RealStar® alpha Herpesvirus PCR Kit 1.0
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1. Contr le interne dans les diff rents canaux correspondant de l instrument de PCR en temps r el Le test consiste en deux proc dures r alis es dans un m me tube essai e Jlamplification par PCR de l ADN cible et le Contr le interne e D tection simultan e des amplicoms par des sondes marqu es par fluorescence Le kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 a t d velopp et valid pour tre utilis avec les instruments de PCR suivants e m2000rt Abbott Diagnostics e Mx 3005P QPCR System Stratagene e VERSANT kPCR Molecular System AD Siemens e ABI Prism 7500 SDS and 7500 Fast SDS Applied Biosystems e Rotor Gene 3000 6000 Corbett Research e Rotor Gene Q 5 6 plex Platform QIAGEN Le kit RealStar a pha Herpesvirus PCR 1 0 est compos de Deux Mastermix Mastermix A et Mastermix B e Mod le de Contr le interne Cl e Contr le positif HSV 1 e Contr le positif HSV 2 e Contr le positif VZV e Eau de qualit PCR RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 Les r actifs du Mastermix A et du Mastermix B contiennent tous les composants tampon enzyme amorces sondes n cessaires a la r alisation de l amplification par PCR a la d tection de la cible et la diff renciation de l ADN sp cifique du HSV 1 du HSV 2 et du VZV ainsi que le contr le interne le tout en une seule mise en place de r action Mises en garde et pr cautions L utilisation de ce produit est limit e au2. HSV 2 n apparaitra que sur la chaine de d tection rouge Cy5 et le signal sp cifique du contr le interne n apparaitra que sur la chaine jaune JOE voir figure 2 Cepen dant le signal de l ADN sp cifique du HSV 1 n apparait pas uniquement dans la 18 RealStar alpha Herpesvirus PCR Kit 1 0 chaine de d tection orange ROX mais produit galement un signal faible d interf rence dans la chaine de d tection Cy5 Ce signal d interf rence dans le Cy5 sera toujours plus faible fluorescence plus faible qu un signal produit par un chantillon d ADN sp cifique de HSV 2 dans le Cy5 Par cons quent nous recom mandons fortement d analyser les chantillons en comparant avec les contr les positifs des VZV HSV 1 et HSV 2 voir figure 2 Si vous avez des questions rela tives l analyse de donn es sur l automate Rotor Gene merci de contacter notre support technique Figure 2 Dilution en s ries d ADN sp cifique de VZV HSV 1 et de HSV 2 de 10 copies ul 10 copies pl Les chantillons ont t analys s en utilisant le kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 sur un instrument Rotor Gene 6000 Corbett Research Les chantillons positifs l ADN de VZV g n rent des signaux uniquement dans la chaine de d tection verte FAM les chantillons positifs l ADN de HSV 2 g n re des signaux seulement dans la chaine de d tection rouge Cy5 et le contr le interne g n re des signaux uniquement dans le Jaune JOE Les ch
3. des chantillons de diagnostic analy s es sur une base reguliere 21 12 28 RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 Limites et precautions L utilisation de ces produits est limit e au personnel comp tent et form aux techniques de PCR en temps r el et aux proc dures de diagnostic in vitro Le respect des Bonnes Pratiques de Laboratoire est essentiel pour assurer la performance du dosage Une attention particuli re doit tre donn e la pr paration des chantillons afin de pr server la puret des composants du kit Tous les r actifs doivent tre minutieusement suivis afin d viter les impuret s et les contaminations Le moindre r actif douteux doit tre cart l est n cessaire de respecter les proc dures de pr l vement de l chantillon de transport et de conservation afin d assurer les performances optimales du test Ce dosage n est pas destin tre r alis directement sur l chantillon L extraction des acides nucl iques doit avoir t r alis e au pr alable La pr sence des inhibiteurs de PCR peut tre une cause de faux n gatifs ou de r sultats erron s De potentielles mutations dans les r gions du g nome du VZV HSV 1 et ou HSV 2 couvertes par les amorces et ou les sondes peuvent conduire de mauvais r sultats pour la d tection du virus Comme avec tous les tests de diagnostic les r sultats du kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 doivent tre interpr t s en prena
4. dyes e D finir les tra eurs de fluorescence dyes Detection Nom de tra eur Reporteur Quencher ADN sp cifique VZV ADN sp cifique HSV 1 ADN sp cifique HSV 2 Contr le interne CI 9 3 Profil de temp rature et aquisition des dyes e D finir le profil de temp rature et l aquisition des dyes Nombre cycles Aquisition Temperature D naturation Tenu 95 C 10 00 min 95 C 0 15 min Amplification Cyclique 58 C 1 00 min RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 10 Analyse des donn es Pour des informations basiques concernant l analyse des donn es sur des instru ment sp cifique de PCR en temps r el merci de se r f rer au manuel concern Pour des informations d taill es concernant l analyse des donn es avec le kit RealStar aloha Herpesvirus PCR 1 0 sur diff rents instruments de PCR en temps reel merci de contacter notre support technique L analyse des donn es si vous utilisez le ABI Prism 7500 SDS ou le 7500 Fast SDS Applied Bio systems le m2000rt Abbott Diagnostics le VERSANT KPCR System Siemens ou le Mx3005P QPCR System Stratagene Si vous utilisez un de ces syst mes de PCR en temps r el il n y aura pas d interf rences entre les diff rentes canals de d tection si l talonage des dyes purs a t bien r alis Fichier de composition du spectre pur ainsi que le blanc Fichier de composition du blanc Par cons quent le signal de l ADN sp cifique du VZV
5. n apparait que dans le canal de d tection du FAM l ADN sp cifique du HSV 1 n apparait que dans le canal de d tection du ROX l ADN sp cifique du HSV 2 n apparait que dans le canal de d tection du Cy5 et le Contr le interne n est visible que dans le canal de d tection du JOE voir figure 1 RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 ee FAM VZV oe ROX HSV 1 Cy5 HSV 2 Figure 1 Dilutions en s rie de l ADN sp cifique de VZV HSV 1 et de HSV 2 de 1 copie ul 10 copies ul Les chantillons ont t analys s en utilisant le kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 sur un ABI Prism 7500 SDS Applied Biosystems Les chantillons positifs l ADN de VZV g n re des siganux dans le canal de d tection FAM Les chantillons positifs l ADN de HSV 1 g n re des signaux dans le canal de d tection de ROX et les chantillons positifs l ADN de HSV 2 g n re des signaux dans le canal de d tec tion de Cy5 Le contr le interne g n re des signaux dans le canal de d tection JOE Analyse des donn es en utilisant le Rotor Gene 3000 6000 Corbett Re search ou le Rotor Gene Q 5 6 plex Platform QIAGEN L utilisation du Rotor Gene 3000 6000 Corbett Research ou du Rotor Gene Q 5 6 plex Platform QIAGEN peu entrainer de l g res interf rences entre les chaines de d tection ROX et Cy5 Par cons quent le signal de l ADN sp cifique de VZV n apparaitra que sur la chaine de d tection verte FAM celui du
6. nucl iques purifi s restants ou recommencer avec l chantillon de d part 20 10 2 RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 10 2 1 Analyse qualitative No de echan tillion Canal de d tection FAM POSITIF Canal de d tection ROX NEGATIF Interpr tation des r sultats Canal de d tection Cy5 NEGATIF Canal de d tection JOE POSITIF Interpr tation r sultats ADN sp cifique de VZV d tect ADN sp cifique de A NEGATIF POSITIF NEGATIF POSITIE HSV 1 d tect ADN sp cifique de NEGATIF NEGATIF POSITIF Neila S s 2 HSV 2 d tect Pas d ADN de VZV ou de HSV 1 ni de HSV 2 d tect NEGATIF NEGATIF NEGATIF POSITIF L chantillon ne con tient pas de quantit d tectable de ces ADN sp cifiques Inhibition ou chec de la r actif R p ter le test partir de l chantillon original ou bien en pr lever un nouveau NEGATIF NEGATIF NEGATIF NEGATIF La d tection du contr le interne dans le canal de d tection JOE n est pas requise pour les r sultats positifs dans le canal de d tection FAM De hautes charges virales en alpha Her pesvirus dans l chantillon peuvent conduire des signaux du contr le interne r duits ou absents Un signal d interf rence peut apparaitre dans la chaine de d tection rouge Cy5 si vous utilisez un automate Rotor Gene 3000 6000 Corbett Research ou un Rotor Gene Q5 6 plex Platform QIAGEN 21 RealStar aloha
7. sur l analyse quantitative des concentrations d finies d ADN sp cifique de VZV HSV 1 et de HSV 2 et sur la valeur seuil du cycle Ct en terme de contr le interne Au moins six r p titions par chantillon ont t analys es pour la variabilit intra dosage inter dosage et inter lot La variance totale a t calcul e en combinant les trois analyses Table 5 Donn es de pr cision pour le syst me sp cifique VZV HSV 1 and HSV 2 du kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 Coefficient Variance de Variation 7o Systeme C moyenne Ecart sp cifique copies pl type VZM 86 3 4 0 15 8 4 6 Variabilit HSV 1 96 0 4 7 22 4 4 9 Intra dosage HSV 2 BITES T3 52 7 9 Variabilit Inter Lot 26 RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 Table 6 Donn es de pr cision pour le contr le interne du kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 Les chantillons qui ont t analys s contenaient 10 copies ul de l ADN cibles respectif Coefficient Syst me Contr le interne e Ecart type Variance de Variation specifique LU VZM 0 02 0 001 0 10 Variabilit HSV 1 0 06 0 004 0 25 Intra dosage HSV 2 0 17 0 031 0 76 0 06 Variabilit Inter Lot 0 12 0 15 114 R p tabilit Afin de s assurer de la r p tabilit du kit RealStar a pha Herpesvirus PCR 1 0 la sp cificit et la sensibilit sont valu es en analysant des panels comp tente d j tablis pour VZV HSV 1 et HSV 2 ainsi que
8. ul de l chantillon lu a partir de l extraction d acide nucl ique ou 10 ul des contr les calibrateurs contr les positifs ou n gatifs e Assurez vous qu il y a au moins un contr le positif et un n gatif par essai e Pour une d termination quantitative tous les calibrateurs QS1 to QS4 doivent tre utilis s e Homog n iser avec soin les chantillons et les contr les avec le Mastermix en pipetant e Couvrir la plaque de 96 puits avec un film adh sif opaque appropri et les tubes essai avec un couvercle appropri e Centrifuger les plaque de 96 puits avec un rotor microplaque pendant 30 secondes environ 1000 x g 3000 rpm Pr paration de la r action Mastermix Echantillon ou contr le 9 Programmation des instruments de PCR en temps r el Pour des informations basiques concernant l installation et la programmation des diff rents instruments de PCR en temps r el merci de vous r f rer au manuel d utilisation des diff rents instruments Pour des instructions de programmation d taill es concernant l utilisation du kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 sur un instrument de PCR en temps r el sp cifique merci de contacter notre support technique 15 RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 9 1 Parametres e D finir les param tres suivants Param tres Volume de r action 30 ul Taux de rampe par d faut R f rence passive ROX 9 2 Tra eurs de fluorescence
9. 9 Hepatitis B Virus Hepatitis C Virus Human Immunodeficiency Virus 1 RealStar alpha Herpesvirus PCR Kit 1 0 Canal FAM VZV Negatif Negatif Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif avec des organismes sp cifi s ci dessus Canal ROX HSV 1 Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Canal Cy5 HSV 2 Negatif Positif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Negatif Table 4 Les organismes test s afin de d montrer la sp cificit analytique du kit RealStar Contr le interne Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Valide Le kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 n a pr sent aucune r action crois e 25 RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 11 3 Pr cision Les donn es de pr cision pour le kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 ont t d termin es comme la variabilit intra dosage variabilit l int rieur d un seul es sai la variabilit inter dosage variabilit entre diff rents essais et la variabilit inter lot variabilit entre des lots de productions diff rentes La variabilit des donn es est exprim e en terme d cart type de variance et de coefficient de variation Les donn es sont bas es
10. Herpesvirus PCR Kit 1 0 11 Evaluation des performances En l absence de standards internationaux disponibles pour le VZV et ou pour le HSV 1 et ou HSV 2 l valuation des performances du kit RealStar alpha Herpes virus PCR 1 0 a t faite en utilisant de l ADN sp cifique de VZV souche VZV ELLEN ATCC Num ro VR 1367 de l ADN sp cifique de HSV 1 ATCC Nu m ro VR 1493 et de l ADN sp cifique de HSV 2 ATCC Num ro VR 540 11 4 Sensibilit analytique La sensibilit analytique du kit RealStar a pha Herpesvirus PCR 1 0 est d finie comme tant la concentration copies par ul d luat de mol cules d ADN sp ci fique du virus VZV ou HSV 1 ou HSV 2 qui peuvent tre d tect es avec un taux sup rieur 2 95 La sensibilit analytique a t d termin e en analysant les dilu tions en s rie d ADN quantifi de VZV d HSV 1 et d HSV 2 Table 1 R sultats de PCR utilis s pour le calcul de la sensibilit analytique du kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 C initiale Nombre de Nombre de Taux de copies ul cycles positifs succes 22 RealStar a pha Herpesvirus PCR Kit 1 0 La sensibilit analytique du kit RealStar aloha Herpesvirus PCR 1 0 d termin e par analyse Probit est de 0 2 copies ul d luat intervalle de confiance 95 Cl 0 1 1 5 copies ui Table 2 R sultats de PCR utilis s pour le calcul de la sensibilit analytique du syst me sp cifique au HSV 1 du kit RealStar
11. a VZV appartiennent la famille alpha herpesviridae 6 Description du produit Le kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 est un test de diagnostic in vitro pour la d tection simultan e et la diff rentiation de l ADN sp cifique du virus herpes simplex de type 1 HSV 1 de type 2 HSV 2 et de la varicelle zona VZV Le dosage comprend un syst me d amplification h t rologue Contr le interne afin d identifier d ventuelles inhibitions de la PCR et de confirmer l int grit des r actifs du kit Le test est bas sur la technologie de la PCR en temps r el utilisant une r action en chaine par polym rase PCR pour l amplification de s quences de cibles sp ci fiques et les sondes cibles sp cifiques pour la d tection de l ADN amplifi Les sondes sont marqu es avec un marqueur fluorescent et un quencher Les sondes sp cifiques l ADN du HSV 1 sont marqu es avec le fluorophore ROX Les sondes sp cifiques l ADN du HSV 2 sont marqu es avec un fluorophore qui pr sente les m me caract ristiques que le Cy5 les sondes sp cifiques l ADN du 8 RealStar alpha Herpesvirus PCR Kit 1 0 VZV sont marqu es avec le fluorophore FAM La sonde sp cifiques au Contr le interne CI est marqu e avec le fluorophore JOE L utilisation de sondes li es des dyes permet la d tection de l ADN sp cifique en parall le avec la diff rentiation entre l ADN sp cifique du HSV 1 du HSV 2 et du VZV ainsi que la d tection du
12. a pha Herpesvirus PCR 1 0 C initiale Nombre de Nombre de Taux de copies pl cycles positifs succes La sensibilit analytique du kit RealStar a pha Herpesvirus PCR 1 0 pour la d tection de l ADN sp cifique de HSV 1 a t d termin e par analyse probit 0 46 copies ul d luat intervalle de confiance 95 Cl 0 23 1 8 copies pl 23 RealStar alpha Herpesvirus PCR Kit 1 0 Table 3 R sultats de PCR pour le calcul de la sensibilit analytique du systeme sp cifique au HSV 2 du kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 Nombre de Nombre de Taux de succes C initiale copies pl cycles positifs La sensibilit analytique du kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 pour la d tection de l ADN sp cifique de HSV 2 a t d termin e par analyse probit 1 00 copie ul d luat intervalle de confiance 95 Cl 0 5 4 1 copies ul 11 2 Sp cificit analytique La sp cificit analytique du kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 a t valu e en testant un panel dADN ARN g nomique extrait d autres virus de l herp s ou d autres pathog nes significatifs chez les patients immunod prim s 24 RealStar alpha Herpesvirus PCR Kit 1 0 alpha Herpesvirus PCR 1 0 Organismes Herpes Simplex Virus 1 Herpes Simplex Virus 2 Varicella Zoster Virus Epstein Barr Virus Cytomegalovirus Human Herpesvirus 6 Human Herpesvirus 7 Human Herpesvirus 8 BK Virus JC Virus Parvovirus B1
13. antillons positifs l ADN de HSV 1 g n re des signaux non seulement dans l orange ROX mais aussi un signal plus faible dans la chaine de d tection du Cy5 Ce signal d interf rence sera toujours plus faible fluorescence plus faible qu un signal produit par un chan tillon positif l ADN de HSV 2 dans le Cy5 19 RealStar alpha Herpesvirus PCR Kit 1 0 10 1 Validit des tests de diagnostic 10 1 1 Validit des tests de diagnostic qualitatif Pour un test de diagnostic valide qualitatif les valeurs suivantes des contr les doivent tre respect s Canal de Canal de Canal de Canal de Nom du Contr le d tection d tection d tection d tection FAM ROX Cy5 JOE Contr le positif POSITIF NEGATIF NEGATIF POSITIF VZV El NEGATIF POSITIVE NEGATIF POSITIF HSV 1 E NEGATIF NEGATIF POSITIVE POSITIF HSV 2 Contr le negatif NEGATIF NEGATIF NEGATIF POSITIF Des signaux d interf rence peuvent apparaitre dans la chaine de d tection rouge Cy5 si vous utilisez un automate Rotor Gene 3000 6000 Corbett Research ou un Rotor Gene Q5 6 plex Platform QIAGEN 10 1 2 Invalidit des tests de diagnostic qualitatif Un test de diagnostic qualitatif est invalide i si l essai n a pas t r alis com pl tement ou ii si l une des conditions de contr le pour l un des tests de validit du test de diagnostic n est pas respect En cas de test de diagnostic invalide r p ter le test en utilisant les acides
14. ealtonae DIAGNOSTICS altona Diagnostics GmbH M rkenstr 12 22767 Hamburg Germany phone 49 40 548 06 76 O fax 49 40 548 06 76 10 e mail info altona diagnostics com www altona diagnostics com ealtonae RealStar alpha Herpesvirus PCR Kit 1 0 08 2011 always a drop ahead MAN 081010 FR 01 RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 RealStar alpha Herpesvirus PCR Kit 1 0 Pour utilisation avec m2000rt Abbott Diagnostics Mx 3005P QPCR System Stratagene VERSANT KPCR Molecular System AD Siemens ABI Prism 7500 SDS and 7500 Fast SDS Applied Biosystems Rotor Gene 3000 6000 Corbett Research Rotor Gene Q5 6 plex Platform QIAGEN M M Usage de DIAGNOSTIC IN VITRO R f rence 081013 96 tests Conserver 15 C 25 C Aout 2011 EH lt lt g8 amp altona Diagnostics GmbH M rkenstraf3e 12 D 22767 Hamburg RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 Sommaire 1 Be CAT BEE 6 2 Composants du Kit E 6 3 Conservation EE 6 4 Mat riels requis non fournis ins 7 5 Informations g n rales cesse eeeeeee eene enne nnns 8 6 Description du produit lleseeeeseeeeeee eese eene 8 T Mises en garde et pr cautions eeeeeeeeeee nennen 11 8 Nee d emploi ac dee essaie ii 12 8 1 Pr paration de l chantillon 12 8 2 Pr paration du Master MIX 13 8 3 Pr paratio
15. in d viter les contaminations avec les amplicons Des contr les additionnels doivent tre faits en accord avec les lignes direc trices aux exigences locales ou gouvernementales ou des organismes d accr ditation Ne pas utiliser des composants au del de leur date d expiration Eliminer les chantillons et les d chets d essai selon la r glementation de s curit s locales RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 8 Mode d emploi 8 1 Pr paration de l chantillon L ADN extrait est le mat riel de d part pour le kit RealStar aloha Herpesvirus PCR 1 0 La qualit de l ADN extrait a un impact important sur la performance de l int gralit du test Il est important de s assurer que le syst me d extraction des acides nucl iques utilis est compatible avec la technologie de PCR en temps r el Les syst mes d extraction nucl iques et les kits suivants sont recommand s e KingFisher Flex Thermo Scientific avec ExtraStar Purification Kit altona Diagnostics e VERSANT Molecular System SP Siemens e HighPure Viral Nucleic Acid Kit Roche e QlAamp DNA Mini Kit QIAGEN Si pour la pr paration des chantillons vous utilisez une colonne comportant des tampons de lavage avec de l thanol une tape de centrifugation suppl mentaire de 10 minutes environ 17000 x g 13000 rpm en utilisant un nouveau tube a essai est recommand avant l lution des acides nucl iques NOTE L utilisation d ADN po
16. ions Mastermix Mastermix B Contr le interne RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 e Si le contr le interne est utilis comme un contr le lors de la proc dure de pr paration de l chantillon et comme un contr le d inhibition de la PCR le contr le interne doit tre ajout au moment de la proc dure d extraction de l acide nucl ique e Peu importe la m thode ou le syst me utilis pour l extraction de l acide nucl ique le contr le interne ne doit pas tre ajout directement l chantillon Le Cl doit toujours tre ajout au m lange chantillon tampon de lyse Le volume de Cl ajouter d pend toujours et uniquement du volume d lution Il repr sente 10 du volume d lution Par exemple si l acide nucl ique va tre lu dans 60 ul de tampon d lution ou de tampon 6 ul de CI par chantillon doivent tre ajout s au m lange chantillon tampon de lyse NOTE A Ne jamais ajouter le Contr le Interne directement avec l chantillon e Si le Cl a t ajout pendant la phase de pr paration de l chantillon le Mastermix doit tre pr par selon le sch ma de pipetage suivant Nombre de r actions Mastermix Mastermix B Volume Mastermix RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 8 3 Preparation de la reaction e Pipeter 20 ul de Mastermix dans chacun des puits n cessaires de la plaque 96 puit ou d un tube essai permettant les r actions optiques e Ajouter 10
17. lot Contient le nombre suffisant pour r aliser n tests Limites de temperature Utiliser avant Version Se reporter au manuel d utilisation Attention Fabricant 30
18. ltona Diagnostics GmbH pour demander conseil Tous les composants doivent tre conserv s 20 C d s la livraison Des cycles r p t s de d cong lation et de cong lation des r actifs plus de deux doivent tre vit s car ils peuvent affecter les performances du dosage La conservation a 4 C ne doit pas exc der une dur e de 2 heures e Prot ger les Mastermix A et B de la lumi re RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 5 Informations g n rales L herpesviridae est une grand famille de virus a ADN qui provoque des maladies chez les animaux dont les humains Tous les virus de l herp s sont compos s d un g nome lin aire double brin Les virus de l herp s se r pliquent par le noyau c est dire que la r plication de l ADN viral se passe l int rieur des noyaux des cellules infect es En fonction des diff rentes pathog nicit s des cellules h tes et des caract ristiques de r plication le virus de l herp s peut tre divis en trois groupes l hnerpesviridae alpha beta et gamma Le type alpha est caract ris par un cycle de reproduction court une destruction rapide des cellules h tes et leur capacit de r plication dans les tissus h tes Une caract ristique importante de ces virus est leur capacit tablir une infection latente permanente dans le syst me nerveux p riph rique de l h te Le virus herpes simplex de type 1 HSV 1 de type 2 HSV 2 et le virus de la varicelle zon
19. n de la COLE 15 9 Programmation des instruments de PCR en temps r el 15 9 1 PAOMEES REX m 16 9 2 Tra eurs de fluorescence dyes eeeeeeeeeeeneeeennneeen nnn 16 9 3 Profil de temp rature et aquisition des dyes ssssssss 16 10 Analyse des donn es qualitatif 17 10 1 Validit des tests de diagnostic ENEE 20 10 1 1 Validit des tests de diagnostic qualitatif 20 10 1 2 Invalidit des tests de diagnostic qualitatif sssssssse 20 10 2 Interpretation des r sultats 21 10 2 1 Analyse qualitative E 21 4 11 11 1 11 2 11 3 11 4 12 13 14 15 16 RealStar alpha Herpesvirus PCR Kit 1 0 Evaluation des performances ccccsceccesseceeseeeeseeeeeeeeseeeeenesseeneesaeeees 23 Sensibilit analytique eecccseseececceseeecceeeececceuseeecseseecsseuseesseeeeeeeeas 29 Sp cificit E ue UC 25 EE eet 2 Bet e 28 Limites TT e E 29 COMPOS CUA EE 30 Assistance technique ou tec eeeceeeeeeeeeeeeeeeeeeneneeneseaneeeaneseaeseeeeseeeeseenenees 30 Marques d pos es et responsabilit 30 Explications des symboles KENNEN RRE EEN 31 RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 1 Usage pr vu 4 Mat riels requis non fournis Le kit RealStar aloha Herpesvirus PCR 1 0 est
20. nt en consid ration tous les sympt mes cliniques RealStar alpha Herpesvirus PCR Kit 1 0 13 Contr le de qualit D apres le syst me de management de la qualit d altona Diagnsotics GmbH selon ISO EN 13485 chaque lot du kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 est test selon les sp cifications pr d finies afin d assurer la qualit constante du produit 14 Assistance technique Pour le support client merci de contacter notre support technique e mail support altona diagnostics com t l phone 49 0 40 5480676 0 15 Marques d pos es et responsabilit RealStar altona Diagnostics GmbH Mx 3005P Stratagene ABI Prism Applied Biosystems HighPure LightCycler Roche Rotor Gene QlAamp QIAGEN VERSANT Siemens KingFisher Thermo Scientific Les noms d pos s les marques d pos es etc utilis es dans ce document m me si ils ne sont pas sp cifi es comme tels ne doivent pas tre consid r es comme non prot g es par la loi Le kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 est un test de diagnostic in vitro mar qu CE en accord avec la Directive europ enne 98 79 EC N est pas disponible dans tous les pays 2011 altona Diagnostics GmbH tous droits r serv s 29 RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 RealStar aloha Herpesvirus PCR Kit 1 0 16 Explications des symboles R 5H5mS 4008 Dispositif Medical de Diagnostic in Vitro R f rence produit Num ro de
21. personnel qualifi et form pour les techniques de PCR en temps r el et aux proc dures de diagnostic in vitro Les chantillons doivent tre manipul s comme s ils taient infectieux et ou dangereux en accord avec les proc dure de s curit en vigueur dans le laboratoire Porter des gants jetables non talqu s une blouse de laboratoire et des lu nettes de protection lors de la manipulation des chantillons Eviter les contaminations microbiennes et nucl aires par ADN ARN de l chantillon et des composants du kit Toujours utiliser avec les a rosols des c nes de pipettes jetables non con tamin s par l ADNase et l ARNase Toujours porter des gants de protection non talqu s lors de la manipulation des composants des kits Utiliser des aires de travail s par es les unes des autres pour i la pr para tion des chantillons ii la pr paration de la r action et iii l amplification et la d tection de l activit Le flux de travail dans le laboratoire doit tre unidi rectionnel Porter des gants dans chaque aire de travail et les changer avant d entrer dans une aire diff rente Consacrer les fournitures et le mat riel aux diff rentes aires de travail et ne pas les d placer d une aire une autre Conserver le mat riel positif oubien potentielle positif s par des autres com posants du kit RealStar alpha Herpesvirus PCR Kit 1 0 Ne pas ouvrir les tubes plaques de r action apr s l amplification af
22. rteur est crucial pour l efficacit de l extraction et la stabilit de l acide nucl ique extrait L thanol est un fort inhibiteur de la PCR en temps r el Si votre syst me de pr paration de l chantillon utilise des tampons de lavage contenant de l thanol assurez vous d liminer toutes les traces d thanol avant de proc der l lution de l acide nucl ique RealStar alpha Herpesvirus PCR Kit 1 0 Pour de plus amples informations ou un support technique concernant le pr traitement et la pr paration des chantillons merci de contacter notre support technique e mail support altona diagnostics com telephone 49 0 40 5480676 0 8 2 Pr paration du Mastermix Tous les r actifs doivent tre compl tement d congel s homog n is s la pi pette ou vortex s doucement et bri vement centrifug s avant leur utilisation Le kit RealStar a pha Herpesvirus PCR 1 0 contient un contr le interne h t ro logue peut tre utilis aussi bien comme un contr le d inhibition de la PCR ou comme un contr le lors de la pr paration de l chantillon extraction de l acide nucl ique et aussi comme un contr le de l inhibition de la PCR e Si le contr le interne est utilis comme un contr le d inhibition de la PCR mais pas comme un contr le lors de la proc dure de pr paration de l chantillon alors le Mastermix doit tre pr par comme d crit par le sch ma de pipetage ci dessous Nombre de r act
23. un test de diagnostic in vitro pour e Instrument adapt la PCR en temps r el Chapitre 6 Description du produit la d tection et la diff renciation simultan e de l ADN sp cifique des virus de l herpes Syst me ou kit appropri l extraction des acides nucl iques simplex 1 HSV 1 de l herpes simplex 2 HSV 2 et du virus de la varicelle vari zella zoster VZV e Centrifugeuse de bureau avec rotor adapt des tubes de 2 ml e Centrifugeuse avec rotor pour plaques de microdosage si vous utilisez des plaques de 96 puits de reaction 2 Composants du kit e Vortex Couleur de Lat B Plaques de 96 puits de r action ou tubes de r action avec le mat riel corre fe anc couvercle spondant pour leur fermeture optique Contr le Contr le Contr le Eau de A Master Master Contr le s 7 x n Pipettes r glables M ve positif positif positif qualit ins is Meme VZV HSV 2 HSV 4 PCR e Cones de pipettes avec filtres jetables e Gants non talqu s jetables NOTE Merci de vous assurer que les instruments ont t install s 3 Conservation calibr s v rifi s et entretenus selon les instructions et les recom mandations du fabricant e Le kit RealStar alpha Herpesvirus PCR 1 0 est exp di sous carboglace Les composants du kit doivent arriver congel s Si un ou plusieurs composants ne sont pas congel s au moment de la r ception ou si l un des tubes a t abim lors de la livraison contacter a
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