VHE IgM ELISA - MP Biomedicals
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1. 2 Purcell R H and J R Ticehurst 1988 Enterically transmitted non A non B hepatitis Epidemiology and clinical characteristics pp 131 137 In A J Zuckerman ed Viral Hepatitis and Liver Disease Alan R Liss Inc New York 3 Moaven L D A J Fuller J C Doultree J A Marshall D S Bowden R A Moeckli and S A Locarnini 1993 A case of acute hepatitis E in Victoria Medical Journal of Australia 159 124 125 4 Skidmore S J P O Yarbough K A Gabor A W Tam G R Reyes A J E Flower 1991 Imported hepatitis E in UK The Lancet 337 1541 5 Dawson G J L K Mushahwar K H Chau G L Gittnick 1992 Detection of long lasting antibody to hepatitis E virus in a US traveller to Pakistan The Lancet 340 426 6 Reyes G R M A Purdy J P Kim K C Luk L M Young K E Fry and D Bradley 1990 Isolation of a cDNA from the virus responsible for enterically transmitted non A non B hepatitis Science 247 1335 7 Yarbough P O A W Tam K E Fry K Krawczynski K A McCaustland D W Bradley and G R Reyes 1991 Hepatitis E virus Identification of type common epitopes Journal of Virology 65 5790 8 Goldsmith R P O Yarbough K E Fry K A Gabor M Kamel S Zakaria S Amer Y Gaffar 1992 Enzyme linked immunosorbent assay for diagnosis of acute sporadic hepatitis E in Egyptian children The Lancet 339 328 331 9 Lee S D Y J Wang R H Lu C Y Chan K J Lo R A Moeckli 19932. 10 Un incubateur 37 C 11 Un lecteur de plaque en microdosage double A A ou simple A longueur d onde 12 Solution d hypochlorite de sodium 5 ou eau de Javel liquide domestique A W PR PARATION DES R ACTIFS CONJUGU DE TRAVAIL a Le CONJUGU DE TRAVAIL doit tre pr par imm diatement avant utilisation b Pour pr parer le conjugu dilu effectuer une dilution du conjugu 1 200 l aide du diluant fourni dans la trousse c Utiliser exclusivement des r cipients et tubes en polypropyl ne d Consulter le tableau pour pr parer le conjugu de travail TABLEAU DE PR PARATION DU CONJUGU Nombre de tests Vol de conjugu ul Vol de diluant ml z4 48 o o wo eo n s o 2 TAMPON DE LAVAGE DILU a Le TAMPON DE LAVAGE DILUE doit tre pr par imm diatement avant utilisation b Diluer 1 volume de CONCENTR DE LAVAGE DE PLAQUE dans 19 volumes d eau distill e de qualit r actif Bien m langer Un volume d approximativement 400 ml de tampon de lavage est n cessaire pour laver 1 plaque PROC DURE DU TEST IMPORTANT Les immunodosages de ce type sont sensibles la temp rature et d pendent de la dur e du test Le respect absolu de la proc dure d analyse garantit le fonctionnement optimal du test Le non respect de la proc dure recommand e peut conduire l obtention de r sultats aberrants 1 10 11
3. NRCX est syst matiquement faible la possibilit d une d t rioration des r actifs peut tre envisag e R SULTATS Chaque microplaque doit tre prise en compte s par ment lors du calcul et de l interpr tation des r sultats de l analyse ind pendamment du nombre de plaques utilis es au cours d une m me analyse LES VALEURS D ABSORBANCE MOYENNES DU BLANC DOIVENT TRE SOUSTRAITES DES VALEURS D ABSORBANCE DES CONTR LES COMME DE CELLES DES PR L VEMENTS AVANT INTERPR TATION DES R SULTATS La pr sence ou l absence d anticorps IgM sp cifiques dirig s contre le VHE est d termin e par comparaison de l absorbance des sp cimens par rapport la VALEUR SEUIL de la plaque La VALEUR SEUIL du test VHE IgM ELISA de MPD est calcul e par addition de 0 400 l absorbance moyenne du contr le n gatif CALCUL DES R SULTATS 1 Calcul de l absorbance moyenne du contr le n gatif NRCX Exemple Puits N Absorbance C1 0 010 D1 0 012 E1 0 008 Total 0 030 Moyenne 0 030 3 0 010 NRCX Chaque valeur du contr le n gatif doit tre inf rieure ou gale 0 100 unit Si l une des valeurs du contr le n gatif ne r pond pas au crit re ci dessus elle doit tre consid r e comme aberrante et tre exclue La moyenne du contr le n gatif NRCX doit alors tre recalcul e d apr s les valeurs de contr le n gatif restantes Toutes les valeurs de contr le n gatif restantes doivent
4. Seroprevalence of Antibody to Hepatitis E Virus among Chinese Subjects in Taiwan Hepatology Vol 19 No 4 1994 10 Balayan M S 1991 HEV Infection Historical Perspectives Global Epidemiology and Clinical Features In F B Hollinger S M Lemon and H Margolis editor Viral Hepatitis and Liver Disease Williams amp Wilkins Baltimore 11 Uchida T etal 1991 Virulence of Hepatitis E virus with Serial Passage to Cynomolgus Monkeys and Identification of Viremia In F B Hollinger S M Lemon and H Margolis editor Viral Hepatitis and Liver Disease Williams amp Wilkins Baltimore 12 Edward T Clayson Khin Saw Aye Myint Rapin Snitban David W Vaughn Bruce L Innis Lily Chan Peter Cheung Mrigendra P Shrestha Viremia Fecal Shedding and IgM and IgG Responses in Patients with Hepatitis E Journal of Infectious Diseases 1995 172 927 33 MP Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd 85 Science Park Drive 04 01 The Cavendish Singapore Science Park Singapour 118259 T l 65 6775 0008 Fax 65 6775 4536 Courriel enquiry_ap mpbio com Medical Technology Promedt EC REP Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Allemagne T l 49 68 94 58 1020 Fax 49 68 94 58 1021 Courriel info mt procons com Bureaux r gionaux MP Biomedicals Suisse S A Halle de Fret Aeroport P O Box 1015 1211 Gen ve 5 Suisse T l 4122 788 1908 Fax 4122 788 1986 Courriel mpbiosui
5. Sortir la microplaque du sachet aluminium Secouer les ampoules de pr l vement et de contr le avant utilisation Remplir un r servoir r actif de DILUANT l aide d une pipette canaux multiples ajouter 200 ul de DILUANT dans tous les puits Les puits A1 et B1 font office de BLANCS NE PAS AJOUTER DE PR L VEMENT DANS CES PUITS Ajouter 10 ul de diluant suppl mentaires dans ces puits Ajouter 10 ul du sp cimen au puits d sign cet effet en commen ant par le puits H1 Ceci permettra d obtenir une dilution finale du pr l vement de 1 21 NE PAS METTRE DE SP CIMEN DANS UN PUITS VIDE Une fois les pr l vements analyser ajout s ajouter 10 ul de CONTR LE N GATIF par puits dans les puits C1 D1 amp Et Ajouter 10 ul de CONTR LE POSITIF par puits dans les puits F1 et G1 M langer soigneusement en tapotant d licatement de chaque c t de la microplaque tout en veillant ce que la plaque reste bien plat sur la paillasse Recouvrir la microplaque avec pr caution l aide de l un des films couvre plaques fournis afin d viter toute vaporation pendant l incubation Laisser incuber pendant 30 minutes 37 C Ne pas utiliser de bain marie pour incuber Pr parer le CONJUGU DE TRAVAIL comme indiqu dans la section PR PARATION DES R ACTIFS avant de laver la microplaque Retirer et jeter le film couvre plaque puis laver la microplaque l aide de TAMPON DE
6. gions end miques elle tend tre quelque peu plus lev e La s ropositivit indique une exposition r cente au virus de l h patite E LIMITES DE LA M THODE Les r sultats positifs r p t s au test VHE IgM ELISA de MPD indiquent la possible pr sence d anticorps IgM dirig s contre le VHE dans le pr l vement Un r sultat N GATIF au test VHE IgM ELISA de MPD signale l absence probable d anticorps IgM d tectables dirig s contre le VHE dans le pr l vement Un r sultat N GATIF ne permet pas d exclure la possibilit d une exposition au VHE ou d une infection par le virus La possibilit de r sultats faussement positifs doit tre prise en compte avec les trousses d analyse de ce type La proportion de faux positifs d pend de la sensibilit et de la sp cificit de la trousse d analyse Pour la plupart des tests diagnostiques plus la pr valence de l anticorps est lev e dans une population plus la proportion de faux positifs est r duite Les tudes internes ont montr que la pr sence de facteurs rhumato des FR ou de forts titrages en IgG n avait pas d incidence sur le bon fonctionnement du test VHE IgM ELISA de MPD L utilisation de proc d s d limination des IgG par exemple le r actif d limination des facteurs rhumato des ou RFRR n cessitant la dilution de l chantillon peuvent affecter le niveau de sensibilit du test VHE IgM ELISA de MPD LIMITES DE GARANTIE Le fabricant ne gara
7. les produits et emballages des produits MP diagnostics Ces symboles sont ceux qui apparaissant le plus fr quemment sur les dispositifs m dicaux et sur leurs emballages lls sont d crits plus en d tails dans la notice de normalisation British and European Standard BS EN 980 20083 Utiliser avant quipement rome m dical usage z Date de p remption J diagnostique in vitro Code du lot de fabrication Num ro du Synonymes catalogue LOT Num ro de lot Num ro de lot de Attention fabrication AN Voir les instructions Conditions de d utilisation conservation Repr sentant agr dans la Fabricant EC REP Communaut europ enne Contenance suffisante Consulter les pour lt n gt tests CH instructions d utilisation Ne pas r utiliser E PRINCIPES CHIMIQUES ET BIOLOGIQUES DU TEST Les puits de la microplaque en polystyr ne contiennent trois antig nes recombinants du VHE correspondants aux r gions structurelles du virus de l h patite E Les chantillons de s rum ou plasma humain dilu s dans un tampon sont mis en incubation dans ces puits recouverts Les anticorps sp cifiques au VHE s ils sont pr sents se fixeront sur les antig nes VHE immobilis s sur la phase solide Les puits sont abondamment lav s afin d liminer les substances non fix es et un anti IgM humain monoclonal de souris marqu la peroxydase du raifort est ajout aux puits Cet anticorps marqu se fixera sur tout co
8. les r actifs une forte luminosit Ne sortir les microplaques de leur pochette de conservation qu au moment pr cis de leur utilisation Les bandelettes non utilis es dont l emballage a t ouvert doivent tre conserv es entre 2 et 8 C dans leur pochette de conservation avec l agent de dessiccation fourni Les contr les de la trousse doivent tre dos s en m me temps que les chantillons des patients chaque cycle de test Prendre soin de ne pas toucher ou clabousser le bord du puits avec le conjugu Ne pas souffler dans la micropipette Dans la mesure du possible il est recommand de proc der un pipetage inverse L utilisation d chantillons fortement h molys s de s rums non totalement coagul s d chantillons plasmatiques contenant de la fibrine ou d chantillons ayant subi une contamination microbienne risque de conduire l obtention de r sultats erron s NE PAS INCUBER LES PLAQUES AU BAIN MARIE Les incubateurs CO ne doivent pas tre utilis s Lors de l incubation 37 C toute vaporation doit tre vit e Couvrir les plaques l aide des films adh sifs couvre plaques fournis viter d ouvrir et fermer trop fr quemment la porte de lincubateur au cours des tapes d incubation Ne pas conserver la solution d arr t dans un r cipient peu profond et ne pas la replacer dans le flacon de stockage apr s utilisation V rifier que le bas de la plaque est propre et se
9. BSTRAT dans chaque puits Poser un film couvre plaques Incuber dans l obscurit pendant 15 minutes temp rature ambiante 25 3 C Retirer et jeter le film couvre plaques l aide d une pipette canaux multiples ajouter 100 ul de SOLUTION D ARR T dans chaque puits M langer d licatement en tapotant la plaque D terminer l absorbance de chaque puits 450 nm Sur un appareil utilisant une longueur d onde double la longueur d onde de r f rence doit tre 620 nm 100 ul 30 minutes 300 ul par puits x 6 100 ul 15 minutes 100 ul REMARQUE L absorbance devrait tre lue dans un d lai de 10 minutes sur l addition de la SOLUTION D ARR T CONTR LE DE QUALIT 1 LeBLANCetle CONTR LE POSITIF doivent tre analys s en double et le CONTROLE NEGATIF en triple sur chaque plaque pour chaque lot de sp cimens 2 L absorbance du blanc doit tre de lt 0 100 3 L absorbance du contr le n gatif doit tre lt 0 100 apr s soustraction de la valeur du blanc 4 L absorbance des 2 contr les positifs doit tre gt 0 500 apr s soustraction de la valeur du blanc 5 Pour que l analyse soit valide la diff rence entre les absorbances moyennes du contr le positif et du contr le n gatif RCX NRCX doit tre de 0 400 ou plus Dans le cas contraire le d roulement des op rations peut tre mis en cause et l analyse doit tre r p t e Si la diff rence RCX
10. LAVAGE DILU selon l une des deux m thodes recommand es A Laveur automatique ou semi automatique de microplaque Laver six 6 reprises avec au moins 300 ul par puits et par lavage 200 ul 10 pl 10 pl 10 ul 10 ul 30 minutes 300 ul par puits x 6 20 B Lavage manuel de la microplaque Aspirer la totalit du contenu des puits en abaissant d licatement l embout de l aspirateur jusqu au fond de chaque puits ATTENTION NE PAS RAYER LA SURFACE INTERNE DES PUITS Remplir la totalit de la plaque avec au moins 300 Hl puits puis aspirer imm diatement dans le m me ordre R p ter ce cycle six 6 reprises S cher la microplaque en la retournant sur un papier absorbant et en tapotant fermement Il ne doit pas subsister de tampon de lavage Tout r sidu de tampon de lavage risque d inhiber l apparition de la coloration pendant l incubation avec le substrat Remplir un r servoir r actifs avec le CONJUGU DE TRAVAIL l aide d une pipette canaux multiples ajouter 100 ul de CONJUGU DE TRAVAIL dans chaque puits Poser un nouveau film couvre plaques Incuber la microplaque pendant 30 minutes 37 C Ne pas incuber 37 C au bain marie Retirer et jeter le film couvre plaques Renouveler les tapes de lavage 11 et 12 Remplir un r servoir r actif avec la SOLUTION DE SUBSTRAT l aide d une pipette canaux multiples ajouter 100 ul de SOLUTION DE SU
11. Si Diagnostics VHE IgM ELISA CE DATE DE R VISION 05 05 MBL 0011 FRA 0 21160 096T trousse de 96 tests NOM ET APPLICATIONS Le test VHE IgM ELISA de MP Diagnostics MPD est un test par immunoadsorption avec enzyme conjugu destin la d tection des anticorps IgM dirig s contre le virus de l h patite E VHE dans le s rum ou le plasma humain Remarque modifications en surbrillance INTRODUCTION Les principales pid mies d h patite non A non B transmission ent rique ET NANB ont t observ es dans les r gions en voie de d veloppement telles que l Asie l ancienne Union Sovi tique l Am rique centrale et l Afrique 1 2 Des cas sporadiques ont galement t relev s dans des pays industrialis s notamment en Australie au Royaume Uni et aux Etats Unis 3 4 5 Les cas survenus dans les pays industrialis s ont g n ralement pu tre associ s des voyages dans les r gions end miques La maladie volue g n ralement sur un mode aigu et spontan ment r solutif sans apparition de s quelles chroniques On note toutefois une forte incidence de la mortalit chez les femmes enceintes au troisi me trimestre de leur grossesse avec approximativement 10 20 1 et un taux de mortalit de 1 2 au sein de la population globale soit un taux 10 fois sup rieur celui de l h patite A VHA Le clonage de l agent tiologique de l h patite ET NANB et l identification des pitope
12. araissant comme positifs apr s renouvellement de l analyse doivent tre interpr t s comme positifs reproductibles vis vis des anticorps IgM dirig s contre le VHE d apr s les crit res du test VHE IgM ELISA de MPD 4 Les pr l vements initialement positifs apparaissant comme n gatifs apr s renouvellement de l analyse sont consid r s comme n gatifs d apr s les crit res du test VHE IgM ELISA de MPD CARACT RISTIQUES SP CIFIQUES DE FONCTIONNEMENT Sp cificit et sensibilit La d tection d une vir mie dans les pr l vements sanguins ou f caux au cours de la phase initiale de l infection a t utilis e afin de d terminer la pr sence de lh patite E Cependant la d tection de la vir mie ne peut tre effectu e avec succ s que si les pr l vements s riques ou f caux sont recueillis suffisamment t t de pr f rence dans les 14 premiers jours suivant l apparition des sympt mes 12 La sensibilit fond e sur la d tection de la vir mie du test VHE IgM ELISA de MPD est d termin e d apr s sa capacit d tecter le nombre de positifs au sein de ce panel de s rums bien d fini Sur les 152 chantillons pr lev s dans l intervalle des 14 jours 141 taient positifs au test VHE IgM ELISA de MPD Ceci repr sente une sensibilit de 93 La s ropositivit des sujets sains des populations faible risque est tr s limit e approximativement lt 1 tandis que chez les sujets sains des r
13. c et que la surface du liquide ne pr sente aucune bulle avant de lire les r sultats sur la plaque Supprimer les bulles du puits par exemple en tapotant d licatement Avant utilisation v rifier que les quipements automatis s sont valid s Il est fortement recommand de proc der r guli rement l entretien du syst me d aspiration de lavage afin d viter le passage de pr l vements fortement positifs vers des pr l vements n gatifs INSTRUCTIONS DE CONSERVATION Conserver la trousse VHE IgM ELISA de MPD et ses composants entre 2 et 8 C en dehors des p riodes d utilisation 2 Lorsqu ils sont conserv s entre 2 et 8 C l ensemble des r actifs et microplaques d analyse restent stables jusqu la date de p remption indiqu e sur la trousse Ne pas congeler les r actifs 3 Des cristaux peuvent se former lorsque le Concentr de lavage de plaque 20x est conserv entre 2 et 8 C Ils doivent tre dissous par r chauffement 37 C avant utilisation 4 Un pr cipit peut se former lorsque le Diluant est conserv entre 2 et 8 C Ceci n a aucune incidence sur le fonctionnement de la trousse 5 Les bandelettes de microplaque non utilis es et dont l emballage a t ouvert doivent tre conserv es avec l agent de dessiccation fourni entre 2 et 8 C dans un sachet ferm RECUEIL TRANSPORT ET CONSERVATION DES PRELEVEMENTS Les chantillons doivent tre conserv s entre 2 et 8 C si analyse doi
14. dangers biologiques Se laver abondamment les mains par la suite 5 Il est fortement recommand de proc der ce test dans un local pr vu pour les op rations pr sentant des dangers biologiques 6 Ne pas placer d aliments ni de boissons proximit des produits 7 En cas d accident ou de contact avec les yeux rincer imm diatement avec une grande quantit d eau et consulter un m decin 8 Consulter imm diatement un m decin en cas d ingestion de substances contamin es ou de mise en contact avec des plaies ouvertes ou autres l sions cutan es 9 Ne jamais ajouter d eau la Solution d arr t 10 11 12 Essuyer imm diatement les claboussures de substances potentiellement infectieuses l aide de papier absorbant et nettoyer la zone contamin e l aide d une solution d hypochlorite de sodium 1 avant de reprendre le travail L hypochlorite de sodium ne doit tre utilis sur les claboussures contaminantes acides moins que la zone n ait t pr alablement essuy e et s ch e l aide de papier absorbant Le mat riel utilis y compris les gants jetables doit tre limin comme s il s agissait de mat riaux susceptibles de pr senter un danger biologique Ne pas mettre l autoclave les mat riaux contenant de lhypochlorite de sodium Mettre tous les mat riaux utilis s et contamin s l autoclave 121 C 15 psi pendant 30 minutes avant limination Il est
15. de Tris 100 mi contenant du s rum de ch vre normal trait par la chaleur de l albumine s rique bovine et des stabilisants Contient du Bronidox comme conservateur Conserver entre 2 et 8 C mean SOLUTION CONCENTR E DE 1 flacon LAVAGE DE PLAQUE 20X 120 ml Solution phosphate saline tamponn e avec du Tween 20 Contient du chloroac tamide comme conservateur Conserver entre 2 et 8 C CONJUGU 1 ampoule Anti IgM humaine monoclonale de 70 ul souris marqu e la peroxydase de raifort Contient du thiomersal 0 02 comme conservateur Conserver entre 2 et 8 C CONJUGATE IgM T SUBSTRAT 1 flacon SUBS TMB Tampon contenant du 3 3 5 5 12 5 ml tetramethylbenzidine Conserver labri de la lumi re entre 2 et 8 C snora SOLUTION D ARR T 1 flacon Solution d acide chlorhydrique 30 ml 1 N Conserver labri de la lumi re entre 2 et 8 C FILMS COUVRE PLAQUES 4 pi ces Films adh sifs pour couvrir la microplaque pendant l incubation MODE D EMPLOI 1 exemplaire Bronidox est une marque d pos e de Henkel Chemical Co PR CAUTIONS D UTILISATION Utilisation r serv e au diagnostic in vitro Utilisation r serv e aux professionnels 3 Consulter emballage du produit pour conna tre les composants susceptibles de pr senter un risque biologique INFORMATIONS RELATIVES LA S CURIT ET LA SANT ATTENTION Cette trousse contient des substances d origine h
16. es lors du pr l vement des aliquots de produit dans les flacons Afin d viter toute contamination crois e utiliser un nouvel embout de pipette pour chaque chantillon et ne pas toucher le haut ou le bas des lignes le bord des puits ou le liquide qu ils contiennent avec les doigts ou l embout de la pipette Il est recommand de nettoyer la verrerie devant tre utilis e pour les r actifs l aide d acide chlorhydrique 2M et de la rincer abondamment l eau distill e ou d sionis e avant utilisation Pour des r sultats optimaux laisser tous les r actifs et chantillons arriver temp rature ambiante 25 C 3 C avant utilisation Apr s utilisation les replacer imm diatement entre 2 et 8 C pour conservation 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 2i 22 23 Utiliser exclusivement de l eau d sionis e ou distill e pour diluer les r actifs Tous les r actifs doivent tre convenablement m lang s avant utilisation La solution conjugu e de travail et le tampon de lavage dilu doivent tre pr par s imm diatement avant leur utilisation Ne pas exposer les r actifs ou r aliser les analyses dans une zone pr sentant un niveau lev de vapeurs chimiques d sinfectantes par exemple des vapeurs d hypochlorite au cours de leur conservation ou de lincubation Une telle mise en contact inhibe la r action de coloration Ne pas exposer non plus
17. galement possible de d contaminer les mat riaux dans une solution d hypochlorite de sodium 5 pendant 30 60 minutes avant de les liminer dans des sacs poubelle pour produits pr sentant un danger biologique D contaminer tous les produits chimiques et r actifs utilis s en y ajoutant le volume d hypochlorite de sodium n cessaire pour arriver une concentration finale d au moins 1 Laisser reposer pendant 30 minutes pour garantir le succ s de la d contamination PR CAUTIONS D UTILISATION 1 Le fonctionnement optimal du test n est possible que dans le RESPECT ABSOLU de la proc dure d crite dans ce Mode d emploi Le non respect de cette proc dure peut conduire l obtention de r sultats aberrants NE PAS MODIFIER OU CHANGER DES R ACTIFS PROVENANT DE TROUSSES DIFF RENTES La correspondance des contr les conjugu et microplaques a t tudi e pour un fonctionnement optimal Utiliser uniquement les r actifs fournis avec la trousse Ne pas utiliser les composants de la trousse au del de la date de p remption figurant sur l emballage de la trousse viter toute contamination microbienne des r actifs lors de louverture des flacons et ampoules et du pr l vement des aliquots de produit Ceci r duirait la dur e de conservation des trousses et pourrait conduire l obtention de r sultats erron s Utiliser des techniques aseptiques notamment les pipettes ou les embouts de pipette jetabl
18. mplexe antig ne anticorps pr alablement form et les anticorps marqu s non fix s en exc s seront limin s par lavage Un substrat contenant du 3 3 5 5 tetramethylbenzidine TMB est ensuite ajout chaque puits La couleur bleue apparaissant apr s ajout du substrat indique la pr sence d anticorps sp cifiques La r action est achev e par l ajout d acide chlorhydrique L intensit de la coloration est d termin e par spectrophotom trie 450 nm Elle est proportionnelle la quantit d anticorps pr sente dans le pr l vement L MENTS DE LA TROUSSE Description du mat riel Quantit fournie MICROPLAQUE VHE 1 plaque Douze bandelettes de 8 puits par 96 puits plaque emball es dans un sachet aluminium contenant un agent de dessiccation Chaque puits de la microplaque contient des prot ines recombinantes adsorb es du VHE Conserver entre 2 et 8 C conrroc CONTR LE N GATIF 1 ampoule S rum humain normal inactiv 160 ul non r actif vis vis de l anti VHC Panti VHE l AgHBs et l anti VIH 1 Contient du thiomersal et de l azide de sodium comme conservateurs Conserver entre 2 et 8 C gt CONTR LE POSITIF 1 ampoule S rum humain inactiv contenant 80 ul un titre lev en anticorps IgM sp cifiques du VHE Contient du thiomersal et de l azide de sodium comme conservateurs Conserver entre 2 et 8 C gt DILUANT 1 flacon Solution saline base
19. ntit explicitement la trousse d analyse que pour un usage diagnostique in vitro sous r serve que soient respect es les sp cifications et limites d crites dans le Mode d emploi du produit et que celui ci soit utilis conform ment aux pr sentes instructions Le fabricant d cline toute responsabilit explicite ou implicite y compris celle implicite ou explicite li e la qualit marchande l aptitude l emploi ou le fonctionnement implicite une autre fin particuli re Le fabricant ne peut s engager que sur un remplacement ou un remboursement du produit Le fabricant ne peut tre tenu responsable par l acheteur ou toute autre partie d aucune d t rioration blessure ou perte financi re r sultant de lutilisation du produit Le fabricant n est pas en mesure de s engager implicitement ou explicitement ce que ce produit n empi te pas sur les droits de propri t intellectuelle de tierces parties PROBL MES TECHNIQUES R CLAMATIONS Dans l ventualit d un probl me technique d une r clamation proc der comme suit 1 Noter le num ro de lot de la trousse et sa date de p remption 2 Conserver les trousses et les r sultats obtenus 3 Contacter le bureau MP Biomedicals le plus proche ou votre distributeur local BIBLIOGRAPHIE 1 Bradley D W 1990 Enterically transmitted non A non B hepatitis pp 442 461 In A J Zuckerman ed British Medical Bulletin 46 2 Churchill Livingstone New York
20. r pondre au crit re ci dessus sans quoi l analyse est invalide et doit tre renouvel e 2 Calcul de l absorbance moyenne du contr le positif RCX Exemple Puits N Absorbance F1 0 758 G1 0 732 Total 1 490 Moyenne 1 490 2 0 745 RCX Chaque valeur du contr le positif doit tre mais sup rieure ou gale 0 500 unit Si l une des valeurs du contr le positif ne r pond pas aux deux crit res ci dessus l analyse est invalide et doit tre renouvel e 3 Calcul de la diff rence entre RCX et NRCX Exemple NRCXx 0 010 RCX 0 745 RCx NRCx 0 745 0 010 0 735 Pour que l analyse soit valable la valeur RCX NRCX doit tre de 0 400 ou plus Dans le cas contraire la possibilit d une manipulation incorrecte ou d une d t rioration des r actifs peut tre envisag e et l analyse doit tre renouvel e 4 Calcul de la valeur SEUIL Valeur SEUIL 0 400 NRCx Exemple NRCX 0 010 Valeur SEUIL 0 400 0 010 0 410 INTERPR TATION DES R SULTATS 1 Les pr l vements dont les absorbances sont inf rieures la valeur SEUIL sont consid r s comme n gatifs au test VHE IgM ELISA de MPD 2 Les pr l vements dont les absorbances sont sup rieures ou gales la valeur SEUIL sont consid r s comme initialement positifs d apr s les crit res du test VHE IgM ELISA de MPD et doivent tre analys s une seconde fois avant interpr tation 3 Les pr l vements app
21. s viraux de type commun 6 7 ont permis la mise au point d outils diagnostiques sp cifiques capables de d tecter les anticorps du virus de l h patite E VHE Les tudes men es en 1986 sur des enfants gyptiens de Benha ont montr que lexposition ant rieure au VHE d clenche une r ponse des IgG 8 pouvant tre provisoire et dispara tre dans les 6 mois mais pouvant parfois se prolonger pendant 8 ans ou plus comme l a indiqu une r cente tude men e Taiwan 9 Il a t montr que la r ponse IgM se limitait la phase aigu de l infection par le VHE Auparavant pour d tecter la r ponse aigu l infection par le VHE il tait n cessaire de proc der l observation des particules virales dans les selles des sujets infect s par microscopie immuno lectronique MIE ou par amplification en cha ne par polym rase ACP 10 11 Cette m thode exige l utilisation d quipements co teux et la ma trise de comp tences techniques De plus l excr tion des particules virales se produit habituellement en faible quantit si bien que le titrage risque de ne pas tre suffisant pour qu elles puissent tre d tect es Le test VHE IgM ELISA de MP Diagnostics utilise les antig nes VHE recombinants issus de la r gion structurelle du g nome viral afin de d tecter la pr sence des anticorps IgM associ s l infection aigu DESCRIPTION DES SYMBOLES UTILIS S Ci apr s les symboles graphiques utilis s sur
22. sse mpbio com Brevet tats Unis 5 741 490 5 770 689 5 885 768 5 686 239 Brevet Singapour 39445 49225 Australie 644878 Taiwan 63167 Cor e du sud 178399 180530 Autres brevets en cours Le nom et le logo Genelabs sont conc d s sous licence par Genelabs Technologies Inc
23. t tre r alis e dans les 7 jours suivant le pr l vement et congel s 20 C ou temp rature inf rieure si l analyse doit tre r alis e plus de 7 jours apr s Il est pr f rable d utiliser des chantillons clairs non h molys s Les chantillons lip miques ict riques ou contamin s par des particules doivent tre filtr s 0 45 um ou centrifug s avant analyse Le s rum des patients peut tre inactiv mais ceci nest pas indispensable au fonctionnement optimal du test Pour l inactiver proc der comme suit 1 Retirer les bouchons des r cipients contenant le s rum 2 Chauffer le s rum 56 C pendant 30 minutes au bain marie 3 Laisser refroidir le s rum avant de refermer les bouchons 4 Le s rum peut tre congel pour tre conserv jusqu l analyse Il est d conseill de soumettre le s rum du patient des cycles r p t s de cong lation d cong lation MAT RIEL SUPPL MENTAIRE N CESSAIRE NON FOURNI AVEC LA TROUSSE 1 Papier absorbant jetable pour paillasse et serviettes en papier 2 Tubes ou r cipients en polypropyl ne Pipettes gradu es 5 ml 10 ml Pipette canaux multiples capable de distribuer 50 pl 100 ul et 200 ul 5 Pipette capable de distribuer 1 1000 pl 6 Embouts de pipette jetables 7 R servoirs r actifs cuves rectangulaires ayant une capacit de 25 ml 8 Eau d sionis e ou distill e de qualit r actif 9 lacons 500 mi 1 litre
24. umaine Aucune AN technique de test ne permet de garantir totalement que les produits sanguins humains ne vont pas transmettre une infection MANIPULER LES PR L VEMENTS TESTER ET LES CONTR LES POSITIFS ET N GATIFS COMME S IL S AGISSAIT D AGENTS POTENTIELLEMENT INFECTIEUX Il est recommand de manipuler les composants et les sp cimens analyser conform ment aux Bonnes Pratiques de Laboratoire Ils doivent galement tre limin s dans le respect des r gles de s curit en vigueur Le Contr le positif et le Contr le n gatif contiennent du thiomersal et de l azide de sodium L azide de sodium peut r agir au contact du cuivre et du plomb pr sents dans certaines tuyauteries pour former des sels explosifs Les quantit s utilis es dans cette trousse sont limit es Toutefois lors de leur limination les substances contenant des azides doivent tre rinc es abondamment afin d viter la formation d azides m tallis s dans les tuyauteries 1 viter toute contamination microbienne des r actifs lors de louverture des flacons et du pr l vement des aliquots de produit 2 Ne pas pipeter avec la bouche 3 Manipuler les sp cimens tester les microplaques et les contr les positifs et n gatifs comme des agents potentiellement infectieux 4 Porter une blouse de laboratoire et des gants jetables pendant le d roulement du test Jeter les gants dans des sacs poubelle destin s aux mat riaux pr sentant des
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