Vitamin B12
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1. Pr cautions d emploi et mises en garde Pour diagnostic in vitro Observer les pr cautions habituelles de manipulation en laboratoire L limination de tous les d chets doit tre effectu e conform ment aux dispositions l gales Ce coffret contient parmi ses constituants les substances suivantes class es selon la directive 88 379 CEE PT2 C CORROSIF R 34 S 26 37 39 hydroxyde de sodium En cas de contact avec les yeux laver imm diatement et abondamment avec de l eau et consulter un sp cialiste Provoque des br lures Porter des gants appropri s et un appareil de protection des yeux du visage Xn NOCIF R 20 21 22 S 45 cyanure de sodium Nocif par inhalation par contact avec la peau et par ingestion En cas d accident ou de ma laise consulter imm diatement un m decin si possible lui montrer l tiquette Les produits d origine humaine ont fait l objet d une recherche des anticorps anti HIV 1 anti HIV 2 anti HCV et de l antig ne HBs ayant conduit un r sultat n gatif Comme le risque d infection ne peut tre exclu avec certitude par aucune m thode ce produit doit tre utilis avec le m me soin que les chantillons de patients En cas d exposition suivre les directives de l autorit comp tente en mati re de sant Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E170 Pr paration des r actifs Les r actifs contenus dans le coffret sont pr ts l emploi et ne peuvent tre utilis s s par ment Toutes2. utilisation de facteur intrins que hautement purifi dans l industrie Le test Vitamine B42 Elecsys utilise le principe par comp tition avec du facteur intrins que sp cifique de la vitamine B La vitamine B de l chantillon entre en comp tition avec la vitamine B 2 biotinyl e ajout e pour les sites de fixation du facteur intrins que marqu au ruth nium Ru bpy Tris 2 2 bipyridyl ruth nium l Principe Principe par comp tition Dur e totale du cycle analytique 27 minutes e 1 incubation Une prise d chantillon de 15 ul est incub e avec les r actifs de pr traitement 1 et 2 de la vitamine B La vitamine B42 est lib r e dans le s rum e 2 incubation L chantillon pr trait est incub avec du facteur intrins que marqu au ruth nium Il se forme un complexe vitamine B prot ine de liaison dont la quantit d pend de la concentration de l analyte dans l chantillon e 3 incubation Les microparticules tapiss es de streptavidine et la vitamine B42 biotinyl e sont ajout es Les sites de fixation libres du facteur intrins que marqu au ruth nium sont occup s il se forme un complexe facteur intrins que marqu au ruth nium vitamine B42 biotinyl e Le complexe est li la phase solide par une liaison biotine streptavidine e Le m lange r actionnel est aspir dans la cellule de mesure les microparticules sont maintenues au niveau de l lectrode par un aimant L liminati
3. Clin Chem Clin Biochem 1984 22 431 445 15 Bablok W et al A General Regression Procedure for Method Transformation J Clin ChemClin Biochem 1988 26 783 790 Pour de plus amples informations se r f rer au manuel d utilisation des analyseurs Elecsys 2010 et E 170 au dossier Information produit Vitamine B Elecsys et aux notices d utilisation Vitamine B12 CalSet PreciControl Universal et Diluent Universal Modifications importantes Les modifications concernant les donn es contenues dans le code barres doivent tre entr es manuellement 2001 Roche Diagnostics CE 2001 07 tal Roche Diagnostics GmbH D 68298 Mannheim
4. YO SO 10090 9261 20 1002 SleSue4 Vitamin B 11820753 Domaine d utilisation Test immunologique pour la d termination quantitative in vitro de la vitamine B dans le s rum et le plasma humains Ce test par lectrochimiluminescence ECLIA est adapt aux dosages immunologiques sur les analyseurs Elecsys 2010 et MODULAR ANALYTICS E170 module Elecsys de Roche 100 tests Tous les appareils ne sont pas disponibles dans tous les pays G n ralit s Les an mies nutritionnelles et macrocytaires peuvent tre dues une carence en vitamine B42 Cette carence peut r sulter de r gimes d pourvus de viande et de produits bact riens de l alcoo isme ou de troubles structurels fonctionnels des processus de digestion ou d absorption formes d an mie pernicieuse La malabsorption est la principale cause de cette carence et peut tre due une insuffisance pancr atique une atrophie gastrique ou une gastrectomie des l sions intestinales une perte des prot ines de liaison de la vitamine B dans l intestin facteur intrins que a production d autoanticorps anti facteur intrins que ou des causes li es Cette vitamine est n cessaire pour un m tabolisme normal la synth se de l ADN et la r g n ration des globules rouges Les carences en vitamine B non trait es conduisent l an mie m galoblastique et provoquent une d g n rescence irr versible du syst me nerveux central Les dosages de vitamine Bet
5. calibration est recommand e pour E170 Elecsys 2010 e apr s un mois 28 jours pour un m me lot de r actifs e apr s sept jours pour un m me flacon rest sur l appareil e quand elle s av re n cessaire par ex si les r sultats des s rums de contr le se situent en dehors des limites de confiance Validation de la calibration Le logiciel de l appareil v rifie la validit de la courbe et affiche les anomalies Contr le de qualit Utiliser PreciControl Universal 1 et PreciControl Universal 2 Elecsys ou d autres contr les appropri s Il est recommand de doser les s rums de contr le en simple au moins une fois par 24 heures pendant une routine pour chaque nouveau coffret et lors d une calibration Cette fr quence peut varier selon les exigences du laboratoire Les r sultats doivent se situer dans les limites de confiance Chaque laboratoire tablira la proc dure suivre si les r sultats sont situ s en dehors des limites de confiance Expression des r sultats E170 et Elecsys 2010 calculent automatiquement le taux de vitamine B42 de chaque chantillon Les r sultats sont exprim s au choix en pg ml ou en pmol l Facteurs de conversion pmol l x 1 36 pg ml pg ml x 0 738 pmol l Limites d utilisation Interf rences La bilirubine lt 650 mg l lt 65 mg dl l h molyse Hb lt 1 0 g dl la lip mie triglyc rides lt 15 g l lt 1500 mg dl et la biotine lt 50 ng ml n influenc
6. d acide folique pr sentent un int r t diagnostic pour le d pistage de carences en vitamine Bou en acide folique en particulier dans le cadre du diagnostic diff renciel de l an mie m galoblastique Les premiers tests radiologiques pour le dosage de la vitamine B datent de 1961 Tous utilisent des traceurs marqu s la Co cyanocobalamine et du facteur intrins que pour la liaison de la vitamine B Les tests disponibles dans le commerce se distinguent par leurs techniques de s paration libre et li e et par leurs m thodes de pr traitement de l chantillon La pr sence de prot ines s riques de liaison endog nes pour la cyanocobalamine transcobalamines y compris prot ine R et d immunoglobulines anti facteur intrins que n cessite que les chantillons soient port s bullition ou trait s un pH alcalin afin de lib rer la vitamine B et d truire les prot ines de liaison A la fin des ann es 1970 les tests radiologiques utilisant les prot ines de liaison s riques ou un facteur intrins que partiellement purifi donnaient des concentrations de vitamine B 2 d passant celles d termin es par les m thodes microbiologiques ceci tant li la pr sence de prot ines de liaison s rique ou de prot ines R dans le test La sp cificit de la prot ine R est m diocre en comparaison celle du facteur intrins que et les analogues de la vitamine B elle m me Depuis lors des recommandations ont pr vu l
7. dings of the Society for Experimental Biology and Medicine 108 45 48 1961 5 Rothenberg S P DaCosta M Rosenberg B S A radioassay for serum folate Use of a two phase sequential incubation ligand binding system New Eng J Med 285 25 1335 1339 1972 6 Gutcho S Mansbach L Simultaneous radioassay of serum vitamin B12 and folic acid Clin Chem 23 1609 1614 1977 7 Kolhouse J F Kondo H Allen N C Podell A B Allen R H Cobalamin analogues are present in human plasma and can mask cobalamin deficiency because current radioisotope dilution assays are not specific for true cobalamin New Eng J Med 299 15 785 792 1978 8 BIO RAD Quantaphase B 12 Folate Radioassay Instruction Manual mars 1995 9 Department of Labor Occupational Safety and Health Administration 29 CFR Part 1910 1030 Occupational Safety and Health Standards Bloodborne Pathogens Fed Register July 1 1998 6 267 280 10 Council Directive 90 679 EEC Official J of the Eur Communites No L374 31 d cembre 1990 11 Documentation de Roche 12 NCCLS Proposed Standard PSLA 12 Guidelines for Evaluating a B 2 COBALAMIN Assay mars 1980 13 Passing H Bablok W New Biometrical Procedure for Testing the Equality of Measurements from Two Different Analytical Methods J Clin Chem Clin Biochem 1983 21 709 720 14 Passing H Bablok W Comparison of Several Regression Procedures for Method Comparison Studies and Determination of Sample Sizes J
8. e gt 1000 pg ml gt 738 pmol l Multiplier le r sultat obtenu par le facteur 2 Remarque Une non lin arit peut tre observ e pour certains chantillons dilu s Diluent Universal pouvant contenir de faibles quantit de vitamine B42 utiliser pour les tudes de lin arit du s rum humain faible concentration en analyte Les chantillons situ s en dehors du domaine de mesure peuvent tre dilu s au 1 2 l aide du Diluent Universal Aux concentrations obtenues apr s dilution la vitamine B 2 endog ne n a pas d influence significative sur le r sultat du test Domaines de r f rence Compte tenu de la particularit des habitudes alimentaires il est recommand au laboratoire de d terminer ses propres valeurs normales partir d un nombre de dosages statistiquement significatif Les valeurs suivantes issues de deux tudes r alis es aux USA et aux Pays Bas sont donn es titre d orientation R gion 2 5 97 5 percentiles n pg ml pmol l USA 111 243 894 179 660 Europe 334 197 866 145 637 Chaque laboratoire devra v rifier la validit de ces valeurs de r f rence et tablir ses propres valeurs selon la population examin e Performances analytiques Pr cision Les r sultats indiqu s ci dessous ont t obtenus avec des analyseurs Elecsys Les r sultats obtenus au laboratoire peuvent diff rer de ceux ci La pr cision a t d termin e l aide de pools d
9. e s rums humains chaque chantillon a t analys 6 fois par jour pendant 10 jours n 60 selon un protocole modifi EP5 A du N C C L S National Committee for Clinical Laboratory Standards pr cision intra s rie sur E170 n 21 Elecsys 2010 Pr cision intra s rie Pr cision inter s rie Echantillon X s CV s CV pg m pmol l pg ml pmol l pg ml pmol l S rum humain 1 203 150 14 1 10 4 6 9 15 4 11 4 7 6 S rum humain 2 481 355 20 4 15 1 4 2 21 1 15 6 4 4 S rum humain 3 1499 1106 41 2 30 4 2 7 47 8 35 2 3 2 Contr le 1 1119 826 31 3 23 1 2 8 36 2 26 7 3 2 Contr le 2 471 348 20 2 14 9 4 3 21 5 15 9 4 6 1926306001 06 04 NFTO Elecsys System 2010 MODULAR ANALYTICS E170 Ci E170 Pr cision intra s rie Pr cision inter s rie Echantillon X s CV X s CV pg ml pmol l pg m pmol l pg ml pmol pg ml pmol l S rum humain 1 155 115 3 67 2 71 2 4 157 116 9 52 7 02 6 1 S rum humain 2 359 265 10 1 7 44 2 8 349 258 12 4 9 17 3 6 S rum humain 3 1162 858 7 42 5 48 0 6 1128 832 24 8 18 3 2 2 PreciControl U1 667 492 6 29 4 64 0 9 671 495 18 8 13 9 2 8 PreciControl U1 399 294 17 1 12 6 4 3 391 289 16 3 12 1 4 2 Sensibilit limite de d tection analytique La limite de d tection se situe 30 p
10. ent pas le r sultat crit re d acceptabilit recouvrement 10 par rapport la valeur initiale Chez les patients trait s par de fortes doses de biotine gt 5 mg jour il est recommand d effectuer e pr l vement de l chantillon au moins 8 heures apr s la derni re administration On n a pas observ d influence par le facteur rhumato de jusqu 1500 U ml L influence de 54 m dicaments fr quemment administr s a t recherch e in vitro aucune interf rence n a t observ e Dans de rares cas des titres tr s lev s d anticorps anti streptavidine et anti ruth nium peuvent conduire des interf rences Les r sultats du test Vitamine B Elecsys doivent toujours tre confront s aux donn es de anamn se du patient au tableau clinique et aux r sultats des autres examens pour tablir un diagnostic Domaine de mesure 30 2000 pg ml 22 1476 pmol l d fini par la limite de d tection et le maximum de la courbe de r f rence Les taux situ s au dessous de la limite de d tection sont exprim s de la mani re suivante lt 30 pg ml lt 22 pmol l et les taux situ s au dessus du domaine de mesure de la mani re suivante gt 2000 pg ml gt 1476 pmol l Dilution des chantillons Les chantillons pr sentant une concentration en vitamine B gt 2000 pg ml peuvent tre dilu s manuellement au 1 2 dans le Diluent Universal La concentration obtenue avec l chantillon dilu doit tr
11. g ml 22 pmol l La limite de d tection correspond au taux le plus faible de vitamine B mesurable qui puisse tre diff renci de z ro Elle repr sente la concentration du standard le plus faible de la courbe de r f rence 2s calibrateur de r f rence standard 1 2s pr cision intra s rie n 21 Sp cificit analytique Le test montre la r action crois e suivante Cobinamide dicyanide 200 ng ml 0 024 Comparaison de m thodes Une comparaison entre le test Vitamine B 2 Elecsys y et un test immuno radiologique du commerce pour la d termination de la vitamine B42 x effectu e sur des s rums de patients hospitalis s a permis d tablir les corr lations suivantes pg ml Nombre d chantillons analys s 345 Passing Bablok R gression lin aire y 9 2 1 06X y 7 4 1 02x r 0 977 r 0 977 s md68 45 7 Sy x 75 5 Les concentrations des chantillons taient situ es entre env 30 et 1798 pg ml ou env 22 et 1328 pmol l Bibliographie 1 Herbert V Drugs effective in megaloblastic anemias in Goodman L S and Gilman A d The Pharmacological Basis of Therapeutics 5 dition MacMillan Co pp 1324 1349 1975 2 Ross G I M Vitamin B12 in body fluids Nature 166 270 1950 3 Barakat R M Ekins P Assay of vitamin B12 in blood A simple method Lancet i 25 26 1961 4 Rothenberg S P Assay of serum vitamin B12 concentration using Co57 B12 and intrinsic factor Procee
12. iaire pour Elecsys 2010 R f 11662988 ProCell Elecsys 6 x 380 ml tampon syst me R f 11662970 CleanCell Elecsys 6 x 380 ml solution de nettoyage pour la cellule de mesure R f 11930346 SysWash Elecsys 1 x 500 ml additif la solution de lavage R f 11933159 Adaptateur pour SysClean R f 11706802 Assay Cup Elecsys 2010 60 x 60 cuvettes r actionnelles R f 11706799 Assay Tip Elecsys 2010 30 x 120 embouts de pipette Mat riel auxiliaire pour MODULAR ANALYTICS E170 R f 12135019 ProCell M 1 x 2 1 tampon syst me R f 12135027 CleanCell M 1 x 2 solution de nettoyage pour la cellule de mesure R f 03023141 PC CC Cups 50 godets pour la thermor gulation de ProCell M et de CleanCell M R f 03005712 Probewash M 12 x 70 ml solution de lavage pour la fin de la s rie et pour le rin age en cas de changement de r actif R f 03004899 PreClean M 5 x 600 ml de solution de lavage avant la d tection R f 12102137 AssayCups AssayTips Combimagazin M 48 blocs de 84 tubes essai embouts de pipettes sacs pour d chets e R f 03023150 WasteLiner sacs pour d chets e R f 03027651 SysClean Adapter M adaptateur M pour SysClean Pour les deux appareils e R f 11298500 SysClean Elecsys 5 x 100 ml solution de lavage du syst me Disponible uniquement aux Etats Unis e R f 11832778 Vitamine B z CalCheck Elecsys trois niveaux de concentration Mode op ratoire Pour garantir le bon fonctionnement du test se c
13. ivent tre centrifug s avant l analyse Ne pas utiliser d chantillons inactiv s par la chaleur Ne pas utiliser d chantillons ou solutions de contr les stabilis s par de l azide Les chantillons destin s au dosage de la vitamine B doivent tre pr lev s sur des personnes eun S assurer avant l analyse que la temp rature des chantillons des calibrateurs et des contr les se situe 20 25 C En raison des risques d vaporation il est recommand de doser les chantillons les contr les et es calibrateurs dans les deux heures qui suivent leur mise en place sur les analyseurs 24 heures entre 2 et 8 C selon les Vitamine B Elecsys R actifs et mat riel n cessaires Contenu du coffret R f 11820753 Coffret Vitamine B 2 Elecsys pour 100 tests e M Microparticules tapiss es de streptavidine R1 Facteur intrins que Ru bpy 3 R2 Vitamine B42 biotine PT1 R actif de pr traitement 1 PT2 R actif de pr traitement 2 pote et mat riel auxiliaires n cessaires R f 11820869 Vitamine B CalSet Elecsys 4 x 1 ml e R f 11731416 PreciControl Universal Elecsys PreciControl Universal 1 pour 2 x 3 ml et PreciControl Universal 2 pour 2 x 3 ml R f 11732277 Diluent Universal Elecsys 2 x 18 ml milieu de dilution de l chantillon ou R f 03183971 Diluent Universal Elecsys 2 x 40 ml milieu de dilution de l chantillon Equipement habituel de laboratoire Elecsys 2010 ou MODULAR ANALYTICS E170 Materiel auxil
14. les informations n cessaires au d roulement du test sont m moris es sur les codes barres des flacons r actifs et sont saisies automatiquement Conservation et stabilit Ranger le coffret Vitamine B42 Elecsys entre 2 et 8 C en position verticale de mani re ce que toutes les microparticules soient rassembl es lors de l homog n isation qui pr c de l analyse Stabilit Avant ouverture entre 2 et 8 C jusqu la date de p remption indiqu e Apr s ouverture entre 2 et 8 C douze semaines Sur E170 et Elecsys 2010 huit semaines Pr l vement et pr paration des chantillons Seuls les chantillons suivants ont t test s S rum recueilli sur tubes standard ou tubes contenant un gel s parateur Plasma recueilli sur h parinate de sodium ou EDTA tripotassique En cas d utilisation de plasma recueilli sur citrate de sodium ou fluorure de sodium oxalate de potassium on obtient des r sultats de 23 plus faibles qu avec le s rum crit re d acceptabilit recouvrement 90 110 de la valeur du s rum ou pente 0 9 1 1 coefficient de corr lation gt 0 95 ordonn e l origine lt 2 x limite de d tection analytique Stabilit deux jours entre 2 et 8 C deux mois 20 C Ne congeler qu une fois Conserver abri de la lumi re Stabilit du s rum recueilli sur tubes gel s parateur indications donn es par le fabricant des tubes Les chantillons qui contiennent un pr cipit do
15. on de la fraction libre est effectu e par le passage de ProCell Une diff rence de potentiel appliqu e l lectrode d clenche la production de luminescence qui est mesur e par un photomultiplicateur e Les r sultats sont obtenus l aide d une courbe de calibration Une courbe de r f rence est m moris e dans le code barres du r actif et est r ajust e pour l analyseur utilis par une calibration en deux points R actifs Contenu du coffret et concentrations Coffret Vitamine B42 Elecsys R f 11820753 pour 100 tests PT1 R actif de pr traitement 1 bouchon blanc 1 flacon contenant 4 0 ml dithiothr itol 1 028 g l agent stabilisant pH 5 5 PT2 R actif de pr traitement 2 bouchon gris 1 flacon contenant 4 0 ml hydroxyde de sodium 36 g l cyanure de sodium 2 205 g l M Microparticules tapiss es de streptavidine bouchon transparent 1 flacon contenant 6 5 ml microparticules tapiss es de streptavidine 0 72 mg ml capacit de liaison 470 ng biotine mg microparticules conservateur R1 Facteur intrins que Ru bpy bouchon gris 1 flacon contenant 10 0 ml facteur intrins que de porc marqu au ruth nium 4 ug l cobinamide dicyanide 15 ug l agent stabilisant s rumalbumine humaine tampon phosphate pH 5 5 conservateur R2 Vitamine B biotine bouchon noir 1 flacon contenant 8 5 ml vitamine B 2 marqu e la biotine 25 ug l biotine 3 ug l tampon phosphate pH 7 0 conservateur
16. onformer au mode d emploi de l appareil utilis et v rifier que les r actifs les solutions auxiliaires et les consommables n cessaires la r alisation du test sont disponibles en quantit suffisante L analyseur effectue automatiquement l homog n isation des microparticules Les informations sp cifiques du test m moris es sur l tiquette code barres doivent tre saisies Si exceptionnellement le code barres ne peut tre lu par l appareil saisir manuellement la s rie de 15 chiffres inscrits sur l tiquette E170 Elecsys 2010 porter les r actifs r frig r s env 20 C avant le chargement et les placer dans le plateau r actifs de l appareil thermostat 20 C Eviter la formation de mousse L analyseur g re le contr le de la temp rature l ouverture et la fermeture des flacons Calibration Le coffret Vitamine B 2 Elecsys a t calibr par rapport un test radio immunologique du commerce pour la d termination de la vitamine B 2 Le code barres du flacon r actif contient toutes les informations sp cifiques de la calibration du lot la courbe de r f rence y est m moris e Le r ajustement de la courbe pour l appareil est effectu l aide des 2 solutions Vitamine B CalSet Elecsys Ci Ci An An SANTE Vitamin B4 Fr quence de calibration Effectuer une calibration par lot en utilisant un r actif frais ayant t enregistr au maximum 24 heures par l appareil Une nouvelle
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