Reagena DOBRAVA-HANTAAN IgG EIA Mode d`emploi REF
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1. tement de l emballage en aluminium B tonnets a avec le tampon o f 114302t prot ines de la entre 4 et 8 C diagnostiques de lavage juste avant a nucl ocapside AA jusqu la date d expiration utilisation du virus Hantaan Tampon pour Tampon tris Pr color dilution HARAS rose 65 ml S rum lyophilis Dissoudre le contr le Dissous 20 C Contr le 114302v1 Test n gatif en dans 1 3 ml de tampon ee positif E HIV HTLV h patite B de dilution avant iy P et C utilisation figurant sur l tiquette Entre 4 et 8 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Pr t l emploi figurant sur l tiquette S rum lyophilis Dissoudre le contr le Dissous 20 C Contr le 114X02v7 Test n gatif en dans 1 3 ml de tampon TE Re n gatif HIV HTLV h patite B de dilution avant jusq p etC utilisation figurant sur l tiquette Tampon de Diluer 1 10 avec de Eire det 800 Tampon tris l eau A er lavage 114x02v6 POTIER jusqu la date d expiration f 2x 50ml d sionis e juste avant Pa concentr er figurant sur l tiquette utilisation Anticorps anti IgG Conjugu HRP 114302v2 une conjugu la peroxydase de raifort 1 5 ml 3 3 5 5 T tram thyl Substrat TMB 114x02v3 benzidine Pr color rose 12 ml Solution 0 1 M d acide sulfurique d arr t TIROEN 12 ml LITTERATURE Hujakka H et al 2003 Diagnostic rapid tests for acute hantavirus infections Sp2. 22 1325 Sirola H 2003 Serological rapid tests for detection of human and rodent hantavirus infections Doctoral dissertation Kuopio University Publications C Natural and Environmental Sciences 155 ISBN 951 781 253 1 ISSN 1235 0486 Rev 2011 05 15
3. Reagena DOBRAVA HANTAAN IgG EIA Mode d emploi Fabricant Reagena International Oy Ltd Takojantie 18 70900 Toivala FINLANDE www reagena fi info reagena fi REAGENA Reagena DOBRAVA HANTAAN IgG EIA Reagena DOBRAVA HANTAAN IgG EIA est une preuve immunoenzymatique de d tection des anticorps IgG des virus Dobrava et Hantaan dans le s rum humain Reagena DOBRAVA HANTAAN IgG EIA est exclusivement destin l usage professionnel Les virus Hantaan et Dobrava appartiennent au genre hantavirus et sont connus pour causer des fi vres h morragiques syndrome r nal FHSR Le virus Hantaan est pr sent dans la plupart des pays asiatiques alors que le virus Dobrava se trouve en Europe centrale et orientale Les virus Hantaan et Dobrava sont transmis aux humains par inhalation ou contact direct avec des excr ments de rongeurs contamin s PRINCIPE DU TEST Avec le Reagena DOBRAVA HANTAAN IgG EIA la prot ine recombinante de la nucl ocapside du virus Hantaan est immobilis e sur une plaque de microtitration L antig ne capture les anticorps sp cifiques aux virus Dobrava et Hantaan pr sents dans l chantillon Les anticorps IgG captur s sont d tect s par enzyme HRP et le d veloppement de la coloration est assur par un substrat de TMB La dur e totale d incubation est de deux jours et demi CONTENU DU KIT 1 cadre EIA 3x4 b tonnets diagnostiques 8 barrettes de microtitration Contr le positif Conjugu HRP Tampon
4. de concentr de lavage x 2 Substrat TMB Tampon pour dilution Solution d arr t Contr le n gatif Mode d emploi MAT RIEL N CESSAIRE MAIS NON INCLUS DANS LE KIT Pipettes de pr cision et embouts de pipette 5 100 il Dispositif ou pipette de lavage des plaques 250 ul microcupule Tubes d chantillonnage 1 5ml Une fiole de 0 5 ou 1 L CONSERVATION Conserver le kit entre 4 et 8 C Le kit reste stable jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Voir le tableau page 2 pour les informations concernant la conservation et la stabilit du kit CHANTILLONS Il est conseill d utiliser des chantillons frais plut t que congel s Les chantillons congel s peuvent entra ner des faux positifs lorsque les r sultats sont agr g s Si l chantillon est agr g ou de mauvaise qualit veuillez centrifuger les chantillons pendant 5 minutes 3000 x g avant de les utiliser LIMITATIONS ET INTERF RENCES e Ne pas m langer de composants issus de lots diff rents e Ne pas utiliser de b tonnets diagnostiques si l emballage en aluminium qui les contient est endommag e Ne pas m langer les chantillons tester puisque diff rentes matrices pourraient entra ner une mauvaise reproductibilit Ruban d tanch it EIA Lecteur de microplaque EIA longueur d onde de 450 nm Agitateur de plaque microcupules e Toute infection bact rienne ou fongique des tampons ou r actifs pourra entra ner des r su
5. e immunit contre celui ci Un facteur de r sistance ou d autres infections n entra nent pas un r sultat positif de cette preuve Les r sultats situ s en Zone grise signifient que le r sultat ne s av re ni positif ni n gatif Dans ce cas suivre les consignes de votre organisation Il faudra g n ralement effectuer un nouveau test sur un nouvel chantillon quelques jours plus tard CONTR LE DE QUALIT V rifier que l absorbance m diane du contr le n gatif et du contr le positif r ponde aux crit res figurant sur la fiche de donn es de contr le Veuillez noter que les valeurs des contr les positifs et n gatifs peuvent varier de lot lot La variation d absorbance de chaque paire chantillon contr le doit tre inf rieure 10 Si le contr le positif est utilis dans diff rentes positions sur la plaque la variation d absorbance doit tre inf rieure 20 CARACT RISTIQUES DE PERFORMANCE Sensibilit et sp cificit La sensibilit de 99 et la sp cificit de 99 ont t obtenues en analysant les chantillons s riques de 41 patients en comparaison la m thode de r f rence IFA et ELISA Institut de microbiologie et d immunologie de Ljubljana Slov nie 2 2 INFORMATIONS CONCERNANT LES COMPOSANTS DU KIT Composant Code Information Consignes d utilisation Conservation amp stabilit Plaque de microtitration A Non ouvert dans A A Lavez les b tonnets n munie d un rev
6. ecific tests for Hantaan Dobrava and Puumala viruses versus a hantavirus combination test J Virol Methods 108 1 117 122 A l abri de la lumi re et entre 4 et 8 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Diluer 1 10 avec le tampon de dilution juste avant utilisation A l abri de la lumi re et entre 4 et 8 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Entre 4 et 8 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Pr t l emploi Pr t l emploi Hujakka H et al Serological rapid tests for detection of hantavirus IgM antibodies Abstract in XIIth International Congress of Virology Paris 27th July 1st August 2002 Vapalahti O et al European Hantaviruses Diagnostic aspects Abstract in The Fifth International Conference on Hemorrahagic Fever with Renal Syndrome HFRS Hantavirus Pulmonary Syndrome HPS and Hantaviruses 13 16 June 2001 Av i upanc T et al Characterization of Dobrava Virus a Hantavirus from Slovenia Journal of Medical Virology 1992 38 132 7 Elgh F et al Serological Diagnosis of Hantavirus Infections by an Enzyme Linked Immunosorbent Assay Based on Detection of Immunoglobulin G and M Responses to Recombinant Nucleocapsid Proteins of Five Viral Serotypes J Clin Microbiol 1997 35 5 1122 30 Klempa B et al 2004 First molecular identification of human Dobrava virus infection in central Europe J Clin Microb 42 3 pp 13
7. le contr le positif et le contr le n gatif avec 1 3 ml de tampon de dilution et bien m langer 5 Prendre le nombre requis de b tonnets diagnostiques EIA de leur emballage en aluminium et les placer sur le cadre EIA Si tous les b tonnets ne sont pas utilis s refermer imm diatement l emballage en aluminium et conserver les b tonnets restants entre 4 et 8 C 6 Laver les microcupules EIA une fois avec le tampon de lavage 250 ul cupule Vider les microcupules et les humidifier avec du papier mouchoir 7 Transf rer en double les dilutions d chantillons et de contr les positif et n gatif sur la plaque 100 ul microcupule 8 Incuber pendant 60 minutes temp rature ambiante dans un agitateur orbital 450 rpm 9 Diluer le conjugu HRP 1 10 avec le tampon de dilution pour un b tonnet diagnostique 100 pl de conjugu HRP 900 ul de tampon de dilution et bien m langer 10 Laver quatre fois les microcupules avec le tampon de lavage 250 ul microcupule et les s cher avec du papier mouchoir 11 Transf rer le conjugu de HRP dilu avec la pipette sur la plaque 100 ul microcupule 12 Incuber pendant 60 minutes temp rature ambiante dans un agitateur orbital 450 rpm 13 Laver cinq fois les microcupules avec le tampon de lavage 250 ul microcupule et les s cher avec du papier mouchoir 14 Ajouter le substrat de TMB rose la plaque 100 ul microcupule 15 Incuber pendant 30 minute
8. ltats erron s Jeter tout r actif qui aurait l air trouble lorsque vous l inspectez la lumi re AVERTISSEMENT e Les contr les comprennent du s rum humain test et trouv n gatif en VIH HTLV h patite B et C Manipuler les contr les comme des substances potentiellement infectantes e Jeter les contr les chantillons et mat riels conform ment aux dispositions l gales vous concernant e La solution d arr t Reagena EIA contient lt 1 m V d acide sulfurique La concentration est si basse qu elle n affecte pas la classification du produit e Le substrat TMB Reagena EIA contient du 3 3 5 5 t tram thylbenzidine lt 0 05 w w La concentration est si basse qu elle n affecte pas la classification du produit PROC DURE DE TEST Lire attentivement le mode d emploi avant de commencer les tests Contacter le fabricant ou votre fournisseur en cas de questions suppl mentaires concernant le produit Effectuer les tests entre 15 et 25 C Conserver le kit au r frig rateur entre 4 et 8 C pendant les p riodes d incubation 1 Ouvrir le kit et v rifier qu il contienne tous les composants figurant sur l tiquette du couvercle 2 Diluer les chantillons 1 201 avec le tampon de dilution c d 5 ul d chantillon 1000 ul de tampon de dilution 3 Diluer le tampon de concentr de lavage 1 10 avec de l eau d sionis e c d 50 mI de tampon de concentr de lavage 450 ml d eau Bien m langer 4 Dissoudre
9. s temp rature ambiante et l abri de la lumi re 16 Ajouter la solution d arr t 100 ul microcupule et bien m langer jusqu ce que la couleur change compl tement 15 secondes 600 800 rpm soit avec un agitateur orbital soit avec le lecteur EIA 17 Mesurer les r sultats dans les 10 minutes avec le lecteur EIA 450 nm CALCUL DES R SULTATS Calculer les r sultats comme suit R chantillon A Contr le positif a x K R r sultat Echantillon 4 Absorbance m diane de l chantillon Contr le positif Absorbance du contr le positif K valeur d pendante du lot qui figure dans la fiche de donn es de contr le comprise dans le kit Utiliser cette valeur pour calculer les r sultats finaux Le r sultats final est obtenu comme suit N GATIF R lt 0 ZONE GRISE 0 lt R lt 1 POSITIF R gt 1 2 INTERPR TATION DES R SULTATS Un r sultat n gatif signifie que l chantillon ne contient pas d anticorps IgG au virus Dobrava ni au virus Hantaan Le patient ne poss de aucune immunit contre une infection par le virus Dobrava Hantaan Dans l ventualit o une infection aigu serait soup onn e il est conseill de tester les anticorps IgM du virus Dobrava Hantaan Lorsqu un r sultat s av re positif il indique que l chantillon du patient contient les anticorps IgG au virus Dobrava ou Hantaan Le patient pr sente alors par cons quent soit une infection par le virus Dobrava Hantaan soit un
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