FideliO® DNA Polymerase
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1. 1 34 60 92 12 cation des s quences riches en GC NUMERO DE FICHE TECHNIQUE OZYA005 500 0514 D FINITION DE L UNIT Une unit est d finie comme la quantit d enzyme qui incorpore PRODUIT A USAGE DE RECHERCHE UNIQUEMENT 10 nmoles de dNTP dans un fragment d ADN en 30 min 74 C 33 0 1 34 60 24 24 info ozyme fr WWW ozyme fr PROTOCOLE STANDARD Ce protocole est adapt pour une r action de 50 ul partir de matrices purifi es Les amorces doivent avoir pr f rentiellement une temp ra ture de fusion Tm proche de 60 C Le tampon de r action HF est le tampon utiliser par d faut Le tampon de r action GC est d di aux cibles riches en GC C est un point de d part pour les optimisations cf tape 3 ci dessous section Optimisations du manuel d utilisation Apr s d cong lation compl te de chaque r actif bien homog n iser l aide d un vortex puis centrifuger bri vement tous les r actifs avant leur utilisation 1 Les r actifs sont m lang s dans un micro tube st rile dans l ordre suivant Volume Conc finale 0 5 yl 0 2 M R actif Eau st rile redistill e Tampon de r action HF 5X ou Tampon de r action GC 5X dNTP m lange 10 mM de chaque Amorce sens ex 20 uM 0 5 ul 0 2 M Amorce anti sens ex 20 uM Plasmide 1 ng ADNg 200 ng ADNc non dilu s lt 250 ng 50 pl lt 5 pl 0 5 1 uyl 1 2 unit s 50 LI q s px quantit suffisant2. 33 0 1 34 60 24 24 info ozyme fr WWwW ozyme fr TAMPON DE REACTION HF ou GC 5X chaque tampon 5X contient 7 5 mMM de MgCl FideliO DNA Polymerase MANUEL D UTILISATION www ozyme fr proto fidelio 500 unit s R F RENCE OZYAO05 500 CONCENTRATION 2 unit s ul VOLUME FideliO DNA Polymerase 250 ul Tampon de r action HF 5X 6 x 1 5 ml PRODUITS ASSOCIES MAC 0e AA 3x 1 5 ml Taq Ozyme Maso 100 500 pl Taq Ozyme HS Taq Ozyme Purple Mix STOCKAGE 20 C PrimeSTAR Max DNA Polymerase Pr mix PrimeSTAR GXL DNA Polymerase PCR lt 30 kb s quence GC riches DUR E DE VIE r ception un an 20 C ExactLadder Ladder DNA PreMix 100 bp Plus ExactLadder Ladder DNA PreMix 2 Log ExactLadder DNA PCR PreMix DESCRIPTIF dNTP PreMix 4 x 10 mM Nr dNTP PreMix 4 x 25 mM La Fideli0O DNA Polymerase est une ADN polym rase modifi e ultra thermostable rapide fid le et robuste Cette enzymes est 50X plus fid le qu une Taq polym rase et amplifie avec une vitesse de POUR COMMANDER www ozyme fr 15 secondes kb Deux tampons de r action sont inclus Nous EEN conseillons d utiliser le tampon de r action HF en premi re intention OZYME Parc d Activit s du Pas du lac 10 Avenue Amp re Pre er i _ 78180 Montigny Le Bretonneux France Email commande ozyme fr pour une fid lit maximale et le tampon de r action GC pour l amplifi T l 33 0 1 34 60 15 16 Fax 33 0
3. e pour Le volume total de r action peut tre ajust si n cessaire la concentration recommand e de chaque amorce est de 0 2 uM finale et peut tre optimis e entre 0 2 et 1 uM 8 aliquot d un m lange r actionnel de transcription inverse la quantit d enzyme d pend de la matrice d ADN utilis e De plus amples informations sont pr sent es dans la section optimisations du manuel d utilisation Matrice d ADN FideliO DNA Polymerase 2 u ul Volume final 33 0 1 34 60 24 24 info ozyme fr WWW ozyme fr 2 Le m lange r actionnel est vortex doucement puis centrifug bri vement pour rassembler l chantillon au fond du tube 3 Programmation du thermocycleur Temp rature Cycles Etape Temps D naturation initiale D naturation Hybridation 25 35 Extension finale O sm ou Tm le plus bas des deux amorces si les amorces sont inf rieures 20 nt Tm 3 C sur le Tm le plus bas des deux amorces si les amorces sont sup rieures 20 nt Si les Tm des amorces sont gt 72 C utiliser le programme de PCR en 2 tapes cf section Optimisations du manuel d utilisation 8 30 sec Kb pour les amplicons gt 1 Kb Elongation 15 30 sec Stockage optionnel 49C PR CAUTIONS Pr parer et conserver le m lange r actionnel sur la glace jusqu au d marrage des cycles de PCR Ajouter toujours en dernier l enzyme COMPOSANTS 1 x 250 lil FideliO DNA Polyme
4. rase 6 x 1 5 ml tampon de r action HF 5X 3 x 1 5 ml tampon de r action GC 5X 2 x 1 5 ml Solution MgCl 50 mM 1 x 500 uI DMSO 100 TAMPON DE STOCKAGE FideliO DNA Polymerase Tris HCI 20 mM KCI 100 mM DTT 1 mM EDTA 0 1 mM Stabilisateur glyc rol 50 pH 7 4 25 C
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