Folate - BIO 2000
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1. 84 tubes essai embouts de pipettes sacs pour d chets e R f 03023150 WasteLiner sacs pour d chets e R f 03027651 SysClean Adapter M adaptateur pour SysClean M Pour les trois appareils e R f 11298500 SysClean Elecsys 5 x 100 ml solution de lavage du syst me Disponible uniquement aux Etats Unis e R f 1832786 Folate CalCheck Elecsys trois niveaux de concentration Mode op ratoire Pour garantir le bon fonctionnement du test se conformer au mode d emploi de l appareil utilis et v rifier que les r actifs les solutions auxiliaires et les consommables sont disponibles en quantit suffisante seuel 1925369001 06 05 Folate Folate L analyseur effectue automatiquement l homog n isation des microparticules Les infor mations sp cifiques du test m moris es sur l tiquette code barres doivent tre saisies Si exceptionnellement le code barres ne peut tre lu par l appareil saisir manuellement la s rie de 15 chiffres inscrits sur l tiquette E170 Elecsys 2010 porter les r actifs r frig r s env 20 C et les placer dans le plateau r actifs de l appareil thermostat 20 C Eviter le formation de mousse L analyseur g re le contr le de la temp rature l ouverture et la fermeture des flacons Calibration Le test Folate Elecsys a t calibr par rapport un test radio immunologique pour la d termination du folate du commerce Le code barres du flacon r actifs conti2. Compte tenu de la particularit des habitudes alimentaires il est recommand au laboratoire de d terminer ses propres valeurs normales partir d un nombre de dosages statistiquement significatif Les valeurs suivantes issues d tudes r alis es aux USA et aux Pays Bas sont donn es titre d orientation R gion 2 5 97 5 percentiles n ng ml nmol l USA 134 4 2 19 9 9 5 45 2 Europe 2 0 9 1 4 5 20 7 334 Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E170 Q Chaque laboratoire devra v rifier la validit de ces valeurs de r f rence et tablir ses propres valeurs selon la population examin e Performances analytiques Pr cision Les r sultats indiqu s ci dessous ont t obtenus avec des analyseurs Elecsys Les r sultats obtenus au laboratoire peuvent diff rer de ceux ci La reproductibilit a t d termin e l aide de pools de s rums humains et de contr les chaque chantillon a t analys 6 fois par jour pendant 10 jours n 60 selon un protocole modifi EP5 A du N C C L S National Committee for Clinical Laboratory Standards Les r sultats suivants ont t obtenus pr cision intra s rie sur E170 n 21 Elecsys 2010 Pr cision intra s rie Pr cision intra s rie Echantillon X s CV s CV ng m nmol l ng ml nmol l ng ml nmol l S rum humain 1 7 6 17 2 0 29 0 66 3 9 0 38 0 86 5 0 S
3. bpy 3 bouchon gris 1 flacon contenant 10 ml Prot ine de liaison du folate marqu e au ruth nium 35 ug l agent stabilisant s rumalbumine humaine tampons borate phosphate et citrate pH 5 5 conservateur R2 Folate biotine bouchon noir 1 flacon contenant 8 0 ml conjugu folate biotine 18 ug l biotine 120 ug l agent stabilisant s rumalbumine humaine tampon borate pH 9 0 conservateur Pr cautions d emploi et mises en garde Pour diagnostic in vitro Observer les pr cautions habituelles de manipulation en laboratoire L limination de tous les d chets doit tre effectu e conform ment aux directives locales Ce coffret contient parmi ses constituants les substances suivantes class es selon la di rective 88 379 CEE PT1 Xn NOCIF R 20 21 22 S 45 monothioglyc rol Nocif par inhalation par contact avec la peau et par ingestion En cas d accident ou de malaise consulter imm diatement un m decin si possible lui montrer l tiquette PT2 C CORROSIF R 34 S 26 37 39 hydroxyde de sodium En cas de contact avec les yeux laver imm diatement et abondamment avec de l eau et consulter un sp cialiste Provoque des br lures Porter des gants appropri s et un appareil de protection des yeux du visage Les mat riaux d origine humaine ont fait l objet d une recherche des anticorps anti HIV 1 anti HIV 2 anti HCV et de l antig ne HBs ayant conduit un r sultat n gatif Comme le ris que d infection ne
4. peut tre exclu avec certitude par aucune m thode ce produit doit tre utilis avec le m me soin que les chantillons de patients En cas d exposition suivre les directives de l autorit comp tente en mati re de sant 865 Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E170 CA Pr paration des r actifs Les r actifs contenus dans le coffret sont pr ts l emploi et ne peuvent tre utilis s s par ment Toutes les informations n cessaires au d roulement du test sont m moris es sur les codes barres des flacons r actifs et sont saisies automatiquement Conservation et stabilit Ranger le coffret Folate Elecsys entre 2 et 8 C en position verticale de mani re ce que toutes les microparticules soient rassembl es lors de l homog n isation qui pr c de l analyse Stabilit Avant ouverture entre 2 et 8 C jusqu la date de p remption indiqu e Apr s ouverture entre 2 et 8 C douze semaines Sur E170 et Elecsys 2010 huit semaines Pr l vement et pr paration des chantillons S rum recueilli sur tube standard ou contenant un gel s parateur Ne pas utiliser de plasma Crit re d acceptabilit recouvrement 90 110 de la valeur du s rum ou pente 0 9 1 1 coefficient de corr lation gt 0 95 ordonn e l origine lt 2 x limite de d tection analytique Stabilit deux jours entre 2 et 8 C un mois 20 C Ne congeler qu une fois Conserver l abri de la lumi re Stabili
5. sont ajout es Les sites libres de la prot ine de liaison du folate marqu e au ruth nium sont occup s il se forme un complexe folate biotinyl prot ine de liaison du folate marqu au ruth nium Le complexe est li la phase solide par une liaison biotine streptavidine e Le m lange r actionnel est aspir dans la cellule de mesure les micro particules sont maintenues au niveau de l lectrode par un aimant L limination de la fraction libre est effectu e par le passage de ProCell Une diff rence de potentiel appliqu e l lectrode d clenche la production de luminescence qui est mesur e par un photomultiplicateur e Les r sultats sont obtenus l aide d une courbe calibration Une courbe de r f rence est m moris e dans le code barres du r actif et est r ajust e pour l analyseur utilis par une calibration en deux points R actifs Contenu du coffret et concentrations Coffret Folate Elecsys R f 11820761 100 tests PT1 R actif de pr traitement 1 bouchon blanc 1 flacon contenant 4 0 ml monothioglyc rol 12 66 g l pH 5 5 PT2 R actif de pr traitement 2 bouchon gris 1 flacon contenant 4 0 ml hydroxyde de sodium 37 g l M Microparticules tapiss es de streptavidine bouchon transparent 1 flacon contenant 6 5 ml Microparticules tapiss es de streptavidine 0 72 mg ml capacit de liaison 470 ng biotine mg microparticules conservateur R1 Prot ine de liaison du folate Ru
6. GO SO LOO69ESZ6 L 20 1002 SIESUEH Folate Folate 11820761 Domaine d utilisation Test de liaison pour la d termination quantitative in vitro du folate dans le s rum humain Ce test par lectrochimiluminescence ECLIA est adapt aux dosages immunologiques sur les analyseurs Elecsys 2010 et MODULAR ANALYTICS E170 module Elecsys de Roche Tous les appareils ne sont pas disponibles dans tous les pays 100 tests G n ralit s Les an mies nutritionnelles et macrocytaires peuvent tre dues une carence en folate La carence peut r sulter d un r gime d pourvu de fruits crus de l gumes ou autres aliments riches en acide folique et se rencontre chez les alcooliques les toxicomanes les personnes g es les personnes de milieux sociaux d favoris s etc Par ailleurs un taux s rique faible de folate au cours d une grossesse a t associ des malformations du tube neural du foetus La carence alimentaire et la malabsorption sont les causes principales des carences en folate Le folate est n cessaire pour un m tabolisme normal la synth se de l ADN et la r g n ration des globules rouges En l absence de traitement les carences voluent en an mie m galoblastique Les dosages de vitamine B et d acide folique pr sentent un int r t diagnostic pour le d pistage de carences en vitamine B ou en acide folique en particulier dans le cadre du diagnostic diff renciel de l an mie m galoblastiq
7. ent toutes les informations sp cifiques de la calibration du lot la courbe de r f rence y est m moris e Le r ajustement de la courbe pour l appareil est effectu l aide de 2 solutions Folate CalSet Elecsys Fr quence de calibration Effectuer une calibration par lot en utilisant un r actif frais ayant t enregistr au maximum 24 heures par l appareil Une nouvelle calibration est recommand e E170 Elecsys 2010 e apr s un mois 28 jours pour un m me lot de r actifs e apr s sept jours pour un m me flacon rest sur l appareil e quand elle s av re n cessaire par ex si les r sultats des s rums de contr le se situent en dehors des limites de confiance Validation de la calibration Le logiciel de l appareil v rifie la validit de la courbe et affiche les anomalies Contr le de qualit Utiliser PreciControl Universal 1 et PreciControl Universal 2 Elecsys ou d autres contr les appropri s Il est recommand de doser les s rums de contr le en simple au moins une fois par 24 heures pendant une routine pour chaque nouveau coffret et lors d une calibration Cette fr quence peut varier selon les exigences du laboratoire Les r sultats doivent se situer dans les limites de confiance Chaque laboratoire tablira la proc dure suivre si les r sultats sont situ s en dehors des limites de confiance Remarque Certaines solutions de contr les disponibles dans le commerce contiennent du f
8. ev s d anticorps anti streptavidine et anti ruth nium peuvent conduire des interf rences Pour le diagnostic les r sultats du test Folate Elecsys doivent toujours tre confront s aux donn es de l anamn se du patient au tableau clinique et aux r sultats des autres examens Domaine de mesure 0 6 20 ng ml 1 36 45 4 nmol l d fini par la limite de d tection et le maximum de la courbe de r f rence Les taux situ s au dessous de la limite de d tection sont exprim s de la mani re suivante lt 0 6 ng ml lt 1 36 nmol l et les taux situ s au dessus du domaine de mesure de la mani re suivante gt 20 ng ml gt 45 4 nmol l Dilution des chantillons Les chantillons pr sentant une concentration de folate gt 20 ng ml gt 45 4 nmol l peuvent tre dilu s manuellement au 1 2 dans le Diluent Universal La concentration obtenue avec l chantillon dilu doit tre gt 10 ng ml gt 22 7 nmol l Multiplier le r sultat obtenu par le facteur de dilution Remarque Diluent Universal pouvant contenir de faibles concentrations de folate utiliser pour les tudes de lin arit des s rums contenant une tr s faible quantit d analyte Les chantillons situ s en dehors du domaine de mesure peuvent tre dilu s au 1 2 l aide du Diluent Universal Aux concentrations obtenues apr s dilution le folate endog ne n a pas d influence significative sur le r sultat du test Valeurs de r f rence
9. ns Fed Register July 1 1998 6 267 280 9 Council Directive 90 679 EEC Official J of the Eur Communites No L374 31 d c 1990 10 Documentation de Roche 11 Passing H Bablok W A New Biometrical Procedure for Testing the Equality of Measurements from Two Different Analytical Methods J Clin Chem Clin Biochem 21 709 720 1983 12 Passing H Bablok W Comparison of Several Regression Procedures for Method Comparison Studies and Determination of Sample Sizes J Clin Chem Clin Biochem 22 431 445 1984 13 Bablok W et al A General Regression Procedure for Method Transformation J Clin ChemClin Biochem 26 783 790 1988 Pour de plus amples informations se r f rer au manuel d utilisation des analyseurs MODULAR ANALYTICS E170 et Elecsys 2010 au dossier information produit Folate Elecsys et aux notices d utilisation Folate Elecsys Folate CalSet PreciControl Universal et Diluent Universal Modifications importantes Les modifications concernant les donn es contenues dans le code barres doivent tre entr es manuellement 2001 Roche Diagnostics w 7 8 tal Roche Diagnostics GmbH D 68298 Mannheim 2001 07
10. olate 5 m thylt trahydrique MFTA Leur utilisation est d conseill e pour le contr le des dosages du folate Expression des r sultats E 170 et Elecsys 2010 calculent automatiquement la concentration en folate de chaque chantillon Les r sultats sont exprim s au choix en nmol l ou en ng ml Facteurs de conversion nmol l x 0 44 ng ml ng ml x 2 27 nmol l Limites d utilisation interf rences La bilirubine lt 750 ug l ou 1282 pmol l la lip mie triglyc rides lt 15 g l ou 1500 mg dl et la biotine lt 40 ng ml n influencent pas les r sultats Crit re d acceptabilit recouvrement par rapport la valeur initiale 0 5 ng ml 1 1 nmol l pour des concentra tions lt 5 ng ml 11 nmol l ou 10 pour des concentrations gt 5 ng ml 11 nmol l Chez les patients trait s par de fortes doses de biotine gt 5 mg jour il est recommand d effectuer le pr l vement de l chantillon au moins 8 heures apr s la derni re administra tion On n a pas observ d influence par le facteur rhumato de jusqu 400 U ml L influence de 56 m dicaments fr quemment administr s a t recherch e in vitro aucune interf rence n a t observ e Le dosage du folate chez les patients trait s par certains m dicaments tels que le m thotr xate ou la leucovorine est contre indiqu ceux ci ayant montr une r action crois e avec la prot ine de liaison du folate Dans de rares cas des titres tr s l
11. reciControl Universal Elecsys PreciControl Universal 1 2 x 3 ml et PreciControl Universal 2 2 x 3 ml e R f 11732277 Diluent Universal Elecsys 2 x 18 ml de milieu de dilution de l chantillon ou R f 03183971 Diluent Universal Elecsys 2 x 40 mi de milieu de dilution de l chantillon f e Equipement habituel de laboratoire e Elecsys 2010 ou MODULAR ANALYTICS E170 Mat riel auxiliaire pour Elecsys 2010 e R f 11662988 ProCell Elecsys 6 x 380 mI de tampon syst me e R f 11662970 CleanCell Elecsys 6 x 380 ml de solution de nettoyage pour la cellule de mesure R f 11930346 SysWash Elecsys 1 x 500 ml additif la solution de lavage R f 11933159 Adaptateur pour SysClean R f 11706802 Assay Cup Elecsys 2010 60 x 60 cuvettes r actionnelles R f 11706799 Assay Tip Elecsys 2010 30 x 120 embouts de pipette Equipement habituel de laboratoire Maternal auxiliaire pour MODULAR ANALYTICS E170 e R f 12135019 ProCell M 1 x 2 de tampon syst me e R f 12135027 CleanCell M 1 x 2 solution de nettoyage pour la cellule de mesure e R f 03023141 PC CC Cups 50 godets pour la thermor gulation de ProCell M et de CleanCell M e R f 03004899 PreClean M 5 x 600 mi solution de lavage avant la d tection e R f 03005712 ProbeWash M 12 x 70 ml solution de lavage pour la fin de la s rie et pour le rin age en cas de changement de r actif e R f 12102137 AssayCups AssayTips Combimagazin M 48 blocs de
12. rum humain 2 19 2 43 7 0 39 0 89 2 0 0 75 1 70 3 9 Contr le 1 14 3 32 4 0 44 1 00 3 1 0 55 1 25 3 8 Contr le 2 2 0 4 5 0 25 0 57 12 6 0 31 0 70 15 7 E170 Pr cision intra s rie Pr cision intra s rie Echantillon X s CV X s CV ng ml nmol I ng mi nmol l ng ml nmol l ng mi nmol l S rum humain 1 4 05 9 19 0 11 0 25 2 7 3 90 8 85 0 14 0 32 3 6 S rum humain 2 10 7 24 4 0 17 0 39 1 6 8 88 20 2 0 22 0 49 2 4 S rum humain 3 16 3 36 9 0 27 0 61 1 7 24 7 56 0 0 43 0 97 1 7 PreciControl U 1 6 55 14 9 0 10 0 22 1 5 6 70 15 2 0 16 0 36 2 4 PreciControl U 2 1 88 4 28 0 09 0 22 5 0 1 81 4 11 0 16 0 35 8 6 Sensibilit limite de d tection analytique La limite de d tection se situe 0 6 ng ml 1 36 nmol l La limite de d tection correspond au taux le plus faible de folate mesurable qui puisse tre diff renci de z ro Elle repr sente la concentration du standard le plus faible de la courbe de r f rence 2s calibrateur de r f rence standard 1 2s pr cision intra s rie n 21 Sp cificit analytique Le test montre des r actions crois es avec les substances suivantes aminopt rine 2 7 am thopt rine 2 3 acide folinique 2 3 Comparaison de m thodes Une comparaison du test Folate Elecsys y avec un test de liaison Folate radio immunologique du commerce x a t effectu e
13. sur des s rums de patients hospitalis s Elle a permis d tablir les corr lations suivantes ng ml Nombre d chantillons analys s 225 Passing Bablok 11 R gression lin aire y 0 29 0 90x y 0 60 0 78x r 0 964 r 0 964 s md68 0 683 Sy x 0 97 Les concentrations des chantillons taient situ es entre env 1 5 et 16 9 ng ml env 3 4 et 38 4 nmol l Bibliographie 1 Rush D Folate Supplements Prevent Recurrence of Neural Tube Defects FDA Dietary Supplement Task Force Nutrition Reviews 50 1 22 28 1992 2 Herbert V Drugs effective in megaloblastic anemias in Goodman L S and Gilman A eds The Pharmacological Basis of Therapeutics 5 dition MacMillan Co pp 1324 1349 1975 Herbert V The assay and nature of folic acid activity in human serum J Clin Invest 40 81 91 1960 4 Dunn R T Foster L B Radioassay of serum Folate Clin Chem 19 1101 1105 1973 5 Rothenberg S P DaCosta M Rosenberg B S A radioassay for serum Folate Use of a two phase sequential incubation ligand binding system New Eng J Med 285 25 1335 1339 1972 6 Gutcho S Mansbach L Simultaneous radioassay of serum Folate and folic acid Clin Chem 23 1609 1614 1977 BIO RAD Quantaphase B 12 Folate Radioassay Instruction Manual mars 1995 Department of Labor Occupational Safety and Health Administration 29 CFR Part 1910 1030 Occupational Safety and Health Standards Bloodborne Pathoge
14. t du s rum pr lev sur tube gel s parateur 24 heures entre 2 et 8 C voir galement la stabilit indiqu e par le fabricant des tubes Les chantillons qui contiennent un pr cipit doivent tre centrifug s avant l analyse Ne pas utiliser d chantillons inactiv s par la chaleur Ne pas utiliser d chantillons ou solutions de contr les stabilis s par de l azide Remarque l h molyse peut augmenter consid rablement les taux de folate du fait des concentrations lev es de folate dans les globules rouges Ne pas utiliser d chantillons pr sentant une h molyse Les chantillons de s rum destin s au dosage du folate doivent tre pr lev s sur des pa tients jeun S assurer avant l analyse que la temp rature des chantillons des calibrateurs et des contr les se situe 20 25 C En raison des risques d vaporation il est recommand de doser les chantillons les contr les et les calibrateurs dans les deux heures qui suivent leur mise en place sur les analyseurs Folate Elecsys R actifs et mat riels n cessaires Contenu du coffret R f 11820761 Coffret Folate Elecsys pour 100 tests e PT1 R actif de pr traitement 1 e PT2 R actif de pr traitement 2 e M Microparticules tapiss es de streptavidine e R1 Prot ine de liaison du folate Ru bpy 3 e R2 Folate biotine R actifs et mat riel auxiliaires n cessaires e R f 11820877 Elecsys CalSet Elecsys 4 x 1 6 ml e R f 11731416 P
15. ue Les premiers tests radio immunologiques pour la d termination du folate datent de 1973 47 Tous utilisent comme traceur le folate marqu l iode 125 et des prot ines de liaison naturelles prot ine de liaison du lait prot ine de liaison du folate Les tests disponibles dans le commerce se distinguent par leurs techniques de s paration libre ou li e utilis es et par leur m thode de pr traitement de l chantillon Le test Folate Elecsys utilise le principe par comp tition l aide de la prot ine de liaison naturelle du folate folate binding protein FBP sp cifique du folate Le folate de l chantillon entre en comp tition avec le folate biotinyl ajout pour les sites de liaison libres du complexe FBP marqu au ruth nium Ru bpy 5 Tris 2 2i bipyridyl ruth nium il Principe Principe par comp tition Dur e totale du cycle analytique 27 minutes e 1 incubation Une prise d chantillon de 15 pl 2010 ou de 30 pl E170 est incub e avec les r actifs de pr traitement 1 et 2 du folate le folate li est lib r des prot ines de liaison qui sont imm diatement d natur es pH lev e 2 Incubation L chantillon pr trait est incub avec la prot ine de liaison du folate marqu e au ruth nium se forme un complexe dont la quantit d pend de la concen tration en analyte dans l chantillon e 3 incubation Les microparticules tapiss es de streptavidine et le folate biotinyl
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