fichier 2 - CRDP de Montpellier
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1. Contr le de la viabilit et num ration du ferment avant inoculation du mo t 21 points 1 1 Principe Pour la fermentation alcoolique le volume d inoculum doit tre compris entre 5 et 10 du volume total du mo t et le nombre de levures doit tre en d but de fermentation compris entre 1 0 10 et 2 0 10 par mL Le contr le de la viabilit et le d nombrement sont r alis s partir d une pr culture de Saccharomyces cerevisiae not e SC en cellule de Malassez annexe 1 1 2 Mat riel et r actifs Pr culture de Saccharomyces cerevisiae not e SC 5 mL Spectrophotom tre 3 cuves parafilm Bouillon Sabouraud 20 mL 2 tubes h molyse st riles Pipettes automatiques P200 P1000 c nes st riles Bleu de Funk Cellule de Malassez lamelle Pipette gradu e de 5 mL Protocole op ratoire Diluer en tube h molyse la pr culture 25 et mesurer la densit optique 620 nm en pr sence d un examinateur D terminer la concentration de la pr culture SC 1 unit de D O 620 nm correspond 1 1 407 levures mL 620 nm Dans un tube h molyse introduire 0 5 mL de la dilution pr c dente et 0 5 mL de Bleu de Funk Monter la pr paration en cellule de Malassez et effectuer la num ration w R aliser en pr sence d un examinateur la mise en celluie de Malassez puis pr senter un champ microscopique en indiquant le nombre de cellules compt es dans un rectangle2. Korburger J A and Rodgers M F 1978 Single or multiple antibiotic amended media to enumerate yeasts and molds J Food Prot 41 367 369 D nombrer s par ment les levures et les moisissures Les colonies de levures apparaissent en rose en raison de l assimilation du rose bengale Les colonies de levures et de bact ries non inhib es pouvant tre confondues il est n cessaire de r aliser un test de confirma tion au microscope 4 Baggerman W I 1981 A modified rose bengal medium for the enumeration of yeasts and moulds from foods Eu J Appl Microbiol Biotechnol 12 242 247 5 MacFaddin J F 1985 Media for isolation cultivation identification maintenance of medical bacteria Williams amp Wilklins Baltimore volume 1 681 682 6 Mistivec P B L R Beuchat and M A Cousin 1992 Yeasts and Molds In Compendium of methods for the microbiological examination of foods 3 Ed American Public Healh Assoc Washington D C 239 249 B T S BIOANALYSES ET CONTR LES Acad mie Session Examen ou Concours S rie Sp cialit option Rep re de l preuve preuve sous preuve 9 NOM 2 en majuscules suivi s il y a lieu du nom d pouse Z Pr noms N ducandidat e N e le e e le num ro est celui qui figure sur la PR Aa RE RA DT SSP MA OE V SET 06 PR ONO EN ETS COUNTER SE CT RR E En convocation ou a liste d appel Uniquementsisagitdunexamen gt I
3. 1 4 Compte rendu Donner les r sultats bruts du comptage Calculer le pourcentage de viabilit et la concentration de levures viables par mL de pr culture SC D terminer le volume de pr culture introduire pour 1 litre de mo t Justifier le calcul Comparer et expliquer les r sultats des concentrations SC obtenues avec la m thode spectrophotom trique et la num ration en cellule de Malassez 1 3 2 D nombrement des levures du mo t apr s inoculation 19 points 2 1 Mat riel Mo t not M 5 mL 6 g loses au Rose Bengale chloramph nicol pr coul es 8 tubes d eau st rile 9 mL 8 pipettes st riles de 1 mL ou syst me paille Dispositif d talement st rile B T S BIOANALYSES ET CONTR LES Rep re BAE5TM 3A SESSION 2008 Dur e 3H15 Page 2 6 Coefficient 4 2 2 Protocole op ratoire Un mo t a t inocul avec le volume de pr culture calcul pr c demment V rifier la concentration des levures du mo t M en r alisant un d nombrement en surface sur g lose au Rose Bengale et chloramph nicol annexe 2 Tester trois dilutions successives en double essais Montrer la r alisation d une dilution l examinateur 2 3 Compte rendu Justifier les dilutions ensemenc es Pr ciser la dur e et la temp rature d incubation 3 V rification de la s lectivit de l antibiotique du milieu de d nombrement 40 points La fiche technique du milieu de d nombrement au R
4. IU u o grej T Rep re BAE5TM 3A SESSION 2008 Dur e 3 H 15 z Page 5 6 Coefficient 4 ANNEXE 3 rendre avec la copie Poste n BON DE COMMANDE a DESCRIPTION DES EXAMENS MICROSCOPIQUES R SULTATS DES TESTS ENZYMATIQUES DEMANDE DE LA GALERIE MINIATURIS E ET MILIEUX B T S BIOANALYSES ET CONTR LES Rep re BAE5TM 3A SESSION 2008 Dur e 3 H 15 Page 6 6 Coefficient 4 ANNEXE 4 GABARIT DE R ALISATION DES STRIES B T S BIOANALYSES ET CONTR LES
5. Rep re BAE5TM 3A SESSION 2008 Dur e 3H15 Page 0 6 Coefficient 4 BREVET DE TECHNICIEN SUP RIEUR BIOANALYSES ET CONTR LES 1 JOUR Dur e de l preuve 3 H15 preuve E5 Unit U52 Techniques de microbiologie Au cours de l preuve le jury appr ciera les qualit s d organisation respect des r gles d hygi ne et de s curit en laboratoire Pour une bonne r alisation de l preuve une gestion optimale du temps imparti est n cessaire en fonction des temps d incubation Le candidat prendra soin de bien lire l ensemble du sujet avant de commencer les manipulations Documents interdits Calculatrice autoris e B T S BIOANALYSES ET CONTR LES Rep re BAE5TM 3A SESSION 2008 Dur e 3H15 Page 1 6 Coefficient 4 PREUVE E5 UNIT U52 Techniques de microbiologie 1 JOUR CONTR LE QUALIT AU COURS DE LA FABRICATION DE LA BIERE La majorit des bi res est labor e partir de grains d orges germ s broy s et brass s Le mo t obtenu est st rilis puis ensemenc avec une souche de levure du genre Saccharomyces pour effectuer une fermentation alcoolique Le laboratoire de microbiologie intervient tous les niveaux du proc d de fabrication en contr lant la viabilit des souches de levures dans la pr culture et dans le mo t Dans le cadre du contr le de la qualit des milieux utilis s on teste la s lectivit de l antibiotique du milieu de d nombrement 1
6. istiques de la cellule de Malassez Profondeur 0 2 mm 0 002 mm Surface totale du quadrillage 5 mm Volume total 1 mm Surface des rectangles quadriil s 1 20 de mm Volume correspondant aux rectangles quadrill s 1 100 de mm soit 1 100 du volume B T S BIOANALYSES ET CONTR LES Dur e 3H15 Coefficient 4 Rep re BAE5TM 3A SESSION 2008 Page 4 6 ANNEXE 2 FICHE MILIEU G LOSE AU ROSE BENGALE Formule pouvant tre ajust e de fa on obtenir des performances optimales Pour 1 litre de milieu Peptone papainique de soja 5 0 g Glucose 10 0 g Phosphate monopotassique 1 0 g Sulfate de magn sium 7 H O 0 5 g Rose bengale 50 mg Chloramph nicol 0 1 g Agar agar bact riologique 13 0 g pH du milieu pr t l emploi 25 C 7 2 0 2 Contr le Qualit Milieu d shydrat poudre cr me ros tre fluide et homog ne Milieu pr par g lose rose R ponse culturale typique apr s 72 heures d incubation 25 C Microorganismes Croissance __ Mcroorganismes __________Croissance _______ Saccharomyces cerevisiae ATCC __ 9763 bonne excellente Candida albicans ATCC 10231 bonne excellente ergillus niger ATCC 16404 bonne excellente Escherichia coli ATCC 25922 inhib e Staphylococcus aureus ATCC 25923 inhib e Stockage Conservation Pr paration Mettre en suspension 29 7 g de milieu d shydrat BK151 dans 1 litre d eau distil l e ou d min
7. ose Bengale et chloramph nicol fourni en annexe 2 pr cise les souches microbiennes de r f rence utiliser pour tester le pouvoir inhibiteur de l antibiotique 3 1 3 2 3 3 3 4 Mat riel et r actifs Souche de r f rence R sur g lose nutritive inclin e R actif pour coloration de Gram Eau oxyg n e et r actif pour oxydase Suspension R1 souche R de 18 heures dilu e au 1 100 en bouillon nutritif 5 mL 2 tubes d eau physiologique st rile 5 mL 5 tubes d eau physiologique st rile 9 mL 3 tubes h molyse st rile Tube contenant 1 mL de solution de chloramph nicol 0 2 g L Pipette automatique P 00 c nes st riles ou syst me paille 3 g loses Columbia 10 o ses calibr es 10 uL Identification de la souche de r f rence R aliser le s examen s microscopique s et test s enzymatique s n cessaires l orientation de la souche w Appeler un examinateur lors de la r alisation de ces examen s et test s Proposer sur l annexe 3 une galerie miniaturis e et les milieux n cessaires l identification du microorganisme 1 heure avant la fin de l preuve Ensemencer la galerie fournie par le centre Mise en vidence de l activit bact ricide du chloramph nicol Dans un contexte de qualit il est n cessaire de contr ler l activit anti microbienne de l antibiotique pr sent dans le milieu de d nombrement On consid re que cette substance est bac
8. ralis e Porter builition lentement en agitant jusqu dissolution compl te R partir raison de 100 mL par flacon St riliser l autoclave 121 C pendant 15 minutes Mode d emploi Faire fondre le milieu s il est pr par l avance Refroidir et maintenir 47 C Couler en bo tes de Petri st riles Laisser solidifier sur une surface froide Faire s cher les bo tes l tuve couvercle entrouvert Transf rer 0 1 mL de l chantillon analyser ou de ses dilutions d cimales dans les bo tes Etaler l inoculum en surface l aide d un taleur st rile Incuber 20 25 C pendant 3 5 jours l obscurit Lecture Milieu d shydrat 2 30 C La date de p remption est mentionn e sur l tiquette Milieu pr par titre indicatif Milieu en flacons 3 mois 2 8 C l abri de la lumi re Milieu en bo tes 7 jours 2 8 C l abri de la lumi re Pr sentation Milieu d shydrat Flacon de 500 g BK151HA R f rences bibliographiques 1 Mossel D A A Vasser M and Mengerink W J H 1962 A comparison of media for the enumeration of moulds and yeasts in foods and beverages Lab Pract 11 109 112 2 Jarvis B 1973 Comparison of an improved rose bengal chlortetracycline agar with other media for the selective isolation and enumeration of moulds and yeasts in food J Appl Bacteriol 35 723 727 3
9. t ricide si son action provoque au moins une r duction de 99 99 4 r ductions d cimales de l inoculum initial de la souche de r f rence R Pr paration des bo tes t moins R aliser une dilution not e R2 au 1 2 de la suspension R1 en eau physiologique st rile partir de R2 effectuer une s rie de dilution jusqu 10 en eau physiologique st rile Sur deux g loses Columbia r aliser l aide d une o se calibr e pour chaque dilution de R2 10 une strie de 5 cm selon le gabarit de l annexe 4 Incuber 37 C pendant 18 24heures R alisation du test Introduire dans un tube h molyse st rile 1 mL de chloramph nicol 0 2 g L et 1 mL de R1 M langer et laisser en contact pendant 60 minutes temp rature ambiante puis r aliser partir de ce test 3 stries identiques comme pr c demment la surface d une g lose Columbia incuber 37 C pendant 18 24 heures Compte rendu Justifier la pr paration de la suspension R2 ainsi que la dilution du t moin jusqu 10 Justifier l utilisation du chloramph nicol la contration de 0 2 g L B T S BIOANALYSES ET CONTR LES Rep re BAE5TM 3A SESSION 2008 Dur e 3H15 Page 3 6 Coefficient 4 ANNEXE 1 CELLULE DE MALASSEZ Rectangle utilis urface l mentaire a Quadrillage total b D tail agrandi des rectangles Quadrillage de Malassez utilis pour la num ration Caract r
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