rapid detection of antibodies against cytomegalovirus induced immediate early and early antigens by an enzyme linked immunosorbent assay J Clin Pathol 37 122 1984 5 F de Ory et al Serological diagnosis of cytomegalovirus infections comparison of six commercial methods of ELISA Serodiagnosis and Immunotherapy 2 423 1988 6
155. odos Uno o m s reactivos no han sido a adidos o han sido a adidos en secuencia err nea Placa no reactiva Controlar de nuevo el procedimiento Controlar si hay disoluciones que no se hayan utilizado Controlar el c digo del envase de la placa ver punto 4 de la informaci n t cnica para el c digo correcto Controlar la presencia de humedad en la placa no utilizada El gel de s lice debe ser amarillo p lido Repetir el test positivos Serie no v lida todos Contaminaci n del sustrato Recoger una nueva al cuota de sustrato Lavado inadecuado Asegurarse del buen funcionamiento del lavador Escasa precisi n Aspiraci n incompleta de los pocillos Asegurarse del buen funcionamiento del lavador Aspiraci n inadecuada de los pocillos Asegurarse del buen funcionamiento del lavador Error de pipeteado Controlar el funcionamiento de la pipeta Adici n de los reactivos demasiado lenta Evitar la sequedad de la placa despu s del lavado A adir los reactivos inmediatamente Presencia de burbujas Evitar la formaci n de burbujas mientras se pipetea Sistema ptico no limpio Controlar la fuente de luz y el detector para la presencia de suciedad Limpiar el fondo de la placa con papel suave Desarrollo escaso del color Tiempo o temperatura de incubaci n incorrectos Verificar el control de la temperatura y el tiempo de incubaci n Seguir cui
156. omegalovirus infections comparison of six commercial methods of ELISA Serodiagnosis and Immunotherapy 2 423 1988 6 P Dal Monte et al Cytomegalovirus umano Diagnosis 2 67 1990 7 R Ziegalmaier et al ELISA la Ricerca Clin Lab 10 83 1980 Ref 91010 BRD it give the answer Serodiagnosis and Frangais c gt E PLATELIA CMV IgG 96 PRUEBAS 72680 KIT INMUNOENZIM TICO PARA LA DETERMINACI N CUALITATIVA Y CUANTITATIVA DE ANTICUERPOS IgG ANTI CYTOMEGALOVIRUS EN SUERO HUMANO Ref 91010 BRD Espanol 10 11 12 13 14 15 16 17 Ref 91010 BRD RESUMO INDICACIONES DE USO RESUMEN Y EXPLICACION DEL TEST PRINCIPIO DEL METODO COMPONENTES DEL KIT Y PREPARACION DEL REACTIVO CONSERVACION Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS PRECAUCIONES DE USO TIPO DE MUESTRA Y CONSERVACION PROCEDIMIENTO DEL TEST ESQUEMA DEL PROCEDIMIENTO DEL TEST VALIDACION DEL TEST INTERPRETACION DE RESULTADOS LIMITACIONES DEL TEST ESPECIFICIDAD ANALITICA SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DIAGNOSTICAS PRECISION GUIA DE RESOLUCION DE PROBLEMAS BIBLIOGRAFIA Espanol 1 INDICACIONES KIT INMUNOENZIM TICO PARA LA DETERMINACI N CUALITATIVA Y CUANTITATIVA DE ANTICUERPOS IgG ANTI CYTOMEGALOVIRUS EN SUERO HUMANO 2 RESUMEN Y EXPLICACI N DEL TEST EI Cytomegalovirus es un virus herpes que se transmite por estrecho contacto humano La mayoria de los seres humanos resulta infectada de manera asintom tica El
157. on identification Sortir le support et les barrettes n cessaires du papier d emballage et placer les barrettes non utilis es dans le sachet en plastique avec le gel de silice chasser l air et fermer le sachet par pression sur la fermeture CAL CALIBRATEURS 5 x 1 6 ml Composition S rums humains dilu s contenant des quantit s connues d anticorps IgG anti CMV dans un tampon phosphate 0 01 mol l avec 1 de BSA et 0 09 azide de sodium Ils se pr sentent sous forme liquide et sont pr ts l emploi sans autre dilution Les valeurs peuvent tre exprim es en UE ml ou Ul ml voir la section 11 table de conversion Le Calibrateur 2 1 Ul ml ou 10 UE ml correspond au contr le seuil et il peut tre utilis dans l analyse qualitative Les valeurs des calibrateurs sont 0 5 1 5 10 20 Ul ml obtenues par titrage contre le Standard International propos OMS 5 Couleur la couleur des calibrateurs est proportionnelle leur concentration en anticorps CONJ CONJUGUE 1 x 16 ml Composition Anticorps monoclonaux anti lgG marqu s la peroxydase dans un tampon phosphate contenant 0 05 de ph nol et 0 02 de bronidox Pr t l emploi CONTROL IgG CONTROLE NEGATIF IgG PF93910 1 x 1 6 ml INTERCHANGEABLE ENTRE LOTS Composition S rum humain dilu dans un tampon phosphate 0 01 mol l avec 1 de BSA et 0 09 d azide de sodium II se pr sente sous forme liquide pr t l emploi
158. or at f yderligere oplysninger om f lgende punkter installation og s rlige krav betjeningsprincipper instruktioner forholdsregler og risici producentens specifikationer og instrumentets ydeevne service og vedligeholdelse Dansk 7 TYPER OG OPBEVARING AF PROVER Proven best r af serum der er indsamlet p normal vis fra en vene og h ndteret i henhold til reglerne for god laboratoriepraksis Den friske serum kan opbevares 4 dage ved 2 til 8 C eller nedfryses i leengere perioder ved 207C og m maksimalt optos 3 gange Optgede prover skal rystes grundigt far anvendelse Provens kvalitet kan p virkes markant af mikrobiel kontamination hvilket kan give fejlagtige resultater Steerkt lipaemiske ikteriske eller kontaminerede prover bor ikke anvendes Hvis det ikke er muligt at skaffe en ny prove bor s danne prover renses ved filtrering 0 45 um eller centrifugering Humant plasma kan ikke anvendes i testen 8 TESTPROCEDURE Manuel teknik Klargor det pakreevede antal strips Klarger vaskebufferen ved at fortynde rensebufferen 10x 100 ml 900 ml H20 Klargor den p kreevede fortynder til prover ved at tilsaette 1 del fortynder 50x til 49 dele af den fortyndede vaskebuffer f eks 2 ml 98 ml fortyndet vaskebuffer Fortynd pr verne i forholdet 1 101 ved at fordele 10 ul serum i 1 ml fortynder Tils t 100 pl af hver fortyndet prove pr brand dobbelttest anbefales Placer UFORTYNDEDE kalibratorer dobbelt h
159. orp n m pap rem a zasa en m sta se mus p ed dal m pokra ov n m v pr ci ot t nap klad 1 0 chlornanem sodn m P ed pou it m chlornanu sodn ho na m sta pot sn n kyselinou je nutn zasa en m sto nejprve d kladn vysu it Materi ly pou it k o i t n pot sn n ch m st v etn rukavic je nutn likvidovat jako potenci ln biologicky nebezpe n odpad Materi ly obsahuj c chlornan sodn nesm b t autokl vov ny Analytick upozorn n 1 10 12 P ed pou it m nechte v echny reagencie ust lit na pokojovou teplotu 18 30 C Ihned po pou it vra te reagencie na m sto s teplotou stanovenou pro uchov v n Je d le it aby pracovn postup prob hal p i spr vn teplot Zkontrolujte zda v termostatu nen teplota ni ne 35 C nebo vy ne 39 C S ek se stripy ponechejte p ed otev en m nejm n 30 minut p i pokojov teplot Nepou vejte reagencie s pro l m datem exspirace Je nutn zabr nit mikrobiologick kontaminaci reagenci kter by mohla zkr tit ivotnost v robku a v st k chybn m v sledk m Neupravujte pracovn postup a nepou vejte reagencie jin ch v robc nebo reagencie z jin ar e pokud nen u dan reagencie uvedeno e je zam niteln mezi r zn mi ar emi Nezkracujte dnou p edepsanou dobu inkubace Ve ker laboratorn sklo kter bude pou ito pro reagencie mus b t d kladn umy
160. ottenute dal locale agente Bio Rad As restantes linguas obrigat rias em conformidade com a Directiva Europeia podem ser obtidas atrav s da subsidi ria Bio Rad mais pr xima de si vriga spr k som kr vs i enlighet med EG direktivet kan erh llas fr n din lokala Bio Rad representant De gvrige sprog som kraeves i henhold til EU direktiv kan fas ved henvendelse til den lokale Bio Rad leverandgr Bio Rad Bio Rad C 0459 3 boulevard Raymond Poincar 12 2004 92430 Marnes la Coquette France Tel 33 0 1 47 95 60 00 Fax 33 0 1 47 41 91 33 Ref 91010 BRD Italiano PLATELIA CMV IgG 96 TESTES 72680 DETERMINAG O QUALITATIVA E QUANTITATIVA DE ANTICORPOS DE CLASSE IgG AO CITOMEGALOVIRUS NO SORO HUMANO PELO METODO IMUNOENZIM TICO Portugu s 10 11 12 13 14 15 16 17 NDICE FINALIDADE DO DISPOSITIVO RESUMO E EXPLICAGAO DO TESTE PRINC PIO DO TESTE CONTEUDO DO DISPOSITIVO E PREPARAGAO DO REAGENTE CONSERVAGAO E ESTABILIDADE DOS REAGENTES PRECAUC ES TIPO E CONSERVAC O DA AMOSTRA PROCEDIMENTO DE TESTE ESQUEMA DE PROCEDIMENTO DE TESTE VALIDAGAO DO TESTE INTERPRETA O DOS RESULTADOS LIMITAGOES DO PROCEDIMENTO ESPECIFICIDADE ANALITICA ESPECIFICIDADE E SENS
161. ou stabilitu REAGENCIE PODM NKY Mikrotitra n desti ka 6 t dn pfi 2 8 C v polyethylenov m s ku Kalibr tory 6 t dn pfi 2 8 C Konjug t 6 tydn pfi 2 8 C Substr t az do data exspirace pfi 2 8 C 1 tyden pfi 15 30 C uchovavejte v temnu Redici roztok pro vzorky hotov k pou it 2 t dny p i 2 8 C Promyvaci roztok 2 t dny p i 2 8 C 5 dn p i 15 30 C Zastavovaci roztok az do data exspirace pfi 2 8 C 6 BEZPECNOSTN OPATREN A OCHRANA ZDRAV POUZE PRO DIAGNOSTIKU IN VITRO Tato souprava obsahuje materi ly lidsk ho p vodu kter byly testov ny a vyk zaly negativn reakci pfi testech na pfitomnost HBs Ag a pfi testech na protil tky proti HIV 1 HIV 2 a anti HCV pomoci metod schv lenych FDA Vzhledem k tomu Ze Z dny diagnosticky test nem ze poskytnout plnou jistotu o nepritomnosti infek n ch agens je nutn zach zet se v emi materi ly lidsk ho p vodu jako s potenci ln infek n mi materi ly Pri pr ci s materi ly lidsk ho p vodu mus b t dodr ov na v echna bezpe nostn opat en kter se b n pou vaj v laboratorn praxi Ref 91010 BRD esky Bezpe nostn pfedpisy a ochrana zdrav 1 2 Nepipetujte sty Pfi zach zen se vzorky a prov d n testu pou vejte rukavice na jedno pou it a ochrann br le Po skon en pr ce si pe liv umyjte ruce N sledujici reagencie obsahuj n zk koncentrace kodliv ch nebo dr
162. r en na likvid ciu sa musia autokl vova alebo sp li Kyselina s rov obsiahnut v zastavovacom roztoku a kyselina chlorovod kov pou van na um vanie laborat rneho skla s leptav kyseliny a je nutn snimi zaobch dza s n le itou opatrnos ou V pr pade kontaktu s ko ou alebo o ami zasiahnut miesto d kladne omyte ve k m mno stvom vody Neutralizovan kyseliny a ostatn tekut odpad musia by dekontaminovan pridan m dostato n ho mno stva chl rnanu sodn ho tak aby kone n koncentr cia chl rnanu sodn ho bola minim lne 1 0 Pre zaistenie innej dekontamin cie je potrebn aby 1 chl rnan sodn p sobil 30 min t V pr pade rozliatia je nutn potenci lne infek n materi l ihne odstr ni absorp n m papierom a zasiahnut miesta sa musia pred al m pokra ovan m v pr ci otrie napr klad 1 0 chl rnanom sodn m Pred pou it m chl rnanu sodn ho na miestach postriekan ch kyselinou je nutn zasiahnut miesta najprv d kladne vysu i Materi ly pou it na o istenie postriekan ch miest vr tane rukav c je nutn likvidova ako potenci lne biologicky nebezpe n odpad Materi ly obsahuj ce chl rnan sodn nesm by autokl vovan Analytick upozornenia 1 10 11 12 Pred pou it m nechajte v etky reagencie vytemperova na izbov teplotu 18 30 C Reagencie ihne po pou it vr te na miesto s teplotou stanovenou pre ich uchov vanie
163. r tu Inkubujte 15 minut p i pokojov teplot KROK 4 Napipetujte 100 ul zastavovac ho roztoku Do 30 minut zm te absorbanci p i 450 nm 10 VALIDACE TESTU 1 KONTROLA Kalibr tor 0 OD negativn kontroly mus b t ni ne 0 6 x OD kalibr toru 2 2 OD kalibr toru 2 mus b t gt 0 2 p i 450 nm gt 0 16 p i 450 620 nm 3 OD kalibr toru 5 mus b t vy ne 1 2 Ref 91010 BRD esky 11 INTERPRETACE VYSLEDK KVANTITATIVNI VYSLEDKY Vyneste do grafu hodnoty OD kalibr tor zmenSen o OD blanku lt 0 150 Odpovidajici titr testovan ho vzorku Ize ziskat extrapolaci POZN MKA Pro ka d b h testu je t eba vytvo it standardn k ivku Je li OD n kter ho vzorku nebo kalibr toru vy ne 2 0 prove te m en p i 405 nm a vyn sobte hodnotu t emi Konverze OD na jednotky ml IgG protil tky proti cytomegaloviru Ize vyj d it v jednotk ch EU ml arbitr n jednotky nebo v IU ml navrhovan standard WHO pro anti CMV IgG na z klad extrapolace v sledk 6 kalibr tor a porovn n OD vzorku se z skanou k ivkou Tabulka 1 Hodnoty kalibr tor v arbitr n ch a mezin rodn ch jednotk ch EU mL IU mL Kalibr tor 0 0 0 Kalibr tor 1 5 0 5 Kalibr tor 2 10 1 Kalibr tor 3 50 5 Kalibrator 4 100 10 Kalibrator 5 200 20 Stav imunity Ize interpretovat takto IMUNN jestli e je koncentrace IgG protil tek proti Cytomegaloviru ve vzorku gt 12 EU ml nebo 1 2
164. ras de soro INTERMUT VEL ENTRE LOTES Conte do Solu o proteica concentrada 50 vezes com adi o de fenol 0 05 e Bronidox 0 02 Preparac o Diluir o volume necess rio 1 50 na soluc o tamp o de lavagem a fim de obter o diluente pronto a usar SUBS TMB SUBSTRATO PF93619 12 ml Pronto a usar INTERMUT VEL ENTRE LOTES Conte do Tetrametilbenzidina 0 26 mg ml e per xido hidrog nio 0 01 estabilizado em tamp o de citrato 0 05 mol l pH 3 8 H SO 0 3 M SOLU O DE PARAGEM PF93602 1 x 16 ml INTERMUT VEL ENTRE LOTES H2SO 0 3 mol l em solu o pronta a usar FITA ADESIVA 2 SACO DE POLIETILENO 1 MATERIAIS NECESS RIOS MAS N O FORNECIDOS Incubadora a 37 C Leitor de microplacas comprimento de onda 450 ou 450 620 nm e 405 nm com linearidade at DO gt 2000 Aparelho de lavagem de microplacas de prefer ncia capaz de distribuir volumes entre 225 375 pl Agua destilada ou desionizada Recipientes de vidro habitualmente utilizados em laborat rio provetas tubos de ensaio etc Micropipetas para recolha rigorosa de 10 100 1000 ul de solu o Luvas descart veis Temporizador Solu o de hipocloreto de s dio 5 Contentores para recolha de materiais potencialmente infecciosos Papel absorvente 5 CONSERVA O E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Os reagentes devem ser conservados temperatura de 2 8 C O prazo de vali
165. recte L antigene CMV purifi et inactiv est fix sur la phase solide cupules de la microplaque Les chantillons dilu s et les calibrateurs sont d pos s dans les cupules de la microplaque Pendant cette incubation 45 minutes a 37 C les anticorps anti CMV pr sents dans l chantillon se lient l antig ne Les prot ines non li es sont limin es par lavages pratiqu s a la fin de l incubation Le conjugu anticorps monoclonaux anti lgG humaines marqu s a la peroxydase est ensuite d pos dans toutes les cupules et incub 45 minutes a 37 C Le conjugu non li est limin par lavages a la fin de cette deuxi me incubation La pr sence du complexe immun phase solide IgG anti CMV acm POD est r v l par addition dans chaque cupule d une solution de r v lation enzymatique Apres cette troisi me incubation la r action enzymatique est stopp e par addition dans chaque cupule de acide sulfurique H2504 0 3 M La densit optique obtenue a 450 nm ou 450 620 nm est proportionnelle la concentration lgG anti CMV pr sentes dans le s rum 4 COMPOSITION DE LA TROUSSE ET PREPARATION DES REACTIFS Le kit permet de r aliser 96 d terminations Laisser les r actifs revenir temp rature ambiante avant utilisation MT PLATE MICROPLAQUE 12 x 8 puits s cables sensibilis s avec l antigene CMV Utilisation D couper le sachet du c t oppos au code C suivi par le num ro du lot qui sert s
166. rmidad de la Directiva Europea puede ser obtenida en su oficina local Biorad Die anderen Sprachen die in bereinstimmung mit der europ ischen IVD Direktive ben tigt werden erhalten Sie ber Ihre lokale Bio Rad Niederlassung Le altre lingue che sono richieste in conformita con le Direttive Europee possono essere ottenute dal locale agente Bio Rad As restantes linguas obrigat rias em conformidade com a Directiva Europeia podem ser obtidas atraves da subsidi ria Bio Rad mais pr xima de si Ovriga spr k som kr vs i enlighet med EG direktivet kan erh llas fran din lokala Bio Rad representant De gvrige sprog som kraeves i henhold til EU direktiv kan f s ved henvendelse til den lokale Bio Rad leverandgr Ol Bio Rad mal Bio Rad C 0459 3 boulevard Raymond Poincar 12 2004 92430 Marnes la Coquette France Tel 33 0 1 47 95 60 00 Fax 33 0 1 47 41 91 33 Portugu s CL E PLATELIA CMV IgG 96 TEST 72680 IMMUNOENZYMATISK METOD F R KVALITATIV OCH KVANTITATIV BEST MNING AV IgG ANTIKROPPAR MOT CYTOMEGALOVIRUS HUMANT SERUM Svensk 10 11 15 16 17 INNEH LLSF RTECKNING ANV NDNINGSOMR DE VERSIKT AV TEST TESTPRINCIP INNEH LL OCH REAGENSBEREDNING REAGENSF RVARING OCH H LLBARHET
167. rrait affecter les r sultats Ne pas modifier le mode op ratoire indiqu ni remplacer les r actifs par d autres provenant de lots ou de fournisseurs diff rents moins que cela ne soit sp cifi sur la notice d utilisation Se r f rer au paragraphe COMPOSITION DU COFFRET ET PREPARATION DES REACTIFS Ne pas r duire les temps d incubation indiqu s Toute verrerie utilis e pour le test doit tre lav e soigneusement avec de acide chlorhydrigue 2M et rinc e eau distill e Ne pas exposer les r actifs a une forte lumi re ni aux vapeurs d hypochlorure pendant leur conservation ni pendant les phases d incubation Eviter le dess chement des puits pendant le test Eviter la contamination croisee entre les r actifs II est important d utiliser des c nes diff rents pour chaque r actif Eviter de toucher ou d clabousser le bord du puits avec le conjugu Ne pas souffler sur les microplaques Les dosages immunoenzymatigues pr sentent parfois un lt effet de bord gt lt edge effect cet effet peut tre minimis en augmentant humidit pendant les phases d incubation Les microplaques doivent tre couvertes avec un couvercle et incub es a 37 C soit dans un bain marie soit dans un incubateur soit dans un analyseur adapt Ne pas utiliser incubateurs Ref 91010 BRD Frangais 10 Avant de lire la microplaque veiller ce que le fond de la micropl
168. s Repeat test Unreactive plate Check the code on the package containing the plate see package insert paragraph 4 for correct code Check for moisture in unused plate Silica gel dessicant must be pale vellow Repeat test Invalid run all positive Contamination of substrate Take new aliguot of substrate Inadeguate washing Ensure that wash apparatus works well Poor precision Incomplete washing of wells Ensure that wash apparatus works well Inadeguate aspiration of wells Ensure that wash apparatus works well Pipetting error Check pipette function Reagent addition too slow Avoid drying of the plate after washing step Add reagents immediately Presence of bubbles Avoid air bubbles during pipetting Optical pathway not clean Check instrument light source and detector for dirt Wipe bottom of plate with soft tissue Inadeguate Colour development Incorrect incubation times or temperature Check for temperature control and time monitoring Adhere to recommended instruction for use Inadeguate volume of substrate added to the plate Check pipette function 17 REFERENCES 1 G B Wisdom Enzyme Immunoassay Clin Chem 22 1243 1976 2 Cytomegalovirus serology does H O Kangro Immunotherapy 1 91 1987 3 Grint P C A et al Screening tests for antibodies to cytomegalovirus an evaluation of five commercial products
169. s a helyes laborat riumi gyakorlat GLP el r sai szerint kezelt sz rum A friss sz rum 4 napig t rolhat 2 8 C k z tt vagy hosszabb ideig 20 C on lefagyasztva Ne olvasszuk fel a mint kat h romn l t bbsz r A kiolvasztott mint kat m r s el tt vatosan r zzuk fel A minta min s g t a mikrobiol giai szennyez d s er sen rontja s hamis eredm nyekhez vezethet Ker lj k az er sen lip mi s icterusos vagy elszennyez d tt mint k haszn lat t Ha jabb minta v tel re nincs lehet s g a zavaros mint kat sz r ssel 0 45 um vagy centrifug l ssal tiszt tsuk meg Hum n plazma a vizsg latra nem alkalmas 8 A TESZT KIVITELEZ SE Manu lis technika K sz ts k ki a sz ks ges sz m tesztcsikot K sz ts k el a mos folyad kot a 10 szeres t m nys g mos puffer h g t s val 100 ml 900 ml v z K sz ts k el a mintahigit t adjunk 1 r sznyi 50X t m nys g h g t t 49 r sz mos pufferhez pl 2 ml 98 ml H g tsuk a mint kat 1 101 ar nyban 10 ul sz rumot adjunk 1 ml higit hoz Minden h g tott mint b l m rj nk 100 ul t egy egy tesztlyukba aj nlatos k t parhuzamossal dolgozni A kalibr torokat HIGITATLANUL m rj k egy tesztcsikba tesztlyukank nt 100ul t ha lehet k t p rhuzamosban Hagyjunk egy tesztlyukat szabadon vak referenciak nt ide majd 100 ul szubsztr t kever k ker l A tesztlyukakat fedj k le az ntapad f li val majd inku
170. s i det kvalitativa testet Kalibratorerna har f ljande v rden 0 5 1 5 10 20 IU ml som erh llits genom titrering enligt WHO International Standard Farg Fargen pa kalibratorerna ar proportionell mot den relativa antikroppstitern CONJ KONJUGAT 1 x 16 ml Inneh ll Monoklonala antikroppar m rkta med peroxidas i fosfatbuffertl sning som inneh ller fenol 0 05 och bronidox 0 02 Bruksf rdigt beh ver inte sp das ytterligare CONTROL IgG IgG NEGATIV KONTROLL PF93910 1 x 1 6 ml UTBYTBAR MELLAN PARTIER Inneh ll Humant serum som inte inneh ller anti CMV IgG antikroppar utsp tt i fosfatbuffert 0 01 mol l med BSA 1 och natriumazid 0 09 flytande form bruksfardigt beh ver inte sp das ytterligare kalibrator 0 H llbarhet Produkten r h llbar till utg ngsdatumet om den f rvaras o ppnad vid 2 8 C Svensk WASH BUF 10x TVATTBUFFERT 10X PF93603 1 x 100 ml UTBYTBAR MELLAN PARTIER Inneh ll Fosfatbuffrad saltl sning koncentrerad 10 ganger innehaller Brij 0 5 Beredning Sp d nskad volym 1 10 med destillerat vatten f r att erh lla en bruksf rdig tv ttbuffert Om kristaller f rekommer ska de l sas i 37 C f re sp dning SAMP DIL 50x UTSPADNINGSMEDEL 50X PF93601 1 x 4 5 ml F r sp dning av serumprover UTBYTBAR MELLAN PARTIER Inneh ll Proteinl sning koncentrerad 50 g nger med tillsats av fenol 0 05 och bronidox 0
171. sak akkor hozzuk forgalomba ha az megfelel az el re fel ll tott krit riumoknak Minden sorozat gy rt si s min s gellen rz si jegyz k nyve megtal lhat c g nkn l S AL LO d VI AA A A I lI AO OT O ALKALMAZ S TARTALOM KLINIKAI JELENTOSEG ulcerosa A VIZSG LAT ALAPELVE oce obi debe rinde Or eue A KIT TARTALMA S A REAGENSEK 2 REAGENSEK T ROL SA S SZAVATOSS GI IDEJE KEZEL SI S MUNKAV DELMI EL R SOK v nn FELDOLGOZHAT MINT K S T ROL SUK iii ATESZT KIVITELEZESE N O AZ ELJ R S SSZEFOGLAL SA cccssessseccsesssssececseseseseceeseseeceeacsesseeseaeseeneeees A VIZSG LAT VALIDALASA nn nn AZ EREDM NYEK KI RT KEL SE n AZ ELJ R S KORL TAI ie ANALITIKAI SPECIFICIT S sau states DIAGNOSZTIKAI RZ KENYS G ES SPECIFICIT S PREC ZI HIBAEBHARETAS une nt ee nee tt an AE HIVATROZASOR nenn nennen 1 ALKALMAZ S CYTOMEGALOV RUS ELLENI IgG OSZT LY ELLENANYAGOK KVALITAT V S KVANTITAT V KIMUTAT SA HUM N SZ RUMBAN ENZIM IMMUNASSAY M DSZERREL 2 KLINIKAI JELENT S G A Cytomegalov rus szoros emberi kontaktussal k zvet tett herpes virus Az esetek t lnyom t bbs g be
172. sgelb sein Wiederholen Sie den Test Ung ltiger Testlauf alle positiv Kontamination des Substrates Nehmen Sie ein neues Substrat Unvorschriftsm iges Waschen Stellen Sie sicher dass der Washer korrekt arbeitet Schlechte Pr zision Unvollst ndiges Waschen der Wells Stellen Sie sicher dass der Washer korrekt arbeitet Unvorschriftsm iges Absaugen der Wells Stellen Sie sicher dass der Washer korrekt arbeitet Pipettierfehler Pr fen Sie die Pipettierfunktion Reagenzienzugabe zu langsam Vermeiden Sie ein Austrocknen der Platte nach dem Waschschritt Geben Sie sofort danach die Reagenzien zu Vorhandensein von Luftblasen Vermeiden Sie Luftblasen w hrend des Pipettierens Optischer Weg nicht sauber berpr fen Sie die Lichtquelle und den Detektor auf Verschmutzung Reinigen Sie den Boden der Platte mit einem weichen Tuch Nicht ausreichende Farbentwicklung Unvorschriftsm ige Inkubationszeit oder temperatur Pr fen Sie die Temperaturkontrolle und die Zeit berwachung Beachten Sie die Vorschriften in der Gebrauchsanweisung Unvorschriftsm iges Pipettiervolumen von Substrat Pr fen Sie die Pipettierfunktion Ref 91010 BRD Deutsch 17 LITERATUR 1 G B Wisdom Enzyme Immunoassay Clin Chem 22 1243 1976 2 H O Kangro Cytomegalovirus serology does it give the answer Serodiagnosis and Immunotherapy 1 9
173. t les d chets liquides doivent tre d contamin s avec un volume suffisant de solution d hypochlorure de sodium pour que la concentration finale soit de 1 minimum Un contact de 30 minutes avec cette solution est n cessaire pour garantir une d contamination efficace En cas de versement accidentel de mat riaux potentiellement infectieux essuyer imm diatement avec du papier absorbant et nettoyer le plan de travail avec par exemple de hypochlorure de sodium 1 avant de continuer le test En pr sence d un acide veiller a bien essuyer le plan de travail avant d utiliser de hypochlorure de sodium Tout mat riel notamment les gants souill par ventuelles claboussures doit tre consid r comme potentiellement infectieux et limin selon la r glementation en vigueur PRECAUTIONS ANALYTIQUES 1 Laisser les r actifs et les chantillons revenir a temp rature ambiante 18 30 C avant utilisation Immediatement apr s utilisation conserver les r actifs a la temp rature de conservation recommandee II est tres important de contr ler la temp rature d incubation des microplaques Le thermostat ne doit pas descendre au dessous de 35 C ni monter au dessus de 39 C Laisser le sachet contenant les barrettes revenir a temp rature ambiante pendant 30 minutes avant de l ouvrir Ne pas utiliser les r actifs au dela de la date de peremption Eviter toute contamination microbienne des r actifs ce qui pou
174. tati come rifiuti potenzialmente infetti Non mettere in autoclave materiali contenenti sodio ipoclorito Avvertenze analitiche 1 10 11 12 Prima dell uso portare tutti i reagenti ed i campioni a temperatura ambiente 18 30 C Riporre i reagenti alla temperatura di conservazione raccomandata immediatamente dopo l uso E importante disporre di una corretta termostatazione per l incubazione delle strip Controllare che il termostato non scenda sotto i 35 C e non salga oltre i 39 C Aprire la busta contenente le strip dopo almeno mezz ora a temperatura ambiente Non utilizzare i reagenti dopo la data di scadenza Evitare l inquinamento microbico dei reagenti poich ci riduce la validit del prodotto e pu dare luogo a risultati errati Non modificare la Procedura n sostituire i reagenti con quelli di altri produttori o da altri lotti a meno che non sia specificamente riportato che il reagente intercambiabile fra lotti Non ridurre i tempi di incubazione raccomandati Tutta la vetreria da utilizzare nel test deve essere lavata accuratamente con acido cloridrico 2M e sciacquata con acqua distillata o deionizzata Non esporre i reagenti a forte illuminazione n a vapori di ipoclorito durante la conservazione e le fasi di incubazione Evitare che i pozzetti si secchino durante il test Evitare la contaminazione incrociata fra reagenti E importante adoperare delle pipette dedicate per l uso Evitare di toccare il bordo del
175. to 2 M kyselinou chlorovod kovou a pot vypl chnuto destilovanou vodou nebo kvalitn deionizovanou vodou B hem uchov v n a b hem inkuba n ch krok nevystavujte reagencie p soben siln ho sv tla nebo v par m chlornanu Jednotliv jamky nesm b hem prov d n testu vyschnout Dbejte na to aby nedo lo ke k ov kontaminaci reagenci Je d le it aby pro r zn reagencie byly vyhrazeny pipety k v lu n mu pou it Dbejte na to aby nedo lo ke kontaminaci nebo p elit okraje jamek konjug tem Neodstra ujte jej z desti ky fouk n m P i enzymov imunoanal ze m e p le itostn doch zet k okrajov mu efektu kter je nutn minimalizovat zv en m vlhkosti b hem inkubace Desti ky mus b t zakryty v kem a inkubov ny p i 37 C bu ve vodn l zni se stoj nkem nebo plov kem slou c m v p pad pot eby ke stabilizaci desti ky nebo v inkub toru Alternativn je mo n desti ky inkubovat ve schv len m analyz toru nesm pou vat Dbejte na to aby bylo dno desti ky ist a such a aby p ed m en m desti ky nebyly na povrchu kapaliny p tomn dn vzduchov bubliny Pou it siln hemolyzovan ch vzork ne pln sra en ho s ra nebo vzork s mikrobiologickou kontaminac m e v st k chybn m v sledk m Ke ka d mu pou van mu n stroji si pe liv p e t te n vod k pou it dan ho v robce kter v m poskytne dopl u
176. to determine an increase in the IgG antibody level The test result should be used in conjunction with information available from the evaluation of the case history or other diagnostic procedures 13 ANALYTICAL SPECIFICITY 23 samples which were negative for CMV but containing IgG antibodies against viruses such as Rubella Epstein Barr Herpes Simplex Measles Mumps were tested In no case did the presence of these antibodies influence the test 14 DIAGNOSTIC SENSITIVITY AND SPECIFICITY In a clinical trial performed in a hospital laboratory 264 samples were analysed 47 of which proved negative and 217 positive The samples were analysed with another commercial immunoenzymatic method 100 agreement was found between the two methods both in the positive and the negative samples The Platelia CMV IgG kit offers 100 sensitivity and specificity Ref 91010 BRD English 15 PRECISION Table 2 Within run Precision performed on 3 different lots Cut Off Batch Batch Batch n 21 N 104 N 105 N 106 O D 0 453 0 374 0 433 CV 4 62 4 73 4 07 Table 3 Between run Precision EU ml Sample I run II run Ill run CV n 1 12 6 17 5 17 6 18 n 2 18 5 87 5 96 3 10 16 TROUBLE SHOOTING GUIDE PROBLEM POSSIBLE SOURCE TEST OR ACTION Invalid run all negative One or more reagents not added or added in wrong seguence Recheck procedure Check for unused solution
177. trv vaj odoberte nov vzorku s ra 12 OBMEDZENIA TESTU Vzorka s ra z skan ho v priebehu ak tnej f zy infekcie kedy s pr tomn len protil tky triedy IgM m e by pri pou it tohto testu negat vna Tepeln inaktiv cia testovan ho s ra nevedie pri stanoven anti CMV IgG ku chybn m v sledkom ako je to v pr pade anti CMV IgM Tw Hladiny IgM proti cytomegalov rusu musia by stanoven pomocou s pravy Platelia CMV IgM Alternat vne je mo n s be ne vy etri druh vzorku s ra odobrat pribli ne o 8 14 dn nesk r na stanovenie n rastu hlad n protil tok IgG V sledok testu sa mus posudzova v kombin cii s inform ciami z skan mi vyhodnoten m anamn zy a ostatn ch diagnostick ch postupov 13 ANALYTICK PECIFICITA Testovalo sa 23 vzoriek negat vnych na CMV av ak obsahuj cich protil tky IgG proti v rusom ako s napr v rus ru ienky Epstein Barrovej v rus Herpes simplex v rus os pok alebo mumpsu Pr tomnos uveden ch protil tok neovplyv ovala test v iadnom z uveden ch pr padov 14 DIAGNOSTICK CITLIVOS A PECIFICITA V klinickom hodnoten uskuto nenom v nemocni nom laborat riu sa analyzovalo celkom 264 vzoriek z ktor ch 47 bolo analyzovan ch s negat vnym a 217 s pozit vnym v sledkom Vzorky boli analyzovan Ref 91010 BRD Slovensky pomocou inej komer ne dostupnej imunoenzymatickej met dy medzi obidvomi met dami bola zisten 100 zhoda a to
178. tta esterna della confezione Reagenti hanno una stabilit limitata dopo apertura e o preparazione REAGENTE CONDIZIONI MICROPIASTRA 6 SETTIMANE 2 8 C busta di polietilene CALIBRATORI 6 SETTIMANE 2 8 C CONIUGATO 6 SETTIMANE 2 8 C SUBSTRATO fino alla scadenza a 2 8 C 1 settimana a 15 30 C conservare al buio DILUENTE CAMPIONI p uso 2 settimane 2 8 C WASH BUFFER p uso 2 settimane 2 8 C 5 giorni 15 30 C STOP SOLUTION fino alla scadenza a 2 8 6 PRECAUZIONI SOLO PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO Attenzione Questo kit contiene materiali di origine umana che sono stati testati e trovati negativi con test approvati dal FDA sia per la ricerca di HbsAg che per quella degli anticorpi anti HIV 1 anti HIV 2 ed anti HCV Poich nessun test diagnostico pu offrire una completa garanzia sull assenza di agenti infettivi qualunque materiale di origine umana deve essere considerato potenzialmente infetto Tutti i reagenti e i campioni devono essere maneggiati secondo le norme di sicurezza normalmente adottate in laboratorio Avvertenze per la sicurezza personale 1 Non pipettare con la bocca Usare guanti monouso e protezione per gli occhi nel maneggiare i campioni e durante la prova Lavare accuratamente le mani una volta terminato il test Ref 91010 BRD Italiano seguenti reagenti contengono concentrazioni basse di sostanze dannose o irritanti a II tampone di lavaggio contiene detergenti b II coniugato contiene feno
179. ultados err neos Portugu s 12 Para cada instrumento utilizado recomenda se a leitura cuidadosa das respectivas instruc es do fabricante por forma a obter informac es adicionais sobre os seguintes pontos instalag o e reguisitos especiais princ pios de funcionamento instruc es precauc es e riscos especificac es do fabricante e desempenho do instrumento assist ncia t cnica e manutenc o 7 TIPO E CONSERVAGAO DA AMOSTRA A amostra composta pelo soro recolhido da forma habitual a partir da veia e submetido a tratamento com todas as precauc es ditadas pelas boas pr ticas de laborat rio O soro fresco pode ser conservado durante 4 dias a 2 8 C ou congelado por periodos mais prolongados a 20 C podendo ser congelado um maximo de 3 vezes As amostras descongeladas devem ser cuidadosamente agitadas antes de usar A qualidade da amostra pode ser seriamente afectada por contaminac o microbiana podendo conduzir a resultados err neos As amostras fortemente lip micas ictericas ou contaminadas dever o ser evitadas Se n o for possivel obter uma nova amostra aguelas dever o ser clarificadas por filtrac o 0 45 um ou centrifugac o O plasma humano n o pode ser utilizado no teste 8 PROCEDIMENTO DE TESTE Tecnica Manual Preparar o numero de tiras necess rias Preparar a solu o de lavagem diluindo o Tamp o de Lavagem 10x 100 ml 900 ml H20 Preparar o diluente necess rio para as amostras ad
180. und Kupfer explosive Metallazide bilden Reagenzienreste sollten daher mit reichlich Wasser verd nnt beseitigt werden Falls irgendeines der Reagenzien in Kontakt mit den Augen oder der Haut kommt waschen Sie den Bereich intensiv mit Wasser 3 Mehrfach verwendbare Materialien oder Gegenst nde sollten nach Gebrauch sterilisiert werden Die bevorzugte Methode ist das Autoklavieren f r eine Stunde bei 121 C Einwegmaterialien sollten autoklaviert oder verbrannt werden 4 Schwefels ure Stop Soution und Salzs ure wird f r das Waschen der Laborgl ser ben tigt sind tzend und sollten mit entsprechender Sorgfalt behandelt werden Bei Kontakt mit Augen oder Haut gr ndlich mit Wasser abwaschen 5 Neutralisierte S uren oder anderer Fl ssigkabfall sollten mit einer ausreichenden Menge von Natriumhypochlorid mit einer Endkonzentration von mindestens 1 0 dekontaminiert werden Eine 30 min tige Behandlung mit Natriumhypochlorid 1 ist erforderlich um eine effektive Dekontamination sicherzustellen 6 Versch ttete potentiell infekti se Materialien sollten sofort mit saugf higem Papier aufgewischt werden und der kontaminierte Bereich sollte mit Natriumhypochlorid 1 nachgewischt werden bevor die Arbeit fortgesetzt wird Natriumhypochlorid sollte nicht bei versch tter Fl ssigkeit die S ure enth lt verwendet werden bevor die Fl ssigkeit trocken aufgewischt wurde Materialien die f r das Aufwischen versch tteter Fl ssigkeiten
181. unoenzymatique La concordance entre les 2 techniques est de 100 Platelia CMV IgG pr sente une sensibilit et une sp cificit de 100 15 PRECISION Tableau 2 R p tabilit intra essai effectu e sur 3 lots diff rents Cut Off Lot Lot N Lot N 106 n 21 N 104 105 O D 0 453 0 374 0 433 CV 4 62 4 73 4 07 Tableau 3 Precision inter essais UE ml Sample I run II run run CV n 1 12 6 17 5 17 6 18 n 2 78 5 87 5 96 3 10 Ref 91010 BRD Frangais 16 EXPERTISE DES CAUSES DERREUR PROBLEME CAUSES POSSIBLES ACTION CONTROLE Manipulation invalid e Tous les r sultats sont n gatifs Absence d un ou plusieurs r actifs ou addition de r actifs dans un ordre erron Contr ler le proc d Contr ler s il y a une solution inutilis e R p ter le test Plaque non r active Contr ler le code imprim sur le sachet de la plaque lire les instructions pour l usage section 4 Contr ler s il y a de humidit sur la plaque inutilis e Le gel de silice doit tre d une couleur jaune p le R p ter le test Manipulation invalid e Tous les r sultats sont positifs Contamination du substrat Pr lever une nouvelle aliquote du substrat Lavage insuffisant S assurer que le laveur fonctionne correctement Mauvaise pr cision Lavage incomplet des puits S assurer que le laveur fonctionne correctem
182. ut off e pode ser utilizado no teste qualitativo Os calibradores t m os seguintes valores 0 5 1 5 10 20 IU ml obtidos por titulac o em comparac o com a norma internacional proposta pela OMS Proposed International Standard WHO Cor a cor dos calibradores proporcional ao t tulo relativo de anticorpos CONJ CONJUGADO 1 x 16 ml Conteudo anticorpos monoclonais etiquetados com Peroxidase em soluc o tamp o de fosfato contendo fenol 0 05 e Bronidox 0 02 Pronto a usar sem diluig o adicional CONTROL IgG CONTROLO IgG NEGATIVO PF93910 1 x 1 6 ml INTERMUTAVEL ENTRE LOTES Conteudo Soro humano nao contendo anticorpos IgG anti CMV diluido em tamp o fosfato 0 01 mol l com BSA 1 e azida de s dio 0 09 liquido pronto a usar sem diluig o adicional Calibrador 0 Estabilidade O produto mant m se estavel at ao termo do prazo de validade quando conservado fechado temperatura de 2 8 C Portugu s WASH BUF 10x TAMP O DE LAVAGEM 10X PF93603 1 x 100 ml INTERMUT VEL ENTRE LOTES Conte do Soluc o salina tamp o de fosfato concentrada 10 vezes cont m Brij 0 5 Preparac o diluir o volume necess rio 1 10 com gua destilada a fim de obter a solug o tamp o de lavagem pronta a usar Se forem visiveis cristais estes dever o ser dissolvidos 8 37 C antes da dilui o SAMP DIL 50x DILUENTE 50X PF93601 1 x 4 5 ml Para dilui o de amost
183. v d ka 450 nm alebo 450 620 nm a 405 nm s line rnos ou do OD gt 2 000 Prem va ka mikrotitra n ch platni iek prednostne na prem vanie o objemoch 225 375 ul Destilovan alebo deionizovan voda Obvykl laborat rne sklo valce sk mavky at Mikropipety na presn pipetovanie 10 100 a 1000 ul roztoku Rukavice na jedno pou itie Stopky Roztok chl rnanu sodn ho 5 N doby na odkladanie potenci lne infek n ho materi lu Absorp n papier 5 UCHOV VANIE A STABILITA REAGENCI Reagencie musia by uchov van pri 2 8 C D tum exspir cie je uveden na ka dej zlo ke a na t tku krabice Po otvoren alebo po pr prave maj reagencie obmedzen stabilitu REAGENCIE PODMIENKY Mikrotitra n platni ka 6 t d ov pri 2 8 C v polyetyl novom s ku Kalibr tory 6 t d ov pri 2 8 C Konjug t 6 t d ov pri 2 8 C Substr t a do d tumu exspir cie pri 2 8 C 1 t de pri 15 30 C uchov vajte v tme Riediaci roztok na vzorky pripraven na pou itie 2 t dne pri 2 8 C Prem vac roztok 2 t dne pri 2 8 C 5 dn pri 15 30 C Zastavovac roztok a do d tumu exspir cie pri 2 8 C 6 BEZPE NOSTN OPATRENIA A OCHRANA ZDRAVIA V HRADNE PRE DIAGNOSTIKU IN VITRO T to s prava obsahuje materi ly udsk ho p vodu ktor boli testovan a vyk zali negativitu na pr tomnos HBsAg a na protil tky proti HIV 1
184. v ttutrustningen fungerar D lig precision Ofullst ndig tv ttning av brunnar Kontrollera att tv ttutrustningen fungerar Bristf llig aspirering brunnar Kontrollera att tv ttutrustningen fungerar Pipetteringsfel Kontrollera pipettfunktionen F r l ngsam reagenstillsats Se till att plattan inte torkar efter tv ttning Tills tt reagenserna omdelbart F rekomst av bubblor Undvik luftbubblor vid pipettering Smutsig optisk utrustning Kontrollera om instrumentets ljusk lla och detektor r smutsiga Torka av plattans botten med en mjuk trasa Bristf llig f rgutveckling Felaktig inkuberingstid eller temperatur Kontrollera temperaturkontroll och tid vervakning F lj rekommenderade anvisningar Felaktig m ngd substrat tillsatt i plattan Kontrollera pipettfunktionen 17 REFERENSER 1 G B Wisdom Enzyme Immunoassay Clin Chem 22 1243 1976 2 H O Kangro Cytomegalovirus serology does it give the answer Serodiagnosis and Immunotherapy 1 91 1987 3 Grint P C A et al Screening tests for antibodies to cytomegalovirus an evaluation of five commercial products J Clin Pathol 38 1059 1985 4 M Musiani et al Rapid detection of antibodies against cytomegalovirus induced immediate early and early antigens by an enzyme linked immunosorbent assay J Clin Pathol 37 122 1984 5 F de Ory et al Serological diagnosis of cytomegalo
185. va A k t m dszer eredm nyei 100 os egyez st mutattak mind a pozit v mind a negativ mint kn l A Platelia CMV IgG kit rz kenys ge s specificit sa egyar nt 100 os 15 PREC ZI 2 t bl zat teszten bel li ism telhet s g 3 k l nb z gy rt si sz mmal Cut off Gy sz Gy sz Gy sz n 21 104 105 106 OD 0 453 0 374 0 433 CV 4 62 4 73 4 07 3 t bl zat tesztek k z tti precizi EU ml Minta I teszt II teszt Ill tesz CV 1 12 6 17 5 17 6 18 2 78 5 87 5 96 3 10 16 HIBAELHARITAS PROBLEMA LEHETSEGES OK VIZSGALAT VAGY TEENDOK Erv nytelen vizsgalat Egy vagy t bb reagenst nem vagy Ellen rizz k a munkamenetet minden negativ rossz sorrendben m rt nk be Ellen rizz k a fel nem haszn lt reagenseket Ism telj k meg a m r st Hib s lemez Ellen rizz k a k dsz mot a lemez csomagol s n a helyes k dsz mot l sd a t j koztat 4 pontj n l Ellen rizz k nem nedves e a m g haszn latlan lemez A szilikag lnek halv nys rg nak kell lennie Ism telj k meg a m r st rv nytelen futtat s Elszennyez d tt a szubsztr t Dolgozzunk j szubsztr ttal PROBL MA LEHETS GES OK VIZSG LAT VAGY TEEND K minden pozit v El gtelen mos s Gondoskodjunk a mos berendez s j m k d s r l Pontatlan m r s A tesztlyukak mos s
186. vato viene legato alla fase solida strip di pozzetti 1x8 Per incubazione con siero umano diluito le immunoglobuline specifiche si legano all antigene Dopo lavaggi per eliminare le proteine che non hanno reagito si effettua l incubazione con il coniugato costituito da anticorpi monoclonali anti IgG umane coniugate con perossidasi di rafano Si elimina il coniugato che non si legato e si aggiunge il substrato per la perossidasi Il colore blu che si sviluppa proporzionale alla concentrazione degli anticorpi specifici presenti nel siero in esame Quando la reazione enzimatica interrotta per aggiunta di una soluzione di acido solforico la colorazione gialla che ne risulta pu essere facilmente letta in un lettore per micropiastre ELISA 4 COMPOSIZIONE DEL KIT E PREPARAZIONE DEI REAGENTI reagenti sono sufficienti per 96 determinazioni Portare a temperatura ambiente prima dell uso MT PLATE MICROPIASTRA 12 x 8 pozzetti sensibilizzati con Cytomegalovirus Uso Aprire l involucro della piastra dalla parte opposta del codice C seguito dal numero di lotto che serve per la sua identificazione prendere il supporto e gli strips necessari Riporre gli altri non utilizzati nella busta di politene con il gel di silice fare uscire l aria e sigillare premendo sulla chiusura CAL CALIBRATORI 5 x 1 6 mL Contenuto Siero umano diluito a concentrazione nota di anticorpi anti CMV IgG in tampone fosfato 0 01 mol L con
187. verwendet wurden inklusive der Handschuhe sollten wie potentiell biogef hrdender Abfall entsorgt werden Autoklavieren Sie keine Materialien die Natriumhypochlorid enthalten Technische Vorsichtsma nahmen 1 Bringen Sie alle Reagenzien vor Gebrauch auf Raumtemperatur 18 30 C Bringen Sie die Reagenzien sofort nach Gebrauch wieder auf die empfohlene Lagerungstemperatur Es ist wichtig bei der korrekten Temperatur zu arbeiten berpr fen Sie dass die Temperatur bei der 1 Inkubation nicht unterhalb 35 C und nicht ber 39 C liegt 2 Verwenden Sie die Reagenzien nicht ber das angegebene Verfalldatum hinaus Mikrobiologische Kontamination der Reagenzien muss vermieden werden da dies die Halbarkeit des Produktes reduzieren und zu falschen Ergebnissen f hren kann 3 Die Testduchf hrung darf nicht ver ndert die Reagenzien d rfen nicht durch Reagenzien von anderen Herstellern oder aus anderen Lots ersetzt werden es sei denn dass die Austauschbarkeit von Lots extra angegeben ist Reduzieren Sie keine der Inkubationszeiten 4 Die f r die Reagenzien verwendeten Laborgl ser sollten gr ndlich mit 2M Salzs ure gewaschen und dann mit destilliertem oder deionisiertem Wasser von guter Qualit t gesp lt werden 5 Vermeiden Sie Gefrierschr nke mit Abtauautomatik f r die Lagerung von Proben 6 Setzen Sie die Reagenzien keiner starken Lichteinstrahlung oder Hypochlorid D mpfen w hrend der Lagerung oder der Inkubationsschritte aus
188. virus infections comparison of six commercial methods of ELISA Serodiagnosis and Immunotherapy 2 423 1988 No P Dal Monte et al Cytomegalovirus umano Diagnosis 2 67 1990 R Ziegalmaier et al ELISA la Ricerca Clin Lab 10 83 1980 Svensk C E CE m rkning Europa direktiv 98 79 EG om medicintekniska produkter l r in vitro diagnostik In vitro diagnostik Tillverkad av Se instruktionsanvisning vid anv ndning I Temperaturbegr nsning The other languages which are required in conformity to the European Directive can be obtained from your local Bio Rad agent Les autres langues requises par la Directive Europ enne sont disponibles aupr s de votre repr sentant Bio Rad local Los otros idiomas que se requiren para la conformidad de la Directiva Europea puede ser obtenida en su oficina local Biorad Die anderen Sprachen die in bereinstimmung mit der europ ischen IVD Direktive ben tigt werden erhalten Sie ber Ihre lokale Bio Rad Niederlassung Le altre lingue che sono richieste in conformit con le Direttive Europee possono essere ottenute dal locale agente Bio Rad As restantes l nguas obrigat rias em conformidade com a Directiva Europeia podem ser obtidas atrav s da subsidi ria Bio Rad mais pr xima de si vriga spr k som kr vs i enlighet med EG direktivet kan erh llas fr n din lokala Bio Rad representant De gvrige sprog som kreeves i henho
189. vis muligt pa en strip 100 ul i hver brand Gem en brand til en blindprove der udf res ved hj lp af 100 UL af substratblandingen Brendene d kkes med beskyttende film og inkuberes i 45 minutter ved 37 C Efter skylning fire gange i 30 sekunder 300 ul skal der tilfojes 100 ul konjugat til hver brand hvorefter brandende igen tild kkes med den beskyttende film og inkuberes i 45 minutter ved 37 C Pladen skylles igen fire gange som beskrevet ovenfor Til sidst fordeles substratet med 100 pl brand Efter 15 minutter ved stuetemperatur stoppes enzymreaktionen med 100 ul stopoplgsning Absorbansen O D aflaeses ved 450 nm eller 450 620 nm inden for 30 min Foretag en afleesning igen ved 405 nm hvis OD veerdien er hgjere end 2000 9 SKEMA OVER TESTPROCEDUREN for Platelia CMV IgG Manuel teknik TRIN 1 Placer 100 pl fortyndet provemateriale kontrolprover i stripsenes brende Inkuber i 45 minutter ved 37 C Skyl 4 gange 300 ul TRIN 2 Tils t 100 pl konjugat til hver brand Inkuber i 45 minutter ved 37 C Skyl 4 gange 300 pl TRIN 3 Tilseet 100 pl substrat til hver brand Inkuber i 15 minutter ved stuetemperatur TRIN 4 Tilseet 100 pl stopoplosning Aflees absorbansen ved 450 nm inden for 30 min 10 VALIDERING AF TEST 1 KONTROL Kalibrator 0 OD vaerdien for den negative kontrolprave skal vaere lt 0 6 gange OD vaerdien for Kalibrator 2 2 OD vaerdien for Kalibrator 2 skal veere gt 0 2 ved 450 nm og gt 0 16 ved 450
190. wurde dieser Test durch das Vorhandensein dieser Antik rper beeinflusst 14 DIAGNOSTISCHE SENSITIVIT T UND SPEZIFIT T In einer klinischen Studie wurden 264 Proben getestet von denen 47 negativ und 217 positiv waren Die Proben wurden einer anderen kommerziellen Enzymimmunoassay Methode getestet Es wurde eine 100 ige bereinstimmung zwischen den beiden Methoden gefunden sowohl f r positive als auch f r negative Proben Dieser Assay bietet damit eine Sensitivit t und Spezifit t von 100 Ref 91010 BRD Deutsch 15 PR ZISION Intraassay Pr zision in 3 verschiedenen Chargen Cut off n 21 Charge Nr 104 Charge Nr 105 Charge Nr 106 O D 0 453 0 374 0 433 CV 4 62 4 73 4 07 Interassay Pr zision EU ml Probe Test Test Il Test Il CV Nr 1 12 6 17 5 17 6 18 Nr 2 78 5 87 5 96 3 10 16 TROUBLE SHOOTING PROBLEMLOSUNGEN PROBLEM MOGLICHE URSACHE MOGLICHE PROBLEMLOSUNG Ung ltiger Testlauf alle negativ Eins oder mehrere Reagenzien wurden nicht zugef gt oder in der falschen Reihenfolge berpr fen Sie die Testdurchf hrung Suchen Sie nach evt ungenutzten Reagenzien Wiederholen Sie den Test Nichtreaktive Platte Pr fen Sie den Code auf der Plattenpackung Der korrekte Code ist in der Gebrauchsanweisung unter Punkt 4 angegeben Pr fen Sie ob die ungenutzte Platte feucht ist Das Silica Gel Trockenmittel muss blas
191. xid zzal jel lt monoklon lis antitestek 0 05 fenolt amp s 0 02 Bronidoxot tartalmaz foszf t pufferben Higit s n lk l azonnal felhaszn lhat CONTROL IgG IgG NEGAT V KONTROLL PF93910 1 x 1 6 ml A K L NB Z LOTSZ M TERM KEK CSERESZABATOSAK Tartalma 1 BSA t s 0 09 n trium azidot tartalmaz 0 01 mol l foszf t pufferes anti CMV IgG ellenanyagot nem tartalmaz hum n sz rum Higit s n lk l azonnal felhaszn l hat 0 s kalibr tor oldat Stabilit s Bontatlan llapotban 2 8 C k z tt t rolva a term k a szavatoss gi id lej rt ig meg rzi a min s g t WASH BUF 10x MOS PUFFER 10X PF93603 1X100 ml A K L NB Z LOTSZAMU TERM KEK CSERESZABATOSAK Tartalma 10 szeres t m nys g 0 5 Brij t tartalmaz foszf t pufferes s oldat Elk sz t se 1 10 ar nyban h g tsuk desztill lt v zzel a k v nt mennyis get hogy megkap juk a felhaszn l sra k sz oldatot Ha krist lyokat l tunk benne akkor azokat h g t s el tt 37 C on oldjuk fel SAMP DIL 50x MINTAH G T 50X PF93601 1 x 4 5 ml Sz rummint k h g t s hoz A K L NB Z LOTSZ M TERM KEK CSERESZABATOSAK Tartalma 0 05 fenollal s 0 02 Bronidox szal kieg sz tett 50X t m nys g feh rjeoldat El k sz t se 1 50 ar nyban h g tsuk a k v nt mennyis get a mos pufferrel hogy megkapjuk a felhaszn l sra k sz mintah g t t SUBS TMB SZUBSZTR T PF93619 12 ml Felhaszn l sra k s
192. y dieron resultados negativos en las pruebas aprobadas por la FDA para la presencia de HbsAg y de los anticuerpos anti VIH 1 anti VIH 2 y anti HCV Dado que ninguna prueba diagn stica puede ofrecer una completa garant a sobre la ausencia de agentes infecciosos cualquier material de origen humano debe ser considerado potencialmente infeccioso Todos los materiales de origen humano deben manipularse seg n las pr cticas de seguridad com nmente adoptadas en la pr ctica diaria de laboratorio Informaciones de Salud y Seguridad 1 No pipetear por via oral Usar los guantes de un solo uso y la protecci n para los ojos al manejar las muestras y durante la prueba Lavar las manos a fondo despu s de terminar el test Ref 91010 BRD Espa ol Los reactivos siguientes contienen baja concentraci n de sustancias dafinas o irritantes a el tamp n de lavado contiene detergentes b el conjugado contiene fenol c el substrato es cido d los reactivos contienen zida S dica 0 09 que puede reaccionar con cobre y plomo y formar zidas met licas potencialmente explosivas Para eliminarla diluir con mucha agua Si cualquier reactivo entra en contacto con la piel u ojos lavar con mucha agua Los aparatos no desechables se deben esterilizar despu s su uso El m todo preferido es autoclavar durante 1 ha 121 C los materiales desechables deben ser autoclavados o incinerados El cido sulf rico contenido en la Soluci n Bloqueante y el cid
193. ymond Poincar 12 2004 92430 Marnes la Coquette France Tel 33 0 1 47 95 60 00 Fax 133 0 1 47 41 91 33 Dansk PLATELIA CMV IgG 96 AOKIME2 72680 TIA TON TON IgG Greek 10 11 12 13 14 15 16 17 FIA TH AOKIMH TOY KIT KAI KAI Greek 1
194. z A K L NB Z LOTSZ M TERM KEK CSERESZABATOSAK Tartalma 0 05 mol l es citr t pufferben pH 3 8 stabiliz lt 0 26 mg ml tetrametil benzidint TMB s 0 019 hidrog n peroxidot tartalmaz oldat H2SO 0 3 M LEALLITO OLDAT PF93602 1x 16 ml A K L NB Z LOTSZAMU TERM KEK CSERESZABATOSAK 0 3 mol l es k nsav oldat H g t s n lk l azonnal felhaszn lhat ntapad f lia 2 Polietil n tasak 1 SZ KS GES DE NEM SZ LL TOTT ESZK Z K Mikrolemez inkub tor 37 C os Mikrolemez leolvas 450 vagy 450 620 nm es s 405 nm es sz r vel legal bb OD 2 000 linearitassal Mikrolemez mos k sz l k lehet s g szerint 225 375 ul adagol s ra Desztill lt vagy ionmentes v z Laborat riumi veg ru m r hengerek k mcs vek stb Mikropipett k 10 100 s 1000 ul kim r s hez s adagol s hoz Eldobhat v d keszty Stopper ra N trium hipoklorit oldat 5 Biol giailag vesz lyes hullad k gy jt tart ly Sz r pap r 5 REAGENSEK T ROL SA S SZAVATOSS GI IDEJE A reagenseket 2 8 C k z tti h m rs kleten t roljuk A szavatoss gi id a dobozon s az vegek c mk j n olvashat Felnyit s s vagy elk sz t s ut n a reagensek csak korl tozott ideig haszn lhat k fel REAGENS K R LM NYEK Mikrolemez 2 8 C on polietil n tasakban t rolva 6 h t Kalibr tor oldatok 2 8 C on t rolva 6 h t Konjug t 2 8 C on t rolva 6 h t Szubsztr t

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