Fiches Ente?robacte?ries:Mise en page 1
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1. Micro e System PROTOCOLE TECHNIQUE Il s agit d une m thode miniaturis e permettant la mise en oeuvre d un nombre de tests sup rieurs celui d une galerie classique En effet la galerie Micro CSB Ent robact ries comporte 16 cupules permettant de r aliser 16 tests biochimiques et de faire un diagnostic de genre ou d esp ce de la plupart des Ent robact ries PRINCIPE Il consiste ensemencer des plaques pr sentant des cupules qui renferment des substrats d shydrat s destin s la mise en vidence d activit s enzymatiques ou d assimilation de substrats carbon s Ces puits sont ensemenc s avec un inoculum qui reconstitue le milieu Apr s incubation la lecture des r actions est effectu e directement virage de l indicateur color utilis ou apr s addition de r actifs de r v lation L identification se fait l aide d un tableau de lecture COMPOSITION DU COFFRET Le coffret Micro CSB Ent robact ries est compos de e 25 galeries Micro CSB Ent robact ries e 25 milieux MEVAG Ent robact ries e 25 fiches de lecture e 1 fiche technique Mat riel non fourni e R actif de Kovacs e Huile de paraffine Perchlorure de fer officinal dilu au 1 3 e KOH 4 e Alpha naphtol 6 CONSERVATION Les microplaques se conservent 2 8 C La date limite d utilisation est imprim e sur l emballage TEST DE PRE IDENTIFICATION Culture pure sur Muller Hinton Noter Aspect des colonies EF Gram Oxydas2. MAN EU a Sh dysenteriae _ Effectuer aussi le s rogroupage pour Shigella Groupe TDA x Proteus P vulgaris mS o e ee P mirabilis P penneri ELR penneri Providencia Prov rettgeri URE MAN G TRE ou INO var Prov stuartii ou Morganella SEb URE IND Prov alcalifaciens
3. e VF Sip Colonies de type M ou S Mobile ou immobile Gram n gatif Oxydase n gative AAF Faire la Microgalerie d identification MODE D EMPLOI e Pr parer une suspension bact rienne de turbidit gale 7 65 10 UFC dans 1 5 ml d eau distill e avec quelques colonies d une culture de 18 24 heures sur milieu solide e Distribuer 3 4 gouttes d inoculum bact rien remplissant la moiti de la cupule environ 100l par cupule de ADH URE e Verser le reste de la suspension bact rienne dans 1 ml de MEVAG Ent robact ries et homog n iser e Ensemencer les cupules de GLU XYL avec le MEVAG ainsi inocul 3 4 gouttes environ 100y1 par cupule e Fermer les cupules LDC ODC ADH URE et tous les sucres avec 2 gouttes d huile de paraffine e Incuber 37 C sur un plateau recouvert de papier buvard imbib d eau e Lire apr s 12 24 heures d incubation T l 221 33 825 24 36 221 77 649 43 39 Site web www microcsb net www cismed inov org e Micro e System PRINCIPE e L tude de la sensibilit aux antibiotiques va consister ajouter au milieu inoculum deux concentrations critiques d un antibiotique donn Apr s une incubation de 18 24 heures la croissance bact rienne est d cel e gr ce au virage de l indicateur color rouge de ph nol PREPARATION DES SOLUTIONS D ANTIBIOTIQUE e Elle est bas e sur la pr paration d une solution m re 200 f
4. e Tryptophanase MAL Malonate de sodium Utilisation du malonate TDA Ph nylalanine Ph nylalanine d saminase ONPG ONPG B galactosidase LAC Lactose GLU Glucose MAN Mannitol XYL Xylose XYL Sorbitol Fermentation 1 goutte de 1 goutte de Kovacs perchlorure de fer Rouge Jaune Vert Rouge Jaune Vert Rouge Jaune Vert Rose framboise Orange Rose Rouge Incolore Diffusion du charbon Inchang Bleu Vert Rose Jaune clair Noir Incolore Anneau rouge Anneau incolore Bleu Jaune vert Marron Jaune Jaune Incolore Jaune Bleu IDENTIFICATION DES PRINCIPALES ESPECES D ENTEROBACTERIES Groupe VP Groupe SH Groupe LAC UREE ONPG TDA KI oxytoca Klebsiella IND eT gt K pneumoniae Ent cloacae Enterobacter ADH q Ent aerogenes LDC Hafnia Ent agglomerans Serratia KI ozaenae et KI rhinoscleromatis Voir les carbohydrates aussi pour Enterobacter Salmonella Edwarsiella C freundii SH lt C malonaticus MAL x C amalonaticus Citrobacter Effectuer un s rotypage des Salmonelles Diff rencier les Salmonelles SH2 des Citrobacter atypiques et des souches VP et ONPG de Hafnia alvei Yersinia KI ozaenae VP ONPG a KI rhinoscleromatis Groupe IND lt E coli Levinea Shigella Sh sonnei var Sh boydii ONPG lt Y Sh flexneri
5. ois plus concentr e que la concentration critique sup rieure de l antibiotique dans le solvant consid r e Pour la pr paration les masses peser d pendent de l activit des antibiotiques e La masse d antibiotique requise est dissoute dans le volume exig de solvant st rile pour obtenir la concentration de la solution m re qui est ensuite conditionn e en cryotubes et conserv e 70 C cette solution m re est 100 fois plus concentr e que la ST CCS Il faut diluer donc la solution m re au 1 100 me pour obtenir les ST CCS et les ST CCI ST solution de travail diluer les SM au 1 100 pour r aliser les concentrations des solutions de travail pour CCS et CCI 1001 du double de la CCS des antibiotiques et 100yu1 de la CCI des antibiotiques donn s ont t respectivement distribu es dans les cupules sup rieures C et inf rieures c ou oppos es c correspondantes selon un ordre bien tabli AMP AMX ATM CFM 4 16 4 8 16 32 1 2 Midi 0000 00 00 x CSB System 00000000 1 PR PARATION DE L INOCULUM Il faut un bouillon MH suppl ment en Ca et Mg Pr parer une suspension dans de l eau distill e st rile ajust une opacit quivalente l talon 0 5 Mc FARLAND Cette suspension a t dilu e TTOOTE INOCULATION DE LA PLAQUE e 80uI de l inoculum bact rien sont distribu s dans chaque cupule e Recouvrir la plaque de papier adh sif e
6. t incuber pendant 18 24 heures sous papier buvard imbib d eau pour viter la d shydratation du milieu LECTURE ET INTERPRETATION L interpr tation se fera en fonction de la CMI de l antibiotique Elle est encadr e par deux valeurs qui sont la concentration critique sup rieure C et la concentration critique inf rieure c Trois cat gories cliniques ont t retenues Les souches S Les concentrations utilis es sont inf rieures ou gales la concentration critique inf rieure c Les souches R Les concentrations utilis es sont sup rieures la concentration critique sup rieure C Les souches l test est comprise concentrations critiques La CMI de l antibiotique entre les deux lt c mg ml gt C mg ml CMI CMI CMI Souche sensible Souche interm diaire Souche r sistante T l 221 33 825 24 36 221 77 649 43 39 Site web www microcsb net www cismed inov org HE ses R actions Enzymes R actifs ajouter R sultats Positifs R sultats N gatifs TABLEAU DE LECTURE 1 goutte de KOH 1 goutte de cr atinine 1 goutte de B naphtol Lysine Lysine d carboxylase ODC Ornithine Ornithine d carboxylase ADH Arginine Arginine dihydrolase URE Ur e Ur ase VP Glucose Pyruvate Glucose Pyruvate GEI G latine G latinase CS Citrate de sodium Utilisation du citrate CC Citrate de sodium Utilisation du citrate H2S Thiosulfate de Production d H2S sodium IND Tryptophan
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