TrueScience™ RespiFinder® Identification Panels Quick Reference
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1. Mix Utiliser la pipette pour m langer 4 Pour chaque chantillon de produit PCR e Diluer bul de produit PCR chantillon dans 45 uL d eau d sionis e e Pipetter 1 uL du produit PCR chantillon dilu dans un puits contenant le Size Standard Mix puis utiliser la pipette pour m langer Remarque Dans certains cas par exemple charge virale lev e il peut tre n cessaire de diluer encore le produit PCR afin d viter les pics hors chelle Pour plus d informations voir TrueScience RespiFinder Identification Panels Protocol 5 Sceller la plaque avec un couvercle ad quat Fiche de consultation rapide de TrueScience RespiFinder Identification Panels b Lancer le cycle de la plaque d chantillons 1 Centrifuger la plaque 1 000 X g pendant 10 secondes pour diriger le liquide vers le fond des puits et supprimer les bulles d air 2 Charger la plaque dans l analyseur g n tique configurer le logiciel de collecte de donn es comme d crit dans le TrueScience RespiFinder Identification Panels Software Setup and Data Analysis User Guide PN 4460428 puis lier la plaque et d marrer le cycle Analyser et interpr ter Proc der l identification du statut du candidat pathog ne en analysant des donn es l aide des des donn es ensembles de r ceptacles panels et param tres d analyse recommand s Pour obtenir des instructions se reporter au TrueScience RespiFinder Identification Panels Software Setu2. ut Da a n pie dt dansant assidu de 3 Panels Cette fiche de consultation rapide traite des TrueScience RespiFinder Identification Panels suivants Panel N Conservation 4460381 TrueScience RespiFinder 15 Viral Identification Panel 50 tests y 4460382 TrueScience RespiFinder 19 Pathogen Identification Panel 50 tests is Description et principes du produit Les TrueScience RespiFinder Identification Panels utilisent un test PCR multiplex permettant de d tecter et de diff rencier les agents pathog nes pouvant entra ner des infections des voies respiratoires Le dosage des TrueScience RespiFinder Identification Panels inclut une phase de transcription inverse PCR combin e pour convertir un ARN viral en ADN compl mentaire et pour amplifier l ADN ADNc cible une phase d hybridation de sonde et une phase de ligature amplification de sonde Un Internal Amplification Control IAC est inclus dans le dosage afin de diff rencier les chantillons vrais n gatifs des faux n gatifs g n r s par une d gradation d acide nucl ique une inhibition de PCR ou des erreurs de manipulation Les cibles peuvent tre d tect es via l analyse d un fragment d identification ADN utilisant l lectrophor se capillaire Pour plus d informations voir le TrueScience RespiFinder Identification Panels Protocol PN 4460429 Nombre Gamme de Panel Agents pathog nes d tect s d ensembles de tailles de sonde
3. 15 pL Passer bri vement au vortex le RT PCR Mix placer 15 uL dans des tubes PCR de 0 2 mL puis fermer les tubes Conserver les tubes PCR sur de la glace 3 Fiche de consultation rapide de TrueScience RespiFinder Identification Panels Pr parer et pipetter Le Probe Hybridization Mix a D geler le Dilution Buffer le Hybridization Buffer et le Probe Mix puis conserver ces l ments sur de la glace Pr parer une quantit suffisante de Probe Hybridization Mix pour le nombre d chantillons traiter plus un volume suppl mentaire pour les pertes se produisant pendant le pipettage Remarque Imm diatement avant utilisation passer chaque r actif au vortex et Le centrifuger bri vement Composants du Probe Hybridization Mix Volume par r action Dilution Buffer 3 0 uL Hybridization Buffer 1 5 uL Probe Mix 1 5 uL Volume total de Probe Hybridization Mix par 6 0 uL r action Pipetter 6 uL de Probe Hybridization Mix dans de nouveaux tubes PCR de 0 2 mL fermer les tubes puis conserver les tubes PCR 4 C jusqu utilisation Configurer et r aliser une transcription inverse et PCR Ajouter 10 uL de mod le d acide nucl ique total chaque tube PCR qui contient 15 uL de RT PCR Mix Bien m langer le contenu en retournant doucement la pipette puis centrifuger bri vement Conserver les tubes PCR sur de la glace jusqu au pr chauffage du cycleur thermique Remarqu
4. IN NO EVENT SHALL APPLIED BIOSYSTEMS BE LIABLE WHETHER IN CONTRACT TORT WARRANTY OR UNDER ANY STATUTE OR ON ANY OTHER BASIS FOR SPECIAL INCIDENTAL INDIRECT PUNITIVE MULTIPLE OR CONSEQUENTIAL DAMAGES IN CONNECTION WITH OR ARISING FROM THIS DOCUMENT INCLUDING BUT NOT LIMITED TO THE USE THEREOF WHETHER OR NOT FORESEEABLE AND WHETHER OR NOT APPLIED BIOSYSTEMS IS ADVISED OF THE POSSIBILITY OF SUCH DAMAGES Symboles utilis s sur les tiquettes et les emballages FABRICANT NOMBRE DE TESTS 15 C i CONSULTER LE MODE D EMPLOI 25 STOCKER LA TEMP RATURE INDIQU E z UTILISER AVANT LA DATE INDIQU E R F RENCE CATALOGUE LOT NUM RO DE LOT Life Technologies Ltd 7 Kingsland Grange Woolston Warrington WA1 4SR United Kingdom www appliedbiosystems com respifinderlit NOTICE TO PURCHASER This product is a RespiFinder product manufactured by PathoFinder B V in Maastricht The Netherlands within quality systems accredited to 15013485 2003 These products are sold for use by the end user only and may not be re sold distributed or re packaged LIMITED USE LABEL LICENSE No right to resell this product or any of its components is conveyed expressly by implication or by estoppel For information on obtaining additional rights please contact outlicensingfalifetech com or Out Licensing Life Technologies 5791 Van Allen Way Carlsbad California 92008 Trademarks The trademarks mentioned herein are the property of Life Technol
5. aide des trois programmes suivants 1 Transcription inverse et 2 Programme d hybridation 3 Ligature et pragramme PCR programme PCR de sonde Dur e Dur e Dur e Phase Temp Phase Temp Phase Temp mm ss mm ss mm ss Transcription 50 C 30 00 D naturation 98 C 10 00 Ligature de 54 C 15 00 inverse ADN sonde Activer 95 C 15 00 Hybridation de 60 C 60 00 D naturation 95 C 2 00 d marrage sonde initiale chaud Taq Cyclage 94 C 00 30 Pause 60 C Passer Cyclage 94 C 0 30 30 cycles 55 C 00 30 directe 33 cycles 60 C 0 30 ment la 120 01 00 phase 296 1 00 Pause 20 C Passer suvanie Pause 20 C Passer directement la directement phase suivante l lectrophor se ou stockert capillaire ou stocker Stocker 4 C pendant un maximum de 1 semaine ou 20 C pour des p riodes plus longues Fiche de consultation rapide de TrueScience RespiFinder Identification Panels Configuration du logiciel de collecte de donn es Avant d utiliser les TrueScience RespiFinder Identification Panels pour la premi re fois configurer 3130 3130x1 Data Collection Software v3 0 ou v3 1 ou 3500 Data Collection Software v1 0 Pour obtenir des instructions se reporter au TrueScience RespiFinder Identification Panels Software Setup and Data Analysis User Guide PN 4460428 Pour t l charger le manuel de l utilisateur voir www appliedbiosyste
6. applied ce biosystems by Life technologies TrueScience RespiFinder Identification Panels FICHE DE CONSULTATION RAPIDE AN Pour obtenir des instructions en mati re de s curit et de risques biologiques consulter la section Safety du TrueScience RespiFinder Identification Panels Protocol PN 4460429 Pour les avertissements et pr cautions consulter TrueScience RespiFinder Identification Panels Product Insert PN 4460486 Concernant tous les produits chimiques lire la fiche signal tique et suivre les consignes de manipulation Porter des protections oculaires des gants et des v tements appropri s Pour plus d informations sur TrueScience RespiFinder Identification Panels voir www appliedbiosystems com respifinderlit Pour t l charger les manuels de l utilisateur TrueScience RespiFinder Identification Panels voir www appliedbiosystems com respifinderlit puis s lectionner l onglet Literature Support Cette fiche de consultation rapide traite des sujets suivants E PNR RE RS a ee ee Ce a ae A i aa ana den ne E Description et principes du produit 4322424 remani rer ia n oa a pet donnons dre e ins n Dire 1 E Utilisation Dr vue scaune me banane eee SAR EN RE a antenne Da rende b ta a at 2 M ASSISTANCR 22522 a ama asa n tt fript a dede 0 a E a ct Ge ERP n 8 RE Out BALE li d np are 2 M Avant de commencer procedures non r p titives nn ae 2 E Procedure insu tas dans d ina aide la
7. d une infection virale ou bact rienne des voies respiratoires Des r sultats n gatifs ne doivent pas tre utilis s comme seule base pour un diagnostic un traitement ou autres d cisions th rapeutiques Des r sultats positifs n excluent pas une co infection avec d autres agents pathog nes Le ou les agents pathog nes d tect s peuvent ne pas tre la cause precise d une pathologie D autres tests de laboratoire et l valuation d une pr sentation clinique doivent tre inclus dans le diagnostic final Des caract ristiques de performance ont t tablies avec des panels EQA valid s sur www qemd org Ce produit est destin un usage par des professionnels des laboratoires et est con u pour une utilisation avec certains instruments et logiciels d analyse de donn es Life Technologies Assistance Pour obtenir les derni res informations sur les services et le support technique dans tous les pays visiter le site www appliedbiosystems com et cliquer sur Support ou bien contacter le repr sentant Life Technologies local Avant de commencer proc dures non r p titives Pr paration des zones de travail Pour emp cher la contamination il est fortement recommand de r aliser les activit s exp rimentales dans des zones s par es Se reporter au TrueScience RespiFinder Identification Panels Protocol PN 4460429 pour obtenir de plus amples informations Programmation du cycleur thermique Programmer le cycleur thermique l
8. e Si les proc dures de laboratoire internes imposent la r alisation d un contr le n gatif ajouter 0 25 uL d Internal Amplification Control 10 uL d eau exempte de DNase RNase puis ajouter ce m lange dans un tube PCR contenant 15 uL de RT PCR Mix Lancer le programme du cycleur thermique Transcription inverse PCR Lorsque la temp rature atteint 50 C placer les tubes PCR dans le cycleur thermique Configurer et r aliser une hybridation de sonde Ajouter 100 uL d eau st rile non fournie chaque r action transcription inverse PCR puis bien m langer en retournant doucement la pipette Ajouter 2 uL de la r action transcription inverse PCR dilu e chaque tube qui contient 6 uL de Probe Hybridization Mix puis centrifuger bri vement Placer les tubes PCR dans le cycleur thermique puis r aliser le programme d hybridation de sonde IMPORTANT Au cours des 60 derni res minutes d hybridation de sonde pr parer le TwoStep Mix Apr s l hybridation de sonde proc der imm diatement la ligature puis la r alisation PCR Maintenir les tubes PCR dans le cycleur thermique 60 C jusqu tre pr t proc der la ligature et la r alisation PCR En cours d hybridation de sonde Pr parer le TwoStep Mix a b Au cours des 60 derni res minutes d hybridation de sonde pr parer le TwoStep Mix Degeler le TwoStep Buffer puis le conserver sur de la glace Pr parer une quantit suffisan
9. ms com respifinderlit puis s lectionner l onglet Literature Support Proc dure 1 Extraire les acides nucl iques totaux puis ajouter Internal Amplification Control IAC aux chantillons lys s Collecter des chantillons cliniques Se reporter au TrueScience RespiFinder Identification Panels Protocol PN 4460429 pour obtenir des directives Recommand Pr chauffer les chantillons s ils sont visqueux et ou contiennent des composants cellulaires solides Se reporter au TrueScience RespiFinder Identification Panels Protocol PN 4460429 pour obtenir des informations Extraire les acides nucl iques totaux ARN et ADN l aide d une m thode d extraction ad quate en suivant les instructions du fabricant Se reporter au TrueScience RespiFinder Identification Panels Protocol PN 4460429 pour consulter des m thodes d extraction valid es Pour la plupart des m thodes d extraction il est recommand d utiliser 200 uL de mat riau d amp chantillon et d eluer dans 100 uL de tampon d lution Apr s incubation de l chantillon avec le tampon de lyse ajouter Internal Amplification Control IAC puis bien m langer Ajouter 5 uL d IAC pour chaque 100 uL de tampon d lution IMPORTANT Pour tous les protocoles d extraction ajouter l IAC apr s que Lincubation de l chantillon avec le tampon de lyse est termin e L ajout d IAC au m lange chantillon tampon de lyse avant la fin de Lincubation peut entra
10. ner une d gradation de l IAC par les RNase et DNase dans l chantillon g n rant de faux n gatifs Le tampon de lyse inhibe les RNase et DNase et emp che la d gradation de l IAC 2 Pr parer et pipetter le RT PCR Mix C D geler les l ments suivants puis les conserver sur de la glace e Mod le d acide nucl ique total ARN et ADN e Pre Amplification Primer Mix e Dilution Buffer e dNTP Mix e 5X RT PCR Buffer Pr parer une quantit suffisante de RT PCR Mix pour le nombre d chantillons traiter plus un volume suppl mentaire pour les pertes se produisant pendant le pipettage Lors de la pr paration du m lange suivre les directives de manipulation sp cifiques ce r actif e Pour le RT PCR Enzyme Mix sortir le m lange du stockage imm diatement avant le pipettage Centrifuger le m lange pendant 5 secondes puis m langer en retournant doucement la pipette Utiliser des embouts de pipette faible r tention lors de la manipulation du m lange Replacer le m lange dans le lieu de stockage imm diatement apr s utilisation e Pour tous les autres r actifs et pour le mod le d acide nucl ique total imm diatement avant utilisation passer les tubes au vortex et les centrifuger bri vement Composants du RT PCR Mix Volume par r action Dilution Buffer 5 5 uL 5X RT PCR Buffer 5 0 uL Pre Amplification Primer Mix 2 5 pL dNTP Mix 1 0 uL RT PCR Enzyme Mix 1 0 uL Volume total de RT PCR Mix par r action
11. ogies Corporation or their respective owners RespiFinder is a registered trademark of PathoFinder B V CE vo LES TRUESCIENCE RESPIFINDER IDENTIFICATION PANELS SONT FOURNIS POUR DES TESTS DE DIAGNOSTICS IN VITRO PROFESSIONNELS CE PRODUIT NE FOURNIT PAS UNE LICENCE PERMETTANT D EX CUTER PCR CONFORM MENT AUX BREVETS D TENUS PAR UN TIERS DONT HOFFMANN LA ROCHE HOFFMANN LA ROCHE LTD DIAGNOSTICS CH 4070 BASEL SWITZERLAND ET ROCHE MOLECULAR SYSTEMS INC ROCHE MOLECULAR SYSTEMS INC 1145 ATLANTIC AVENUE ALAMEDA CALIFORNIA 94501 Le client est responsable de la validation des dosages et de la conformite avec les exigences reglementaires applicables aux procedures et utilisations des produits RespiFinder 461372 6 2011 Life Technologies Corporation All rights reserved Part Number 4461372 Rev B 07 2011 Translated from the English PN 4460430 Rev A a lied Headquarters Technical Resources and Support pp 5791 Van Allen Way Carlsbad CA 92008 USA For the latest technical resources and support information biosyste m S Phone 760 603 7200 for all locations please refer to our Web site at www lifetechnologies com www appliedbiosystems com by Lie technologies
12. p and Data Analysis User Guide PN 4460428 Life Technologies recommande chaque laboratoire de d velopper ses propres proc dures et crit res d interpr tation et de rapports Fiche de consultation rapide de TrueScience RespiFinder Identification Panels Fiche de consultation rapide de TrueScience RespiFinder Identification Panels Not for sale in U S A Avis de non responsabilit Les r sultats obtenus l aide de ces panels de diagnostic ou de tout autre doivent tre utilis s et interpr t s uniquement dans le contexte du tableau clinique global Life Technologies ne peut accepter aucune part de responsabilit pour aucune d cision clinique prise Life Technologies ne pr sente pas ce guide comme r sum complet de tous les r sultats possibles li s l utilisation des TrueScience RespiFinder Identification Panels Ce guide est con u uniquement pour une utilisation en tant qu aide memoire Il ne peut tre utilis pour aucune interpr tation clinique des r sultats d un dosage Les laboratoires doivent interpr ter et rapporter les r sultats du dosage conform ment leurs propres proc dures d velopp es localement Information in this document is subject to change without notice APPLIED BIOSYSTEMS DISCLAIMS ALL WARRANTIES WITH RESPECT TO THIS DOCUMENT EXPRESSED OR IMPLIED INCLUDING BUT NOT LIMITED TO THOSE OF MERCHANTABILITY OR FITNESS FOR A PARTICULAR PURPOSE TO THE FULLEST EXTENT ALLOWED BY LAW
13. rer les r actions de l hybridation de sonde pour la ligature et PCR 1 Sortir les r actions d hybridation de sonde du cycleur thermique 2 Ajouter 32 uL de TwoStep Mix chaque 8 uL de r action d hybridation de sonde 3 Remettre les tubes dans le cycleur thermique Remarque En cas de r alisation d un grand nombre de r actions r aliser la phase 7c par lots Par exemple en cas d utilisation de tubes 8 bandes sortir 8 r actions ajouter le TwoStep Mix puis replacer les tubes dans le cycleur thermique avant de sortir les 8 r actions suivantes Red marrer imm diatement le programme de ligature et PCR mis en pause Proc der une lectrophor se capillaire Combiner un talon de masse du formamide et un produit PCR 1 Combiner les l ments suivants puis m langer soigneusement Pr parer un volume suffisant pour le nombre d chantillons traiter plus un volume suppl mentaire pour les pertes se produisant pendant le pipettage Volume par r action Composants du Size Standard Mix produit PCR ou reference marker GeneScan 600 LIZ Size Standard PN 4366589 0 5 uL Hi Di Formamide PN 4311320 10 0 uL Volume total de Size Standard Mix par 10 5 pL r action 2 Dans une plaque optique 96 puits pipetter 10 5 uL du Size Standard Mix dans chacun des nombre requis de puits 3 Recommand Pipetter 1 uL de Reference Marker FAM dans un des puits contenant le Size Standard
14. s cibles sonde TrueScience RespiFinder 15 14 virus ARN et 1 virus ADN 15 plus IAC 163 498 Viral Identification Panel nucl otides TrueScience RespiFinder 19 14 virus ARN 1 virus ADN et 4 bact ries 19 plus IAC Pathogen Identification Panel Fiche de consultation rapide de TrueScience RespiFinder Identification Panels Utilisation pr vue Les TrueScience RespiFinder Identification Panels sont des essais qualitatifs multiparam tres con us pour d tecter et identifier simultan ment des agents pathog nes respiratoires communs partir d acides nucl iques totaux purifi s L chantillon d entr e est constitu d acides nucl iques totaux extraits et purifi s issus de s cr tions rhinopharyng es pr lev es par couvillonnage d aspirations nasales d expectorations et de lavages broncho alv olaires LBA sur des patients suspect s de souffrir d infections des voies respiratoires La pr paration d chantillons cliniques est un processus distinct du champ d action des panels Utiliser des m thodes ou des produits adapt s pour manipuler les chantillons puis extraire et purifier les acides nucl iques Les TrueScience RespiFinder Identification Panels contribuent poser le diagnostic d infection des voies respiratoires lorsqu ils sont utilis s conjointement avec d autres r sultats cliniques et de laboratoire Des r sultats n gatifs ne sont pas forc ment le signe de l absence
15. te de TwoStep Mix pour le nombre d chantillons traiter plus un volume suppl mentaire pour les pertes se produisant pendant le pipettage Conserver le m lange sur de la glace jusqu utilisation Lors de la pr paration du m lange suivre les directives de manipulation sp cifiques ce r actif e Pour Ligase Enzyme et Taq Polymerase sortir chaque r actif du stockage imm diatement avant le pipettage Centrifuger chaque r actif pendant 5 secondes puis m langer chaque r actif en retournant doucement la pipette Utiliser des embouts faible r tention lors de la manipulation de ces r actifs Replacer les r actifs dans le lieu de stockage imm diatement apr s utilisation Fiche de consultation rapide de TrueScience RespiFinder Identification Panels e Passer au vortex et centrifuger bri vement le TwoStep Buffer avant le pipettage Composants du TwoStep Mix Volume par r action TwoStep Buffer 30 6 uL Ligase Enzyme 1 0 uL Taq Polymerase 0 4 uL Volume total de TwoStep Mix par reaction 32 0 uL Imm diatement apr s Uhybridation de sonde Configurer et realiser la ligature et PCR Imm diatement apr s la r alisation de l hybridation de sonde a Arr ter le programme d hybridation de sonde et d marrer imm diatement le programme de ligature et PCR Lorsque le cycleur thermique atteint 54 C appuyer sur Pause pour maintenir la temperature du bloc du cycleur thermique 54 C Pr pa
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