G-IVF™ PLUS
Contents
1. Test sur embryon de souris une cellule L de blastocystes d velopp s le jour 5 gt 80 Endotoxines bact riennes test LAL EU mL lt 0 25 Les r sultats des tests sp cifiques au LOT sont indiqu s sur le certificat d analyse remis pour chaque livraison Pr cautions prendre et avertissement N utilisez pas G IVF PLUS s il a un aspect trouble G IVF PLUS contient de la s rumalbumine humaine et de la gentamicine Attention Tous les produits sanguins doivent tre consid r s comme potentiellement infectieux Le mat riel d origine dont ce produit est d riv s est av r n gatif lors des tests d anticorps au VIH l HBc au VHC et l HTLV I II et non r actif pour l AgHBs l ARN du VHC l ARN du VIH 1 et la syphilis Aucune m thode de test connue ne peut garantir que les produits d riv s du sang humain ne transmettent pas d agents infectieux Vitrolife recommande d ouvrir ce milieu et de l utiliser uniquement avec une technique aseptique Les risques de toxicit reproductive et de toxicit de d veloppement pour les milieux de FIV y compris pour les milieux de FIV de Vitrolife n ont pas t tablis et restent incertains Ne pas utiliser en injection Attention La loi f d rale am ricaine limite la vente de ce produit aux m decins ou sur d livrance d une ordonnance IT Terreno per la preparazione e la manipolazione dei gameti e per la fecondazione in vitro SUPPLEMENTATO2. In alternativa aggiungere sospensione di sperma equilibrata alle piastre equilibrate con gli ovociti gi presenti Si raccomanda di inseminare in un volume di 0 5 1 mL senza sovrapposizione di olio Se si utilizza la sovrapposizione si raccomandano gocce di almeno 100 pL Specifiche Filtraggio sterile SAL 10 Analisi su embrione di topo 1 cellula blastocisti espansa il giorno 5 gt 80 Endotossine batteriche analisi LAL EU mL lt 0 25 l risultati dei test specifici sui Lotti sono riportati sul Certificato di analisi fornito ad ogni consegna Precauzioni ed avvertenze Non utilizzare G IVF PLUS se presenta un aspetto torbido G IVF PLUS contiene albumina del siero umana e gentamicina Attenzione tutti gli emoderivati devono essere trattati come potenzialmente infettivi Le materie prime impiegate per questi prodotti sono risultate negative ai test per gli anticorpi di HIV HBc HCV e HTLV I II e non reattive per HbsAg HCV RNA e HIV 1 RNA e sifilide Nessun metodo di prova conosciuto pu assicurare che i prodotti derivati dal sangue umano non trasmettano agenti infettivi Vitrolife raccomanda di aprire ed utilizzare i terreni esclusivamente con tecniche asettiche Irischi di tossicit riproduttiva e tossicit dello sviluppo dei terreni IVF inclusi i terreni IVF Vitrolife non sono stati determinati e sono incerti Non per iniezione Attenzione la legge federale degli Stati Uniti li
3. Nicht zur Injektion bestimmt Hinweis Nach US amerikanischem Gesetz darf dieses Produkt nur von einem Arzt gekauft oder gegen Vorlage eines rztlichen Rezeptes verkauft werden ES Medio para preparar y manejar gametos y para fecundaci n in vitro ENRIQUECIDO CON HSA G IVFM PLUS es un medio tamponado con bicarbonato que contiene alb mina s rica humana y gentamicina como f rmaco antibacteriano Listo para usar tras equilibrarlo a 37 C en una atm sfera de CO al 6 Instrucciones de conservaci n y estabilidad Conservar en un lugar oscuro de 2 a 8 C G IVF PLUS es estable hasta la fecha de caducidad que aparece en las etiquetas del envase y el certificado de an lisis espec fico de cada LOT Los frascos no deben conservarse una vez abiertos Desechar el exceso de medio despu s de finalizar el procedimiento Instrucciones de uso A continuaci n se indica el procedimiento general para usar G IVF PLUS Para m s informaci n sobre el uso recomendado de G IVF PLUS consulte por favor el Manual Vitrolife de la serie G M El manual debe solicitarse a Vitrolife pudiendo encargarse a trav s de la p gina web de la empresa www vitrolife com En ella tambien pueden encontrarse instrucciones de uso en otros idiomas Preparaci n del esperma M todo de migraci n swim up para muestras de semen con buen n mero de espermatozoides con buena motilidad Pipetee 1 0 ml de semen en el tubo Cubra co
4. 2 mLdi liquido seminale sopra il gradiente Infatti una quantit eccessiva di liquido seminale compromette la separazione Centrifugare quindi per 10 20 minuti a 300 600g Rimuovere i due strati superiori prestando attenzione a non lasciare residui sulle pareti della provetta Trasferire il pellet di liquido seminale con la minore quantit possibile di soluzione al 90 in una provetta conica sterile risciacquata con 5 mL di G IVF PLUS equilibrato Centrifugare per 10 minuti a 300 6009 Gettare il supernatante e ripetere il lavaggio Dopo il secondo lavaggio risospendere il pellet in 1 mL di G IVF PLUS equilibrato Valutare quindi la mobil ela concentrazione del campione lavato Diluire il campione lavato con G IVF PLUS equilibrato a una concentrazione finale di 75 000 200 000 spermatozoi mobili mL Preparare le piastre di inseminazione risciacquate con 0 5 1 0 mL di sospensione di sperma ed equilibrare a 37 C e 6 CO per almeno 2 ore Identificazione degli ovociti Risciacquare gli ovociti prima in G MOPSTM supplementato pre riscaldato G MOPS PLUS quindi in G IVFM PLUS equilibrato La procedura di lavaggio deve includere almeno due fasi con 1 0 mL di G IVF PLUS in ciascuna fase Trasferire gli ovociti alle piastre con G IVF PLUS equilibrato e riporre immediatamente le piastre nell incubatore Inseminazione Trasferire gli ovociti nelle piastre di inseminazione e lasciare a 37 C e al 6 CO durante la notte
5. auf den Verpackungsetiketten und im Analysezertifikat der Charge angegebenen Verfallsdatum haltbar Die Flaschen d rfen nach dem ffnen nicht aufbewahrt werden Entsorgen Sie restliches Medium nach Abschluss des Vorgangs Anwendung Nachfolgend wird das allgemeine Verfahren f r die Verwendung von G IVFM PLUS beschrieben Weitere Informationen zur empfohlenen Anwendung von G IVF PLUS finden Sie im Vitrolife G Series Handbuch Das Handbuch ist auf Anfrage bei Vitrolife erh ltlich oder kann auf der Unternehmenswebsite www vitrolife com bestellt werden Die Anwendungsvorschriften in weiteren Sprachen entnehmen Sie bitte der Website Aufbereitung der Spermien Bei Spermaproben mit hoher Spermienzahl und Motilit t sollte die Swim up Methode Migration angewendet werden Pipettieren Sie 1 0 ml des Spermas in das R hrchen Bedecken Sie das Sperma mit 2 0 ml equilibriertem G IVF PLUS Stellen Sie das Swim up R hrchen 30 60 Minuten lang in Schr glage bei 37 C und 6 iger CO Atmosph re in den Inkubator Aspirieren Sie das aufgetropfte Medium ohne dabei die darunter liegenden Spermien zu ber hren und geben Sie die Probe in ein sauberes R hrchen Geben Sie 5 0 ml G IVF PLUS dazu mischen und zentrifugieren Sie das Ganze 10 Minuten lang bei 300 600 g Aspirieren Sie den berstand und resuspendieren Sie das Sediment in 5 0 ml equilibriertem G IVF PLUS Wiederholen Sie das Zentrifugieren Entsorgen Sie den bers
6. 0 600g Aspirate the supernatant and re suspend the pellet in 5 0 mL of equilibrated G IVF PLUS and repeat the centrifugation Discard the supernatant and resuspend the pellet in 0 5 1 0 mL of equilibrated G IVF PLUS Determine motility and concentration of spermatozoa in the washed sample Density gradient centrifugation method This method can be used to wash all samples regardless of quality Mix SpermGrad with G IVF PLUS in separate tubes to obtain 90 and 45 stock solutions For 90 stock solution mix 9 0 mL SpermGrad with 1 0 mL G IVF M PLUS For 45 stock solution mix 4 5 mL SpermGrad M with 5 5 mL G IVF PLUS Mix the solutions thoroughly Store in sterile non toxic tubes or sterile tissue culture flasks Label and refrigerate until use Equilibrate the solutions at 37 C and 6 CO before use The density gradient should be layered in a sterile and rinsed conical non toxic centrifuge tube Pipette 1 5 GIVFPLUS26078 02 indd 1 26078 02 Vitrolife FT Innovative Cell and Tissue Technology mL of 90 solution into the tube first and then slowly 1 5 mL of 45 solution on top ofit Finally the semen is gently layered on the top If the semen sample is of poor quality up to 2 mL of semen can be layered on top of the gradient Adding too much semen will result in poor separation The tube is then centrifuged for 10 20 minutes at 300 600g Remove the two top layers and take care not to leave any residues on t
7. 7 C und 6 CO stehen Alternative Geben Sie die equilibrierte Spermienl sung in equilibrierte Schalen die bereits die Oozyten beinhalten Es wird empfohlen mit einer Menge von 0 5 1 ml und ohne labdeckung zu inseminieren Verwenden Sie l zur Abdeckung wird ein Tropfenvolumen von mindestens 100 pl empfohlen Produktdaten Steril filtriert SAL 10 Mouse Embryo Assay 1 cell expandierte Blastozyste an Tag 5 280 Bakterielle Endotoxine LAL Test EU mL lt 0 25 Thargen spezifische Testergebnisse finden Sie auf dem Analysezertifikat das jeder Lieferung beiliegt Vorsichtsma nahmen Verwenden Sie G IVF PLUS nicht wenn es tr be erscheint G IVF PLUS enth lt humanes Serum Albumin und Gentamicin Hinweis Alle Blutprodukte sind grunds tzlich als potenziell infekti s anzusehen Das Quellmaterial dem dieses Produkt entnommen wurde wurde negativ auf HIV HBc HCV und HTLV I Il Antik rper getestet und war nicht reaktiv auf HbsAg HCV RNA und HIV 1 RNA und Syphilis Keine derzeit bekannten Testverfahren k nnen gew hrleisten dass aus menschlichem Blut gewonnene Produkte keine Infektionserreger bertragen Vitrolife empfiehlt die Medien nur unter Anwendung aseptischer Methoden zu ffnen und zu verwenden Die Risiken einer Toxizit t von IVF Medien in Hinblick auf Reproduktion und Entwicklung inklusive der IVF Medien von Vitrolife wurden noch nicht bestimmt und gelten als unsicher
8. CON ALBUMINA DEL SIERO UMANA G IVF PLUS un terreno con tampone di bicarbonato contenente albumina del siero umana e gentamicina come agente antibatterico Destinato all uso dopo l equilibratura a 37 C in atmosfera al 6 CO Istruzioni per la conservazione e stabilit Conservare al riparo dalla luce ad una temperatura di2 8 C G IVFM PLUS rimane stabile fino alla data di scadenza riportata sulle etichette dei contenitori e sul Certificato di analisi di ogni Lotto Dopo l apertura i flaconi di terreno non possono essere conservati Gettare il terreno in eccesso al termine della procedura Istruzioni per l uso Di seguito riportata la procedura generica per l uso di G IVF PLUS Per maggiori informazioni sull uso corretto di G IVF PLUS vedere il Manuale Vitrolife G Series Il Manuale pu essere richiesto alla Vitrolife ed ordinato dal sito Internet dell azienda www vitrolife com Il sito contiene anche le istruzioni per l uso in altre lingue Preparazione del liquido seminale Il metodo di migrazione swim up deve essere utilizzato per campioni di liquido seminale con un buon conteggio di spermatozoi ed una buona mobilit Pipettare 1 0 mL di liquido seminale nella provetta Sovrapporre 2 0 mL di G IVF PLUS equilibrato Posizionare la provetta di swim up in posizione angolata nell incubatore a 37 C e 6 CO per 3060 minuti Aspirare il terreno superiore senza toccare il liquido seminale sottos
9. G IVF PLUS EN Medium for preparation and handling of gametes and for in vitro fertilisation SUPPLEMENTED WITH HSA G IVF PLUS is a bicarbonate buffered medium containing human serum albumin and gentamicin as an antibacterial agent Ready to use after equilibration at 37 C and 6 CO atmosphere Storage instructions and stability Store darkat 2 to 8 C G IVF PLUS is stable until the expiry date shown on the container labels and the LOT specific Certificate of Analysis Media bottles should not be stored after opening Discard excess media after completion of the procedure Directions for use The following is the general procedure for using G IVF PLUS For more information on the recommended use of G IVF PLUS please see Vitrolife G Series Manual The Manual is available on request from Vitrolife and may be obtained through the company s internet website www vitrolife com Directions for use in other languages can also be found at the website Sperm preparation Swim up migration method for semen samples with a good sperm count and motility Pipette 1 0 mL of semen into the tube Overlay 2 0 mL of equilibrated G IVF PLUS Place the swim up tube in an angled position in the incubator at 37 C and 6 CO for 30 60 minutes Aspirate the top medium without touching the underlaying semen and transfer to a clean tube Add 5 0 mL of G IVF PLUS mix and centrifuge for 10 minutes at 30
10. ation de G IVF PLUS veuillez consulter le Manuel Vitrolife G Series Ce manuel est disponible sur demande aupr s de Vitrolife et peut tre obtenu sur le site Internet de la soci t www vitrolife com Le mode d emploi est disponible dans d autres langues sur le site Internet Pr paration du sperme Methode de migration ascendante swim up pour les chantillons de sperme riche en spermatozo des ayant une bonne mobilit Pipetez 1 0 mL de sperme dans le tube Recouvrez de 2 0 mL de milieu G IVFM PLUS quilibr Placez le tube de migration swim up inclin dans l incubateur 37 Cet 6 de CO pendant 30 60 minutes Aspirez le milieu du dessus sans toucher la couche inf rieure de sperme puis transf rez dans un tube propre Ajoutez 5 0 mL de milieu G IVF PLUS m langez et centrifugez pendant 10 minutes 300 600 g Aspirez le surnageant et r alisez une nouvelle suspension du culot dans 5 0 mL de milieu G IVFTM PLUS quilibr puis r p tez la centrifugation Jetez le surnageant et r alisez une nouvelle suspension du culot dans 0 5 1 0 mL de G IVF PLUS quilibr D terminez la mobilit et la concentration des spermatozo des dans l chantillon lav Centrifugation sur gradient de densit Cette m thode peut tre utilis e pour laver tous les chantillons quelle que soit leur qualit M langez SpermGrad avec G IVF PLUS dans des tubes distincts pour obtenir des s
11. g zentrifugiert Pipettieren Sie anschlie end die beiden obersten Schichten ab achten Sie darauf dass keine R ckst nde an der Wand des R hrchens zur ckbleiben Transferieren Sie das Spermien Pellet mit einer m glichst geringen Menge der 90 igen L sung in ein steriles konisches und gesp ltes R hrchen mit 5 ml equilibriertem G IVF PLUS Zentrifugieren Sie bei 300 600 g 10 Minuten lang Entsorgen Sie den berstand und wiederholen Sie den Waschvorgang Resuspendieren Sie nach der zweiten W sche das Sediment in 1 ml equilibriertem G IVFM PLUS Die gewaschene Probe wird dann auf Motilit t und Konzentration gepr ft Verd nnen Sie die gewaschene Probe mit equilibriertem G IVFM PLUS zu einer endg ltigen Konzentration von 75 000 200 000 motiler Spermien mi Bereiten Sie gesp lte Inseminations Schalen mit 0 5 1 0 ml Spermienl sung vor und equilibrieren Sie sie mindestens 2 Stunden bei 37 C und 6 iger CO Atmosph re Identifizierung der Eizellen Sp len Sie die Eizellen zun chst in vorgew rmten und supplementierten G MOPS G MOPS PLUS und anschlie end in equilibriertem G IVF PLUS Das Waschen wird in mindestens zwei Schritten mit je 1 0 ml G IVF PLUS durchgef hrt Transferieren Sie die Eizellen in die Schalen mit dem equilibrierten G IVF PLUS und stellen Sie sie sofort zur ck in den Inkubator Insemination Transferieren Sie die Eizellen in die Inseminations Schalen und lassen Sie sie ber Nacht bei 3
12. he tube wall Transfer the sperm pellet with as little of the 90 solution as possible to a sterile conical rinsed tube with 5 mL of equilibrated G IVF PLUS Centrifuge for 10 minutes at 300 600g Discard the supernatant and repeat the wash After the second wash the pellet is re suspended in 1 mL of equilibrated G IVF PLUS The washed sample is then assessed for motility and concentration Dilute the washed sample with equilibrated G IVF PLUS to a final concentration of 75 000 200 000 motile sperm mL Prepare rinsed insemination dishes with 0 5 1 0 mL of sperm suspension and equilibrate at 37 C and 6 CO for at least 2 hours Oocyte identification Rinse the oocytes first in pre warmed supplemented G MOPS G MOPS PLUS and then in equilibrated G IVF PLUS The washing procedure should include at least two steps with 1 0 mL of G IVF PLUS in each step Transfer the oocytes to the dishes with equilibrated G IVFM PLUS and return the dishes to the incubator immediately Insemination Transfer the oocytes to insemination dishes and leave at 37 C and 6 CO over night Alternatively Add equilibrated sperm suspension to equilibrated dishes with the oocytes already present Itis recommended to inseminate in 0 5 1 mL volume without oil overlay If overlay is used droplets of at least 100 uL are recommended Specifications Sterile filtered SAL10 Mouse Embryo Assay 1 cell expanded blastocy
13. mita la vendita del presente dispositivo dietro prescrizione medica EN DE ES FR IT For technical support Technischer Support Asistencia t cnica Pour contacter l assistance technique Per l assistenza tecnica Americas Tel 1 866 848 7687 E mail support us fertility vitrolife com Europe Middle East Asia Pacific Africa Tel 46 31 721 80 20 E mail support fertility vitrolife com Vitrolife Sweden AB Box 9080 SE 400 92 G teborg Sweden Vitrolife Inc South Inca Street Englewood CO 80110 USA Vitrolife Pty Ltd 26 Tyne Street Carlton VIC 3053 Australia 0434 www vitrolife com M sranufactured by Vitrolife Sweden AB G teborg Sweden fe 2009 04 21 09 23 13
14. n 2 0 ml de G IVF PLUS equilibrado Coloque el tubo de swim up en posici n inclinada en la incubadora a 37 C y con CO al 6 durante 30 a 60 minutos Aspire el medio de la parte superior sin tocar el semen subyacente y transfi ralo a un tubo limpio A ada 5 0 ml de G IVF PLUS mezcle y centrifugue durante 10 minutos a 300 600 g Aspire el sobrenadante y vuelva a suspender el sedimento en 5 0 ml de G IVF PLUS equilibrado y repita la centrifugaci n Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender el sedimento en 0 5 1 0 ml de G IVF PLUS equilibrado Determine la motilidad y la concentraci n de espermatozoides en la muestra lavada M todo de centrifugaci n en gradiente de densidad Este m todo puede usarse para lavar todas las muestras independientemente de su calidad Mezcle SpermGrad con G IVF PLUS en tubos separados para obtener soluciones madre al 90 y 45 Para la soluci n madre al 90 mezcle 9 0 ml de SpermGrad con 1 0 ml de G IVF PLUS Para la soluci n madre al 45 mezcle 4 5 ml de SpermGrad con 5 5 ml de G IVF PLUS Mezcle bien las soluciones Cons rvelas en tubos est riles no t xicos o frascos de cultivo est riles para tejidos Etiqu telos y refrig relos hasta el momento de usarlos Equilibre las soluciones a 37 C y con CO al 6 antes de usarlas El gradiente de densidad debe colocarse en capas en un tubo de centrifuga c nico no t xico enjuagado y est ril A ada p
15. n m todo de ensayo conocido puede garantizar que los productos derivados de la sangre humana no transmitan agentes infecciosos Vitrolife recomienda que los medios se abran y utilicen solamente con t cnica as ptica Los riesgos de toxicidad para la reproducci n y el desarrollo que conllevan los medios de FIV incluidos los de Vitrolife no se han determinado y son inciertos No inyectable Atenci n Las leyes federales de los Estados Unidos restringen la venta de este dispositivo a los profesionales de la medicina o bajo su autorizaci n FR milieu pour la pr paration et la manipulation des gam tes et pour la f condation in vitro SUPPLEMENTE EN HSA G IVF PLUS est un milieu tamponn au bicarbonate contenant de l albumine s rique humaine et de la gentamicine comme agent antibact rien Pr t tre utilis apr s quilibrage 37 C et dans une atmosph re 6 de CO Instructions de stockage et stabilit A conserver l abri de la lumi re entre 2 et 8 C G IVF PLUS reste stable jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette du flacon et le certificat d analyse sp cifique au LOT Le flacon du milieu ne doit pas tre conserv apr s ouverture Jeter le milieu en exc s la fin de la proc dure GIVFPLUS26078 02 indd 2 Mode d emploi La proc dure g n rale d utilisation de G IVFM PLUS est d crite ci apr s Pour en savoir plus sur les recommandations d utilis
16. nageant et r p tez le lavage Apr s le second lavage r alisez une nouvelle suspension du culot dans 1 mL de milieu G IVF PLUS quilibr L chantillon lav est ensuite valu pour la concentration et la mobilit Diluez l chantillon lav dans G IVF PLUS quilibr raison d une concentration finale de 75 000 200 000 spermatozo des mobiles mL Pr parez les bo tes d ins mination rinc es avec 0 5 1 0 mL de suspension de sperme et quilibrez 37 C et 6 de CO pendant au moins 2 heures Identification des ovocytes Rincez d abord les ovocytes dans le milieu G MOPSTM suppl ment G MOPSM PLUS pr chauff puis dans le milieu G IVF PLUS quilibr La proc dure de lavage doit inclure au moins deux tapes avec 1 0 mL de G IVFM PLUS chaque tape Transf rez les ovocytes dans les bo tes avec le milieu G IVF PLUS quilibr et remettez imm diatement les bo tes dans l incubateur Ins mination Transf rez les ovocytes dans les bo tes d insemination et laissez les 37 C et 6 de CO pendant une nuit Sinon Ajoutez la suspension de sperme quilibr e dans les bo tes quilibr es contenant les ovocytes Il est recommand d inseminer dans un volume de 0 5 1 mL sans couche sup rieure d huile En cas d utilisation d une couche sup rieure d huile le volume des gouttes doit tre d au moins 100 pL Sp cifications Filtration sterile Niveau d assurance de la ste
17. ncluir al menos dos pasos con 1 0 ml de medio G IVF PLUS en cada uno Transfiera los ovocitos a las Vitrolife 2009 04 21 09 23 13 placas con medio G IVFM PLUS equilibrado y vuelva a poner inmediatamente las placas en la incubadora Inseminaci n Transfiera los ovocitos a las placas de inseminaci n y d jelas a 37 C y con CO al 6 hasta el dia siguiente Alternativamente A ada la suspensi n de espermatozoides equilibrada a las placas equilibradas con los ovocitos ya en su interior Se recomienda inseminar en un volumen de 0 5 1 ml sin cubrir con aceite Si se utiliza el recubrimiento de aceite se recomiendan que las gotas tengan un volumen de al menos 100 pl Especificaciones Filtrado est ril SAL 10 Ensayo en embri n de rat n 1 c lula de blastocistos expandidos el d a 5 280 Endotoxinas bacterianas ensayo LAL UE mI lt 0 25 Los resultados de los ensayos de cada LOT aparecen en el certificado de an lisis suministrado con cada entrega Precauciones y adverten No utilice G IVF PLUS si tiene aspecto turbio S G IVF PLUS contiene alb mina s rica humana y gentamicina Atenci n Todos los productos hemoderivados deben tratarse como potencialmente infecciosos El material original del que deriva este producto se mostr negativo en los ensayos de anticuerpos frente a VIH HBc VHC y HTLV 1 II y no reactivo frente a HbsAg ARN de VHC ARN de VIH 1 y sifilis Ning
18. olutions m res de 90 et 45 Pour une solution m re de 90 m langez 9 0 mL de SpermGrad avec 1 0 mL de G IVF PLUS Pour une solution m re de 45 m langez 4 5 mL de SpermGrad avec 5 5 mL de G IVF PLUS M langez les solutions soigneusement Conservez les solutions dans des tubes essai st riles et non toxiques ou dans des flacons st riles culture tissulaire Collez une tiquette et r frig rez jusqu utilisation Laissez les solutions s amp quilibrer 37 C et 6 de CO avant de les utiliser Le gradient de densit doit tre dispos en couche dans un tube conique st rile non toxique et lav pour centrifugeuse Pipetez 1 5 mL de la solution 90 dans le tube puis pipetez lentement 1 5 mL de solution 45 par dessus Pour finir d posez d licatement une couche de sperme au dessus des deux solutions Si l chantillon de sperme est de faible qualit il est possible de r aliser une couche de 2 mL maximum de sperme au dessus du gradient Une quantit excessive de sperme entra ne une mauvaise s paration Le tube est ensuite centrifug pendant 10 20 minutes 300 600 g Retirez les deux couches sup rieures en veillant ne laisser aucun r sidu sur la paroi du tube Transf rez le culot de sperme avec aussi peu que possible de la solution 90 dans un tube conique st rile et rinc contenant 5 mL de G IVF PLUS quilibr Centrifugez pendant 10 minutes 300 600 g Jetez le sur
19. rimero con la pipeta 1 5 ml de soluci n al 90 al tubo despu s pipetee lentamente 1 5 ml de soluci n al 45 encima de lo anterior Finalmente aplique con precauci n una capa de semen en la parte superior Si la muestra de semen es de mala calidad se pueden colocar hasta 2 ml de semen encima del gradiente A adir demasiado semen dar lugar a una mala separaci n El tubo se centrifuga entonces durante 10 20 minutos a 300 600 g Retire las dos capas superiores y tenga cuidado de no dejar ning n residuo en la pared del tubo Transfiera el sedimento de esperma con el minimo posible de la soluci n al 90 a un tubo c nico enjuagado y est ril con 5 ml de G IVF PLUS equilibrado Centrifugue durante 10 minutos a 300 600 g Deseche el sobrenadante y repita el lavado Despu s del segundo lavado el sedimento se suspende de nuevo en 1 ml de G IVF PLUS equilibrado La motilidad y la concentraci n de la muestra lavada se eval an a continuaci n Diluya la muestra lavada con medio G IVF PLUS equilibrado a una concentraci n final de 75 000 a 200 000 espermatozoides m viles ml Prepare unas placas enjuagadas de inseminaci n con 0 5 a 1 0 ml de la suspensi n de espermatozoides y equilibrelas a 37 C y con CO al 6 durante al menos 2 horas Identificaci n de ovocitos Enjuague los ovocitos primero en G MOPS enriquecido G MOPS PLUS precalentado y despu s en G IVF PLUS equilibrado El procedimiento de lavado debe i
20. st on day 5 280 Bacterial endotoxins LAL assay EU mL lt 0 25 LOT specific test results are available on the Certificate of Analysis provided with each delivery Precautions and warnings Do not use G IVFM PLUS if it appears cloudy G IVF PLUS contains human serum albumin and gentamicin Caution All blood products should be treated as potentially infectious Source material from which this product was derived was found negative when tested for antibodies to HIV HBc HCV and HTLV I II and non reactive for HbsAg HCV RNA and HIV 1 RNA and syphilis No known test methods can offer assurance that products derived from human blood will not transmit infectious agents Vitrolife recommends that media be opened and used only with aseptic technique The risk of reproductive toxicity and developmental toxicity for IVF media including Vitrolife s IVF media have not been determined and are uncertain Not for injection Caution Federal US law restricts this device to sale by or on the order of a physician DE zur Vorbereitung und Handhabung von Gameten und f r die In Vitro Fertilisation SUPPLEMENTIERT MIT HSA G IVF PLUS ist ein Bikarbonat gepuffertes Medium und enth lt humanes Serum Albumin und Gentamicin als Antibiotikum Zur Anwendung nach einer Equilibrierung bei 37 C und 6 iger CO Atmosph re Lagerung und Haltbarkeit Vor Licht gesch tzt bei 2 bis 8 C lagern G IVFM PLUS ist bis zum
21. tand und resuspendieren Sie das Sediment in 0 5 1 0 ml equilibriertem G IVF PLUS Bestimmen Sie Motilit t und Konzentration der Spermien in der gewaschenen Probe Dichtegradientenzentrifugation Diese Methode kann zur Waschung aller Proben und unabh ngig von deren Qualit t angewendet werden Mischen Sie SpermGrad mit G IVFTM PLUS in separaten R hrchen um eine 90 ige und eine 45 ige Vorratsl sung zu erhalten Mischen Sie f r eine 90 ige L sung 9 0 ml SpermGrad mit 1 0 ml G IVFM PLUS Mischen Sie f r eine 45 ige L sung 4 5 ml SpermGrad mit 5 5 ml G IVF PLUS Mischen Sie die L sungen sorgf ltig Lagern Sie die fertigen Vorratsl sungen in sterilen R hrchen oder Gef en f r Gewebekulturen Beschriften Sie die Gef e und bewahren Sie sie bis zum Gebrauch k hl auf Equilibrieren Sie die L sungen vor der Verwendung bei 37 C und 6 iger CO Atmosph re Der Dichtegradient sollte in einem sterilen und gesp lten konischen nicht toxischen Zentrifugenr hrchen angelegt werden Pipettieren Sie zuerst 1 5 ml der 90 igen L sung in das R hrchen und geben Sie dann langsam 1 5 ml der 45 igen L sung darauf Anschlie end wird das Sperma vorsichtig obenauf geschichtet Weist die Spermaprobe eine schlechte Qualit t auf k nnen bis zu 2 ml Sperma auf den Gradienten geschichtet werden Wird zu viel Sperma hinzugef gt f hrt dies zu einer schlechten Separation Dann wird das R hrchen 10 20 Minuten lang bei 300 600
22. tante e trasferirlo in una provetta pulita Aggiungere 5 0 mL di G IVF PLUS omogeneizzare e centrifugare per 10 minuti a 300 600g Aspirare il supernatante e risospendere il pellet in 5 0 mL di G IVF PLUS equilibrato quindi ripetere la centrifugazione Gettare il supernatante e risospendere il pellet in 0 5 1 0 mL di G IVF PLUS equilibrato Determinare la mobilit e la concentrazione degli spermatozoi nel campione lavato Metodo di centrifugazione su gradiente di densit Questo metodo pu essere utilizzato per lavare tutti i campioni indipendentemente dalla qualit Miscelare SpermGrad con G IVF PLUS in provette separate per ottenere soluzioni base al 90 e 45 Per la soluzione base al 90 miscelare 9 0 mL di SpermGrad con 1 0 mL di G IVF PLUS Per la soluzione base al 45 miscelare 4 5 mL di SpermGrad con 5 5 mL di G IVF PLUS Omogeneizzare le soluzioni Conservare in provette sterili atossiche oppure in flaconi sterili per coltura Etichettare e tenere al freddo fino all uso Equilibrare le soluzioni a 37 C e al 6 CO prima dell uso Stratificare il gradiente di densit in una provetta sterile conica atossica risciacquata per centrifuga Pipettare 1 5 mL di soluzione al 90 nella provetta quindi sovrapporre lentamente 1 5 mL di soluzione al 45 Infine stratificare delicatamente il liquido seminale Se i campioni di liquido seminale sono di mediocre qualit possibile stratificare fino a
Download Pdf Manuals
Related Search