RAPID`Campylobacter / Gélose 356-4295 356-4296 - Bio-Rad
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1. DOMAINE D APPLICATION La g lose RAPID Campylobacter est un milieu s lectif chromog nique utilis pour la recherche et le d nombrement des principales esp ces de Campylobacter thermotol rants C jejuni C coli et C lari dans les produits d alimentation et les chantillons de l environnement NF VALIDATION par AFNOR CERTIFICATION selon le protocole EN ISO 16140 La m thode RAPID Campylobacter est certifi e NF VALIDATION comme m thode alternative la norme ISO TS 10272 2 Janvier 2006 pour le d nombrement des Campylobacter spp selon le protocole ISO 16140 dans les volailles et produits base de volaille les viandes et produits base de viande ainsi que dans les chantillons de l environnement CATION NF ania VALIDATION EN ISO 16140 BRD 07 25 01 14 METHODES ALTERNATIVES D ANALYSES POUR L AGROALIMENTAIRE Certifi par AFNOR Certification www afnor validation org REFERENCE S NORMATIVE S e ISO 10272 1 2006 2006 01 15 Microbiologie des aliments M thode horizontale pour la recherche et le d nombrement des Campylobacter spp Partie 1 m thode de recherche e ISO TS 10272 2 2006 2006 01 15 Microbiologie des aliments M thode horizontale pour la recherche et le d nombrement des Campylobacter spp Partie 2 technique par comptage des colonies PRINCIPE La g lose RAPID Campylobacter permet le d veloppement des principales esp ces de Campylobacter thermotol ran2. 44 4 heures 41 5C 1 C en atmosph re microa rophile Bio Rad 3 boulevard Raymond Poincar e 92430 Marnes la Coquette Tel 33 0 1 47 95 60 00 e Fax 33 0 1 47 41 91 33 www foodscience bio rad fr Apr s incubation les g loses RAPID Campylobacter peuvent tre conserv es au froid 2 8 C pendant 72 heures en atmosph re microa rophile avant lecture et ou confirmation Lecture Les Campylobacter produisent des colonies rouge brique Confirmation Apr s 24 heures d incubation R aliser un test PCR iQ Check Campylobacter code 357 8135 directement partir d une colonie caract ristique de Campylobacter Apr s 44 4 heures d incubation Par lutilisation des tests classiques d crits dans la norme ISO 10272 1 2006 2006 01 15 A l aide d un test PCR iQ Check Campylobacter code 357 8135 r alis directement partir d une colonie caract ristique de Campylobacter Par l utilisation d un test Latex Campylobacter code 356 4297 sur colonie isol e PRECAUTIONS D EMPLOI e Respecter les Bonnes Laboratoire EN ISO 7218 e Ne pas exposer les bo tes de Petri aux rayons du soleil e Apr s r partition laisser le milieu se stabiliser en stockant les bo tes de Petri une nuit temp rature ambiante et l obscurit Avant ensemencement les g loses doivent tre suffisamment s ches sans humidit visible en surface pour viter la propagation des colonies par e
3. rile ex code 355 4154 le lyophilisat e Homog n iser jusqu dissolution compl te Milieu complet e Dissoudre 20g de poudre code 356 4295 dans 370 mli d eau distill e e M langer jusqu l obtention d une solution homog ne e Chauffer lentement en agitant fr quemment puis porter bullition e St riliser en autoclavant pendant 15 minutes 121 C e Refroidir 47 50 C Bio Rad 3 boulevard Raymond Poincar 92430 Marnes la Coquette Tel 33 0 1 47 95 60 00 e Fax 33 0 1 47 41 91 33 www foodscience bio rad fr Campylobacter Confirm Latex code 356 4297 e Ajouter aseptiquement 1 flacon reconstitu de suppl ment RAPID Campylobacter code 356 4296 e Bien m langer et r partir en bo tes de Petri e Avant utilisation les bo tes de Petri doivent tre soigneusement s ch es cf Pr cautions PROTOCOLES Recherche M thode normalis e ISO 10272 1 2006 2006 01 15 Pr paration et chantillons effectuer conform ment la norme ISO 10272 1 2006 2006 01 15 enrichissement des Ensemencement et incubation effectuer conform ment la norme ISO 10272 1 2006 2006 01 15 Incuber les bo tes de RAPID Campylobacter couvercle vers le bas pendant 24 heures 48 heures 41 5 C 1 C en atmosph re microa rophile Lecture Les Campylobacter produisent des colonies rouges brique Confirmation effectuer conform ment la norme ISO
4. 10272 1 2006 2006 01 15 D nombrement M thode alternative RAPID Campylobacter valid e ISO 16140 Pr paration des chantillons ensemencement et incubation e Pr parer l chantillon analyser conform ment la norme ISO 10272 2 2006 2006 01 15 Etalement et Incubation Etaler 0 1 mL en surface d une g lose RAPID Campylobacter ou 1 mL sur 3 bo tes de g lose RAPID Campylobacter Effectuer si n cessaire une dilution au 1 10 ou plus dans les diluants Tryptone Sel ou Eau pepton e tamponn e selon la norme ISO 6887 1 et taler 0 1 ml de chaque dilution sur 1 bo te de RAPID Campylobacter Incuber les bo tes couvercle vers le bas pendant 24 heures 48 heures 41 5 C 1 C en atmosph re microa rophile Apr s incubation les g loses RAPID Campylobacter peuvent tre conserv es au froid 2 8 C pendant 72 heures en atmosph re microa rophile avant lecture et ou confirmation Lecture e Les Campylobacter produisent des colonies 2 4 V2 14 04 14 rouge brique bien visibles Confirmation Apr s 24 heures d incubation R aliser un test PCR iQ Check Campylobacter code 357 8135 directement partir d une colonie caract ristique de Campylobacter Apr s 44 4 heures d incubation Par lutilisation des tests classiques d crits dans la norme ISO 10272 1 2006 2006 01 15 A l aide d un test PCR Campylobacter code 357 8135 directement
5. h MICRO ORGANISMES 41 5 C en atmosph re microa rophile Campylobacter coli ATCC 43478 WDCM 00004 Campylobacter jejuni ATCC 29428 WDCM 00156 Escherichia coli ATCC 8739 Inhibition totale WDCM 00012 Staphylococcus aureus ATCC 25923 WDCM Inhibition totale 00034 Bonne croissance Colonies rouge brique Bonne croissance Colonies rouge brique CONTROLE QUALITE Tous les produits fabriqu s et commercialis s par la soci t Bio Rad sont plac s sous un syst me d assurance qualit de la r ception des mati res premi res jusqu la commercialisation des produits finis Chaque lot du produit fini fait l objet d un contr le de qualit et il n est commercialis que s il est conforme aux crit res d acceptation La documentation relative la production et au contr le de chaque lot est conserv e La documentation relative la production et au contr le de chaque lot est conserv e MOTS CLES RAPID Campylobacter Campylobacter Produits base de viande Produits base de volaille D nombrement Bio Rad 3 boulevard Raymond Poincar 92430 Marnes la Coquette Tel 33 0 1 47 95 60 00 e Fax 33 0 1 47 41 91 33 www foodscience bio rad fr V2 14 04 14 4 4
6. partir d une caract ristique de Campylobacter Par l utilisation d un test Campylobacter Confirm Latex code 356 4297 sur colonie isol e iQ Check r alis colonie NB Dans le cadre de la marque NF VALIDATION les temps d incubation inf rieurs 44 h 4h n ont pas t valid s Expression des r sultats e effectuer conform ment la norme ISO 10272 2 2006 2006 01 15 NB Le fait de ne pas confirmer 5 colonies en d nombrement implique un risque de rendre un r sultat surestim du fait de la pr sence ventuelle de colonies caract ristiques qui ne seraient pas des Campylobacter spp Recherche M thode alternative RAPID Campylobacter Pr paration des chantillons Diluer h g ou h mL de l chantillon dans 9 x h mL de bouillon Preston ou Bolton Exemple Diluer 25 g d chantillon dans 225 mL de bouillon Preston ou Bolton Enrichissement Preston Incuber 41 5 C 1 C pendant 24h 2 heures en atmosph re microa rophile Bolton Incuber 37 C 1 C pendant 4 6 heures puis 41 5 C 1 C pendant 44h 4 heures en atmosph re microa rophile Ensemencement et incubation Pr lever 10ul de bouillon d enrichissement en fin d incubation l aide d une se st rile Ensemencer une g lose de RAPID Campylobacter selon les techniques traditionnelles d isolement en stries Incuber les bo tes de RAPID Campylobacter couvercle vers le bas pendant 24 heures
7. spiratoires MATERIEL NECESSAIRE NON FOURNI liste non exhaustive e Balance e Sacs de pes e st riles e Broyeur e Agitateur homog n isateur e Bo tes de Petri st riles e Pipettes st riles 0 1 ml 1 ml 1 4 V2 14 04 14 e se boucl e e Pipettes Pasteur st riles e Bains marie e Etuve ou enceinte thermostat e e Tout mat riel courant d un laboratoire AUTRE S PRODUIT S NECESSAIRE S NON FOURNI S M thode de recherche e Bouillon Bolton e Bouillon Preston e G lose mCCD e Dispositif appropri la culture en atmosph re microa rophile M thode de d nombrement e Tryptone Sel 9 ml x 25 tubes ex code 355 5754 90 ml x 6 flacons ex code 355 5756 500 g ex code 356 4544 5 poches de 31 ex code 355 5796 e Eau Pepton e Tamponn e 6 flacons de 225 ml ex code 355 4179 500 g ex code 356 4684 5 poches de 31 ex code 355 5795 2 poches de 51 ex code 355 5790 e Dispositif appropri la culture en atmosph re microa rophile Confirmation e G lose Columbia e Eau physiologique Disque oxydase Eau distill e st rile ex code 356 3784 ex code 355 4164 e ex code 355 3834 ex code 355 4154 e iQ Check Campylobacter code 357 8135 PREPARATION DU MILIEU DESHYDRATE MODE D EMPLOI Toujours agiter avant chaque utilisation Reconstitution du Suppl ment Lyophilis code 356 4296 e R hydrater aseptiquement par 30 ml d eau distill e st
8. ts C jejuni C coli et C lar en 24 48 heures Une association d l ments nutritifs et de compos s r ducteurs favorise la croissance des Campylobacter qui produisent des colonies Bio Rad 3 boulevard Raymond Poincar 92430 Marnes la Coquette Tel 33 0 1 47 95 60 00 e Fax 33 0 1 47 41 91 33 www foodscience bio rad fr V2 14 04 14 rouge brique sur le milieu Les autres esp ces bact riennes ainsi que les levures et moisissures sont inhib es gr ce au m lange s lectif PRESENTATION e D shydrat 500g code 356 4295 e Suppl ment Lyophilis 10 flacons QSP 400 ml code 356 4296 CONSERVATION VALIDITE LOT e D shydrat 15 25 C flacon soigneusement ferm dans un endroit frais et sec e Suppl ment lyophilis 2 8 C labri de la lumi re e Milieu pr par par l utilisateur e Base non suppl ment 6 semaines 2 8 C et l obscurit e Bo tes de Petri reconstitu es 2 semaines 2 8 C et l obscurit emball es dans sac plastique ou quivalent e La date de p remption et le num ro du lot sont indiqu s sur le conditionnement FORMULE THEORIQUE M lange nutritif 28 5 g M lange r ducteur 1g Chlorure de sodium 5g Tampon 1 250 M lange s lectif 0 082 g Substrat chromog ne 0 05g Agar 14g Eau q s p 1 L pH 25 final 7 2 7 5 D H315 Provoque une irritation cutan e H319 Provoque une s v re irritation des yeux H335 Peut irriter les voies re
9. xemple en les s chant 15 min 56 C en incubateur e Les bo tes de Petri peuvent tre stock es 2 semaines 2 8 C Avant ensemencement laisser les bo tes revenir temp rature ambiante Les g loses doivent tre suffisamment s ches sans humidit visible en surface pour viter la propagation des colonies par exemple en les s chant 15 min 56 C en incubateur e Lors de la validation NF VALIDATION la souche Ralstonia mannitolytica a r v l des colonies typiques apr s 48 h d incubation Cette souche tr s rare en matrice alimentaire est n gative en confirmation Elle pr sente une r action d agglutination atypique avec le test de confirmation Campylobacter Confirm Latex code 356 4297 e agglutination faible d apparence muco de et filamenteuse tr s diff rente d une Pratiques de 3 4 agglutination typique granuleuse homog ne et dense e Apr s 24h d incubation des g loses si les colonies sont de trop petite taille pour tre ais ment d nombrable une prolongation jusqu 48h de l incubation est possible e En cas de r sultats discordants positif sur la g lose RAPID Campylobacter n gatif par la m thode de confirmation le laboratoire devra mettre en uvre les moyens suffisants pour s assurer de la validit du r sultat rendu PERFORMANCES CONTROLE QUALITE DU TEST Les performances culturales sont contr l es l aide des souches r f renc es Aspect apr s 24 48
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