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Rapport de synthèse BIO 12-18 03-06 (fr) - NF VALIDATION

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Contents

1. 9328 2 26 par d faut 9481 2 30 f par d faut 9562 2 32 par d faut 9500 2 31 1 par d faut 9769 237 par d faut 9344 2 27 H par d faut 9560 2 32 H 1 par d faut 60 67 Laboratoire Q RESULTATS INDIVIDUELS DES LABORATOIRES COLLABORATEURS R f rence Fraser 1 2 M thode de r f rence Fraser PALCAM R sultat Comparaison r sultats attendus Test DLMO M thode alternative VIDAS Listeria Duo Test DLIS R sultat VT du test F RFV VT R sultat du tesi par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut Confirmation AA 4 4 4 er oo 4 4 4 4 R sultat 4 to Comparaison r sultats attendus 61 67 ANNEXE 7 ETUDE INTERLABORATOIRE DEGRE D ACCORD 62 67 METHODE ALTERNATIVE Niveau LO Nb de n gatifs Nb de n gatifs Probabilit de Probabilit de Probabilit de Probabilit de paireg Probabilit de paires de Laboratoire GH Su G sa attendus obtenus n gatifs paires de n gatifs positifs de positifs r sultats identiq
2. 2 0 00 8 0 00 f 2 0 00 8 0 00 H 3 0 00 8 0 00 H 3 0 00 8 0 00 H 9420 2 15 H I par d faut 9306 2 13 H par d faut 8992 2 15 H par d faut 8880 2 12 par d faut 9175 2 19 H par d faut 9046 2 16 H par d faut 9124 2 18 H H par d faut 8322 1 99 I 1 par d faut D nombrement du lait en UFC ml 55 67 Laboratoire F RESULTATS INDIVIDUELS DES LABORATOIRES COLLABORATEURS R f rence Fraser 1 2 M thode de r f rence Ge R sultat OAA PALCAM D nombrement du lait en UFC ml lt 1 Laboratoire G Comparaison r sultats attendus Test DLMO M thode alternative VIDAS Listeria Duo R sultat Test DLIS VT du test VT R sultat du tes par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut Confirmation 4 4 fa 4 4 R sultat Comparaison r sultats attendus R f rence Ge R sultat OAA PALCAM D nombrement du lait en UFC ml 1 Comparaison r sultats attendus
3. M thode de r f rence Comparaison M thode alternative VIDAS Listeria Duo Comparaison R f rence Fraser 1 2 Fraser R sultat r sultats Test DLMO R sultat Test DLIS R sultat du tesi Confirmation R sultat r sultats OAA PALCAM attendus VT du test VT attendus par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut Ai 4 e er o 4 4 4 4 ES ES HA D nombrement du lait en UFC ml lt 1 Laboratoire E M thode de r f rence Comparaison M thode alternative VIDAS Listeria Duo Comparaison R f rence Fraser 1 2 Fraser S r sultats Test DL MO R sultat Test DLIS j A i r sultats R sultat R sultat du test Confirmation R sultat OAA PALCAM OAA PALCAM attendus RFV VT du test RFV VT attendus 4 0 00 8 0 00 f 3 0 00 8 0 00 H 5 3 0 00 8 0 00 H 3 0 00 12 0 00 f 9815 2 25 H par d faut 9383 2 15 H par d faut 1 0 00 9 0 00 par d faut 11134 2 55 H H par d faut 11894 2 72 par d faut 11431 2 62 H H par d faut 11657 2 67 par d faut 10679 2 44 H par d faut
4. 7756 1 89 I par d faut 7814 1 90 par d faut K 8982 2 18 par d faut 8770 2 13 f par d faut 9001 2 19 H par d faut 8903 2 17 I par d faut 8904 2 17 par d faut 8624 2 10 par d faut E 3 0 00 6 0 00 3 0 00 5 0 00 H 4 0 00 6 0 00 f RN 3 0 00 6 0 00 H 2 0 00 7 0 00 e e 8847 2 15 H par d faut 6154 1 50 H par d faut 8640 2 10 H 1 par d faut 8621 2 10 d par d faut 8586 2 09 F par d faut 8223 2 00 H par d faut 8201 1 99 H 1 par d faut D nombrement du lait en UFC ml Laboratoire N M thode de r f rence Comparaison M thode alternative VIDAS Listeria Duo Comparaison R f rence Fraser 1 2 Fraser F r sultats Test DLMO R sultat Test DLIS j A i r sultats R sultat R sultat du test Confirmation R sultat OAA PALCAM OAA PALCAM attendus RFV VT du test RFV VT attendus 3 0 00 9 0 00 f 2 0 00 11 0 00 H 7 3 0 00 10 0 00 H 3 0 00 12 0 00 H 9584 2 55 I par d faut Ed 9837 2 62 H par d faut K 10295 2 74 par d faut 10545 2 81 I par d faut 10380 2 77 H par d faut 1
5. 3 0 00 8 0 00 H 3 0 00 8 0 00 H 3 0 00 8 0 00 H 10092 2 65 I I par d faut dl 10020 2 63 H par d faut 9490 2 49 par d faut 9607 2 53 1 par d faut 9236 2 43 H par d faut 9798 2 58 f par d faut El 9459 2 49 H I par d faut 5 9481 2 49 H par d faut 3 0 00 9 0 00 H 2 0 00 10 0 00 3 0 00 9 0 00 H 3 0 00 6 0 00 H 9776 2 57 H H par d faut 9862 2 59 par d faut 9447 2 48 1 par d faut 9631 2 53 H H par d faut 9459 2 49 H par d faut 9642 2 53 1 par d faut 9497 2 50 H par d faut 9546 2 51 I H par d faut 58 67 RESULTATS INDIVIDUELS DES LABORATOIRES COLLABORATEURS Laboratoire M M thode de r f rence Comparaison M thode alternative VIDAS Listeria Duo Comparaison R f rence Fraser 1 2 Fraser A r sultats Test DLMO R sultat Test DLIS A j r r sultats R sultat R sultat du test Confirmation R sultat OAA PALCAM OAA PALCAM attendus RFV VT du test RFV VT attendus 4 0 00 6 0 00 H 4 0 00 8 0 00 H 7 4 0 00 8 0 00 H 3 0 00 8 0 00 H
6. QeaQeaggaggaagaa Crevettes L seeligeri d par d faut 31 67 CODE MATRICES sue G6 Brisures de saumon Brisures de saumon Saumon fum Saumon fum Saumon fum Saumon fum Brisures de saumon Truite fum e Saumon fum Norvege Saumon fum Atlantique Saumon fum Ecosse Saumon fum Ecosse Truite fum e Brisures de saumon Saumon fum Eglefin fum Saumon fum Atlantique Saumon fum Atlantique Fl tan fum Truite fum e Colin d Alaska fum Saumon fum de Norv ge Truite fum e des Pyr n es Allumettes de saumon fum Truite fum e d Aquitaine Tartare de saumon Tartare de saumon Filets de harengs marin s Poisson la Bordelaise Tarama Tarama Filets de harengs marin s Paupiettes de saumon aux l gumes Brochettes de poisson blanc Brochettes de saumon Morue sal e Harengs saurs Accras de morue Filet de colin aux petits l gumes Produits de la p che METHODE NF EN ISO 11290 1 FRASER 1 2 DS CONFIRMATION REV RESULTAT RFV RESULTAT pat am on ENEE S558 le Su 950 gt m al gt aaaaaraez at gt el Lu I GEES D Domaine L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L innocua L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monoc
7. Test DLMO M thode alternative VIDAS Listeria Duo R sultat Test DLIS VT du test ttl tle VT R sultat du tesi par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut Confirmation Ai lr 4 er ES ES ES EE 4 4 4 ER ES R sultat Comparaison r sultats attendus 56 67 RESULTATS INDIVIDUELS DES LABORATOIRES COLLABORATEURS Laboratoire H M thode de r f rence Comparaison M thode alternative VIDAS Listeria Duo Comparaison R f rence Fraser 1 2 Fraser R sultat r sultats Test DLMO R sultat Test DLIS r sultats OAA PALCAM attendus VT ditest VT R sultat du test Confirmation R sultat attendus par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut mise u par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut ro o 4 4 ER ES I D nombrement du lait en UFC ml lt 1 Laboratoire J M thode de r f rence Comparaison M thode alternative VIDAS Listeria Duo Comparaison R f rence Fraser 1 2 Fraser r sultats Test
8. attestation 12 18 03 06 La m thode a t reconduite en d cembre 2009 et en janvier 2014 Les r sultats report s dans le pr sent rapport ont t produits lors des essais de validation conduits par EUROFINS IPL Nord dans le cadre de la marque NF VALIDATION conform ment aux exigences en vigueur 1 2 Principe et protocole de la m thode alternative 1 2 1 Principe de la m thode Le test VIDAS Listeria Duo est un test immuno enzymatique permettant la d tection d antig ne Listeria monocytogenes et Listeria par la m thode ELFA Enzyme Linked Fluorescent Assay gr ce au syst me automatis VIDAS Chaque test se d compose en deux l ments e Le c ne a usage unique servant la fois de phase solide et de syst me de pipetage pour le test L int rieur du c ne est recouvert d anticorps anti Listeria monocytogenes et d anticorps anti Listeria adsorb s sur sa surface e La cartouche cf sch ma ci dessous qui contient tous les r actifs pr ts l emploi n cessaires pour le test solution de lavage anticorps anti Listeria monocytogenes et anticorps anti Listeria conjugu s la phosphatase alcaline et substrat Solution de pr lavage Substrat Echantillon Solutions de lavage Conjugu Lis Conjugue LMO2 Toutes les tapes sont r alis es automatiquement par le module analytique VIDAS Un aliquot du bouillon d enrichissement est plac dans la cartouche et subit un cycle d aspiration refoulement dont la dur
9. me Laboratoires 8 7 eu ew Laboratoire K a 8 mee se e lLaboratoreL 8e 7 e mee Laboratoirem zs Ia ses me Laboratoire N zs 7 e mee Laboratoire zs 8e CSC me LaboratoireP__ zs 8e ess me Laboratoire Q 8 8 8s 8 Total E GO ET Niveau L2 Nb de positifs Nb de positifs Paires interlaboratoires EEN EE EE EE Laboratoire 8 II 896 Laboratoire E 8 TH HH Laboratoire 8 8 Io oe Laboratoire G 8 8 e oe lLaboratoreH 8 8 oe Laboratoires 8 8 Io oe Laboratoire K 8 8 oe Laboratoiet 8 8 oe Laboratoire M 8 8 _ _ 896 eo Laboratoiren oz ee ee Laboratoire 8 8 oe lLaboratoreP_ 8 8 oe Laboratoire Q 8 8 896 oe Toa 818440 67 67
10. par d par d par d par d par d par d par d par d par d par d t Limite in sup REF Val Limite HE Limite in sup Charge bact rienne R partition de la flore L l g re A culture pure de colonies suspectes M moyenne B m lange avec une majorit de colonies suspectes H lev e C m lange avec une minorit de colonies suspectes D m lange avec de rares colonies suspectes E absence de colonies suspectes 46 67 NIVEAU DE DETECTION RELATIF CONTAMINE AVEC Listeria monocytogenes 4b Chou rouge 40 000 000 UFC g M thode de r f rence M thode alternative VIDAS LDUO Niveau de Niveau obtenu contamination b 25g RG 12 104 R sultat Conclusion RFV LMO VT Resultal RFV LIS R sultat Conclusion OAA1 OAA2 Test LMO 23 3 2 par d faut par d faut par d par d par d par d par d par d par d par d op L oo o par d par d par d par d par d par d par d par d par d par d par d par d lo o Ses tile zi Limite in sup REF Val Limite aur Limite in sup Charge bact rienne R partition de la flore L l g re A culture pure de colonies suspectes M moyenne B m lang
11. zs 8 10 too TI oo uo too lLaboratoieK zs 8 10 too TI oo TI uo too Laboratoire zs 8 tw too TI 0 00 oo too LaboratoireM_ 8 7 ose o7z 0 18 oo ag Laboratoiren zs 8 10 1 00 TI oo uo too LaboratoireO zs 7 ose o7z Tu oo og LaboratoieP 8 8 10 too um oo to LaboratoireQ sa 8 10 10 TI oo oo too Moyenne 094 Nb de n gatifs Probabilit de Probabilit de obtenus n gatifs paires de n gatifs Degr d accord Niveau L2 aboratoire o ES R attendus positifs de positifs r sultats identiques Laboratoire A 8 ooo oo 10 Eaboratire B 58 10 10 oo o0 10 Laboratoire a 8 1 00 o 00 omg t0o k Laboratoire E a 8 100 1 00 00 ooo 100 k Laboratoire F 8 8 100 1 00 00 ooo 100 k LaboratoireG sa 8 10 o oo om o k LaboratoreH e 8 10 1 00 0 00 0 00 10m k Laboratoire 8 8 10 1 00 00 omg t0o k Laboratoire 8 8 10 10 oo oo 10 LaboratoireL 8 8 10 10 oo oo 10 I LaboratoireM 8 8 10 1 00 00 om t0o k Laboratoiren gs 8 10 1 00 00 omg 10 k Laboratoire O a 8 10 1 00 00 om t0o k Laboratoire P 8 8 10 10 oo 000 10 k Laboratoire Q sa 8 100 1 00 00 omg 1400 k Moyenmej 100 Degr d aciejordj 1009 63 6
12. Listeria monocytogenes Les deux m thodes sont consid r es comme statistiquement quivalentes selon les tests appliqu s Le niveau de d tection relatif de la m thode VIDAS LDUO et de la m thode de r f rence a t valu par contaminations artificielles de cinq produits diff rents Le niveau de d tection obtenu est compris entre 0 3 et 2 5 cellules par 25 grammes pour les deux m thodes La sp cificit de la m thode est satisfaisante puisque toutes les souches de Listeria monocytogenes et de Listeria spp ont t d tect es inclusivit et aucune r action crois e n a t observ e parmi les souches non cibles test es lorsque le protocole complet de la m thode alternative tait mis en uvre exclusivit e Etude interlaboratoires Les r sultats obtenus pour l ensemble des 15 laboratoires retenus montrent que la m thode alternative et la m thode de r f rence ont des valeurs d exactitude relative de sp cificit et de sensibilit quivalentes et du m me ordre que celles obtenues lors de l tude pr liminaire La variabilit de la m thode alternative degr d accord concordance est comparable celle de la m thode de r f rence Fait Massy le 19 d cembre 2014 Fran ois Le Nestour Responsable de l Unit innovation Biologie Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 18 67 ANNEXES 19 67 ANNEXE 1 PROTOCOLES ANALYTIQUES 20 67 NORME EN ISO 11290 1 A1 2004
13. assaisonn s Environnement EN eaux de process ENZ pr l vements de surface To r sidus Total 44 41 1 6 92 92 4 88 0 45 97 8 950 ae A TOTAL 239186 15 26 jas 12 254 oat 212 87 PA Accord positif R A NA Accord n gatif R A PD d viation positive R A ND d viation n gative A R 39 67 Calcul de l exactitude relative de la sensibilit et de la sp cificit relative de la m thode alternative R ponse Listeria monocytogenes Exactitude relative N Sensibilit N Sp cificit Types AC LCL PA ND relative SE LCL NA PD relative SP LCL 100x PA NA N 100xPAJ N 100xNAI N 11 1 2 Produits carn s PC1 crus PC2 assaisonn s pr ts cuire PC3 charcuteries plats cuisin s Produits laitiers PL1 fromages au lait de vache PL2 fromages au lait de ch vre ou de brebis PL3 desserts poudres de lait PL4 laits crus PP1 filets de poissons frais et crustac s PP2 poissons fum s PP3 plats cuisin s base de Produits de la p che Produits v g taux PV1 surgel s PV2 frais ou 4 me gamme PV3 assaisonn s Environnement EN eaux de process EN2 pr l vements de surface ENS r sidus 93 0 3 86 0 42 976 90 TOTAL 1551186 7 16 364 93 7 162 957 202 927 PA Accord positif R A NA Accord n gatif R A PD d viation positive R A ND d viation n gative A R 40 67 Calcul de l
14. lev plus la variation interlaboratoires est pr dominante Conclusions e Etude comparative L tude comparative des m thodes a t r alis e selon le r f rentiel ISO 16140 2003 Les performances de la m thode VIDAS Listeria Duo LDUO ont t compar es a celles de la m thode de r f rence EN ISO 11290 1 A1 2004 par l analyse de 466 chantillons r partis dans cinq cat gories de produits L exactitude relative obtenue est de 91 2 la sensibilit relative de 94 1 et la sp cificit relative de 87 7 selon les calculs demand s par la norme EN ISO 16140 pour le param tre Listeria spp L exactitude relative obtenue est de 93 7 la sensibilit relative de 95 7 et la sp cificit relative de 92 1 selon les calculs demand s par la norme EN ISO 16140 pour le param tre Listeria monocytogenes Si l on consid re l ensemble des positifs confirm s la sensibilit de la m thode alternative est de 94 6 et celle de la m thode de r f rence est de 90 7 pour le param tre Listeria spp Si l on consid re l ensemble des positifs confirm s la sensibilit de la m thode alternative est de 96 1 et celle de la m thode de r f rence est de 91 0 pour le param tre Listeria monocytogenes Le nombre de r sultats discordants obtenu dans cette tude est de 41 pour la r ponse Listeria spp sur 280 chantillons positifs et de 23 pour la r ponse Listeria monocytogenes sur 179 chantillons contenant des
15. 3 0 00 11 0 00 H 2 0 00 11 0 00 H S 5 0 0 00 9 0 00 H 2 0 00 10 0 00 H 3 0 00 25 0 00 e f 8130 2 00 H par d faut 8281 2 03 F par d faut 8485 2 08 H 1 par d faut 8136 2 00 H par d faut 8356 2 05 I par d faut 8476 2 08 H par d faut E 7969 1 96 H 1 par d faut D nombrement du lait en UFC ml Laboratoire P M thode de r f rence Comparaison M thode alternative VIDAS Listeria Duo Comparaison R f rence Fraser 1 2 Fraser A r sultats Test DLMO R sultat Test DLIS i j A S r sultats R sultat R sultat du test Confirmation R sultat OAA PALCAM OAA PALCAM attendus RFV VT du test RFV VT attendus 3 0 00 11 0 00 f 4 0 00 11 0 00 H 7 0 0 00 11 0 00 H 4 0 00 12 0 00 H 9461 2 30 I par d faut 9549 2 32 H par d faut K 10024 2 43 par d faut 9990 2 43 f par d faut 9347 2 27 par d faut 9347 2 27 I par d faut s 9256 2 25 par d faut 9588 2 33 H H par d faut 3 0 00 16 0 00 f 4 0 00 10 0 00 H z 2 0 00 11 0 00 H 3 0 00 17 0 00 H 9421 2 29 f H par d faut
16. Effectuer la prise d essai en pesant 25 g de produit Diluer au 1 10 dans le bouillon Fraser demi Incuber 24h 30 C Isoler sur g lose s lective Transf rer 0 1 ml de Agar Listeria O amp A et PALCAM l enrichissement primaire dans 10 ml de milieu Fraser complet Incuber 24h 37 C Incuber 48h 37 C 7 7 a Isoler sur g lose s lective Agar Listeria O amp A et PALCAM Incuber 24h 37 C Pr sence de colonie caract ristiques de Listeria R incuber 24h a 37 C OUI NON Pr sence de colonie caract ristiques de Listeria R ponse OUI Pr sence de L monocytogenes Confirmation L mono dans 25 g NON R ponse gt Absence de L monocytogenes dans 25 g 21 67 PROTOCOLE VIDAS LDUO Prise d essai 25 g ou 25 ml de produit Diluer dans 225 ml de bouillon LX Incuber 22 26h 30 1 C Transf rer 0 1 ml de l enrichissement primaire dans 6 ml de bouillon LX Incuber 22 26 h 30 1 C Conserver l enrichissement Chauffage du bouillon 5 1 min 95 100 C secondaire 2 8 C pour et r alisation test VIDAS confirmations ult rieures des tests R sultat du kit positif OUI NON Absence de Listeria dans 25g Isoler sur g lose Palcam ou Oxford ou milieu chromog nique Incuber 24h 37 1 C Pr sence de colonies caract ristiques NON R incuber si n cessaire 24h 37 1 C R ponse NON Abse
17. FN Filet de sabre j L welshimeri A H L welshimeri FN L monocytogenes L innocua Filet de poisson i 1 L welshimeri H A L welshimeri Filet de colin L monocytogenes i par d faut Crevettes Black tiger Filet de perche Filet de tacaud Filet de perche Pav de cabillaud Darne de requin Filet de Panga Filet de sabre Filet de colin Carpaccio de saumon Filet de dorade Filet de cabillaud Filet de sabre fe D to 29039099009 gt AAZ AAAA RA L monocytogenes E par d faut L monocytogenes H L monocytogenes E par d faut L monocytogenes L monocytogenes d par d faut L monocytogenes ses aut gt L innocua L innocua L seeligeri i L seeligeri w Crevettes cuites Filets de maquereaux Pav s de saumon surgel s Pav s de saumon surgel s Pav s de saumon surgel s L monocytogenes j par d faut L monocytogenes Filets de harengs H A Je Filets de harengs L monocytogenes A par d faut L monocytogenes L monocytogenes L innocua j 5 j L innocua E L innocua L innocua H j L innocua L innocua E L innocua E Al L innocua F A L innocua H j L innocua L innocua i H L innocua L monocytogenes L seeligeri Crevettes L innocua L innocua clic gt gt Crevettes par d faut L monocytogenes Crevettes Filet de cabillaud Filet de lieu noir Filet de saumon Langoustines Crevettes Crevettes Filet de cabillaud Filet de lieu noir Ve
18. Fraser 7 r sultats Test DLMO R sultat Test DLIS i e e A r sultats R sultat R sultat du test Confirmation R sultat OAA PALCAM OAA PALCAM attendus RFV VT du test RFV VT attendus e 2 0 00 8 0 00 H 3 0 00 8 0 00 I 2 0 00 8 0 00 H 3 0 00 12 0 00 H 8079 1 74 H par d faut sE 7598 1 63 1 H par d faut 8112 1 74 I par d faut 7850 1 69 d par d faut 8247 1 77 H par d faut 7569 1 63 par d faut 7594 1 63 H par d faut 7933 1 70 E H par d faut S 3 0 00 9 0 00 H 2 0 00 10 0 00 2 0 00 10 0 00 H 3 0 00 9 0 00 H 8497 1 83 H H par d faut 7042 1 51 par d faut 6953 1 49 par d faut 7117 1 53 H H par d faut 7495 1 61 f par d faut 7515 1 61 H par d faut 7379 1 58 par d faut F 7445 1 60 7 1 par d faut D nombrement du lait en UFC ml Laboratoire L M thode de r f rence M thode alternative VIDAS Listeria Duo E e Fraser 1 2 Fraser Comparaison Test DLMO Test DLIS Comparaison R f rence A r sultats R sultat A S r sultats OAA PALCAM OAA PALCAM R sultat attendus RFV VE du test BEV UT R sultat du tes Confirmation R sultat attend s 8 RLM 8 RLM 2 0 00 8 0 00 H
19. SS SS SES SS SS SSSS SS SS SS SS SS SS SS 1 09 19009 E E 1 09 09 09 6 19 959 50 67 Inclusivit Taux d inoculation RFV cu R sultat Listeria innocua Foie de g nisse 8106 Listeria innocua 7354 Listeria innocua 7742 Listeria innocua 7998 Listeria innocua 7934 Listeria innocua Boulette d Avesnes 7681 Listeria innocua 6b Steak hach 7737 Listeria innocua 6a Saucisse de Toulouse 7747 Listeria innocua Coquelet 7657 Listeria innocua Gorgonzola 7921 Listeria innocua Epoisses 7532 Listeria innocua Fl tan fum 7857 Listeria ivanovii Collection ATCC 101461 Listeria ivanovii Roquefort 8675 Listeria ivanovii Pav de boeuf hach 9565 Listeria ivanovi Pr levement environnement 8672 Listeria welshimeri 6b Collection ATCC 35897 10712 Listeria welshimeri Steak hach 7050 Listeria welshimeri 6a Steak hach 7511 Listeria welshimeri Rosette 8180 Listeria welshimeri P t tartiner 8452 Listeria welshimeri Jambon l ancienne 7439 Listeria seeligeri 1 2b Langue de porc en gel e 7811 Listeria seeligeri Steak hach 7720 Listeria seeligeri Collection 8195 Listeria seeligeri Eau sale 8163 Listeria seeligeri Fromage au lait cru Vinage 7696 Listeria grayi lection ATCC 19120 8 0 Listeria grayi lection ATCC 25401 2 7 6 0 1 0E 05 Sl ol HB Oo oo oo o do NOR o Ri M thode de r f rence Isolement du FRASER 1 2 FRASER bouillon LX OnNNON OO OO Om it zitrizizizizizlzrizrizizizititrlzrizlziti
20. TI oo 00m too Laboratoire zs 8 tw too TI oo 00m too LaboratoireG_ ___s___ __s_ 10 Im 0 00 00 to Laboratoiren Ss 8 J 10 too f oo oo too Laboratoires 8 7 ose o7z os o2 am Laboratoire K 8 8a 10 f 10 oam 0 00 too Laboratoire 8 7 ose o7z os J o2 am lLaboratoreM 8 8a 10 f o oam 0 00 too Laboratoiren 8 7 ose o7z os o2 am Laboratoire 8 8 10 f 10 oam 0 00 too LaboratoireP_ e 8 10 10 000 0 00 Im Laboratoire Q e 8a 10 too 00m TI oam f 10 Moyenne 093 Niveau L2 Laboratoire a pis se Gs f attendus obtenus n gatifs paires de n gatifs positifs de positifs r sultats identiques Laboratoire e 8 10 TI 10 000 0 00 10 Laboratoires e 8 10 TI 10 TI 00m oam f o Laboratoire C 8 8 10 f 10 oam 0 00 too LaboratoireE 8 8 10 f 10 oam 0 00 too Laboratoire F_ 8 8 10 f o om 0 00 too Laboratoire G 8 8 10 f o TI om 0 00 too LaboratoieH 8 8 10 f 10 oam 0 00 too Laboratoires 8 8 10 f 10 oam 0 00 too LaboratoireK_ e 8 10 too 0 00 0 00 Im lLaboratoreL e 8 10 TI 10 0 00 0 00 f 10 Laboratoire M_ 8 8 10 f 10 oam 0 00 too Laboratoiren 8 8 10 f 10 oam 0 00 too Laboratoire 8 8 10 f 10 om 0 00 too Laboratoire P_ 8 8 10
21. e Cr me de roquefort Cr me de roquefort Rond du vinage Ossau Iraty Fromage au lait cru Fromage au lait cru Petit vinageois Fromage de ch vre Carr du vinage Picodon Fromage de caprin Ossau Iraty Brie Crottin de ch vre Chevrotin fermier Fromage de ch vre Boule du vinage B che de ch vre Fromage de ch vre Fromage de ch vre Coupe Profiteroles Coupe Profiteroles Tartelettes fraises Tartelettes fraises Chou chantilly G teau la cr me Petits suisses au chocolat Fromage blanc 0 Fromage blanc 20 Poudre de Poudre de Poudre de Poudre de Poudre de Poudre de Chou chantilly Fraises melba Glace fraise Glace vanille Tarte normande Flan p tissier Glace vanille fraise Chou la cr me v UTUT I 0 VU U UTUT TUU UU D 00000 000 VU LA 4 L monocytogenes L seeligeri L monocytogenes L innocua L monocytogenes L monocytogenes L innocua L welshimeri L monocytogenes L innocua L monocytogenes L monocyto L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L innocua L grayi L monocytogenes L innocua L monocytogenes L innocua L innocua L innocua L innocua L innocua L innocua L monocytogenes par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut L innocua L monocytogenes L monocytogenes L monocytoge
22. e a t sp cifiquement calcul e pour activer la r action Ainsi le syst me effectue deux tapes de r v lation et deux lectures e la premi re lecture apporte une r ponse pour Listeria monocytogenes DLMO e a seconde lecture apporte une r ponse pour Listeria spp DLIS L intensit de la fluorescence est mesur e par le syst me optique du VIDAS 450 nm et exprim e en valeur de fluorescence relative RFV interpr t e par le syst me VIDAS de la mani re suivante Les valeurs de tests calcul es selon la formule suivante sont ensuite compar es des valeurs seuils d finies pour Listeria monocytogenes et pour Listeria spp Valeur du test TV RFV chantillon RFV standard R ponse Listeria monocytogenes DLMO SiTV lt 0 05 gt le test est n gatif et SiTV gt 0 05 gt le test est positif Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 3 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 R ponse Listeria DLIS Si TV lt 0 1 gt le test est n gatif et Si TV gt 0 1 gt le test est positif Il est noter cependant que si le test est positif en Listeria monocytogenes le syst me ne fournit pas de valeur de test pour Listeria spp mais fournit seulement une r ponse positive par d faut Les diff rents types de r ponses sont repris dans le tableau suivant Valeur de R ponse DLMO DLIS Valeur de test DLIS g test DLMO s
23. exactitude relative de la sensibilit et de la sp cificit relative de la m thode alternative R ponse Listeria monocytogenes Exactitude relative N Sensibilit N Sp cificit Types AC LCL PA ND relative SE LCL NA PD relative SP LCL 100x PA NAD N 100xPA N 100xNA N Produits carn s PC1 crus 11 16 1 2 PC2 assaisonn s pr ts cuire 15 PC3 charcuteries plats cuisin s 15 34 1 2 Total Produits laitiers PL1 fromages au lait de vache PL2 fromages au lait de ch vre ou de brebis PL3 desserts poudres de lait PLA laits crus PP1 filets de poissons frais et crustac s PP2 poissons fum s PP3 plats cuisin s base de Total 2 47 pS Produits v g taux PV1 surgel s PV2 frais ou 4 me gamme e Produits de la p che PV3 assaisonn s Environnement EN1 eaux de process EN2 pr l vements de surface EN3 r sidus 92 TOTAL riss 2ea 7 16 aes 95 1 te2 057 faut ur PA Accord positif R A NA Accord n gatif R A PD d viation positive R A ND d viation n gative A R 41 67 ANNEXE 3 NIVEAU DE DETECTION RELATIF TABLEAUX DE RESULTATS 42167 NIVEAU DE DETECTION RELATIF CONTAMINE AVEC Listeria monocytogenes 1 2b Lait cru L mono 72 000 UFC ml M thode de r f rence M thode alternative VIDAS LDUO Niveau de Niveau obtenu S Fraser 12 ion SC R sultat Tes contamination b 25g R sultat Conclusi
24. f 10 oam 0 00 too Laboratoire Q 8 8 10 o 0 00 0 00 too Moyenne 100 k 64 67 ANNEXE 8 ETUDE INTERLABORATOIRE CONCORDANCE 65 67 METHODE ALTERNATIVE Niveau LO Nb de n gatifs Nb de n gatifs Paires interlaboratoires e dd ETT REA ER PR co RNE E Laboratoires 8 8 _ _ 896 oe lLaboratoreC 8 8 oe Laboratoire E 8 8 oe Laboratoire 8 8 TI ee eo Laboratoire G zz __8w oe Laboratoire 8 8 oe Laboratoires 8 8 ee 896 lLaboratoreK 8 8 oe Laboratoire 8 8 oe Laboratoire M 8 8 oe lLaboratoreN 8 8 oe Laboratoire 8 8 _ 896 eo lLaboratoieP zz oe Laboratoire Q 8 8 ee LI oe Moai o S S 13440 13440 Niveau L1 eg PRET Laboratoire attendus obtenus le m me r sultat interlaboratoires lLaboratoieA 8 8 CH se Laboratoires zs 8e sb a Laboratoirec zs 8e HACC me Laboratoire E zs 7 me mee Laboratoire F 8 8e HT me Laboratoire G zs 8e sb mee Laboratoire H zs 7 me me Laboratoires o8 8e oe TI ee Laboratoire K a 8 HC ee LaboratoireL 8e 8e HT me Laboratoire M zs 7 7 me Laboratoiren zs 8e oe me LaboratoireO zs 7 e me LaboratoireP__ 8e 8e sabe me Laboratoire Q 8 8 86 8 Total 12568 oun Ef Niveau L2 Nb de posi
25. terminer d PD ND et de comparer d une valeur de d minimale d finie pour chaque nombre de r sultats discordants Nombre de r sultats d e SC d Conclusion discordants minimal R ponse Listeria spp 41 13 26 15 11 Equivalence R ponse Listeria monocytogenes 23 10 16 7 9 Equivalence Les deux m thodes sont consid r es comme quivalentes puisque d lt d minimal Annexe F 2 1 5 2 Analyse des r sultats discordants Le tableau ci dessous liste les chantillons discordants dans l ordre de l annexe B en fonction de la r ponse consid r e R ponse R ponse Listeria spp Listeria monocytogenes de ela i Faux n gatif gt EE Faux n gatif suppl mentaire suppl mentaire PC1 D7 D7 V14 M4 Produits carn s PC2 C19 T15 C19 PC3 v10 110 L1 L3 V10 V11 110 PL1 C7 D14 H1 L6 Produits laitiers ile Ger GE PL3 J19 J28 C13 J20 PL4 J14 J17 J14 J17 PP1 G8 136 S5 M13 M15 M16 G8 136 U1 Produit de la p che PP2 137 139 U3 s3 137 139 PP3 Q10 PV1 C1 Produits v g taux PV2 L125 1 Q18 S8 12 Q18 S8 12 PV3 U9 EN1 H7 H13 Environnement EN2 G27 J1 03 03 EN3 132 143 143 014 Tableau 6 synth se des r sultats discordants Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 9 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 2 1 6 Commentaires sur les essais r alis s apres 72 h Les bo
26. 0 00 00 00 00 00 00 o 00 00 00 09 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 09 00 R sultats positifs obtenus par la m thode alternative Niveaux de contamination Laboratoires LO Obtenu Nb chantillons Obtenu Nb chantillons Obtenu Nb chantillons o 00 00 00 00 00 Laboratoire A Laboratoire B Laboratoire C Laboratoire E Laboratoire F Laboratoire G Laboratoire H Laboratoire J Laboratoire K Laboratoire L Laboratoire M Laboratoire N Laboratoire O Laboratoire P Laboratoire Q 0 8 8 8 8 oo oO 0 0 0 00 0000 0 00 00 00 090 00 00 00 00 00 00 00 00 00 o N CON DO 00 CON 00 CO N 00 00 00 00 00 00 00 09 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 09 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 09 00 Tableau 10 R sultats positifs apr s confirmation obtenus par la m thode alternative Les r sultats de la m thode de r f rence et de la m thode alternative sont concordants et conformes aux r sultats attendus pour 6 laboratoires B F G K P et Q Pour le laboratoire F un des chantillons non contamin s a t retrouv positif par le test VIDAS LDUO la valeur seuil VT 0 10 pour la r ponse DLIS Le laboratoire surpris par cette faible valeur a isol le bouillon LX et n a retrouv aucune colonie sur les g loses s lectives Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 15 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 Les r sult
27. 0 15 16 21 22 1 2 7 8 13 14 19 20 5 6 11 12 17 18 23 24 Tableau 8 taux de contamination th oriques et r els Suite aux conditions de transport 15 laboratoires ont r alis les analyses Deux laboratoires n ont effectivement pas t inclus dans la liste de laboratoires finale un laboratoire a re u les chantillons hors d lais pour un autre laboratoire la mise jour du syst me VIDAS n avait pas t r alis e 3 3 R sultats des analyses Les r sultats positifs apr s confirmation obtenus par les laboratoires collaborateurs et le laboratoire expert sont repris dans les tableaux suivants et en annexe 5 et 6 Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 14 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 R sultats positifs obtenus par la m thode de r f rence Niveaux de contamination Laboratoires LO Obtenu Nb chantillons Obtenu Nb chantillons Obtenu Nb chantillons o 00 N 00 00 00 Laboratoire A Laboratoire B Laboratoire C Laboratoire E Laboratoire F Laboratoire G Laboratoire H Laboratoire J Laboratoire K Laboratoire L Laboratoire M Laboratoire N Laboratoire O Laboratoire P Laboratoire Q 0 8 8 8 Tableau 9 R sultats positifs apr s confirmation obtenus par la m thode de r f rence CO OO OO OO OO OO CH O0 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 00 CO N CO N 00 N 00 00 CN 00 00 00 00 00 00 09 00 00 00 00 00 00 00 00 0
28. 0409 2 77 par d faut 10546 2 81 f par d faut 10622 2 83 1 H par d faut 2 0 00 11 0 00 f 4 0 00 9 0 00 H z 3 0 00 9 0 00 H 3 0 00 9 0 00 H 9559 2 54 H par d faut 9649 2 57 H par d faut 10255 274 par d faut 10421 2 77 H 1 par d faut 10365 2 76 H par d faut 10321 2 75 I par d faut 10266 2 79 H par d faut 10456 2 78 H par d faut 59 67 RESULTATS INDIVIDUELS DES LABORATOIRES COLLABORATEURS Laboratoire O M thode de r f rence Comparaison M thode alternative VIDAS Listeria Duo Comparaison R f rence Fraser 1 2 Fraser S r sultats Test DL MO R sultat Test DLIS i S r sultats R sultat R sultat du test Confirmation R sultat OAA PALCAM OAA PALCAM attendus RFV VT du test RFV VT attendus 1 0 00 6 0 00 f 3 0 00 7 0 00 H 5 0 0 00 9 0 00 I 2 0 00 12 0 00 H 8764 2 15 I par d faut 8837 2 17 par d faut K 8993 2 21 par d faut 9164 2 25 f par d faut 9181 2 25 par d faut 9446 2 32 I par d faut s 9350 2 30 par d faut 8488 2 08 H par d faut
29. 7 METHODE DE REFERENCE Niveau LO Nb de n gatifs Nb de n gatifs Probabilit de Probabilit de Probabilit de Probabilit de paireg Probabilit de paires de Laboratoire GH Su G sa attendus obtenus n gatifs paires de n gatifs positifs de positifs r sultats identiques Laboratoire A too 10 TI o0 0 00 10 Laboratoire B Laboratoire C Laboratoire E Laboratoire F L RE 8 E 8 000 om o e 8 000 om A ee 000 om A 8a 000 om Laboratoire zs 8 mm 0 00 000 Laboratoiren zs 8 10 too TI 0 00 000 Laboratoires zs 8 10 10 TI 0 00 000 lLaboratoireK zs 8 10 10 TI oo uo too Laboratoire zs 8 10 too TI 0 00 000 Laboratoire M 8 8 10 tom 0 00 TI uo Laboratoiren Ss 8 J 10 too TI oo TI 000 Laboratoire zs 8 000 om LaboratoireP_ zs 8e 000 om a 8 00 0 00 Laboratoire Q Degr d accord Niveau L1 Nb de n gatifs Nb de n gatifs Probabilit de Probabilit de Probabilit de Probabilit de paireg Probabilit de paires de Laboratoire 2 e Ap f f attendus obtenus n gatifs paires de n gatifs positifs de positifs r sultats identiques LaboratoireA_ zs 7 La o7z 0 18 0 02 ag Laboratoires zs 8 10 too TI oo 00m too Laboratoire zs 7 ose o7z 0 18 oo _ oz LaboratoireE zs 8 10 10
30. DLMO R sultat Test DLIS R j P F r sultats R sultat R sultat du test Confirmation R sultat OAA PALCAM OAA PALCAM attendus RFV VT du test RFV VT attendus 2 0 00 11 0 00 H E 2 0 00 9 0 00 I 3 0 00 10 0 00 H 2 0 00 12 0 00 d 9012 2 01 par d faut S 9041 2 01 I par d faut 9113 2 03 H par d faut 9002 2 00 par d faut E 9091 2 02 H par d faut 9145 2 04 par d faut E 9248 2 06 H par d faut 8852 1 97 H H par d faut S 2 0 00 11 0 00 H 3 0 00 11 0 00 H 2 0 00 9 0 00 H E 4 0 00 10 0 00 H 9874 2 20 H par d faut 8744 1 95 F par d faut 8727 1 94 H par d faut 8754 1 95 par d faut 8565 1 91 H par d faut 8638 1 92 H par d faut 8268 1 84 H par d faut 7690 1 71 H D par d faut D nombrement du lait en UFC ml 57 67 Laboratoire K RESULTATS INDIVIDUELS DES LABORATOIRES COLLABORATEURS M thode de r f rence Comparaison M thode alternative VIDAS Listeria Duo Comparaison R f rence Fraser 1 2
31. E 05 2 00E 05 3 00E 05 2 50E 05 6 00E 05 6 00E 05 2 40E 05 5 80E 05 R sultat Test LMO RFV LIS 26 R sultat Test LIS 52 67 ANNEXE 5 RESULTATS DU LABORATOIRE EXPERT Laboratoire Expert M thode de r f rence M thode alternative VIDAS Listeria Duo R f rence Fraser 1 2 F Comparaison Test DLMO R sultat Test DLIS R sultat d Comparaison an Geer sulta sultat du Confirmation R sultat r sultats attendus PALCAN du test tos 6 A par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut A 4 EI El All ST EI EI EI EIB Al o ll ti tot to 53 67 ANNEXE 6 RESULTATS INDIVIDUELS DES LABORATOIRES COLLABORATEURS Laboratoire A M thode de r f rence Comparaison M thode alternative VIDAS Listeria Duo Comparaison R f rence Fraser 1 2 r sultats Test DLMO R sultat Test DLIS a e A S r sultats R sultat du test Confirmation R sultat attendus VT du test VT attendus par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut Ai 4 4 er 4 4 4 4 PE ES
32. ENT RESULTAT COMPARAISON LMO TESTLMO _ LIS TEST LIS L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua L monocytogenes L welshimeri L monocytogenes L monocytogenes Merguez L innocua par d L innocua L welshimeri L welshimeri L monocytogenes L innocua L monocytogenes L innocua par d fa Chipolatas if par d Merguez L monocytogenes par d Chipolatas L monocytogenes par d L monocytogenes Hachis aux herbes L innocua par d L welshimeri Andouillette L monocytogenes par d L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes Chipolatas aux olives L welshimeri par d L welshimeri L innocua L innocua L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua Chipolatas tomates basilic S H i de L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua L monocytogenes L monocytogenes Merguez L innocua par d L innocua L welshimeri L welshimeri L monocytogenes L innocua L monocytogenes L innocua Saucisse de Toulouse par d Chipolatas par d Grillade de porc texane L monocytogenes par d L monocytogenes L innocua Poitrine pic e L monocytogenes H par d L monocytogenes Hamburger L monocytogenes d par d L monocytogenes Hot Dog D H i Boudin noir A L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua Boudin noir l Steak hach aux oignons L innocua A L innocua Burger tomates L innocua Farce tomates de A i Burger tomates L wel
33. ES ER ES tlt tlt tl t D nombrement du lait en UFC ml 1 Laboratoire B M thode de r f rence Comparaison M thode alternative VIDAS Listeria Duo Comparaison R f rence Fraser 1 2 Fraser S r sultats Test DL MO R sultat Test DLIS i j A i r sultats R sultat R sultat du test Confirmation R sultat OAA PALCAM OAA PALCAM attendus RFV VT du test RFV VT attendus 4 0 00 11 0 00 f 3 0 00 11 0 00 H 5 4 0 00 11 0 00 H 3 0 00 12 0 00 H 8276 1 92 I par d faut 8289 1 91 H par d faut K 7693 1 79 par d faut 7596 1 76 H par d faut 7410 1 72 par d faut 7821 1 81 I par d faut s 7687 1 78 par d faut 7849 1 82 H par d faut 2 0 00 11 0 00 f 3 0 00 11 0 00 H 4 0 00 9 0 00 H 2 0 00 10 0 00 H 7773 1 83 H par d faut 7719 1 81 H par d faut 8315 1 95 f par d faut 8391 1 97 H par d faut 8241 1 94 H par d faut 7982 1 88 par d faut 8124 1 91 H par d faut 8334 1 96 I 1 par d faut 54 67 RESULTATS INDIVIDUELS DES LABORATOIRES COLLABORATEURS Laboratoire C
34. ISHA Institut Scientifique d Hygi ne amp d Analyse NF VALIDATION 16140 VALIDATION AFNOR CERTIFICATION DE LA METHODE VIDAS Listeria Duo LDUO R f 30225 BIO 12 18 03 06 pour la d tection de Listeria spp et de Listeria monocytogenes Protocole pour les produits d alimentation humaine et les chantillons d environnement RAPPORT DE SYNTHESE DECEMBRE 2014 V1 Laboratoire expert Fabricant ISHA bioM rieux 25 avenue de la R publique Chemin de l Orme 91300 MASSY 69280 MARCY L ETOILE FRANCE FRANCE Ce rapport d analyse ne concerne que les objets soumis aux analyses Sa reproduction n est autoris e que sous forme de fac simil photographique int gral Il comporte 18 pages hors annexes bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 Table des matieres We 1 INntrOdUCH OM iria id 3 1 1 Date s et historique de validation sus 3 1 2 Principe et protocole de la m thode alternative es 3 1 2 1 Principe HERE TEE 3 1 2 2 PO Ol aia 4 1 3 M thode de r f rence laquelle la m thode alternative a t compar e 5 1 4 Domaine d application esses cc ccsesssscaccdceeteeridarsaces ous diais ane aida 5 2 Etude comparative des m thodes iii 6 2 1 Exactitude sp cificit et sensibilit relatives 6 2 1 1 Nombre et nature des chantillons iii 6 2 1 2 Contamination artificial iii aa 7 2 1 3 R sultats AE oia 7 2 1 4 Calcul de l exa
35. O JO Ensemencements des diff rents bouillons d enrichissement J1 J1 secondaire Fraser 1 2 LX R alisation du test VIDAS LDUO J2 Isolement des bouillons s lectifs sur g loses s lectives J1 amp J3 Obtention des r sultats n gatifs si aucune colonie caract ristique si test VIDAS LDUO n gatif J2 J5 si test VIDAS LDUO positif et confirmation n gative J3 J4 chantillons positifs D lai obtenu D lai obtenu Etape m thode VIDAS m thode de LDUO r f rence R alisation du l enrichissement primaire JO JO Ensemencements des diff rents bouillons d enrichissement J1 J1 secondaire Fraser 1 2 LX R alisation du test VIDAS LDUO et isolement sur g loses s lectives J2 Isolement des bouillons s lectifs sur g loses s lectives J1 amp J3 Tests de confirmation Genre Isolement sur TSAYE J2 J5 Gram catalase J3 J6 Esp ce Camp test h molyse bouillon TSBYE J3 J6 Utilisation des glucides J4 37 Obtention des r sultats positifs Genre J3 J3 J6 Esp ce apres confirmation par les tests de la m thode de r f rence J10 J9 J12 si utilisation de galeries API J4 J5 apres isolement sur g lose chromog ne J3 J4 pour Listeria monocytogenes 10 Type de qualification de niveau identique celui n cessaire pour la m thode de r f rence l op rateur 11 Etapes communes avec a Aucune m thode de r f rence 12 Tra abilit des r s
36. R demande que la sensibilit des deux m thodes soit recalcul e en tenant compte de l ensemble des positifs confirm s ceci inclut les positifs suppl mentaires de la m thode alternative M thode alternative M thode de r f rence PA PD PA PD ND 98 3 PA ND PA PD ND 97 9 3 4 1 Interpr tation 3 4 1 1 Degr d accord Le degr d accord est le pourcentage de chances de trouver le m me r sultat pour deux prises d essai identiques analys es dans le m me laboratoire dans des conditions de r p tabilit c est a dire un seul op rateur utilisant le m me appareillage et les m mes r actifs dans l intervalle de temps le plus court possible Pour calculer le degr d accord il faut calculer la probabilit que deux chantillons identiques donnent le m me r sultat et ceci pour chacun des laboratoires participants et d terminer ensuite la moyenne des probabilit s de l ensemble des laboratoires Les diff rents tableaux permettant de d duire le degr d accord figurent en annexe 7 et les degr s d accord pour chacune des m thodes chacun des niveaux sont repris dans le tableau 12 ci dessous Niveau M thode de r f rence M thode alternative LO DA 100 DA 100 L1 DA 93 DA 94 L2 DA 100 DA 100 Tableau 12 degr d accord par niveau et par m thode 3 4 1 2 Concordance La concordance est le pourcentage de chances
37. a m thode VIDAS LDUO pour les cat gories concern es rillettes avec L welshimeri lait cru avec L monocytogenes 1 2b et avec L innocua chou rouge avec L monocytogenes 4b saumon fum avec L monocytogenes 1 2a eau de process avec L monocytogenes 1 2c Le niveau de flore totale de la matrice a t d termin et figure dans les tableaux de r sultats de l annexe 3 2 2 2 Protocole de contamination Au moins quatre niveaux de contamination y compris le contr le n gatif ont t r alis s Chacune des combinaisons matrice souche niveau a t r pliqu e 6 fois avec la m thode alternative VIDAS LDUO et la m thode de r f rence EN ISO 11290 1 A1 La premi re tape d enrichissement n tant pas commune douze sachets de 25 grammes d aliments ont t r alis s dilu s au 1 10 dans le diluant appropri puis contamin s individuellement l aide d une suspension bact rienne au titre d termin Chaque suspension contaminante a t d nombr e sur 30 boites de g lose TSAYE 2 2 3 R sultats Les tableaux de r sultats d taill s figurent en annexe 3 Les niveaux de d tection calcul s selon la m thode de Spearman K rber LOD50 obtenus pour chaque combinaison matrice souche sont les suivants Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 10 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 M tis souche N
38. achine trancher charcuterie Ecouvillon rigole sol d d Surface couteau fromage L monocytogenes par d faut L monocytogenes Surface planche stand fromage H d Surface Couteau charcuterie j L welshimeri Surface sol d coupe poisson L monocytogenes A par d faut L monocytogenes Surface sol local stockage L seeligeri i d L seeligeri Surface Monte charge sale l L innocua A L innocua Surface table inox atelier p tisserie l i L innocua ve Surface Machine a trancher jambon d d d i d Z L innocua A d L innocua Surface trancheuse atelier boucherie j L innocua i A L innocua L monocytogenes L innocua Couteau stand fromage j L innocua L innocua Surface planche stand fromage i L monocytogenes Lame couteau scie stand boucherie j L innocua A A L innocua Surface surg lateur p tisserie i 2 L innocua j L innocua L monocytogenes i L monocytogenes L innocua L innocua Couteau stand fromage Surface sol atelier boucherie Surface table d couper boucherie Surface table inox atelier boucherie L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua Couteau stand charcuterie L monocytogenes i j L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua Ecouvillon ligne fabrication frites L monocytogenes d par d faut L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua L monocytogenes L monocytogenes L innocua L inno
39. al value d finie par la norme ISO 16140 L exactitude relative tait de 97 5 Il est cependant a noter que dans cette tude il ne s agit pas de vrais couples de r sultats dans la mesure ou il s agit de donn es non appari es Etude des r sultats discordants Selon l annexe F de la norme EN ISO 16140 le nombre de discordants au dela duquel un test statistique doit tre r alis afin de comparer les deux m thodes est de 6 Ce test statistique est donc mis en ceuvre puisque 9 r sultats sont discordants entre les deux m thodes Il s agit de d terminer M en fonction du nombre total de discordants et en fonction de la norme ISO 16140 annexe F et de comparer M a une valeur m plus petite des deux valeurs de PD et de ND Les deux m thodes seront consid r es comme quivalentes si m gt M Nombre de r sultats discordants M Conclusion 513 9 1 Equivalence Comparaison des valeurs d exactitude relative AC de sp cificit SP et de sensibilit SE Les valeurs obtenues dans les deux parties de l tude de validation sont report es dans le tableau ci dessous Etude collaborative Etude pr liminaire Exactitude relative AC 97 5 93 7 Sensibilit SE 98 3 95 7 Sp cificit SP 100 92 1 Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 16 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 Le Bureau Technique AFNO
40. alternative pour Listeria spp R ponse Listeria monocytogenes Afin de ne pas introduire de biais les r sultats provenant d chantillons ne contenant que des Listeria autres que L monocytogenes n ont pas t consid r s dans les calculs suivants Cat gorie PA NA ND PD N AC N SE N SP Produits carn s 41 35 2 5 83 91 6 43 95 3 40 87 5 Produits laitiers 27 42 0 4 73 94 5 27 100 46 91 3 Produits de la p che 29 31 0 5 65 92 3 29 100 36 86 1 Produits v g taux 30 37 3 1 71 92 3 33 90 9 38 97 4 Echantillons de l environnement 28 41 2 1 72 95 8 30 93 3 42 97 4 TOTAL 155 186 7 16 364 93 7 162 95 7 202 92 1 Tableau 3 exactitude relative sensibilit relative et sp cificit relative de la m thode alternative pour Listeria monocytogenes Pour la m thode alternative les valeurs en pourcentage calcul es pour les trois criteres suivants selon la norme EN ISO 16140 sont Param tre R ponse Listeria spp R ponse Listeria monocytogenes Exactitude relative AC 91 2 93 7 Sp cificit relative SP 87 7 92 1 Sensibilit relative SE 94 1 95 7 Tableau 4 Valeurs de l exactitude relative de la sensibilit relative et de la sp cificit relative de la m thode alternative pour les deux r ponses de la m thode La sensibilit des deux m thodes a t recalcul e en tenant compte de l ensemble des positifs confirm s in
41. ats des laboratoires A C J L et N sont conformes ceux attendus uniquement pour la m thode alternative Ces laboratoires retrouvent chacun un chantillon contamin au faible taux n gatif par la m thode de r f rence Les r sultats des laboratoires E H M et O sont conformes a ceux attendus uniquement pour la m thode de r f rence L encore ces laboratoires retrouvent chacun un chantillon contamin au faible taux n gatif par la m thode alternative pour les deux r ponses DLMO et DLIS Ces r sultats ne sont pas surprenants puisque deux fois huit chantillons distincts avaient t pr par s pour le faible niveau de contamination Un chantillon n tait mis en uvre que pour l une des m thodes alternative ou r f rence les bouillons d enrichissement primaires tant diff rents Il est probable que ces chantillons retrouv s n gatifs n aient pas t contamin s 3 4 Calculs Les r sultats de 15 laboratoires ont t interpr t s Note les r sultats positifs de la m thode alternative sont tous confirm s Les pourcentages de sp cificit SP et de sensibilit SE taient les suivants ET M thode de r f rence M thode alternative SP SE LCL SP SE LCL LO SP 100 98 SP 100 98 L1 SE 95 8 93 SE 96 7 93 L2 SE 100 98 SE 100 98 L1 L2 SE 97 9 96 SE 98 3 96 Tableau 11 pourcentages de sp cificit et de sensibilit LCL low critic
42. cluant les positifs suppl mentaires de la m thode alternative Cat gorie M thode alternative M thode de r f rence PA PD PA PD ND PA ND PA PD ND R ponse Listeria spp 94 6 90 7 R ponse Listeria monocytogenes 96 1 91 0 Tableau 5 Sensibilit relative recalcul e A noter que la sp cificit du test VIDAS LDUO est galement de 100 dans cette tude puisque tous les r sultats trouv s positifs apres VIDAS LDUO ont pu tre confirm s Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 8 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 2 1 5 Analyse des discordances 2 1 5 1 Test statistique Le nombre d chantillons discordants entre la m thode de r f rence et la m thode alternative est variable en fonction de la r ponse consid r e Selon l annexe F de la norme EN ISO 16140 le nombre de discordants pour lequel un test statistique doit tre r alis afin de comparer les deux m thodes est de 6 Ce test statistique est donc mis en ceuvre puisque le nombre de r sultats discordants est de 41 pour la r ponse Listeria spp sur 280 chantillons positifs 23 pour la r ponse Listeria monocytogenes sur 179 chantillons contenant des Listeria monocytogenes Lorsque le nombre de r sultats discordants est sup rieur a 22 il s agit d utiliser le test de McNemar avec la distribution du x pour un degr de libert Il s agit de d
43. ctitude relative de la sp cificit relative et de la sensibilit relative 7 2 1 5 Analyse des diSCO En le ui ra 9 2 1 6 Commentaires sur les essais r alis s apr s 72 he 10 2 2 Niveau de detection CEET 10 2 2 1 Matrices tili s e Siirsin A aaa iia 10 2 2 2 Protocole de contamihati Mii a tatou 10 2 2 3 R sultats oa ad 10 2 2 4 COnClUSIOn iii a bites 11 SC Ed EE 11 2 3 1 Protocoles d ESSA iia aida 11 2 3 2 R sultats t conc ad ege 11 24 Prati Cab UE 11 3 Etude interlabora tolteS ura aaa caia 14 31 Organisation de l tude A ad 14 3 1 1 RISCH a erre 14 3 2 Tauxkide CONtaMiN ti tania aid 14 ES DN Ee CET 14 BeAr e TEE 16 3 4 1 lee TE 17 4 E ee e 18 Annexes Annexe 1 protocoles de la m thode alternative et de la m thode de r f rence Annexe 2 r sultats de l exactitude relative Annexe 3 r sultats du niveau de d tection relatif Annexe 4 r sultats de la s lectivit Annexe 5 r sultats du laboratoire expert Annexe 6 r sultats des laboratoires collaborateurs Annexe 7 calcul du degr d accord Annexe 8 calcul de la concordance Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 2 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 1 Introduction 1 1 Date s et historique de validation La m thode VIDAS Listeria Duo a t valid e par AFNOR Certification sous la marque NF Validation 16140 en mars 2006 sous le num ro d
44. cua Eponge surface stand p tisserie par d faut Surface chambre froide viandes par d faut Surface salle de refroidissement par d faut Sol chambre froide conditionnement par d faut Surface tag re inox chambre froide i L monocytogenes par d faut L monocytogenes Surface trancheuse atelier charcuterie Surface chambre froide fromages i A H Fi Surface chariot de transport i L innocua A L innocua Eponge tapis transfert L monocytogenes i L monocytogenes Table inox stand charcuterie i L innocua L innocua Evier zone fabrication i L innocua H L innocua L innocua L innocua L ivanovi j L ivanovii Surface chariot zone fabrication i L ivanovi H i L ivanovii A A Ecouvillon joint sol mur Environnement METHODE NF EN ISO 11290 1 M thode LDUO FRASER 1 2 PE CONFIRMATION VIDAS LDUO CONFIRMATION SUR ENRICHISSEMENT lt 7 7 COMPARAISON LMO TEST LMO TEST LIS AM 5 CA C14 R sidus ligne fabrication Non L monocytogenes par d faut L monocytogenes R sidus bacs sales Non L monocytogenes par d faut L monocytogenes R sidus filtre machine Oui L seeligeri V L seeligeri R sidus stand fromage R sidus stand fromage R sidus sol hall fabrication L welshimeri L innocua R sidus Stand d coupe i par d faut L monocytogenes R sidus poissonnerie 8 j L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua Sciure d os R sidus bac stockage frites par d faut R sidu
45. de carottes Brocolis cuits Brochettes de legumes i L innocua L innocua Soupe de l gumes i 1 L monocytogenes par d faut L monocytogenes Salade c leri betteraves L monocytogenes par d faut L monocytogenes Ratatouille L monocytogenes par d faut L monocytogenes par d faut L monocytogenes Flocons de pommes de terre L monocytogenes par d faut L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua Gateau de c leri L seeligeri L seeligeri L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua Po l e de courgettes L seeligeri Po l e m ridionale Po l e champ tre L monocytogenes L monocytogenes L welshimeri L welshimeri Po l e catalane L innocua L innocua Po l e m ridionale L innocua L innocua Po l e champ tre L innocua L innocua Po l e de l gumes L innocua L innocua Pur e l gumes L innocua L innocua Carottes cuites i L innocua L innocua Galettes chou fleur brocolis par d faut Po l e m ridionale par d faut Pur e Chou fleur Brocolis par d faut 35 67 CODE MATRICES Ele Eau Siphon de boucherie Eaux us es Eau stagnante Eau machine laver Eau bac de rin age Eau Eau de rincage final Bain de rin age Bac lavage Eau r siduelle Eau ringage doseuse Eau stagnante local stockage Eau de rin age doux Eau r siduelle atelier Eau r siduelle Eau machine laver Eau machine laver Eau de rin age Eau bac de lavage F
46. de comparative des m thodes 2 1 Exactitude sp cificit et sensibilit relatives L objectif de cette tude tait de comparer les deux m thodes la m thode de r f rence EN ISO 11290 1 et la m thode VIDAS LDUO sur des chantillons naturellement contamin s et non contamin s en Listeria monocytogenes et en autres Listeria 2 1 1 Nombre et nature des chantillons Selon la norme EN ISO 16140 un minimum de 60 produits par cat gorie doit tre analys avec environ 50 de produits positifs au moins 30 r sultats et 50 de produits n gatifs Suite aux d cisions du Bureau technique de validation des m thodes alternatives il a t test par cat gorie de produits un minimum de 30 chantillons n gatifs un minimum de 45 chantillons positifs dont au moins 30 chantillons contenant Listeria monocytogenes seule ou en m lange avec d autres Listeria dont au moins 15 chantillons contenant uniquement Listeria autre que L monocytogenes Chaque cat gorie a t divis e en diff rents types et les produits se r partissent de la mani re suivante Positifs Gat eories es Listeria Listeria Listeria autre N gatifs Total monocytogenes monocytogenes que seule en m lange monocytogenes crus 6 8 6 10 30 assaisonn s pr ts cuire 3 13 3 6 25 Produits carn s charcuteries plats cuisin s 9 9 15 19 52 Total 18 30 24 35 107 fromages au lait de vache 12 1 9 15 37 l fromages a
47. de trouver le m me r sultat pour deux chantillons identiques analys s dans deux laboratoires diff rents Il s agit donc de calculer le pourcentage de toutes les paires donnant les m mes r sultats sur toutes les paires possibles de r sultats Les tableaux de r sultats permettant de r aliser ces calculs figurent en annexe 9 et les pourcentages de concordance pour chacune des m thodes et a chacun des niveaux sont repris dans le tableau 13 ci dessous Niveau M thode de r f rence M thode alternative LO Concordance 100 Concordance 100 L1 Concordance 92 Concordance 94 L2 Concordance 100 Concordance 100 Tableau 13 concordance par niveau et par m thode 3 4 1 3 Odds Ratio Il est calcul selon la formule suivante COR degr d accord x 100 concordance concordance x 100 degr d accord Les odds ratio pour chacune des m thodes et chacun des niveaux figurent dans le tableau 14 ci dessous Niveau M thode de r f rence M thode alternative LO COR 1 00 COR 1 00 L1 COR 1 01 COR 1 01 L2 COR 1 00 COR 1 00 Tableau 14 odds ratio par niveau et par m thode Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 17 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 Une valeur pour l odds ratio de 1 00 signifie que le degr d accord et la concordance sont gaux Plus l odds ratio est
48. e avec une majorit de colonies suspectes H lev e C m lange avec une minorit de colonies suspectes D m lange avec de rares colonies suspectes E absence de colonies suspectes 47 67 NIVEAU DE DETECTION RELATIF CONTAMINEE AVEC Listeria monocytogenes 1 2c Eau de process 1 100 UFC ml et 1 300 UFC ml M thode de r f rence M thode alternative VIDAS LDUO Niveau de Niveau obtenu de Ease 20o o SC contamination b 25g Fraser 1 2 1041 RFV LMO VT RFV LIS VT R sultat Test LIS R sultat Conclusion oa P2 on Test LMO 22 3 3 3 par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut teehee zie ES ES gt LE par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut Limite Limite inff sup Val Limite TENE Limite inff sup 052 Charge bact rienne R partition de la flore L l g re A culture pure de colonies suspectes M moyenne B m lange avec une majorit de colonies suspectes H lev e C m lange avec une minorit de colonies suspectes D m lange avec de rares colonies suspectes E absence de colonies suspectes 48 67 ANNEXE 4 ETUDES D INCLUSIVITE ET D EXCLUSIVITE TABLEAUX DE RESULTATS 49 67 Aa Taux d inoculation RFV R sultat R sultat Isolement sur f VT RFV LIS VT Ge E dans 225 mL de Limo YT Te
49. e de veau Brochettes de dinde Steak hach surgel Magret de canard Filet de poulet Viande hach e de cheval FRASER 1 2 Produits carn s as NF EN ISO 11290 1 CONFIRMATION L monocytogenes L monocytogenes L innocua L welshimeri L monocytogenes L innocua L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L welshimeri L welshimeri L innocua L innocua L monocytogenes L innocua L welshimeri L innocua L monocytogenes L welshimeri L innocua d L monocytogenes L innocua L welshimeri L monocytogenes L innocua L monocytogenes L monocytogenes L welshimeri VIDAS LDUO M thode LDUO par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut CONFIRMATION SUR ENRICHISSEMENT Pp VIDAS LDUO REV RESULTAT RFV RESULTAT HEE IBENTI L monocytogenes L monocytogenes L innocua L welshimeri L monocytogenes L innocua L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L welshimeri L welshimeri L innocua L innocua L monocytogenes L innocua L welshimeri L innocua L monocytogenes L welshimeri L innocua L monocytogenes L innocua L welshimeri L monocytogenes L innocua L monocytogenes L innocua L monocytogenes L monocytogenes L welshimeri RESULTAT COMPARAISON FINAL m 25 67 Produits carn s METHODE NF EN ISO 11290 1 M thode LDUO FRASER 1 2 e CONFIRMATION VIDAS LDUO CONFIRMATION SUR ENRICHISSEM
50. es cartouches LDUO en polypropyl ne compos es de 10 puits recouverts d une feuille d aluminium les c nes LDUO en pochettes aluminium de 30 unit s avec un d shydratant le flacon de standard LDUO Listeria monocytogenes S1 6 ml le flacon de standard LDUO Listeria S2 6 ml les flacons de contr les positifs LDUO Listeria monocytogenes et Listeria C1 et C3 6 ml le flacon de contr le n gatif C2 6 ml 3 Condition de stockage des l ments cf notice P remption des produits non ouverts cf notice La temp rature de stockage du test est de 2 8 C La validit des tests est indiqu e sur les coffrets 4 Modalit s d utilisation apr s premi re utilisation cf notice Chaque r actif doit tre conserv entre 2 C et 8 C 5 Equipements ou locaux sp cifiques n cessaires cf notice Parmi les quipements n cessaires il faut un incubateur 30 C 1 C un bain Marie d eau bouillante un automate VIDAS 6 R actifs pr ts l emploi ou reconstituer cf notice Tous les r actifs sont pr ts l emploi 7 Dur e de formation de l op rateur non initi la m thode pour un op rateur form aux techniques classiques de microbiologie la formation la technique n cessite moins de 1 jour 8 Temps r el de manipulation Flexibilit de la m thode par rapport au nombre d chantillons analyser Temps moyen pour un chantillo
51. i Eminc de porc la toscane L welshimeri i H ra Saucisses de Strasbourg L welshimeri E L welshimeri Rillettes i L ivanovii K H Rillettes de poulet i j y L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua L monocytogenes all El lt lt SE al QU Ez noo jojojo P t de t te par d faut Magret de canard par d faut Jambon de Bayonne Pat de viande Rosette Cervelas Jambon Pat en cro te L monocytogenes P L monocytogenes L welshimeri L welshimeri L monocytogenes i L monocytogenes L welshimeri L welshimeri Pat de foie A d L innocua Saucisse tartiner SECH L innocua L welshimeri Lardons fum s Saucisse tartiner Langue en gel e L monocytogenes i L monocytogenes Saucisses de Strasbourg ra d L monocytogenes L monocytogenes L welshimeri Jambon grill L monocytogenes d L monocytogenes Poitrine fum e L monocytogenes E L monocytogenes L monocytogenes y L monocytogenes L welshimeri L welshimeri Lardons L monocytogenes d L monocytogenes Lardons L innocua L innocua Poitrine fum e L monocytogenes L monocytogenes Lardons fum s L welshimeri Lardons Produits laitiers METHODE NF EN ISO 11290 1 M thode LDUO FRASER 1 2 E CONFIRMATION VIDAS LDUO CONFIRMATION SUR ENRICHISSEMENT RESULTAT COMPARAISON LMO TESTLMO SS TEST Maroilles L monocytogenes L monocytogenes Maroilles fermier L monocytogene
52. is es en simple par les deux m thodes Les diff rents chantillons analys s et leurs r sultats sont d taill s en annexe 2 Les r sultats obtenus pour les 466 chantillons analys s se r partissent de la mani re suivante R ponse Listeria spp M thode de r f rence positive M thode de r f rence n gative R R M thode alternative positive Accord positif A R D viation positive R A A PA 239 PD 26 M thode alternative n gative D viation n gative A R Accord n gatif A R A ND 15 NA 186 L gende A positifs confirm s A n gatifs imm diats et n gatifs apr s confirmation quand pr somptifs positifs dont aucun r sultat positif VIDAS LDUO non confirm R ponse Listeria monocytogenes M thode de r f rence positive M thode de r f rence n gative R R M thode alternative positive Accord positif A R D viation positive R A A PA 155 PD 16 M thode alternative n gative D viation n gative A R Accord n gatif A R a NA 288 l NOE b NA 186 L gende A positifs confirm s A n gatifs imm diats et n gatifs apr s confirmation quand pr somptifs positifs dont aucun r sultat VIDAS LDUO positif DLMO positif non confirm 1 dont 1 chantillon n gatif en m thode de r f rence n gatif dans la r ponse DLMO du test et positif dans la r ponse DLIS avec is
53. iveau de d tection relatif cellules 25 g ou 25 mL M thode de r f rence M thode alternative E EN L monocytogenes 1 2b 0 5 0 3 0 8 0 6 0 4 0 9 L innocua 1 3 0 7 2 5 1 4 0 8 2 5 Rillettes L welshimeri 0 5 0 3 0 9 0 6 0 3 1 0 Saumon fum L monocytogenes 1 2a 0 7 0 4 1 3 0 7 0 4 1 3 Chou rouge r p L monocytogenes 4b 0 5 0 3 1 0 0 4 0 3 0 7 Eau de process L monocytogenes 1 2c 0 6 0 5 0 8 0 8 0 5 1 3 Tableau 7 niveau de d tection relatif 1 chiffres significatif 2 2 4 Conclusion Le niveau de d tection obtenu pour la m thode alternative est compris entre 0 3 et 2 5 cellules par 25 grammes Celui de la m thode de r f rence est compris entre a 0 3 et 2 5 cellules par 25 grammes 2 3 S lectivit L inclusivit et l exclusivit de la m thode sont d finies par l analyse respectivement de 50 souches positives et de 30 souches n gatives La m thode VIDAS LDUO permettant de donner une r ponse simultan e de Listeria monocytogenes et de Listeria spp 50 souches de Listeria monocytogenes et 30 souches Listeria spp ont t test es autre que L monocytogenes 31 souches n appartenant pas au genre Listeria ont t galement examin es 2 3 1 Protocoles d essai Protocole pour l inclusivit Pour chacune des souches de Listeria une culture en bouillon nutritif a t r alis e pendant 24 heures 30 C Un bouillon LX a t inocul avec en
54. laque d eau Eau r siduelle Eau stagnante bac stockage Eau sortie bac rin age Eau au sol Eau sortie filtre bac rin age Eau tour de refroidissement Environnement METHODE NF EN ISO 11290 1 FRASER 1 2 27 CONFIRMATION VIDAS LDUO M thode LDUO CONFIRMATION SUR ENRICHISSEMENT RFV RESULTAT RFV RESULTAT M L monocytogenes par d faut A e d e gt L monocytogenes L innocua par d faut 5888 Qeas a DD L monocytogenes L innocua L monocytogenes par d faut par d faut L innocua L monocytogenes par d faut HA L monocytogenes Z L monocytogenes L innocua d L seeligeri L seeligeri L Innocua L seeligeri L monocytogenes L monocytogenes L innocua L monocytogenes RESULTAT COMPARAISON FINAL 36 67 Environnement METHODE NF EN ISO 11290 1 FRASER 12 CONFIRMATION SUR ENRICHISSEMENT A a Pepe ee LMO TESTLMO LIS TEST LIS Eponge dessus tapis pes e L monocytogenes par d faut L monocytogenes Eponge d coupe poissons j j Eponge trancheur Chiffonnette Machine trancher fromage E Chiffonnette couteau fromage Ecouvillon Ligne fabrication saucisse L monocytogenes par d faut L monocytogenes Surface D coupe poisson a S Surface Couteau dent boucherie Surface Plateau pr paration viandes Surface Machine trancher Surface Couteau charcuterie Surface Broche r tir Surface M
55. n Temps moyen pour 30 chantillon Etapes min min Norme Alternative Norme Alternative Pr paration pes e dilution et 7 7 90 90 broyage Repiquage sur bouillons s lectif Fraser 1 2 1 25 LX 1 25 Isolement du Fraser et du Fraser sur g loses s lectives Agar Listeria 2 30 et autre milieu Lectures 2 20 R alisation du test VIDAS 5 10 TOTAL 12 minutes 13 minutes 165 minutes 125 minutes 0H 12 0H 13 2H45 2H05 Dans le cas d chantillons positifs il faut rajouter le temps n cessaire aux confirmations Pour la m thode alternative il faut ajouter le temps n cessaire l isolement sur g lose s lective soit environ 1 minute par chantillon Le temps moyen pour la confirmation d une colonie suspecte partir d une g lose s lective a t estim a environ 5 minutes L int r t de la m thode alternative r side notamment dans la possibilit de trier les chantillons n gatifs des chantillons suspects et d all ger ainsi les confirmations ainsi que dans le gain de temps technicien lorsqu il s agit d analyser des s ries d chantillons Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 12 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo 9 D lai d obtention des r sultats chantillons n gatifs Rapport de synth se d cembre 2014 D lai obtenu D lai obtenu Etape M thode M thode VIDAS LDUO de r f rence R alisation du l enrichissement primaire J
56. nce de Listeria dans 25g OUI Pr sence de colonies caract ristiques Test de confirmations 22 67 ANNEXE 2 EXACTITUDE RELATIVE SPECIFICITE RELATIVE SENSIBILITE RELATIVE PAR CATEGORIE D ECHANTILLONS TABLEAUX DE RESULTATS DETAILLES 23 67 LEGENDE Charge bact rienne pas de culture L l g re M moyenne H lev e R partition de la flore A culture pure de colonies suspectes B m lange avec une majorit de colonies suspectes C m lange avec une minorit de colonies suspectes D m lange avec de rares colonies suspectes E absence de colonies suspectes x x colonies caract ristiques de Listeria si x lt 5 pr sence de deux types de colonies caract ristiques L monocytogenes autre a r incubation des LX pendant 24 heures 30 b repiquage de 0 1ml en bouillon LX incub 24 heures 30 puis re test LDUO c repiquage de 0 1ml en bouillon Fraser incub 24 heures 30 puis re test LDUO 24 67 CODE MATRICES Ei C ur de b uf Brochette de dinde Ailerons de poulet Viande hach e de b uf Viande hach e Viande hach e Viande hach e B uf bourguignon maigre Brochette d agneau Tournedos Filet de cheval C te de porc Rumsteak Entrec te Rognons de porc Pointe de porc minc e Viande bovine C te de porc Rognons d agneau Viande hach e Cuisses de poulet Blancs de poulet Rognons Magret de canard Viand
57. nes L seeligeri L monocytogenes L monocytogenes L welshimeri L monocytogenes L innocua L monocytogenes L monocyto L monocytogenes L monocytogenes Pa L monocytogenes L innocua L monocytogenes L innocua L innocua d L monocytogenes L innocua L innocua L innocua L innocua L innocua L innocua L welshimeri L monocytogenes 29 67 Produits laitiers METHODE NF EN ISO 11290 1 FRASER 12 FRASER CONFIRMATION VIDAS LDUO CONFIRMATION SUR ENRICHISSEMENT s n CODE MATRICES Cat CA RFV RESULTAT RFV RESULTAT comes alas oe om con pes o ESRI ow mae om one A 126 g g 5 d va L monocytogenes L innocua L innocua L innocua L innocua L innocua L monocytogenes L innocua par d faut par d faut L innocua L innocua L innocua L innocua L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua par d faut 30 67 Produits de la p che METHODE NF EN ISO 11290 1 M thode LDUO FRASER 1 2 RE CONFIRMATION VIDAS LDUO CONFIRMATION SUR ENRICHISSEMENT AT MPARAISON LMO TEST LMO TEST LIS Pav de saumon par d faut L monocytogenes Pav de saumon d par d faut L monocytogenes Pav de saumon A VA Pav de thon S par d faut L monocytogenes R ti de saumon frais L monocytogenes d par d faut L monocytogenes FN Direct amp 72H Filet de Panga L monocytogenes A par d faut L monocytogenes Roussette i L welshimeri H j f
58. nes une option 2 de confirmation est propos e en cas de pr sence de colonies caract ristiques sur g lose chromog ne le r sultat VIDAS DLMO pour Listeria monocytogenes est consid r comme confirm e dans le cas d une r ponse positive en Listeria spp autre que Listeria monocytogenes les colonies caract ristiques de Listeria sont confirm es par les tests biochimiques classiques ou par r alisation d une galerie API sans purification pr alable si la colonie est suffisamment isol e Les tubes de bouillons LX ont t conserv s pendant 72h 2 8 C puis nouveau test s en VIDAS et confirm s si le test VIDAS LDUO est positif afin de documenter l impact d une conservation des bouillons jusqu 72 heures 2 C 8 C Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 4 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 1 3 M thode de r f rence a laquelle la m thode alternative a t compar e La norme EN ISO 11290 1 A1 2004 m thode horizontale pour la recherche et le d nombrement de Listeria monocytogenes a t utilis e Le protocole de la m thode est pr sent en annexe 1 1 4 Domaine d application Le domaine d application est le suivant tous produits d alimentation humaine et chantillons d environnement hors environnement d levage Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 5 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 2 Etu
59. olement de L monocytogenes partir du bouillon LX a si l on consid re les chantillons contenant des Listeria autres que L monocytogenes comme des r sultats n gatifs b si l on limine tous les r sultats provenant d chantillons ne contenant que des Listeria autres que L monocytogenes afin de r tablir l quilibre entre les chantillons positifs et les chantillons n gatifs 2 1 4 Calcul de l exactitude relative de la sp cificit relative et de la sensibilit relative l ensemble de ces r sultats permet de calculer l exactitude relative la sensibilit relative et la sp cificit relative pour chacune des cat gories et pour l ensemble des cat gories selon les formules de la norme EN ISO 16140 tableaux 2 et 3 Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 7 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 R ponse Listeria spp Cat gorie PA NA ND PD N AC N SE N SP Produits carn s 65 35 3 4 107 93 5 68 95 6 39 89 7 Produits laitiers 43 42 3 8 96 88 5 46 93 5 50 84 0 Produits de la p che 39 31 4 7 81 86 4 43 90 7 38 81 6 Produits v g taux 48 37 4 1 90 94 4 52 92 3 38 97 4 Echantillons de l environnement 44 41 1 6 92 92 4 45 97 8 47 87 2 TOTAL 239 186 15 26 466 91 2 254 94 1 212 87 7 Tableau 2 exactitude relative sensibilit relative et sp cificit relative de la m thode
60. on RFV LMO VT RFV LIS VT R sultat Conclusion P OAA2 Test LMO LIS 15 5 0 15 0 0 O sup LOD 50 0 575 0 400 0 850 REF Valeur Limite inf Limi sup 4 4 Fife zz zz Charge bact rienne R partition de la flore L l g re A culture pure de colonies suspectes M moyenne B m lange avec une majorit de colonies suspectes H lev e C m lange avec une minorit de colonies suspectes D m lange avec de rares colonies suspectes E absence de colonies suspectes 43 67 NIVEAU DE DETECTION RELATIF CONTAMINE AVEC Listeria innocua Lait cru L spp 5 800 000 UFC ml et 280 000 UFC ml M thode de r f rence M thode alternative VIDAS LDUO Niveau de Niveau obtenu on Fraser 1 2 1041 R sultat R sultat contamination b 25g R sultat Conclusion RFV LMO VT RFV LIS VT R sultat Conclusion EI Test EME Tests 36 2 Limite REF Val Limite asar Limite in sup Charge bact rienne R partition de la flore L l g re A culture pure de colonies suspectes M moyenne B m lange avec une majorit de colonies suspectes H lev e C m lange avec une minorit de colonies suspectes D m lange avec de rares colonies suspectes E absence de colonies suspectes 44 67 NIVEAU DE DETECTION RELATIF CONTAMINEES AVEC L welshimeri Rillettes 1 000 000 UFC g 400 UFC g e
61. ous r serve de confirmation Se S Hisani par Non disponible Pr sence de Listeria monocytogenes d faut et par d faut pr sence de Listeria spp Absence de Listeria monocytogenes amp Cas 2 Di ibl Di ibl SS aci SPORE Pr sence de Listeria spp autre que Listeria monocytogenes Absence de Listeria spp Cas 3 Disponible Disponible y compris Absence de Listeria monocytogenes 1 2 2 Protocole Le protocole est le suivant e un enrichissement en bouillon LX incub 22 26 heures 30 C 1 C e unrepiquage en bouillon LX 0 1ml dans 6ml incub 22 26 heures 30 C 1 C NB dans l tude comparative des m thodes les temps minimum d incubation soit 22 heures ont t respect s Le sch ma de la m thode figure en annexe 1 Le test VIDAS LDUO est ensuite r alis a partir d un aliquote de LX chauff 5 1 minutes 95 100 C Deux r ponses sont apport es pr sence ou absence de Listeria monocytogenes DLMO et pr sence ou absence de Listeria spp DLIS Les chantillons positifs l issue du test VIDAS LDUO sont confirm s par isolement du tube de bouillon LX non chauff sur g lose s lective permettant le d veloppement de toutes les esp ces de Listeria Palcam ou Oxford ou g lose chromog ne Les colonies caract ristiques de Listeria spp sont ensuite confirm es par les tests biochimiques classiques De plus e dans le cas d une r ponse positive en Listeria monocytoge
62. s Frites surgel es Frites surgel es Haricots verts L innocua i i L innocua Frites surgel es H Frites surgel es S i y L monocytogenes L innocua L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua Frites surgel es Tradition L monocytogenes f par d faut L monocytogenes Haricots verts i L innocua j L innocua Pommes de terre rissol es surgel es Frites surgel es pr cuites par d faut L monocytogenes Frites surgel es par d faut L monocytogenes par d faut L monocytogenes L monocytogenes L innocua L monocytogenes L innocua Frites surgel es par d faut L monocytogenes Frites surgel es par d faut L monocytogenes Pommes de terre rissol es surgel es Frites surgel es i L monocytogenes par d faut L monocytogenes Pommes de terre rissol es L monocytogenes L monocytogenes surgel es L innocua L innocua Frites surgel s F Champignons surgel s i L seeligeri L seeligeri L monocytogenes par d faut L monocytogenes par d faut 33 67 V g taux METHODE NF EN ISO 11290 1 M thode LDUO FRASER 1 2 E CONFIRMATION VIDAS LDUO CONFIRMATION SUR ENRICHISSEMENT AT COMPARAISON LMO TEST LMO L TEST LIS F S Non L monocytogenes par d faut L monocytogenes Non o Non Salade m lang e Non L gumes crus m lang s Non C leri r p Non Carottes r p es Non Carottes r p es Non Champignons crus Non Chou rouge cru Non Chou rouge cru Non Champignons cru
63. s L monocytogenes Maroilles L monocytogenes L monocytogenes Maroilles f Epoisses L monocytogenes A S L monocytogenes Maroilles L monocytogenes S S L monocytogenes Maroilles L monocytogenes i L monocytogenes St Germain L monocytogenes E L monocytogenes Fromage au lait cru H i L seeligeri Epoisses L monocytogenes i L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L innocua i L innocua Tomme de Cambrai Epoisses Maroilles Coulommiers Maroilles Munster Camembert Reblochon Reblochon Neufch tel Fromage de Langres Morbier Morbier Gruy re r p Vieux p n Reblochon Reblochon Roquefort Brie Brie Camembert L innocua E L innocua Munster L innocua i g f Fromage double cr me L innocua H F L innocua Leerdamer L innocua E L innocua Epoisses L monocytogenes i par d faut L monocytogenes Maroilles L monocytogenes par d faut L monocytogenes Maroilles L monocytogenes par d faut L monocytogenes SD m ZTAQaqgaag m NININININININININ SNE gt w QAQ ER L monocytogenes d par d faut L monocytogenes f j 7 aria 7 E L innocua L innocua L innocua L innocua L innocua 20930805 gt 28 67 Produits laitiers a NF EN ISO 11290 1 M thode LDUO VIDAS LDUO L monocytogenes Po Me EDU FRASER 1 2 CONFIRMATION CONFIRMATION SUR ENRICHISSEMENT RESULTAT COMPARAISON IDENT RESULTAT LMO w TESTLMO _LIS ki TEST LIS LB 1 S
64. s Non Feuille de ch ne Non M lange de salade Non Crudit s r p es m lang es Non H i de Carottes Oignons Oui L innocua A L innocua M lange catalan Oui L innocua H K L innocua Soja Oui L innocua L innocua Salade pinards Oui L innocua E E L innocua Chou rouge Oui L monocytogenes i A Salade Oui E F M lange carottes c leri poivrons Oui L innocua A i L innocua Carottes amp chou Oui L innocua E y L innocua Mache Oui L monocytogenes i L monocytogenes Concombres Oui Brocolis Carottes M che Chou blanc Carottes L monocytogenes Champignons L monocytogenes par d faut L monocytogenes Chou rouge L monocytogenes j j Champignons L monocytogenes par d faut L monocytogenes Champignons A Salade m lang e L monocytogenes A par d faut L monocytogenes L125 1 Chou rouge R L monocytogenes L125 2 Chou rouge L125 3 Chou rouge NSINSININSININININININSINIS NSI ININININININININININIS L125 4 Chou rouge L125 5 Chou rouge 34 67 V g taux METHODE NF EN ISO 11290 1 M thode LDUO FRASER 1 2 CONFIRMATION VIDAS LDUO CONFIRMATION SUR ENRICHISSEMENT TAT MPARAISON LMO TEST LMO TEST LIS Riz en salade L monocytogenes par d faut L monocytogenes Po l e campagnarde L monocytogenes par d faut L monocytogenes L monocytogenes par d faut L monocytogenes L monocytogenes L innocua Epinards la cr me L monocytogenes par d faut L monocytogenes Pur e
65. s planche d couper viandes EN3 L monocytogenes E par d faut L monocytogenes R sidus atelier conditionnement L monocytogenes par d faut L monocytogenes R sidus atelier d coupe viandes L monocytogenes E par d faut L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua R sidus vier atelier d coupe i L monocytogenes H i L monocytogenes par d faut R sidus bac conditionnement i L monocytogenes A par d faut L monocytogenes R sidus stand charcuterie 4 j R sidus stand poissons L monocytogenes i par d faut l L monocytogenes Plateau pes e poissons L monocytogenes E par d faut L monocytogenes R sidus atelier fromage d d R sidus table inox atelier d coupe par d faut 38 67 Calcul de l exactitude relative de la sensibilit et de la sp cificit relative de la m thode alternative R ponse Listeria spp Exactitude relative Sensibilit Sp cificit AC relative SE relative SP 100x PA NA N 100xPA N 100xNA N Produits carn s PC2 assaisonn s pr ts cuire PC3 charcuteries plats cuisin s Produits laitiers PL1 fromages au lait de vache PL2 fromages au lait de ch vre ou de brebis PL3 desserts poudres de lait PL4 laits crus PP1 filets de poissons frais et crustac s PP2 poissons fum s PP3 plats cuisin s base de Produits de la p che Produits v g taux PV1 surgel s PV2 frais ou 4 me gamme PV3
66. shimeri H L welshimeri Viande hach e bolognaise d R A Poitrine aux herbes par d L monocytogenes Merguez par d faut 26 67 Produits carn s METHODE NF EN ISO 11290 1 FRASER 12 CONFIRMATION SUR ENRICHISSEMENT A A e LMO TESTLMO LIS TEST LIS C26 P t forestier a Lardons L innocua par d faut L welshimeri Jambon cru L welshimeri i L welshimeri L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua L monocytogenes L innocua Viande hach e par d faut P t de campagne Saucisse de Strasbourg P t de campagne P t de campagne Jambon cru P t de foie Jambon de Paris L monocytogenes Saucisson l ail Pat l chalotte Langue en gel e L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua Jambonneau L monocytogenes par d faut L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L innocua L innocua Terrine de lapin i y y Ze Pat de foie artisanal i j P t de pays L welshimeri ji L welshimeri Mousse de canard i j 7 Tourte la volaille i Steak de b uf L welshimeri A y L welshimeri Roulade de jambon j f G sier de volaille i L innocua A A L innocua Mortadelle i L innocua H L innocua Jambon L welshimeri H L welshimeri Langue en gel e L welshimeri V L welshimeri Potjevlesch i L welshimeri i L welshimeri L innocua L innocua L welshimeri L welshimeri L innocua L innocua L welshimeri i L welshimer
67. st LMO pau vr TestLIS_ Palcam OAA RIM 7 Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2a Listeria monocytogenes 1 2b Listeria monocytogenes 1 2b Listeria monocytogenes 1 2b Listeria monocytogenes 1 2c Listeria monocytogenes 1 2c Listeria monocytogenes 1 2c Listeria monocytogenes 1 2c Listeria monocytogenes 1 2c Listeria monocytogenes 1 2c Listeria monocytogenes 1 2c Listeria monocytogenes 1 2c Listeria monocytogenes 1 2 Listeria monocytogenes 3b Listeria monocytogenes 3c Listeria monocytogenes 4a Listeria monocytogenes 4b Listeria monocytogenes 4b Listeria monocytogenes 4b Listeria monocytogenes 4b Listeria monocytogenes 4d Listeria monocytogenes 4e Listeria monocytogenes 4e Listeria monocytogenes 4e Listeria monocytogenes 7 Listeria monocytogenes Listeria monocytogenes Listeria monocytogenes Listeria monocytogenes Listeria monocytogenes Listeria monocytogenes Listeria monocytogenes Listeria monocytogenes Listeria monocytogenes Listeria monocytogenes ATTCC 35152 Lardons de saumon fum Pizza Munster Rillettes M
68. t 80 UFC g 430 UFC g M thode de r f rence M thode alternative VIDAS LDUO Niveau de Niveau obtenu He Fraser 1 2 10pl Fraser y R sultat R sultat Test Isolements sur A A contamination b 25g R sultat Conclusion RFV LMO VT RFV LIS VT R sultat Conclusion Test LMO Lis 21 i 7 3 o o o o o x on 0 56 2 n 3 0 74 5 a 4 1 68 gt 5 2 22 E 7 6 2 24 S K 4 Limite in sup LOD 50 0 575 0 325 1 000 Limite in sup Charge bact rienne R partition de la flore L l g re A culture pure de colonies suspectes M moyenne B m lange avec une majorit de colonies suspectes H lev e C m lange avec une minorit de colonies suspectes D m lange avec de rares colonies suspectes E absence de colonies suspectes 45 67 NIVEAU DE DETECTION RELATIF CONTAMINE AVEC Listeria monocytogenes 1 2a Saumon fum 8 500 UFC g M thode de r f rence M thode alternative VIDAS LDUO Niveau de Niveau obtenu Fraser 1 2 Fraser R sultat R sultat Test Isolements sur contamination b 25g Freser 12 ou Free R sultat Conclusion RFV LMO esulial REV LIS sultat Test denen at estat Conclusion Ce Lomi ou ee D par d faut L y SE SIS ee SS CR et Ae OS ls
69. tifs Nb de positifs Paires interlaboratoires EH EE E EE Laboratoire 8 II eo Laboratoire E 8 8e ee HH lLaboratoreF 8 8H oe LaboratoreG__ __8__ __8_ ee oe lLaboratoreH 8 8H oe Laboratoires 8 8 oe lLaboratoreK 8 8 oe Laboratoire 8 8 e oe Laboratoire M 8 8 TI ee eo Laboratoiren 8 8e 896 ee O Laboratoire 8 8 896 oe LaboratoieP_ 8 8 Ir ee oe f Laboratoire Q 8 8 896 oe Toa 8418440 66 67 METHODE DE REFERENCE Niveau LO Nb de n gatifs Nb de n gatifs Paires interlaboratoires oT ae O O Se ee ee A Laboratoires 8 8 HH e O Laboratoire 8 8 ee TH Laboratoire E 8 8 e e Laboratoire 8 8 896 Laboratoire G e 8 J wee ae Laboratoire 1 8 8 me TH Laboratoires zs 8 J ee 896 Laboratoire K 8 8 e e lLaboratoreL 8 8 e eo lLaboratoreM 8 8 ee e Laboratoiren 8 HH lLaboratoreO_ e 8 ae Laboratoire P sa 8 J ee TI me Laboratoire Q 8 8 ee TH Total Yo 13440 13440 Niveau L1 eg TE T Laboratoire attendus obtenus le m me r sultat interlaboratoires Laboratoire 8 IL CTC se LaboratoireB__ zs 8e Le me Laboratoire CT zs 7 e mee Laboratoire E e 8e LI ee CLC ee Laboratoire F 8 8e 856 me Laboratoire G zs 8e Le LaboratoireH zs 8e ses
70. tli Listeria grayi lection CIP 103213 6 0 1 0E 05 51 67 BA5 Bacillus sphaericus Bacillus cereus Bacillus stearothermophilus Bacillus coagulans Brochotrix thermosphacta Rhodotorula rubra Candida albicans Saccharomyces cerevisiae Enterococcus faecalis Enterococcus faecalis Enterococcus faecium Enterococcus faecium Enterobacter cloacae Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca Serratia marcescens Jonesia denitrificans Lactobacillus acidophilus Lactobacillus casei Lactobacillus plantarum Lactobacillus paracasei Micrococcus spp Pseudomonas putida Pseudomonas putida Rhodococcus equi Streptococcus bovis Streptococcus bovis Staphylococcus hyicus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus epidermidis Staphylococcus aureus Origine Produit carn Betteraves Produit laitier Collection Viande hach e P tisserie Collection Extrait de caf Ovoproduit Collection ATCC 19433 Collection ATCC 3286 Collection CIP 5433 Collection C leri Lait Lait cru Collection Produit laitier Produit laitier Produit laitier Produit laitier Environnement Champignons Poisso ion ATCC 12228 Exclusivit Taux d inoculation dans 225mL de bouillon nutritif non s lectif UFC 6 70E 05 7 20E 05 2 40E 05 2 40E 05 6 00E 03 3 00E 05 3 00E 05 3 00E 05 4 80E 05 5 40E 05 3 00E 05 2 00E 05 2 00E 05 2 00E 05 2 60E 05 3 00E 05 4 00E 05 4 00E 05 6 00E 04 5 00E 05 2 00E 05 3 00E 05 5 60E 05 6 00
71. u lait de ch vre 3 6 1 11 21 Produits ou de brebis laitiers desserts poudres de lait 3 3 9 8 23 laits crus 0 3 4 8 15 Total 18 13 23 42 96 eege frais et 10 3 11 18 42 Produits de la poissons fum s 16 0 2 7 25 che lats cuisin s base de H dE 5 0 3 6 14 Total 31 3 16 31 81 surgel s 8 6 3 7 24 Produits frais ou 4 me gamme 9 0 6 25 40 v g taux assaisonn s 8 4 9 5 26 Total 25 10 18 37 90 eaux diverses 3 2 4 17 26 Ee pr l vements de surface 8 6 14 18 46 r sidus 10 2 2 6 20 Total 21 10 20 41 92 TOTAL 113 65 102 186 466 Tableau 1 nombre et nature des chantillons test s positifs par l une ou l autre des m thodes Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 6 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 2 1 2 Contamination artificielle Des contaminations artificielles ont t r alis es l aide de souches stress es selon les exigences de la norme EN ISO 16140 et du bureau technique de validation AFNOR 108 chantillons ont donn un r sultat positif 80 pour la r ponse DLIS et 28 pour la r ponse DLMO Au total sur 280 r sultats positifs en Listeria spp 61 ont t obtenus a partir de produits naturellement contamin s Pour les chantillons contenant Listeria monocytogenes 84 150 r sultats sur 178 ont t obtenus partir de produits naturellement contamin s 2 1 3 R sultats des essais Les analyses ont t r al
72. ues LaboratoireA zs 8 10 10 TI oo oo too Laboratoires zs 8 10 too TI 0 00 uo too lLaboratoreC e 8 tw too um oo to LaboratoireE sz 8 J tw too f um oo too Laboratoire zs 8 10 too TI oo oo too Laboratoire zs 8 10 too TI oo uo too Laboratoiren zs 8 10 too TI oo uo too Laboratoires zs 8 10 10 TI oo uo too Laboratoirek_ zs 8 10 too TI oo uo too Laboratoire zs 8 10 too TI oo oo too Laboratoire M 8 8 10 tom um oo to Laboratoiren Ss 8 J tw too f 0 00 oo too Laboratoire zs 8 10 too TI oo oo too LaboratoireP_ zs 8 tw too f 0 00 uo too Laboratoire Q zs 8 10 too oo oo too Moyemmej 1 00 Degr d accord 100 Niveau L1 Nb de n gatifs Nb de n gatifs Probabilit de Probabilit de Probabilit de Probabilit de paireg Probabilit de paires de Laboratoire S bat gs D se f f attendus obtenus n gatifs paires de n gatifs positifs de positifs r sultats identiques 8e 10 f 10 o0 sa 10 f 10 o0 o0 too k Laboratoire 8 Laboratoire 8 too 10m oo 00m too Laboratoire C 8 LaboratoireE zs 7 L eF 8 Is 00 f 1 00 o0 0 00 10 k Laboratoire G_ _8 too 1 00 oo 00 to Laboratoiren Ss 7 ose o7z Tu up ag Laboratoires
73. uillons LX ont t test s par le test VIDAS LDUO imm diatement apr s incubation puis ces bouillons LX ont t conserv s pendant 3 jours 2 8 C et un nouveau test a t r alis ainsi que des isolements du bouillon LX sur g loses s lectives et des confirmations Certaines discordances entre les deux r sultats sont apparues lors de la r alisation du test VIDAS LDUO r alis partir du bouillon LX conserv 72 heures 2 8 C sept r sultats sont discordants entre la r ponse sp cifique du test et le r sultat d identification positifs en r ponse DLMO du test avec identification d une Listeria autre que L monocytogenes trois r sultats sont apparus faux positifs en r ponse DLIS du test un chantillon faux n gatif en test direct est devenu concordant apr s conservation du bouillon LX 2 8 C Les r sultats des tests VIDAS LDUO r alis s sur les bouillons LX conserv s 72 heures 2 8 C sont donc globalement quivalents ceux obtenus lorsque le test VIDAS LDUO est r alis directement apr s incubation 2 2 Niveau de d tection relatif L objectif est de d terminer le niveau de contamination pour lequel moins de 50 des r ponses obtenues sont positives et celui pour lequel plus de 50 des r ponses obtenues sont positives 2 2 1 Matrices utilis es Diff rents couples matrice alimentaire souche ont t tudi s en parall le avec la m thode de r f rence et l
74. ultats Une feuille de r sultats est imprim e mentionnant les r f rences des d analyse r actifs la date et l heure le r sultat du test et l identification de l chantillon 13 Maintenance par le laboratoire Le manuel d utilisation VIDAS explicite quelques probl mes Un service d assistance technique par t l phone existe chez bioM rieux Diff rents contrats de maintenance pr ventive sont possibles Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 13 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 3 Etude interlaboratoires 3 1 Organisation de l tude 3 1 1 Mise en uvre e Nombre de laboratoires participants 17 laboratoires taient destinataires des chantillons e Matrice utilis e La matrice lait pasteuris a t utilis e pour la r alisation de l tude interlaboratoires e Souche utilis e La souche utilis e pour les contaminations est une souche de Listeria monocytogenes L37 origine produits laitiers e Nombre d chantillons par laboratoire 24 chantillons par laboratoire ont t pr par s pour la m thode de r f rence et 24 chantillons pour la m thode alternative r partis en 3 niveaux avec 8 chantillons par niveau 3 2 Taux de contamination Les taux de contaminations obtenus dans la matrice figurent dans le tableau ci dessous Niveau Echantillons Taux th orique cibl Taux r el UFC 25mL UFC 25mL 3 4 9 1
75. unster Saumon fum Munster Escalope de poulet Viande hach e Saucisson Terrine de lapin Pommmes rissol es Coquille de poisson Tourteau de soja Pommes rissol es Maroilles au lait cru Cr me de foie de volaille Fromage affin Viande hach e Boeuf Viande hach e Poitrine de porc Munster Steak hach Boeuf bourguignon Saucisse de Montb liard Brisures de saumon SLCC 2540 SLCC 2479 SLCC 2482 Epinards Mozzarella Filet de perche L gumes po l s Coulommiers au lait cru Pr levement environnement Pr levement environnement Pr levement environnement Saucisson Saumon fum 2 05 1 99 1 90 Inclusivit AS par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut par d faut II jririr bs LITITITITIT a E gt FS SS SS SS
76. viron 10 Listeria par mL puis le protocole d enrichissement complet de la m thode a t suivi avant r alisation du test VIDAS LDUO Protocole pour l exclusivit Les diff rentes souches n gatives ont t cultiv es en bouillon nutritif pendant 24 heures 30 C ensemenc es dans 10 mL de bouillon nutritif afin d obtenir des niveaux d environ 105 cellules par mL puis incub es pendant 24 heures 30 C avant r alisation du test VIDAS LDUO 2 3 2 R sultats et conclusion Les r sultats figurent en annexe 4 Les 50 souches de Listeria monocytogenes ont toutes t mises en vidence avec le test DLUO r ponse DLMO positive Les 30 souches de Listeria autres que Listeria monocytogenes ont galement t mises en vidence par le test DLUO r ponse DLIS positive Aucune r action crois e n a t obtenue avec les 31 souches autres que Listeria 2 4 Praticabilit La praticabilit est tudi e en fonction des 13 crit res d finis par le bureau technique en comparant la m thode de r f rence la m thode VIDAS LDUO Les crit res d finis par l AFNOR sont renseign s ci dessous Institut scientifique d Hygi ne et d Analyse 11 67 bioM rieux VIDAS Listeria Duo Rapport de synth se d cembre 2014 1 Mode de conditionnement des l ments de la m thode cf notice 2 Volume des r actifs cf notice et emballage des flacons Les kits sont conditionn s en coffrets de 60 tests contenant l
77. ytogenes L monocytogenes L innocua L innocua VIDAS LDUO Pe e f IIS ITS M thode LDUO par d faut par d faut par d par d par d aut aut aut par d faut par d par d par d par d aut aut aut aut par d faut par d faut par d par d par d aut aut aut CONFIRMATION SUR ENRICHISSEMENT L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L innocua L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L monocytogenes L welshimeri L monocytogenes L innocua L innocua RESULTAT COMPARAISON FINAL MES 32 67 V g taux METHODE NF EN ISO 11290 1 FRASER 172 CONFIRMATION SUR ENRICHISSEMENT le LMO TEST LMO LIS TEST LIS Brocolis surgel s L monocytogenes par d faut L monocytogenes Frites surgel es L monocytogenes K par d faut L monocytogenes Pommes rissol es surgel es L monocytogenes par d faut L monocytogenes Pommes de terre surgel es L grayi A par d faut L monocytogenes Brocolis surgel s E F Frites surgel es L monocytogenes H par d faut L monocytogenes Pommes de terre et oignons surgel e

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