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Novocastra™ Enzyme Proteinase K (IHC)

Contents

1. Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K 25 C va TO
2. 1 Enzvme Proteinase K Concentrate RE7126 0 75 ml 40 v v 10 mM Tris HCI pH 7 5 1 mM 2 Enzyme Proteinase K Buffer RE7127 100 ml Tris 0 35 ProClin 950 3 To Novocastra Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 K Proteinase K Buffer RE7127 K O
3. rou C onpacp vo
4. XXIV K in situ IHC
5. rou H
6. 8 RE7160 K Page 23 TA rou OHOOTTOV IOKOUG
7. HOVINOTTOINNEVA ro a
8. H To Novocastra Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K va
9. RE7160 K Page 24 H HOVIHOTTO NON IHC H HOVIJOTTOINONG
10. IHC Novocastra M NCL BrdU NCL CYCLIN D1 NCL COLL IIp NCL CYCLIN D1 GM H H
11. O 2 8 C 2 8 C To KOVIKOTTOINTIKO 10 PROTEINASE K H334
12. H H Novocastra Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K Novocastra Ta 1 Huang SN Minassian H and More JD Application of immunofluorescent staining on paraffin sections improved by trypsin digestion Laboratory Investigations 1976 Oct 35 4 383 390 2 Bancroft JD and Stevens A Theory and Practice of Histological Techniques 4th Edition Churchill Livingstone New York 1996 3 National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue proposed guideline Villanova P A 1991 7 9 Order code M29 P 4 Battifora H Diagnostic uses of antibodies to keratins a review and immuno
13. Kontroller at pakken er ubeskadiget fgr brug www LeicaBiosystems com RE7160 K Page 1 Novocastra Enzyme Proteinase K IHC Product No RE7160 K Intended Use For in vitro diagnostic use Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC is intended for the enzymatic pretreatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections prior to incubation with a primary antibody in an immunohistochemical IHC procedure This product can be used for epitope retrieval with Novocastra M antibodies for which trypsin is recommended known exceptions to this are NCL BrdU NCL CYCLIN D1 NCL COLL IIp and NCL CYCLIN D1 GM The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist Principle of Procedure Enzyme pretreatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections improves the staining of some antibodies by exposing epitopes within tissue that have been masked during fixation The first proteolytic enzyme employed for epitope retrieval was trypsin Other proteolytic enzymes that can be used for this purpose include Protease XXIV and Pepsin More recently proteinase K which is commonly used in in situ hybridization techniques has also been employed This product is used in an IHC procedure which allows the qualitat
14. TOU CUVIOTWHEVO rou
15. 1 2 EMW OTE K K 5 3 TBS 4 IHC 40 ul Proteinase K Concentrate 26 6 ml rou Proteinase K Buffer RE7127 2 8 C
16. RE7160 K Page 10 Novocastra Enzyme Proteinase K IHC Produkt Nr RE7160 K Verwendungszweck Fur in vitro Diagnostik Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K ist fur die enzymatische Vorbehandlung formalinfixierter paraffineingebetteter Gewebeschnitte vor der Inkubation mit einem prim ren Antik rper in einem immunhistochemischen IHC Verfahren bestimmt Dieses Produkt kann fir die Epitopdemaskierung mit Novocastra M Antik rpern fir die Trypsin empfohlen wird verwendet werden Bekannte Ausnahmen sind NCL BrdU NCL CYCLIN D1 NCL COLL IIp und NCL CYCLIN D1 GM Die klinische Bewertung einer vorliegenden bzw fehlenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit entsprechenden Kontrollen erg nzt und im Kontext der Krankengeschichte des Patienten und anderer diagnostischer Tests von einem qualifizierten Pathologen vorgenommen werden Verfahrensgrundlage Die Enzymvorbehandlung von formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitten verbessert die F rbung einiger Antik rper durch die Freilegung von Epitopen in Geweben die w hrend der Fixierung maskiert wurden Das erste f r die Epitopdemaskierung verwendete proteolytische Enzym war Trypsin Andere proteolytische Enzyme die fir diesen Zweck verwendet werden k nnen sind Protease XXIV und Pepsin In j ngerer Zeit ist auRerdem Proteinase K die gew hnlich bei Techniken zur in situ Hybridisierung verwendet wird eingesetzt worden Dieses Produkt wird in einem IH
17. o cl nica de qualquer sec o de tecido colorido dever incluir a an lise morfol gica e a avalia o de controlos apropriados Caracter sticas de desempenho O desempenho da Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K foi validado atrav s da utiliza o de anticorpos prim rios Novocastra M para os quais a tripsina a t cnica de recomenda o recomendada Este produto est vel at ao prazo de validade indicado no seu r tulo Bibliografia 1 Huang SN Minassian H and More JD Application of immunofluorescent staining on paraffin sections improved by trypsin digestion Laboratory Investigations 1976 Oct 35 4 383 390 2 Bancroft JD and Stevens A Theory and Practice of Histological Techniques 4th Edition Churchill Livingstone New York 1996 3 National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue proposed guideline Villanova P A 1991 7 9 Order code M29 P 4 Battifora H Diagnostic uses of antibodies to keratins a review and immunohistochemical comparison of seven monoclonal and three polyclonal antibodies Progress in Surgical Pathology 6 1 15 eds Fenoglio Preiser C Wolff CM Rilke F Field amp Wood Inc Philadelphia 5 Nadji M Morales AR Immunoperoxidase part I the techniques and pitfalls Laboratory Medicine 1983 14 767 6 Mount SL Cooper K Beware of biotin a source of false positive immuno
18. va P261 va CONCENTRATE Proteinase K P285 lt 10 GHS08 P304 341 ZE P342 311 Eva P501 www LeicaBiosystems com
19. 5 Nadji M Morales AR Immunoperoxidase part I the techniques and pitfalls Laboratory Medicine 1983 14 767 6 Mount SL Cooper K Beware of biotin a source of false positive immunohistochemistry Current Diagnostic Pathology 2001 7 161 167 7 Omata M Liew CT Ashcavai M Peters RL Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen a possible source of error in immunohistochemistry American Journal of Clinical Pathology 1980 73 626 Amendements apport s la version pr c dente Mises en garde et Pr cautions Date de publication 17 f vrier 2015 RE7160 K Page 7 Novocastra Enzyme Proteinase K IHC Cod prodotto RE7160 K Uso previsto Per uso diagnostico in vitro Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K destinato all uso nel pretrattamento enzimatico di sezioni tissutali fissate in formalina e incluse in paraffina prima dell incubazione con un anticorpo primario nel corso di una tecnica immunoistochimica IHC Questo prodotto pu essere impiegato per lo smascheramento degli epitopi con anticorpi Novocastra per il quale si raccomanda Puso di tripsina Eccezioni note sono rappresentate da NCL BrdU NCL CYCLIN D1 NCL COLL IIp e NCL CYCLIN D1 GM L interpretazione clinica di ogni colorazione o della sua assenza va integrata da studi morfologici che utilizzino i controlli appropriati e deve essere valutata da un patologo qualificato nel contesto della storia clinica del p
20. Mount SL Cooper K Beware of biotin a source of false positive immunohistochemistry Current Diagnostic Pathology 2001 7 161 167 7 Omata M Liew CT Ashcavai M Peters RL Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen a possible source of error in immunohistochemistry American Journal of Clinical Pathology 1980 73 626 Correcciones a la publicaci n anterior Advertencias y precauciones Fecha de publicaci n 17 de febrero de 2015 RE7160 K Page 16 Novocastra Enzyme Proteinase K IHC N do produto RE7160 K Utiliza o prevista Para utiliza o em diagn sticos in vitro O produto Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K foi concebido para ser utilizado no pr tratamento enzim tico de sec es de tecido fixadas em formol e envolvidas em parafina antes da sua incuba o com um anticorpo prim rio num procedimento imunohistoqu mico IHQ Este produto pode ser empregado para a recupera o de ep topos com anticorpos Novocastra M para o qual se recomenda a tripsina com as seguintes excep es j estabelecidas NCL BrdU NCL CYCLIN D1 NCL COLL Ilp e NCL CYCLIN D1 GM A interpreta o cl nica de qualquer colora o ou da sua aus ncia deve ser complementada por estudos morfol gicos empregando os devidos controlos e deve ser avaliada por um patologista qualificado dentro do contexto do historial cl nico do doente e de outros testes de diagn stico Princ pio do
21. RE7160 K Page 5 Minimiser la contamination microbienne des r actifs sinon un accroissement du marquage non sp cifique est susceptible de se produire Des dur es et des temp ratures d incubation diff rentes de celles qui ont t sp cifi es sont susceptibles de conduire des r sultats erron s Toutes les modifications de ce type doivent tre valid es par l utilisateur Proc dure A R actifs n cessaires mais non fournis Voir le Mode d emploi de l anticorps primaire B Equipements n cessaires mais non fournis Equipements g n raux d un laboratoire d immunohistochimie C M thodologie Avant d utiliser cette m thodologie les utilisateurs doivent avoir t form s aux techniques immunohistochimiques et l emploi en association de l Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K de l anticorps primaire sa dilution et le syst me de d tection doit tre valid par l utilisateur sur une s rie de contr les n gatifs et positifs connus Sauf mention contraire toutes les tapes sont r alis es temp rature ambiante 25 C Les tapes suivantes doivent tre mises en ceuvre avant l incubation avec l anticorps primaire 1 Laverles lames l eau d sionis e 2 Incuber avec la solution de travail Prot inase K voir Solution de travail de Prot inase K pendant 5 minutes 3 Laver dans du TBS 4 Mettre en ceuvre le protocole IHC conform ment aux Mode d emploi fourni par le fabricant pour l anticorps primaire et le syst me
22. o e processamento de tecidos prepara o das l minas de IHQ e interpreta o dos resultados das colora es A colora o de tecidos depende do seu manuseamento e processamento antes da sua colora o A fixa o congela o descongela o lavagem secagem aquecimento ou corte incorrectos das amostras ou a sua contamina o com outros tecidos ou fluidos pode produzir artefactos reten o de anticorpos ou resultados falso negativos Os resultados inconsistentes podem dever se a varia es nos m todos de fixa o e envolvimento ou a irregularidades inerentes ao tecido Uma contrasta o excessiva ou incompleta pode comprometer a devida interpreta o dos resultados A interpreta o cl nica de qualquer colora o ou da sua aus ncia deve ser complementada por estudos morfol gicos empregando os devidos controlos e deve ser avaliada por um patologista qualificado dentro do contexto do historial cl nico do doente e de outros testes de diagn stico Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K serve para ser utilizado em sec es envolvidas em parafina com requisitos especiais de fixa o Nem todos os ant genos requerem a recupera o de ep topos As condi es ideais para a recupera o de ep topos devem ser validadas pelo utilizador pois que tais condi es variam com os tecidos fixa o e ou anticorpo prim rio Pode ocorrer uma express o inesperada de ant geno especialmente em neoplasmas A interpreta
23. 75 ml Enzym i 40 volumen volumen glycerol der indeholder 10 mM TrisHCI pH7 5 med 1 mM calciumacetat 2 Enzyme Proteinase K Buffer RE7127 100 ml Trisbufferet saltvand overfladeaktivt stof og 0 35 ProClin 950 3 Tom dr beteellerflaske Rekonstituering blanding fortynding titrering Novocastra M Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 K kr ver fortynding i Proteinase K Buffer RE7127 til fremstilling af en arbejdsoplosning se Proteinase K arbejdsoplosning Brugeren skal validere en eventuel s dan ndring Yderligere fortynding kan resultere i tab af antigenfarvning Brugeren skal validere en eventuel s dan ndring Opbevaring og stabilitet Opbevares ved 2 8 C M ikke fryses Returneres til 2 8 C straks efter brug M ikke anvendes efter udl bsdatoen der er angivet p produktetiketten Opbevaringsbetingelser der er forskelige fra de anf rte skal verificeres af brugeren Der er ingen tydelige tegn der viser ustabilitet for dette produkt der skal derfor k res positive og negative kontroller samtidigt med patientpr ver Klarg ring af pr ver Det anbefalede fikseringsmiddel er 10 neutralbufferet formalin til paraffin indlejrede v vssnit Advarsler og forholdsregler ENZYME PROTEINASE K H334 Kan for rsage P261 Undg ind nding af pulver r g gas t ge damp spray CONCENTRATE allergi eller astmasymptomer eller P285 Ved utilstr kkelig udluftning anvendes Indeholder og Proteinase K ndedr tsbesv r ved in
24. Lave con TBS 4 Proceda con el protocolo de inmunohistoqu mica conforme a las Instrucciones de uso del fabricante para el anticuerpo primario y del sistema de detecci n Soluci n de trabajo de Proteinase K A ada 40 ul de Proteinase K Concentrate RE7126 a 6 ml de Proteinase K Buffer RE7127 Coloque la soluci n en el gotero que se suministra La soluci n de trabajo es estable durante un per odo de tres meses si se conserva a una temperatura de 2 8 C Control de calidad Las diferencias en el procesado de los tejidos y en los procedimientos t cnicos del laboratorio del usuario pueden producir una variabilidad significativa en los resultados por ello es necesario que ste lleve a cabo regularmente sus propios controles adem s de los siguientes procedimientos Los controles deben ser muestras frescas de autopsia biopsia o quir rgicas fijadas en formol procesadas e incluidas en parafina lo antes posible de manera id ntica a la utilizada para la muestra o muestras del paciente o pacientes Control tisular positivo Se utiliza para indicar la preparaci n correcta de los tejidos y las t cnicas de tinci n adecuadas Debe incluirse un control tisular positivo por cada conjunto de condiciones de ensayo y anticuerpo primario en cada tinci n o serie de tinciones realizada Un tejido con una tinci n positiva d bil es m s adecuado que un tejido con una tinci n positiva intensa para un control de calidad ptimo y para detectar nive
25. Negativ reagenskontroll Anv nd en ospecifik negativ reagenskontroll ist llet f r den prim ra antikroppen med ett snitt fr n varje patientprov f r att utv rdera ospecifik f rgning och till ta b ttre tolkning av specifik f rgning p antigenomr det Patientv vnad Unders k f rgade patientprover sist Positiv f rgningsintensitet b r utvarderas inom ramen f r all ospecifik bakgrundsfargning av den negativa reagenskontrollen Som vid alla immunhistokemiska tester betyder ett negativt resultat att antigenet inte uppt cktes inte att det inte f rekom i de analyserade cellerna v vnaderna Anv nd vid behov en antikroppspanel f r att identifiera falskt negativa reaktioner Begr nsningar Immunhistokemi r en diagnostisk process i flera steg som kr ver specialiserad utbildning i urvalet av l mpliga reagens val av v vnad fixering och bearbetning f rberedelse av IHC objektglaset samt tolkning av fargningsresultaten Vavnadsfargning r beroende av hantering och bearbetning av v vnaden fore f rgningen Felaktig fixering nedfrysning upptining tv ttning torkning uppv rmning snittning eller kontaminering med andra v vnader eller v tskor kan framst lla artefakter inf ngande av antikroppar eller falskt negativa resultat Mots gelsefulla resultat kan bero p variationer av fixerings och inb ddningsmetoder eller p naturliga oregelbundenheter inom v vnaden Overfl dig eller ofullst ndig kontrastf gning kan ven
26. components Minimize microbial contamination of reagents or an increase in non specific staining may occur Incubation times or temperatures other than those specified may give erroneous results Any such change must be validated by the user Procedure A Reagents required but not supplied See primary antibody Instructions for Use RE7160 K Page 2 B Equipment required but not supplied General immunohistochemistry laboratory equipment C Methodology Prior to undertaking this methodology users must be trained in immunohistochemical techniques and the use in combination of Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K primary antibody its dilution together with the detection system should be validated by the user on a series of known positive and negative controls Unless indicated all steps are performed at room temperature 25 C The following steps should be undertaken prior to incubation with the primary antibody 1 Wash slides in de ionized water 2 Incubate with Proteinase K Working Solution see Proteinase K Working Solution for 5 minutes 3 Wash in TBS 4 Proceed with IHC protocol according to manufacturers Instructions for Use for the primary antibody and detection system Proteinase K Working Solution Add 40 pL of Proteinase K Concentrate RE7126 to 6 mL of Proteinase K Buffer RE7127 Load solution into the dropper bottle provided The working solution is stable for up to 3 months when stored at 2 8 C Quality Control
27. de d tection Solution de travail Prot inase K Ajouter 40 pL de Proteinase K Concentrate RE7126 6 ml de Proteinase K Buffer RE7127 Charger la solution dans le flacon compte gouttes fourni La solution de travail est stable pendant 3 mois si elle est conserv e 2 8 C Contr le de qualit Des diff rences de traitement des tissus et de proc dures techniques du laboratoire de l utilisateur sont susceptibles de conduire une variabilit significative des r sultats ce qui rend n cessaire la mise en uvre de contr les en interne en plus des proc dures suivantes Les contr les doivent tre des sp cimens frais provenant d autopsies de biopsies ou d interventions chirurgicales fix s au formol trait s et inclus en cire de paraffine d s que possible de la m me fa on que le s chantillon s de patient Tissu de contr le positif Il est utilis pour indiquer que les tissus ont t pr par s correctement et que les techniques de marquage taient appropri es Un contr le tissulaire positif doit tre inclus dans toute op ration de marquage pour chaque ensemble d anticorps primaire de conditions d analyse Un tissu pr sentant un marquage faiblement positif est plus adapt un contr le de qualit optimal qu un tissu pr sentant un marquage fortement positif et il permet de d tecter de moindres niveaux de d gradation du r actif Pour le tissu de contr le positif recommand voir le Mode d emploi de l antico
28. endog nes ou la liaison non sp cifique d enzymes de l immunor activit sp cifique des tissus suppl mentaires du patient peuvent tre marqu s exclusivement avec le substrat chromog ne le Streptavidin HRP ou le polym re marqu et le substrat chromog ne respectivement Si un marquage sp cifique se produit dans le tissu de contr le n gatif les r sultats des sp cimens du patient doivent tre consid r s comme invalides R actif de contr le n gatif Utiliser un r actif de contr le n gatif non sp cifique la place de l anticorps primaire avec une coupe de chaque sp cimen du patient afin d valuer le marquage non sp cifique et de permettre une meilleure interpr tation du marquage sp cifique au niveau du site antig nique Tissu du patient Examiner en dernier lieu les sp cimens du patient L intensit du marquage positif doit tre valu e la lumi re du bruit de fond du marquage non sp cifique du r actif de contr le n gatif Comme pour toutes les analyses immunohistochimiques un r sultat n gatif signifie que l antig ne n a pas t d tect mais ne signifie pas qu il est absent des cellules tissus test s Si n cessaire employer un panel d anticorps pour identifier les r actions faussement n gatives Limites L immunohistochimie est un processus diagnostique constitu de plusieurs tapes qui n cessite une formation sp cialis e relative au choix des r actifs appropri s au choix la fixation
29. et au traitement des tissus la pr paration des lames IHC et l interpr tation des r sultats du marquage RE7160 K Page 6 Le marquage des tissus d pend de leur manipulation et de leur traitement avant le marquage Une fixation une cong lation une d cong lation un lavage un s chage un chauffage une coupe incorrects ou une contamination par d autres tissus ou d autres liquides sont susceptibles de conduire la production d artefacts au pi geage de l anticorps ou des r sultats faussement n gatifs Des variations dans les m thodes de fixation et d inclusion ainsi que des irr gularit s propres au tissu peuvent conduire des r sultats incoh rents Une coloration de contraste excessive ou incompl te peut g ner l interpr tation correcte des r sultats Linterpr tation clinique de tout marquage ou absence de marquage doit tre compl t e par des tudes morphologiques utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e par un pathologiste qualifi la lumi re des ant c dents cliniques du patient et d autres analyses diagnostiques Le Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 Kdoit tre utilis sur des coupes incluses en paraffine avec des exigences sp cifiques en mati re de fixation Tous les antig nes ne n cessitent pas une restauration des pitopes Les conditions optimales de restauration de l pitope doivent tre valid es par l utilisateur car elles sont d pendantes du tissu de
30. inesperada del ant geno especialmente en las neoplasias La interpretaci n cl nica de cualquier secci n de tejido te ida debe incluir un an lisis morfol gico y la evaluaci n de los controles apropiados Caracter sticas del rendimiento La eficacia de Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K se ha validado con anticuerpos primarios Novocastra M para los que la tripsina es la t cnica de recuperaci n recomendada Este producto es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del producto Bibliograf a 1 Huang SN Minassian H and More JD Application of immunofluorescent staining on paraffin sections improved by trypsin digestion Laboratory Investigations 1976 Oct 35 4 383 390 2 Bancroft JD and Stevens A Theory and Practice of Histological Techniques 4th Edition Churchill Livingstone New York 1996 3 National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue proposed guideline Villanova P A 1991 7 9 Order code M29 P 4 Battifora H Diagnostic uses of antibodies to keratins a review and immunohistochemical comparison of seven monoclonal and three polyclonal antibodies Progress in Surgical Pathology 6 1 15 eds Fenoglio Preiser C Wolff CM Rilke F Field amp Wood Inc Philadelphia 5 Nadji M Morales AR Immunoperoxidase part I the techniques and pitfalls Laboratory Medicine 1983 14 767 6 6
31. la fixation et ou de Panticorps primaire Une expression antig nique inattendue est susceptible de se produire en particulier au niveau des n oplasmes Linterpr tation clinique de toute coupe tissulaire marqu e doit comporter une analyse morphologique et l valuation des contr les appropri s Caract ristiques de performance Les performances du Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K ont t valid es l aide d anticorps primaires Novocastra M pour lesquels la trypsine constitue la technique de restauration recommand e Ce produit est stable jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette du produit Bibliographie 1 Huang SN Minassian H and More JD Application of immunofluorescent staining on paraffin sections improved by trypsin digestion Laboratory Investigations 1976 Oct 35 4 383 390 2 Bancroft JD and Stevens A Theory and Practice of Histological Techniques 4th Edition Churchill Livingstone New York 1996 3 National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue proposed guideline Villanova P A 1991 7 9 Order code M29 P 4 Battifora H Diagnostic uses of antibodies to keratins a review and immunohistochemical comparison of seven monoclonal and three polyclonal antibodies Progress in Surgical Pathology 6 1 15 eds Fenoglio Preiser C Wolff CM Rilke F Field amp Wood Inc Philadelphia
32. liore le marquage de certains anticorps en exposant les pitopes pr sents dans les tissus qui ont t masqu s au cours de la fixation La premi re enzyme prot olytique employ e pour la restauration des pitopes a t la trvpsine D autres enzymes prot olytiques la prot ase XXIV et la pepsine peuvent tre utilis es dans ce but Plus r cemment la prot inase K qui est couramment utilis dans le cadre des techniques d hybridation in situ a galement t employ e Ce produit est utilis dans le cadre d une proc dure IHC qui permet une identification qualitative des antig nes par microscopie optique dans des coupes fix es au formol incluses en paraffine par l interm diaire d tapes s quentielles comportant des tapes de lavage pour le Principe de la proc dure de marquage IHC voir le Mode d emploi du syst me de d tection appropri La restauration des pitopes par pr traitement enzymatique est recommand e pour un nombre limit d anticorps voir Recommandations d utilisation de l anticorps primaire Les conditions optimales de restauration de l pitope doivent tre valid es par l utilisateur car elles sont d pendantes des tissus de la fixation et ou de l anticorps primaire R actifs fournis 1 Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 0 75 ml Enzyme dans du glyc rol 40 v v contenant du Tris HCI 10 mM 7 5 de pH avec de l ac tate de calcium 1 mM 2 Enzyme Proteinase K Buffer RE7127 100 ml Solut
33. rbetechniken an In jedem F rbelauf sollte f r jeden Satz Testbedingungen prim rer Antik rper eine positive Gewebekontrolle durchgef hrt werden Gewebe mit schwach positiver F rbung ist f r die optimale Qualit tskontrolle und den Nachweis kleiner Minderungen in der Reagenzleistung besser geeignet als ein Gewebe mit stark positiver F rbung Informationen ber das positive Kontrollgewebe sind in den Gebrauchsanweisungen zum prim ren Antik rper zu finden Falls das positive Kontrollgewebe keine positive F rbung nachweisen kann sollten die mit den Testproben erzielten Ergebnisse als ung ltig betrachtet werden Negative Gewebekontrolle Die negative Gewebekontrolle sollte nach der positiven Gewebekontrolle erfolgen um die Spezifit t der Zielantigenmarkierung durch den prim ren Antik rper zu verifizieren Informationen ber das empfohlene negative Kontrollgewebe sind in den Gebrauchsanweisungen zum prim ren Antik rper zu finden Alternativ bietet die Vielfalt unterschiedlicher Zelltypen die in den meisten Gewebeschnitten vorliegen h ufig Stellen f r eine negative Kontrolle Jedoch sollte dies vom Benutzer verifiziert werden Liegt eine unspezifische F rbung vor hat diese gew hnlich ein diffuses Erscheinungsbild Eine sporadische F rbung des Bindegewebes kann ebenfalls in Schnitten von berm ig formalinfixierten Geweben beobachtet werden Zur Bewertung der Farbeergebnisse intakte Zellen verwenden Nekrotische oder degenerierte Z
34. reactivos apropiados selecci n fijaci n y procesamiento de tejidos preparaci n del portaobjeto para IHQ e interpretaci n de los resultados de la tinci n La tinci n de los tejidos depende de la manipulaci n y el procesamiento del tejido previos a la tinci n Una fijaci n congelaci n descongelaci n lavado secado calentamiento o seccionamiento incorrectos o la contaminaci n con otros tejidos o l quidos puede generar artefactos atrapamiento del anticuerpo o falsos negativos La aparici n de resultados incoherentes puede deberse a variaciones en los m todos de fijaci n y de inclusi n o a irregularidades inherentes al tejido Una contratinci n excesiva o incompleta puede poner en peligro la interpretaci n correcta de los resultados La interpretaci n cl nica de cualquier tinci n o de su ausencia se debe complementar con estudios morfol gicos utilizando los controles adecuados y un pat logo cualificado debe evaluarla en el contexto de la historia cl nica del paciente y de otras pruebas diagn sticas El empleo del producto Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K est indicado en cortes incluidos en parafina con requisitos de fijaci n espec ficos No todos los ant genos requieren la recuperaci n de los ep topos Las condiciones ptimas para la recuperaci n de los ep topos deber n ser validadas por el usuario ya que dependen del tejido la fijaci n y o el anticuerpo primario Puede producirse una expresi n
35. sp dning kan resultera i f rlust av antigenf rgning Anv ndaren m ste kontrollera s dana f r ndringar F rvaring och stabilitet F rvara vid 2 8 C Frys inte Aterg till 2 8 C direkt efter anv ndning Anv nd inte efter det utg ngsdatum som anges p produktens etikett F rvaringsf rh llanden som skiljer sig fr n de ovann mnda m ste kontrolleras av anv ndaren Det finns inga tydliga tecken p att denna produkt r ostabil d rf r b r positiva och negativa kontroller k ras samtidigt med patientprover Preparation av prov Det rekommenderade fixeringsmedlet f r paraffininb ddade v vnadssnitt r 10 neutralbuffrat formalin Varningar och f rsiktighets tg rder ENZYME PROTEINASE K H334 Kan orsaka P261 Undvik att inandas damm r k gaser dimma ngor CONCENTRATE allergi eller astmasymtom eller sprej Inneh ller och Proteinase K andningssv righeter vid inandning P285 Anv nd andningsskydd vid otillr cklig ventilation lt 10 P304 341 VID INANDNING Vid andningsbesv r flytta GHS08 Halsofara personen till frisk luft och se till att han eller hon vilar i en Signalord Fara st llning som underl ttar andningen P342 311 Vid besv r i luftv garna Kontakta GIFTINFORMATIONSCENTRAL eller l kare P501 Inneh llet Beh llaren l mnas till insamlingsst lle f r farligt avfall Materials kerhetsdatablad finns att f p beg ran eller fr n www LeicaBiosystems com For professionella anv n
36. C RE7160 K er blevet valideret ved brug af Novocastra M prim re antistoffer for hvilke trypsin er den anbefalede genfindingsteknik Dette produkt er stabilt til udlobsdatoen der er angivet p produktetiketten Litteraturliste 1 Huang SN Minassian H and More JD Application of immunofluorescent staining on paraffin sections improved by trypsin digestion Laboratory Investigations 1976 Oct 35 4 383 390 Bancroft JD and Stevens A Theory and Practice of Histological Techniques 4th Edition Churchill Livingstone New York 1996 National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue proposed guideline Villanova P A 1991 7 9 Order code M29 P Battifora H Diagnostic uses of antibodies to keratins a review and immunohistochemical comparison of seven monoclonal and three polyclonal antibodies Progress in Surgical Pathology 6 1 15 eds Fenoglio Preiser C Wolff CM Rilke F Field amp Wood Inc Philadelphia Nadji M Morales AR Immunoperoxidase part I the techniques and pitfalls Laboratory Medicine 1983 14 767 Mount SL Cooper K Beware of biotin a source of false positive immunohistochemistry Current Diagnostic Pathology 2001 7 161 167 Omata M Liew CT Ashcavai M Peters RL Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen a possible source of error in immunohistochemistry American Journ
37. C Verfahren verwendet das den qualitativen Nachweis von Antigenen in formalinfixiertem paraffineingebettetem Gewebeschnitten in mehreren aufeinander folgenden Schritten mit dazwischen liegenden Waschschritten mittels Lichtmikroskopie gestattet die Verfahrensgrundlage der IHC F rbung ist in den Gebrauchsanweisungen des entsprechenden Nachweissystems beschrieben Die Epitopdemaskierung durch enzymatische Vorbehandlung wird f r eine begrenzte Zahl von Antik rpern empfohlen siehe Gebrauchsempfehlungen f r den prim ren Antik rper Da die optimalen Bedingungen f r die Epitopdemaskierung vom Gewebe von der Fixierung und oder vom prim rem Antik rper abh ngen sind sie vom Benutzer zu validieren Gelieferte Reagenzien 1 Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 0 75 ml Enzym in 40 Vol Glycerol das 10 mmol l Tris HCl pH 7 5 mit 1 mmol l Kalziumazetat enth lt 2 Enzyme Proteinase K Buffer RE7127 100 ml Tris gepufferte physiologische Kochsalzl sung oberfl chenaktive Substanz und 0 35 ProClin 950 3 Leere Tropfflasche Rekonstitution Mischen Verd nnung Titration Novocastra M Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 K muss zur Vorbereitung einer Arbeitsl sung im Proteinase K Buffer RE7127 verdiinnt werden siehe Proteinase K Arbeitsl sung Der Benutzer muss solche Anderungen zuvor validieren Eine weitere Verd nnung k nnte zum Verlust der Antigenf rbung f hren Der Benutzer muss solche Anderungen zuvor validieren L
38. Differences in tissue processing and technical procedures in the user s laboratory may produce significant variability in results necessitating regular performance of in house controls in addition to the following procedures Controls should be fresh autopsy biopsy surgical specimens formalin fixed processed and paraffin wax embedded as soon as possible in the same manner as the patient sample s Positive Tissue Control Used to indicate correctly prepared tissues and proper staining techniques One positive tissue control should be included for each set of test conditions primary antibody in each staining run A tissue with weak positive staining is more suitable than a tissue with strong positive staining for optimal quality control and to detect minor levels of reagent degradation For recommended positive control tissue see primary antibody Instructions for Use If the positive tissue control fails to demonstrate positive staining results with the test specimens should be considered invalid Negative Tissue Control Should be examined after the positive tissue control to verify the specificity of the labeling of the target antigen by the primary antibody For recommended negative control tissue see primary antibody Instructions for Use Alternatively the variety of different cell types present in most tissue sections frequently offers negative control sites but this should be verified by the user Non specific staining if present usually has
39. IHC RE7160 K ist zur Verwendung auf paraffineingebetteten Schnitten mit spezifischen Fixierungsanforderungen bestimmt Nicht alle Antigene erfordern eine Epitopdemaskierung Da die optimalen Bedingungen f r die Epitopdemaskierung vom Gewebe von der Fixierung und oder vom prim rem Antik rper abh ngen sind sie vom Benutzer zu validieren Es kann insbesondere bei Neoplasmen zu einer unerwarteten Antigenexpression kommen Die klinische Bewertung eines gef rbten Gewebeschnitts muss eine morphologische Analyse und die Auswertung der entsprechenden Kontrollen einschliefen Leistungsmerkmale Die Leistung von Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K wurde mithilfe prim rer Novocastra M Antik rper f r die Trypsin die empfohlene Demaskierungstechnik darstellt validiert Dieses Produkt bleibt bis zum auf dem Beh lteretikett angegebenen Verfallsdatum stabil Literatur 1 Huang SN Minassian H and More JD Application of immunofluorescent staining on paraffin sections improved by trypsin digestion Laboratory Investigations 1976 Oct 35 4 383 390 2 Bancroft JD and Stevens A Theory and Practice of Histological Techniques 4th Edition Churchill Livingstone New York 1996 3 National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue proposed guideline Villanova P A 1991 7 9 Order code M29 P 4 Battifora H Diagnostic uses of antibodies t
40. a diffuse appearance Sporadic staining of connective tissue may also be observed in sections from excessively formalin fixed tissues Use intact cells for interpretation of staining results Necrotic or degenerated cells often stain non specifically False positive results may be seen due to non immunological binding of proteins or substrate reaction products They may also be caused by endogenous enzymes such as pseudoperoxidase erythrocytes endogenous peroxidase cytochrome C or endogenous biotin eg liver breast brain kidney To differentiate endogenous enzyme activity or non specific binding of enzymes from specific immunoreactivity additional patient tissues may be stained exclusively with substrate chromogen Streptavidin HRP or labeled polymer and substrate chromogen respectively If specific staining occurs in the negative tissue control results with the patient specimens should be considered invalid Negative Reagent Control Use a non specific negative reagent control in place of the primary antibody with a section of each patient specimen to evaluate non specific staining and allow better interpretation of specific staining at the antigen site Patient Tissue Examine stained patient specimens last Positive staining intensity should be assessed within the context of any non specific background staining of the negative reagent control As with any immunohistochemical test a negative result means that the antigen was not detected no
41. agerung und Stabilit t Bei 2 8 C lagern Nicht einfrieren Nach Gebrauch sofort wieder bei 2 8 C lagern Nach Ablauf des Verfallsdatums auf dem Beh lteretikett angezeigt darf das Produkt nicht mehr verwendet werden Lagerbedingungen die von den oben genannten Bedingungen abweichen m ssen vom Benutzer verifiziert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r die Instabilit t dieses Produkts Daher sind die positiven und negativen Kontrollen gleichzeitig mit den Patientenproben durchzuf hren Probenvorbereitung F r paraffineingebettete Gewebeschnitte ist das empfohlene Fixativ 1096 neutral gepuffertes Formalin Warnhinweise und Sicherheitsma nahmen ENZYME PROTEINASE K H334 Kann bei Einatmen Allergie P261 Einatmen von Staub Rauch Gas Nebel Dampf CONCENTRATE asthmaartige Symptome oder Aerosol vermeiden Enth lt und Proteinase K Atembeschwerden verursachen P285 Bei unzureichender Bel fung Atemschutz tragen lt 10 P304 341 BEI EINATMEN Bei Atembeschwerden an die GHS08 Gesundheitsgefahr frische Luft bringen und in einer Position ruhigstellen die Signalw rter Gefahr das Atmen erleichtert P342 311 Bei Symptomen der Atemwege GIFTINFORMATIONSZENTRUM oder Arzt anrufen P501 Inhalt Beh lter zu einer Problemabfallentsorgung zuf hren Ein Materialsicherheits Datenblatt ist auf Anfrage von www LeicaBiosystems com erh ltlich Fur geschultes Fachpersonal Vor und nach der Fixierung sind die Proben sowie al
42. al of Clinical Pathology 1980 73 626 ndringer til tidligere udgave Advarsler og forholdsregler Udf rdigelsesdato 17 februar 2015 RE7160 K Page 28 RE7160 K Page 29 RE7160 K Page 30 Leica Biosystems Newcastle Ltd Balliol Business Park West asd Benton Lane Newcastle Upon Tyne NE12 8EW United Kingdom 2 44 191 215 4242 Leica Biosystems Newcastle Ltd RE7160 K 17 02 2015
43. aziente e delle altre metodiche diagnostiche adoperate Principio della procedura Il pretrattamento enzimatico di sezioni tissutali fissate in formalina e incluse in paraffina migliora la colorazione di alcuni anticorpi esponendo gli epitopi presenti nel tessuto e mascherati durante la fissazione Il primo enzima proteolitico impiegato per lo smascheramento degli epitopi stato la tripsina Altri enzimi proteolitici che possono essere impiegati a tale scopo sono ad esempio la proteasi XXIV e la pepsina Pi recentemente stata utilizzata anche la proteinasi K comunemente impiegata nelle tecniche di ibridazione in situ Questo prodotto viene impiegato nel corso di una tecnica IHC che consente l identificazione qualitativa in microscopia ottica degli antigeni in sezioni tissutali fissate in formalina e incluse in paraffina attraverso fasi sequenziali intervallate da fasi di lavaggio per il Principio della procedura relativo alla colorazione IHC vedere le Istruzioni per l uso del sistema di determinazione corrispondente Lo smascheramento degli epitopi dopo pretrattamento enzimatico consigliato per un numero limitato di anticorpi vedere le Raccomandazioni per l uso per l anticorpo primario Le condizioni ottimali per lo smascheramento degli epitopi vanno convalidate dall utente poich dipendono dal tessuto dalla fissazione e o dall anticorpo primario Reagenti forniti 1 Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 0 75 ml Enzima i
44. bricante para o anticorpo prim rio e para o sistema de detec o Solu o de trabalho de Proteinase K Adicionar 40 pl de Proteinase K Concentrate RE7126 a 6 ml of Proteinase K Buffer RE7127 Colocar a solu o no frasco conta gotas fornecido A solu o de trabalho permanece est vel durante um m ximo de 3 meses se for armazenada a 2 8 C Controlo da qualidade As diferen as entre os diferentes m todos e t cnicas de processamento de tecidos no laborat rio do utilizador podem causar uma grande variabilidade de resultados requerendo a realiza o frequente de controlos internos suplementares aos procedimentos que se seguem Os controlos devem ser amostras de aut psia biopsia cirurgia frescas fixadas em formol processadas e envolvidas em cera paraf nica logo que poss vel da mesma maneira que a s amostra s do s doente s Controlo de tecido positivo Usado para assinalar os tecidos correctamente preparados e as t cnicas de colora o indicadas Por cada conjunto de condi es de testes em cada processo de colora o deve incluir se um controlo de tecido positivo Os tecidos com uma colora o positiva fraca s o mais indicados do que os t m uma colora o positiva forte para proporcionarem um controlo de qualidade ptimo bem como para detectar n veis reduzidos de degrada o dos reagentes Consultar as Instru es de utiliza o do anticorpo prim rio para obter informa es sobre o tecido de controlo positivo r
45. cl nica de cualquier tinci n o de su ausencia se debe complementar con estudios morfol gicos utilizando los controles adecuados y un pat logo cualificado debe evaluarla en el contexto de la historia cl nica del paciente y de otras pruebas diagn sticas Principio del procedimiento El tratamiento enzim tico previo de secciones de tejido fijadas con formol e incluidos en parafina mejora la tinci n de algunos anticuerpos al exponer los ep topos presentes en el tejido que se han enmascarado durante la fijaci n La primera enzima proteol tica empleada en la recuperaci n de los ep topos fue la tripsina Otras enzimas proteol ticas que se pueden usar con esta finalidad son la proteasa XXIV y la pepsina Recientemente se ha utilizado tambi n habitualmente la proteinasa K en las t cnicas de hibridaci n in situ Este producto se usa en un procedimiento de inmunohistoqu mica lo que permite la identificaci n cualitativa mediante microscop a ptica de ant genos en cortes fijados con formol e incluidos en parafina mediante pasos secuenciales con pasos intermedios de lavado vea el Principio del m todo de tinci n inmunohistoqu mica en las instrucciones de uso del sistema de detecci n adecuado La recuperaci n de los ep topos mediante tratamiento enzim tico previo se recomienda para unos pocos anticuerpos consulte las Recomendaciones de uso del anticuerpo primario Las condiciones ptimas para la recuperaci n de los ep topos deb
46. d nding ndedr tsv rn lt 10 P304 341 VED IND NDING Ved vejrtr kningsbesv r GHS08 Sundhedsfarer Flyt personen til et sted med frisk luft og s rg for at Signalord Fare vedkommende hviler i en stilling som letter vejrtr kningen P342 311 Ved luftvejssymptomer Ring til en GIFTINFORMATION eller en l ge P501 Indholdet Beholderen bortskaffes i et indsamlingssted for farligt affald og problemaffald Et Materialesikkerhedsdataark kan rekvireres eller findes p www LeicaBiosystems com Til anvendelse af uddannet fagpersonale Pr ver f r og efter fiksering samt alle materialer der eksponeres for disse skal h ndteres som potentielt smittefarlige og bortskaffes under passende forholdsregler Pipett r aldrig reagenser med munden og undg at reagenser og pr ver kommer i kontakt med hud og slimhinder Hvis reagenser eller pr ver kommer i kontakt med f lsomme omr der skal der skylles med rigelige m ngder vand Konsult r offentlige eller lokale regler for bortskaffelse af potentielt toksiske bestanddele Minim r mikrobiel kontaminering af reagenser da dette kan medf re get uspecifik farvning Inkuberingstider eller temperaturer der er anderledes end de anf rte kan medf re fejlagtige resultater En eventuel s dan ndring skal valideres af brugeren RE7160 K Page 26 Procedure A Nodvendige reagenser der ikke medf lger Se brugsanvisningen til det prim re antistof B Nodvendigt udstyr d
47. dare Prover innan och efter fixering samt all material som uts tts f r dem b r hanteras som om de verf r infektioner och kastas enligt g llande f rsiktighets tg rder Pipettera aldrig via mun och se till att hud och slemhinnor inte kommer i kontakt med reagens och prover Om reagens eller prover kommer i kontakt med k nsliga omr den skall du tv tta med rikliga m ngder vatten Ang ende kassering av potentiellt toxiska komponenter h nvisas till nationella eller lokala best mmelser Minimera mikrobisk kontaminering av reagens annars kan en kning av ospecifik f rgning ske Inkubationstider eller temperaturer som skiljer sig fr n dem som specificeras kan ge felaktiga resultat Alla s dana f r ndringar m ste kontrolleras av anv ndaren RE7160 K Page 20 Procedur A Reagens som kr vs men inte tillhandah lls Se prim r antikropp Instruktioner vid anv ndning B Utrustning som kr vs men inte tillhandah lls Allm n immunhistokemisk laboratorieutrustning C Metod Innan denna metod anv nds b r anv ndare utbildas i immunhistokemiska tekniker och anv ndningen i kombination med Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K prim r antikropp dess sp dning tillsammans med detektionssystemet b r kontrolleras av anv ndaren med en serie k nda positiva och negativa kontroller Om inte annat anges utf rs alla steg vid rumstemperatur 25 C F ljande steg b r tas fore inkubation med prim r antikropp 1 Tv tta objek
48. das enzimas end genas ou as liga es n o espec ficas de enzimas e as imunoreactividades espec ficas podem colorir se tecidos adicionais dos doentes exclusivamente com substrato cromog nio Streptavidin HRP ou com pol mero etiquetado e substrato cromog nio respectivamente Se ocorrer a colora o espec fica no controlo de tecido negativo os resultados dos testes feitos com as amostras do doente devem ser considerados inv lidos Controlo de reagente negativo Utilizar um controlo de reagente negativo n o espec fico em vez do anticorpo prim rio com uma sec o de cada amostra de doente para avaliar a colora o n o espec fica e permitir uma melhor interpreta o da colora o espec fica no local do ant geno Tecido do doente Examinar as amostras coloridas do doente em ltimo lugar A intensidade da colora o positiva deve ser avaliada dentro do contexto de qualquer colora o n o espec fica de fundo do controlo de reagente negativo Tal como com qualquer teste imunohistoqu mico um resultado negativo significa que o ant geno n o foi detectado e n o que o ant geno se encontrava ausente das c lulas ou tecido analisados Se necess rio deve utilizar se um painel de anticorpos para identificar reac es falso negativas RE7160 K Page 18 Limites A imunohistoqu mica um processo diagn stico em m ltiplas etapas que consta de uma forma o especializada na selec o dos reagentes apropriados selec o fixa
49. del reagente in luogo dell anticorpo primario con una sezione di ogni campione biologico del paziente per valutare la colorazione aspecifica e per consentire una migliore interpretazione della colorazione specifica in corrispondenza del sito antigenico Tessuto del paziente Per ultimi esaminare i campioni biologici colorati del paziente L intensit della colorazione positiva va analizzata nel contesto di qualsiasi colorazione aspecifica di fondo del controllo negativo del reagente Come per tutti gli altri test immunoistochimici un risultato negativo significa che l antigene non stato determinato ma non necessariamente che fosse assente dalle cellule o dal tessuto esaminato Se necessario usare un pannello di anticorpi per identificare reazioni falsamente negative RE7160 K Page 9 Limitazioni L immunoistochimica un procedimento diagnostico a pi passi multistep che richiede un esperienza specifica nella selezione dei reagenti appropriati nella selezione fissazione e processazione dei tessuti nella preparazione di vetrini IHC e nell interpretazione dei risultati della colorazione La colorazione del tessuto dipende dalle modalit di manipolazione e di processazione del tessuto stesso adottate prima della colorazione La fissazione il congelamento lo scongelamento il lavaggio l asciugatura il riscaldamento o la sezione condotti in modo non corretto o la contaminazione con altri tessuti o liquidi pu produrre artefatti i
50. ding af proteiner eller substratreaktionsprodukter De kan ogs skyldes endogene enzymer s som pseudoperoxidase erytrocytter endogen peroxidase cytochrom C eller endogen biotin6 f eks lever bryst hjerne nyre For at adskille endogen enzymaktivitet eller uspecifik binding af enzymer fra specifik immunreaktivitet kan yderligere patientvsev farves udelukkende med henholdsvis substratkromogen streptavidin HRP eller m rket polymer og substratkromogen Hvis der forekommer specifik farvning i den negative v vskontrol b r resultaterne af patientpr verne betragtes som ugyldige Negativ reagenskontrol Brug en uspecifik negativ reagenskontrol i stedet for det prim re antistof sammen med et snit af hver patientpr ve for at vurdere uspecifik farvning og bne mulighed for en bedre tolkning af specifik farvning i antigenstedet Patientv v Unders g farvede patientpr ver til sidst Intensiteten af positiv farvning skal vurderes p baggrund af eventuel uspecifik baggrundsfarvning af den negative reagenskontrol Som ved alle immunhistokemiske tests betyder et negativt resultat at antigenet ikke blev p vist ikke at antigenet var frav rende i de analyserede celler eller det analyserede v v Brug om n dvendigt et panel af antistoffer til at identificere falske negative reaktioner Begr nsninger Immunhistokemi er en flertrins diagnostisk proces der best r af specialiseret tr ning i valget af passende reagenser v vsvalg fikseri
51. e Proteinase K Concentrate RE7126 0 75 ml Enzima em glicerina a 40 v v contendo 10 mM Tris HCI pH 7 5 com 1 mM de acetato de c lcio 2 Enzyme Proteinase K Buffer RE7127 100 ml Soro tamponado com tris um produto tensio activo e ProClin 950 a 0 35 3 Frasco conta gotas vazio Reconstitui o mistura dilui o titula o Novocastra M Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 K requer a dilui o de Proteinase K Buffer RE7127 para a prepara o de uma solu o de trabalho consultar a sec o Solu o de trabalho com protease K O utilizador deve validar quaisquer altera es dessa natureza Qualquer dilui o adicional poder resultar na perda de colora o do ant geno O utilizador deve validar quaisquer altera es dessa natureza Armazenamento e estabilidade Armazenar a 2 8 C N o congelar Retornar temperatura de 2 8 C imediatamente ap s a utiliza o N o utilizar ap s o prazo de validade indicado no r tulo do produto As condi es de armazenamento que diferirem das que se encontram especificadas devem ser verificadas pelo utilizador N o h sinais bvios que indiquem a instabilidade deste produto portanto os controlos positivos e negativos devem ser activados em simult neo com as amostras do doente Prepara o das amostras O fixador recomendado formol tamponado neutro a 10 para sec es de tecido envolvidas em parafina Avisos e precau es ENZYME PROTEINASE K H334 Quando inalad
52. ecomendado Se o controlo de tecido positivo n o demonstrar uma colora o positiva os resultados obtidos com as amostras de testes devem ser considerados inv lidos Controlo de tecido negativo Este deve ser examinado depois do controlo de tecido positivo para verificar a especificidade da marca o do ant geno objectivado pelo anticorpo prim rio Consultar as Instru es de utiliza o do anticorpo prim rio para obter informa es sobre o tecido de controlo negativo recomendado Alternativamente a variedade de diferentes tipos de c lulas presentes na maioria das sec es de tecidos oferece muitas vezes locais de controlo negativo mas isto deve ser verificado pelo utilizador A colora o n o espec fica caso ocorra tem geralmente um aspecto difuso A colora o espor dica do tecido conjuntivo pode tamb m ter lugar em sec es de tecido excessivamente fixado em formol Devem utilizar se c lulas intactas para a interpreta o dos resultados da colora o As c lulas necr ticas ou degeneradas causam muitas vezes uma colora o n o espec fica Podem verificar se resultados falso positivos devido liga o n o imunol gica de prote nas ou de produtos da reac o do substrato Esses resultados podem tamb m ser causados por enzimas end genas tais como a pseudoperoxidase eritr citos a peroxidase end gena citocromo C ou a biotina end gena ex no f gado mama c rebro ou rim Para diferenciar entre a actividade
53. edeutet jedoch nicht notwendigerweise dass das Antigen in den getesteten Zellen im getesteten Gewebe nicht vorlag Bei Bedarf sollte zur Identifizierung falsch negativer Reaktionen eine Gruppe von Antik rpern verwendet werden Beschr nkungen Die Immunhistochemie ist ein mehrstufiger diagnostischer Prozess der eine spezialisierte Ausbildung auf den folgenden Gebieten erfordert Auswahl der entsprechenden Reagenzien Gewebeauswahl fixierung und verarbeitung Vorbereitung des IHC Objekttr gers sowie Bewertung der F rbeergebnisse RE7160 K Page 12 Die Gewebef rbung h ngt von der Handhabung und Verarbeitung des Gewebes vor dem Farben ab Unsachgem es Fixieren Einfrieren Auftauen Waschen Trocknen Erw rmen Schneiden oder eine Kontamination mit anderen Geweben oder Fl ssigkeiten kann zu Artefakten Antik rper Trapping oder falsch negativen Ergebnissen f hren Abweichende Ergebnisse k nnen aufgrund von Unterschieden bei der Fixierung und Einbettung oder intrinsischen Unregelm igkeiten im Gewebe selbst entstehen Eine exzessive oder unvollst ndige Gegenf rbung kann die korrekte Bewertung von Ergebnissen gef hrden Die klinische Bewertung einer vorliegenden bzw fehlenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit entsprechenden Kontrollen erg nzt und im Kontext der Krankengeschichte des Patienten und anderer diagnostischer Tests von einem qualifizierten Pathologen vorgenommen werden Novocastra M Enzyme Proteinase K
54. ellen werden oft unspezifisch gef rbt Falsch positive Ergebnisse k nnen aufgrund einer nichtimmunologischen Bindung von Proteinen oder Substratreaktionsprodukten beobachtet werden Solche Ergebnisse k nnen auch durch endogene Enzyme wie Pseudoperoxidase Erythrozyten endogene Peroxidase Zytochrom C oder endogenes Biotin6 beispielsweise Leber Mamma Gehirn Niere hervorgerufen werden Um eine endogene Enzymaktivit t bzw eine unspezifische Enzvmbindung von einer spezifischen Immunreaktivit t zu unterscheiden k nnen zus tzliche Patientengewebe ausschlieRlich mit Substratchromogen Streptavidin HRP bzw markiertem Polymer plus Substratchromogen gef rbt werden Falls im negativen Kontrollgewebe eine spezifische F rbung auftritt sollten die Ergebnisse mit den Patientenproben als ung ltig betrachtet werden Negative Reagenzkontrolle Zur Beurteilung einer unspezifischen F rbung und zur besseren Bewertung einer spezifischen F rbung an der Antigenstelle ist mit einem Schnitt jedes Patientenpr parates anstelle des prim ren Antik rpers eine unspezifische negative Reagenzkontrolle zu verwenden Patientengewebe Die gef rbten Patientenproben m ssen zuletzt untersucht werden Eine positive F rbeintensit t ist im Kontext einer unspezifischen Hintergrundf rbung der negativen Reagenzkontrolle zu bewerten Wie bei jedem immunhistochemischen Test bedeutet ein negatives Ergebnis dass das Antigen nicht nachgewiesen wurde Ein negatives Ergebnis b
55. en misslyckas med att uppvisa positiv f rgning b r resultat med testproverna anses vara ogiltiga Negativ v vnadskontroll B r unders kas efter den positiva v vnadskontrollen f r att fastst lla specificiteten f r m rkningen av m lantigenet med den prim ra antikroppen F r rekommenderad negativ kontrollv vnad se prim r antikropp Instruktioner vid anv ndning Alternativt ger ofta en m ngd olika celltyper som finns i de flesta v vnadssnitt negativa kontrollomr den men detta b r kontrolleras av anv ndaren Ospecifik f rgning om det f rekommer har ofta ett diffust utseende Sporadisk f rgning av bindv v kan ocks observeras i snitt fr n verfl digt formalinfixerade v vnader Anv nd intakta celler f r tolkning av f rgningsresultat Nekrotiska eller degenererade celler f rgar ofta ospecifikt Falskt positiva resultat kan ses p g a icke immunologisk bindning av proteiner eller substratreaktionsprodukter De kan ocks orsakas av endogena enzymer som pseudoperoxidas erytrocyter endogent peroxidas cytokrom C eller endogent biotin6 t ex lever br st hj rna njure F r att skilja endogen enzymaktivitet eller ospecifik enzymbindning fr n specifik immunreaktivitet kan ytterligare patientvavnader f rgas exklusivt med respektive substratkromogen eller Streptavidin HRP eller markt polymer och substratkromogen Om specifik f rgning sker i den negativa v vnadskontrollen b r resultat med patientprover anses vara ogiltiga
56. er n ser validadas por el usuario ya que dependen del tejido la fijaci n o el anticuerpo primario Reactivos suministrados 1 Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 0 75 ml Enzima en glicerol al 40 v v que contiene Tris HCI 10 mM a pH 7 5 con acetato c lcico 1 mM 2 Enzyme Proteinase K Buffer RE7127 100 ml Soluci n salina tamponada con Tris agente tensioactivo y ProClin 950 al 0 35 3 Frasco gotero vac o Reconstituci n mezclado diluci n y titulaci n Es necesario diluir Novocastra M Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 K en Proteinase K Buffer RE7127 para preparar la soluci n de trabajo vea la Soluci n de trabajo de Proteinase K El usuario debe validar cualquier cambio de este tipo Una mayor diluci n puede provocar la p rdida de tinci n del ant geno El usuario debe validar cualquier cambio de este tipo Almacenamiento y estabilidad Almac nelo a una temperatura de 2 8 C No lo congele Devu lvalo a 2 8 C inmediatamente despu s de su uso No lo utilice despu s de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del producto Cualesquiera condiciones de almacenamiento que no sean las especificadas deben ser verificadas por el usuario No existe ning n signo evidente que indique la inestabilidad de este producto por lo tanto deber n realizarse simult neamente controles positivos y negativos con las muestras de pacientes Preparaci n de las muestras El fijador recomendado para secc
57. er ikke medf lger Almindeligt immunhistokemisk laboratorieudstyr C Metodik F r brugere g r brug af denne metodik skal de v re uddannet i immunhistokemiske teknikker og brugen af kombinationen af Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K prim rt antistof dets fortynding sammen med detektionssystemet skal valideres af brugeren p en serie af kendte positive og negative kontroller Med mindre andet er anf rt skal alle trin udf res ved stuetemperatur 25 C F lgende trin skal udf res far inkubation med det prim re antistof 1 Vask objektglas i deioniseret vand 2 Inkub r med Proteinase K arbejdsopl sning se Proteinase K arbejdsopl sning i 5 minutter 3 Vask i TBS 4 Forts t med IHC protokol i henhold til producentens brugsanvisning til det prim re antistof og detektionssystemet Proteinase K arbejdsopl sning Tils t 40 pl Proteinase K Concentrate RE7126 til 6 ml Proteinase K Buffer RE7127 Fyld opl sningen i den medf lgende dr bet llerflaske Arbejdsopl sningen er stabil i op til 3 m neder ved opbevaring ved 2 8 C Kvalitetskontrol Forskelle i v vsbehandling og tekniske procedurer i brugerens laboratorium kan medf re en signifikant variation i resultaterne der n dvendigg r regelm ssig udf relse af interne kontroller foruden f lgende procedurer Kontrollerne skal v re autopsi biopsi kirurgiske pr ver der formalin fikseres behandles og paraffinvoks indst bes s hurtigt som muligt p samme m de so
58. eua BIOSYSTEMS Novocastra Enzyme Proteinase K IHC Product Code RE7160 K Leica Biosystems Newcastle Ltd Balliol Business Park West as Benton Lane Newcastle Upon Tyne NE 12 8EW United Kingdom C EN FR IT DE ES PT SV EL DA 44 191 215 4242 Instructions for Use Please read before using this product Mode d emploi lire avant d utiliser ce produit Istruzioni per L uso Si prega di leggere prima di usare il prodotto Gebrauchsanweisung Bitte vor der Verwendung dieses Produkts lesen Instrucciones de Uso Por favor leer antes de utilizar este producto Instru es de Utiliza o Leia estas instru es antes de utilizar este produto Instruktioner vid Anv ndning Var god l s innan ni anv nder produkten Brugsanvisning L s venligst for produktet tages i brug Check the integrity of the packaging before use V rifier que le conditionnement est en bon tat avant l emploi Prima dell uso controllare l integrit della confezione Vor dem Gebrauch die Verpackung auf Unversehrtheit berpr fen Comprobar la integridad del envase antes de usarlo Verifique a integridade da embalagem antes de utilizar o produto Kontrollera att paketet r obrutet innan anv ndning
59. eventuel farvning eller frav r heraf skal suppleres med morfologiske unders gelser ved anvendelse af passende kontroller og skal evalueres af en kvalificeret patolog p baggrund af patientens kliniske historie og andre diagnostiske tests Procedureprincip Enzymforbehandling af formalin fikserede paraffin indlejrede v vssnit forbedrer farvningen af nogle antistoffer ved at eksponere epitoper i v v der er blevet skjult under fiksering Det f rste proteolytiske enzym der blev anvendt til epitopgenfinding var trypsin 1 Andre proteolytiske enzymer der kan anvendes til dette form l indbefatter Protease XXIV og pepsin For nyligt er ogs blevet anvendt proteinase K der er almindeligt anvendt i in situ hybridiseringsteknikker Dette produkt anvendes i en IHC procedure der bner mulighed for kvalitativ identifikation ved lysmikroskopi af antigener i snit af formalin fikseret paraffin indlejret v v ved anvendelse af sekventielle trin med mellemliggende vasketrin for oplysninger om procedureprincippet for IHC farvning henvises til brugsanvisningen til det anvendte detektionssystem Epitopgenfinding ved hj lp af enzymatisk forbehandling anbefales til et begr nset antal af antistoffer se prim rt antistof Anbefalinger for anvendelse Optimale betingelser for epitopgenfinding skal valideres af brugeren da disse afh nger af v v fiksering og eller prim rt antistof Medf lgende reagenser 1 Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 0
60. gli aerosol Contiene e Proteinase K respiratorie se inalato P285 In caso di ventilazione insufficiente utilizzare un lt 10 apparecchio respiratorio GHS08 Pericolo per la salute P304 341 IN CASO DI INALAZIONE se la respirazione Avvertenze Pericolo difficile trasportare l infortunato all aria aperta e mantenerlo a riposo in posizione che favorisca la respirazione P342 311 In caso di sintomi respiratori contattare un CENTRO ANTIVELENI o un medico P501 Smaltire il prodotto recipiente in un punto di raccolta rifiuti pericolosi o speciali Una scheda di sicurezza del prodotto MSDS disponibile su richiesta o dal sito www LeicaBiosystems com Per Uso Professionale Prima e dopo la fissazione i campioni biologici e tutti i materiali ad essi esposti vanno trattati come potenzialmente infettanti e smaltiti con le appropriate precauzioni Non pipettare i reagenti con la bocca ed evitare il contatto dei reagenti e dei campioni biologici con la pelle e con le mucose Se i reagenti o i campioni biologici vengono a contatto con zone sensibili sciacquare abbondantemente le parti interessate Fare riferimento alla normativa federale statale o locale per lo smaltimento dei componenti potenzialmente tossici RE7160 K Page 8 Ridurre al minimo la contaminazione microbica dei reagenti allo scopo di evitare un aumento di colorazione aspecifica Tempi o temperature d incubazione diversi da quelli specificati possono condurre a
61. histochemical comparison of seven monoclonal and three polyclonal antibodies Progress in Surgical Pathology 6 1 15 eds Fenoglio Preiser C Wolff CM Rilke F Field amp Wood Inc Philadelphia 5 Nadji M Morales AR Immunoperoxidase part I the techniques and pitfalls Laboratory Medicine 1983 14 767 6 Mount SL Cooper K Beware of biotin a source of false positive immunohistochemistry Current Diagnostic Pathology 2001 7 161 167 7 Omata M Liew CT Ashcavai M Peters RL Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen a possible source of error in immunohistochemistry American Journal of Clinical Pathology 1980 73 626 17 2015 RE7160 K Page 25 Novocastra Enzyme Proteinase K IHC Produktnummer RE7160 K Tilsigtet anvendelse Til in vitro diagnostisk anvendelse Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC er beregnet til enzymatisk forbehandling af formalin fikserede paraffin indlejrede veevssnit for inkubation med et prim rt antistof i en immunhistokemisk IHC procedure Dette produkt kan anvendes til epitopgenfinding med NovocastraTM antistoffer hvortil trypsin anbefales Kendte undtagelser til dette er NCL BrdU NCL CYCLIN D1 NCL COLL Ilp og NCL CVCLIN D1 GM Den kliniske tolkning af en
62. histochemistry Current Diagnostic Pathology 2001 7 161 167 7 Omata M Liew CT Ashcavai M Peters RL Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen a possible source of error in immunohistochemistry American Journal of Clinical Pathology 1980 73 626 Emendas da edic o anterior Avisos e precau es Data de emiss o 17 de Fevereiro de 2015 RE7160 K Page 19 Novocastra Enzyme Proteinase K IHC Produktnr RE7160 K Avsedd anv ndning F r in vitro diagnostisk anv ndning Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K r avsedd f r enzymatisk f rbehandling av formalinfixerade paraffininb ddade vavnadssnitt fore inkubation med en primar antikropp i en immunhistokemisk IHC procedur Denna produkt kan anv ndas f r epitop tervinning med Novocastra antikroppar f r vilka rekommenderas trypsin k nda undantag r NCL BrdU NCL CYCLIN D1 NCL COLL Ilp and NCL CYCLIN D1 GM Den kliniska tolkningen av all f rgning eller dess fr nvaro b r kompletteras med morfologiska unders kningar som anv nder korrekta kontroller och utv rderas av kvalificerad patolog inom ramen f r patientens kliniska anamnes och andra diagnostiska tester Metodens princip Enzymf rbehandling av formalinfixerade paraffininb ddade vavnadssnitt f rb ttrar fargningen av vissa antikroppar genom att exponera epitoperna inom v vnaden som har maskerats vid fixering Den f rsta proteolytiska enzymen som anv nde
63. ion saline tamponn e de Tris surfactant et ProClin 950 0 35 3 Flacon compte gouttes vide Reconstitution M lange Dilution Titrage Le Novocastra Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 K n cessite une dilution dans le Proteinase K Buffer RE7127 pour pr parer une solution de travail voir Solution de travail de Prot inase K Toute modification de ce type doit tre valid e par l utilisateur Une dilution suppl mentaire est susceptible de se traduire par une perte de marquage des antig nes Toute modification de ce type doit tre valid e par l utilisateur Conservation et Stabilit Conserver 2 8 C Ne pas congeler Remettre imm diatement 2 8 C apr s utilisation Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur l tiquette du produit Les conditions de conservation autres que celles qui sont sp cifi es doivent faire l objet d une v rification par l utilisateur Il n existe aucun signe visible susceptible de signaler une instabilit de ce produit par cons quent des contr les positif et n gatif doivent tre trait s en m me temps que les chantillons du patient Pr paration des sp cimens Le fixateur recommand est le formol 1096 tamponn neutre pour coupes tissulaires incluses en paraffine Mises en garde et Pr cautions ENZYME PROTEINASE K H334 Peut provoquer des P261 viter de respirer les poussi res fum es gaz CONCENTRATE sympt mes allergiques ou d asthme brouillards va
64. iones de tejido incluidas en parafina es formol tamponado neutro al 10 Advertencias y precauciones ENZYME PROTEINASE K H334 Puede provocar s ntomas P261 Evitar respirar el polvo el humo el gas la niebla los CONCENTRATE de alergia o asma o dificultades vapores el aerosol Contiene y Proteinase K respiratorias en caso de inhalaci n P285 En caso de ventilaci n insuficiente llevar equipo de lt 10 protecci n respiratoria GHS08 Peligro para la salud P304 341 EN CASO DE INHALACI N Si respira con Palabras de advertencia dificultad transportar a la v ctima al exterior y mantenerla Peligro en reposo en una posici n confortable para respirar P342 311 En caso de s ntomas respiratorios Llamar a un CENTRO DE INFORMACI N TOXICOL GICA o a un m dico P501 Eliminar el contenido el recipiente en un punto de recogida p blica de residuos especiales o peligrosos Est disponible una Hoja de informaci n sobre la seguridad del material previa petici n o en www LeicaBiosystems com Para usuarios profesionales Las muestras antes y despu s de ser fijadas as como todos los materiales expuestos a ellas deben manipularse como capaces de transmitir una infecci n y deber n eliminarse tomando las precauciones adecuadas No pipetee nunca los reactivos con la boca y evite el contacto de la piel y de las membranas mucosas con los reactivos y las muestras Si los reactivos o las muestras entran en contacto con zonas sensibles la
65. ity of this product therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient samples Specimen Preparation The recommended fixative is 10 neutral buffered formalin for paraffin embedded tissue sections Warnings and Precautions ENZYME PROTEINASE K H334 May cause allergy or asthma P261 Avoid breathing dust fumes gas mist vapours spray CONCENTRATE symptoms or breathing difficulties P285 In case of inadequate ventilation wear respiratory Contains Proteinase K lt 10 if inhaled protection GHS08 Health hazard P304 341 IF INHALED If breathing is difficult remove Signal words Danger victim to fresh air and keep at rest in a position comfortable for breathing P342 311 If experiencing respiratory symptoms Call a POISON CENTRE or doctor P501 Dispose of contents container to hazardous or special waste collection point A Material Safety Data Sheet is available upon request or available from www LeicaBiosystems com For Professional Users Specimens before and after fixation and all materials exposed to them should be handled as if capable of transmitting infection and disposed of with proper precautions Never pipette reagents by mouth and avoid contacting the skin and mucous membranes with reagents and specimens If reagents or specimens come in contact with sensitive areas wash with copious amounts of water Consult Federal State or local regulations for disposal of any potentially toxic
66. ive identification by light microscopy of antigens in sections of formalin fixed paraffin embedded tissue via sequential steps with interposed washing steps for IHC staining Principle of Procedure see appropriate detection system Instructions for Use Epitope retrieval by enzymatic pretreatment is recommended for a limited number of antibodies see primary antibody Recommendations on Use Optimum conditions for epitope retrieval should be validated by the user as these are dependant upon tissue fixation and or primary antibody Reagents Provided 1 Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 0 75 mL Enzyme in 40 v v glycerol containing 10 mM Tris HCl pH 7 5 with 1 mM calcium acetate 2 Enzyme Proteinase K Buffer RE7127 100 mL Tris buffered saline surfactant and 0 35 ProClin 950 3 Empty dropper bottle Reconstitution Mixing Dilution Titration Novocastra Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 K requires dilution in the Proteinase K Buffer RE7127 to prepare a working solution see Proteinase K Working Solution The user must validate any such change Further dilution may result in loss of antigen staining The user must validate any such change Storage and Stability Store at 2 8 C Do not freeze Return to 2 8 C immediately after use Do not use after expiration date indicated on the product label Storage conditions other than those specified must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instabil
67. le Materialien die mit ihnen in Kontakt gekommen sind als potentiell infekti s zu behandeln und daher mit entsprechender Vorsicht zu entsorgen Reagenzien d rfen niemals mit dem Mund pipettiert werden und jeglicher Kontakt der Reagenzien und Proben mit Haut und Schleimh uten ist zu vermeiden Falls Reagenzien oder Proben mit empfindlichen Bereichen in Kontakt gekommen sind m ssen diese mit reichlich Wasser gesp lt werden Die entsprechenden nationalen und lokalen Bestimmungen und Vorschriften zur Entsorgung potentiell giftiger Komponenten sind einzuhalten RE7160 K Page 11 Die mikrobielle Verunreinigung von Reagenzien ist zu minimieren da ansonsten eine erh hte unspezifische F rbung auftreten kann Falls die spezifizierten Inkubationszeiten oder temperaturen nicht eingehalten werden kann es zu fehlerhaften Ergebnissen kommen Jegliche Abweichungen von den angegebenen Werten m ssen vom Benutzer verifiziert werden Verfahren A Zus tzlich ben tigte aber nicht mitgelieferte Reagenzien Siehe Gebrauchsanweisungen des prim ren Antik rpers B Zus tzlich ben tigte aber nicht mitgelieferte Ausriistung 1 Allgemeine immunhistochemische Laborausstattung C Vorgehensweise Vor Anwendung dieser Vorgehensweise m ssen die Benutzer mit immunhistochemischen Techniken vertraut sein Die Kombination aus Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K dem prim ren Antik rper und seiner Verd nnung zusammen mit dem Nachweissystem ist vom Benut
68. les bajos de degradaci n del reactivo 4 En cuanto al tejido de control positivo recomendado vea las Instrucciones de uso del anticuerpo primario Si el tejido de control positivo no muestra tinci n positiva los resultados de las muestras analizadas deben considerarse no v lidos Control tisular negativo Debe examinarse despu s del control de tejido positivo a fin de verificar la especificidad del marcado del ant geno diana por el anticuerpo primario En cuanto al tejido de control negativo recomendado vea las instrucciones de uso del anticuerpo primario Como alternativa la variedad de diferentes tipos de c lulas presentes en la mayor a de las secciones de tejido ofrece con frecuencia lugares de control negativo pero esto debe ser verificado por el usuario Si aparece tinci n no espec fica tiene generalmente aspecto difuso En secciones de tejido fijado excesivamente en formol puede observarse tambi n tinci n espor dica del tejido conectivo Utilice c lulas intactas para la interpretaci n de los resultados de la tinci n A menudo las c lulas necr ticas o degeneradas quedan te idas de forma no espec fica Tambi n pueden observarse falsos positivos causados por la uni n no inmunol gica de prote nas o de productos de reacci n del sustrato Estos falsos positivos pueden estar causados tambi n por enzimas end genas tales como la pseudoperoxidasa eritrocitos la peroxidasa end gena citocromo C o la biotina end gena por eje
69. m patientpr ven patientpr verne Positiv v vskontrol Anvendes til visning af korrekt pr parerede v v og korrekte farvningsteknikker Der skal inkluderes n positiv v vskontrol for hvert s t af testbetingelser prim rt antistof i hver farvningsk rsel Et v v med svag positiv farvning er mere egnet end et v v med kraftig positiv farvning til optimal kvalitetskontrol og til detektion af mindre grader af reagensdegradering For oplysninger om anbefalet positivt kontrolv v henvises til brugsanvisningen til det prim re antistof Hvis den positive v vskontrol ikke viser positiv farvning b r resultaterne fra patientpr verne betragtes som ugyldige Negativ v vskontrol Skal unders ges efter den positive v vskontrol for at verificere specificiteten af m rkningen af m lantigenet ved hj lp af det prim re antistof For oplysninger om anbefalet negativt kontrolv v henvises til brugsanvisningen til det prim re antistof Alternativt giver varieteten af forskellige celletyper der er til stede i de fleste v vssnit ofte negative kontrolsteder men dette b r verificeres af brugeren Hvis der forekommer uspecifik farvning har den ofte en diffus fremtoning Sporadisk farvning af bindev v kan ogs forekomme i snit fra kraftigt formalinfikserede v v Brug intakte celler til tolkning af farvningsresultater Nekrotiske eller degenererede celler farves ofte uspecifikt Falsk positive resultater kan forekomme p grund af ikke immunologisk bin
70. mplo de h gado mama cerebro o ri n Para diferenciar la actividad de las enzimas end genas o la uni n inespecifica de las enzimas de la inmunorreactividad espec fica pueden te irse otros tejidos del paciente exclusivamente con crom geno sustrato Streptavidin HRP o pol meros marcados y con crom geno sustrato respectivamente Si se produce tinci n espec fica del control tisular negativo los resultados de las muestras de los pacientes deben considerarse no v lidos Control de reactivo negativo Utilice un control de reactivo negativo no espec fico en lugar del anticuerpo primario con una secci n de cada muestra del paciente a fin de evaluar la tinci n no espec fica y obtener una mejor interpretaci n de la tinci n espec fica en el lugar en que se encuentra el ant geno Tejido del paciente Examine por ltimo las muestras de paciente te idas La intensidad de la tinci n positiva debe valorarse en el contexto de cualquier tinci n de fondo no espec fica del control de reactivo negativo Como con cualquier prueba inmunohistoqu mica un resultado negativo significa que no se ha detectado ant geno y no que el ant geno est ausente en las c lulas o tejido probados Si es necesario use un panel de anticuerpos para identificar falsas reacciones negativas RE7160 K Page 15 Limitaciones La inmunohistoqu mica es un proceso de diagn stico en varias fases que abarca formaci n especializada en la selecci n de los
71. n glicerolo 40 v v contenente 10 mM di Tris HCI a pH 7 5 con 1 mM di calcio acetato 2 Enzyme Proteinase K Buffer RE7127 100 ml Tampone Tris surfattante e 0 35 di ProClin 950 3 Flaconcino contagocce vuoto Ricostituzione miscelazione diluizione titolazione Novocastra M Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 K richiede la diluizione in Proteinase K Buffer RE7127 per la preparazione di una soluzione di lavoro vedere Soluzione di lavoro Proteinase K Tali eventuali variazioni devono essere convalidate dall utente L ulteriore diluizione potrebbe causare una perdita di colorazione dell antigene Tali eventuali variazioni devono essere convalidate dall utente Conservazione e stabilit Conservare a 2 8 C Non congelare Immediatamente dopo l uso riportare a 2 8 C Non usare dopo la data di scadenza indicata sull etichetta del prodotto Condizioni di conservazione diverse da quelle sopra specificate vanno verificate dall utente Non essendoci segni evidenti che indichino l instabilit del prodotto i controlli positivi e negativi vanno eseguiti in parallelo al test sui campioni del paziente Preparazione del campione biologico Il fissativo raccomandato la formalina tamponata neutra al 10 per sezioni tissutali incluse in paraffina Avvertenze e precauzioni ENZYME PROTEINASE K H334 Pu provocare sintomi P261 Evitare di respirare la polvere i fumi i gas la nebbia i CONCENTRATE allergici o asmatici o difficolt vapori
72. ng og forarbejdning pr parering af IHC objektglasset og tolkning af farvningsresultaterne V vsfarvning afh nger af h ndteringen og behandlingen af v vet f r farvningen Ukorrekt fiksering frysning opt ning vask t rring opvarmning sk ring eller kontaminering med andre v v eller v sker kan frembringe artefakter antistofindfangning eller falske negative resultater Inkonsekvente resultater kan skyldes variationer i fikserings og indst bningsmetoder eller iboende uregelm ssigheder i selve v vet Kraftig eller ufuldst ndig kontrastfarvning kan p virke en korrekt tolkning af resultaterne Den kliniske tolkning af en eventuel farvning eller frav r heraf skal suppleres med morfologiske unders gelser ved anvendelse af passende kontroller og skal evalueres af en kvalificeret patolog p baggrund af patientens kliniske historie og andre diagnostiske tests Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K er til anvendelse p paraffin indlejrede snit med specifikke fikseringskrav Ikke alle antigener kr ver epitopgenfinding Optimale betingelser for epitopgenfinding skal valideres af brugeren da disse afh nger af v v fiksering og eller prim rt antistof Uventet antigenekspression kan forekomme is r i neoplasmer Den kliniske tolkning af et farvet v vssnit skal inkludere en morfologisk analyse og en evaluering af passende kontroller RE7160 K Page 27 Ydeevne egenskaber Ydeevnen for Novocastra M Enzyme Proteinase K IH
73. ntrappolamento trapping anticorpale o risultati alsamente negativi Risultati incompatibili possono essere dovuti a modifiche dei metodi di fissazione e di inclusione o ad irregolarit intrinseche al tessuto Una controcolorazione eccessiva o incompleta pu compromettere la corretta interpretazione dei risultati L interpretazione clinica di ogni colorazione o della sua assenza va integrata da studi morfologici che utilizzino i controlli appropriati e deve essere valutata da un patologo qualificato nel contesto della storia clinica del paziente e delle altre metodiche diagnostiche adoperate Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K destinato all uso su sezioni tissutali incluse in paraffina con specifici requisiti di fissazione Non tutti gli antigeni richiedono smascheramento degli epitopi Le condizioni ottimali per lo smascheramento degli epitopi vanno convalidate dall utente poich dipendono dal tessuto dalla fissazione e o dall anticorpo primario Un espressione antigenica inattesa pu manifestarsi in particolare nelle neoplasie L interpretazione clinica di ogni sezione tissutale colorata deve includere l analisi morfologica e la valutazione dei controlli appropriati Caratteristiche di rendimento Il rendimento di Novocastra Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K stato convalidato utilizzando anticorpi primari Novocastra M per i quali la tripsina la tecnica di smascheramento raccomandata Il prodotto stabile fin
74. o pode P261 Evitar respirar as poeiras fumos gases n voas CONCENTRATE provocar sintomas de alergia ou de vapores aeross is Cont m e Proteinase K asma ou dificuldades respirat rias P285 Em caso de ventila o inadequada usar protec o lt 10 respirat ria GHS08 Perigo para a sa de P304 341 EM CASO DE INALA O em caso de Palavras sinal Perigo dificuldade respirat ria retirar a v tima para uma zona ao ar livre e mant la em repouso numa posi o que n o dificulte a respira o P342 311 Em caso de sintomas respirat rios contacte um CENTRO DE INFORMA O ANTIVENENOS ou um m dico P501 Eliminar o conte do recipiente em um local autorizado para a recolha de res duos perigosos ou especiais Encontra se dispon vel uma Ficha de Dados de Seguran a do Material mediante pedido ou atrav s do site www LeicaBiosystems com RE7160 K Page 17 Apenas para utilizadores profissionais As amostras antes e depois da sua fixa o bem como todos os materiais expostos s mesmas devem ser processados tal como se tivessem a capacidade de transmitir infec es e devem ser descartados com as devidas precau es Nunca pipetar os reagentes com a boca e evitar o contacto da pele e membranas mucosas com os reagentes e amostras Caso os reagentes ou amostras entrem em contacto com reas sens veis lavar com grandes quantidades de gua Consultar a legisla o nacional ou europeia em rela o ao descarte de quaisque
75. o alla data di scadenza indicata sull etichetta Riferimenti bibliografici 1 Huang SN Minassian H and More JD Application of immunofluorescent staining on paraffin sections improved by trypsin digestion Laboratory Investigations 1976 Oct 35 4 383 390 2 Bancroft JD and Stevens A Theory and Practice of Histological Techniques 4th Edition Churchill Livingstone New York 1996 3 National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue proposed guideline Villanova P A 1991 7 9 Order code M29 P 4 Battifora H Diagnostic uses of antibodies to keratins a review and immunohistochemical comparison of seven monoclonal and three polyclonal antibodies Progress in Surgical Pathology 6 1 15 eds Fenoglio Preiser C Wolff CM Rilke F Field amp Wood Inc Philadelphia 5 Nadji M Morales AR Immunoperoxidase part I the techniques and pitfalls Laboratory Medicine 1983 14 767 6 Mount SL Cooper K Beware of biotin a source of false positive immunohistochemistry Current Diagnostic Pathology 2001 7 161 167 7 Omata M Liew CT Ashcavai M Peters RL Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen a possible source of error in immunohistochemistry American Journal of Clinical Pathology 1980 73 626 Modifiche alla pubblicazione precedente Non applicabile Data di pubblicazione 17 febbraio 2015
76. o keratins a review and immunohistochemical comparison of seven monoclonal and three polyclonal antibodies Progress in Surgical Pathology 6 1 15 eds Fenoglio Preiser C Wolff CM Rilke F Field amp Wood Inc Philadelphia 5 Nadji M Morales AR Immunoperoxidase part I the techniques and pitfalls Laboratory Medicine 1983 14 767 6 Mount SL Cooper K Beware of biotin a source of false positive immunohistochemistry Current Diagnostic Pathology 2001 7 161 167 7 Omata M Liew CT Ashcavai M Peters RL Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen a possible source of error in immunohistochemistry American Journal of Clinical Pathology 1980 73 626 nderungen zur vorhergehenden Ausgabe Warnhinweise und Sicherheitsma nahmen Ausgabedatum 17 Februar 2015 RE7160 K Page 13 Novocastra Enzyme Proteinase K IHC Referencia RE7160 K Indicaciones de uso Para uso diagn stico in vitro El producto Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K est indicado para el tratamiento enzim tico de secciones de tejido fijadas con formol e incluidos en parafina antes de la incubaci n con un anticuerpo primario en un proceso inmunohistoqu mico Este producto se puede usar para recuperar los epitopos con anticuerpos Novocastra M para los que se recomienda tripsina excepciones conocidas a esta circunstancia son NCL BrdU NCL CYCLIN D1 NCL COLL IIp y NCL CYCLIN D1 GM La interpretaci n
77. ody Unexpected antigen expression may occur especially in neoplasms The clinical interpretation of any stained tissue section must include morphological analysis and the evaluation of appropriate controls Performance Characteristics The performance of Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K has been validated using Novocastra M primary antibodies for which trypsin is the recommended retrieval technique This product is stable up to the expiry date indicated on the product label RE7160 K Page 3 Bibliography 1 Huang SN Minassian H and More JD Application of immunofluorescent staining on paraffin sections improved by trypsin digestion Laboratory Investigations 1976 Oct 35 4 383 390 Bancroft JD and Stevens A Theory and Practice of Histological Techniques 4th Edition Churchill Livingstone New York 1996 National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue proposed guideline Villanova P A 1991 7 9 Order code M29 P Battifora H Diagnostic uses of antibodies to keratins a review and immunohistochemical comparison of seven monoclonal and three polyclonal antibodies Progress in Surgical Pathology 6 1 15 eds Fenoglio Preiser C Wolff CM Rilke F Field amp Wood Inc Philadelphia Nadji M Morales AR Immunoperoxidase part I the techniques and pitfalls Laboratory Medicine 1983 14 767 Mount SL Cooper K Beware
78. of biotin a source of false positive immunohistochemistry Current Diagnostic Pathology 2001 7 161 167 Omata M Liew CT Ashcavai M Peters RL Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen a possible source of error in immunohistochemistry American Journal of Clinical Pathology 1980 73 626 Amendments to Previous Issue Warnings and Precautions Date of Issue 17 February 2015 RE7160 K Page 4 Novocastra Enzyme Proteinase K IHC R f rence du produit RE7160 K Utilisation pr vue Diagnostic in vitro Le Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K est destin au pr traitement enzymatique des coupes tissulaires fix es au formol incluses en paraffine avant incubation avec un anticorps primaire dans le cadre d une proc dure immunohistochimique IHC Ce produit peut tre utilis pour la restauration des pitopes avec les anticorps Novocastra pour lesquels la trypsine est recommand e l exception de NCL BrdU NCL CYCLIN D1 NCL COLL Ilp et NCL CYCLIN D1 GM L interpr tation clinique de tout marquage ou absence de marquage doit tre compl t e par des tudes morphologiques utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e par un pathologiste qualifi la lumi re des ant c dents cliniques du patient et d autres analyses diagnostiques Principe de la proc dure Le pr traitement enzymatique des coupes tissulaires fix es au formol incluses en paraffine am
79. one del tessuto e nelle tecniche in uso presso il laboratorio dell utente possono produrre una discrepanza significativa nei risultati rendendo necessaria la regolare esecuzione di controlli interni in aggiunta alle procedure descritte di seguito I controlli devono essere costituiti da campioni biologici freschi autoptici bioptici chirurgici e devono essere il piu rapidamente possibile fissati in formalina processati ed inclusi in paraffina allo stesso modo dei campioni biologici ottenuti dal paziente Controllo positivo del tessuto usato per indicare tessuti correttamente preparati e tecniche di colorazione appropriate Per ogni gruppo di condizioni del test anticorpo primario e per ogni ciclo di colorazione deve essere incluso un controllo positivo del tessuto Un tessuto a debole colorazione positiva pi adatto di uno a colorazione positiva intensa per un ottimale controllo qualit e per mettere in evidenza livelli inferiori di degradazione del reagente Per il tessuto raccomandato come controllo positivo vedere le Istruzioni per l uso per l anticorpo primario Se il controllo positivo del tessuto non dimostra colorazione positiva i risultati con i campioni biologici del test vanno considerati non validi Controllo negativo del tessuto Va esaminato dopo il controllo positivo per verificare la specificit della marcatura dell antigene bersaglio da parte dell anticorpo primario Per il tessuto raccomandato come controllo negativo vede
80. peurs a rosols Contient et Proteinase K ou des difficult s respiratoires par P285 Lorsque la ventilation du local est insuffisante porter lt 10 inhalation un quipement de protection respiratoire GHS08 Danger pour la sant P304 341 EN CAS D INHALATION s il y a difficult Mentions d avertissement respirer transporter la victime l ext rieur et la maintenir Danger au repos dans une position o elle peut confortablement respirer P342 311 En cas de sympt mes respiratoires appeler un CENTRE ANTIPOISON ou un m decin P501 liminer le contenu r cipient dans un centre de collecte des d chets dangereux ou sp ciaux Une Fiche de donn es de s curit est disponible sur demande ou sur le site www LeicaBiosystems com Pour Utilisateurs Professionnels Les sp cimens avant et apr s fixation ainsi que tous les mat riels ayant t en contact avec eux doivent tre manipul s comme s ils taient susceptibles de transmettre une infection et limin s conform ment aux pr cautions appropri es en vigueur Ne jamais pipeter les r actifs avec la bouche et viter de mettre en contact la peau et les muqueuses avec les r actifs et les sp cimens Rincer avec de grandes quantit s d eau en cas de contact des r actifs ou des sp cimens avec des zones sensibles Consulter les r glementations nationales r gionales ou locales en vigueur relatives l limination de tous les l ments potentiellement toxiques
81. procedimento O pr tratamento enzim tico de sec es de tecido fixadas em formol e envolvidas em parafina melhora o n vel de colora o de alguns anticorpos atrav s da exposi o de ep topos contidos no tecido os quais tinham permanecido dissimulados durante a fixa o A primeira enzima proteol tica empregada para a recupera o de ep topos foi a tripsina Outras enzimas proteol ticas que se podem empregar para este fim incluem a Protease XXIV e a Pepsina Mais recentemente tamb m se tem empregado a Proteinase K uma enzima normalmente utilizada em t cnicas de hibridiza o in situ Este produto utilizado em procedimentos de IHQ os quais permitem a identifica o qualitativa de ant genos por microscopia ptica em sec es de tecido fixado com formalina e envolvido em parafina atrav s de etapas sequenciais intercaladas com etapas de lavagem consultar as Instru es de utiliza o do sistema de detec o apropriado para obter informa es sobre o princ pio do procedimento da colora o IHQ Recomenda se a recupera o de ep topos por pr tratamento enzim tico para um n mero limitado de anticorpos consultar a sec o Recomenda es sobre a utiliza o para obter informa es sobre o anticorpo prim rio As condi es ideais para a recupera o de ep topos devem ser validadas pelo utilizador pois que tais condi es variam com os tecidos fixa o e ou anticorpo prim rio Reagentes fornecidos 1 Enzym
82. r componentes potencialmente t xicos Minimizar a contamina o microbiana dos reagentes para evitar a possibilidade do aumento da colora o n o espec fica Os per odos de incuba o ou temperaturas diferentes dos que foram especificados poder o dar azo a resultados errados Todas as altera es desse tipo devem ser validadas pelo utilizador Procedimento A Reagentes necess rios n o fornecidos Consultar as Instru es de utiliza o relativas ao anticorpo prim rio B Equipamento necess rio n o fornecido 1 Equipamento geral de laborat rio de imunohistoqu mica C Metodologia Antes de adoptar esta metodologia o utilizador deve receber forma o em t cnicas imunohistoqu micas e a utiliza o combinada de Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K do anticorpo prim rio e a sua dilui o juntamente com o sistema de detec o devem ser validados pelo utilizador numa s rie de controlos positivos e negativos j conhecidos A n o ser indica o em contr rio todas as etapas devem ser efectuadas temperatura ambiente 25 C Devem adoptar se as etapas que se seguem antes de se efectuar a incuba o com o anticorpo prim rio 1 Lavar as l minas em gua desionizada 2 Incubar com a solu o de trabalho de Proteinase K consultar Solu o de trabalho de Proteinase K durante 5 minutos 3 Lavar em TBS 4 Continuar a efectuar o protocolo IHQ em conformidade com as instru es de utiliza o emitidas pelo fa
83. ratory Standards NCCLS Protection of laboratory workers from infectious diseases transmitted by blood and tissue proposed guideline Villanova P A 1991 7 9 Order code M29 P Battifora H Diagnostic uses of antibodies to keratins a review and immunohistochemical comparison of seven monoclonal and three polyclonal antibodies Progress in Surgical Pathology 6 1 15 eds Fenoglio Preiser C Wolff CM Rilke F Field amp Wood Inc Philadelphia Nadji M Morales AR Immunoperoxidase part I the techniques and pitfalls Laboratory Medicine 1983 14 767 Mount SL Cooper K Beware of biotin a source of false positive immunohistochemistry Current Diagnostic Pathology 2001 7 161 167 Omata M Liew CT Ashcavai M Peters RL Nonimmunologic binding of horseradish peroxidase to hepatitis B surface antigen a possible source of error in immunohistochemistry American Journal of Clinical Pathology 1980 73 626 R ttelser av tidigare utgivning Varningar och f rsiktighets tg rder Utgivningsdatum 17 februari 2015 RE7160 K Page 22 Novocastra Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K in vitro To Novocastra Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K
84. re le Istruzioni per l uso per l anticorpo primario In alternativa la variet dei tipi cellulari presenti nella maggior parte delle sezioni tissutali offre spesso siti di controllo negativo ma questo va verificato dall utente La colorazione aspecifica se presente assume di solito aspetto diffuso La colorazione sporadica del tessuto connettivo pu anche manifestarsi in seguito ad iperfissazione di sezioni di tessuto in formalina Per l interpretazione dei risultati della colorazione usare cellule intatte Le cellule necrotiche o degenerate si colorano spesso in maniera aspecifica Si possono osservare risultati falsamente positivi dovuti a legame non immunologico delle proteine o a prodotti di reazione del substrato Tali falsi positivi possono essere anche causati da enzimi endogeni quali la pseudoperossidasi eritrociti la perossidasi endogena citocromo C o la biotina endogenaf es fegato mammella cervello rene Per differenziare l attivit enzimatica endogena o il legame enzimatico aspecifico dall immunoreattivit specifica possono essere colorati ulteriori tessuti del paziente esclusivamente e rispettivamente con substrato cromogeno con Streptavidin HRP o con polimero marcato e substrato cromogeno Se nel controllo negativo del tessuto compare una colorazione specifica i risultati sui campioni biologici ottenuti dal paziente devono essere considerati non validi Controllo negativo del reagente Usare un controllo negativo aspecifico
85. risultati non veritieri Tali eventuali variazioni devono essere convalidate dall utente Procedura A Reagenti necessari ma non forniti Vedere le Istruzioni per l uso per l anticorpo primario B Attrezzature necessarie ma non fornite 1 Attrezzatura di base del laboratorio di immunoistochimica C Metodologia Prima di intraprendere questa metodologia l utente deve aver acquisito esperienza con le tecniche immunoistochimiche e l uso in combinazione di Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K dell anticorpo primario la sua diluizione assieme al sistema di determinazione vanno convalidati dall utente su una serie di controlli positivi e negativi noti Se non indicato diversamente tutte le fasi vanno condotte a temperatura ambiente 25 C Effettuare le seguenti operazioni prima dell incubazione con l anticorpo primario 1 Lavarei vetrini con acqua deionizzata 2 Incubare con soluzione di lavoro Proteinase K vedere Soluzione di lavoro Proteinase K per 5 minuti 3 Lavare in TBS 4 Procedere con il protocollo IHC seguendo le istruzioni per l uso del fabbricante per l anticorpo primario e per il sistema di determinazione Soluzione di lavoro Proteinase K Aggiungere 40 di Proteinase K Concentrate RE7126 a 6 ml di Proteinase K Buffer RE7127 Caricare la soluzione nel flaconcino contagocce fornito La soluzione di lavoro rimane stabile fino a 3 mesi se conservata a 2 8 C Controllo qualit Differenze nella processazi
86. rps primaire Si le tissu de contr le positif ne pr sente pas de marquage positif les r sultats des sp cimens analys s doivent tre consid r s comme invalides Tissu de contr le n gatif Il doit tre examin apr s le tissu de contr le positif afin de v rifier la sp cificit du marquage de l antig ne cible par l anticorps primaire Pour le tissu de contr le n gatif recommand voir le Mode d emploi de l anticorps primaire Sinon la diversit des types cellulaires pr sents dans la plupart des tissus permet de disposer fr quemment de sites de contr le n gatif mais ils doivent tre v rifi s par l utilisateur S il est pr sent le marquage non sp cifique prend habituellement une apparence diffuse Un marquage sporadique du tissu conjonctif peut galement tre observ sur des coupes de tissus qui ont t fix es par un exc s de formol Utiliser des cellules intactes pour l interpr tation des r sultats du marquage Les cellules n crotiques ou d g n r es sont souvent marqu es de fa on non sp cifique Des r sultats faussement positifs peuvent tre observ s en raison d une liaison non immunologique des prot ines ou des produits de r action du substrat Ils peuvent galement tre provoqu s par des enzymes endog nes comme la pseudoperoxydase rythrocytes la peroxydase endog ne cytochrome C ou la biotine endog ne foie sein cerveau rein par exemple Pour diff rencier l activit des enzymes
87. s f r epitop tervinning var trvpsin Andra proteolytiska enzymer som kan anv ndas i detta ndam l omfattar Protease XXIV och Pepsin P senare tid har Proteinase K som vanligtvis anv nds f r in situ hybridiseringstekniker ocks anv nts Denna produkt anv nds i en IHC procedurer som till ter kvalitativ identifikation med Ijusmikroskopi av antigener i sektioner av formalinfixerad paraffininb ddad v vnad via sekvenssteg med inlagda tv ttsteg f r IHC f rgning Metodens princip se Instruktioner vid anv ndning f r l mpligt detektionssystem Epitop tervinning genom enzymatisk f rbehandling rekommenderas f r ett begr nsat antal antikroppar se prim ra antikroppar Rekommendationer vid anv ndning Optimala f rh llanden f r epitop tervinning b r kontrolleras av anv ndaren eftersom dessa beror p v vnad fixering och eller prim r antikropp Tillhandah llna reagens 1 Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 0 75 ml Enzym i 40 v v glycerol inneh llande 10 mM Tris HCI pH 7 5 med 1 mM kalcium acetat 2 Enzyme Proteinase K Buffer RE7127 100 ml Trisbuffrad koksaltl sning med ytaktivt medel och 0 35 ProClin 950 3 Tom pipettflaska Rekonstitution blandning sp dning titrering Novocastra M Enzyme Proteinase K Concentrate RE7126 K kr ver sp dning i Proteinase K Buffer RE7127 f r att bereda en arbetsl sning se Proteinase K bruksl sning Anv ndaren m ste kontrollera s dana f r ndringar Fortsatt
88. t that the antigen was absent in the cells tissue assayed If necessary use a panel of antibodies to identify false negative reactions Limitations Immunohistochemistry is a multistep diagnostic process that consists of specialized training in the selection of the appropriate reagents tissue selection fixation and processing preparation of the IHC slide and interpretation of the staining results Tissue staining is dependent on the handling and processing of the tissue prior to staining Improper fixation freezing thawing washing drying heating sectioning or contamination with other tissues or fluids may produce artifacts antibody trapping or false negative results Inconsistent results may be due to variations in fixation and embedding methods or to inherent irregularities within the tissue Excessive or incomplete counterstaining may compromise proper interpretation of results The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K is for use on paraffin embedded sections with specific fixation requirements Not all antigens require epitope retrieval Optimum conditions for epitope retrieval should be validated by the user as these are dependant upon tissue fixation and or primary antib
89. tglasen i avjoniserat vatten 2 Inkubera med Proteinase K bruksl sning se Proteinase K bruksl sning i 5 minuter 3 Tv tta i TBS 4 Forts tt med IHC protokoll enligt tillverkarens instruktioner f r Anv ndning av prim r antikropp och detektionssystem Proteinase K bruksl sning Tills tt 40ul Proteinase K Concentrate RE7126 till 6ml Proteinase K Buffer RE7127 Ladda l sningen i pipettflaskan som medf ljer Bruksl sningen h ller sig stabil i upp till 3 m nader om den f rvaras vid 2 8 C Kvalitetskontroll Skillnader i vavnadsbehandling och tekniska metoder i anv ndarens laboratorium kan ge stor variation i resultaten vilket kan g ra det n dv ndigt att genomf ra regelbundna interna kontroller ut ver f ljande metoder Kontroller b r vara f rska obduktions biopsi kirurgiprover som snarast m jligt formalinfixeras bearbetas och paraffininb ddas p samma s tt som patientprover Positiv v vnadskontroll Anv nds f r att ange korrekt f rberedda v vnader och r tt f rgningstekniker En positiv v vnadskontroll b r ing i varje upps ttning av testf rh llanden prim r antikropp vid varje f rgningsk rning En v vnad med svag positiv f rgning r mer passande f r optimal kvalitetskontroll och f r att uppt cka l ga niv er av reagensdegradering n en v vnad med stark positiv f rgning F r rekommenderad positiv kontrollv vnad se prim r antikropp Instruktioner vid anv ndning Om den positiva v vnadskontroll
90. tyra korrekt tolkning av resultat Den kliniska tolkningen av all f rgning eller dess fr nvaro b r kompletteras med morfologiska unders kningar som anv nder korrekta kontroller och utv rderas av kvalificerad patolog inom ramen f r patientens kliniska anamnes och andra diagnostiska tester Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K r avsedd att anv ndas p paraffininb ddade sektioner med specifika fixeringskrav Det r inte alla antigen som kr ver epitop tervinning Optimala f rh llanden f r epitop tervinning b r kontrolleras av anv ndaren eftersom dessa beror p vavnad fixering och eller primar antikropp Ov ntat antigenuttryck kan ske speciellt i neoplasmer Morfologisk analys och utv rdering av l mpliga kontroller m ste ing i den kliniska tolkningen av alla f rgade v vnadssnitt RE7160 K Page 21 Prestanda Novocastra M Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K prestanda har kontrollerats med Novocastra M prim ra antikroppar f r vilka trypsin r den rekommenderade tervinningstekniken Denna produkt r stabil fram till utg ngsdatumet p produktens etikett Bibliografi 1 Huang SN Minassian H and More JD Application of immunofluorescent staining on paraffin sections improved bv trvpsin digestion Laboratory Investigations 1976 Oct 35 4 383 390 Bancroft JD and Stevens A Theory and Practice of Histological Techniques 4th Edition Churchill Livingstone New York 1996 National Committee for Clinical Labo
91. ve stas con abundante agua Consulte las normativas nacionales estatales provinciales o municipales acerca de c mo desechar cualquier componente potencialmente t xico RE7160 K Page 14 Reduzca al m nimo la contaminaci n microbiana de los reactivos de lo contrario podr a producirse un aumento de la tinci n no espec fica Cualquier tiempo o temperatura de incubaci n que no sean los aqu especificadas pueden conducir a resultados err neos Cualquier cambio de tal naturaleza debe ser validado por el usuario Procedimiento A Reactivos necesarios que no se suministran Vea las Instrucciones de uso del anticuerpo primario B Equipo necesario que no se suministra Equipo de laboratorio utilizado generalmente para inmunohistoqu mica C Metodolog a Antes de utilizar esta metodolog a los usuarios deben haber recibido formaci n en t cnicas inmunohistoqu micas su uso junto con Enzyme Proteinase K IHC RE7160 K el anticuerpo primario su diluci n junto con el sistema de detecci n deber ser validado por el usuario en una serie de controles positivos y negativos conocidos A menos que se indique otra cosa todos los pasos se llevan a cabo a temperatura ambiente 25 C Antes de la incubaci n con el anticuerpo primario se deben ejecutar los pasos siguientes 1 Lave los portaobjetos en agua desionizada 2 Incube con la soluci n de trabajo de Proteinase K vea Soluci n de trabajo de Proteinase K durante 5 minutos 3
92. zer auf einer Reihe bekannter positiver und negativer Kontrollen zu validieren Sofern nicht anderweitig vorgegeben werden alle Schritte bei Raumtemperatur 25 C durchgef hrt Die folgenden Schritte sind vor der Inkubation mit dem prim ren Antik rper durchzuf hren 1 Die Objekttr ger unter entionisiertem Wasser absp len 2 Mit Proteinase K Arbeitsl sung siehe Proteinase K Arbeitsl sung 5 Minuten lang inkubieren 3 In TBS waschen 4 AnschlieRend mit dem IHC Protokoll gem R den Gebrauchsanweisungen des Herstellers f r den prim ren Antik rper und das Nachweissystem fortfahren Proteinase K Arbeitsl sung 40 uL Proteinase K Concentrate RE7126 zu 6 ml Proteinase K Buffer RE7127 hinzugeben Die L sung in die mitgelieferte Tropfflasche einf llen Die Arbeitsl sung bleibt bei Lagerung bei 2 8 C bis zu 3 Monate lang stabil Qualit tskontrolle Unterschiede bei der Gewebebearbeitung und den technischen Verfahren im Labor des Benutzers k nnen zu signifikanten Schwankungen bei den Ergebnissen f hren Daher ist es wichtig zus tzlich zu den folgenden Verfahren regelm ige laborinterne Kontrollen durchzuf hren Die Kontrollen sollten mit frischen Autopsie Biopsie chirurgischen Proben vorgenommen werden die so bald wie m glich und auf dieselbe Weise wie die Patientenprobe n in Formalin fixiert behandelt und in Paraffin eingebettet worden sind Positive Gewebekontrolle Zeigt korrekt vorbereitete Gewebe und korrekte F

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