Thymune [FR] - Thermo Scientific
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1. Les r actifs sont strictement contr l s pour assurer une bonne reproductibilit entre les lots Chaque lot d h maties test est pr par pour r agir vis vis d un panel de s rums contenant des taux d anticorps connus avec une tol rance maximale d une double dilution La reproductibilit de lot lot a t valu e en testant 12 chantillons trois occasions sur trois lots de r actifs Chaque chantillon donnait r guli rement le m me r sultat plus ou moins une double dilution d cart BIBLIOGRAPHIE Anderson J R Goudie R B et al 1959 The thyrotoxic complement fixation reaction Scot med J 4 64 2 Cayzer l Chalmers S R et al 1978 An evaluation of two new haemagglutination tests for the rapid diagnosis of autoimmune thyroid desease J Clin Path 31 1147 3 Doniach D 1975 Humoral and genetic aspects of thyroid autoimmunity Clinics in Endocrinology and Metabolism 4 Part 2 p 267 Irvine W J ed 4 Doniach D and Roitt I M 1962 Auto antibodies in disease Ann Rev Med 13 213 5 Doniach D and Roitt I M 1976 Clinical aspects of immunology 3rd edition ed P G H Gell R R A Coombs and P J Lachmann Blackwell Oxford Roitt I M Doniach D et al 1956 Auto antibodies in Hashimoto s disease l mphadenoid goitre Lancet ii 820 7 Vall e G Izembart M et al 1982 tude de la fr quence des anticorps antithyroglobuline et antimicr2. Thymune T FR Le test Thymune T est destin la mesure semi quantitative des auto anticorps anti thyroglobuline humaine auto anticorps de la thyro de 2 RESUME ET EXPLICATION DU TEST Ce test est bas sur l h magglutination passive de Boyden et sur les travaux de Witebsky et Rose Des h maties recouvertes avec de la thyroglobuline humaine sont agglutin es par un auto anticorps sp cifique formant ainsi un tapis au fond de la cupule en cas d absence d agglutination les h maties se rassemblent en un bouton ou un anneau troit Depuis la mise en vidence d anticorps contre la thyroglobuline dans le s rum de patients atteints de la maladie de Hashimoto il a t tabli que des auto anticorps dirig s contre plusieurs constituants de la thyro de sont associ s avec les l sions inflammatoires destructives de la glande thyro dienne Les anticorps contre deux de ces constituants appel s thyroglobuline et antig ne microsomal ont une importance particuli re dans le diagnostic 3 PRINCIPE DE LA METHODE Les prot ines telles que la thyroglobuline sont facilement fix es sur la surface de globules rouges qui ont t trait s par l acide tannique La thyroglobuline est extraite de glandes thyro des humaines par des techniques de pr cipitation saline classique puis fix e la surface de globules rouges de dinde tann s ceci donnera un r actif suffisamment sensible pour d tecter les taux bas d antic
3. consulter imm diatement un m decin et lui montrer l emballage ou l tiquette Noter que les azides peuvent r agir avec le plomb et le cuivre utilis s dans les syst mes de plomberie et pourront former des sels explosifs Bien que la quantit d azide utilis e dans ce coffret soit faible tous les mat riaux en contact avec de l azide doivent tre rinc s abondamment l eau PRECAUTIONS D ANALYSE 1 Ne pas utiliser les r actifs au del de la date de p remption indiqu e 2 Avant utilisation essuyer les plaques de microtitration avec un chiffon propre afin de r duire les interf rences statiques 3 Tous les r actifs et chantillons doivent tre temp rature ambiante 18 30 C avant utilisation Replacer les r actifs la temp rature de conservation recommand e imm diatement apr s utilisation 4 Tous les tests doivent tre effectu s temp rature ambiante 18 30 C 5 Bien que le test puisse tre effectu avec des plaques de microtitration fond en U ou en V les performances de tous les lots sont confirm es par Remel avec des plaques fond en U En cas d utilisation de plaques fond en V il est recommand l utilisateur de se familiariser avec les images de r action obtenues 6 Les plaques de microtitration fond UV ne doivent pas tre utilis es 7 Les micropipettes donnent des r sultats plus pr cis et reproductibles que les microd
4. e Remettre le bouchon en place et agiter pour faciliter la dispersion du r actif Laisser reposer le flacon jusqu obtention d une dispersion compl te puis retourner le flacon et remuer nouveau pour obtenir un m lange homog ne Pour des performances optimales les h maties doivent tre reconstitu es au moins 30 minutes avant utilisation Une fois reconstitu es les suspensions d h maties restent stables entre 2 et8 C pendant 5 jours Pour une conservation plus longue des h maties test jusqu un mois les suspensions d h maties doivent tre congel es entre 15 et 25 C et ne peuvent tre d congel es qu une fois Les h maties contr le peuvent tre r parties en aliquotes et congel es pendant 18 mois entre 15 et 25 C Le diluant et les s rums contr le peuvent tre conserv s entre 2 et 8 C Il est essentiel de prendre un maximum de pr cautions pour viter toute contamination bact rienne du diluant et des s rums contr le durant le test H maties test Chaque flacon d h maties test contient l quivalent lyophilis de 3 ml de suspension d h maties de dinde 1 tann es trait es l ald hyde et recouvertes de thyroglobuline humaine dispers es dans du tampon phosphate salin pH 7 2 contenant 5 de saccharose 1 5 de s rum normal de lapin et 0 01 de Bronopol TEST CELLS H maties contr le Chaque flacon d h maties contr le contient l quivalent lyophil
5. plaque trop lent entra nera un r sultat avec des images irr guli res et une sensibilit plus faible Mettre un couvercle sur la plaque afin d viter toute vaporation ou contamination Laisser la plaque s dimenter temp rature ambiante 18 30 C labri de la lumi re directe et loin de toute vibration Lire apr s 30 60 minutes 10 RESULTATS LECTURE DES RESULTATS Dans un test positif les h maties sensibilis es sont agglutin es par les anticorps et forment un tapis diffus sur le fond des cupules Dans un test n gatif les h maties s dimentent au fond des cupules en un petit cercle ou un bouton compact Des r actions faiblement positives peuvent donner des images interm diaires Le point final doit tre lu comme la dilution la plus grande de l chantillon donnant approximativemet 50 d agglutination avec les h maties test Un effet de prozone une ou plusieurs cupules pr sentant une agglutination inattendue faible ou n gative est parfois vu sur les dilutions faibles de s rums positifs prendre garde ne pas mal interpr ter ces r sultats Si une agglutination compl te est encore pr sente la dilution finale de 1 5 120 pr parer une dilution 1 100 du s rum dans le diluant fourni et re titrer la dilution comme un chantillon normal Si un point final n est toujours pas obtenu r p ter la titration avec une dilution de d part plus lev e telle que 1 1 000 R sultats typiques obt
6. usage professionnel Pour de plus amples informations sur les composants potentiellement dangereux se r f rer la fiche de s curit fournie par le fabricant et l tiquetage INFORMATIONS DE SECURITE ATTENTION Ce coffret contient des composants d origine humaine Aucun test actuel ne peut garantir que les produits issus de liquides biologiques humains ne transmettront pas d infection Par cons quent tout le mat riel d origine humaine devra tre consid r comme potentiellement infectieux Il est recommand que tous les r actifs et chantillons d origine humaine soient manipul s avec les pr cautions d usage selon le Guide de Bonne Ex cution des Analyses Le s rum humain normal utilis dans la fabrication du diluant et dans le contr le n gatif ont subi un d pistage n gatif concernant les antig nes HBs et les anticorps anti HIV 1 et 2 et anti VHC Le diluant et les s rums contr le positif et n gatif contiennent 0 1 d azide de sodium lequel est classifi selon les directives de la Communaut Economique Europ enne CEE comme nocif Xn Les phrases de risque R et de s curit S appropri es se trouvent ci dessous Xn R22 Nocif en cas d ingestion R32 Au contact d un acide d gage un gaz tr s toxique S35 Ne se d barrasser de ce produit et de son r cipient qu en prenant toutes les pr cautions d usage S36 Porter un v tement de protection appropri S46 En cas d ingestion
7. de patients Les s rums de patients doivent tre inactiv s par chauffage 56 C pendant 30 minutes Etape 1 0 0 o mo oMoflofloflofoplorlo COLE z Ajouter 4 gouttes de diluant dans la cupule 1 et une goutte dans les cupules 2 12 l aide d un compte gouttes standard de 0 025 ml Etape 2 VV M J 2 3 4 5 6 Fd 8 9 10 t 12 Ajouter 0 025 ml de s rum dans la cupule 1 M langer et transf rer 0 025 ml dans la cupule 2 a l aide d une micropipette ou d un microdilueur Celle ci fournira la cupule de s rum contr le Retirer 0 025 ml de la cupule 2 Etape 3 Jeter U UE Titre 45 140 140 1 20 1 40 180 1160 1 320 1 640 1 1280 ps 115120 Transf rer 0 025 ml de la cupule 1 dans la cupule 3 m langer et transf rer 0 025 ml dans la cupule 4 avec un nouvel embout de micropipette ou un microdilueur Continuer les dilutions jusqu la cupule 12 Retirer 0 025 ml de la cupule Etape 4 eee Ajouter imm diatement 0 025 ml d h maties contr le dans la cupule 2 et 0 025 ml d h maties test dans les cupules 3 12 Etape 5 QUE JD M langer les contenus sur un agitateur de plaque pendant 30 secondes au minimum ou en tapotant tr s doucement la plaque sur les quatre c t s ATTENTION Ne pas m langer correctement ou utiliser un agitateur de
8. enus avec Thymune T Q DO N 2 L illustration montre huit titrations dans des plaques en U Les titrations sont faites en utilisant des micropipettes La seconde cupule de chaque rang e contient des h maties contr le avec une dilution 1 10 de s rum les cupules 3 12 contiennent des dilutions successives de s rum provenant d une dilution de 1 10 1 5 120 avec des h maties test Rang e A Positif 1 320 Rang e E Positif 1 1 280 Rang e B N gatif Rang e F N gatif Rang e C Positif 1 160 Rang e G Positif 1 640 Rang e D Positif 1 20 1 40 Rang e H Positif 1 40 11 CONTROLE QUALITE La cupule contr le colonne 2 doit toujours tre n gative Des anticorps h t rophiles anti dinde sont tr s rarement rencontr s aux dilutions 1 10 et plus mais si la cupule contr le pr sente une agglutination le s rum doit tre absorb en m langeant 0 5 ml de suspension d h maties contr le avec 0 1 ml de s rum test Agiter le m lange laisser reposer pendant 10 minutes et s parer le s rum absorb par centrifugation R p ter le test en utilisant le s rum absorb Les s rums contr le positif et n gatif sont fournis afin de s assurer du bon fonctionnement des suspensions d h maties test et contr le Le s rum n gatif ne doit pas provoquer d agglutination quelle que soit la dilution alors que le s rum positif doit produire une agglutination la dil
9. es investigations suppl mentaires telles que la scintillation thyro dienne pour le cancer la TRH pour l exploration de la thyro de et le dosage de la TSH dans le s rum pour d celer la pr sence d hypothyro disme sont n cessaires le choix du test d pendant du tableau clinique Les h magglutinations thyroglobuline et microsomale sont tr s utiles pour pr voir un possible dysfonctionnement thyro dien chez des patients pr sentant d autres d sordres endocriniens auto immuns tels que la maladie d Addison les diab tes mellitus insulino d pendants ou les auto immunopathies polyendocriniennes et chez les membres de familles pr dispos es des d sordres auto immunitaires sp cifiques d organes 13 LIMITES DE LA METHODE Le plasma et le s rum infect ne sont pas utilisables dans ce test 14 RESULTATS ATTENDUS Voir le paragraphe Interpr tation des r sultats 15 PERFORMANCE DU TEST Une comparaison de sensibilit du test Thymune T avec une technique d h magglutination h maties de mouton a t faite en testant des s rums de 158 patients atteints soit d un goitre Hashimoto soit d un myxoed me primaire soit d une thyrotoxicose Une bonne corr lation entre les deux syst mes a t trouv e dans une chelle de titres variant entre lt 1 10 et gt 1 5 1207 En testant des s rums provenant d un panel de donneurs de sang normaux l incidence de r sultats positifs tait de 4 avec des titres 1 20
10. es tests aideront la diff renciation entre une tiologie endocrinienne et des l sions orbitales locales pouvant viter ainsi des tests beaucoup plus co teux Environ 70 90 des cas de variantes de la maladie de Graves donnent des r sultats positifs en thyroglobuline et ou antig ne microsomal contre 10 15 des bien portants selon l ge et le sexe La plupart des sujets thyrotoxiques pr sentent des taux relativement bas d anticorps environ 20 ont des taux mod r s ou lev s thyroglobuline gt 1 640 microsomal gt 1 6 400 et ceci indique soit une forme plus s v re de la maladie avec tendance la rechute soit une thyro dite destructive concomitante pr disposant un myxoed me post op ratoire ou une perte de fonction thyro dienne spontan e quelques ann es apr s l pisode thyrotoxique De m me une h magglutination de thyroglobuline en combinaison avec une h magglutination microsomale permettront de distinguer la thyro dite atrophique avec hypothyro disme moyen ou s v re et les cas de d pression ou ob sit dus d autres causes Des r sultats positifs dans ces deux tests ne sont pas suffisants pour exclure le cancer de la thyro de pas plus que des taux bas Thyroglobuline lt 1 160 Microsomal lt 1 1 600 indiquent n cessairement des l sions thyro diennes s v res Certains cas de foyers thyro diques restent subcliniques et non progressifs Si un r sultat positif est obtenu d
11. ilueurs et doivent tre utilis es si possible lors de la titration des chantillons Si des microdilueurs sont utilis s bien s assurer de la pr cision du volume 7 __PRELEVEMENT ET CONSERVATION DES ECHANTILLONS Les chantillons de sang pr lev s par ponction veineuse doivent coaguler naturellement et les s rums doivent tre clarifi s par centrifugation avant le test S il est n cessaire de conserver les chantillons avant le test ils devront tre congel s entre 15 et 25 C Eviter les cong lations et d cong lations r p t es Tous les chantillons de patients doivent tre inactiv s par chauffage 56 C pendant 30 minutes avant le test Les chantillons de plasma ne conviennent pas pour ce test 8 PROCEDURE MATERIEL FOURNI Le mat riel fourni permet d effectuer 50 tests Voir la partie Composition du coffret MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI Le mat riel suivant est n cessaire en plus des mat riels normalement disponibles dans les laboratoires 1 Plaques de microtitration en U ou V jetables 2 Compte gouttes de 0 025 ml 3 Micropipette multicanaux ou microdilueurs de 0 025 ml 9 PROCEDURE DU TEST Procedure Thymune T Une rang e compl te cupules 1 12 de la plaque de microtitration est n c ssaire pour chaque chantillon ou contr le tester Les s rums contr le n gatif et positif doivent tre inclus dans chaque s rie de tests et trait s comme des s rums
12. is de 3 ml de suspension d h maties CONTROL CELLS de dinde 1 tann es trait es l ald hyde dispers es dans du tampon phosphate salin pH 7 2 contenant 5 de saccharose 1 5 de s rum normal de lapin et 0 01 de Bronopol Diluent Chaque flacon contient 25 ml de solution saline isotonique contenant du s rum humain normal n gatif pour les antig nes Hbs et les anticorps anti VIH 1 et 2 et anti VHC du s rum de dinde normal et 0 1 d azide de sodium Les volumes de ces constituants sont ajust s pour donner des r sultats optimaux avec chaque lot d h maties sensibilis es et les composants d un coffret ne doivent pas tre m lang s avec ceux d un autre DILUENT S rum contr le positif Chaque flacon contient 1 ml de s rum de mouton anti thyroglobuline ayant un titre h magglutinant d environ 1 640 avec les h maties test Aucune agglutination des h maties contr le ne doit se manifester lors des dilutions Le s rum contient 0 1 d azide de sodium eonrroz S rum contr le n gatif Chaque flacon contient 1 ml de s rum humain normal n gatif pour les antig nes HBs et les anticorps anti VIH 1 2 et anti VHC qui ne doit pas agglutiner les h maties test ou contr le aucune dilution Le s rum contient aussi 0 1 d azide de sodium PRECAUTIONS ET RESTRICTIONS D EMPLOI eontro R serv exclusivement au diagnostic in vitro R serv uniquement un
13. orps contre la thyroglobuline Tr s peu de s rums humains r agissent directement envers les h maties de dinde provoquant une agglutination non sp cifique des h maties sensibilis es Ces r actions non sp cifiques peuvent tre d tect es l aide d h maties contr le non sensibilis es Les h maties test et les h maties contr le sont trait es par du formalin et lyophilis es pour permettre une bonne conservation 4 REACTIFS COMPOSITION DU COFFRET H maties test H maties contr le Diluant 5 flacons bouchons blancs 1 flacon bouchon blanc 2 flacons bouchons blancs S rum contr le positif 1 flacon bouchon rouge S rum contr le n gatif 1 flacon bouchon bleu Mode d emploi 1 DESCRIPTION DES REACTIFS PREPARATION POUR UTILISATION ET CONDITIONS DE CONSERVATION RECOMMANDEES Voir galement Pr cautions et restrictions d emploi 8C 2C Avant reconstitution les r actifs doivent tre conserv s entre 2 et 8 C pour leur permettre de conserver leurs propri t s actives au moins jusqu la date de p remption indiqu e sur l emballage or JOUER a E Les h maties test et les h maties contr le doivent tre reconstitu es avec 3 ml d eau distill e selon la m thode suivante tapoter le flacon sur la paillasse afin d liminer toutes les substances adh rant au bouchon en caoutchouc Retirer avec pr caution la capsule et le bouchon en caoutchouc puis ajouter 3 ml d eau distill
14. osomaux en pathologie thyro dienne Ann Biol Clin 40 651 656 Witebsky E and Rose N R 1956 Studies on organ specificity 1 V production of rabbit thyroid antibodies in the rabbit J Immunol 76 408 Witebsky E Rose N R et al 1957 Chronic thyroiditis and autoimmunization J Amer med Ass 164 1439 1 Donn es sur fichier EMBALLAGE REF AD12 R30850601 50 tests L gende des symboles REF R f rence de catalogue IVD Dispositif m dical de diagnostic in vitro Ci Consulter le mode d emploi 1 Limite de temp rature temp rature de conservation LOT Code de lot num ro de lot w A utiliser avant date de p remption A al CE Marque commerciale X7812 Ao t 2012 r vis e Avertissement consulter la documentation jointe fabricant Remel Europe Ltd Clipper Boulevard West Crossways Dartford Kent DA2 6PT Royaume Uni Pour tout support technique contacter le distributeur local
15. ution 1 640 dans les cupules en U plus ou moins une dilution d cart Les titres observ s dans les cupules en V sont g n ralement l g rement plus lev s L absence d un titre acceptable pour le s rum contr le positif indique que le test n a pas une sensibilit correcte et il doit tre r p t Toute r action non conforme cette description indiquera une d t rioration des h maties contr le ou test ou une contamination du diluant 12 INTERPRETATION DES RESULTATS Les tests d h magglutination passive HA pour la d tection des anticorps anti thyroglobuline sont environ 1 000 fois plus sensibles que les tests de pr cipitation et les patients atteints de la maladie de Hashimoto avec pr cipit s positifs ont donn des titres HA de 640 plusieurs millions La combinaison des tests d h magglutination de thyroglobuline et d antig ne microsomal d tecte pratiquement tous les goitres Hashimoto et environ 90 des cas de myxoed mes primaires Les deux tests doivent tre pratiqu s en parall le dans tous les cas o il est difficile de distinguer cliniquement une thyro dite auto immune d un autre type de goitre Une autre application importante des deux tests d anticorps thyro diens est dans le diagnostic diff rentiel de la thyrotoxicose primaire et certaines vari t s de tachycardies d tats anxieux de pertes de poids inexpliqu es ou de diarrh es Dans des cas d exophtalmie unilat rale l
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