C-Peptide ELISA Kit
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1. 8 2 11 Die Testergebnisse sollten zusammen mit weiteren Informationen beurteilt werden die aus epidemiologischen Studien klinischen Patientenbeurteilungen und anderen diagnostischen Verfahren verf gbar sind 9 PROBENENTNAHME UND VORBEREITUNG Dako C Peptide ist f r die C Peptide Bestimmung in humanem Serum und Plasma bestimmt 9 1 SERUM Blutproben ber Venenpunktur sammeln auf nat rliche Weise gerinnen lassen und das Serum durch Zentrifugation von den Zellen trennen Die Proben k nnen entweder bis zu 3 Tagen bei 2 8 oder bis zu 28 Tagen bei 20 au fbewahrt werden Proben bei Bedarf aliquotieren um ein wiederholtes Auftauen und Einfrieren zu vermeiden Beim Auftauen eingefrorener Proben darf die Raumtemperatur nicht berschritten werden 9 2 PLASMA Blutproben ber Venenpunktur in R hrchen sammeln die als Antikoagulans Heparin oder EDTA enthalten Plasmafraktion ber einen Zentrifugationsschritt abtrennen und bis zu 3 Tagen bei 2 8 oder bis zu 28 Tagen bei 20 la gern Proben bei Bedarf aliquotieren um ein wiederholtes Auftauen und Einfrieren zu vermeiden Beim Auftauen eingefrorener Proben darf die Raumtemperatur nicht berschritten werden 10 TESTDURCHF HRUNG BEACHTEN SIE BITTE DIE TECHNISCHEN VORSICHTSMASSNAHMEN IN ABSCHNITT 8 2 BEVOR SIE DIESEN TEST DURCHF HREN 10 1 ALLGEMEINE HINWEISE 10 1 1 Die Inkubationszeiten sind genau einzuhalten d h es muss gew hrleistet sein dass die einzelnen Reagen2. 8 1 4 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 8 1 5 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 8 1 6 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations 8 1 7 Safety data sheet available for professional user on request 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 6 43 8 2 TECHNICAL PRECAUTIONS 8 2 1 Components must not be used after the expiry date printed on the labels Do not mix different lots of reagents 8 2 2 Test performance will be adversely affected if reagents are incorrectly diluted modified or stored under conditions other than those as detailed in Section 5 2 8 2 3 Avoid contamination of reagents 8 2 4 Every effort should be made to ensure that no cross contamination occurs between wells It is essential that enzyme conjugated monoclonal antibody is not allowed to contaminate reagents and equipment A separate pipette should be reserved for dispensing the conjugate and care should be taken to avoid touching or splashing the rim of the well Conjugate allowed to dry on to the rim of the well may adversely affect the performance of the test 8 2 5 All equipment including washers and liquid handling devices must be free of microbial contamination and be correctly calibrated and maintained according to the manufacturer s instructions 8 2 6 Do not store unused working strength wash buffer
3. C peptide measurement is used for the following clinical applications 1 To assess the residual B cell function in patients treated with insulin and to distinguish between type 1 diabetes and type 2 diabetes Of particular interest is its use to indicate the need for progression to insulin therapy in type 2 diabetes 2 The diagnosis of factitious hypoglycaemia The surreptitious administration of insulin causes high insulin levels in the absence of elevated C peptide concentrations 3 Insulinoma diagnosis especially in patients treated with insulin C peptide measurement is used in insulin suppression tests in euglycaemic patients with suspected insulinoma Elevated C peptide levels in this test are indicative of insulinoma 4 As a marker for residual pancreatic tissue after pancreatectomy In the case of insulinoma C peptide measurement may be used to detect metastasis and the response to therapy It may also be used to monitor the progress of pancreas or islet cell transplantation Until recently routine C peptide measurement has only been possible by radioimmunoassay although HPLC methods have been described in the literature Dako C peptide is an enzyme immunoassay for the quantitative determination of C peptide 3 PRINCIPLE OF THE TEST Dako C peptide is an ELISA based on two monoclonal antibodies Simultaneous incubation of specimen and enzyme labelled antibody in a microplate microwell coated with a specific anti C pept
4. 13 mL Stop Solution 0 46 mol L sulphuric acid 5 2 RECONSTITUTION STORAGE AND RE USE OF KIT COMPONENTS Dako C peptide allows for testing of up to 86 batches of specimens during any 8 week period In order to ensure optimal kit performance it is important that all reconstituted and unused kit components are stored according to the following instructions 2 1 Monoclonal Antibody Coated Microwells MICROTITRATION PLATE o Open the plate pouch by cutting along the seal Break off the required number of microwell strips and relocate them into the frame Use only complete strips Place unused microwells in the resealable plastic pouch with the dessicant carefully reseal the pouch and store at 2 8 Microwells may be used for up to 8 weeks after initial opening provided they are stored in this manner 2 2 Calibrator 1 a Ready to use Store unused Calibrator 1 at 2 8 Calibrator 1 may be used for up to 8 weeks at 2 8 after initial opening provided it is stored in this manner 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 4 43 523 Calibrators 2 5 Reconstitute the lyophilised calibrators with 1 mL of fresh distilled or deionised water Discard the stoppers after reconstitution Allow to stand for 10 15 minutes at room temperature mix gently before use Aliquot and store reconstituted calibrators upright at 2 8 for up to 5 days or 20 for up to 8 weeks 5 2 4 Conjugate Concentrate and Conjugate Diluent CONJUGATE C
5. Molekulargewichts des C Peptides von 3020 Da berechnet angegeben Die genauen Werte werden in beiden Ma einheiten auf dem der Packung beiliegenden Werteblatt angegeben und m ssen stets f r die Kalibrierung des Tests verwendet werden Die ungef hren Werte sind Kalibrator ng mL pmol L CONJUGATE CONCENTRATE 2 5 mL Konjugatkonzentrat Monoklonaler Anti C Peptid Antik rper gegen Meerettichperoxidase Horseradish Peroxidase HRP konjugiert in einer organischen Pufferl sung die Protein anorganische Salze einen roten Farbstoff und einen antibakteriellen Wirkstoff enth lt CONJUGATE DILUENT 10 mL Konjugatverd nnungsmittel Organische Pufferl sung mit anorganischen Salzen Protein und antibakteriellem Wirkstoff WASH BUFFER 15x 28 mL Waschpufferkonzentrat 15x Organische Pufferl sung mit Detergenz anorganischen Salzen und antibakteriellem Wirkstoff 13 mL Substrat stabilisiertes Peroxyd und 3 3 5 5 Tetramethylbenzidin TMB in einer Verd nnungs pufferl sung TMB wird als nicht karzinogen betrachtet Trotzdem wird empfohlen Schtuzkleidung zu tragen um einen direkten Kontakt zu vermeiden o o o 3 2 m 4 w STOP SOLUTION 13 mL Stoppl sung 0 46 mol L Schwefels ure oa 2 REKONSTITUTION LAGERUNG UND WIEDERVERWENDUNG DER TESTKIT BESTANDTEILE Mit dem Dako C Peptide Testkit k nnen bis zu 86 Patientenproben in einem Zeitraum von 8 Wochen getestet werden Um die optimale Leistungsf hig
6. calcul e en pourcentage Peptide C ajout ng mL Resultat ng mL Correlation 14 2 3 R activit crois e La sp cificit du dosage a t valu e en tudiant la r action crois e avec des peptides et des hormones apparent s de part leur structure au peptide C La r activit crois e en a t calcul e a partir de la masse de peptide C et de la masse de la mol cule pr sentant une r action crois e et donnant le m me signal Mol cule a analyser R activit crois e Proinsuline humaine intacte biosynth tique Proinsuline 32 33 Insuline humaine L insuline a une concentration de 240 000 pmol L tait une tait en dessous du seuil de d rection du peptide C Les concentrations je n de proinsulines sont de l ordre de 1 2 des concentrations en peptide C La r activit crois e n est donc pas cliniquement significative pour ces mol cules 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 27 43 1 VERWENDUNGSZWECK Dako C Peptide ELISA Kit ist ein Enzymimmunassay ELISA zur quantitativen Bestimmung von C Peptid in humanem Serum und Plasma 2 ZUSAMMENFASSUNG C Peptide wird bei der Verarbeitung von Insulin in den Zellen des Pankreas gebildet Proinsulin wird dort proteolytisch in quimolare Mengen von ausgereiftem Insulin und C Peptide gespalten die beide ber die Pfortader in den Blutkreislauf sezerniert werden Das C Peptide das nach seiner Funktion der Verbindung
7. d un agitateur secoueur veuillez contacter votre filiale ou votre distributeur local e Dako 10 2 1 Ajout de calibrateurs d chantillons et de contr les Installer le nombre de barrettes de microtitration appropri sur le support des micropuits en fonction du nombre de comptages requis Pipeter 25 uL de calibrateur d chantillon ou de contr le dans les micropuits Pour les calibrateurs il convient d utiliser deux micropuits Veiller noter l emplacement de chaque chantillon de patient sur la plaque de microtitration 10 2 2 Ajout de conjugu Une fois que tous les calibrateurs chantillons ou contr les ont t ajout s ajouter 100 uL de conjugu dans chaque micropuits Eviter toute contamination crois e entre les micropuits 10 2 3 Premi re incubation Placer la plaque de microtitration sur l agitateur secoueur de plaque et agiter pendant les 60 minutes de l incubation une temp rature comprise entre 20 et 30 10 2 4 Lavage des micropuits Laver les micropuits l aide de tampon de lavage fra chement dos voir la Section 5 2 5 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 21 43 La technique de lavage utilisee a un impact majeur sur les performances du test Veiller a compl tement remplir avec au moins 250 pL de tampon de lavage fra chement dose puis vider les puits Veiller imp rativement a effectuer trois cycles de lavage par des techniques automatiques ou manuelles Lavage manuel En
8. in Abbildung 1 dargestellt Abbildung 1 Testprinzip des Dako C Peptide Tests Monokonaler Substrat Anti C Peptide Antik rper C Peptide C Peptide C Peptide gt Anti C Peptide HRP Farbe Konjugat A DEFINITIONEN Erl uterung der Symbole Bestellnummer MN Gebrauchsanweisung beachten N Inhalt ausreichend f r n Ans tze mal Hersteller IVD In Vitro Diagnostikum te Verwendbar bis Chargenbezeichnung o 3 N Zul ssiger Temperaturbereich Wasser zusetzen GELIEFERTES REAGENZ V 96 Jeder Testkit enth lt gen gend Material f r 96 Bestimmungen a Die Haltbarkeit des Testkits ist auf dem u eren Verpackungsetikett vermerkt 5 1 INHALT DES DAKO C PEPTIDE TESTKITS a Eine Gebrauchsanweisung Eine x96 Kavit tenplatte mit 12 8 Kavit tenstreifen die mit Anti C Peptide Antik rper der monoklonalen Maus beschichtet sind Eine wiederverschlie bare Plastiktasche 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 29 43 zur Lagerung unbenutzter Kavit ten ist ebenfalls mitgeliefert Jeweils eine Flasche der folgenden Reagenzien sofern nicht anders angegeben 5 mL Kalibrator Proteinmatrix mit antibakteriellem Wirkstoff Kalibratoren 2 5 lyophilisiert Synthetisches C Peptide in einer mit einem antibakteriellen Wirkstoff versehenen Proteinmatrix Der Test ist gegen International Reference Reagent IRR 84 510 kalibriert und die Werte werden sowohl in ng mL als auch in SI Einheiten pmol L anhand des
9. r s comme potentiellement infectieux et manipul s en cons quence 8 1 3 S assurer que les coupures corchures ou l sions de la peau soient bien prot g es pour viter l autoinoculation ou tout contact avec les muqueuses 8 1 4 Comme avec tout produit d origine biologique respecter les proc dures de manipulation appropri es 8 1 5 Porter un quipement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 19 43 8 1 7 8 2 8 2 1 8 2 2 8 2 3 8 2 4 8 2 5 8 2 6 8 2 7 8 2 8 8 2 9 8 2 10 8 2 11 9 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Des Fiches techniques de s curit MSDS sont disponibles sur demande pour les utilisateurs professionnels PRECAUTIONS TECHNIQUES Ne pas utiliser les l ments du kit apr s la date d expiration indiqu e sur l tiquette Ne pas m langer diff rents lots de r actifs Les performances du test seront alt r es si les r actifs sont dilu s de fa on incorrecte modifies ou stock s dans des conditions autres que celles d crites dans la section 5 2 Eviter toute contamination des r actifs Toujours s assurer qu aucune contamination ne s est produite entre les puits Il est important qu il n y ait aucune contamination entre l anticorps monoclonal conjugu l enzyme et les r actifs ou le mat riel Une pipette
10. 1 Detection limit 0 09 ng mL 30 pmol L 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 12 43 14 2 ACCURACY 14 2 1 Linearity Three patient samples heparin plasma with high analyte concentrations were diluted with calibrator 1 Sample Dilution Factor Result ng mL Observed Expected 7 6 3 8 100 2 0 105 8 0 4 1 103 2 1 105 8 1 4 1 101 2 1 104 Three plasma sample pools with low analyte concentrations were spiked with different concentrations of C peptide and the recovery calculated as a percentage Added C peptide ng mL Result ng mL Recovery Sample pool 1 Sample pool 1 1 9 Sample pool 1 4 3 Sample pool 1 7 8 14 2 2 Recovery Sample pool 2 Sample pool 2 1 9 Sample pool 2 4 3 Sample pool 2 7 8 Sample pool 3 Sample pool 3 1 9 Sample pool 3 4 3 Sample pool 3 7 8 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 13 43 14 2 3 Cross reactivity The specificity of the assay was assessed by observing cross reaction with structurally related peptides and hormones Cross reactivity was calculated from the mass of C peptide and the mass of cross reactant giving the same assay signal Intact human proinsulin biosynthetic 32 33 split proinsulin Human insulin Insulin at a concentration of 240 000 pmol L was below the detection limit of the C peptide assay Fasting concentrations of intact and split proinsulins are typically only 1 2 of C peptide concentrations
11. CKJ 2009 06 17 p 23 43 11 3 COURBE D ETALONNAGE TYPIQUE Figure 1 Courbe d talonnage r alis e avec le kit C Peptide ng mL Absorbance Au C peptide Conc ng mL Remarque Ce graphique n est produit qu a titre d exemple et ne doit pas tre utilis pour la d termination des r sultats 11 4 DILUTION DES ECHANTILLONS TRES CONCENTRES Les chantillons dont les concentrations de peptide C sont sup rieures a celle du calibrateur le plus concentr doivent tre dilu s dans une proportion de 1 4 v v l aide du calibrateur 1 avant de proc der au dosage 12 LIMITES DU TEST 12 1 INTERFERENCES Les valuations cliniques indiquent que de fortes concentrations en lipides ou bilirubine dans les chantillons n interferent pas sur les r sultats du kit C Peptide I n y a pas d interference li e au facteur rhumato de ou des anticorps h t rophiles 12 2 HEMOLYSE Les chantillons tr s fortement h molys s ne doivent pas tre utilis s 12 3 EFFET DE ZONE Dans des syst mes de dosage immunologique de type sandwich la courbe de r ponse peut s inverser en pr sence de tr s forte concentration en peptide C Dans le test Peptide C cet effet se produit des concentrations sup rieures 120 ng ml 40 000 pmol l en peptide C 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 24 43 12 4 SERUM ET PLASMA Le s rum et le plasma peuvent tre utilis s Pendant l valuation clinique aucune differenc
12. cas de lavage manuel des micropuits aspirer ou faire tomber le contenu des micropuits Utiliser ensuite du tampon de lavage fraichement dos pour remplir compl tement les micropuits puis les vider entierement Entre chaque tape du processus de lavage veiller a ter tout tampon de lavage restant en tapotant les micropuits renvers s sur un morceau de papier absorbant propre R p ter deux fois ce processus et tournant la plaque apr s chaque lavage afin de commencer dans la direction oppos e pour 3 lavages au total L efficacite d un lavage manuel est accrue si le tampon de lavage est introduit de fagon inclin e afin de produire un tourbillon dans les micropuits Apr s le dernier lavage la plaque doit tre renvers e et tapot e sur du papier absorbant afin de faire dispara tre toute trace de tampon de lavage Lavage automatique Veiller programmer 3 cycles de lavage sur les appareils de lavage automatiques Les tapes d impr gnation sont inutiles Les appareils de lavage doivent tre correctement talonn s afin d assurer un remplissage et un vidage complets des micropuits entre chaque lavage Apr s le dernier lavage la plaque doit tre renvers e et tapot e sur du papier absorbant pour faire disparaitre toute trace de tampon de lavage 10 2 5 Addition du substrat et deuxieme incubation Ajouter 100 uL de solution de substrat chaque micropuits Placer la plaque de microtitration sur l agitateur secoueur de plaqu
13. de type 2 Ces dosages s av rent particuli rement utiles pour d terminer s il convient de passer une insulino th rapie en cas de diab te de type 2 2 Diagnostic de l hypoglyc mie artificielle En cas de surdosage d insuline on note un haut niveau en insuline mais pas en peptide C 3 Diagnostic de l insulinome notamment chez les patients trait s l insuline Les dosages de peptide C sont utilises dans le cadre des tests de freinage de la s cr tion d insuline chez les patients euglyc miques en cas de suspicion d insulinome Des niveaux lev s de peptide C r v l s par ce test indiquent un insulinome 4 Marqueur de tissus r siduel pancr atique apr s une pancr atectomie Dans le cas d insulinome les mesures en peptide C permettent de d tecter des m tastases et d valuer les r ponses a une th rapie Ces mesures peuvent galement servir suivre l volution d une greffe du pancr as ou d ilots pancr atiques Jusqu une date r cente les mesures du peptide C n taient possibles que dans le cadre d un dosage radioimmunologique m me si des m thodes par chromatographie liquide haute performance ont t d crites Le kit Dako C Peptide est un test immunoenzymatique pour le dosage du peptide C 3 PRINCIPE DU TEST Le kit Dako C Peptide est un test ELISA bas sur l utilisation de deux anticorps monoclonaux L incubation simultan e de l chantillon et d un anticorps marqu avec une enzyme dans
14. distincte doit tre utilis e pour la distribution du conjugu Prendre soin de ne pas toucher ou clabousser le rebord des puits avec le conjugu Un conjugu qui a s ch sur le rebord du puits peut interf rer sur la performance du test Tout mat riel de laboratoire y compris l automate de lavage et de manutention des liquides doit tre d pourvu de contamination microbienne calibr amp correctement et entretenu conform ment aux directives du fabricant Ne pas conserver le tampon de lavage fra chement dose inutilis en vue d une utilisation future Lorsqu ils ne sont pas utilis s les r servoirs tampon de lavage doivent tre rinc s avec de l eau d sionis e ou distill e puis s cher l air libre Ne pas r utiliser les micropuits Ne pas utiliser de substrat pr sentant une coloration bleue avant l ajout dans les micropuits Prot ger le substrat de la lumi re ll est recommand de tester les chantillons en double jusqu ce que le personnel de laboratoire soit enti rement familiaris avec le test Les r sultats des tests doivent tre interpr t s en se basant galement sur les etudes pid miologiques et les valuations cliniques du patient et sur d autres procedures diagnostiques PRELEVEMENT ET PREPARATION DES ECHANTILLONS Le kit Dako C Peptide a t con u pour tre utilis sur du s rum et du plasma humain 9 1 SERUM Pr lever le sang par ponction veineuse dans des tube
15. for 10 minutes at 20 30 Note If using a plate reader with a maximum absorbance of 2 2 AU reduce the substrate incubation time to 7 minutes 10 2 6 Stop the Reaction Add 100 uL stop solution to each microwell allowing the same time interval between each strip as in Section 10 2 5 Ensure thorough mixing in the microwells 10 3 READING THE TEST RESULTS 10 3 1 PHOTOMETRIC READING The plate must be read photometrically within 30 minutes after addition of the stop solution Protect the plate from light until ready to read Mix the contents of the microwells and read the absorbance of each microwell using a suitable spectrophotometer or EIA plate reader set at 450 nm Ensure that the bottoms of the microwells are clean before reading and check that no foreign matter is present in the microwells The reader should be blanked on air ie with no plate in the carriage before the plate is scanned Alternatively if the spectrophotometer or EIA plate reader allows for the use of a reference wavelength at 620 to 650 nm dual wavelength reading should be performed which will eliminate any potential interference caused by aberrations such as dirt or marks on the optical surface of the microwells 10 4 SUMMARY OF DAKO C PEPTIDE ASSAY PROCEDURE Ensure all reagents reach room temperature 15 30 C before use Add 25 uL sample or calibrator Add 100 pL of conjugate 4 Incubate for 60 minutes with shaking at 20 30 C Wash x3 Add 100 u
16. for subsequent use When not in use wash buffer reservoirs should be rinsed in deionised or distilled water and left to dry 8 2 7 Microwells cannot be re used 8 2 8 Do not use substrate showing a blue colour prior to its addition to the microwells 8 2 9 Protect substrate from light 8 2 10 It is recommended that samples are run in duplicate until the laboratory is totally familiar with the assay 8 2 11 Test results should be interpreted in conjunction with information available from epidemiological studies clinical assessment of the patient and other diagnostic procedures 9 COLLECTION AND PREPARATION OF SPECIMENS Dako C peptide has been designed for use with human serum and plasma 9 1 SERUM Collect blood by venepuncture into tubes without additives allow to clot and separate the serum from cells by centrifugation Store samples for up to 3 days at 2 8 or for up to 28 days at 20 Aliquot if necessary to avoid rep eated freezing and thawing of samples and do not thaw frozen samples by heating above ambient temperature 9 2 PLASMA Collect blood by venepuncture into tubes containing heparin or EDTA as anticoagulant Centrifuge separate the plasma fraction and store for up to 3 days at 2 8 or for up to 28 days at 20 Aliquot if necessary to avoid re peated freezing and thawing of samples and do not thaw frozen samples by heating above ambient temperature 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 7 43
17. une microplaque sensibilis e avec un anticorps anti peptide C entra ne la formation d un complexe Un seul lavage limine l anticorps marqu non fix Le conjugu li est d tect par la r action avec le substrat de l enzyme t tram thyl 3 3 5 5 benzidine TMB La r action est arr t e par l ajout d acide pour donner un r sultat colorim trique qui est lu spectrophotom triquement L utilisation dans le test de calibrateurs dont la concentration en peptide C est connue permet de r aliser une courbe d talonnage partir 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 15 43 de laquelle la concentration en peptide C des chantillons peut tre d termin e Le principe du dosage est sch matis ci dessous Figure 1 Figure 1 Principe du dosage de C peptide avec le kit Dako Anticorps Monoclonal anti C peptide Substrat C peptide C peptide C peptide Anticorps anti C Peptide conjugu la P roxydase Produit color X HA A DEFINITIONS Explication des symboles R f rence du catalogue ij Consulter les instructions d utilisation N Contenu suffisant pour lt N gt tests mal Fabricant Dispositif m dical de diagnostic n vitro be Utiliser jusqu a Code du lot Limites de temp rature Verser de l eau REACTIFS FOURNIS VW 96 Chaque kit contient suffisamment de r actifs pour la r alisation de 96 tests a La date de p remption du kit est indiqu e sur l tiquette ext rieure
18. von A und B Kette des Insulins im Proinsulinmolek l benannt wurde besteht aus einer einzelnen Polypeptidkette mit 31 Aminos uren MG 3020 Da und hat im Gegensatz zu Insulin keine bekannte physiologische Funktion Aufgrund der im Vergleich zu Insulin l ngeren Halbwertszeit Faktor 2 5 sind die C Peptide Konzentrationen im peripheren Blutkreislauf h her und weisen geringere Schwankungen auf als Insulin Deshalb k nnen die C Peptide Konzentrationen im Plasma die Insulinsekretion aus dem Pankreas mit gr erer Zuverl ssigkeit widerspiegeln als die Insulinkonzentration selbst Die C Peptide Bestimmung wird f r folgende klinischen Anwendungen durchgef hrt 1 Zur Beurteilung der noch vorhandenen 8 Zellfunktion bei Patienten die mit Insulin behandelt wurden und zur Unterscheidung zwischen Diabetis Typ 1 und Typ 2 Der C Peptide Test ist bei der Entscheidung zur Anwendung der Insulintherapie bei Diabetis Typ 2 von besonderem Interesse 2 Zur Diagnose einer k nstlichen Hypoglyk mie Eine unerlaubte Insulinverabreichung f hrt zu hohen Insulinkonzentrationen ohne dass die C Peptide Konzentrationen erh ht werden 3 Zur Insulinomdiagnose insbesondere bei mit Insulin behandelten Patienten Die C Peptide Bestimmung wird bei euglykamischen Patienten mit Verdacht auf Insulinom in Insulin Suppressionstests eingesetzt Sind die C Peptide Konzentrationen in diesem Test erh ht weist dies auf ein Insulinom hin 4 Als Indikator f r noc
19. 10 TEST PROCEDURE PLEASE REFER TO SECTION 8 2 TECHNICAL PRECAUTIONS BEFORE PERFORMING TEST PROCEDURE 10 1 GENERAL NOTES 10 1 1 Ensure that within any run all the reaction times are the same by adding reagents in the same timed sequence 10 1 2 Pipette into the reagent trough only as much liquid as necessary for any assay Do not return excess reagents to bottles after use 10 2 ASSAY PROCEDURE NOTE The assay procedure requires the use of a microtitration plate shaker For information on suitability of shakers contact your local Dako subsidiary or distributor 10 2 1 Calibrator Specimen and Control Addition Locate the required number of microtitration strips into the microwell holder according to the number of determinations required Pipette 25 uL of calibrator specimen or control into the microwells Duplicate microwells should be used for the calibrators The position of each patient sample on the microtitration plate must be recorded 10 2 2 Conjugate Addition After addition of all calibrators specimens or controls add 100 uL of conjugate into each microwell Avoid cross contamination between microwells 10 2 3 First Incubation Place the microtitration plate on the plate shaker and shake during the incubation at 20 30 for 60 minutes 10 2 4 Washing the Microwells The microwells should be washed using working strength wash buffer Section 5 2 5 The washing technique is critical to the test performance and s
20. 467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 17 43 5 2 2 Calibrateur 1 Pr t l emploi Conserver le calibrateur 1 inutilis une temp rature comprise entre 2 et 8 Le calibrateur 1 peut tre utilis une temp rature comprise entre 2 et 8 au cours des 8 semaines suivant la premi re ouverture condition qu il ait t conserv selon les instructions 523 Calibrateurs 2 5 Reconstituer les calibrateurs lyophilis s l aide d 1 mL d eau fra chement d sionis e ou distill e Une fois la reconstitution effectu e jeter les bouchons Laisser reposer 10 15 minutes temp rature ambiante puis m langer doucement avant utilisation Aliquoter et stocker les calibrateurs reconstitu s en position verticale pendant 5 jours au maximum une temp rature comprise entre 2 et 8 ou pendant 8 semaines au maximum une temp rature de 20 5 2 4 Conjugu concentr et diluant conjugu CONJUGATE CONCENTRATE CONJUGATE DILUENT Diluer le conjugu concentr 2 5 mL en y ajoutant du diluant conjugu 10 mL La quantit de produit obtenue permet de traiter 96 micropuits M langer doucement avant utilisation Conserver le conjugu fraichement dos a une temp rature comprise entre 2 et 8 pendant 8 semaines au maximum 5 2 5 Tampon de lavage concentr Fourni concentr 15x Pr parer une solution de lavage fraichement dos e en ajoutant 1 unit de tampon de lavage a 14 unit s d eau d sionis e o
21. 9 CE C Peptide ELISA Kit Code K6220 An enzyme immunoassay for the quantitative measurement of C peptide in human clinical samples This kit contains reagents for 96 test wells Un test enzymatique pour une mesure quantitative du peptide C sur des chantillons humains La trousse contient des r actifs pour 96 puits de test Enzymimmuntest zur quantitativen Bestimmung von C Peptide In Humanen Proben Dieser Kit enth lt Reagenzien f r 96 Vertiefungen 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 1 43 1 INTENDED USE Dako C peptide ELISA Kit is an enzyme linked immunosorbent assay ELISA for the quantitative measurement of C peptide in human serum and plasma 2 SUMMARY C peptide is formed as a by product of the processing of insulin in the pancreatic B cell Proinsulin is cleaved proteolytically to form equimolar amounts of mature insulin and C peptide which are released into the portal circulation So called because it connects the A and B chains of insulin in the proinsulin molecule C peptide is a single chain of 31 amino acids mol wt 3020 D and unlike insulin has no known physiological function Because C peptide has a longer half life than insulin 2 5 times longer higher concentrations of C peptide persist in the peripheral circulation and these levels fluctuate less than insulin For these reasons plasma C peptide concentrations may reflect pancreatic insulin secretion more reliably than the level of insulin itself
22. ASH BUFFER 15x 28 mL de tampon de lavage concentr x15 solution tamponn e organique contenant du d tergent des sels min raux et un agent antimicrobien SUBSTRATE TMB 13 mL de substrat peroxyde stabilis et 3 3 5 5 tetram thylbenzidine dans un tampon de dilution Le TMB est un produit non canc rig ne Porter cependant des v tements de protection et des gants appropri s pour viter toute exposition directe STOP SOLUTION 13 mL de solution d arr t acide sulfurique 0 46 mol L oa 2 RECONSTITUTION STOCKAGE ET REUTILISATION DES ELEMENTS DU KIT Le kit Dako Peptide C permet d effectuer jusqu 86 analyses d chantillons en l espace de 8 semaines Afin d assurer la performance optimale du kit il est important de conserver tous les l ments reconstitu s et inutilis s selon les recommandations suivantes 2 1 Barrettes sensibilis es avec l anticorps monoclonal MICROTITRATION PLATE oa Ouvrir la poche contenant la microplaque en coupant le long du joint S parer le nombre de micropuits requis puis les fixer sur le support N utiliser que des barrettes entieres Replacer les micropuits inutilises dans la poche plastique refermable avec le dessicateur refermer soigneusement la poche et stocker une temp rature comprise entre 2 et 8 Les micropuits peuvent tre utilis s au cours des huit semaines suivant la premi re ouverture a condition qu ils aient t conserv s selon les instructions 109
23. Cross reactivity with these molecules therefore is not clinically significant 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 14 43 1 INTERET MEDICAL Le kit Dako C Peptide ELISA Kit est un test immunoenzymatique ELISA pour le dosage du peptide C dans le s rum et le plasma humains 2 RESUME Le peptide C appara t au cours de la synth se de l insuline dans les cellules B des lots de Langerhans La proinsuline pr curseur se transforme en peptide C et en insuline s cr t s en quantit quimolaire dans la circulation sanguine Dans la mol cule de proinsuline le peptide C connecte les cha nes A et B de l insuline Il est lui m me constitu d une cha ne de 31 acides amin s poids mol culaire de 3020 D et contrairement l insuline ne poss de pas de fonction physiologique connue Du fait de sa longue demi vie 2 5 fois sup rieure celle de l insuline la concentration du peptide C est plus importante que celle de l insuline dans la circulation p riph rique et son taux fluctue moins Les concentrations en peptide C dans le plasma permettent d valuer la s cr tion en insuline par le pancr as de fa on plus fiable que le niveau en insuline lui m me 1 Les dosages de peptide C ont t utilis s dans les contextes cliniques suivants 1 1 Evaluation de la fonction r siduelle des cellules B du pancr as chez les patients trait s l insuline et outil de diff renciation entre le diab te de type 1 et le diab te
24. ENTRATE CONJUGATE DILUENT Das Konjugatkonzentrat 2 5 mL durch Hinzuf gen von Konjugatverd nnungsmittel 10 mL verd nnen Das ist ausreichend f r 96 Kavitaten Vor Gebrauch sanft mischen Konjugat in Arbeitskonzentration bei 2 8 C bis zu 8 Wochen lang lagern 5 2 5 _Waschpufferkonzentrat 15x Konzentrat liegt dem Kit bei Waschpuffer in Arbeitskonzentration durch Hinzuf gen von 1 Teil Waschpuffer auf 14 Teile frisches deionisiertes oder destilliertes Wasser ansetzen F r 96 Kavit ten werden 28 mL Waschpufferkonzentrat mit 392 mL deionisiertem oder destilliertem Wasser auf ein Gesamtvolumen von 420 mL Es sollte nur soviel Waschpuffer angesetzt werden wie am Versuchstag ben tigt wird Nicht ben tigtes Konzentrat bei 2 8 C aufbewahren Unverbrauchte Reste von Waschpuffer in Arbeitskonzentration d rfen nicht f r eine sp tere Verwendung aufbewahrt werden siehe Abschnitt 8 2 11 5 2 6 Substratlosung Gebrauchsfertig Restliches Substrat bei 2 8 lichtgesch tzt aufbewahren 5 2 7 Stoppl sung Gebrauchsfertig Nicht verwendetes Reagenz bei 2 8 lagern 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 31 43 6 ZUS TZLICHE REAGENZIEN 6 1 REAGENZIEN Destilliertes oder deionisiertes Wasser zur Rekonstitution der Kalibratoren 2 5 und zum Ansetzen der Waschpuffer in Arbeitskonzentration 6 2 ZUBEH R UND GER TE Die folgenden Produkte sind zur Verwendung zusammen mit C Peptide bestimmt Bei Anfragen jeglicher Ar
25. GKEIT DES TESTS 12 1 INTERFERENZEN Externe klinische Evaluierungen haben gezeigt dass Proben mit hohen Lipid oder Bilirubinkonzentrationen mit dem C Peptide Test nicht interferieren Es wurde keine Beeintr chtigungen durch Rheumafaktor oder heterophile Antik rper beobachtet 12 2 HAMOLYSE Stark h molysierte Proben sollten nicht eingesetzt werden da dies zu niedrigeren Werten f hren k nnte 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 38 43 12 3 HIGH DOSE HOOK EFFEKT In Sandwich Immunassays kann sich die Antwortkurve in Gegenwart extrem hoher Analytkonzentrationen umkehren Im C Peptide Test tritt dies ein wenn die C Peptide Konzentration gr er als 120 ng mL 40 000 pmol L ist 12 4 SERUM UND PLASMA In den Tests k nnen sowohl Serum als auch Plasma eingesetzt werden W hrend der klinischen Evaluierungsphase wurden keine klinisch signifikanten Unterschiede bei der C Peptide Bestimmung von zusammengeh rigen Serum und Plasmaproben beobachtet Als Antikoagulantien k nnen sowohl Heparin als auch EDTA verwendet werden 12 5 PROINSULIN UND PROINSULINKOMPLEXE Obwohl zirkulierendes C Peptide im Vergleich zu Proinsulin in 50 fachem molarem berschuss vorliegt f hren Proben mit erh hter Proinsulin Konzentration im C Peptide Test zu erh hten C Peptide Werten Abschnitt 14 2 3 Auch die bei manchen Patienten zirkulierenden Proinsulin Anti Insulin Antik rper Komplexe k nnen den Test beeintr chtigen In solchen F ll
26. L of substrate Incubate for 10 minutes with shaking at 20 30 C Add 100 pL of stop solution Read absorbance at 450 nm 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 9 43 11 CALCULATION AND RESULTS Patient sample results are estimated from a calibration curve constructed either manually or automatically by computer 11 1 AUTOMATED CALCULATION Refer to the plate reader manual Plot the absorbance obtained against the concentration of C peptide in the calibrators A four parameter curve fit is recommended to construct the calibration curve from which patient sample results are estimated Owing to the nature of the four parameter fit it may be necessary to enter the value of the calibrator 1 as 0 001 This will ensure that the curve passes through all data points For further details please contact your local Dako subsidiary or distributor 11 2 MANUAL CALCULATION Results can be calculated manually using graph paper Plot C peptide concentration on a linear scale on the x axis and the absorbance on a linear scale on the y axis Construct the calibration curve and use this to determine the concentration of C peptide in patient samples 11 3 TYPICAL CALIBRATION CURVE Figure 1 A typical C peptide calibration curve ng mL Absorbance Au C peptide Conc ng mL Note This graph is for the purpose of illustration only and should not be used to determine results 11 4 DILUTION OF SAMPLES OF HIGH CONCENTRATION Samples with co
27. NCE DU KIT Les donn es pr sent es dans cette section ont t obtenues lors d valuations cliniques ind pendantes et ou d evaluations cliniques effectu es par Dako 14 1 PRECISION 14 1 1 Precision intra essai 3 lots d chantillons de patients dont les concentrations en peptide C sont r parties dans l intervalle de mesure ont t test s 24 fois chacun sur une seule plaque 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 25 43 ee ee EE E T cart type 14 1 2 Precision inter essai 3 lots d chantillons dont les concentrations en peptide C sont r parties dans l intervalle de mesure ont t test s dans le cadre de 10 dosages 14 1 3 Limite de detection Sensibilit La limite de d tection a t valu e dans le cadre de 2 dosages en testant 20 calibrateurs 1 La valeur moyenne obtenue correspond a 2 5 carts type du signal moyen du calibrateur 1 Limite de detection 0 09 ng mL 30 pmol L 14 2 EXACTITUDE 14 2 1 Linearite 3 chantillons plasma h parine dont les concentrations en peptide C sont tr s fortes ont t dilu s avec le calibrateur 1 Facteur de Resultat Observe Attendu dilution ng mL 100 2 0 105 8 0 4 1 103 2 1 105 8 1 101 104 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 26 43 14 2 2 Correlation 3 chantillons dont les concentrations en peptide C sont faibles ont t additionn s avec diff rentes concentrations de peptide C et la corr lation a t
28. ONCENTRATE CONJUGATE DILUENT Dilute the conjugate concentrate 2 5 mL by adding the conjugate diluent 10 mL This is sufficient for 96 microwells Mix gently before use Store working strength Conjugate at 2 8 for up to 8 weeks 5 2 5 Wash Buffer Concentrate Provided 15x concentrate Prepare working strength wash buffer by adding 1 part of wash buffer to 14 parts of fresh deionised or distilled water For 96 microwells dilute 28 mL of wash buffer concentrate with 392 mL of deionised or distilled water to give a total volume of 420 mL Prepare working strength wash buffer as required on the day of use Store unused concentrate at 2 8 Do not store unused working strength wash buffer for subsequent use see Section 8211 5 2 6 Substrate Solution Ready to use Store unused substrate at 2 8 prot ect from light 5 2 7 Stop Solution Ready to use Store unused reagent at 2 8 6 ADDITIONAL REAGENTS 6 1 REAGENTS Fresh deionised or distilled water for reconstitution of Calibrators 2 5 and preparation of working strength wash buffer 6 2 ACCESSORIES The following products are intended for use in conjunction with Dako C peptide Contact your local Dako subsidiary or distributor for further information The Diabetes Immunoassay Control Set Code S6247 is intended as a tri level control for use with diabetes immunoassays 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 5 43 7 EQUIPMENT The following equipment is req
29. Use by Utiliser jusqu Verwendbar bis 8 C nee Limites de temp rature all Fabricant Temperature limitation Manufacturer Zul ssiger Temperaturbereich Hersteller lt q Contains sufficient for lt n gt tests Contenu suffisant pour lt n gt tests Inhalt ausreichend fiir lt n gt Ans tze 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 42 43 TECHNICAL ADVICE AND CUSTOMER SERVICE CONSEIL TECHNIQUE ET SERVICE CLIENTELE TECHNISCHE BERATUNG UND KUNDENDIENST For all enquiries please contact your local Dako subsidiary or distributor Pour toute information veuillez contacter votre filiale ou votre distributeur local e Dako Anfragen jeder Art richten Sie bitte an die f r Sie zust ndige Dako Niederlassung oder an Ihren H ndler Produced by Produit par Hergestellt von Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Danemark D nemark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 95 95 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 43 43
30. de la bo te 5 1 CONTENU DU KIT A Un livret d instructions d utilisation Une plaque de 96 micropuits r partis en 12 barrettes de 8 puits tapiss s d anticorps monoloconal de souris anti peptide C Une poche plastique refermable est fournie pour le stockage des micropuits inutilis s Un flacon de chacun des produits suivants 5 mL de calibrateur 1 solution de prot ine contenant un agent 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 16 43 antimicrobien Calibrateurs 2 5 lyophilis s peptide C biosynth tique dans une solution prot ique contenant un agent antimicrobien Le test est calibr selon un r actif de r f rence International Reference Reagent IRR 84 510 et les valeurs sont exprim es en ng mL et en pmol L calcul a partir du poids mol culaire du peptide C 3020D Les valeurs pr cises exprim es dans les deux unit s sont port es sur la fiche de valeurs fournie avec le produit et elles doivent syst matiquement tre utilis es pour l talonnage du test Les valeurs sont environ de CONJUGATE CONCENTRATE 2 5 mL de conjugu concentr anticorps monoclonal anti peptide C conjugu la p roxydase de raifort PER dans une solution tamponn e organique contenant une prot ine des sels min raux un colorant rouge et un agent antimicrobien CONJUGATE DILUENT 10 mL de diluant pour le conjugu solution tamponn e organique contenant des sels min raux une prot ine et un agent antimicrobien W
31. die C Peptide Konzentration der Kalibratoren aufgetragen Zur Erstellung der Kalibrierungskurve aus der die Patientenwerte abgelesen werden wird eine 4 Punkte Parameterkurve empfohlen Entsprechend der Natur dieser Kurvenanpassung an vier Punkte kann es erforderlich sein den Wert des Kalibrators 1 mit 0 001 festzusetzen um einen Kurvenverlauf durch alle Datenpunkte sicherzustellen Wenden Sie sich bei weiterf hrenden Fragen bitte an die f r Sie zust ndige Dako Niederlassung oder Ihren H ndler 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 37 43 11 2 MANUELLE BERECHNUNG Die Ergebnisse k nnen manuell auf Millimeterpapier berechnet werden Hierbei wird die C Peptide Konzentration auf der X Achse gegen die Absorption auf der Y Achse beides im linearen Ma stab aufgetragen eine Kalibrierungskurve erstellt und daraus die C Peptide Konzentration in den einzelnen Patientenproben abgelesen 11 3 TYPISCHE KALIBRIERUNGSKURVE Eine typische Kalibrierungskurve des C Peptide Tests ng mL Absorption Au C Peptide Konzentration ng mL Hinweis Diese graphische Darstellung dient nur der Illustration und darf keinesfalls zur Berechnung von Ergebnissen benutzt werden 11 4 VERD NNUNG VON HOCHKONZENTRIERTEN PROBEN Proben deren C Peptide Konzentration voraussichtlich ber dem h chsten Kalibrator liegen wird sollten vor der Testdurchf hrung mit dem Kalibrator 1 1 4 v v verd nnt werden 12 EINSCHR NKUNGEN DER LEISTUNGSF HI
32. e caus e par des anomalies telles que la pr sence de poussi re ou de marques sur la surface optique des micropuits 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 22 43 10 4 RESUME DU MODE D EMPLOI DU KIT DAKO C PEPTIDE V rifier que tous les r actifs sont temp rature ambiante entre 15 et 30 avant de les utiliser D poser 25 uL d chantillon ou de calibrateur Ajouter 100 LL de conjugu Incuber pendant 60 minutes 20 30 sous agitation Laver x3 Ajouter 100 uLde substrat Incuber pendant 10 minutes a 20 30 C sous agitation Ajouter 100 uL de solution d arr t Lire absorbance 450 nm 11 CALCUL ET RESULTATS La concentration en peptide C des chantillons test s est valu e a partir d une courbe d talonnage r alis e manuellement ou automatiquement l aide d un ordinateur 11 1 CALCUL AUTOMATISE Consulter le manuel du lecteur de plaques Inscrire le r sultat de l absorbance par rapport la concentration de peptide C des calibrateurs Il est recommand de r aliser la courbe d talonnage partir de 4 points pour valuer les r sultats 11 2 CALCUL MANUEL Les r sultats peuvent tre calcul s manuellement sur un papier graphique Indiquer la concentration d insuline sur l axe des abscisses et l absorbance sur l axe des ordonn es R aliser la courbe d talonnage et l utiliser pour d terminer la concentration en peptide C dans les chantillons 109467 003 K6220 EFG
33. e et agiter pendant 10 minutes a une temp rature comprise entre 20 et 30 Remarque En cas d utilisation d un lecteur de plaque dont l absorbance maximale est de 2 2 uA ramener le temps d incubation du substrat a 7 minutes 10 2 6 Arr t de la r action Ajouter 100 uL de solution d arr t dans chaque micropuits en maintenant le m me intervalle de temps entre chaque barrette comme indiqu dans la section 10 2 5 Veiller a bien m langer le contenu des micropuits 10 3 LECTURE DES RESULTATS 10 3 1 LECTURE PHOTOMETRIQUE La lecture photom trique de la plaque doit s effectuer dans les 30 minutes suivant l ajout de la solution d arr t Prot ger la plaque de la lumi re jusqu au moment de la lecture M langer le contenu des micropuits et lire l absorbance de chaque micropuits l aide d un spectrophotom tre appropri ou d un lecteur de plaque EIA pouvant lire l absorbance a 450 nm S assurer que le fond des micropuits est propre avant de proc der la lecture et v rifier qu aucun corps tranger n est pr sent dans les micropuits Le lecteur doit effectuer un blanc sur l air c est dire en l absence de plaque sur le support avant que la plaque ne soit scann e En outre si le spectrophotom tre ou le lecteur de plaque EIA permet l utilisation d une longueur d onde de r f rence de 620 650 nm une lecture double longueur d onde doit tre effectu e afin d liminer toute interf rence possibl
34. e notable d un point de vue clinique n a t trouv e en dosant le peptide C dans les s rums et les chantillons de plasma correspondants L h parine ou EDTA peuvent tre utilis s 12 5 REACTIVITE CROISEE AVEC LA PROINSULINE M me si la concentration molaire en peptide C est 50 fois sup rieure celle de proinsuline les chantillons avec de fortes concentrations en proinsuline provoquent une augmentation des valeurs en peptide C voir chapitre 14 2 3 La pr sence de complexes proinsuline anticorps anti insuline chez certains patients peut aussi interf rer avec le test Il est pr f rable alors de mesurer le niveau en peptide C apr s pr cipitation au poly thyl ne glycol PEG 12 6 INSUFFISANCE RENALE Le rein tant le site principal pour le m tabolisme du peptide C les patients atteints d une s v re insuffisance r nale peuvent pr senter des niveaux anormalement lev s en peptide C circulant 12 7 LES EXPERTISES MEDICO LEGALES Le kit Dako pour l analyse du peptide C n est pas appropri une utilisation dans le domaine des expertises m dico l gales et n a t pas valid avec des chantillons d autopsies 13 VALEURS ATTENDUES Il est recommand a chaque laboratoire d etablir ses propres valeurs de r f rence Les intervalles de r f rence peuvent varier consid rablement selon les m thodes Ne pas utiliser de valeurs de r f rence tablies avec d autres m thodes 14 PERFORMA
35. en und Hautkontakt durch das Tragen von Schutzbrille und Schutzkleidung vermeiden 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 32 43 8 1 2 8 2 8 2 1 8 2 2 8 2 3 8 2 4 8 2 5 8 2 6 8 2 7 8 2 8 8 2 9 Bei versehentlichem Kontakt mit diesem Reagenz betroffene Stellen sofort mit Wasser waschen Klinische Proben k nnen infekti se Stoffe wie z B Hepatitis B Virus und HIV enthalten Alle Proben Kalibratoren Kontrollen und Materialien die mit den klinischen Proben in Ber hrung kommen sollten als potenziell infekti s angesehen und entsprechend gehandhabt werden Sicherstellen dass Schnitt und Sch rfwunden sowie Hautverletzungen in geeigneter Weise gesch tzt sind und Vorkehrungen treffen um eine Eigeninokulation bzw Spritzer auf die Schleimh ute zu vermeiden Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Sicherheitsdatenbl tter f r geschultes Fachpersonal sind auf Anfrage erh ltlich TECHNISCHE VORSICHTSMASSNAHMEN Kit Komponenten d rfen nach Ablauf des auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatums nicht l nger verwendet werden Unterschiedliche Reagenzienchargen nicht mischen Falls Reagenzien inkorrekt verd nnt modifiziert oder unter anderen Bedingungen als den i
36. en sollten die C Peptide Konzentrationen nach der Pr zipitation der Immunkomplexe mit Polyethylenglycol PEG bestimmt werden 12 6 NIERENINSUFFIZIENZ Da das C Peptide haupts chlich in der Niere metabolisiert wird k nnen Patienten mit schwerer Niereninsuffizienz abnorm erh hte Konzentrationen an zirkulierendem C Peptide aufweisen 12 7 GERICHTSMEDIZINISCHE ANWENDUNGEN Der C Peptide Test eignet sich nicht f r gerichtsmedizinische Untersuchungen und wurde f r Proben die nach dem Tod entnommen wurden nicht validiert 13 ERWARTUNGSWERTE Jedes Labor sollte seine eigenen Referenzbereiche erstellen Die mit unterschiedlichen Methoden erzielten Referenzbereiche k nnen erheblich voneinander abweichen Deshalb d rfen keine f r andere Methoden festgelegten Referenzbereiche verwendet werden 14 LEISTUNGSEIGENSCHAFTEN Die in diesem Abschnitt vorgelegten Daten stammen aus unabh ngigen klinischen Evaluierungen und oder von Dako 14 1 PR ZISION 14 1 1 Intraassay Prazision Drei den Testbereich umfassende gepoolte Patientenproben wurden auf jeweils einer Platte in 24 Wiederholungen getestet 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 39 43 Poot n MW SA ng mL MW SA pmol L VK Drei Pools von Patientenproben die den Referenzbereich des Tests abdecken wurden in 10 voneinander unabh ngigen Testreihen untersucht Poot n MW SA ng mL MW SA pmol L VK 14 1 2 Interassay Pr zision 14 1 3 Nachwe
37. ger ts bei 450 nm ablesen Vor der Ablesung sicherstellen dass die B den der Kavit ten sauber sind und berpr fen dass sich keine Fremdk rper in den Kavit ten befinden Das Leseger t sollte vor dem Scannen der Platte gegen Luft gemessen werden d h ohne eine Platte auf dem Tr ger Falls das Spektrophotometer oder EIA Plattenleseger t die Verwendung einer Referenzwellenl nge 620 bis 650 nm gestattet sollten duale Wellenl ngenablesungen durchgef hrt werden die jegliche potenzielle Interferenz aufgrund von Abweichungen durch Schmutz oder Kratzer auf der optischen Oberfl che der Kavit ten ausschlie en 10 4 SCHEMA DER DAKO C PEPTIDE TESTDURCHF HRUNG Sicherstellen dass alle Reagenzien vor dem Gebrauch auf Raumtemperatur 15 30 aufgewarmt worden sind Zugabe von 25uL Probe oder Kalibrator Zugabe von 100uL Konjugat 4 Inkubation 60 Minuten bei 20 30 unter Sch tteln Waschen x3 Zugabe von 100uL Substrat Inkubation 10 Minuten bei 20 30 unter Sch tteln Zugabe von 100uL Stop L sung Absorption bei 450nm ablesen 11 BERECHNUNG UND ERGEBNISSE Die Me ergebnisse der Patientenprobe werden anhand einer Kalibrierungskurve ermittelt die entweder manuell oder automatisch mit dem Computer erstellt wurde 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 36 43 11 1 AUTOMATISCHE BERECHNUNG Anweisungen k nnen dem Handbuch zum Plattenleseger t entnommen werden Die gemessenen Absorptionswerte werden gegen
38. h vorhandenes Pankreasgewebe nach einer Pankreatektomie Im Fall eines Insulinoms kann die C Peptide Bestimmung zum Nachweis von Metastasen und zur Kontrolle des Therapieverlaufs herangezogen werden Dar ber hinaus kann sie auch zur berwachung des Verlaufs einer Pankreas oder Inselzell Transplantation dienen Bis vor Kurzem war eine routinem ige C Peptide Bestimmung nur mittels Radioimmunassay m glich obwohl HPLC Methoden in der Literatur beschrieben worden sind Der Dako C Peptide Test ist ein Enzymimmunassay zur quantitativen Bestimmung von C Peptide 3 TESTPRINZIP Dako C Peptide ist ein ELISA Test mit zwei monoklonalen Antik rpern In einer Mikrotestplatte die mit einem spezifischen Anti C Peptide Antik rper beschichtet ist werden die Probe und der enzymmarkierte Antik rper gleichzeitig inkubiert Dadurch bildet sich ein Komplex Der ungebundene enzymmarkierte Antik rper wird mit einem einfachen Waschschritt entfernt Das gebundene Konjugat wird durch seine Reaktion mit dem Substrat 3 3 5 5 Tetramethylbenzidin TMB nachgewiesen 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 28 43 Die Reaktion wird durch Zugabe von S ure gestoppt und die resultierende Farbintensit t spektralphotometrisch gemessen Der Einsatz von Kalibratoren mit bekannter C Peptide Konzentration im Test erm glicht die Erstellung einer Kalibrierungskurve mit deren Hilfe die C Peptide Konzentration in Patientenproben bestimmt werden kann Das Testprinzip ist
39. hould be carried out so as to ensure complete filling with a minimum of 250 uL of working strength wash buffer and emptying of the microwells Three wash cycles are essential by either automated or manual washing techniques Manual washing If washing microwells manually aspirate or shake out the contents of the microwells and using freshly prepared wash buffer ensure complete filling and emptying of microwells Between each wash step remove all remaining wash buffer by tapping the inverted microwells on to clean absorbent paper Repeat the process twice rotating the plate after each wash to start in the opposite direction a total of 3 washes Manual washing efficiency is further ensured if the wash buffer is delivered at an angle so as to produce a vortex in the microwells After the final wash the plate should be inverted and tapped on absorbent paper to remove the last traces of wash buffer 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 8 43 Automated washing Automated washers should be programmed to complete 3 wash cycles Soak steps are not required Washers must be correctly calibrated to ensure complete filling and emptying of microwells between each wash After the final wash the plate should be inverted and tapped on absorbent paper to remove the last traces of wash buffer 10 2 5 Substrate Addition and Second Incubation Add 100 uL substrate solution to each microwell Place the microtitration plate on the plate shaker and shake
40. ide antibody forms a complex A simple washing step removes unbound enzyme labelled antibody The bound conjugate is detected by reaction with the substrate 3 3 5 5 tetramethylbenzidine TMB The reaction is stopped by adding acid to give a colorimetric endpoint that is read spectrophotometrically The inclusion of calibrators of known C peptide concentration in the assay allows a calibration curve to be constructed from which the level of C peptide in samples can be determined The assay principle is shown below in Figure 1 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 2 43 Figure 1 Dako C peptide assay principle Monoclonal Sih m 4 anti C peptide ubstrate antibody C peptide C peptide gt Anti C peptide HRP conjugate C peptide Colour Eas A DEFINITIONS Explanation of symbols Product code and catalogue number aA Consult the instructions for use N Contains sufficient for N tests al Manufacturer IVD In vitro diagnostic medical device 2 Use by Batch code oY di Storage temperature limitations er Add water 5 REAGENTS PROVIDED y 96 Each kit contains sufficient materials for 96 determinations a The shelf life of the kit is as indicated on the outer box label 5 1 DAKO C PEPTIDE TEST CONTENTS One Instructions for Use Booklet One x 96 microwell plate of 12 8 microwell strips coated with mouse monoclonal anti C peptide antibody A resealable plastic pouch is provided for storage
41. isgrenze Sensitivit t Die Nachweisgrenze wurde in 2 voneinander unabh ngigen Tests ermittelt bei denen der Nullkalibrator in 20 Wiederholungen bestimmt wurde Der so erzielte Mittelwert entspricht 2 5 Standardabweichungen vom mittleren Extinktionswert des Kalibrators 1 Nachweisgrenze 0 09 ng mL 30 pmol L 14 2 GENAUIGKEIT 14 2 1 Linearit t Drei Patientenproben Heparin Plasma mit hohen Analytkonzentrationen wurden mit dem Kalibrator 1 verd nnt Probe Verd Faktor Ergebris Messwert Erwartungswer ng mL t 1 Neat 7 6 1 2 3 8 100 1 4 2 0 105 2 Neat 8 0 1 2 4 1 103 1 4 2 1 105 3 Neat 8 1 1 2 4 1 101 1 4 2 1 104 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 40 43 14 2 2 Wiederfindung Drei Mischungen von Serumproben mit niedrigen Analytkonzentration wurden mit verschiedenen Konzentrationen an C Peptide versehen und die prozentuale Wiederfindung berechnet C Peptide Zusatz ng mL Ergebnis ng mL Wiederfindung Probenpool 1 Probenpool 1 1 9 Probenpool 1 4 3 Probenpool 1 7 8 Probenpool 2 Probenpool 2 1 9 Probenpool 2 4 3 Probenpool 2 7 8 Probenpool 3 Probenpool 3 1 9 Probenpool 3 4 3 Probenpool 3 7 8 14 2 3 Kreuzreaktivitat Die Spezifit t des Tests wurde anhand der Kreuzreaktivit t mit strukturell verwandten Peptiden und Hormonen ermittelt Die Kreuzreaktivit t wurde aus dem Vergleich der jeweiligen Mengen an C Peptide und der kreuzreagiere
42. keit des Testkits sicherzustellen ist es wichtig alle rekonstituierten und noch nicht gebrauchten Kit Bestandteile folgenderma en aufzubewahren 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 30 43 5 2 1 Mit monoklonalem Antik rper beschichtete Kavit ten Die Plattentasche durch Schneiden entlang der Schwei naht ffnen Die gew nschte Anzahl von Kavit tenstreifen abbrechen und sie in das Gestell setzen Ausschlie lich vollst ndige Streifen verwenden Unbenutzte Kavit ten mit dem Trockenmittel in die wiederverschlie bare Tache legen Tasche sorgf ltig wiederverschlie en und bei 2 8 lagern Bei dieser sachgem en Lagerung k nnen die Kavit ten nach dem ersten ffnen der Tasche bis zu 8 Wochen lang verwendet werden 5 2 2 Kalibrator 1 Gebrauchsfertig Unbenutzten Kalibrator 1 bei 2 8 C lagern Bei sachgem er Lagerung kann der Kalibrator 1 nach dem ersten ffnen bis zu 8 Wochen lang verwendet werden 5 2 3 Kalibratoren 2 5 CALIBRATOR 2 CALIBRATORS Die Iyophilisierten Kalibratoren mit 1 mL frischem destilliertem Wasser oder deionisiertem Wasser rekonstituieren Die Stopper nach der Rekonstituierung verwerfen L sung 10 15 Minuten lang bei Raumtemperatur stehen lassen und vor Gebrauch sanft mischen Rekonstituierte Kalibratoren aufrecht stehend bei 2 8 bis zu 5 Tage lang oder bei 20 bis zu 8 Wochen lang aliquotieren und lagern 5 2 4 Konjugatkonzentrat und Konjugatverd nnungsmittel CONJUGATE CONC
43. ls are measured after precipitation with polyethylene glycol PEG 12 6 RENAL INSUFFICIENCY Because the kidney is the major site for C peptide metabolism patients with severe renal insufficiency may have abnormally high circulating C peptide levels 12 7 FORENSIC APPLICATIONS The C peptide assay is not intended for forensic use and has not been validated with post mortem samples 13 EXPECTED VALUES It is recommended that each laboratory establishes its own reference intervals Reference intervals can differ considerably between methods Do not use reference intervals established for other methods 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 11 43 14 PERFORMANCE CHARACTERISTICS The data presented in this section was obtained during independent clinical evaluations and or at Dako 14 1 PRECISION 14 1 1 Within intra assay precision Three pools of patient samples covering the range of the assay were tested 24 times ona single plate eS Mean SD ng mL Mean SD pmol L CV 14 1 2 Between inter assay precision Three pools of patient samples covering the range of assay were tested in 10 assays Mean SD ng mL SD pmol L 1 77 0 08 26 4 3 4 0 05 17 0 0 17 55 8 14 1 3 Detection Limit Sensitivity The limit of detection was assessed in 2 assays by testing 20 replicates of the zero calibrator The average value obtained corresponds to a signal 2 5 standard deviations from the mean signal of the calibrator
44. n Abschnitt 5 2 beschriebenen Bedingungen gelagert werden k nnte die Testleistung beeintr chtigt werden Verunreinigung von Reagenzien vermeiden Es m ssen alle Anstrengungen unternommen werden um eine Kreuzkontamination zwischen Kavit ten zu vermeiden Es ist ebenfalls von gr ter Bedeutung dass enzymkonjugierter monoklonaler Antik rper die Reagenzien und Ausstattung nicht verunreinigt Das Konjugat sollte mit einer separaten Pipette entnommen werden und es muss darauf geachtet werden den Rand der Kavitat nicht zu ber hren oder zu benetzen Konjugat das auf dem Rand der Kavitat antrocknet k nnte die Testleistung beeintr chtigen Alle Ausstattungsgegenst nde einschlie lich Reinigungsger ten und Ger ten zur Handhabung von Fl ssigkeiten m ssen frei von bakteriellen Verunreinigungen sowie korrekt kalibriert und den Herstelleranweisungen entsprechend gepflegt sein Restlichen gebrauchsfertigen Waschpuffer nicht f r sp teren Gebrauch aufbewahren Nicht gebrauchte Waschpuffergef e mit destilliertem Wasser sp len und trocknen lassen Kavit ten k nnen nicht wiederverwendet werden Substrat das vor dem Hinzugeben zu den Kavitaten eine blaue F rbung aufweist darf nicht verwendet werden Substrat vor Lichteinwirkung sch tzen 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 33 43 8 2 10 Es wird empofhlen Proben so lange im Duplikat zu verarbeiten bis das Labor sich vollkommen auf die Benutzung der Tests eingestellt hat
45. n auf die Durchf hrung von 3 Waschzyklen programmiert werden Einweichschritte sind nicht erforderlich Waschger te m ssen korrekt kalibriert werden um das vollst ndige F llen und Entleeren der Kavit ten zwischen jedem Waschen zu gew hrleisten Nach dem abschlie enden Waschschritt sollte die Platte umgedreht und auf saugf higem Papier abgeklopft werden um die letzten Reste des Waschpuffers zu entfernen 10 2 5 Substratzugabe und zweite Inkubation 100 uL Substratl sung zu jedem Kavit t hinzugeben Die Mikrotiterplatte auf dem Plattensch ttler platzieren und 10 Minuten lang bei 20 30 sch tteln lassen Hinweis Falls ein Plattenleseger t mit einer maximalen Absorption von 2 2 AU verwendet wird muss die Substratinkubationszeit auf 7 Minuten verringert werden 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 35 43 10 2 6 Die Reaktion anhalten 100 uL Stoppl sung zu jeder Kavit t hinzugeben wobei dieselben Zeitabst nde zwischen den einzelnen Streifen wie in Abschnitt 10 2 5 eingehalten werden m ssen Sicherstellen dass der Inhalt der Kavit ten gr ndlich gemischt wird 10 3 ABLESEN DER TESTERGEBNISSE 10 3 1 PHOTOMETRISCHE ABLESUNG Die Platte muss innerhalb von 30 Minuten nach der Hinzugabe der Stoppl sung photometrisch abgelesen werden Die Platte bis zur Ablesung vor Lichteinfall sch tzen Die Inhalte der Kavit ten mischen und die Absorption jeder Kavit t mittels eines geeigneten Spektrophotometers oder EIA Plattenlese
46. ncentrations of C peptide expected to be in excess of the top calibrator should be diluted 1 in 4 v v with Calibrator 1 before performing the assay 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 10 43 12 PERFORMANCE LIMITATIONS 12 1 INTERFERENCES Clinical evaluations indicate that samples containing high concentrations of lipid or bilirubin do not interfere in the C peptide assay No interference from rheumatoid factor or heterophilic antibodies was seen 12 2 HAEMOLYSIS Grossly haemolysed samples should not be used as lower assay values may be obtained 12 3 HIGH DOSE HOOK EFFECT In two site immunoassay systems the response curve may invert in the presence of extremely high analyte concentrations In the C peptide assay this effect occurs at greater than 120 ng mL 40 000 pmol L C peptide 12 4 SERUM AND PLASMA Both serum and plasma can be used During clinical evaluation no clinically significant difference was found in measured C peptide between matched serum and plasma samples Both heparin and EDTA anticoagulants may be used 12 5 PROINSULIN AND PROINSULIN COMPLEXES Even though circulating C peptide is in 50 times molar excess compared to proinsulin samples with elevated proinsulin levels will produce increased values in C peptide Section 14 2 3 The presence of circulating proinsulin anti insulin antibody complexes in some patients may also interfere with the assay In such cases it is suggested that the C peptide leve
47. nden Substanz die den gleichen Extinktionswert ergaben berechnet Intaktes humanes Proinsulin biosynthetisch 84 Proinsulin Spaltprodukt 32 33 Humanes Insulin Insulin lag mit einer Konzentration von 240 000 pmol L unterhalb der Nachweisgrenze des C Peptide Tests Die N chtern Konzentrationen von intaktem Proinsulin und seinen Spaltprodukten betragen in der Regel 1 2 der C Peptide Konzentrationen Eine Kreuzreaktivit t mit diesen Molek len ist daher klinisch nicht signifikant 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 41 43 15 REFERENCES LITERATUR Haibach H Dix J amp Shah J 1987 Homicide by insulin administration Journal of Forensic Sciences 32 1 208 216 Heding LG 1975 Radioimmunological determination of human C peptide in serum Diabetologia 11 541 548 Hanning I Home PD amp Alberti KGMM 1985 Measurement of free insulin concentrations the influence of the timing of extraction of insulin antibodies Diabetologia 28 831 835 Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole Catalogue number g Add water R f rence du catalogue II Ajouter de l eau Bestellnummer Wasser hinzuf gen Dispositif m dical de diagnostic LOT Code du lot In vitro diagnostic medical device Batch code in vitro Chargenbezeichnung In Vitro Diagnostikum Lil Consult instructions for use Consulter les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten
48. ndung des Waschpuffers bei Arbeitskonzentration gewaschen werden Abschnitt 5 2 5 Die Waschtechnik ist f r die Testleistung von ausschlagender Bedeutung und sollte so durchgef hrt werden dass eine vollst ndige F llung und Entleerung der Kavit ten gew hrleistet wird mit mindestens 250 uL Waschpuffer bei Arbeitskonzentration Es werden drei Waschzyklen verlangt entweder mittels automatisierter oder manueller Waschtechniken Manuelles Waschen Falls Kavit ten manuell gewaschen werden muss ihr Inhalt aspiriert oder ausgesch ttelt und ein frisch angesetzter Waschpuffer verwendet werden wobei darauf geachtet werden muss dass die Kavit ten vollst ndig gef llt und entleert werden Zwischen den Waschschritten muss der gesamte restliche Waschpuffer entfernt werden dazu werden die umgedrehten Kavit ten auf sauberem und saugf higem Papier abgeklopft Dieser Prozess wird zweimal wiederholt wobei die Platte nach jedem Waschschritt gedreht wird um in der entgegengestzten Richtung zu beginnen insgesamt 3 Waschschrite Die Effizienz der manuellen Waschtechnik wird weiterhin gew hrleistet wenn der Waschpuffer in einem schr gen Winkel in die Kavit ten gegeben wird und somit einen Wirbel in den Kavit ten erzeugt Nach dem abschlie enden Waschschritt sollte die Platte umgedreht und auf saugf higem Papier abgeklopft werden um die letzten Reste des Waschpuffers zu entfernen Automatisiertes Waschen Automatisierte Waschmaschinen sollte
49. nser 25 uL 250 uL Rigoles de r actifs en V Minuteur Papier absorbant propre pour s cher les micropuits en les tapotant Eprouvette gradu e de 500 mL Agitateur secoueur pour plaque de microtitration Pour obtenir des informations sur la conformit d un agitateur secoueur de plaque veuillez contacter votre filiale ou votre distributeur local e Dako Appareil de lavage automatique pour microplaques facultatif ou mat riel adapt au lavage de barrettes de huit micropuits voir la section 10 2 4 Spectrophotom tre ou lecteur de plaques EIA capable de lire l absorbance 450 nm avec plaque pour 96 micropuits r partis en barrettes de 8 puits facultatif voir la section 10 3 intitul e Lecture des r sultats ll existe pour ce test des Notes d Application pour l utilisation sur des syst mes automatis s ouverts Veuillez contacter votre filiale ou votre distributeur local e Dako 8 PRECAUTIONS Pour un usage dans les diagnostics in vitro Pour usage professionnel uniquement 8 1 PRECAUTIONS DE SECURITE 8 1 1 La solution d arr t contient de l acide sulfurique 0 46 mol L Eviter tout contact avec les yeux ou la peau par le port d un v tement de protection 8 1 2 Les chantillons cliniques peuvent contenir des agents infectieux comme le virus de l H patite B et celui du VIH Tous les chantillons calibrateurs t moins et mat riaux qui ont t en contact avec les chantillons doivent tre consid
50. of unused microwells One bottle of each of the following 5 mL Calibrator 1 Protein matrix with an anti microbial agent Calibrators 2 5 Iyophilised Synthetic C peptide in a protein 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 3 43 matrix with an anti microbial agent The assay is calibrated against International Reference Reagent IRR 84 510 and CALIBRATOR 4 values are expressed in both ng mL and in S I units pmol L CALIBRATOR 5 calculated from the molecular weight of C peptide 3020 D Precise values in both units are stated on the Value sheet included with the product and must always be used for calibration of the assay The approximate values are ame Jo fefe fe ng mL 0 3 3 9 15 pmol L 100 1000 3000 5000 2 5 mL Conjugate Concentrate Anti C peptide monoclonal antibody conjugated to horseradish peroxidase HRP in an organic buffered solution containing protein inorganic salts a red coloured dye and an anti microbial agent 10 mL Conjugate Diluent Organic buffered solution containing inorganic salts protein and an anti microbial agent 28 mL Wash Buffer Concentrate 15x Organic buffered solution containing detergent inorganic salts and an anti microbial agent 13 mL Substrate stabilised peroxide and 3 3 5 5 tetramethylbenzidine TMB substrate in a dilute buffer solution TMB has been reported to be non carcinogenic However personal protective equipment is recommended to avoid direct exposure
51. s qui ne contiennent pas d additifs laisser coaguler et s parer le s rum des cellules par centrifugation 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 20 43 Conserver les chantillons jusqu 3 jours 2 8 ou jusqu 28 jours 20 Aliquoter au besoin pour viter la cong lation et la d cong lation r p t es des chantillons et ne pas d congeler les chantillons en les chauffant 9 2 PLASMA Pr lever le sang par ponction veineuse dans des tubes contenant de l Heparine ou de l DTA comme anticoagulant Centrifuger s parer la fraction de plasma et conserver pendant 3 jours 2 8 ou jusqu 28 jours 20 Aliquoter au besoin pour viter la cong lation et d cong lation r p t es des chantillons et ne pas d congeler les chantillons en les chauffant 10 MODE D EMPLOI DU TEST PRIERE DE SE REFERER A LA SECTION 8 2 PRECAUTIONS TECHNIQUES AVANT D EFFECTUER LE TEST 10 1 REMARQUES GENERALES 10 1 1 S assurer que durant chaque s rie les temps de r action soient les m mes en ajoutant les r actifs dans le m me intervalle de temps 10 1 2 Ne pipetter dans la rigole de r actif que la quantit de liquide n cessaire pour un dosage donn Ne pas remettre l exc dent de r actifs dans les flacons apr s usage 10 2 PROCEDURE DU DOSAGE REMARQUE Cette proc dure de dosage n cessite l emploi d un agitateur secoueur de plaque de microtitration Pour obtenir des informations sur la conformit
52. t wenden Sie sich bitte an die f r Sie zust ndige Dako Niederlassung oder an Ihren H ndler Das Diabetes Immunoassay Control Set Code Nr S6247 ist als dreifache Kontrolle zur Verwendung mit Diabetis Immunassays bestimmt 7 AUSSTATTUNG Die folgenden Ausstattungsgegenst nde sind erforderlich Pr zisionspipetten und Einwegspitzen oder einstellbare Mehrkanal Pipettenspitzen f r 25 uL 250 uL V f rmige Reagenzienbeh lter Stoppuhr Sauberes und saugf higes Papier zum Abklopfen der Kavit ten Messzylinder 500 mL Mikrotitrierplattensch ttler Bitte wenden Sie sich an die f r Sie zust ndige Dako Niederlassung oder an Ihren H ndler um weitere Informationen ber die Eignung des Plattenschittlers zu erhalten Automatisierter Plattenwascher als Option oder geeignete Ausstattung zum Waschen von 8 Kavitatenstreifen Abschnitt 10 2 4 Spektrophotometer oder EIA Plattenleser zum Ablesen einer 96 Kavitaten Platte mit 8 Kavitatenstreifen bei einer Absorption von 450 nm und mit einer Referenz von 620 650 nm Option Abschnitt 10 3 Ablesen der Testergebnisse Anwendungshinweise f r die Verwendung auf offenen automatisierten Systemen stehen f r diesen Test zur Verf gung Bitte wenden Sie sich an Ihre Dako Vertretung bzw Ihren H ndler 8 VORSICHTSMASSNAHMEN In vitro Diagnostikum Nur f r Fachpersonal bestimmt 8 1 SICHERHEITSMASSNAHMEN 8 1 1 Die Stoppl sung besteht aus 0 46 mol L Schwefels ure Aug
53. u distill e Pour 96 micropuits diluer 28 mL de tampon de lavage concentr avec 392 mL d eau d sionis e ou distill e afin d obtenir un volume total de 420 mL Reconstituer la solution de lavage tamponn e fraichement dos e en fonction des besoins le jour de son utilisation Conserver le concentr inutilise une temp rture comprise entre 2 et 8 C Ne pas conserver le reste du tampon de lavage fraichement dos pour des utilisations ult rieures voir la Section 8 2 11 5 2 6 Solution de substrat Fourni pr t a l emploi Conserver le substrat inutilis 2 8 l abri de la lumi re 5 2 7 Solution d arr t Pr t l emploi Stocker le r actif inutilis 2 8 6 REACTIFS SUPPLEMENTAIRES 6 1 REACTIFS Eau distill e ou d siionis e pour la reconstitution des calibrateurs 2 5 et la pr paration du tampon de lavage fra chement dos 6 2 ACCESSOIRES Les produits suivants doivent tre utilis s avec le C peptide Pour toute information compl mentaire veuillez contacter votre filiale ou votre distributeur local e Dako 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 18 43 Le Diabetes Immunoassay Control Set Code S6247 est un contr le a trois niveaux destin tre utilis avec les dosages immuno enzymatiques li s au diab te 7 MATERIEL Le mat riel suivant est n cessaire Pipettes de pr cision et embouts jetables ou embouts de pipettes multicanalaires ajustables permettant de dispe
54. uired Precision pipettes and disposable tips or adjustable multichannel pipettes tips to deliver 25 uL 250 uL V shaped reagent troughs Timer Clean absorbent paper on to which microwells can be tapped dry Measuring cylinder 500 mL Microtitration plate shaker For information on suitability of plate shakers contact your local Dako subsidiary or distributor Automated plate washer optional or suitable equipment for washing 8 microwell strips Section 10 2 4 Spectrophotometer or EIA plate reader able to read a 96 microwell plate of 8 microwell strips at an absorbance of 450 nm with a reference at 620 650 nm Optional Section 10 3 Reading the Test Results Application notes for use on open automated systems are available for this assay Contact your local Dako subsidiary or distributor 8 PRECAUTIONS ND For in vitro diagnostic use For professional use only 8 1 SAFETY PRECAUTIONS 8 1 1 The stop solution is sulphuric acid 0 46 mol L Avoid eye and skin contact by wearing protective clothing and eye protection 8 1 2 Clinical specimens may contain infectious agents eg Hepatitis B virus and HIV All specimens calibrators controls and materials that come into contact with them should be treated as potentially infectious and handled accordingly 8 1 3 Ensure that cuts abrasions and skin lesions are properly protected and take precautions to avoid self inoculation or splashing of mucous membranes
55. zien bei jedem Lauf in der gleichen zeitlichen Abfolge zugegeben werden 10 1 2 Nur die f r den jeweiligen Test erforderliche Fl ssigkeitsmenge in den Reagenzienbeh lter pipettieren Nicht ben tigte Reagenzien nach Gebrauch auf keinen Fall wieder in die Originalfl schchen zur ckf llen 10 2 TESTPROZEDUR HINWEIS Die Testprozedur erfordert die Verwendung eines Mikrotitrierplattensch ttlers Bitte wenden Sie sich an die f r Sie zust ndige Dako Niederlassung oder an Ihren H ndler um weitere Informationen ber die Eignung des Plattensch ttlers zu erhalten 10 2 1 Kalibrator Probe und Kontrollzusatz Die erforderliche Anzahl von Mikrotitrierstreifen gem der Anzahl der erforderlichen Bestimmungen in den Kavit tenhalter stellen 25 uL Kalibrator Probe oder Kontrolle in die Kavit ten pipettieren F r die Kalibratoren sollten zweifache Kavit ten verwendet werden 109467 003 K6220 EFG CKJ 2009 06 17 p 34 43 Die Position jeder Patientenprobe auf der Mikrotitrierplatte muss festgehalten werden 10 2 2 Konjugatzusatz Nachdem alle Kalibratoren Proben oder Kontrollen hinzugegeben worden sind 100 uL Konjugat in jede Kavit t geben Kreuzkontamination zwischen Kavit ten vermeiden 10 2 3 Erste Inkubation Die Mikrotitrierplatte auf dem Plattensch ttler platzieren und w hrend des Zeitraums der Inkubation von 60 Minuten bei 20 30 sch tteln lassen 10 2 4 Die Kavit ten waschen Die Kavit ten sollten unter Verwe
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