Anti-HLA Negative Control Anti-HLA Positive Control Anti-HLA
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1. du test Les antis rums HLA r agissent avec les antig nes membranaires correspondants pr sents sur les lymphocytes humains L ajout de compl ment de lapin provoque une modification de structure de la membrane cellulaire qui conduit la p n tration d un indicateur color Lymphocytes color s r action positive En cas d absence de r action antig ne anticorps la membrane cellulaire reste intacte L indicateur color ne p n tre pas et les cellules restent incolores r action n gative Isolement des lymphocytes Isolement des lymphocytes l aide d un gradient de densit ou par immuno billes IMB selon les instructions du fabricant Protocole du test Test de microlymphocyvytotoxicit classe l 1 Remplir les puits des plateaux de microtest avec environ 5 10 ul d huile min rale 2 Distribuer dans chaque puits 1 ul de s rum anti HLA en dessous de l huile l aide d une seringue d un microlitre Ajouter 1 ul de suspension de lymphocyte environ 2 000 3 000 cellules en dessous de l huile De mani re garantir une r action antig ne anticorps suffisante il est n cessaire que l antis rum et les cellules soient en contact Incuber une temp rature comprise entre 18 et 22 temp rature ambiante pendant 30 minutes 4 Ajouter 5 6 ul de compl ment de lapin dans chaque puits et incuber pendant 60 minutes une temp rature comprise entre 18 et 22 temp rature ambiante r acti2. O BAG eau care NOTICE TECHNIQUE D UTILISATION Anti HLA Negative Control Anti HLA Positive Control Anti HLA Positive Control B Cell Anti HLA Positive Control T Cell Test de microlymphocytotoxicit NIH POUR USAGE DE DIAGNOSTIC IN VITRO CE Lire attentivement les instructions figurant dans le manuel d utilisation du ou des syst me s et sur les tiquetages et ou dans la notice d utilisation du r actif Description du produit Le contr le positif anti HLA est compos d une globuline IgG de lapin anti lymphocyte humain m lang e des antis rums humains polysp cifiques Le contr le n gatif anti HLA est compos d un groupe de s rums provenant de plusieurs donneurs masculins de groupe sanguin AB ne pr sentant aucune r activit d anticorps anti HLA Le contr le positif anti HLA et le contr le n gatif anti HLA sont utilis s en tant que r actifs de contr le dans le test de microlymphocytotoxicit pour le diagnostic in vitro des antig nes anticorps humains HLA de classe et ou Il Les contr les positifs anti HLA B cell et T cell sont utilis s dans le test de microlymphocytotoxicit pour v rifier la puret des cellules apr s la proc dure de s paration Tous ces contr les anti HLA sont lyophilis s Avant l utilisation dissoudre les s rums de contr le anti HLA lyophilis s avec le volume d eau distill e n cessaire indiqu sur l tiquette La reconstitution n cessite 10 15 minutes Principe
3. et les cellules soient en contact 3 Incuber une temp rature comprise entre 18 et 22 temp rature ambiante pendant 30 minutes 4 Ajouter 5 ul de compl ment de lapin Incuber une temp rature comprise entre 18 et 22 temp ra ture ambiante pendant 60 minutes 5 Ajouter 5 ul de solution d orange d acridine bromure d thidium EDTA 6 Lire l aide d un microscope fluorescence Caract ristiques de performances Les s rums de contr le positif anti HLA sont test s en contr le de qualit avec au moins 50 suspensions de lymphocytes T et B provenant de donneurs diff rents et ils r agissent conform ment la r action positive des sp cifications score 8 Les s rums de contr le n gatif anti HLA sont test s en contr le de qualit avec au moins 50 suspensions de lymphocytes T et B provenant de donneurs diff rents et ils r agissent conform ment la r action n gative des sp cifications score maximum 2 D pannage Raisons possibles de r actions faussement n gatives ou faibles e Contamination par des rythrocytes ce qui peut rendre difficile la lecture au microscope e Contamination par des plaquettes e Quantit de lymphocytes trop lev e e Coloration jaune des antis rums HLA e S rums trop souvent d congel s et recongel s e Compl ment reconstitu rest trop longtemps temp rature ambiante avant utilisation e Reste de compl ment recongel puis red co
4. icit Temp rature de conservation selon le NIH Date de p remption Consulter la notice technique d utilisation ANTI HLA SERA S rums anti HLA Pour usage de diagnostic in vitro Code produit Code de lot N B pour les modes d emploi en d autres langues veuillez utiliser ce lien http www bag healthcare com en Diagnostika Downloads Version 1 2013 Auftragsannahme Ordering Customer Service BAG Health Care GmbH Tel 49 0 6404 925 450 Tel 49 0 6404 925 125 o R AG AmtsgerichtsstraRe 1 5 Tel 49 0 6404 925 0 www bag healthcare com Fax 49 0 6404 925 460 Fax 49 0 6404 925 421 35423 Lich Germany Fax 49 0 6404 925 250 info bag healthcare com verkauf bag healthcare com service bag healthcare com
5. ier au moment d liminer les r actifs comportant de l azide L limination de tous les chantillons et mat riels du test doit respecter les r glementations nationales et locales Prendre connaissance des avertissements et des pr cautions du fabricant de la solution de formald hyde et d orange d acridine bromure d thidium Avertissements de risque R 22 52 53 uniquement pour les s rums anti HLA non dissous Dangereux en cas d ingestion Dangereux pour les organismes aquatiques peut provoquer des effets ind sirables long terme dans l environnement aquatique Avertissements de s curit S 22 61 uniquement pour les s rums anti HLA non dissous Ne pas respirer les poussi res Eviter de diss miner dans l environnement Se r f rer aux instructions particuli res dans les fiches de donn es de s curit Les fiches de donn es de s curit sont disponibles sur demande Ne pas utiliser les s rums de contr le anti HLA au del de la date de p remption indiqu e sur l tiquette Conservateur lt 1 Nas 3 lt lyophilis dangereux lt 0 1 NaNs dissout Dur e de conservation e sous forme lyophilis e jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette e sous forme dissoute 3 mois Stockage entre 2 et 8 dissout lt 20 Conditionnement 0 5 ml d origine humaine ou monoclonale lyophilis Explication des symboles utilis s sur les emballages Test de lymphocytotox
6. ngel e Dur es d incubation trop courtes e Temp rature d incubation trop faible Raisons possibles de r actions faussement positives Dur es d incubation trop longues Temp rature d d incubation trop lev e Lymphocytes l s s ant rieurement le contr le n gatif est positif bruit de fond Oubli d ajout du fixateur Contamination crois e due au pipetage Limites Le contr le positif anti HLA ne peut pas tre utilis avec du DTT dithiothr itol Des r actions faussement n gatives peuvent se produire car les anticorps monoclonaux de lapin pr sents dans le contr le peuvent se comporter diff remment des anticorps IgG humains lorsqu ils sont trait s par le DTT Bibliographie Bodmer J et al 1997 Tissue Antigens 49 297 321 Avertissements et pr cautions Les s rums de contr le anti HLA sont uniquement destin s au diagnostic in vitro et ils doivent tre utilis s par du personnel correctement form exp riment en tests d histocompatibilit Les directives de transplantation et les normes EFI doivent tre respect es dans le cas particulier des r sultats de typage douteux Le mat riel d origine humaine utilis pour produire ces r actifs a t test et trouv n gatif pour HBsAg et pour les anticorps anti HIV et anti HCV Cependant tous les mat riels biologiques utilis s comme le sang les s rums et les s rums de contr le doivent tre manipul s comme des substances po
7. on cytol ytique 5 Ajouter 3 4 ul de solution d osine aqueuse 5 chaque puits et fixer apr s 5 10 minutes avec 5 6 ul de solution de formald hyde 37 coloration et fixation 6 Apr s la s dimentation des lymphocytes 30 60 minutes lire les plateaux de microtest l aide d un microscope invers contraste de phase 7 Recourvrir le plateau d un couvercle en verre juste avant la lecture o Distribu en Belgique en France et au Luxembourg par m diane diagnostics SAS Z A de la Cha ne 78370 PLAISIR 33 1 30 07 50 60 info mediane diag fr Auftragsannahme Ordering Customer Service BAG Health Care GmbH Tel 49 0 6404 925 450 Tel 49 0 6404 925 125 o R AG Amtsgerichtsstra e 1 5 Tel 49 0 6404 925 0 www bag healthcare com Fax 49 0 6404 925 460 Fax 49 0 6404 925 421 35423 Lich Germany Fax 49 0 6404 925 250 info bag healthcare com verkauf bag healthcare com service bag healthcare com Protocole du test Technique par IMB classe Il f Remplir les puits des plateaux de microtest avec environ 5 10 ul d huile min rale 2 Distribuer dans chaque puits 1 ul de s rum anti HLA en dessous de l huile l aide d une seringue d un microlitre Ajouter 1 ul de la suspension de lymphocyte IMB B environ 1 000 cellules en dessous de l huile De mani re garantir une r action antig ne anticorps suffisante il est n cessaire que l antis rum
8. tentiellement infectieuses car aucune m thode de test ne peut garantir l absence d agents infectieux dans des produits d origine biologique Il est recommand de respecter les pr cautions de s curit adapt es pour manipuler les produits biologiques ne pas pipeter la bouche utiliser des gants jetables pour manipuler les produits biologiques et r aliser le test se d sinfecter les mains une fois le test termin Les produits biologiques doivent tre inactiv s avant leur limination ex dans un autoclave Les produits jetables doivent tre autoclav s ou incin r s apr s usage Un renversement de produits potentiellement infectieux doit tre ramass imm diatement avec du papier absorbant et les zones contamin es doivent tre nettoy es avec un d sinfectant standard adapt ou avec de l alcool 70 Les mat riels utilis s pour nettoyer les renversements y compris les gants doivent tre inactiv s avant leur limination ex dans un autoclave Les r actifs du test contiennent du NaN comme conservateur Les r actifs dissous contiennent une concentration lt 0 1 NaNs qui n est pas consid r e comme dangereuse Toutefois viter le contact avec la peau et les membranes muqueuses Les azides peuvent r agir avec le cuivre et le plomb de certaines tuyauteries et former des sels explosifs Les quantit s d azide utilis es dans cette trousse sont faibles Cependant laisser couler une grande quantit d eau dans l v
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