Screen Anti-Phospholipides
Contents
1. n tests T Contenuto sufficiente per n saggi 66 a2 Conte do suficiente para n testes Temperaturbereich Optra Bepuokpactoc Temperature interval Temperatura de conservaci n Limites de temp rature de conservation Limiti di temperatura Intervalo de temperatura 29 30 Hergestellt von KatackevacotTis Manufacturer Fabricado por Fabriqu par Fabbricante Produzido por Herstellungsdatum Huepounv a Ko TOOKEeu S Date of manufacture Fecha de producci n Date de fabrication Data di produzione Data de produ o Biogef hrdung Bi0Aoytk c kiv vvoc Biological risk Riesgo biol gico Risque biologique Rischio biologico Risco biol gico Chargenbezeichnung ApiWu c napti ac Batch code C digo de lote Num ro de lot Codice del lotto Lote Inhalt ITEPIEZOUEVO TOV KIT Contents of kit Contenido del kit Contenu du coffret Contenuto del kit Conte do do kit Manufacturer Via Garibaldi 18 DiaMetra S r l Headquarter 20090 SEGRATE MI Tel 0039 02 2139184 02 26921595 Fax 0039 02 2133354 UK UNITED KINGDOM Distributed by A Menarini Diagnostics Ltd 405 Wharfedale Road Winnersh Wokingham Berkshire RG41 5RA ES ESPA A Distribuido por A Menarini Diagnosticos S A Avenida del Maresme 120 08918 Badalona Barcelona PT PORTUGAL Distribuido por A Menarini Diagn sticos Lda Quinta da Fonte Edif cio D Manuel 2 B 27170 203 Paco de Arcos DE D2. A MENARINI diagnostics CE Screen Anti Phospholipides D termination quantitative des auto anticorps anti phospholipides dans le s rum ou le plasma LOT UTILISATION PREVUE Le coffret screen Anti phospholipides est un test immunoenzymatique en phase solide pour la recherche quantitative des auto anticorps anti cardiolipines de classe IgG et IgM dans le s rum ou le plasma humain Les anticorps anti cardiolipines reconnaissent principalement le complexe phospholipides anioniques fB2 glycoprot ine l Les principaux phospholipides anioniques impliqu s sont les cardiolipines la phosphatidyl s rine le phosphatidyl inositol et lacide phosphatidique Ce test de diagnostic in vitro est un support dans le diagnostic et l valuation du risque de thrombose chez les patients ayant un Lupus Eryth mateux Syst mique LES ou des d sordres similaires IVD Voir tiquette externe 1 SIGNIFICATION CLINIQUE La premi re tude sur les anticorps anti phospholipides commen a en 1906 quand Wasserman introduisit un test s rologique pour la syphilis En 1942 on d couvrit que la composante active tait un phospholipide du nom de Cardiolipine Dans les ann es 50 il apparut qu un nombre lev de personnes pouvait tre positif pour le test de la syphilis mais ne pr senter aucun signe clinique de la maladie Au d but on classa le ph nom ne comme une s rie de faux positifs du test de la syphilis par la suite il apparut que
3. s contre les complexes antig niques form s par des phospholipides anioniques parmi lesquels la Cardiolipine la Phosphatidyl s rine le Phosphatidyl inositol l Acide Phosphatique et la B2 Glycoprot ine ces complexes sont adsorb s sur la microplaque Tous les anticorps pr sents dans les talons dans les contr les et dans les chantillons de s rum ou plasma pr dilu s des patients pourront se lier aux antig nes adsorb s sur la microplaque Apr s 60 minutes d incubation la microplaque est lav e avec une solution de lavage pour enlever les composants du s rum qui n ont pas r agi Une solution d immunoglobuline anti IgG humaine ou IgM conjugu e avec la peroxydase Conjugu reconna t les anticorps de classe IgG ou IgM li s aux antig nes immobilis s Apr s 30 minutes d incubation l exc s de conjugu enzymatique qui ne s est pas li sp cifiquement est enlev par lavage avec un tampon Solution de lavage On ajoute ensuite une solution substrat chromog nique Substrat TMB contenant de la T tram thylbenzidine Apr s 15 minutes d incubation le d veloppement de la couleur est bloqu par ajout de la solution d arr t La couleur de la solution devient jaune et l intensit de couleur d velopp e est directement proportionnelle la concentration en anticorps IgG ou IgM se trouvant dans l chantillon original 3 REACTIFS MATERIELS ET EQUIPEMENT 3 1 R actifs et mat riels fournis dans le kit 1 St
4. dans ce groupe de patients il y avait une pr valence lev e de d sordres auto immunitaires parmi lesquels le Lupus Eryth mateux Syst mique LES et le Syndrome de Sj grens Le terme Lupus anticoagulant LA utilis pour la premi re fois en 1972 d rive d observations exp rimentales dans lesquelles on observa une augmentation du risque de thrombose li e paradoxalement la pr sence de certains facteurs anti coagulants le terme LA n est pas tout fait correct car la pathologie se pr sente plus fr quemment chez les patients sans lupus et est associ des thromboses plut t qu un saignement anormal Plus r cemment le r le d un cofacteur la prot ine f2 glycoprot ine I apolipoprot ine H appel aussi B2GPI et ses interactions avec les phospholipides anioniques contenus dans le s rum plasma humain a t tudi Ce cofacteur est une f globuline avec poids mol culaire de 50 kDa qui se trouve dans le plasma la concentration d environ 200 ug mL On a d couvert que la B2GPI est impliqu e dans la r gulation de la coagulation du sang inhibant la voie intrins que La B2GPl in vivo est associ e des substances charg es n gativement tels que par exemple les phospholipides anioniques lh parine et les lipoprot ines La r gion qui lie les phospholipides est situ e dans son cinqui me domaine 8 C 2 C A Y 13 30 Y 96 d terminations REF 39826 Avec Pacronyme aPL anticorps anti ph
5. 000 uL de diluant chantillon 6 3 Pr paration de la Solution de lavage Avant utilisation diluer le contenu du flacon de la Solution de lavage conc 10X avec de l eau distill e jusqu un volume de 500 mL Pour pr parer des volumes inf rieurs respecter le rapport de dilution de 1 10 La solution de lavage dilu e est stable 2 8 C pendant au moins 30 jours Dans la solution de lavage concentr e on peut observer la pr sence de cristaux dans ce cas agiter temp rature ambiante jusqu compl te dissolution des cristaux pour une plus grande pr cision diluer tout le flacon de la solution de lavage concentr e 500mL en ayant soin de transf rer aussi les cristaux avec le lavage du flacon agiter ensuite jusqu dissolution compl te 6 4 Proc dure Porter tous les r actifs temp rature ambiante 22 28 C pendant au moins 30 minutes Puisqu il faut travailler en double pr parer deux puits pour chaque point de la courbe Standard S S4 deux pour chaque chantillon et un pour le blanc Distribuer _R actifs Standard Echantillon Blanc Echantillon dilu E 100 uL Incuber 60 minutes temp rature ambiante 22 28 C Enlever le contenu de chaque puit laver les puits trois fois avec 300 uL de solution de lavage dilu e Conjugu 100 uL 100 uL Incuber 30 minutes temp rature ambiante 22 28 C Enlever le contenu de chaque puit laver les puits trois fois avec 300 uL de solut
6. EUTSCHLAND Vertrieb durch A Menarini Diagnostics Eine Division der Berlin Chemie AG Glienicker Weg 125 12489 Berlin FR FRANCE Distribu par A Menarini Diagnostics France S A R L 3 5 Rue du Jura BP 70511 94633 Rungis Cedex Manufacturing site Via Giustozzi 35 35a Z Paciana 06034 FOLIGNO PG ITALY Tel 0039 0762 24864 Fax 0039 0762 316197 E mail info diametra com 30 30 EL Alav Metal OTNV EAAAAA arr tnv A Menarini Diagnostics S A 575 Vouliagmenis Ave 16451 Argyroupolis Attiki IT ITALIA Distribuito da A Menarini Diagnostics Via Lungo Ema 7 50012 Bagno a Ripoli Firenze
7. L Normal lt 10 lt 10 Elev gt 10 gt 10 Les valeurs report es ci dessus sont des valeurs sugg r es Chaque laboratoire devrait tablir ses propres valeurs de plage de r f rence en fonction de la proc dure utilis e des contr les de l appareillage et de la population de patients selon ses propres m thodes standard Les r sultats positifs devraient tre v rifi s en rapport avec l tat clinique du patient De plus toute d cision relative la th rapie devrait tre prise individuellement Il est recommand que chaque laboratoire tablisse ses propres plages de r f rences normales et pathologiques de Ab Anti Phospholipide s riques 10 LIMITATIONS DU TEST La pr sence dans l chantillon de complexes immunitaires ou d autres agr gats d immunoglobulines peut conduire des r actions asp cifiques avec par cons quent des r sultats faux positifs 11 PARAMETRES CARACTERISTIQUES 11 1 Pr cision et reproductibilit La pr cision et la reproductibilit ont t valu es en testant huit r plications de deux chantillons positifs dans deux exp riences diff rentes avec deux lots de kits diff rents Les op rations de distribution manuellement par un op rateur Les r sultats en terme de d viation standard et coefficient de variation sont report s ci apr s CV SD CV 102 SD 1 02 SD 5 7 2 6 1 ont t effectu es Echantillon Intra test 8 1 IgM Echantill
8. andards lgG et IgM Anti Phospholipides 5x 1 flacon 1 0 mL pr t l emploi Tampon phosphate 0 1 M NaN lt 0 1 STDO REF DCE002 11406 0 STD1 REF DCE002 11407 0 STD2 REF DCE002 11408 0 STD3 REF DCE002 11409 0 STD4 REF DCE002 11410 0 2 Contr les 1 flacon 1 0 mL pr t l emploi Tampon phosphate 0 1 M NaN lt 0 1 Contr le Positif DCE045 11402 0 3 Diluant Echantillon 1 flacon 100 mL pr t l emploi Tampon phosphate 0 1 M NaN lt 0 1 DCE053 11453 0 4 Conjugu lgG 1 flacon 15 mL pr t l emploi Conjugu Anti h lgG avec peroxydase BSA 0 1 Proclin lt 0 003 DCE002 11402 G 5 Conjugu IgM 1 flacon 15 mL pr t l emploi Conjugu Anti h IgM avec peroxydase BSA 0 1 Proclin lt 0 003 DCE002 11402 M 6 Microplaque recouverte 1 microplaque fractionnable DCE002 11403 0 7 Substrat TMB 1 flacon 15 mL pr t l emploi 3 3 5 5 t tram thylbenzidine 0 26 g L peroxyde d hydrog ne 0 05 DCE004 8 Solution de lavage conc 10X 1 flacon 50 mL Tampon phosphate 0 2 M proclin lt 0 002 DCE054 9 Solution d arr t 1 flacon 15 mL pr t l emploi Acide sulfurique 0 15 M DCE005 3 2 R actifs n cessaires non fournis dans le kit Eau distill e 3 3 Mat riel et quipement auxiliaire Distributeurs automatiques Lecteur pour microplaques 450 nm 4 PRECAUTIONS e Ce kit est le diagnostic in vitro effectuer par du personnel exp riment e Suivre rigoureusem
9. anism of Action of lgG Lupus Anticoagulants Blood Vol 70 N 1 69 76 1987 SUGGESTIONS POUR LA RESOLUTION PROBLEMES TROUBLESHOOTING DES ERREURS CAUSES POSSIBLES SUGGESTIONS 16 30 Aucune r action colorim trique de l chantillon absence distribution du conjugu contamination du conjugu et ou du substrat erreurs dans l ex cution de l chantillon ex Distribution accidentelle des r actifs en s quence erron e ou provenant de flacons erron s etc R action trop faible DO trop basses conjugu non ad quat ex ne provenant pas du kit original temps d incubation trop bref temp rature d incubation trop basse R action trop intense DO trop hautes conjugu non ad quat ex ne provenant pas du kit original temps d incubation trop long temp rature d incubation trop lev e mauvaise qualit de l eau utilis e pour la solution de lavage faible degr de d ionisation lavages insuffisants conjugu non compl tement enlev Valeurs inexplicables hors chelle contamination de pipette embouts ou r cipients lavages insuffisants conjugu pas compl tement enlev CV intra test lev r actifs et ou strip non port s temp rature ambiante avant l utilisation le laveur pour microplaques ne lave pas correctement suggestion nettoyer la t te du laveur CV inter test lev conditions d incubation non constantes temp rature contr les et chantillo
10. ctifs sont stables jusqu la date de p remption s ils sont conserv s et trait s en suivant les instructions fournies e Les barrettes des puits non utilis es doivent tre replac es imm diatement dans l enveloppe refermable contenant le mat riel de dessiccation et conserv es dans l enveloppe bien ferm e 2 8 C 6 PROCEDURE 6 1 Pr paration des Standards S S4 Les standards sont pr ts l usage et sont mixtes ils contiennent donc les anticorps lgG et les IgM et les concentrations pr sentes sur l tiquette reportent les valeurs calibr es par rapport au mat riel de r f rence de Harris 6 2 Pr paration de l chantillon Pour la r alisation du test on peut utiliser des chantillons de s rum ou de plasma Les chantillons utiliser doivent tre limpides ll est conseill d viter les contaminations dues lhyperlip mie m me si ces derni res n interferent pas avec l analyse Les chantillons peuvent tre conserv s r frig r s 2 8 C pendant max 5 jours ou bien congel s 20 C pour 6 mois ll est conseill d viter les cong lations et d cong lations r p t es des chantillons de s rum qui pourraient conduire une perte variable de l activit des auto anticorps L analyse d chantillons inactiv s par la chaleur est d conseill e Tous les chantillons de s rum doivent tre dilu s au 1 100 avec le diluant chantillon Donc 10 uL de s rum peuvent tre dilu s avec 1
11. ent la s quence des passages indiqu e dans ce protocole Observer les recommandations pour lex cution du contr le de qualit dans les laboratoires cliniques en testant les contr les et ou les pools de s rums e Tous les r actifs doivent tre conserv s temp rature contr l e de 2 8 C dans le r cipient d origine Ne pas m langer des r actifs de lots diff rents Les dates de p remption report es sur les tiquettes des r cipients d exp dition et de tous les flacons doivent tre respect es Ne pas utiliser de composants apr s la date de p remption e Avant utilisation laisser tous les composants des kits et les chantillons temp rature ambiante et m langer soigneusement e Tous les r actifs d origine humaine utilis s pour la pr paration des standards et des contr les ont t analys s et sont non r actifs aux HIV 1 et 2 et aux anticorps HCV et Hbs Ag Cependant aucun test 14 30 n offre la certitude compl te de l absence de HIV HBV HCV ou d autres agents infectieux C est pourquoi les contr les positif et n gatif et les standards doivent tre manipul s comme des produits potentiellement infect s e Eviter le contact entre la solution tampon de peroxyde et les mat riels facilement oxydables les temp ratures extr mement lev es pourraient provoquer une combustion spontan e p CONDITIONS DE CONSERVATION Conserver tous les r actifs du kit 2 8 C Ne pas congeler Les r a
12. est valable uniquement si la densit optique 450 nm du contr le positif ainsi que celle des talons S0 S4 co incident avec les intervalles correspondants indiqu s dans le Certificat de Contr le de Qualit inclus dans le kit 8 CALCUL DES RESULTATS Pour le screen anti phospholipides il est recommand d utiliser les courbes log x lin y et 4 param tres d ajustement L approximation de Spline et les coordonn es log log peuvent galement tre utilis es Il est cependant recommand d utiliser une courbe Lin Log 15 30 Tout d abord il faut calculer la moyenne des densit s optiques pour chaque talon Utiliser une feuille de papier log lin aire et reporter les valeurs des densit s optiques de chaque talon sur l axe des ordonn es axe des Y et les valeurs des concentrations correspondantes sur l axe des abscisses axe des X Dessiner la courbe qui s approche le mieux de tous les points d talonnage Les points des talons peuvent aussi tre reli s avec des segments de ligne droite La concentration des chantillons inconnus peut tre d termin e en reportant la valeur de la DO obtenue sur la courbe de calibration 9 VALEURS DE REFERENCE Dans une tude sur les valeurs normales effectu e avec des chantillons de s rum provenant de donneurs sains on a d termin les intervalles de normalit suivants avec le test Screen Anti Phospholipide Anti Phospholipide Ab IgG GPL U mL IgM MPL U m
13. ion de lavage dilu e Substrat TMB 100 uL 100 uL 100 uL Incuber 15 minutes dans ambiante 22 28 C Solution d arr t 100 uL 100 uL 100 uL Lire l absorbance E a 450 nm en mettant a z ro avec le blanc l obscurit temp rature Pour viter la contamination microbienne il est conseill de pr lever du flacon du conjugu HRP uniquement la quantit de conjugu n cessaire pour la r alisation du test Ne jamais remettre le conjugu utilis dans le flacon original 7 CONTROLE DE QUALITE e Le contr le positif pour les anti phospholipides doit tre inclus chaque fois que l on effectue un test pour s assurer que tous les r actifs et que le test fonctionnent correctement e Puisque le contr le est pr dilu il ne repr sente pas un contr le de proc dure pour les techniques de dilution utilis es pour les chantillons e D autres s rums de contr le peuvent tre pr par s en recueillant un pool de s rums humains en les fractionnant et en les conservant lt 20 C e Pour que les r sultats des tests soient consid r s valides tous les crit res suivants doivent tre satisfaits Si m me un seul ne rentre pas dans les valeurs sp cifi es les r sultats ne pourront tre consid r s valables et le test devra tre r p t Le contr le positif sert contr ler un ventuel mauvais fonctionnement des r actifs mais il n est pas li la pr cision de la valeur seuil du test Le test
14. ns non distribu s en m me temps avec les m mes intervalles contr ler la s quence de distribution Variabilit intrins que des op rateurs dur e ou Ed 10 2009 Verwendete Symbole Ere nynon ovuboicov Explanation of symbols Explicacion de los simbolos Explication des symboles Spiegazione dei simboli Significado dos s mbolos In vitro Diagnostikum In vitro OLayVOOTIKN 1ATPIK OVOKEVN In vitro diagnostic medical device Para diagn stico in vitro Dispositif m dical de diagnostic in vitro Dispositivo di diagnostica in vitro Dispositivos m dicos para diagnostico in vitro Bestellnummer Apiu c katad yov Catalogue number N mero de cat logo R f rences du catalogue Numero di catalogo N mero do cat logo Verwendbar bis letzter Tag des Monats Xphon oc n tedevta a nu pa tov UVA Use by last day of the month Fecha de caducidad usar antes del ltimo d a del mes Utiliser avant dernier jour du mois indiqu Utilizzare prima del ultimo giorno del mese Utilizar at antes do ltimo dia do m s Gebrauchsanweisung beachten 2uvufovAevtelte tis OONy eC YPAONG Read instructions for use Consultar las instrucciones de uso Consulter le mode d emploi Consultare le istruzioni per luso Consultar instru es para uso Ausreichend f r n Tests To repiey uevo enrapKe yia n doxuactes Contents for n tests Contenido suficiente para n ensayos 6622 Contenu suffisant pour
15. on 14 2 AAA CV SD CV Intra test 7 32 56 333 72 Inter tests_ 11 53 7 6 345 61 11 2 Sensibilit Des tests de corr lation avec un kit analogue commercial de r f rence effectu s sur 18 s rums dont 4 positifs pour IgG 8 positifs pour IgM et 14 n gatifs pour IgG 10 n gatifs D 1 2 D Inter tests 9 8 Co pour IgM ont montr une sensibilit de 100 0 pour les IgG et de 87 5 pour les IgM 11 3 Sp cificit Des tests de corr lation avec un kit analogue commercial de r f rence effectu s sur 18 s rums dont 4 positifs pour IgG 8 positifs pour IgM et 14 n gatifs pour IgG 10 n gatifs pour IgM ont montr une sp cificit de 92 9 pour les IgG et de 90 0 pour les IgM 11 4 Limites de d tection La plus faible concentration qui peut tre distingu e par le standard z ro est d environ 1 U mL 12 DISPOSITIONS POUR L ELIMINATION Les r actifs doivent tre limin s en accord avec les lois locales BIBLIOGRAPHIE 1 Hughes G R V Harris E N Gharavi AE The Anticardiolipin Syndrome J Rheumat 13 3 486 489 1986 2 Harris E N et al Evaluation of the anti Cardiolipn antibody test report of an international Workshop held 4 April 1986 Clin Exp Immunol 68 215 222 1987 3 Domke N Siegert G Phospholipidantik rper und ihre klinische Bedeutung Zeitschrift fur Klinische Medizin 16 1399 1401 1988 4 Pengo V et al Immunological Specificity and Mech
16. ospholipides on entend de facon impropre les anticorps dirig s contre les phospholipides charg s n gativement tels que la Cardiolipine CL la Phosphatidyl s rine PS le Phosphatidyl inositol Pl et l Acide Phosphatique PA selon une acception plus correcte du terme sont entendus comme anticorps anti phospholipides ces anticorps dirig s contre le complexe entre la B2GPI et les phospholipides anioniques capables de se lier au cinqui me domaine de la B2GPI Parmi ceux ci la Cardiolipine est le phospholipide utilis le plus commun ment comme antig ne pour doser les aPL par m thode ELISA Les laboratoires de diagnostic mesurent les anticorps dirig s contre le complexe entre la B2GPI et les phospholipides charg s n gativement tels que la Phosphatidyl s rine PS le Phosphatydil inositol PI et Acide phosphatique PA Certains chercheurs ont sugg r que l utilisation de la PS la place de la Cardiolipine dans les dosages ELISA permettrait un diagnostic plus pr cis Cependant les anticorps anti phospholipides sont utilis s moins commun ment et leur utilisation suppl mentaire peut augmenter la sensibilit clinique dans les chantillons de patients avec un Syndrome des Anti phospholipides APS suppos mais ne peut remplacer la d termination des auto anticorps anti Cardiolipine 2 PRINCIPE DE LA METHODE Le test des anti phospholipides se base sur la liaison des anticorps pr sents dans le s rum et dirig
Download Pdf Manuals
Related Search