FICHE TECHNIQUE POUR LE KIT CLA® DE DOSAGE DES IgE
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1. 2 8 C cette solution peut tre utilis e pendant un mois Solution d anticorps e Laisser revenir la solution d anticorps temp rature ambiante e Inverser doucement la solution d anticorps avant utilisation e _ Sielle n est pas utilis e la solution d anticorps r frig r e 2 8 C peut tre utilis e jusqu la date d expiration du kit REMARQUE Une bouteille de solution d anticorps suffit pour vingt 20 cuves de dosage contenant 30 allerg nes par cuve et 2 contr les M lange Photo r actif Pr parer le m lange photo r actif juste avant utilisation Laisser les compos s photo r actifs A B C D revenir temp rature ambiante Dans un r cipient m langer des volumes gaux de compos photo r actif A B C et D avec une micro pipette c ne jetable Il faut un volume minimal de 350 uL de chaque compos photo r actif par cuve de dosage soit au total 1 4 mL par cuve de dosage REMARQUE Afin d viter toute contamination des r actifs utiliser un nouveau c ne jetable pour chacun des compos s photo r actifs Remuer doucement le r cipient afin de m langer la solution REMARQUE Le m lange photo r actif doit tre utilis dans les 60 minutes qui suivent le m lange Instructions pour le stockage e Conserver les composants du kit entre 2 et 8 C S ils sont stock s correctement ces compos s peuvent tre utilis s jusqu la date d expiration imprim e sur l tiquette de chaque2. celui ci permet de v rifier le bon fonctionnement des r actifs du kit Ce contr le devrait produire une valeur sup rieure ou gale 243 en LUs Contr le n gatif celui ci permet d liminer toute valeur correspondant liaison non sp cifique des IgE Ce contr le devrait produire des valeurs inf rieures 33 en LUs R sultats de contr les internes non valid s Si les r sultats pour les contr les internes ne sont pas dans les limites des valeurs indiqu es ci dessus alors replacer la cuve de dosage dans la cassette s assurer que la cuve de dosage est ins r e proprement et refaire une lecture Si les r sultats ne sont toujours pas acceptables appeler l assistance technique de votre fournisseur local B S rums positifs et n gatifs pour les IgE Hitachi Chemical Diagnostics recommande que chaque nouveau lot de kit CLA de dosage des IgE sp cifiques d allerg ne ainsi que les cuves de dosage sont test es avec deux s rums contr les le s rum CLA positif pour les IgE et le s rum CLA n gatif pour les IgE Pour toute instruction concernant leur utilisation ainsi que les valeurs obtenir se r f rer la fiche technique du kit CLA contenant les s rums positifs et n gatifs pour les IgE Certaines institutions peuvent avoir besoin d utiliser ces s rums contr le plus fr quemment Pour plus de d tails v rifier avec votre institution R sultats Le luminom tre CLA 1 mesure la quantit de lumi re mise
3. cipients jetables de 50 mL Une seringue de 3 CC Une prouvette gradu e ou un flacon de 1 L afin de pr parer du tampon de lavage De leau distill e ou d ionis e Des tubes pour la collecte des chantillons Une centrifugeuse pouvant tourner 2000 3000 x g ou 2500 3600 rpm Des tubes de stockage en plastique propre n cessaires la pr paration des chantillons Du papier absorbant Des mouchoirs propres ne contenant pas de coton Un luminom tre CLA 1 Pr paration des cuves de dosage et des chantillons des patients Avant utilisation centrifuger nouveau les chantillons de patients pendant 10 20 minutes 2000 3000 x g ou 2500 3600 rpm REMARQUE Le frein de la centrifugeuse pourrait d loger le culot et augmenter le bruit de fond et produire des r sultats erron s Eteindre le frein avant de centrifuger les chantillons Sortir du sac en plastique les cuves de dosage n cessaires une par chantillon Refermer le sac et remettre les cuves non utilis es dans le r frig rateur Essuyer l humidit l ext rieur de chaque cuve de dosage Indiquer le num ro d identification du patient sur chacune des cuves de dosage en orientant la grille color e vers le bas Noter les num ros de lot des kits des groupes d antig nes ainsi que le num ro d identification des patients Tapoter doucement l extr mit de la cuve de dosage sur un papier absorbant afin d liminer tout r sidu de liquide M thode S
4. de l limination de ce r actif rincer abondamment vier et plomberie afin d viter accumulation de compos m tal azide Ne pas utiliser les composants du kit apr s la date d expiration indiqu e et imprim e sur chacun des composants Les r actifs pr sents dans les kits CLA de dosage des IgE sp cifiques d allerg ne forment un tout Ne pas m langer ces r actifs avec des r actifs provenant d autres kits Toute contamination par de l eau de javel peut interf rer avec le dosage FJ Pr paration des R actifs Tampon de Lavage e Laisser la solution concentr e de tampon de lavage revenir temp rature ambiante V rifier que tout cristal de sel est dissout Si des cristaux persistent placer la bouteille bien viss e de solution concentr e de tampon de lavage dans un b cher contenant de l eau chaude jusqu ce que tous les cristaux soient dissous e Rincer le distributeur de tampon de lavage ainsi que le tube avec de leau distill e e Bien m langer la solution concentr e de tampon de lavage en inversant doucement la bouteille plusieurs fois e Dans une prouvette gradu e ou un flacon de 1 L m langer le contenu de la bouteille de solution concentr e de tampon de lavage 50 mL avec 950 mL d eau distill e ou d ionis e Bien m langer Transf rer cette solution dans le distributeur de tampon de lavage Une fois pr par e et stock e temp rature ambiante 20 25 C ou r frig r e
5. e la sensibilit de la technique standard Chaque laboratoire doit d s lors d terminer si cette m thode alternative convient ses besoins sp cifiques Cette m thode n cessite l utilisation de l agitateur rotatif CLA Pr parer les cuves de dosage et les chantillons de patients comme d crit dans les tapes 9 1 9 6 A Remplir la cuve de dosage avec du s rum 1 Adapter une seringue de 3 ml sur l extr mit sup rieure de la cuve de dosage et un c ne propre sur l extr mit inf rieure de la cuve 2 Plonger le c ne pr c demment fix dans un tube contenant du s rum de patient Eviter de pr lever tout pr cipit et ou couches lipidiques 3 Aspirer lentement 750 ul de s rum afin de remplir la moiti de la cuve de dosage REMARQUE Abaisser le piston de la seringue avant d ins rer l extr mit de la cuve de dosage dans les chantillons de s rum L injection d air dans le s rum peut provoquer un remous des pr cipit s pr sents au fond des tubes d chantillons 4 Ne pas ter la seringue B Boucher les cuves de dosage les placer sur l agitateur rotatif CLA et faire tourner 1 Ins rer un bouchon blanc l extr mit inf rieure de la cuve de dosage 2 Retirer la seringue de 3 ml et ins rer un bouchon noir sur l extr mit sup rieure de la cuve de dosage REMARQUE Les bouchons doivent tre ins r s fermement afin d viter toute fuite 3 Faire pivoter la cuve de dosag
6. gatif blanc et un contr le positif de la m thode Le test CLA des IgE sp cifiques d allerg nes est r alis en pla ant le s rum du patient dans une cuve de dosage Au cours de cette incubation les IgE du s rum se lient aux allerg nes coupl s aux fils de cellulose La cuve de dosage est ensuite lav e avec du tampon afin d liminer tous les composants du s rum non li s Un anticorps anti IgE coupl une enzyme est ensuite ajout dans la cuve de dosage et se lie aux IgE du s rum fix es sur le fil Apr s un second lavage la cuve de dosage est remplie d une solution de photo r actifs qui r agit avec l anticorps coupl enzyme afin de produire une r action de chimiluminescence La quantit de lumi re mise par chaque fil est directement proportionnelle la quantit d IgE sp cifique de l allerg ne pr sente dans le s rum du patient EL P actifs Composants Kit CLA de dosage des IgE sp cifiques d allerg nes A conserver entre 2 et 8 C jusqu la date d expiration Ne pas congeler Description des composants Chaque kit de dosaage de 20 test comprend Cuves de dosage CLApette 20 cuves Allerg nes sp cifiques ou m lange d allerg nes fix s des fils de cellulose de fa on covalente 2 bouteilles de 50mL chacune Solution concentr e de tampon de lavage Une fois dilu e cette solution contient 0 01 M de tampon phosphate PBS 0 1 de Tween 20 et 0 001 d azide
7. par les fils dans les chambres de test Cet appareil mesure l mission de lumi re en unit s de luminescence LUs Pour calculer la r ponse IgE des patients cet instrument soustrait automatiquement les valeurs d mission donn es par le contr le interne n gatif des valeurs mises par chaque filament Des valeurs de classe allant de 0 4 ont t d termin es en mesurant la quantit de lumi re mise par chaque filament dans une cuve de dosage Ces valeurs constituent le syst me d valuation de classe d allergie pour le kit CLA de dosage des IgE sp cifiques d allerg ne Les quantit s en IgE correspondant chaque valeur de classe ainsi que les valeurs correspondant au luminom tre sont indiqu es dans le tableau ci dessous Concentration en IgE induit par allerg ne Classe CLA LUS nets d fini Concentration tr s importante 143 242 Concentration lev e 01 on absence Des valeurs de classe CLA de 1 0 et plus repr sentent une augmentation progressive des concentrations d anticorps sp cifiques d un antig ne La valeur O indique l absence ou des taux non d tectables d anticorps sp cifiques d allerg nes 2 Limites de la M thode Un s rum h molys ou contenant des lipides peut affecter l efficacit du kit CLA de dosage des IgE sp cifiques d allerg ne Un diagnostic clinique et ou un traitement immunoth rapeutique ne devrait pas uniquement se baser sur les r sultats d un seul test Mais doit tr
8. r actif e Ne pas congeler les composants du kit e Les cuves de dosage sont stock es dans un sac en plastique contenant une ponge humide S assurer que le sac en plastique est referm proprement avant et apr s chaque utilisation Si l ponge s ass che humidifier nouveau avec du tampon de lavage puis refermer le sac en plastique Ces cuves de dosage peuvent tre utilis es jusqu la date d expiration du kit si elles sont conserv es entre 2 et 8 C e S il existe des signes de d t rioration ne pas utiliser le kit Les signes de d t rioration incluent une odeur inhabituelle une apparence turbide ou tout autre signe de contamination FA Collecte et Pr paration des chantillons Manipuler les chantillons provenant de patients ainsi que les composants du kit selon les pr cautions prescrites pour tout chantillon de s rum humain ou de sang pouvant contenir un agent infectieux Au cours de la manipulation des chantillons provenant de patients suivre les pr cautions d usage ou celles sugg r es par votre institution Le volume minimal de s rum humain n cessaire sans utilisation d agitateur rotatif par cuve de dosage individuelle est le suivant Une cuve de dosage contenant 30 allerg nes 1 5 mL de s rum Protocole suivre pour la collecte la pr paration et le stockage du s rum utiliser dans le test CLA Pr lever un chantillon de sang veineux dans un tube de s paration du s rum de 10 mL
9. 7 149 ainsi que sous des brevets correspondants issus au Canada en Australie au Japon en Espagne en France en Allemagne en Italie en Su de en Suisse en Autriche en Belgique en Hollande au Luxembourg et en Grande Bretagne 4 568 184 285 485 4 743 541 ainsi que sous des brevets correspondants issus au Canada en Australie au Japon en France en Allemagne en Su de en Suisse et en Grande Bretagne et 5 082 768 ainsi qu un brevet correspondant au Japon
10. Amorcer le distributeur de tampon de lavage afin d liminer toute bulle d air 2 Adapter la tubulure du distributeur sur l extr mit sup rieure de la premi re cuve de dosage 3 Laver successivement chaque cuve de dosage une fois avec 10 mL de tampon de lavage en pressant une fois mod r ment sur le piston REMARQUE Laisser chaque cuve de dosage se vider compl tement avant de passer l tape suivante 4 R p ter l tape pr c dente deux fois afin d effectuer au total un nombre de trois lavages pour chaque cuve de dosage REMARQUE Afin d viter que les filaments ne s chent les cuves de dosage doivent tre remplies imm diatement avec la solution d anticorps apr s ces lavages F Remplir les cuves de dosage avec la solution d anticorps 1 Tapoter doucement la partie inf rieure de la cuve de dosage sur du papier absorbant afin d liminer toute trace de tampon de lavage 1 Adapter une seringue de 3 ml sur l extr mit sup rieure de la cuve de dosage et un c ne propre l extr mit inf rieure de la cuve de dosage 3 Plonger l extr mit inf rieure de la cuve de dosage dans un r cipient usage unique contenant la solution d anticorps n cessaire 4 A laide de la seringue aspirer lentement la solution d anticorps sans former de bulle afin de remplir compl tement la cuve de dosage Le filament sup rieur doit tre recouvert de solution d anticorps REMARQUE S assurer que le fil sup rieur est
11. HITACHI Hitachi Chemical Diagnostics Inc FICHE TECHNIQUE POUR LE KIT CLA DE DOSAGE DES IgE SPECIFIQUES D ALLERGENES Pour utilisation diagnostique in vitro CE Utilisation pr vue Le kit CLA de dosage des IgE sp cifiques d allerg nes est un test in vitro utiliser pour la d termination semi quantitative de la concentration en IgE produits dans le s rum humain dirig s contre des allerg nes d termin s Doc No 0546 FRE Rev 07 R sum et explication du test L atopie est un tat d hypersensibilit immunologique induit par une classe particuli re d anticorps appel s r agines et identifi es Immunoglobulines E IgE dans les ann es 1960 Lorsqu ils sont stimul s par un allerg ne donn les lymphocytes B comp tents produisent des anticorps IgE contre cet allerg ne un anticorps IgE se lie par son domaine Fc des r cepteurs pr sents sur la surface des mastocytes et des basophiles la fixation d allerg nes sp cifiques sur ces IgE coupl es aux cellules va alors induire la d granulation de ces cellules et permettre la lib ration d amines vasoactives et provoquer la contraction de muscles lisses des d mangeaisons des boursouflures ainsi que la perte de fluides extracellulaires travers les muqueuses Les manifestations cliniques les plus courantes de ce m canisme biologique sont le rhume de foin l asthme l ecz ma l urticaire et le choc anaphylactique L valuation du taux
12. btenus si le test est r alis en respectant parfaitement les instructions d utilisation du produit et les proc dures de contr le de bonne qualit L eau de javel interf re avec le dosage Toute vaisselle contamin e doit tre abondamment lav e avec de l eau distill e ou d ionis e REMARQUE L utilisation de solutions base d alcool pour d sinfecter la paillasse provoque des fissures du plastique des cuves de dosage et les d gradent pr matur ment Valeurs Attendues A l origine les classes CLA ont t d termin es par des tudes scientifiques ayant pour but d tablir des courbes talons en utilisant un s rum contenant des anticorps IgE sp cifiques contre le bouleau blanc La limite entre les r sultats n gatifs et positifs a t tablie de fa on statistique comme deux d viations standard au dessus de la valeur moyenne de la population normale Il est recommand que chaque laboratoire d finisse ses propres valeurs de r f rence sur la population qui les int resse Performance de la M thode Standard A Precision Inter test Cinq r plications de 4 chantillons de s rums s ont t analys es en une fois La valeur moyenne du coefficient de variation des r ponses tous les allerg nes analys s calcul en Lus nets est de 11 7 Inter test Cinq r plications de 4 chantillons de s rums ont t analys es sur quatre jours diff rents La valeur moyenne du coefficient de variation des
13. d IgE d un patient contre divers allerg nes est important pour le diagnostic et le traitement de l allergie atopique Le kit CLA de dosage des IgE sp cifiques d allerg nes est fond sur une modification n utilisant pas d isotopes de la m thode RAST d origine et permet la d termination simultan e d un grand nombre d allerg nes sp cifiques Des r sultats semi quantitatifs sont obtenus en utilisant un syst me de classification similaire celui utilis pour la m thode RAST Tous les groupes d allerg nes CLA incorporent des contr les internes qui permettent d valuer le fonctionnement du kit en tenant compte des liaisons non sp cifiques dues au s rum du patient Le kit CLA de dosage des IgE sp cifiques d allerg ne combine la sp cificit et la sensibilit de la m thode RAST avec la facilit et la simplicit d un dosage sans utilisation d isotope de plusieurs allerg nes simultan s Principe du test Le kit CLA de dosage des IgE sp cifiques d allerg nes utilise une cuve en plastique de dosage CLApette qui permet d incuber le s rum des patients simultan ment en pr sence d un grand nombre d allerg nes sp cifiques ou d un m lange d allerg nes Chaque cuve de dosage CLApette contient un nombre d fini de fils de cellulose sur lesquels un allerg ne sp cifique ou un m lange d allerg nes a t fix de fa on covalente Chaque cuve de dosage poss de aussi un contr le n
14. de sodium conservateur Anticorps IgE Une bouteille de 32 mL Solution bleue contenant un anticorps de ch vre anti IgE humain conjugu une enzyme 0 01 M de tampon phosphate PBS pH 7 2 des stabilisateurs de prot ines ainsi que 0 1 de Proclin conservateur Photo r actif A Une bouteille de 8 mL Solution contenant 14 30 mM d O aminophthahydrazide luminol Photor actif B Une bouteille de 8 mL Solution contenant 0 05 M de tampon borate pH 9 4 Photor actif C Une bouteille de 8 mL Solution contenant 0 0025 M d thyle orange Photor actif D Une bouteille de 8 mL Solution contenant 0 004 M de peroxyde d hydrog ne Bouchons en caoutchouc pour cuve de dosage 44 bouchons CLApette noirs A placer en haut des cuves CLApette Bouchons en caoutchouc pour cuve de dosage 44 bouchons CLApette blancs A placer en bas des cuves CLApette Disponibles sous diff rents formats de kit Pour plus de d tails contactez votre repr sentant Hitachi Chemical Diagnostics local Pr cautions suivre Le kit CLA de dosage des IgE sp cifiques d allerg ne est con u pour des diagnostics in vitro La solution concentr e de tampon de lavage contient de l azide de sodium comme conservateur Il a t rapport que l azide de sodium peut interagir avec le plomb et le cuivre des tuyaux de plomberie et peut former des compos s m taux azide potentiellement explosifs La prudence est donc conseill e lors
15. e afin d impr gner tous les filaments avec du s rum et tapoter doucement l une des extr mit s bouch es plusieurs fois jusqu ce que le s rum s coule l autre extr mit de la cuve de dosage R p ter l op ration jusqu l assurance d un coulement fluide d une extr mit l autre de la cuve de dosage 4 Placer les cuves de dosage sur l agitateur rotatif CLA et allumer l agitateur rotatif Faire tourner les chantillons 16 24 H Temp rature ambiante Noter l heure de d but d incubation des s rums Veiller l coulement r gulier du s rum dans chacune des cuves de dosage Si le s rum ne s coule pas facilement d une extr mit l autre d une cuve de dosage a Arr ter l agitateur rotatif enlever la cuve de dosage en question la tapoter doucement sur la paillasse b Remettre la cuve de dosage sur l agitateur rotatif c Allumer l agitateur rotatif et observer nouveau le flux du s rum dans chaque cuve de dosage d Recommencer l op ration si n cessaire NDO C N Suivre le protocole indiqu dans la m thode standard Remarque Ne pas faire tourner les cuves de dosage durant l incubation avec la solution d anticorps et le m lange photo r actifs Contr le de Qualit A Fils de contr le interne Chaque cuve de dosage poss de un contr le positif et un contr le n gatif Ces filaments servent de contr les internes pour chaque cuve de dosage Contr le positif
16. e fait par un m decin apr s valuation de toutes les donn es cliniques et des r sultats de laboratoire Le kit CLA de dosage des IgE sp cifiques d un allerg ne donn produit des r sultats semi quantitatifs Cette m thode n a pas de r f rence absolue Des valeurs de classe ont t arbitrairement assign es Parce que la capacit d interaction d un anticorps IgE avec un allerg ne peut varier d un allerg ne un autre une classification similaire pour diff rents allerg nes ne signifie pas obligatoirement une quivalence clinique Lorsque des allergies alimentaires sont test es les IgE circulantes peuvent ne pas tre d tect es si elles reconnaissent des allerg nes d natur s cuits transform s dig r s Ces formes d natur es ne sont pas pr sentes sous la m me structure que les allerg nes alimentaires utilis s dans ce test particulier Un faux r sultat positif chez des personnes test es pour des allergies alimentaires pourrait les conduire suivre un r gime alimentaire inappropri Un r sultat n gatif chez une personne sensible certains aliments pourrait conduire un choc anaphylactique aux cons quences plus ou moins graves Un fort taux d IgE totale sup rieur ou gal 500 IU mL peut donner des r sultats d IgE sp cifiques faiblement ou fortement positifs sur tous les filaments Il conviendra d interpr ter ces r sultats avec pr caution Des r sultats fiables et reproductibles seront o
17. lavage 2 Adapter une seringue de 3 ml sur l extr mit sup rieure de la cuve de dosage 3 Plonger l extr mit inf rieure de la cuve de dosage dans le m lange photo r actif contenu dans un r cipient usage unique 4 A aide de la seringue aspirer lentement le m lange photo r actif sans former de bulle afin de remplir compl tement la cuve de dosage Le filament sup rieur doit tre recouvert par du m lange photo r actif 5 Noter l heure du d but de l incubation L Boucher les cuves de dosage 1 Ne pas ter la seringue 2 Ins rer le bouchon blanc sur la partie inf rieure de la cuve de dosage 3 Enlever la seringue et ins rer le bouchon noir sur la partie sup rieure de la cuve de dosage 4 V rifier que la cuve de dosage ne fuit pas 5 Essuyer tout m lange photo r actif qui pourrait contaminer l ext rieur de la cuve de dosage avec un mouchoir propre humide ne contenant pas de coton M Laisser incuber les cuves de dosage pendant 20 minutes avant la lecture au luminom tre Toutes les cuves de dosage doivent tre lues dans les 60 minutes qui suivent l addition du m lange photo r actif dans la cuve de dosage N Pour la lecture des r sultats se r f rer au Manuel d utilisation du luminom tre CLA M thode alternative Remarque Il a t d montr lors d tudes internes que la sensibilit du dosage obtenue avec la technique utilisant un agitateur rotatif peut tre diminu e lorsque compar
18. nd Public Safety Workers February 1989 10 Richardson SH Barkley WE eds Biosafety in microbiological and biomedical laboratories 2nd ed Washington DC US Dept of Health and Human Services 1988 11 Federal OSHA Standard 1910 1030 Bloodborne pathogens 29 CFR 1910 1030 12 R sultats sont fournis selon demande O1 D D N Pour toute assistance technique veuillez contacter Hitachi Chemical Diagnostics En dehors des Etats Unis veuillez contacter votre repr sentant Hitachi Chemical Diagnostics local EA Hitachi Chemical Diagnostics Inc Hitachi Europe Ltd Whitebrook Park Lower Cookham Road Maidenhead Berkshire SL6 8YA United Kingdom Tel 44 0 1628 585 590 Fax 44 0 1628 585 594 dl Hitachi Chemical Diagnostics Inc 630 Clyde Court Mountain View California 94043 Tel 650 961 5501 Fax 650 969 2745 Distribu par BMD Biomedical Diagnostics B P 103 77423 Marne la Vall e cedex 2 France T l phone 33 1 64 62 10 12 T l copie 33 1 64 62 09 66 2011 Hitachi Chemical Diagnostics Inc CLA est une marque de fabrication enregistr e par Hitachi Chemical Diagnostics Inc Fabriqu aux tats Unis sous un ou plusieurs brevets ayant pour num ro 3 941 876 4 031 197 4 459 360 ainsi que sous des brevets correspondants issus au Canada en Australie au Japon en Espagne en France en Allemagne en Italie en Su de et en Grande Bretagne 4 510 393 4 558 013 5 56
19. ou un tube bouchon rouge Le patient n a pas besoin d tre je n Aucune pr paration sp ciale n est n cessaire REMARQUE Un s rum h molys ou contenant des lipides peut avoir un effet adverse sur l efficacit du kit CLA de dosage des IgE sp cifiques d allerg ne 1 2 1 Laisser le sang coaguler pendant 1 heure 2 heures temp rature ambiante 2 Centrifuger le sang coagul pendant 10 20 minutes 2000 3000 x g ou 2500 3600 rpm 3 Transf rer le s rum dans un tube en plastique propre marqu de stockage 4 Les chantillons de s rum stock s entre 2 et 8 C peuvent tre conserv s pendant une semaine au maximum Au del de cette p riode les conserver congeler 20 C REMARQUE Les cycles r p t s de cong lation d cong lation doivent tre vit s Les chantillons qui ont t d congel s doivent tre bien m lang s avant centrifugation EX tapes suivre pour le dosage Pour obtenir des instructions d taill es pour r aliser ce test se r f rer au Manuel d utilisation du Luminom tre CLA Mat riel fourni e Kit CLA de dosage des IgE sp cifiques d allerg ne voir paragraphe 4 REACTIFS COMPOSANTS Mat riel n cessaire non fourni dans le Kit r actifs e Kit quipement CLA comprenant Portoir de lavage pouvant contenir jusqu 40 cuves de dosage Un r servoir de lavage Une bouteille de lavage et son piston Une micro pipette et des c nes Des r
20. r ponses tous les allerg nes analys s calcul en Lus nets est de 11 6 B Sensibilit La limite de d tection du dosage est de 10 LUs C Sp cificit Dans le s rum humain des niveaux physiologiques normaux il n y a pas de r action crois e d tectable avec les immunoglobulines IgA IgM IgG ou IgD D Comparaison des m thodes In Vitro de d tection d allergie En moyenne la similitude calcul e en pourcentage d efficacit entre le kit CLA et d autres kits de dosage n Vitro est de 95 ces valeurs varient entre 86 et 100 Remarque Il n existe pas d allerg ne sp cifique t moin pour comparer ces m thodes biologiques in vitro m Bibliographie Ishizaka K Ishizaka T Hornbrook MM J Immunol 1966 97 75 Johansson SGO Bennich H Immunol 1967 13 381 Kulczycki A J Allergy Clin Immunol 1981 68 5 Johansson SGO Bennich HH Berg T Prog Clin Immunol 1972 1 157 Homburger HA CRC Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences 1986 23 279 Miller SP Marinkovich VA Riege DH Sell WJ et al Clin Chem 1984 30 1467 Agata H et col Ann Allergy 1993 70 153 Safety Management No CDC 22 Decontamination of laboratory sink drains to remove azide salts Atlanta GA Centers for Disease Control April 30 1976 9 U S Dept of Health and Human Services Centers for Disease Control Guidelines For Prevention of Transmission of Human Immunodeficiency Virus and Hepatitis B Virus to Health Care a
21. recouvert par la solution d anticorps Ceci diminuera les risques de formation de bulles d air qui pourraient affecter les r sultats du test G Boucher et incuber les cuves de dosage 1 Ne pas ter la seringue 2 Boucher l extr mit inf rieure de la cuve de dosage avec un bouchon blanc 3 Enlever la seringue et ins rer le bouchon noir sur l extr mit sup rieure de la cuve de dosage 4 Garder ces cuves de dosage verticalement sur le portoir de lavage Incuber temp rature ambiante pendant 4 heures 15 minutes noter l heure du d but de l incubation H liminer la solution d anticorps 1 Enlever le bouchon blanc de chaque cuve de dosage replacer chacune de ces cuves sur le portoir de lavage 2 Enlever le bouchon noir de chaque cuve de dosage de fa on liminer le liquide dans le r servoir de lavage Ne pas jeter les bouchons Noter l heure de la fin de l incubation I Laver les cuves de dosage trois 3 fois tel qu indiqu dans le paragraphe 9 E J Pr parer le m lange photo r actif comme indiqu dans le paragraphe 6 PREPARATION DES REACTIFS REMARQUE Afin d viter que les filaments ne s chent remplir imm diatement les cuve de dosage avec du m lange photo r actif apr s le dernier lavage K Remplir les cuves de dosage avec le m lange photo r actif 1 Tapoter doucement la partie inf rieure de la cuve de dosage sur du papier absorbant afin d liminer toute trace de tampon de
22. tandard A Remplir les cuves de dosage avec du s rum 1 Attacher la seringue de 3 cc sur le haut de la cuve de dosage 2 Ins rer la partie basse de la cuve de dosage dans un tube contenant du s rum de patient Eviter tout pr cipit et ou couches de lipides 3 A l aide de la seringue aspirer lentement le s rum afin de remplir compl tement la cuve de dosage S assurer que le filament sup rieur est compl tement couvert par du s rum et qu aucune bulle ne se soit form e dans la cuve de dosage B Boucher et incuber les cuves de dosage 1 Sans ter la seringue ins rer un bouchon blanc sur la partie inf rieure de la cuve de lavage 2 Enlever la seringue et placer un bouchon noir sur le haut de la cuve de dosage REMARQUE ins rer les bouchons fond afin d viter toute fuite 3 Placer les cuves de dosage remplies de s rum verticalement sur le portoir de lavage 4 Laisser incuber temp rature ambiante pendant 16 24 heures Noter l heure du d but de l incubation C Pr parer le tampon de lavage en suivant les instructions d crites dans le paragraphe 6 PREPARATION DES REACTIFS D limination du S rum 1 Enlever le bouchon blanc de la cuve de dosage remettre la cuve de dosage sur le portoir de lavage 2 Enlever le bouchon noir de la cuve de dosage de fa on liminer le s rum dans le r servoir de lavage Noter l heure du d but D arr t de l incubation E Lavage des cuves de dosage 1
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