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1. ve ed ad dede 6 PREMIERE PARTIE REVUE DE LA LITTERATURE CHAPITRE I GENERALITES SUR LE CONTROLE DE QUALITE DANS UN LABORATOIRE DE BIOCHIMIE MEDICALE suisses 9 Tle LE CONTROLE DE QUALIT nt ne 9 L1 1 DEFINITIONS ss cas riven i etes een ee eee dee rente 9 1 1 2 IMPORTANCE DU CONTROLE DE QUALITE 10 1 1 3 LE MANAGEMENT DE LA QUALITE 1 0 cece cece 11 1 1 4 VALIDATION D UNE METHODE ANALYTIQUE 11 1 1 4 1 CONTROLE DE QUALITE INTERNE 11 1 1 4 2 CONTROLE DE QUALITE EXTERNE 12 1 1 5 CRITERES CONTRIBUANT A LA FIABILITE DES RESULTATS AU LABORATOIRE ses ann des Mine rouen Pense 13 1 1 5 1 L EXACTITUDE OU JUSTESSE tonne y s roug eye ere 13 1 1 5 2 PRECISION OU REPRODUCTIBILITE 14 1 1 6 FACTEURS INFLUENCANT LA QUALITE DE RESULTATS DE BIOCHIMIE MEDICALE sisi 15 1 2 LA QUALITE EN BIOCHIMIE 4 sisi 15 1 2 1 ETALONNAGES ET CONTROLE DE QUALITE 16 1 2 1 1 Etalonnage ou calibrage pour am liorer la qualit des r sultats de laboratoire sd oie a NEN sal aa Ea ee 16 CHAPITRE II NOTIONS DE RAPPEL SUR L ENZYMOLOGIE CLINIQUE 20 11 1 INTRODUCTION ele 20 IT DEFINITION2. dat e 48 ANNEXE S E A AAS es Me che a ela Sg ka A a aay ide asda 56 TABLE DE MATIERES anges sta Sos debe hgh eho ne Lewes B YE a kb kaa BON 633
3. v oi Actuellement la coh rente de la part du biologiste devraient tre la suivante 27 38 gt Lors de l introduction d une nouvelle technique d un nouvel analyseur dans le laboratoire ou l adaptation d une nouvelle technique sur un analyseur existant il est important de tester cet analyseur ou cette technique pour connaitre la qualit les performances et les confronter aux exigences cliniques actuellement admises il s agit de la validation de techniques gt Puis il faut introduire en routine cette technique pour un analyseur il s agit d installer la machine dans de bonnes conditions et apr s une p riode de familiarisation en d finir les conditions d exploitations et les proc dures d entretien r gulier et syst matique permettant de garantir un fonctionnement correcte et de pr venir une d gradation du fonctionnement cest la maintenance pr ventive gt Il faut mettre en place un certain nombre d indications pour s assurer en permanence du maintien de la qualit des r sultats et signaler imm diatement en temps r el toute anomalie Cest le contr le de qualit gt En cas d anomalies constat es entrainant le rejet des s ries en cours il faudra alors mettre en uvre des proc dures de d pannage plus ou moins lourdes selon les cas c est la maintenance curative 18 Conclusion partielle Alors que le contr le est universel et repose sur l em
4. dosages enzymatiques par cons quent la valorisation de laboratoire m dical Car l am lioration de la qualit est une pr occupation partag e dans le monde v pr CHAPITRE II NOTIONS DE RAPPEL SUR L ENZYMOLOGIE CLINIQUE 20 II 1 INTRODUCTION 1 1 DEFINITION L enzymologie clinique est une branche de la biochimie appliqu e dans le dosage des enzymes dans le but de diagnostiquer pronostiquer ou orienter le traitement d un patient 1 2 ENZYMES Les enzymes sont des biocatalyseurs 46 Tl s agit des macromol cules de nature prot ique exer ant une action catalytique 22 49 II 1 3 ORIGINE ET SIGNIFICATION CLINIQUE La plupart des enzymes sont fabriqu s ou localis dans la cellule et se retrouvent a diff rents niveaux de la membrane plasmique du cytoplasme de la cellule et des organites Lorsque surviennent des l sions tissulaires qui s accompagnent de la mort des cellules ces derni res d versent leur contenu enzymatique cytoplasmique en partie dans la circulation sanguine On peut alors d tecter une activit enzymatique anormale dans le sang et leur taux est lev dans le s rum 14 22 a jr L augmentation dans le s rum de l activit d un enzyme est un signe d alt ration de fonction cellulaire et on peut aller plus loin et pr ciser le tissu en cause 33 Par exemple gt Alanine aminotransf rase ALAT est retrouv e dans le foie s
5. gt Faire asseoir le patient v Choisir la veine de pr l vement Placer le garrot plus ou moins 10Cm du site de pr l vement Mod r ment serr D sinfecter et ponctionner Aspirer le sang doucement Degarroter Placer l endroit ponctionn un tampon d ouate sec Retirer l aiguille D monter l aiguille du corps de la seringue Refouler doucement le sang dans le tube VV VV VV WV Centrifuger et d canter le s rum plasma 25 2 Conservation des chantillons Les chantillons sont conserv s au frigo 2 8 C pendant 48 heures 0 C pendant plusieurs mois II 3 4 Types d chantillons sur lesquels on peut doser les enzymes La plupart des analyses biochimiques sont r alis es sur s rum ou plasma sur sang total par exemple pour les Gaz du sang urines liquide c phalorachidien liquide pleural etc Le recours des m thodes d analyses de plus en plus sensibles pr conisent de travailler sur du s rum qui ne subit pas l addition d autres compos s chimiques les anticoagulants 63 II 3 5 La qualit d Equipements Mat riels et r actifs La qualit de r actifs des produits chimiques des mat riels utilis s dans l analyse enzymatique ont une influence et doit satisfaire a de grandes exigences en ce qui concerne la puret l activit et la stabilit du r actif et la propret du mat riel 3 Le mat riel n est pas en g n ral st rile
6. v Jh dans deux laboratoires diff rents savoir le laboratoire de Vhopital saint Joseph et le laboratoire de l hopital l Amiti Sino Congolaise III 2 2 METHODES STATISTIQUES 8 44 Pour l exploitation des r sultats nous avons utilis le logiciel SPSS 16 0 pour le calcul des moyennes et des carts types pour comparer les deux moyennes de chaque param tre dos et le test d ANOVA sous conditions exp rimentale et contr le t moin III 2 3 PROTOCOLE Pour doser les chantillons de transaminase nous avons proc d de la mani re suivante gt Dans chaque laboratoire nous avons proc d au dosage de transaminase pour les m mes chantillons recueillis dans chaque laboratoire par sa technique habituellement pratiqu e sur les spectrophotom tres suivants COBAS C111 pour le laboratoire de saint Joseph SECOMM BASIC pour le laboratoire de l h pital Sino Congolaise et Visuel 6 3 pour le laboratoire de l h pital de Kimbondo avec des r actifs bioM rieux gt Ensuite les m mes chantillons de s rums ont t repartis en aliquotes pour chaque laboratoire puis achemin s au laboratoire de l h pital de Kimbondo r f rence pour le m me dosage enzymatique gt Les r sultats obtenus ont t compar dans les deux laboratoires puis ceux obtenus par le laboratoire de r f rence pour appr cier la performance par rapport la valeur cible de transaminase 1 jr La m thode ut
7. Rev Fr Lab 1997 297 19 24 14 CHU de RENNES Enzymes s riques s miologie biochimique 2001 2p 15 DUFFOUR DR et al Diagnosis and monitoring of hepatic injury Recommendations for laboratory test in screening diagnosis and monitoring Clin Chem 2000 46 2050 68 16 DUFOUR DR LOTT JA NOLTE JA GRETCH DR Diagnosis and monitoring of hepatic injury I Performance characteristics of laboratory tests Clin Chem 2000 46 2027 49 17 DUMONTET M Mise en uvre utilisation et exploitation du contr le de qualit afin d assurer la validation analytique la maitrise m trologique des instruments d analyses et la d termination de l incertitude de mesure Spectra Biologie 2007 26n 157 37 35 5o ri 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 DUMONTET M Probl matique de la maitrise m trologique des instruments d analyses automatiques Spectra Biologie 2005 24 n 147 35 39 FERARD G Directive du parlement europ en et conseil europ en du 27 octobre 1998 relative aux dispositifs de diagnostic in vitro 98 79 FERARD LESSINGER L enzymologie clinique des ann es 2000 Vers une meilleure efficacit pour le clinicien et le patient Ann Biol Clin 2000 58 380 3 FLORENCE Guide technique d accr ditation Les contr les de qualit analytique en biologie m dicale Document COFRAC SH GTA 06 R vision
8. Supervision et contr le de qualit des laboratoires gt Aux biologistes m dicaux et techniciens de laboratoire Assurer et garantir la qualit des analyses biochimiques qui doit tre comme un vad m cum L affichage dans le laboratoire des modes op ratoires et les instructions relatives chaque analyse V rifier l ad quation de protocole avec son analyseur pour chaque nouveau r actif Assurer la maintenance entretien r paration des appareils de laboratoires Contr ler le fonctionnement des appareils pr sent dans le laboratoire temp rature de frigo l aspect de r actif et surtout la stabilit gt Aux futurs chercheurs Que cette tude soit tendue sur tout le territoire national fo jr De mener des tudes beaucoup plus approfondies afin de d celer les facteurs responsables influen ant la qualit de r sultats de laboratoire m dicale de la ville de Kinshasa 48 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1 AFNOR G rer et assurer la qualit 6 dition 1996 13 15 23pp 2 AFNOR Arr t du 2 novembre 1994 relatif la bonne ex cution des analyses de biologie m dicale Journal officiel de la R publique fran aise du 4 d cembre 1994 171 93 201 3 AFSSAPS Rapport du contr le de march des dispositifs de diagnostic in vitro de dosage de transaminase Version du 17 f vrier 2010 10 4 5 p 4 AFSSAPS Annales du contr le national de qualit des analy
9. aou Pote ea des vanter Cedex ea yan 20 TT 132 ENZYMES ae kota say kte delivre fen e daw pede chive de swe ni 20 1 3 ORIGINE ET SIGNIFICATION CLINIQUE 0 ecee ec ee eee eee eeeneneeeeees 20 IL T INDICATION CLINIQUE visi de ase 21 1 5 IMPORTANCE DES PARAMETRES BIOLOGIQUE ENCLINIQUE 22 2 METHODES DE DOSAGE DES ENZYMES EN CLINIQUE 22 11 2 1 METHODE ENZYMATIQUE sise 22 11 2 2 METHODE CHIMIQUE iis aie EE A TEE aa 23 PRINCIPES GENERAUX DE DOSAGE ENZYMATIQUES ET QUALITE 23 HS TE Pr VeMent Ra RS te Ne 23 13 2 Conditions de prelevement n ant 24 II 3 3 Modalit de pr l vement et conservation des chantillons 24 1 Modalit de Winona 24 21 Conservation d s chantillons gen eka gn eke ke kk kaa en ep eat 25 II 3 4 Types d chantillons sur lesquels on peut doser les enzymes 25 II 3 5 La qualit d Equipements Mat riels et 25 IL 4 FACTEURS INFLUENCANT LES DOSAGES ENZYMATIQUES 26 11 5 SOURCES DERREUR eme mnt nent detente de de ann 26 II 6 PRECAUTIONS A PRENDRE POUR REALISER LE DOSAGE ENZYMATIQUE E PE F 27 DEUXIEUME PARTIE PART
10. par rapport l cart type du laboratoire Sino Congolaise pour le GPT 43 J 3 IV 2 DISCUSSION A partir de nos r sultats des chantillons de dosage de transaminases obtenus dans diff rents laboratoires en comparant les r sultats obtenus l h pital saint Joseph par rapport ceux de l h pital Sino Congolaise nous constatons qu il y a une diff rence significative car le f calcul est loin sup rieur au f tabul 0 6 Ceci corr le avec les r sultats pr sent dans le tableau I Il en est de m me pour les r sultats comparatifs fournis par les deux laboratoires par rapport aux r sultats du laboratoire t moin dans lequel le f calcul est de 0 9 contre 0 3 dans le tableau IV Au vu de ces r sultats nous avons observ que les deux laboratoires n ont pas atteint la conformit tant pour le GOT que pour le GPT Ce constat appel la prise de mesures correctives d urgence Ces mesures consistent dans le laboratoire n 1 v rifier l aspect de r actif revoir les conditions op ratoires et surtout la date de p remption des r actifs Dans le laboratoire n 2 il faut v rifier l aspect du r actif NaOH les pipetages contr ler la temp rature de conservation de r actifs la maintenance d appareil et surtout la stabilit Apr s cette v rification il faut r calibrer l appareil Les r sultats obtenus dans notre tude sont similaires ceux obtenus par CAMARA CISSEM DJOHAN Y
11. Ces deux qualit s lui permettent de faire face aux exigences de la biologie clinique moderne 62 La diversit des m thodes employ es est tr s grande comme lindiquent les tables de codage du contr le de qualit national CNQ 14 51 Les donn es de ce contr le montrent qu il existe des carts importants entre les diff rents r actifs ou entre les diff rentes m thodes utilis es en enzymologie clinique La connaissance de la m thode utilis e pour le dosage de transaminase est donc essentielle les interf rences analytiques d une part l existence ou non d une tra abilit d talonnage d autre part peuvent alt rer ou modifier significativement les r sultats Ces diff rences entre les m thodes utilis es peuvent conduire une erreur dans le d pistage diagnostic et suivi de pathologies diverses ou dans l ajustement d un traitement m dicamenteux la fonction h patique 15 51 Au vu de ceci notre pr occupation fondamentale est celle de savoir si ces laboratoires de la ville de Kinshasa valides les m thodes d analyses quel cr dit peut on accorder aux r sultats des analyses biom dicales surtout ceux de dosages 5 J enzymatiques et quels sont les principaux facteurs influen ant la qualit de r sultats de laboratoire 2 HYPOTHESE Comme hypoth se dans ce travail la revue de la litt rature et l observation faite dans diff rents laboratoires sur le dosage enzymatique nous e
12. m thodes utilis es gt Fr quente pour d celer et corriger les erreurs au fur et mesure s jr 1 2 1 ETALONNAGES ET CONTROLE DE QUALITE 26 32 50 62 1 2 1 1 Etalonnage ou calibrage pour am liorer la qualit des r sultats de laboratoire La fiabilit des r sultats des analyses est influenc e par de nombreux param tres qui doivent tre rigoureusement contr l s Les notices ins r es dans les coffrets de r actifs poss dent une rubrique intitul e en anglais calibration a L talonnage L talonnage tablit la relation entre les valeurs des talons et les r ponses correspondantes indiqu es par l appareil de mesure Il aboutit la courbe d talonnage voir annexe C est le r glage de l appareil position de seuils d termination de facteurs de gains selon la proc dure d crite dans le manuel d utilisation b Calibration proprement dite C est Vanalyse d un chantillon de r f rence dont les valeurs sont connues calibrant et l ajustement des algorithmes de l appareil de mani re obtenir les valeurs sp cifi es Au laboratoire de biochimie clinique le calibrage devrait am liorer la coh rence inter laboratoire des r sultats en corrigeant des erreurs syst matiques li es aux appareils de mesure ou des conditions de mesure temp rature les volumes d chantillons de r actifs la longueur d onde le trajet optique des cuvettes de mesure 50
13. 00 juillet 2005 FLORIAN Horn et al Biochimie humaine Edit Flammarion Medicine science Paris 2005 60 75pp FRAZER CG Analytic goal are applicable to all JIFCC1990 2 84 6 FROMAN B Le manuel qualit Outil strat gique d une d marche qualit Afnor 2 dition 1995 HENRY J La temp rature de mesure enzymatique ou en enzymologie Inf Sci Biol 1990 16 8 7 htt www Afssaps Sant fr htt www Probioqual com IF EN ISO 8402 Management de la qualit et assurance de la qualit Vocabulaire juillet 1995 s Jh 29 30 31 32 33 34 35 36 37 ISO 5725 1 Exactitude des r sultats et m thodes de mesure Principes g n raux et d finitions organisation internationale de la standardisation Gen ve Suisse 1994 p 14 ISO 5725 4 Exactitude des r sultats et m thodes de mesure m thode de base pour estimer la justesse d une m thode d essai organisation internationale de la standardisation Gen ve Suisse 1994 p17 ISO 5725 6 Exactitude des r sultats et m thodes de mesure Application pratique organisation internationale de la standardisation Gen ve Suisse 1994 p 5 7 LESSINGER JM FERARD G FREI J Les calibrations d enzymes Int r ts et conditions d emploi Spectra Biologie 1995 4 40 6 LESSINGER JM FERARD GRAFMEYER D Am lioration de la coh rence des r sultats en enzymologie clinique Etude multi
14. F et al 11 qui ont effectu un contr le de qualit dans les laboratoires de biochimie m dicale Abidjan propos de transaminases et LESSINGER JM et al 33 qui ont montr une am lioration de la u PR coh rence de r sultats en enzymologie clinique concernant les dosages de transaminases et des autres param tres La pr cision est le crit re de fiabilit le plus valu sous le terme de contr le de qualit interne 61 En cela les deux laboratoires n ont pas atteint le seuil maximum de pr cision L exactitude semble quelque peu n glig e par le manque de consensus entre les biologistes pour l adoption de m thodes de r f rence 59 3 33333 45 CONCLUSION GENERALE ET RECOMMANDATIONS a Conclusion Au terme de notre travail port sur l Etude Comparative des Valeurs de Transaminases dos es dans diff rents Laboratoires de Biochimie M dicale de la ville de Kinshasa dont le but consistait de v rifier la conformit de r sultats biochimiques r alis es dans de laboratoires de l h pital Saint Joseph l h pital Sino Congolaise et l h pital de Kimbondo en g n ral mais en se basant sur le dosage de transaminase Apr s notre tude nous avons observ que chaque laboratoire pour le m me chantillon donn un r sultat diff rent des autres D o l importance de la normalisation de m thodes de travail dans les laboratoires en se conformant au standard international en la ma
15. au sens strict du terme mais il doit aussi tre propre que possible et exempt de d tergents produits de nettoyage Les r actifs se conservent plus ou moins longtemps Une utilisation et un entreposage appropri s sont d une tr s grande importance Les enzymes doivent toujours se garder au froid r frig rateur bain de glace etc s jh En r gle g n rale tous les r actifs sous forme s che se conservent bien Les solutions pr par es au laboratoire doivent tre munies d une date de p remption 5 II 4 FACTEURS INFLUEN ANT LES DOSAGES ENZYMATIQUES Les enzymes ont besoins de certaines conditions d environnement pour pouvoir fonctionner 36 Il s agit d abord de la temp rature et du pH La temp rature est l un de facteur les plus importants qui agissent sur les enzymes 25 Chaque enzyme une valeur optimale de ce param tre Il existe une zone limit e de temp rature ou de pH dans laquelle l enzyme travail au mieux Normalement le pH optimal d un enzyme d pend du milieu dans lequel il se trouve 22 46 II 5 SOURCES D ERREUR 63 Diverses sources d erreurs peuvent survenir a diff rentes phases du processus analytique gt A la phase pr analytique le plus souvent en dehors du laboratoire avec par exemple l obtention d un pr l vement inadapt une identification fausse mauvaises conditions de conservation etc gt A la phase analytique dans le laboratoire avec
16. et 15 4 5 7 cart type soit 23 pour le GPT yz J1 Figure 2 Repr sentation des r sultats de dosage des transaminases du laboratoire Saint Joseph par rapport au laboratoire de r f rence Moyenne Ecartype GOT stj GOTRef GPTstj GPTRef Ce graphique montre que la moyenne de GOT pour le laboratoire de r f rence est lev e par rapport la moyenne de GOT pour le laboratoire Saint Joseph et les carts types presque les m mes Tandis que la moyenne et l cart type de GPT pour le laboratoire de Saint Joseph sont lev es par rapport la moyenne et l cart type de GPT pour le laboratoire de r f rence 38 PA Tableau III R sultats de dosage des transaminases du laboratoire Sino Congolaise par rapport au laboratoire de R f rence eor smece Rer Grrsine co 17 7 27 19 8 29 16 9 26 19 0 28 L gende gt GOT Sino Co Glutamate Oxaloac tate Transaminase Sino Congolaise gt GOT R f Glutamate Oxaloac tate Transaminase de R f rence gt GPT Sino Co Glutamate Pyruvate Transaminase Sino Congolaise gt GPT R f Glutamate Pyruvate Transaminase de R f rence Ce tableau montre les r sultats obtenus apr s dosage de transaminases au laboratoire de r f rence pour les m mes chantillons de transaminases dos s au laboratoire Sino Congolaise Sur 16 chantillons analys s le laboratoire de r f rence avait une moyenne de 1
17. facons d appr hender la participation a un contr le de qualit le GBEA exige le contr le de qualit interne et externe 14 1 1 4 1 CONTROLE DE QUALITE INTERNE 12 38 Le GBEA le d finit comme l ensemble des proc dures mises en uvre dans un laboratoire en vue de permettre un contr le de qualit des analyses au fur et mesure de l ex cution de ces analyses 48 50 Cela signifie que chaque laboratoire a un programme de v rification de la qualit de ses propres tests 7 Il est organis par le biologiste qualifi charg de l assurance qualit Le GBEA stipule le CQI est indispensable pour permettre de d celer les anomalies et les erreurs pour y rem dier afin d atteindre la qualit comporte toutes les mesures destin es v rifier les diff rentes phases de l activit permettant l obtention des jr r sultats et notamment l analyse d chantillons de contr le effectu dans les m mes conditions que celles appliqu es aux chantillons biologiques 6 51 s agit donc d un contr le permanent et consiste a introduire dans chaque s rie d analyse un ou plusieurs chantillons de concentration connue la valeur trouv e est confront e la valeur cible et des limites acceptables ce qui permet au biologiste et au technicien de valider ou de rejeter en temps r el la s rie d analyse 9 21 38 1 1 4 2 CONTROLE DE QUALITE EXTERNE 5 Le C
18. finit comme la qualit de l accord entre l estimation de la valeur mesur e et la valeur vrai en dehors des erreurs al atoires 17 29 31 En d autre terme c est la correspondance troite entre la valeur obtenue par la m thode de mesure utilis e et la valeur r elle obtenue par une m thode ou un mat riel de r f rence 11 30 Elle se calcule par la diff rence entre la valeur th orique ou valeur vrai C et la valeur produite x par le technicien 44 Plus cette diff rence est grande plus la mesure est inexacte Le manque d exactitude entraine une erreur syst matique que l on trouve a chaque dosage 51 Ces erreurs peuvent tre li es A la m thode utilis e inad quate Au produits produit inad quate r actif trouble gt Aux instruments d fectueux les volumes pr lev s inexacts mat riel sale 14 Jo I 1 5 2 LA PRECISION REPRODUCTIBILITE C est l accord dans une zone d finie de valeurs mesurer entre des mesures r p t es effectu es sur le m me chantillon dans de conditions constantes et d termin es 51 C est la limitation de dispersion de r sultats fournis par des mesures r p titives sur le m me chantillon ou des plusieurs chantillons La pr cision permet d appr cier la dispersion au tour de la moyenne des r sultats obtenus apr s le dosage fractionn d un chantillon mettant ainsi en vidence les erreurs fortuites ou al atoires Elle est a
19. rieur des Techniques M dicales ISTM de Kinshasa mes pens es vont droit a Dieu tout puissant pour sa grace infinie dont nous avons t combl s tout au long de notre parcours En effet nos plus vifs remerciements s adressent d abord au Professeur MANUELE KANYONGA qui en d pit de ses multiples occupations s est impos le sacrifice d assurer la direction de ce m moire pour son encadrement et ses orientations qui nous ont permis de r aliser ce travail Nous tenons a remercier profond ment et sinc rement toutes les autorit s acad miques et administratives les corps enseignants professeurs chefs de travaux et assistants de VISTM Kinshasa et ceux de la section des techniques de laboratoire en particulier pour leurs enseignements de qualit qui font de nous aujourd hui Biologiste m dical malgr les difficult s remarquables que connait notre pays Nous pensons galement aux Chefs de Travaux LUFULWABO KASEREKA KITENGE MATEFA Assistante Th r se MUJANYI pour leurs conseils Nos remerciements s adressent galement a tous les personnels des h pitaux SINO CONGOLAISE SAINT JOSEPH et KIMBONDO pour leur contribution a la r alisation de ce travail v ji Nous restons redevables la famille de Monsieur JUSTIN LUWEPE et Madame Monique MATUNDU pour tant des sacrifices et leur amour incontournable envers nous Nous remercions en fin tous les amis et coll gues de la promotion partic
20. sultats du laboratoire n 1 par rapport au laboratoire de r f rence Lab 3 LABORATOIRE n 1 LABORATOIRE n 3 N Saint Joseph R f rence Kimbondo GOT GPT GOT GPT 1 16 23 26 15 2 21 22 13 16 3 15 17 20 7 4 17 14 17 14 5 15 14 15 14 6 17 15 23 16 7 17 17 21 7 8 17 16 20 13 9 16 16 17 19 10 15 8 26 13 11 15 12 22 10 12 15 14 18 27 13 16 22 30 12 14 20 21 22 15 15 17 15 14 20 Moyenne 15 5 15 4 20 3 14 5 Ecart Type 4 5 5 7 4 8 5 0 a J1 Annexe 6 Tableau III R sultats du laboratoire n 2 par rapport au laboratoire de r f rence Labo n 3 LABORATOIRE n 2 LABORATOIRE n 3 N Sino congolaise R f rence Kimbondo GOT GPT GOT GPT 1 15 13 15 13 2 22 17 22 17 3 14 16 21 15 4 15 15 16 18 5 17 16 18 21 6 26 17 30 32 7 17 20 17 20 8 18 23 20 23 9 15 16 23 24 10 22 18 22 17 11 16 17 16 17 12 15 21 10 12 13 15 16 32 28 14 27 12 27 12 15 14 16 17 18 16 15 17 31 19 Moyenne 17 7 16 9 19 8 19 0 Ecart type 4 2 2 7 5 7 5 9 jr Annexe 5 Tableau IV R sultats de dosages de transaminases du laboratoire Sino Congolaise saint Joseph par rapport au laboratoire de r f rence LABORATOIRE n 1 LABORATOIRE n 3 LABORATOIRE n 2 N Saint Joseph R f rence K
21. 9 8 5 7 cart type soit 29 pour le GOT et de 19 0 5 9 cart type soit 28 pour le GPT alors que le laboratoire Sino Congolaise avait une moyenne de 17 7 4 2 cart type soit 27 pour le GOT et de 16 9 2 7 cart type soit 26 pour le GPT s J Figure 3 Repr sentation des r sultats de dosage des transaminases du laboratoire Sino Congolaise par rapport au laboratoire de R f rence Moyenne Ecart type GOT Sino Co GOT R f GPT Sino Co GPT R f Ce graphique montre que la moyenne et l cart type de GOT pour le laboratoire de r f rence sont lev s par rapport la moyenne et l cart type de GOT pour le laboratoire Sino Congolaise et la moyenne de GPT pour le laboratoire de r f rence est inf rieur et son cart type sup rieur par rapport la moyenne et l cart type de GPT pour le laboratoire Sino Congolaise qui est trop r duit vo P _ Tableau IV R sultats de dosage des transaminases du laboratoire Sino Congolaise Saint joseph par rapport au laboratoire r f rence GOT GPT Sino Co Sino Co GOTR f GPT R f GOTst J GPTst J L gende gt GOT Sino Co Glutamate Oxaloac tate Transaminase de Sino Congolaise GPT Sino Co Glutamate Pyruvate Transaminase de Sino Congolaise GOT R f Glutamate Oxaloac tate Transaminase de R f rence GPT R f Glutamate Pyruvate Transaminase de R f rence GOT st J Glutamate oxaloac tate transaminase de Saint
22. EPIGRAPHE La science a quelque chose de fascinant Elle permet de tirer une masse de conclusions partir de simples hypoth ses labor es au d part des faits r els minimes Mark Twain fi ii DEDICACE A vous tr s chers parents MAYARA LUWEPE L onard et MPAKU Georgette pour nous avoir donn l ducation de base et nous avoir lev dans la patience la pers v rance et dans l endurance Que votre esprit de sacrifice soit r compens d s la r ception du pr sent travail A vous mes fr res et s urs Justin LUWEPE Val rie SHONO Lucie NDOMWENYI Jean IBANA Armel MAYARA et Mimi MINGUNA mon amour pour vous n a pas de limites pour les forces puis es en visant mon bien tre pour tant de sacrifices et soutiens consentis pour moi mat riellement moralement et financi rement A vous mes oncles et tantes pour vos sacrifices pour moi A vous mes neveux ni ces et cousins cousines pour votre amour qui caract rise notre fraternit inoubliable A vous regrett grand p re Abb F Jovite Mapwar envers qui nous n avons jamais cess de penser que votre me repose en paix A vous tous je d die ce modeste travail qui est le couronnement des efforts que nous avons conjugu s le fruit de la pers v rance l endurance et de tout ce que nous avons sem Michel MAYEMBE MAYARA AA i Di REMERCIEMENTS Au terme de deux ann es de dur labeur de notre cycle de licence a l Institut Sup
23. IE EXPERIMENTALE CHAPITRE MATERIEL ET METHODES 29 Mt MATERIEL sal sede disa eski neg sia dey dot a ane dan dose ea ed ae 29 one haga ad te PR 29 1 2 PERIODE Di ETUDE issued dent sa van pak 29 1 3 MATERIEL A REA A EAA Aa AASTAS 29 WWD METHODES EAV ERa EEE SG Sa an A ad ag Taa 29 M21 ECHANTILLONNAGE E ciir aa rer koun ak ke sa ak ieee ate aa kisa se elas SEa agente 29 1 2 3 METHODES STATISTIQUES ss 30 T2 PROTOCOLE AR e ayo kos sa ren en ten sis kas 30 III 2 5 LES PARAMETRES DOSES 31 1 des eee a A AT ae sat 31 2 Mode 1 tia Gua nd pans 31 Af a jr 3 R s ltats oi koy ata ea lake aa takse ke ES eka Ans na 32 4 Int r t Fieve eg ta ta Fo eke eon ed kes ke ba ea ke ea KA es 32 5 Valeurs de Tererence sue ie kas a dv kof w te Pew el en pa tte 32 CHAPITRE IV RESULTATS ET DISCUSSIONS 33 V1 RESULTA Sa ESS ake aaa RES pe kot DA RESE 33 5 DISCUSSION ei ta bas an pase kosa a ka oke Mee Oe kaa pese ke id peta re 43 CONCLUSION GENERALE ET RECOMMANDATIONS 45 a CONCHASION inept optimus stance E 45 D ARECOMIMANC ATOM eee ae iced sas ae A A eee 46 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
24. Joseph VV VV WV GPT st J Glutamate pyruvate transaminase de Saint joseph Ce tableau pr sente les r sultats de la moyenne et des carts types obtenus dans les deux laboratoires et au laboratoire de r f rence Il stipule que gt Au laboratoire n 1 Saint Joseph la moyenne de GOT tait de 15 5 4 5 cart type et 15 4 5 7 cart type pour le GPT 4 a jr gt Au laboratoire n 2 Sino Congolaise le GOT avait une moyenne de 17 7 et 16 9 pour le GPT avec un cart type de 4 2 pour le GOT et 2 7 pour le gt Au laboratoire n 3 R f rence de Kimbondo la moyenne pour le GOT tait de 20 3 et 14 5 pour le GPT avec l cart type de 4 8 pour le GOT et 5 pour le GPT 42 Figure 4 Repr sentation des r sultats de dosage des transaminases du laboratoire Sino Congolaise Saint joseph par rapport au laboratoire de r f rence Moyenne Ecartype GOT Sino GPT Sino GOTRef GPTRef GOT stj GPTstj Ce graphique montre que la moyenne de GOT du laboratoire de r f rence est tr s lev par rapport la moyenne de GOT de deux laboratoires et son cart type est presque le m me avec le laboratoire Saint Joseph pendant que la moyenne de GPT pour le laboratoire de r f rence est inf rieur par rapport la moyenne de GPT de deux laboratoires et son cart type est presque le m me avec le laboratoire Saint Joseph et lev
25. NCANT LES DOSAGES ENZYMATIQUES ILS SOURCES D ERREUR 6 PRECAUTIONS A PRENDRE POUR REALISER LE DOSAGE ENZYMATIQUE Av ji DEUXIEME PARTIE PARTIE EXPERIMENTALE CHAPITRE MATERIELS ET METHODES IL 1 MATERIEL 2 METHODES CHAPITRE IV RESULTATS ET DISCUSSION CONCLUSION ET SUGGESTIONS REFFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ANNEXE TABLE DE MATIERES vi J LISTE DES ABREVIATIONS AFNOR Association Fran aise de Normalisation ASAT Aspartate Aminotransf rase ALAT Alanine Aminotransf rase AFSSAPS Agence Fran aise de S curit Sanitaire des Produits de Sant AQ Assurance Qualit AQI Assurance Qualit Interne AQE Assurance Qualit Externe AQEC Assurance de Qualit en Enzymologie Clinique o nan amp D BCRUE Bureau Communautaire de R f rence de l Union Europ enne BPL Bonnes Pratiques de Laboratoire CNQ Contr le National de Qualit CV Coefficient de Variation Contr le de Qualit Externe Contr le de Qualit Interne pd nd nt en bn OR UO N EEQ Evaluation Externe de Qualit N EIQ Evaluation Interne de Qualit FICC F d ration Internationale de Chimie Clinique GBEA Guide de Bonne Ex cution des Analyses p _ o GOT Glutamate Oxaloac tate Transaminase D Glutamate Pyruvate Transaminase N ren HAS Ha
26. cin tique concernant les activit s gammaglutamyltransf rase phosphatase alcaline amylase et transaminase Ann Biol Clin 1995 53 147 54 LEVEY S JENNINGS E R The use of control charts in clinical laboratory Amer J Clin Pathol 1967 47 329 336 LOGAN J E ALLAN Control serum preparations Clin Chem 1968 14 347 448 MAITRE A Temp rature de mesure et facteurs de conversion de temp rature en enzymologie Inf Sci Biol 1990 16 9 10 MARTIN A Le contr le de qualit Introduction au laboratoire de biochimie m dicale Edit Ellips 1995 18 25pp 2 jr 38 MASSEYEFF R Plaidoyer pour la modernisation du contr le interne de la 39 40 41 42 43 44 45 46 qualit Spectra Biologie 2003 22n 127 28 33 MAX FEINBRG La validation des m thodes d analyses une approche chiom trique de l assurance qualit au laboratoire dit Masson Paris 1996 15 7 8 MONTAN AGNERY I FURARD Biochimie Clinique Tome I NF X03 111 NF X06 049 Paris S MEP 1990 259p Protocole d valuation intra laboratoire d une m thode alternative qualitative par rapport a une m thode de r f rence Afnor Paris la d fense France 1995 Laboratoire d analyses de biologie m dicale Exigences particuli res concernant la qualit et comp tence Recommandations pour l organisation des tests d aptitudes des laboratoires Afnor Paris la d fe
27. cisions et une meilleure prise en charge des patients 12 Ce faisant la qualit de ces r sultats a toujours constitu une pr occupation majeure pour le biologiste et personnel de sant Ils doivent avoir le souci permanent de garantir la fiabilit des r sultats conform ment a ses obligations vis a vis de ses confr res et ses patients L enjeu de recherche de la qualit totale par le laboratoire est donc la fid lisation des patients et une bonne image de marque Cette qualit r sulte de l ad quation entre les moyens mis en oeuvre par le laboratoire dans le processus op ratoire et les informations attendues par le prescripteur Les r sultats des dosages des enzymes repr sentent un outil rapide automatisable et peu on reux pour l aide au diagnostic et au suivi de pathologies vari es Cela explique que les mesures d activit catalytique des enzymes sont tr s employ es en biologie clinique 52 Cependant les r sultats obtenus sont hautement d pendants des conditions de mesure AMA a jr c est a dire des m thodes choisies par les biologistes et des conditions locales de leur r alisation 30 31 A cet gard le contr le de qualit intra laboratoire et interlaboratoire est un outil m thodologique de contr le de qualit r gulier des performances analytiques 61 Cette situation engage la responsabilit du biologiste vis vis du geste analytique et l am ne d avantage a la dext rit et la vigilance
28. de nombreux biologistes consid rent leur production en biochimie clinique mais l absence d un contr le de qualit de r sultats de laboratoire m dical et d une politique r glementaire dans notre pays font que ces derniers sont fournis dans des conditions d favorables Diverses m thodes recommand es ont t labor es et sont d application dans plusieurs pays 3 12 24 Les recommandations des diff rentes soci t s savantes la Soci t Fran aise de Biologie Clinique la F d ration Internationale de Chimie Clinique la Haute Autorit de Sant le Laboratoire National d Essai groupement pour l Evaluation des Dispositifs M dicaux Agence Fran aise de S curit Sanitaire des Produits de Sant et des institutions impliqu es dans la qualit ont permis d liminer des m thodes pr sentant des insuffisances graves 17 19 en m me temps de nombreux progr s techniques ji concernant l appareillage et l essor de l industrie du r actif ont permis d am liorer la pr cision des mesures et surtout ont abouti au d veloppement de nouvelles m thodes et nouveaux syst mes analytiques 40 58 Cependant la R publique D mocratique du Congo RDC notre pays ne fait pas exception a ces r gles L valuation de qualit est encore loin de jouer convenablement son r le C est pourquoi le biologiste en tant que praticien de sant a l obligation de r sultats Et ces r sultats contribuent a la prise de d
29. i cette enzyme est pr sente en grande quantit dans le sang cela permet le diagnostic d une l sion h patique gt cr atine kinase ASAT ou GOT aspartate aminotransf rase ou Glutamate oxaloac tate transaminase ces deux enzymes sont retrouv dans deux organes foie et muscle cardiaque Les concentrations lev es dans le s rum Permettent le diagnostic de la maladie du foie et un infarctus du myocarde 22 II 1 4 INDICATION CLINIQUE Les enzymes sont utiles pour le diagnostic comme marqueurs de certaines l sions pathologiques suite aux dommages cellulaires provoqu e par des infections virales ou bact riennes 49 Les enzymes en biologie clinique interviennent a deux chelons gt Comme r actifs elles permettent de doser tr s sp cifiquement les substrats correspondants gt Comme param tres dont les variations des activit s plasmatiques font d elles des excellents indicateurs des l sions tissulaires Elles sont pour ce fait des pr cieux auxiliaires du diagnostic pronostic de la surveillance d volution et d efficacit th rapeutique en clinique 22 jr 1 5 IMPORTANCE DES PARAMETRES BIOLOGIQUE EN CLINIQUE Devant le r sultat d un param tre biochimique on doit se poser les questions suivantes 63 gt Est il normal gt Est il significativement diff rent des r sultats pr c dents gt Est il compatible avec les donn es cliniques Lorsqu on consid re u
30. ientifique fran aise 2001 p 181 184 62 VASSAULT A GRAFMEYER D GRAVE JR Anales de biologie m dicale Sp cification et normes d acceptabilit l usage de la validation de techniques Ann Biol Clin 1999 57 685 95 63 WILLIAM J MARSHALL STEPHEN K BANGERT Biochimie m dicale physiopathologie et diagnostic 2005 p3 5 8 55 64 WESTEGARD J O BARRY P L HUNT M R A multirole sheward chart for quality control in clinical chemistry Clinical chemistry 1981 27 433 501 65 WWW multiqc com s Jh ANNEXES Annexe 1 Composition de r actifs de dosages utilis s a R actif 1 Substrat TGO ASAT constitu de gt Tampon phosphate pH7 5 85mmol 1 gt Aspartate phosphate 200mmol 1 gt 1 2mmol 1 b R actif 2 Substrat TGP ALAT constitu de gt Tampon phosphate ph 7 5 95mmol 1 gt Alanne Stein nes 200mmol 1 gt 1 1 2mmol 1 c R actif 3 2 4dinitroph nylhydrazine r actif de coloration d R actif 4 Solution talon NaOH OMAN aparece unes 16g 1 s jr Annexe 2 Appareils Mat riels et r actifs utilis s Spectrophotom tres Tubes essai Portoir chronom tre Bain mari M langeur mixeur Micropipettes de 50 100ul SOOul et 1000u1 Pipette de 10m1 Embouts
31. ilis e dans les diff rents laboratoires tait la m thode enzymatique III 2 4 LES PARAMETRES DOSES Les parametres de dosages sont TGO ASAT et TGP ALAT 1 Principe La d termination colorim trique de l activit TGO ou TGP est bas selon les r actions suivantes ASAT ou ASAT Aspartate a c toglutarate gt Glutamate oxaloac tate TGP ou ALAT Alanine a c toglutarate iGlutamate pyruvate Le pyruvate ou l oxaloac tate form s sont dos s sous formes de leurs d riv es 2 4 dinitroph nylhydrazones 2 Mode op ratoire Pour le dosage proprement dite nous avons proc d comme suit gt La longueur d onde 505 nm gt Z ro de l appareil eau distill e gt Pour chaque s rum pr parer les tubes suivants z2 jr TGO ASAT TGP ALAT R actif 1 1000 ul R actif 2 1000 ul Incuber 5 minutes 37 C au bain mari S rum 200ul 200ul M langer et mettre Exactement Exactement 30 min lheure 37 C 60 minutes R actif 3 1000ul 1000ul M langer laisser incuber 20 min la temp rature ambiante NaOH 0 4N 10ml 10ml M langer lire apr s 5 minutes au spectrophotom tre 3 R sultats Les r sultats sont d termin s partir de la courbe d talonnage le nombre d unit s de TGO et TGP par UI 1 voir annexe 4 Int r t clinique Diagnostic et s
32. imbondo Sino Congolaise GOT GPT GOTs1 GOTsino GPTstj GPTsino GOT GPT 1 16 23 26 15 15 13 15 13 2 21 22 13 22 16 17 22 17 3 15 17 20 21 7 15 14 16 4 17 14 17 16 14 18 15 15 5 15 14 15 18 14 21 17 16 6 17 15 23 30 16 32 26 17 7 17 17 21 17 7 20 17 20 8 17 16 20 20 13 23 18 23 9 16 16 17 22 19 24 15 16 10 15 8 26 23 13 17 22 18 11 15 12 22 16 10 17 16 17 12 15 14 18 10 27 10 15 21 13 16 22 30 32 12 28 15 16 14 20 21 22 15 15 12 27 12 15 17 15 14 20 20 18 14 16 16 31 15 15 17 Moyenne 15 5 15 4 20 3 19 8 14 5 19 0 17 7 16 9 Ecart type 4 5 5 7 4 8 5 7 5 0 5 9 4 2 2 7 s ji TABLE DE MATIERES EPIGRAPHE a aa a aada date dega eda i DEDICACE he ke dents aa oi A a ues ii REMERCIEMENTS E dan aE a ar iii PLAN DU TRAVAIL deeds us nitrate ent TEETAN beatae vas LISTE DES ABREVIATIONS INTRODUCTION GENERALE oti on kil n te pa ducati ge A en dds heen 1 I PROBLEMATIQUE can iene eae Dy e kosyon tite eee 1 2 HYPOTHESE Patate vwe simaye 5 3 OBJECTIF DU TRAVATE ar sete cube ein satis cal es E ae vo el depa net nt z 5 4 INTERET DU SUJET iss tee keksyon kila ei ge ee AR Meee dee aie ct 6 DELIMITATION DU SUJE Tiree re mayi es is ease Lk eh ee en te 6 6 SUBDIVISION DU TRAVAI D
33. ique duquel le dosage est effectu II 2 2 METHODE CHIMIQUE Cette m thode la plus ancienne n est pas surtout r aliser actuellement Les r actifs sont pr sent s sous forme brute poudre liquide concentr s et doivent tre pr par Cette derni re pr sente tout inconv nient d tre sujette de nombreuses interf rences Selon le principe de la m thode elle consiste comprendre le principe chimique conduisant au r sultat final II 3 PRINCIPES GENERAUX DE DOSAGE ENZYMATIQUES ET QUALITE 60 II 3 1 pr l vement L acte de pr lever l chantillon inaugure l acte m dicale biochimique important qui se poursuit pendant le d lai coul jusqu l analyse proprement dite 63 Toute erreur survenu ce 2 ri stade compromet sans appel le r sultat final quelque soit le soin apport l ex cution de l analyse 13 II 3 2 Conditions de pr l vement Pour r aliser un pr l vement de bonne qualit il doit tre adapt l analyse demand e La premi re condition la quelle joindre d autres sp cifiques de param tre doser c est standardiser le mode de pr l vement matin heure de pr l vement jeun le sujet l tat de repos tendu et d tendu tout en vitant l effort physique et les motions Ainsi on limite les facteurs de variation nycth m rale 22 63 II 3 3 Modalit de pr l vement et conservation des chantillons 1 Modalit de pr levement
34. n examen biochimique il est important de savoir quelle est sa fiabilit et dans quelle mesure il contribue a la d cision clinique Ainsi les biologistes et les techniciens doivent s assurer autant que possible que les r sultats sont exacts et pr cis et que le clinicien sera satisfait de la valeur du bilan dans le contexte o il a t prescrit 63 2 METHODES DE DOSAGE DES ENZYMES EN CLINIQUE Les dosages enzymatiques dans le s rum doivent r pondre plusieurs buts Appr cier l tendue et la gravit de l atteinte tissulaire ainsi que son volution et la nature de l organe l s 14 49 Il existe deux principales m thodes de dosage II 2 1 METHODE ENZYMATIQUE Les m thodes enzymatiques sont devenues une r f rence dans des nombreux domaines jusqu tre incluses dans les recommandations officielles et les textes l gaux mis par diff rentes organisations internationales et nationales 19 47 52 z Pe Les r actifs sont pr sent s sous forme de kits de dosage enzymatique et pr ts l emploi Ils sont plus rapides et plus simple r aliser que les m thodes chimiques Les m thodes enzymatiques offrent d excellentes performances en termes de sensibilit sp cificit reproductibilit 11 Cette m thode consiste a observer ou a respecter les recommandations du fabricant et comprendre le principe du dosage conduisant au r sultat final concernant la nature du produit biolog
35. nse France 1993 IF XO6 501 Introduction la Pratique et la fiabilit au LABM Editions FM Bio 2007 Paris 304pp NYSSEN M Contr le statistique de la qualit utilis dans les essais d aptitude par comparaisons _interlaboratoires Journ es nationales de biologie Ann Biol Clin 1999 43 51 p O M S Organisation Mondiale de la Sant Bact riologie clinique Techniques de base de laboratoire 1994 Gen ve 8 2 3 pp P BOULANGER J POLONOVSKI et al Enzymes et m tabolismes Fascicule II 2 dition Masson et Cie Paris 1973 1 2 35 5 47 PANTEGHINI M CERIOTTI F et al Establishing a reference system in clinical enzymology Clin Chem Lab Med 2001 39 795 800 48 PERRIN A DUCHASSAING D Assurance de la qualit en biologie m dicale Structure documentaire et valuation Document r alis par le groupe qualit de coll ge national de biochimie des h pitaux 1998 12 17 18pp 49 PETER N CAMPBELL ANTHONY D SMITH Biochimie illustr e ditions Maloine 2002 Paris 143 143 144 50 PIERRE F BARYTHOF F ARNOLD J Assurance qualit ou contr le de qualit Les enseignements d un circuit d inter comparaison Ann biol Clin 1992 50 259 262 51 S DRZEVIECK RENARD et M Genesse La qualit en biochimie pr cision et exactitude Annales de biologie clinique 2006 1 2 3 pp 52 SCHIELLE F FERARD G Harmonisation de
36. ontr le de Qualit Externe consiste par le fait que les r sultats du laboratoire sont contr l s par un organisme ext rieur Ce contr le r trospectif permet une confrontation inter laboratoires en vue d am liorer la qualit du travail de l ensemble des participants 17 Dans certains pays cette op ration est obligatoirement et indispensable pour obtenir la licence d exercice 62 Bien que ponctuel il est un indicateur int ressant celui ci indique la fr quence des param tres contr l s les techniques les plus utilis es ainsi que leur performance les unes par rapport aux autres 48 50 L organisme ext rieur adresse les m mes chantillons aux diff rents laboratoires collectionne les r sultats obtenus les analyses et les transmet avec commentaires aux laboratoires participants L valuation externe de la qualit comprend gt La surveillance p riodique de la qualit des tests s jr gt La v rification ponctuelle des tests r alis s et parfois les techniques utilis es 1 1 5 CRITERES CONTRIBUANT LA FIABILITE DES RESULTATS AU LABORATOIRE 43 La fiabilit analytique d une m thode est une qualit globale qui r unit des crit res vari s dont les manquements ou d fauts conduisent des erreurs diverses Les crit res de fiabilit d une m thode d analyse recouvrent les performances fondamentales d une m thode 1 1 5 1 L EXACTITUDE OU JUSTESSE L exactitude se d
37. par exemple une erreur humaine ou analytique gt A la phase post analytique o le r sultat produit est correct mais mal report dans le dossier du patient par exemple cause d une erreur de transcription La plupart des erreurs qui surviennent plus forte raison dans les laboratoires s rieux sont d tect es par les z PR proc dures de contr le de qualit gr ce aux logiciels de gestion des r sultats ou la vigilance des biologistes validant les bilans 61 II 6 PRECAUTIONS A PRENDRE POUR REALISER LE DOSAGE ENZYMATIQUE gt Les pr l vements destin s a l analyse doivent tre r alis et transport s dans des conditions appropri es gt Ne pas travailler sur un chantillon gard plus de 48 heures 2 8 C risque de d naturation de constituants chimiques gt Ne pas travailler sur du s rum h molys gt Ne pas utiliser le r actifs s il est trouble gt V rifier la date de p remption de r actifs indiqu e sur l tiquette avant leur utilisation gt Ne pas utiliser le mat riel de mauvaise qualit gt Ne pas travailler sur un chantillon recongel Ces crit res d crits dans les chapitres pr c dents permettent chaque laboratoire de juger sur base de crit res s rs s il remplit ou non les conditions n cessaires de dosage de transaminases Ces crit res ne s adressent donc pas uniquement aux personnes nocives en la mati re Ils apportent aux analyste
38. ploi de bonnes techniques et de bonnes notions analytiques l assurance qualit au laboratoire est indispensable l tablissement de confiance dans la prestation de laboratoire patient biologiste cliniciens 7 L assurance qualit exig e par le GBEA en souligne l obligation D une fa on g n rale le contr le de qualit n est pas une pratique ennuyeuse il fait appel l ing niosit de l analyste dans la mesure o celui ci interpr te correctement des r sultats fournis par le laboratoire 10 13 Cest une occasion de perfectionnement qui bien accept e devient indispensable et am liore consid rablement le travail de tout le personnel du laboratoire Il est donc n cessaire de mieux valider ces m thodes de dosages enzymatiques de mani re mieux maitriser la justesse Car la reproductibilit est essentielle pour le suivi de patients gr ce des d terminations r alis es dans le m me laboratoire de biologie m dicale la justesse est n cessaire pour interpr ter des r sultats de LABM en termes diagnostiques partir d observations pid miologiques ou r alis es par d autres laboratoires de biologie m dicale C est dans ce cadre que nous avons men cette tude sur la qualit de dosages enzymatiques de param tres contr l s caract risant ces r sultats Les lecteurs trouveront travers de cette tude notre contribution a l am lioration de la qualit des r sultats des 19
39. ppr ci e par le coefficient de variation CV CV x100 m m moyenne S cart type Le coefficient de variation CV s exprime en pourcentage Plus le CV est grand moins le dosage est pr cis Pour tre pr cis le dosage doit avoir un lt 5 3 12 Les erreurs sont dues a un ensemble des causes non contr l s agit donc d erreurs qui se produisent accidentellement Ces erreurs sont vitables si elles sont d cel es temps par la qualification r guli re des appareils 51 ii I 1 6 FACTEURS INFLUENCANT LA QUALITE DE RESULTATS DE LABORATOIRE DE BIOCHIMIE 2 24 56 Ces facteurs sont d finit par le diagramme d ISHIKAWA qui prend en compte les crit res des 5M gt Milieu locaux environnement gt Mat riel quipement r actifs gt Mati re chantillon gt Main d uvre personnel gt Mode op ratoire m thodes d analyses 1 2 LA QUALITE EN BIOCHIMIE 7 12 37 Le contr le de qualit en biochimie est la somme de toutes les activit s dans lesquelles le laboratoire est engag pour faire en sorte que les r sultats soient de bonne qualit 28 53 Il doit tre gt Exhaustive afin de couvrir chaque tape du cycle depuis le pr l vement des chantillons jusqu l envoi du rapport au prescripteur gt Rationnelle pour se concentrer sur les tapes les plus importantes de l analyse gt R guli re afin d assurer une v rification continue des
40. rn es nationales de biologie JNB pour pr senter les r sultats de leurs r flexions et sensibiliser l ensemble des biologistes l int r t de cette recherche gt D autre part a la constatation que pour tre pleinement efficaces les efforts d velopp s dans ce domaine devaient d passer l chelle d un laboratoire ou d un petit nombre de laboratoires pour regrouper de nombreux laboratoires g ographiquement proches Le programme d assurance qualit constitue un moyen efficace pour maintenir la qualit des r sultats de diagnostic dans le monde entier 9 48 53 Il a pour r le de v rifier r guli rement le niveau de la qualit des r sultats fournis par un service AA J laboratoire On estime g n ralement que la qualit d une preuve de laboratoire est synonyme de sa fiabilit 4 45 Cependant au laboratoire de biologie m dicale la qualit se situe au del de la simple perfection technique et prend en compte la rapidit le cout et l int r t clinique de l preuve L organisation mondiale de la sant O M S a tabli des plans internationaux d valuation de la qualit dans le laboratoire de biologie m dicale 45 Ces derniers peuvent jouer un r le capital dans la mise en place de plans nationaux d valuation de qualit a tous les niveaux Le contr le de qualit exig e par le GBEA a officialis et confirm cette d marche 2 13 24 C est donc avec un certain optimisme que
41. rs domaines d application il existe ce jour plusieurs r f rentiels ou r glementaires qui servent sp cifiquement organiser l assurance de la qualit au laboratoire 39 gt Les Bonnes pratiques de laboratoire BPL gt L accr ditation qui suit les principes des normes EN 45000 de la commission europ enne de normalisation CEN 1 21 gt Le Guide de Bonne Ex cution des Analyses GBEA gt La certification qui s appuie sur les normes ISO 9000 1 1 2 IMPORTANCE DU CONTROLE DE QUALITE 4 Le contr le de qualit a pour but de s assurer de la fiabilit justesse des valeurs des r sultats des analyses ex cut es par les laboratoires qui est soumis compte tenu des techniques des r actifs et du mat riel employ en les comparant le cas ch ant avec les r sultats obtenus par l ensemble des laboratoires habilit s ex cuter ces m mes cat gories d analyses u jr I 1 3 LE MANAGEMENT DE LA QUALITE Le management de la qualit est l ensemble des activit s coordonn es permettant d orienter et de contr ler un organisme en mati re de qualit 1 28 1 1 4 VALIDATION D UNE METHODE ANALYTIQUE 6 58 59 La validation analytique doit tre soumise a des proc dures pr cises crites Elle ne doit tre effectu e qu apr s avoir v rifi les indicateurs de bon fonctionnement des instruments et pris connaissance des r sultats du contr le de qualit Il existe deux
42. s d j exp riment s un instrument dont ils peuvent se servir p riodiquement pour un contr le de qualit objectif DEUXIEUME PARTIE PARTIE EXPERIMENTALE 2 _ CHAPITRE III MATERIEL ET METHODES 1 MATERIEL 1 1 SITE D ETUDE Notre tude a t r alis e dans les laboratoires de biochimie clinique sur trois sites diff rents a savoir le laboratoire de l h pital saint Joseph le laboratoire de l h pital l Amiti Sino Congolaise ou nous avons effectu les dosages de transaminases et le laboratoire de l hopital de Kimbondo pour la r alisation de l valuation externe de la qualit des r sultats dans la ville de Kinshasa en R publique D mocratique du Congo III 1 2 PERIODE D ETUDE Cette tude a t effectu e sur une p riode de quatre vingt dix 90 jours allant du 23 mars 2012 au 23 juin 2012 III 1 3 MATERIEL BIOLOGIQUE Le mat riel biologique de notre tude est constitu des chantillons de s rum provenant de patients pr lev s pour un bilan h patique dans le cadre d un suivi d h patite recueillis dans deux sites diff rents notamment le laboratoire de Ph pital saint Joseph et le laboratoire de l h pital l Amiti Sino Congolaise III 2 METHODES 2 1 ECHANTILLONNAGE Notre chantillon est constitu de 31 chantillons de s rums destin au dosage de transaminase en raison de 15 16 chantillons de s rums pour chaque laboratoire respectivement
43. s pratiques Application la mesure d activit s enzymatiques et pr vention th rapeutique Annales de biologie clinique 2001 59 291 7 53 SIMONTNET C FARARD G Assurance qualit en biologie et gestion de la documentation Option Bio 1995 Suppl 154 2 6 54 SZYMANOWICZ A et al Optimisation de la gestion du contr le de qualit Partie I les r sultats Spectra Biologie 2005 n 147 40 48 54 Je n 55 SZYMANOWICZ A BOURGNE M O DENIS I Optimisation de la gestion du contr le de qualit Partie II approche m thodologique Les r sultats Spectra Biologie 2005 24n 147 40 8 56 VALDIGUIE P et al Contr le de la qualit des r sultats au laboratoire de biochimie clinique Rev Med Toulouse 1998 829 842 57 VALDIGUIE P FARGE F SOLERA M L Contr le de la qualit des r sultats issu d un automate de biochimie haute performance Rev Med Toulouse 2001 830 855 58 VASSAULT A ALT Protocole de validation des techniques Commission SFBC Ann Biol Clin 1986 44 679 745 59 VASSAULT A BALLY M M Validation des techniques SFBC cahier de formation biochimie 2010 Tome I 17 36 60 VASSAULT A BAUD M CASTANIER M Recommandations pour comparaison de techniques Document F stade 3 Annales de biologie clinique 1992 50 727 30 61 VASSAULT A DUMONT G LABBED D Contr le de qualit intra laboratoire Proc dure g n rale Expansion sc
44. ses de biologie m dicale Edition 2006 143 147 5 AFSSAPS Annales du contr le national de qualit 1999 18 105 39 6 ANNE VALSSAULT FEUILLU A Le contr le de qualit dans le domaine du dosage des m dicaments Tome 2000 p11 7 BAKO M Evaluation de la qualit des prestations du laboratoire de biochimie m dicale du CHU de Cocody M moire INFAS 2001 173p 8 BARNETH R N Clinical laboratory statistics Little Brown edit 1971 70 75pp 9 BAWA Contribution la mise en place d un programme de contr le de qualit interne dans le laboratoire de biologie clinique de CHU de Yopougon M moire INFAS 2003 66p 10 BERNARD S Mise en uvre d un contr le de qualit au laboratoire clinique Edit Masson biochimie clinique 1995 75 76 s jr 11 BIENVENU J DOCHE C LATER R Am lioration apport es par le mat riau de r f rence CRM 470 dans la standardisation du dosage des prot ines s riques Donn es partir du contr le de qualit national Ann biol clin 1997 55 37 40 12 CAMARA CISSEM et al Contr le de qualit interne et externe dans trois laboratoires de biochimie m dicale Abidjan propos de dosage de transaminase Rev CAMES SERIE A Vol 04 2006 10 15pp 13 CHEMINEL V PREVOSTO JM RENARD C Guide de bonne ex cution des analyses Exp rience de mise en place d un contr le de qualit dans un laboratoire hospitalier
45. st riles Eau distill e Kits de r actifs de transaminases bioM rieux Frigo pour conservation des chantillons Registre d enregistrement des r sultats Bic marker Stylo VV VV VV VV VV VV VV WV 56 Annexe 3 Courbe d talonnage N des tubes 1 2 3 4 5 6 Eau distill e 0 2 10 2 0 2 0 2 0 2 0 2 R actiflou R2 1 0 9 10 8 0 7 0 6 0 5 R actif 4 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 R actif 3 1 1 1 1 1 1 M langer laisser 20 min la temp rature ambiante NaOH 10 10 10 10 10 10 M langer attendre 5 minutes Photometrer GOT 22 95 95 150 215 25 50 83 126 Etablissement de la courbe d talonnage gt En abscisse nombres d unit s ml gt En ordonn e densit s optiques Source dosage sur terrain s jh Annexe 4 R sultats de dosage de transaminases de deux laboratoires contr ler N LABORATOIRE n 1 LABORATOIRE n 2 Saint Joseph Sino Congolaise GOT GPT GOT GPT 1 16 23 15 13 2 21 22 22 17 3 15 17 14 16 4 17 14 15 15 5 15 14 17 16 6 17 15 26 17 7 17 17 17 20 8 17 16 18 23 9 16 16 15 16 10 15 8 22 18 11 15 12 16 17 12 15 14 15 21 13 16 22 15 16 14 20 21 27 12 15 17 15 14 16 16 15 17 Moyenne 15 5 15 4 17 7 16 8 Ecart Type 4 5 5 7 4 2 2 7 o ri Annexe 5 Tableau II R
46. stimons que la plupart de laboratoire de biochimie m dical de la ville province de Kinshasa ne respectent pas les processus de contr le et suivi qualit surtout en ce qui concerne les analyses enzymatiques 3 OBJECTIF DU TRAVAIL L objectif poursuivi dans ce travail est de v rifier la qualit de contr le et de suivi qualit des analyses biochimiques r alis es dans les laboratoires de la ville de Kinshasa en ce qui concerne les dosages de transaminases afin de les comparer aux recommandations de l organisation mondiale de la sant OMS la f d ration internationale de chimie clinique IFCC AFSSAPS et la haute autorit de la sant HAS dans notre pays 4 10 26 Pour atteindre cet objectif nous avons suivi la m thodologie ci apr s Trois laboratoires ont t retenus dont deux consid r s comme laboratoires tests et un laboratoire t moin ainsi les dosages des chantillons de transaminase recueillis dans chaque laboratoire et nous avons proc d la comparaison de r sultats de chaque laboratoire test par rapport aux r sultats de ces m mes chantillons r alis s au laboratoire t moin e pr 4 INTERET DU SUJET L int r t de notre tude porte sur la validation des m thodes d analyse et l analyse de causes de variabilit des r sultats d un dosage et inscrire le laboratoire Congolais en g n ral et particuli rement ceux de Kinshasa dans la logique de normalisation et la standardisation d
47. ti re norme ISO GBEA OMS Le contr le de qualit est un moyen efficace pour maintenir la qualit de r sultats de diagnostic au laboratoire dans le monde entier Il a pour r le de v rifier r guli rement le niveau de la qualit des r sultats fournis par le laboratoire Mais l absence d un contr le de qualit de r sultats de laboratoire m dical et d une politique r glementaire dans notre pays la R publique D mocratique du Congo font que ces derniers ne sont pas fiable Il serait important que ces param tres soient contr l s car le contr le de qualit constitue un indicateur d valuation permanente de la fiabilit du syst me analytique est indispensable de le r aliser quotidiennement lors de dosage de transaminases Car l am lioration de la qualit est une pr occupation partag e dans le monde Aft ji b Recommandations gt Aux autorit s politico sanitaires Minist re de la sant Limplication par r glementation du secteur de laboratoire en dotant les laboratoires de moyens efficaces leurs permettant d am liorer la qualit de leurs r sultats pour apporter un plus dans le domaine de laboratoire Lorganisation de session de formation pour la sensibilisation de biologistes et techniciens de laboratoire en mati re de management qualit au niveau de laboratoire La cr ation d un r seau de contr le interlaboratoire en vue d atteindre la conformit entre les diff rents laboratoires
48. tion Fran aise de Normalisation AFNOR sous la r f rence NFX50 109 gt La qualit est l ensemble des propri t s et caract ristiques d un produit ou d un service rendu satisfaire les besoins exprim s et ou implicites de l utilisateur 39 gt D apr s le GBEA Le contr le de qualit est l ensemble des activit s pr tablies et syst matiques mises en uvres pour donner confiance en l obtention de la qualit requise la fois au sein de l organisme et l ext rieur vis vis des clients ou des autorit s 9 10 13 gt Selon l OMS D livrer chaque patient l assortiment d actes diagnostiques et th rapeutiques qui lui assurera les meilleurs r sultats en termes de sant conform ment l tat actuel de la science m dicale au moindre cout pour un m me r sultat au moindre risque iatrog ne et pour sa plus grande satisfaction en termes de proc dures de r sultats et de contacts humains l int rieur du syst me de soins 24 o Jh gt Dans le domaine de la biologie m dicale le contr le de qualit est l ad quation des r sultats mis en uvre et les informations attendues par le prescripteur ainsi que la r ponse aux attentes du patient 13 24 53 En d autre terme c est l ensemble des op rations qui garantissent aux prescripteurs la qualit analytiques dont il a besoin 48 Pour prendre en compte 1 sp cialisation des laboratoires et la diversit de leu
49. ts de dosage des transaminases de deux laboratoires Moyenne Ecart type GOT st J GOTsino co GPT st J GPT sino co Ce graphique montre la dispersion des r sultats obtenus apr s dosages de transaminases au tour de la moyenne et cart type Il r vele que Les moyennes de GOT et GPT pour le laboratoire de Vhopital Amiti Sino Congolaise sont lev es par rapport a celles du laboratoire de l h pital Saint Joseph avec les carts types inf rieurs 36 PA Tableau II R sultats de dosage des transaminases du laboratoire Saint Joseph par rapport au laboratoire de r f rence corse st J GOT ES J GPT ETS 15 5 24 20 3 31 15 4 23 14 5 22 L gende gt GOT st J Glutamate Oxaloac tate Transaminase Saint Joseph gt GPT st J Glutamate Pyruvate Transaminase saint Joseph gt GOT R f Glutamate Oxaloac tate Transaminase R f rence gt GPT R f Glutamate Pyruvate Transaminase R f rence Ce tableau montre les r sultats de dosage de transaminases fournis par le laboratoire de r f rence Kimbondo pour les m mes chantillons de transaminases dos s au laboratoire n 1 Saint Joseph Sur 15 chantillons de transaminases dos s au laboratoire de r f rence la moyenne de GOT est de 20 3 4 8 cart type soit 31 et 14 5 5 cart type soit 22 pour le GPT cependant le laboratoire n 1 Saint Joseph avait une moyenne de 15 5 4 5 cart type soit 24 pour le GOT
50. u processus de contr le et de suivi qualit surtout en ce qui concerne les analyses enzymatiques 11 31 32 58 5 DELIMITATION DU SUJET Notre tude a t men e dans la ville province de Kinshasa pr cis ment dans trois laboratoires de biochimie de hopital saint Joseph Sino congolaise et Kimbondo propos de transaminase sur une p riode de quatre vingt dix 90 jours allant du 23 mars au 23 juin 2012 6 SUBDIVISION DU TRAVAIL Le pr sent travail est subdivis en deux grandes parties pr c der par une introduction g n rale La premi re partie constitue la revue de la Litt rature et comprend deux chapitres Le premier traite de g n ralit s sur le contr le de la qualit dans un laboratoire de biochimie Le deuxi me chapitre voque les notions de rappelle sur l enzymologie clinique gt La seconde partie concerne la partie des donn es exp rimentales et comprend aussi deux chapitres f 7 Les mat riels et m thodes utilis es La pr sentation des r sultats et discussions Une conclusion g n rale et suggestions mettront terme a notre travail PREMIERE PARTIE REVUE DE LA LITTERATURE fa pr CHAPITRE I GENERALITES SUR LE CONTROLE DE QUALITE DANS UN LABORATOIRE DE BIOCHIMIE MEDICALE I 1 LE CONTROLE DE QUALITE I 1 1 DEFINITIONS Une d finition internationale de la qualit claire et admise par tous est fournie par la norme ISO 8402 et reprise par L Associa
51. uli rement Norya NKABA Michou MUNGULA Arnold TSHIPELE Octave INGUMAYAYA Mimi MAYANDA NDOLO MWANZA Angel KAKWATA Henry IKOMBA Giselle BWALUNGU Fran ois MEKOBE Coco VANGU Ursula KWANGU Matadi Balthazar PHOBA Lilas KONGOLO Jolie FUMIE Esp rance LUTAYI Immacul e KAYINDO etc pour la collaboration Que tous ceux qui de loin ou de pr s nous ont apport leur contribution pour la r alisation de ce travail trouvent ici l expression de notre profonde reconnaissance Michel MAYEMBE MAYARA v ji PLAN DU TRAVAIL EPIGRAPHE DEDICACE REMERCIEMENTS PLAN DU TRAVAIL LISTE DES ABREVIATIONS INTRODUCTION PREMIERE PARTIE REVUE DE LA LITTERATURE CHAPITRE I GENERALITES SUR CONTROLE DE QUALITE DANS UN LABORATOIRE DE BIOCHIMIE MEDICALE I 1 LE CONTROLE DE QUALITE 1 1 1 DEFINITIONS 1 1 2 IMPORTANCE DU CONTROLE DE QUALITE 1 1 3 LE MANAGEMENT DE LA QUALITE 1 1 4 VALIDATION D UNE METHODE ANALYTIQUE 1 1 5 CRITERES CONTRIBUANTS A LA FIABILITE DE RESULTATS DE LABORATOIRE 1 1 6 FACTEURS INFLUENCANT LA QUALITE DES RESULTATS DE LABORATOIRE CHAP II NOTION DE RAPPEL SUR L ENZYMOLOGIE CLINIQUE IL 1 INTRODUCTION IL 1 1 DEFINITION IL1 2 ENZYMES 1 3 ORIGINE ET SIGNIFICATION CLINIQUE IL 1 4 INDICATIONS CLINIQUE 1 5 IMPORTANCE DES PARAMETRES BIOLOGIQUE EN CLINIQUE 2 METHODES DE DOSAGE DES ENZYMES EN CLINIQUE IL3 PRINCIPES GENERAUX DE DOSAGE ENZYMATIQUE 4 FACTEURS INFLUE
52. urveillance des volutions des h patites aigues et des infarctus du myocarde 5 Valeurs de r f rence TGO ou ASAT lt 40 U ml TGP ou lt 45 U ml z3 PR CHAPITRE IV RESULTATS ET DISCUSSION IV 1 RESULTATS Les r sultats obtenus de dosages de 31 chantillons de s rums de transaminase au niveau de chaque laboratoire sont pr sent s dans les tableaux ci dessous Tableau I R sultats de dosage des transaminases de deux laboratoires contr ler B stj GOTsino Co GPTsino Co 15 5 24 17 7 27 15 4 23 16 8 26 L gende GOT st J Glutamate Oxaloac tate Transaminase Saint Joseph gt gt GOTsino co Glutamate Oxaloac tate Transaminase Sino Congolaise gt GPT st J Glutamate Pyruvate Transaminase Saint Joseph gt GPT Sino co Glutamate Pyruvate Transaminase Sino Congolaise Ce tableau pr sente les r sultats obtenus de dosage des transaminases de deux laboratoires Il stipule que gt Au laboratoire n 1 Saint Joseph 15 chantillons de transaminases ont t dos s et avaient une moyenne de 15 5 4 5 cart type soit 24 pour le GOT et 15 4 5 7 cart type soit 23 pour le GPT 34 Jo gt Au laboratoire n 2 Sino Congolaise 16 chantillons ont t dos s et avaient une moyenne de 17 7 soit 27 pour le GOT et 16 8 soit 26 pour le GPT avec un cart type de 4 2 pour le GOT et 2 7 pour le GPT Jh Figure 1 Repr sentation des r sulta
53. ute Autorit de Sant N N IRMM Institute for Reference Material and Measurements N ISTM Institut Sup rieur des Techniques M dicales N gt ISO International Standardization Organization Organisation Internationale de Standardisation 25 JCTLM Joint Committee for Traceability in Laboratory Medicine viii 26 LA Limite d Acceptabilit 27 LABM Laboratoire de Biologie M dicale 28 LNE GMED Laboratoire National d Essai Groupement pour l Evaluation des Dispositifs M dicaux 29 MRC Mat riaux de R f rence Certifi s 30 NIST National Institute of Standard and Technology 31 OMS Organisation Mondiale de la Sant 32 pH Potentiel d Hydrog ne 33 Pourcentage AA a jr INTRODUCTION GENERALE 1 PROBLEMATIQUE A l instar des autres pays du monde certains biologistes ont pris connaissance de l importance du contr le de qualit des examens de laboratoire 37 Il constitue un l ment majeur d valuation les laboratoires d analyses tant sens s rendre des r sultats justes et g r s par le personnel qualifi comp tent et soucieux d apporter le maximum de fiabilit a leur travail 56 En particulier les laboratoires hospitaliers ont d velopp des proc dures de contr le de qualit et ont entrepris une r flexion approfondie sur ces pratiques et diligent diff rentes exp riences qui ont abouti gt Dune part l organisation des jou
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