Lymphatic Filariasis Bm14 Antibody CELISA
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1. celle du contr le n gatif cet chantillon contient des anticorps DECHETS Jetez tout composant inutilis dans la poubelle aux d chets biologiques Consultez la fiche de s curit du produit notice MSDS pour plus amples informations SENSIBILIT SPECIFICITE ET AUTRES DONNEES DU TEST Des donn es sur la performance du test Bm14 Antibody CELISA sont disponible aupr s de votre distributeur local ou en contactant Cellabs NOTICE D INDEMNITE Toute modification ou variation du protocole d amp mploi recommand peut affecter les performances annonc es du produit Un r sultat positif ou n gatif n xclue pas la pr sence d utres agents causatifs sous jacents Cellabs et ses agents et distributeurs ne sont l galement responsables d ucun dommage dans de telles circonstances FIGURE 1 Lymphatic Filariasis Bm14 Antibody CELISA DIAGRAM FOR USE Bring all components to RT Prepare WASH BUFFER Prepare working Sample buffer 1x FASD Add 100uL of onmo controt and SAMPLE to FAMW Incubate for 1 hour in a humid chamber at 37 C Wash 4x with WASH BUFFER Add 100uL CONJUGATE to each well Incubate 45 minutes in a humid chamber at 37 C Wash 4x with WASH BUFFER Add 100uL of SUBSTRATE to each well Incubate for 15 minutes in the dark at RT Add 100uL FASS to each well Read at 450 or 450 620nm EXPLANATION OF SYMBOLS EXPLICATION DES SYMBOLES pA Consult Instructions for Use Cellabs Pty Ltd Consultez le mode d am2. m contactez votre fournisseur local pour un remplacement Ne pas m langer les r actifs de coffrets diff rents Certains r actifs contiennent du Thimerosal comme pr servatif qui est un poison Manipulez ces r actifs avec soin La solution d rr t est corrosive Evitez tout contact avec la peau les yeux ou les membranes muqueuses Ajouter les r actifs en vitant tout risque de contamination crois e des puits Eviter d xposer le substrat la lumi re Les chantillons cliniques et les contr les doivent tre consid r s comme potentiellement infectieux infectieux et jet s selon les proc dures en vigueur Consultez la fiche de s curit du produit notice MSDS pour plus amples informations INSTRUCTIONS D EMPLOI Pr paration du tampon de lavage Si des cristaux apparaissent dans le concentr r chauffer le r actif pour les dissoudre Pour chaque plaque de micropuits ajouter 50mL de concentr PBS Tween FAPT a 950mL d au distill e Libeller la bouteille WASH BUFFERI Conserver 2 8 C Pr paration du r actif de dilution des chantillons Pr parer la dilution de travail du r actif de dilution des chantillons FASD 1x en diluant le concentr x10 avec de l amp au distill e M langer le tampon vigoureusement avant usage sur chantillons tester Pr paration des chantillons S rum ou plasma Collecter les sp cimens sanguins par ponction veineuse courante Le dosage peut se faire sur plasma ou s rum Conserv
3. 00 millions de personnes dans plus de 83 pays du monde Plus d n milliard de personnes risquent cette infection qui dans son stade chronique l phantiasis a de profondes cons quences physiques sociales et conomiques et repr sente la quatri me cause d andicap permanent au monde L radication de cette maladie par IMS est pr vue en l nn e 2020 gr ce un programme de chimioth rapie de masse CTM op r par les pays affect s en collaboration avec I Alliance Globale pour l amp limination de la Filariose Lymphatique AGEFL Afin de suivre l fficacit du programme d radication FL un nombre d utils diagnostics ont t employ s y compris la mesure de la microfilar mie et d ntig nes parasitaires par dosages immunologiques en formats rapides et ELISA Les anticorps sp cifiques lgG4 anti filariose ont galement t propos s comme marqueurs efficaces de l nterruption de la transmission FL en particulier chez les jeunes enfants La trousse Bm14 Antibody CELISA est un ELISA indirecte pour d tecter les anticorps IgG4 humains de l ntig ne recombinant Bm14 L sage d n anticorps monoclonal de d tection anti lgG4 augmente la sensibilit et la sp cificit du dosage Le test est con u pour usage sur chantillons de s rum ainsi que sur chantillons d lution de gouttes de sang sur papier filtre collect s sur le terrain PRINCIPE DU TEST ET INDICATIONS D EMPLOI Ce test est un ELISA indirecte pour d tecter les anticorps
4. CelLabs Lymphatic Filariasis Bm14 Antibody CELISA BACKGROUND Lymphatic filariasis LF caused by the filarial worm Wucheria bancroftii and transmitted through a mosquito vector affects more than 100 million people in more than 83 countries worldwide A further billion people are at risk from the infection which in its chronic stage elephantiasis has profound physical social and economic consequences and represents the world amp fourth leading cause of permanent disability The disease has been targeted by the WHO for eradication by the year 2020 through an international programme of mass drug administration MDA operated by affected countries in collaboration with the Global Alliance to Eliminate Lymphatic Filariasis GAELF To monitor the effectiveness of the LF eradication programme a number of diagnostic tools have been employed including microfilaremia quantitation and parasite antigen immunoassays both of the rapid and ELISA format Specific IgG4 anti filarial antibodies have also been proposed as an effective marker for interruption of LF transmission particularly in young children The Bm14 Antibody CELISA Kit is an indirect ELISA for the detection of human IgG4 antibodies to the filarial recombinant antigen Bm14 Added sensitivity and specificity result from the use of a monoclonal anti IgG4 indicator The test is designed to be used with serum samples as well as blood spot eluates collected on filter paper in the fi
5. IgG4specifiques Bm14 L anticorps est li par l ntig ne recombinant Bm14 fix sur la surface interne des puits de dosage Un anticorps anti IgG4 humain conjugu a la peroxydase est ajout et r agit avec I nticorps immobilis Un substrat chromog ne pour peroxydase est ajout Si l nticorps LF est pr sent une r action se produit conduisant au d veloppement d ne couleur bleue d ntensit proportionnelle au niveau d nticorps dans le s rum L ddition dain r actif d rr t change la couleur au jaune COMPOSITION DU COFFRET Plaque CELISA 1x96 puits usage unique 5 plaques conrro Contr le positif 0 05mL controt Contr le n gatif 0 05mL R actif de dilution des chantillons 10x 60mL FAPO Conjugu enzymatique 100x 0 6mL Diluant de conjugu enzymatique 60 mL PBS Tween 20x 250mL Substrat chromog ne TMB 20x 3 0mL Tampon du substrat 60mL FASS Solution d rr t 30mL Conserver tous les composants 2 8 C Les dates de p remption sont clairement marqu es sur chaque composant et sur le coffret de la trousse L uverture n lt re pas les dates de p remption MATERIELS REQUIS NON FOURNIS Micropipettes et embouts verrerie propre ou r cipients plastiques pour solutions eau distill e chambre humide laveur ELISA spectrophotom tre capable de lire 450 nm PRECAUTIONS Produit usage uniquement in vitro Ne pas utiliser apr s la date de p remption indiqu e sur l amp tiquette Si I amp mballage est ab
6. Lammie P Weil G Rahmah N et al 2004 Recombinant antigen based assay for the diagnosis and surveillance of lymphatic filariasis a multicenter trial Filaria Journal 3 9
7. cepted the controls must read as follows Negative Control Positive Control Note cut off value can be determined by testing a panel of known negative samples Cut off value mean 3 Standard Deviations 3SD A pilot study conducted in house with 50 blood spot eluates from Australian residents without prior exposure to LF gave a cut off of 0 25 OD units mean 3SD Visual Reading Results can also be read visually Note colour of the specimen wells and compare with the colour of the negative control If the colour read visually of a specimen well is above that of the negative control then the specimen contains antibody WASTE DISPOSAL Dispose of any unused components as biohazardous waste For more information please refer to the MSDS SENSITIVITY SPECIFICITY amp OTHER DATA ON THE BM14 ANTIBODY CELISA KIT Data on the Bm14 Antibody CELISA test performance can be obtained from your local distributor or by contacting Cellabs INDEMNITY NOTICE Modifications or changes made in the recommended procedure may affect the stated or implied claims A positive or negative result does not preclude the presence of other underlying causative agents Cellabs and its agents and distributors shall not be liable for damages under these circumstances Cellabs Lymphatic Filariasis Bm14 Antibody CELISA PREAMBULE L gent de la filariose lymphatique FL est la filaire Wucheria bancroftii qui est transmise par un moustique et qui infecte plus de 1
8. distributor and ask for a replacement Do not mix reagents from different kits Thimerosal preservative added to some components is a poison Exercise caution when handling these components The stopping solution is corrosive Avoid contact with skin eyes and mucous membranes Dispense all reagents with care to avoid cross contamination of wells Avoid exposure of the substrate to light Treat all clinical and control material as though potentially infectious and dispose of in accordance with local operating regulations For further information please refer to the Material Safety Data Sheet INSTRUCTIONS FOR USE Preparation of Wash Buffer If crystals are present warm the concentrate to dissolve For each microplate add 50mL PBS Tween concentrate FAPT to 950mL of distilled water Label the bottle WASH BUFFER Store at 2 8 C Preparation of Sample Diluent Prepare the working Sample Diluent FASD 1x by diluting the 10x Concentrate in distilled water Mix the buffer thoroughly before using to dilute test samples Preparation of Samples Serum or Plasma Collect patient blood samples by standard venipuncture procedure The test may be used with serum or plasma The serum or plasma should be stored below 10 C if the analysis is delayed Prepare a 1 100 dilution of the positive control como the negative control controL and the patient specimens using the prepared Sample Diluent 1x above ensuring proper mixing Record the position
9. e micropuits FFAMW Imm diatement refermer le sac contenant les micropuits restants avec du ruban adh sif Ajouter 100uL de SAMPLE de contro et de contro dans leurs micropuits individuels Inclure deux contr les positifs et deux contr les n gatifs dans chaque s rie de dosage Couvrir et incuber une 1 heure 37 C en chambre humide voir Pr paration des Echantillons Elution de gouttes de sang sur papier filtre Dans les 10 derni res minutes de Incubation pr parer la solution de travail de CONJUGATE Ajouter 10uL de Conjugu enzymatique FAPOI 990uL de FACD et m langer vigoureusement pr voir 1mL de solution de travail par barrette de 8 micropuits Laver les micropuits au laveur automatique ou manuellement comme suit Vider le contenu des micropuits Remplir les micropuits de WASH BUFFER R p ter l p ration trois 3 fois Vider le contenu des puits apr s le quatri me lavage NB op rez cette tape avec pr caution en serrant le cadre de la plaque micropuits pour viter quds ne s n d logent Ajouter 100uL de dans chaque puits Incuber 45 minutes 37 C en chambre humide Dans les 10 derni res minutes de Incubation pr parer la solution de travail de SUBSTRATE Ajouter 50uL de Substrat chromog ne FASC 950uL de Tampon de substrat FASB et m langer vigoureusement pr voir 1 mL de solution de travail par barrette de 8 micropuits Cette solution de travail est stable pendant 30 minu
10. eld INTENDED USE AND PRINCIPLE OF THE TEST This test is an indirect ELISA for the detection of Bm14 specific IgG4 antibody Antibody is bound by the recombinant antigen Bm14 coated on the inner surface of the test Strip Peroxidase conjugated antibody to human IgG4 is added and reacts with bound antibody A chromogenic substrate for peroxidase is added If antibody to LF is present there is a reaction which results in the development of a blue colour which is in proportion to the serum level of the antibody Addition of stopping solution changes the blue colour to yellow CONTENTS OF THE KIT 4 5 6 Celisa Plate i 1x96 wells single use only 5 plates contro Positive Control 0 05mL conrro Negative Control 0 05mL Sample Diluent 10x 60mL Enzyme Conjugate 100x 0 6mL Conjugate Diluent 60 mL FAPT PBS T ween 20x 250mL Substrate Chromogen TMB 20x 3 0mL Substrate Buffer 60mL FASS Stopping Solution 30mL Store all components at 2 8 C Expiry dates are clearly marked on each kit component and on the box Expiry dates do not change once opened MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED Micropipettes and tips clean glassware or plastic containers for solutions humid chamber ELISA washer and Spectrophotometer to read absorbances at a single wavelength of 450nm PRECAUTIONS For in vitro diagnostic use only Reagents should not be used after the expiry date shown on the label If protective packaging is damaged contact your local
11. er les chantillons de plasma ou s rum 10 C si l nalyse est retard e Pr parer une dilution au 1 100 du contr le positif coro du contr le n gatif coro et des chantillons patients l ide du r actif et bien m langer Rep rer la position des chantillons dilu s SAMPLE sur la feuille de travail Elution de gouttes de sang sur papier filtre L mploi du papier filtre TropBio format OMS est recommand Chaque cercle de papier filtre absorbe 10uL de sang Apres s chage temp rature ambiante les papiers filtres utilis s doivent tre conserv s 2 8 C court terme ou au cong lateur 20 C pour un stockage de plus longue dur e jusqu leur emploi Eluer les chantillons en retirant d licatement un cercle et en l mmergent dans un tube de 500uL de solution de travail de r actif de dilution des chantillons 1x Laisser les chantillons au r frig rateur 2 8 C durant la nuit Le lendemain agiter au vortex le contenu du tube d lution de I amp chantillon Cette lution est quivalente une dilution du s rum au 1 100 et peut tre utilis e dans la trousse Bm14 Antibody CELISA sans dilution suppl mentaire Mode D emploi Ramener tous les r actifs temp rature ambiante 18 25 C avant I amp mploi Pr parer le WASH BUFFER voir Pr paration du Tampon de Lavage Pr parer la solution de travail FASD 1x voir Pr paration du Reactif de Dilution des Echantillons Retirer le nombre requis d
12. of each diluted on a work sheet Blood Spot Eluates The recommended filter paper for use is the TropBio filter paper WHO format Each filter paper circle absorbs 10uL of blood Upon drying at room temperature the spotted blood circles should be stored at 2 8 C for short term storage and transportation or 20 C in a freezer for long term storage until ready for testing Prepare to elute the sample by carefully removing one circle and completely immersing in a tube of 500uL of prepared working Sample Diluent 1x Leave the samples refrigerated at 2 8 C overnight The following day vortex the contents of the tube to ensure complete elution of sample The eluate is equivalent to a 1 100 serum dilution and can be used in the Bm14 Antibody CELISA assay without further dilution Assay Procedure Bring all reagents to room temperature 18 25 C before use Prepare WASH BUFFER see Preparation of Wash Buffer Prepare the working Sample Diluent FASD 1x See Preparation of Sample Diluent Remove required number of FAMW strips Reseal the foil bag containing unused microwell strips immediately with tape Pipette 100uUL of the SAMPLE contro and contro into individual microwells Include two positive and two negatives in each assay run Cover and incubate for one 1 hour at 37 C in a humid chamber see Preparation of Samples using serum plasma or blood spot from filter paper In the last 10 minutes of the incubation period
13. p mploi Unit 7 27 Dale Street PO Box 421 In Vitro Diagnostic Medical Device Brookvale NSW 2100 Australia Diagnostic medical in vitro Tel 61 2 9905 0133 Fax 61 2 9905 6426 Temperature Limitation Web hitp www cellabs com au 8 C Limites de temperature Email sales cellabs com au 2 C LOT Batch WMDE Lot Ee rer Bergerweg 18 t 6085 AT Horn cono Coral Rositive The Netherlands Contr le positif CONTROL Control Negative Insert enl fr ENS Contr le n gatif Version vee e d mploi 6 March 2012 DS Use By Expiration Date Date de p remption 0843 Q Do Not Re use Ne pas r utiliser References 1 Weil GJ amp Ramzy RMR 2006 Diagnostic tools for filariasis elimination programs Trends Parasitol 23 78 82 2 Ramzy RMR Setouhy M El Helmy H et al 2006 Effect of yearly mass drug administration with diethylcarbamazine and albendazole on bancroftian filariasis in Egypt a comprehensive assessment Lancet 367 992 999 3 Ottesen EA Skvaril F Tripathy SP Poindexter RW Hussain R 1985 Prominence of IgG4 in the IgG antibody response to human Filariasis J Immunol 134 2707 2712 4 Chandrashekar R Curtis KC Ramzy RM et al 1994 Molecular cloning of Brugia malayi antigens for diagnosis of lymphatic filariasis Mol Biochem Parasitol 64 261 274 5 Ramzy RM Helmy H Faris R et al 1995 Evaluation of a recombinant antigen based antibody assay for diagnosis of bancroftian filariasis in Egypt Ann Trop Med Parasitol 89 443 446 6
14. prepare the working strength CONJUGATE Add 10uL of Enzyme Conjugate FAPO to 990uL of FACD and mix thoroughly allow 1mL per strip of 8 wells Wash the wells preferably using an automatic plate strip washer or manually as follows Empty contents from the wells Refill with the WASH BUFFER Repeat this process a further three 3 times After the fourth wash bang inverted wells dry on absorbent tissue NB take care when flicking out plates hold side of frame firmly to hold strips in place Add 100uL of CONJUGATE to each well Incubate for 45 minutes at 37 C in a humid chamber In the last 10 minutes of the incubation period prepare the working strength SUBSTRATE Add 50uL of Substrate Chromogen FASC to 950uL of Substrate Buffer FASB and mix thoroughly allow 1mL per strip of 8 wells The stability of the solution is 30 minutes Repeat washing as in step 7 Add 100uL of fresh and incubate in the dark covered at room temperature for 15 minutes Add 100uL of Stopping Solution FASS Tap the plate to mix Read the results visually or in a spectrophotometer at 450nm or 450 620 nm READING AND INTERPRETATION OF RESULTS AND DIAGNOSIS Photometrically It is optimal to use a dual beam ELISA reader Blank machine against the well designated as the blank Within 30 minutes of stopping the reaction read absorbance of all wells including all the controls at 450nm on an ELISA reader For the test results to be ac
15. tes R p ter le lavage comme tape 7 Ajouter 100uL de frais et incuber couvert bscurit pendant 15 minutes temp rature ambiante Ajouter 100uL de solution d rr t FASS Taper la plaque pour m langer Lire les r sultats visuellement ou au spectrophotometre 450nm ou 450 620nm LECTURE INTERPRETATION DES RESULTATS ET DIAGNOSTIC Lecture spectrophotom trique ll est pr f rable d tiliser un spectrophotom tre double longueur d nde Calibrer la machine contre un blanc d sign Lire l bsorbance de chaque puit y compris contr les dans un lecteur microplaque ELISA dans les 30 minutes suivant I ddition de la solution d rr t Pour tre valides les valeurs des contr les doivent tre comme suit Valeur D O 450 620 nm Contr le n gatif Contr le positif Note Un seuil discriminant peut tre d termin l aide d un groupe d chantillons n gatifs confirm s Seuil discriminant moyenne 3 D viations Standard 3 DS Une tude pilote effectu e par Cellabs sur 50 chantillons sanguins d lution sur papier filtre provenant de r sidents Australiens sans exposition pr alable FL a produit un seuil discriminant de 0 25 unit s DO moyenne 3 DS Lecture visuelle Les r sultats peuvent tre lus visuellement Observer l ntensit couleur des chantillons en comparaison celle du contr le n gatif Si un chantillon pr sente une couleur visuellement clairement sup rieure
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