BD? Columbia Agar with 5% Sheep Blood
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1. ceux mentionn s sous la rubrique R sultats et interpr tation La BD BBL Dermatoslide est con ue pour l isolement et le d nombrement primaire Pour r aliser des tests suppl mentaires en particulier si des cultures mixtes sont observ es dans les milieux de ce syst me repiquer dans des milieux d talement appropri s afin d obtenir des cultures pures indispensables l identification compl te et la r alisation de tests de sensibilit Les lames immerg es ne doivent pas tre utilis es pour effectuer des tests de sensibilit sur disque REFERENCES 1 Taplin D et al 1969 Isolation and recognition of dermatophytes on a new medium DTM Arch Dermatol 99 203 2 MacFaddin J D 1985 Media for isolation cultivation identification maintenance of medical bacteria vol 1 p 275 284 Williams amp Wilkins Baltimore MD 3 Summerbell R C 2003 Trichophyton Microsporum Epidermophyton and agents of superficial mycoses In Murray P R E J Baron J H Jorgensen M A Pfaller and R H Yolken ed Manual of clinical microbiology 8th ed American Society for Microbiology Washington D C 4 Larone D H 1995 Medically important fungi a guide to identification 3rd edition ASM Press Washington 5 Atlas R M 1993 Handbook of Microbiological media CRC Press Boca Raton FL 6 Sutton D A 2003 Specimen collection transport and processing mycology In Murray P R E J Baron J H Jorgensen2. un laboratoire d analyse m me d ex cuter les tests mycologiques Apr s utilisation autoclaver ou incin rer tous les tubes usag s et tout autre mat riel contamin avant de les liminer Pour plus d informations voir le document MODE D EMPLOI GENERAL CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES ET LIMITES DE LA PROCEDURE La BD BBL Dermatoslide est une lame immerg e deux faces qui convient l isolement des champignons et qui doit tre utilis e uniquement pour la mise en vidence de champignons impliqu s dans des cas d infections superficielles peau cheveux et ongles Le milieu 1 est un milieu s lectif standard pour les dermatophytes p ex Trichophyton Epidermophyton et Microsporum spp De plus les levures r sistantes au cycloheximide comme Candida albicans peuvent se d velopper sur ce milieu Ce milieu inhibe les bact ries Certains champignons pathog nes dont certaines souches de Microsporum sont inhib s par le cycloheximide contenu dans ce milieu Cependant ces souches peuvent se d velopper sur le milieu 2 de cette lame immerg e Le milieu 2 est un milieu d isolement universel pour les champignons notamment les esp ces saprophytes La plupart des bact ries susceptibles d tre pr sentes en tant qu agents contaminants ou pathog nes sont inhib es par le faible pH de ce milieu Le nombre d esp ces qui peuvent se d velopper dans les milieux de cette lame g los e est important et ne se limite pas
3. M A Pfaller and R H Yolken ed Manual of clinical microbiology 8th ed American Society for Microbiology Washington D C CONDITIONNEMENT BBL Dermatoslide N r f 273191 10 lames INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES Pour plus d informations contacter le repr sentant local de BD DA 273191 00 5 sel BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D 69126 Heidelberg Germany Phone 49 62 21 30 50 Fax 49 62 21 30 52 16 Reception Germany europe bd com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Berg s 38800 Le Pont de Claix France Tel 33 476 68 3636 Fax 33 476 68 3292 http www bd com BD BD logo and BBL are trademarks of Becton Dickinson and Company ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection 2003 Becton Dickinson and Company DA 273191 00 6
4. tabolis es en l ments alcalins l indicateur au rouge de ph nol passe du jaune au rouge Du glucose est ajout en tant qu l ment nutritif et pour permettre une acidification par les champignons capables d utiliser principalement le glucose La plupart des champignons autres que les dermatophytes y compris les levures et les moisissures si elles sont capables de se d velopper dans le milieu utilisent le glucose Il en r sulte une formation d acide sans changement de couleur de l indicateur de pH le rouge de ph nol Le cycloheximide est un inhibiteur pour les moisissures et les levures non pathog nes Le chloramph nicol et la gentamicine sont des inhibiteurs antibact riens Quelques microorganismes notamment les saprophytes les levures et les bact ries sont capables de se d velopper dans ce milieu et de faire passer l indicateur de pH du rouge au jaune La morphologie caract ristique de leurs colonies facilite leur identification Le milieu 2 est une Malt agar pour la d tection des levures Ce milieu est utilis pour la d tection de tous les types de champignons y compris les moisissures et levures L extrait de malt contient toutes les substances nutritives n cessaires la croissance des champignons Le faible pH du milieu entra ne une inhibition partielle compl te des bact ries contaminantes mais est bien tol r par les champignons La BBL Dermatoslide est utilis e pour l isolement primaire des champigno
5. AW MODE D EMPLOI RJ B D MILIEUX SUR LAMES C IMMERGEES PRETS A L EMPLOI DA 273191 00 Rev Juillet 2003 BD BBL Dermatoslide APPLICATION La BBL Dermatoslide est un syst me de lames deux faces destin la d tection et l isolement de champignons pathog nes partir d infections superficielles de la peau des cheveux et des ongles PRINCIPES ET EXPLICATION DE LA METHODE M thode microbiologique Les champignons jouent un r le majeur dans les infections de la peau et de ses organes adjacents comme les cheveux ou les ongles En g n ral ce sont les champignons myc liens comme Trichophyton Epidermophyton et Microsporum mais aussi d autres qui sont le plus fr quemment identifi s comme tant les agents infectieux Des esp ces de levures telles que Candida albicans peuvent aussi tre l origine de cas d infections superficielles de la peau Pour permettre une identification et un traitement appropri des milieux d isolement s lectifs et non s lectifs doivent tre utilis s pour d tecter les agents impliqu s Le milieu 1 est une Dermatophyte Test Medium Agar modifi e selon les indications de Taplin pour la d tection de dermatophytes particuli rement mais non exclusivement Trichophyton Epidermophyton et Microsporum spp Dans ce milieu les peptones fournissent de l azote n cessaire la croissance et sont la source des l ments alcalins produits par les dermatophytes Lorsque les peptones sont m
6. ent que des cheveux sains Si une lampe de Wood est utilis e pr lever les cheveux fluorescents m me s ils semblent sains la lumi re du jour En cas d observation de ce qui est commun ment d sign sous le terme points noirs extraire le cheveu infect hors du bulbe l aide du bord d un scalpel Ne pas utiliser de cheveux coup s comme chantillon R partir les cheveux sur les deux milieux de la lame Appliquer doucement les cheveux sur la g lose l aide de pinces Ongles En cas d infection sous ungu ale toutes les parties particuli rement d form es de la surface de l ongle doivent tre retir es avec des ciseaux une lime ongle ou un scalpel Des fragments d ongle doivent alors tre pr lev s partir du lit ungu al En cas d infection superficielle gratter des fragments d ongle ou de petites particules en forme de poussi res de la surface de l ongle Ne pas ensemencer la BBL Dermatoslide avec de gros fragments coup s partir des ongles extraits Utiliser de pr f rence une fraise ongles Ensemencer les deux faces de la lame avec l chantillon Echantillons pr lev s par couvillonnages ou l aide de pinces R partir uniform ment la mati re sur les deux milieux g los s en commen ant par la g lose 1 l aide d un couvillon st rile ou de pinces st riles A l aide de pinces presser l g rement les particules les plus grosses sur la g lose afin de garantir que l c
7. hantillon est bien en contact avec la surface de la g lose Noter que les couvillons issus de zones infect es ne sont pas des chantillons appropri s pour le pr l vement de dermatophytes Pour une description d taill e des m thodes de pr l vement des chantillons consulter les documents cit s en r f rence Apr s le pr l vement et l ensemencement de l chantillon replacer la lame l int rieur du tube et bien refermer le bouchon Incuber la BBL Dermatoslide entre 25 et 30 C jusqu 4 semaines Inspecter quotidiennement les surfaces de la g lose Les lames ensemenc es peuvent aussi tre exp di es des laboratoires sp cialis s pour traitement suppl mentaire ou identification des pathog nes R sultats Apr s l incubation inspecter visuellement les surfaces de la g lose sans ouvrir le tube Milieu 1 La croissance de dermatophytes entra ne un changement de couleur du milieu situ sous les colonies qui vire du jaune au rouge avant m me que ces derni res n aient atteint leur d veloppement complet Au fur et mesure que la croissance se d veloppe la couleur du milieu tout entier volue vers le rouge et un myc lium blanc gris ou jaun tre devient visible L chantillon est consid r n gatif aux dermatophytes si aucune croissance n est visible apr s incubation dans ce milieu Certaines moisissures saprophytes sont susceptibles de se d velopper dans le milieu 1 Toutefois dans ce cas
8. les colonies et le myc lium apparaissent g n ralement avant que le milieu ne change de couleur Certaines levures r sistantes au cycloheximide par ex Candida albicans peuvent aussi provoquer un changement de couleur du milieu du jaune au rouge apr s une incubation prolong e Les levures peuvent tre diff renci es des dermatophytes car elles forment des colonies lisses d nu es de myc lium Milieu 2 Tous les champignons y compris les levures peuvent se d velopper sur ce milieu Les levures sensibles au cycloheximide Candida tropicalis Candida parapsilosis Candida krusei Candida Torulopsis glabrata et autres se pr sentent g n ralement sous forme de colonies lisses sur le milieu 2 mais ne se d veloppent pas sur le milieu 1 Noter que certains dermatophytes pr sents sur le milieu 2 n cessitent une p riode d incubation plus longue que sur le milieu 1 faute de quoi leur croissance risque d tre limit e DA 273191 00 4 Noter que des tests suppl mentaires tels que des proc dures microscopiques et ou biochimiques sont n cessaires pour obtenir une identification compl te des pathog nes isol s sur cette lame immerg e La plupart de ces m thodes sont uniquement applicables en laboratoire de diagnostic et ne peuvent pas tre r alis es dans un cabinet m dical standard Par cons quent toutes les lames immerg es pr sentant des r sultats nettement positifs ou ind termin s doivent tre transmises
9. ns en particulier des dermatophytes partir de diverses infections superficielles Elle peut galement tre utilis e comme milieu de transport pour acheminer les chantillons partir du cabinet m dical jusqu au laboratoire d analyse DA 273191 00 1 REACTIFS BBL Dermatoslide Formule par litre d eau purifi e Milieu 1 Milieu 2 Digestion pancr atique de cas ine 15 0 g Extrait de malt 30 0 g Digestion papa que de semoule de 5 0 G lose 18 0 soja Chlorure de sodium 5 0 pH 4 0 0 2 G lose 20 0 Glucose 10 0 Rouge de ph nol 0 2 Cycloheximide 0 5 Chloramph nicol 0 1 Gentamicine 0 1 pH 5 5 0 1 Ajust e et ou compl ment e en fonction des crit res de performances impos s PR CAUTIONS usage professionnel uniquement Ne pas utiliser de lames pr sentant des signes de contamination microbienne d coloration dessiccation ou fissure ou d autres signes de d t rioration Lors de l utilisation de la BBL Dermatoslide en tant que milieu de transport entre un cabinet m dical et un laboratoire de diagnostic respecter la r glementation locale en vigueur concernant l exp dition d chantillons cliniques Consulter le document MODE D EMPLOI GENERAL pour plus d informations sur les proc dures de manipulation aseptique les risques biologiques et l limination des produits usag s Porter des gants de protection lors du pr l vement et de la manipulation d chantillo
10. ns et de lames positives contenant des agents infectieux STOCKAGE ET DUREE DE CONSERVATION D s r ception conserver les produits BBL Dermatoslide dans l obscurit entre 15 et 20 C dans leur emballage d origine jusqu au moment de leur utilisation Ne pas les congeler les surchauffer les laisser se dess cher ni les soumettre des variations de temp rature Les lames non ouvertes provenant de bo tes de 10 lames d j entam es peuvent tre utilis es jusqu la date de p remption indiqu e Une fois ouvertes les lames doivent tre utilis es imm diatement CONTROLE DE QUALITE PAR L UTILISATEUR Pr parer des suspensions des souches mentionn es ci dessous jusqu obtenir une turbidit quivalente un standard McFarland 0 5 Pour chaque microorganisme pr parer un tube d une largeur suffisante pour y introduire un support de g lose BBL Dermatoslide avec 20 25 mL de s rum physiologique et ajouter 1 mL de la suspension de la souche ci dessus Ouvrir une BBL Dermatoslide retirer le support de g lose le plonger bri vement dans la suspension de la souche de test et passer l tape concernant les chantillons liquides d crite dans Mode op ratoire du test Incuber pendant 5 7 jours 35 2 C Examiner les surfaces de la g lose comme d crit sous R sultats et interpr tation afin de d tecter une croissance ventuelle DA 273191 00 2 Souches Milieu 1 Milieu 2 Trichophyton mentagrophy
11. ors du pr l vement des chantillons Gratter l aide d un scalpel afin de retirer les squames des l sions s ches ou d coll es en partant des limites de la zone enflamm e et en progressant en direction de la peau saine Les scalpels jetables peuvent facilement endommager la peau utiliser si possible uniquement le dos de la lame Gratter soigneusement les zones tendues et pr lever autant de mati re que possible En cas de l sions v siculaires ou d inflammation aigu retirer d licatement la peau des cloques avec des ciseaux et des pinces L chantillon pr lev doit tre cultiv avec le contenu de la cloque et dans la mesure du possible avec des squames issues de la zone avoisinante En pr sence d infiltrats ou de processus granulomateux pr lever la mati re en profondeur et dans les plis de la peau l aide d une curette ou d une lancette vacciner Recueillir la mati re sur un morceau de papier filtre ou directement sur la BBL Dermatoslide Si les chantillons sont pr lev s selon la m thode des r pliques il convient de gratter d licatement les couches superficielles de la peau avec un instrument coupant puis de presser d licatement les diff rentes faces de la BBL Dermatoslide contre la zone tester en commen ant avec le milieu 1 DA 273191 00 3 Cheveux Extraire les racines des cheveux ternes et sans clat l aide de pinces Les cheveux infect s sont cassants et se d tachent plus facilem
12. tes Croissance Croissance ATCC 9533 Candida albicans Croissance Croissance ATCC 10231 Candida glabrata Inhibition partielle a compl te Croissance ATCC 2001 Aspergillus niger Inhibition compl te Croissance ATCC 16404 ATCC 27853 ATCC 29212 ATCC 25923 l g rement opaque Noter que dans ce milieu la croissance des dermatophytes est susceptible d tre plus faible ou plus lente que dans le milieu 1 METHODE Mat riaux fournis BBL Dermatoslide Produits contr l s microbiologiquement Mat riaux non fournis Milieux de culture auxiliaires r actifs mat riel de laboratoire et dispositifs de pr levement requis Types d chantillons La BBL Dermatoslide peut tre utilis e avec tous les chantillons pr sum s contenir des champignons responsables d infections de la peau des cheveux des ongles etc Pr l vement d chantillons ensemencement et mode op ratoire du test Avant d ouvrir et d utiliser la BBL Dermatoslide inspecter visuellement les surfaces de la g lose pour s assurer de sa st rilit Etiqueter le tube avec le nom du patient le num ro de l chantillon et la date de l ensemencement Avant l ensemencement retirer la lame du tube plastique en prenant soin de ne pas toucher les surfaces de la g lose Peau Avant de retirer les squames nettoyer le site infect avec de l alcool thylique ou isopropylique dilu 70 Toujours utiliser des instruments st riles l
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