Système FlashGel
Contents
1. 34 50 100 150 200 300 500 800 1 500 bp Taille Format 500 ul Pr t charger Recommand pour les cassettes double plateau Tailles des bandes 100 300 500 800 1 500 3 000 bp 250 ul Pr t charger Tailles des bandes 100 250 400 800 1 500 Comprend Cuve FlashGel bo te de 9 cassettes pour ADN agarose 1 2 puits 12 1 plateau simple 1 mi Colorant de charge FlashGel et 150 ul marqueur pour ADN FlashGel Taille Format Agarose 1 2 puits 12 1 plateau simple Agarose 1 2 puits 16 1 double plateau Substance tampon de d naturation d chantillon d ARN contient du bleu de bromoph nol et du xyl ne cyanol 5x1iml Substance tampon pour chantillon d ARN natif 5 x flacons 1 ml concentration 5X No de Description r f rence 50577 Marqueur pour ARN FlashGel 51200 Eau biologique mol culaire AccuGENE exempte de DNase RNase 57024 Trousse de d marrage pour ARN FlashGel Syst me de r cup ration FlashGel No de Description r f rence 57051 Cassettes de r cup ration FlashGel 57060 Substance tampon de r cup ration FlashGel 57050 Trousse de r cup ration FlashGel 35 Taille Format 0 5 bp 9 Kb 50 ug 1 ug ml Pour remplir les puits d chantillons et diluer PARN 1 litre Comprend Bo te de 9 cassettes pour ARN agarose 1 2 puits 12 1 plateau simple substance tampon au formald hyde marqueur pour ARN FlashGel2. l usage fr quent les dommages caus s par la corrosion d un solvant les dommages caus s par une mauvaise manipulation ou une modification par l utilisateur ou une performance insatisfaisante d coulant de conditions ind pendantes de notre volont Lonza Rockland Inc ne sera en aucun cas responsable de dommages indirects ou cons cutifs y compris mais sans s y limiter la perte de profit la perte de revenus la perte d occasions d affaires la perte d utilisation et autres dommages li s occasionn s d une fa on ou d une autre ni de tout dommage d coulant de la mauvaise utilisation du produit Renseignements sur la licence et la marque de commerce Certains l ments et technologies du syst me FlashGel sont vendus sous licence Le colorant d acide nucl ique de ce produit est fabriqu et vendu sous licence par Molecular Probes Inc et la cassette FlashGel est vendue sous licence par Invitrogen IP Holdings Inc aux seules fins d application en recherche et contr le de la qualit et fait l objet de brevets en instance ou d pos s Dark Reader est une marque de commerce de Clare Chemical Research Inc La technologie de la cuve FlashGel comprend la technologie du transilluminateur Dark Reader de Clare Chemical Research Inc et fait l objet des brevets am ricains 6 198 107 6 512 236 et 6 914 250 La technologie de l lectrophor se est autoris e en vertu d une licence attribu e par Temple University et fait l ob
3. Mode d emploi du Syst me pour ARN FlashGel Introduction Le Syst me FlashGel est recommand pour la s paration rapide et l analyse de l ARN y compris JM e La v rification et l analyse de l ARN totale de 0 5 Kb 9 Kb e La v rification de la d gradation de l ARN e La v rification rapide de l ARN natif Les fragments s par s gr ce au syst me FlashGel peuvent tre photographi s en utilisant l appareil photo FlashGel ou d autres syst mes de documentation standards Les cassettes pour ARN FlashGel r cup ration ne sont pas recommand es pour la Renseignements importants Conditions de traitement et r solution Le Syst me FlashGel est con u pour la s paration rapide haute tension Les cassettes peuvent tre trait es une tension plus basse pendant une plus longue dur e pour am liorer la s paration des fragments ayant un poids mol culaire plus lev Surveiller le traitement et optimiser les conditions Les fragments seront trait s plus rapidement dans une cuve chaude R duire le temps de traitement ou abaisser la tension au besoin Consulter le tableau 1 pages 8 et 9 au sujet des conditions de traitement recommand es Visualisation des bandes sur la cuve FlashGel L ARN et les bandes de marqueurs seront visibles sur la cuve illumin e sous un clairage normal de laboratoire Le degr de visibilit peut varier selon l intensit de l clairage dans le laboratoire On peut mieux
4. et eau biologique mol culaire AccuGENE Cuve vendue s par ment Taille Format Agarose 1 2 puits 8 1 double plateau 2 x flacons 500 ul Comprend Bo te de 9 cassettes de r cup ration agarose 1 2 puits 8 1 double plateau colorant de charge FlashGel substance tampon de r cup ration FlashGe QuantLadder FlashGel fragment t moin lunettes de visualisation FlashGel masque FlashGel Cuve vendue s par ment TM 3 Notes 36 Garantie et responsabilit Ce produit a t fabriqu en utilisant les normes de pratique les plus lev es relatives aux mat riaux la qualit d ex cution et la conception Lonza Rockland Inc garantit que le produit a t test et qu il atteint et d passe les sp cifications publi es Cette garantie est valide seulement si le produit est utilis et entretenu selon les directives fournies Lonza Rockland Inc garantit que ce produit est exempt de tout d faut de mat riaux et de qualit de l ex cution dans le cadre d une utilisation normale pendant un an compter de la date d exp dition Si le produit s av re d fectueux pendant cette p riode Lonza Rockland Inc le r parera ou le remplacera sa discr tion gratuitement si le produit lui est retourn port pay Cette garantie ne couvre pas les dommages durant le transport les dommages caus s par un manque de prudence un usage abusif ou la n gligence l usure normale due
5. e de traitement plateau simple 275 V pendant 2 7 minutes double plateau 275 V pendant 2 5 minutes A plateau simple 225 V pendant 4 8 minutes double plateau 225 V pendant 3 5 minutes 275 V pendant le temps n cessaire pour l lectrophor se des bandes vers les puits de r cup ration varie selon les fragments partir de 3 minutes Dur e maximale de traitement 12 14 minutes Concentration et volume r cup r s S O S O La r cup ration des chantillons est habituellement de 80 90 selon le fragment Le volume de r cup ration est habituellement de 15 50 ul Marqueurs recommand s Cassettes 1 2 Marqueurs FlashGel pour ADN de 100 bp 4 Kb Cassettes 2 2 Marqueurs FlashGel pour ADN de 50 bp 1 5 Kb Cassettes double plateau Marqueurs FlashGel pour ADN de 100 bp 3 Kb Marqueurs FlashGelTM pour ARN de 0 5 Kb 9 Kb Marqueurs FlashGel pour ADN de 100 bp 3 Kb QuantLadder FlashGel 100 bp 3 Kb Cassettes 2 2 Marqueurs FlashGe pour ADN de 50 bp 1 5 Kb TM Mode d emploi du Syst me FlashGel pour ADN Introduction Le Syst me FlashGe l analyse de l ADN M est recommand pour la s paration rapide et Cassettes pour ADN FlashGel e S lection de l ampleur ou de l analyse quantitative du PCR ou des fragments de restriction de 10 bp 10
6. e Humidit 15 85 d humidit relative sans condensation Nettoyage entretien et limination Proc dure de nettoyage MISE EN GARDE Pour viter l exposition accidentelle une haute tension ne pas nettoyer la cuve alors qu elle est branch e l alimentation haute tension Nettoyer la cuve FlashGel Entretien avec un linge humect avec de l eau ou un d tergent doux Ne pas immerger Inspectez la cuve avant de l utiliser pour des signes d usure des fissures ou des d g ts Ne pas utiliser si un dommage est constat Il n y a aucune pi ce r parable par l utilisateur dans la cuve FlashGelTM limination Le colorant utilis dans les cassettes FlashGel est un agent mutag ne potentiel Suivre les directives de l Etat provinciales et locales pour l limination de cette mati re Sp cifications Gamme de s paration Cassettes pour ADN 1 2 Cassettes pour ADN 2 2 Cassettes pour ARN 1 2 Cassettes de r cup ration 1 2 Cassettes de r cup ration 2 2 Entreposage des cassettes Cassettes pour ADN Cassettes pour ARN Cassettes de r cup ration Volume du puits Puits 12 1 Puits 16 1 Puits 8 1 50 bp 4 Kb jusqu 10 Kb pour les temps de traitement plus longs 10 bp 1 Kb 0 5 Kb 9 Kb 50 bp 4 Kb 10 bp 1 Kb 18 C 26 C pendant 5 mois partir de la date de fabrication Veuillez vous renseigner 18 C 26 C penda
7. exempte de RNase Incliner la cassette et utiliser un linge non pelucheux ou un petit morceau de papier buvard pour retirer l exc s de liquide Ne pas ponger les puits directement REMARQUE Pour de meilleurs r sultats remplir les puits avec de l eau biologique mol culaire AccuGENE n de r f 51200 AMISE EN GARDE Pour viter l exposition accidentelle une haute tension ne pas remplir les puits alors que la cassette est branch e l alimentation haute tension 5 Placer la cassette dans la cuve et la faire glisser en place la cassette devrait se mettre en place solidement dans la cuve AMISE EN GARDE Pour viter l exposition accidentelle une haute tension ne pas charger les chantillons alors que la cassette est branch e l alimentation haute tension 6 Charger les chantillons et les marqueurs Consulter le tableau 1 pages 8 et 9 au sujet de la pr paration des chantillons et les marqueurs recommand s MISE EN GARDE Utiliser le masque FlashGel pour bloquer la lumi re du deuxi me plateau lors de l utilisation des cassettes double plateau 7 Brancher l alimentation basse tension la cuve en ins rant le fil dans le r ceptacle au dos de la cuve et en la branchant l alimentation lectrique Cela fournit l alimentation lectrique la source d clairage 21 8 Allumer la lumi re de la cuve en appuyant sur le bouton orange situ sur le dessus de l appa
8. lectrique et r gler la puissance selon la tension recommand e tableau 1 pages 8 et 9 REMARQUE Les courants de d marrage types devrait varier de 20 25 mA REMARQUE L expression d un peu de substance tampon hors des puits est normale Porter des gants une blouse de laboratoire et des lunettes de s curit lors de la manipulation 28 10 Proc der au traitement en surveillant la migration de l chantillon ou des chantillons r cup rer Juste avant que le ou les chantillons d sir s n atteignent les puits de r cup ration 2 plateau couper l alimentation et d brancher les c bles haute tension Ne pas retirer la cassette de la cuve AMISE EN GARDE Manipuler ou toucher les cassettes seulement 11 12 13 14 apr s avoir coup la tension et d branch les fils ponger l exc s de substance tampon du ou des puits de r cup ration et ajouter 20 ul de substance tampon de r cup ration FlashGel dans chaque puits Retirer le masque FlashGel rebrancher les c bles d alimentation et remettre en marche Utiliser les lunettes de visualisation FlashGel pour observer la migration de la bande d ADN Traiter jusqu ce que la bande r cup rer soit entr e dans le puits de r cup ration et que le bord avant de la bande se soit d plac jusqu au bord du puits de r cup ration REMARQUE Pour la r cup ration de plus d un fragment du gel r cup rer d abord le
9. mettre en place solidement dans la cuve Ins rer le masque FlashGel sous le deuxi me plateau du puits afin de minimiser la 27 lumi re qui passe travers les puits et augmenter la facilit d observation lorsque les chantillons se s parent AMISE EN GARDE Pour viter l exposition accidentelle une haute tension ne pas charger les chantillons alors que la cassette est branch e l alimentation haute tension MISE EN GARDE Utiliser le masque FlashGel pour bloquer la lumi re du deuxi me plateau lors de l utilisation des cassettes de r cup ration 6 Charger les chantillons et les marqueurs Consulter le tableau 1 pages 8 et 9 au sujet de la pr paration des chantillons et les marqueurs recommand s REMARQUE Utiliser le fragment t moin FlashGel pour surveiller la r cup ration 7 Brancher l alimentation basse tension la cuve en ins rant le fil dans le r ceptacle au dos de la cuve et en la branchant l alimentation lectrique Cela fournit l alimentation lectrique la source d clairage 8 Allumer la lumi re de la cuve en appuyant sur le bouton orange situ sur le dessus de l appareil REMARQUE La lumi re s teindra automatiquement apr s 10 minutes Rallumer en appuyant sur le bouton orange AMISE EN GARDE Manipuler ou toucher les cassettes seulement apr s avoir coup la tension et d branch les fils 9 Brancher les fils haute tension l alimentation
10. plus petit fragment Couper l alimentation d brancher les fils et utiliser une pipette pour retirer le tampon de r cup ration contenant l ADN REMARQUE La quantit r cup r e ne correspondra pas tout fait aux 20 ul charg s dans le puits AMISE EN GARDE Porter des gants une blouse de laboratoire et des lunettes de s curit pour la manipulation des cassettes FlashGel 15 Pour la r cup ration de grandes quantit s d ADN sup rieures 350 ng il peut tre n cessaire de r p ter le cycle d lectrophor se r cup ration afin de r cup rer le maximum d ADN Au besoin ajouter 20 ul suppl mentaire de substance tampon de r cup ration FlashGelTM et recommencer le traitement jusqu ce que l chantillon se soit d plac jusqu au bord du puits de r cup ration ensuite r cup rer R p ter au besoin en prenant soin de toujours 29 16 teindre l appareil et de d brancher les fils avant de r cup rer les chantillons REMARQUE La capacit du tampon de la cassette de r cup ration FlashGel supportera environ 12 14 minutes de temps de traitement total 275 V Prendre soin d viter un temps de traitement excessif lors de la r cup ration de plusieurs fragments ou de fragments exceptionnellement gros La r cup ration d un chantillon peut tre rapidement valu e en utilisant le Syst me pour ADN FlashGel standard et le QuantLadder FlashGel Pr parer l chantil
11. re seulement apr s la mise en place de la cassette Ne pas regarder directement la lumi re MISE EN GARDE Utiliser le masque FlashGel pour bloquer la lumi re du deuxi me plateau lors de l utilisation des cassettes F lashGel double plateau ou de r cup ration Porter des gants une blouse de laboratoire et des lunettes de s curit lors de la manipulation des cassettes FlashGel Le gel et la substance tampon des cassettes FlashGel contiennent un colorant de gels l acide nucl ique exclusif qui est un agent mutag ne potentiel Suivre les directives de l tat provinciales et locales pour la manipulation et l limination de ces mati res AMISE EN GARDE Pour viter l exposition accidentelle une haute tension ne pas inverser les lectrodes afin de traiter les chantillons l envers Conditions d utilisation de la cuve FlashGel Limites maximales Appareil d lectrophor se alimentation en courant continu haute tension de 0 300 V CC Puissance de 15 watts Courant de 50 mA Eclairage de la cuve alimentation en courant continu basse tension de 18 V CC Conditions ambiantes Conditions d utilisation e Temp rature 15 C 35 C e Humidit 15 85 d humidit relative sans condensation e Utilisation exclusivement l int rieur Altitude maximale 2000 m Conditions d entreposage et d exp dition cuve FlashGel e Temp rature 2 C 60 C
12. ul 5 X colorant de charge FlashGel Directives pour le traitement du gel AMISE EN GARDE Porter des gants un sarrau de laboratoire et des lunettes de s curit pour la manipulation des cassettes FlashGel 1 Pr parer les chantillons Consulter le tableau 1 pages 8 et 9 au sujet de la pr paration recommand e pour les chantillons 2 Ouvrir le sachet et sortir la cassette REMARQUE Si la cassette est humide l essuyer avec un linge propre REMARQUE Il peut y avoir des poches d air entre le gel et la cassette Cela n affectera pas la migration des bandes 3 Placer la cassette sur une surface plane et tirer sur la languette pour retirer le mat riau de scellement blanc du puits Ne pas enlever le mat riau de scellement transparent qui recouvre du trou d a ration lat ral 4 Remplir les deux plateaux des puits avec de l eau distill e ou d sionis e Incliner la cassette et utiliser un linge non pelucheux ou un petit morceau de papier buvard pour retirer l exc s de liquide Ne pas ponger les puits directement REMARQUE Pour de meilleurs r sultats remplir les puits avec de l eau biologique mol culaire AccuGENE n de r f 51200 AMISE EN GARDE Pour viter l exposition accidentelle une haute tension ne pas remplir les puits alors que la cassette est branch e l alimentation haute tension 5 Placer la cassette dans la cuve et la faire glisser en place la cassette devrait se
13. Kb e Confirmation de l amplification par PCR La s paration des fragments d ADN peut tre surveill e en temps r el la table de laboratoire sans recourir un clairage ultraviolet Les fragments s par s gr ce au syst me FlashGel peuvent tre photographi s avec l appareil photo FlashGel ou avec d autres syst mes de documentation standards Les cassettes pour ADN FlashGel ne sont pas recommand es pour la r cup ration Utiliser les cassettes de r cup ration FlashGel page 25 pour r cup rer l ADN Renseignements importants Conditions de traitement et r solution Le syst me FlashGel est con u pour la s paration rapide haute tension de fragments de 10 bp 10 Kb Les cassettes peuvent tre trait es une tension plus basse pendant une plus longue dur e pour am liorer la s paration des fragments gt 4 Kb page 18 Surveiller le traitement et optimiser les conditions Les fragments seront trait s plus rapidement dans une cuve chaude R duire le temps de traitement ou abaisser la tension au besoin Consulter le tableau 1 pages 8 et 9 au sujet des conditions de traitement recommand es Visualisation des bandes sur la cuve FlashGel L ADN et les bandes de marqueur seront visibles sur la cuve illumin e sous un clairage normal de laboratoire Le degr de visibilit peut varier selon l intensit de l clairage g n ral dans le laboratoire On peut mieux observer les bandes en regardant la
14. Lonza Syst me FlashGel Lonza Rockland Inc www lonza com scientific support lonza com Assistance scientifique 800 521 0390 Service la client le 800 638 8174 Rockland ME 04841 Table des mati res Renseignements importants sur la s curit Nettoyage et limination Sp cifications Guide de d marrage rapide du Syst me FlashGel Mode d emploi du Syst me FlashGel pour ADN Mode d emploi du Syst me FlashGel pour ARN Mode d emploi du Syst me de r cup ration FlashGel Renseignement pour commander le Syst me FlashGel Garantie et responsabilit Renseignements sur la licence et la marque de commerce 10 19 25 33 37 37 Syst me FlashGel Renseignements importants sur la s curit Symboles de s curit Les symboles suivants avertissent l utilisateur des exigences importantes relatives au fonctionnement l entretien ou la garantie ou l exposition possible des dangers Ce symbole indique une mise en garde g n rale ou un avertissement pour l utilisateur Y compris mais non limit une exposition dangereuse des rayons ou des produits chimiques Ce symbole indique un avertissement d exposition potentielle des tensions dangereuses dont le contact peut entra ner la mort ou des blessures graves MISE EN GARDE Tension dangereuse Le contact peut causer la mort ou une blessure grave Faire preuve de prudence en utilisant ce syst me car il peut produire une te
15. N ou pour ARN standards traiter selon la dur e recommand e ou jusqu ce que la s paration des fragments d sir s soit termin e Dans le cas d une utilisation de cassettes de r cup ration traiter et observer la migration de l chantillon juste avant que l chantillon d sir atteigne le puits de r cup ration 2 plateau arr ter le traitement et d brancher les c bles haute tension effectuer les tapes 9 13 ponger l exc s de substance tampon du ou des puits de r cup ration et ajouter 20 ul de substance tampon de r cup ration FlashGel Retirer le masque FlashGel rebrancher les c bles d alimentation et remettre en marche Utiliser les lunettes de visualisation FlashGel pour observer la migration de la bande Lorsque la bande d sir e a migr au centre du puits de r cup ration couper l alimentation et d brancher les c bles lectriques Utiliser une pipette pour retirer d licatement la substance tampon de r cup ration qui contient l ADN du puits de r cup ration Au besoin le processus ajout de substance tampon de r cup ration lectrophor se et r cup ration peut tre r p t pour augmenter la r cup ration une charge ADN plus lev e Photographier l aide de l appareil photo FlashGel ou d un autre appareil photo et du transilluminateur standard Tableau 1 Pr paration des chantillons et conditions de traitement recommand es Cassettes pour ADN Casse
16. Ne pas ponger les puits directement Seuil de sensibilit de l ARN Le Syst me FlashGel utilise un colorant exclusif qui est de 5 20 fois plus sensible que le colorant au bromure d thidium et qui d tectera des quantit s d ARN inf rieures 10 ng par bande Pour l ARN d natur diluer les chantillons avec une substance tampon de formald hyde de mani re ce qu un chantillon de 5 ul contienne au plus 200 ng d ARN par bande Pour l ARN natif diluer les chantillons avec le colorant de charge FlashGel de mani re ce qu un chantillon de 5 ul contienne au plus 200 ng d ARN par bande Directives pour le traitement du gel AMISE EN GARDE Porter des gants une blouse de laboratoire et des lunettes de s curit pour la manipulation des cassettes FlashGel 1 Pr parer les chantillons Consulter le tableau 1 pages 8 et 9 au sujet de la pr paration recommand e pour les chantillons 20 2 Ouvrir le sachet et sortir la cassette REMARQUE Si la cassette est humide l essuyer avec un linge propre REMARQUE I peut y avoir des poches d air entre le gel et la cassette Cela n affectera pas la migration des bandes 3 Placer la cassette sur une surface plane et tirer sur la languette pour retirer le mat riau de scellement blanc du puits Ne pas enlever le mat riau de scellement transparent qui recouvre le trou d a ration lat ral 4 Remplir tous les puits d chantillons avec de l eau
17. charg dans le couloir l extr me droite I ou d un autre syst me Les images ci dessous montrent une s rie de dilutions de fragments de 400 bp et 1500 bp Transilluminateur Dark Reader avec couvercle orange appareil photo CCD avec filtre EtBr exposition de 3 secondes 75 50 25 12 5 6 25 3 13 1 56 0 78 0 39 0 20 0 10 0 05 ng couloir Transilluminateur UV appareil photo Polaroid avec filtre EtBr exposition de 3 secondes 75 50 25 12 5 6 25 3 13 1 56 0 78 0 39 0 20 0 10 0 05 ng couloir 16 on Figure 3 S paration de marqueurs et de fragments d ADN sur une cassette pour ADN FlashGel 2 2 puits 16 1 double plateau Couloirs d chantillon Couloirs 1 7 13 Marqueur FlashGel 50 bp 1 Kb recommand pour les cassettes 2 2 17 Couloirs 2 8 14 Marqueur FlashGel 100 bp 3 Kb recommand pour les cassettes double plateau Couloirs 6 et 12 QuantLadder FlashGel M Couloirs 3 4 5 9 10 11 15 16 17 Charge de 8 ng de fragments d ADN de 150 bp 600 bp et 800 bp Figure 4 Am lioration de la s paration des gros fragments d ADN sur le Syst me FlashGel 2 4Kb 3 10 Kb 2 4Kb 3 10 Kb Traitement 275 V Traitement 50 V Traitement 275 V Traitement 50 V 6min 7min 9 5 min 40 min 47min 60min 75 min 7min 9 5 min 50 min 75 min Dimensions des fragments Dimensions des fragments 2000 2500 3000 4000 bp 3000 4000 5000 7000 10000 bp 18
18. contienne la quantit d ADN sugg r e par bande Seuil de sensibilit de l ADN Le Syst me FlashGel utilise un colorant exclusif qui est de 5 20 fois plus sensible que le colorant au bromure d thidium En g n ral utiliser une concentration d ADN par bande de 1 5 de la concentration par bande normalement utilis e pour la d tection au bromure d thidium Le niveau optimal de charge d ADN sur une cassette de r cup ration FlashGel est de 50 500 ng par bande Le niveau d ADN peut tre ajust pour offrir la meilleure s paration pour le fragment d sir Un niveau lev de charge d ADN pourrait ne pas fournir une r solution ad quate si la dimension du fragment d sir est relativement proche de celle des fragments contaminants R cup ration de l ADN Pour une efficacit optimale de r cup ration particuli rement pour les gros fragments d ADN ajouter de la substance tampon de r cup ration FlashGel au puits de r cup ration avant d extraire les fragments d ADN Afin de d terminer les conditions optimales pour les fragments r cup r s utiliser le fragment t moin FlashGel inclus dans la trousse de d marrage du Syst me de r cup ration FlashGel 26 R solution de l ADN r cup r Pour une meilleure r solution de l ADN r cup r diluer l chantillon traiter sur un gel subs quent avec de l eau dans une proportion d au moins 1 1 p ex 2 ul d ADN r cup r 2 ul d eau 1
19. cuve directement vers le bas dans un environnement o l intensit lumineuse et les reflets sont r duits On peut galement observer la s paration des bandes sur un cran d ordinateur gr ce l appareil photo FlashGel 10 Afin d assurer une visibilit ad quate du marqueur pour surveiller le traitement dans la cuve utiliser les marqueurs pour ADN FlashGel ou les QuantLadders FlashGel Consulter le tableau 2 page 14 et la figure 2 page 16 pour les d tails sur les concentrations d ADN visibles dans diverses conditions Les bandes d ADN sont visibles dans la cuve tout au long du traitement Colorant de charge et marqueurs Le syst me FlashGel est compatible avec les colorants de charge et les marqueurs standards Le colorant bleu de bromoph nol ne migre pas dans les cassettes FlashGel V toutefois les chantillons contenant du bleu de bromoph nol peuvent tre utilis s puisque la migration des chantillons n est pas affect e Utiliser le colorant de charge FlashGel et les marqueurs FlashGel ou le QuantLadder FlashGel pour obtenir de meilleurs r sultats Pr paration du gel pour le traitement Pour obtenir de meilleurs r sultats utiliser une pipette de transfert ou une bouteille bouchon gicleur pour remplir les puits d chantillons d eau distill e ou d sionis e avant de charger les chantillons ou les marqueurs Cela assurera une humidit ad quate dans le puits Remplir les puits puis incli
20. e en temps r el et les fragments peuvent tre r cup r s la table de laboratoire sans recourir un clairage ultraviolet et sans excision de la bande Les fragments s par s gr ce au syst me de r cup ration FlashGel sont compatibles avec les applications de biologie mol culaire standards amplification par PCR ligature et clonage etc Renseignements importants Conditions de traitement et r solution Le Syst me de r cup ration FlashGel est con u pour la s paration rapide haute tension et la r cup ration Les cassettes peuvent tre trait es une tension plus basse pendant une plus longue dur e pour am liorer la s paration des plus gros fragments Surveiller le traitement et optimiser les conditions pour les fragments d sir s Les fragments seront trait s plus rapidement dans une cuve chaude R duire le temps de traitement ou abaisser la tension au besoin Ne pas d passer 14 minutes de traitement au total Consulter le tableau 1 pages 8 et 9 au sujet des conditions de traitement recommand es Visualisation des bandes sur la cuve FlashGel L ADN et les bandes de marqueur seront visibles sur la cuve illumin e sous un clairage normal de laboratoire Le degr de visibilit peut varier selon l intensit de l clairage g n ral dans le laboratoire On peut mieux observer les bandes en regardant la cuve directement vers le bas dans un environnement o l intensit lumineuse et les reflets sont mi
21. illons et les marqueurs Consulter le tableau 1 pages 8 et 9 au sujet de la pr paration des chantillons et des marqueurs recommand s AMISE EN GARDE Pour viter l exposition accidentelle une haute tension ne pas charger les chantillons alors que la cassette est branch e l alimentation haute tension 7 Brancher l alimentation basse tension la cuve en ins rant le fil dans le r ceptacle au dos de la cuve et en la branchant l alimentation lectrique Cela fournit l alimentation lectrique la source d clairage 8 Allumer la lumi re de la cuve en appuyant sur le bouton orange situ sur le dessus de l appareil REMARQUE La lumi re s teindra automatiquement apr s 10 minutes Rallumer en appuyant sur le bouton orange 9 Brancher les fils haute tension l alimentation lectrique et r gler la puissance selon la tension recommand e tableau 1 pages 8 et 9 REMARQUE Les courants de d marrage typiques devraient varier de 20 25 mA pour les gels d ADN Traiter jusqu ce que la s paration des fragments d sir s soit atteinte Dans les conditions d crites les fragments d ADN de 50 bp 100 bp migreront l ext rieur du gel en 7 8 minutes Consulter la figure 1 page 15 pour au sujet des r sultats de la s paration pour diverses dur es de traitement REMARQUE Le traitement successif et rapide de plusieurs cassettes peut exiger un l ger ajustement des conditions de traitement puisq
22. ir d eau les puits d chantillon avant la charge et utiliser le colorant de charge FlashGel et les marqueurs FlashGel de m me que la substance tampon de r cup ration FlashGel Utiliser le masque FlashGel lors de l utilisation de cassettes double plateau Utiliser les lunettes de visualisation FlashGel lors de la r cup ration des chantillons Mode d emploi 1 Consulter le tableau 1 pages 8 et 9 pour conna tre la pr paration des chantillons et les conditions de traitement recommand es 2 Retirer le mat riau de scellement blanc des puits de la cassette Ne pas retirer le mat riau de scellement transparent du trou d a ration 3 Remplir les puits d chantillons d eau distill e ou d sionis e Incliner la cassette pour faire couler l exc s de liquide vers le rebord et essuyer avec un linge non pelucheux Ne pas ponger le puits directement 10 11 12 13 Ins rer la cassette dans la cuve Ins rer le masque FlashGel le plateau central des puits d chantillon si vous utilisez des cassettes double plateau ou de r cup ration sous Charger les chantillons Les chantillons r cup rer devraient tre charg s dans les puits d chantillon du plateau sup rieur Brancher les c bles haute tension mettre sous tension et r gler la tension recommand e Brancher l alimentation basse tension et allumer la lumi re Dans le cas d une utilisation de cassettes pour AD
23. jet du brevet am ricain 6 905 585 Polaroid est une marque d pos e de Polaroid Corporation RiboPure est une marque de commerce d Ambion Inc Toutes les autres marques de commerce mentionn es dans le document sont des marques de Lonza Group ou de ses soci t s affili es A des fins de recherche seulement Non destin aux proc dures de diagnostic 2011 Lonza Rockland Inc 37 Lonza Rockland Inc www lonza com scientific support lonza com Assistance scientifique 800 521 0390 Service la client le 800 638 8174 Document n 00521123 0209 1 Rockland ME 04841
24. lashGel Syst me FlashGel Syst me FlashGel pour ADN No de r f rence 57023 57029 57031 57032 50462 50473 57033 Description Cassettes pour ADN FlashGel Cassettes pour ADN FlashGel Cassettes pour ADN FlashGel Cassettes pour ADN FlashGel Colorant de charge FlashGel Marqueur FlashGel pour ADN de 100 bp 4 Kb Marqueur FlashGe pour ADN de 50 bp 1 5 Kb 33 TM Taille Format Un seul format Un seul format Comprend cuve appareil photo bo te de 9 cassettes pour ADN colorant de charge et marqueur Taille Format Agarose 1 2 puits 12 1 plateau simple Agarose 1 2 puits 16 1 double plateau Agarose 2 2 puits 12 1 plateau simple Agarose 2 2 puits 16 1 double plateau 5 x flacons 1 ml concentration 5X 500 ul Pr t charger Recommand pour les cassettes 1 2 Tailles des bandes 100 200 300 500 800 1250 2 000 4 000 bp 500 ul Pr t charger Recommand pour les cassettes 2 2 Tailles des bandes No de Description r f rence 57034 Marqueur FlashGel pour ADN de 100 bp 3 Kb 50475 QuantLadder FlashGel M 57026 Trousse de d marrage pour ADN FlashGel Syst me FlashGel pour ARN No de Description r f rence 57027 Cassettes pour ARN FlashGel 57028 Cassettes pour ARN FlashGel 50571 Substance tampon d chantillon au formald hyde 50462 Colorant de charge FlashGel
25. lon d ADN r cup r en combinant des volumes gaux d ADN r cup r et d eau puis en ajoutant la quantit appropri e du colorant de charge 5X FlashGel Le volume de l chantillon d ADN pour la v rification de la r cup ration d pend de la quantit d ADN charg sur le gel de r cup ration Evaluer la quantit d ADN dans l chantillon r cup r en comparant les bandes du QuantLadder FlashGel tableau 3 page 31 figure 8 page 32 REMARQUE Selon le temps de traitement utilis l tape de r cup ration la m me cassette FlashGel peut tre utilis e pour v rifier l chantillon r cup r La cassette sera fonctionnelle jusqu environ 12 14 minutes de temps de traitement total 275 V 30 Renseignements de r f rence Tableau 3 Niveaux d ADN du QuantLadder FlashGel Fragment 1 500 bp 800 bp 400 bp 250 bp 100 bp Charge de 2 5 ul Charge de 5 0 ui 15 ng 30 ng 10 5 ng 21 ng 7 5 ng 15 ng 3 75 ng 7 5 ng 1 5 ng 3 ng Figure 7 Images de cassette de r cup ration FlashGel avant et apr s la r cup ration d un fragment d ADN Fragment AND 1000 bp charge 300 ng Echantillons pr lev s de 2 couloirs d une cassette de r cup ration FlashGelT 2 2 Un courant de 275 V appliqu durant plusieurs secondes apr s r cup ration montre la s lection qui a t enlev e Les chantillons de plus haut poids mol culaires sont maintenant pr ts tre r cup
26. ner la cassette et utiliser un linge non pelucheux ou un petit morceau de papier buvard pour retirer l exc s de liquide de la cassette Ne pas ponger le puits directement Seuil de sensibilit de l ADN Le Syst me FlashGel utilise un colorant exclusif qui est de 5 20 fois plus sensible que le colorant au bromure d thidium En g n ral utiliser une concentration d ADN par bande de 1 5 de la concentration par bande normalement utilis e pour la d tection au bromure d thidium Le niveau optimal de charge d ADN sur une cassette FlashGel est de 5 20 ng par bande Un niveau d ADN inf rieur 5 ng par bande pourrait ne pas tre visible dans la cuve mais un niveau jusqu 0 10 ng par bande peut tre d tect sur des photos ou images du gel Des niveaux d ADN allant jusqu 80 ng par bande peuvent tre utilis s toutefois des niveaux sup rieurs 20 ng par bande peuvent entra ner une distorsion de la bande Le niveau d ADN peut tre ajust afin d offrir le meilleur r sultat selon le syst me d analyse d image utilis 11 En raison de la sensibilit du Syst me FlashGel la plupart des chantillons d ADN devraient tre dilu s et le volume de charge par puits ne pas d passer 5 ul Pour obtenir de meilleurs r sultats diluer les chantillons d ADN dans 1 X colorant de charge FlashGel de mani re ce qu un chantillon de 5 ul contienne de 5 10 ng d ADN par bande Directives pour le traiteme
27. nimes Afin de s assurer une bonne visibilit d un marqueur pour surveiller le traitement utiliser les marqueurs d ADN FlashGel ou les QuantLadders FlashGel Consulter le tableau 2 page 14 au sujet des concentrations d ADN visibles dans diverses conditions 25 Colorant de charge et marqueurs Le syst me FlashGel est compatible avec les colorants de charge et les marqueurs standards Le colorant bleu de bromoph nol ne migre pas dans les cassettes FlashGel V toutefois les chantillons contenant du bleu de bromoph nol peuvent tre utilis s puisque la migration des chantillons n est pas affect e Utiliser le colorant de charge FlashGel et les marqueurs FlashGel ou le QuantLadder FlashGel pour obtenir de meilleurs r sultats Pr paration du gel pour le traitement Pour obtenir de meilleurs r sultats utiliser une pipette de transfert ou une bouteille bouchon gicleur pour remplir les puits d chantillons d eau distill e ou d sionis e avant de charger les chantillons ou les marqueurs Cela assurera une humidit ad quate dans le puits Remplir les puits puis incliner la cassette et utiliser un linge non pelucheux ou un petit morceau de papier buvard pour retirer l exc s de liquide de la cassette Ne pas ponger les puits directement Pour obtenir de meilleurs r sultats diluer l chantillon d ADN dans 1 X colorant de charge FlashGel de mani re ce qu un chantillon charge maximum de 12 ul
28. ns 0 39 0 78 ng 0 39 0 78 ng ultraviolets Photographie UV 0 39 0 78 ng 0 39 0 78 ng 14 Figure 1 Exemples de s paration pour diverses dur es de traitement 275 V sur une cassette pour ADN FlashGel 1 2 puits 12 1 plateau simple 2 minutes 4 minutes 6 minutes EHHE LR AL 8 minutes 10 minutes _ ee um ee Es eu ee eo nd e Couloirs d chantillons de gauche droite Couloir 1 Marqueurs FlashGel pour ADN 100 200 300 500 800 1 250 2 000 4 000 bp charge 5 ul dilution 1 5 Couloir 2 QuantLadder FlashGel 100 250 400 500 1 500 bp charge 5 ul dilution 1 5 Couloir 3 Marqueur Lonza 50 bp 2 500 bp charge 3 ul dilution 1 5 Couloir 4 chelle Lonza 100 bp charge 3 ul dilution 1 15 15 Figure 2 D tection des fragments d ADN sur les cassettes pour ADN FlashGel e clairer les cassettes l aide du transilluminateur ultraviolet ou lumi re bleue comme le transilluminateur Dark Reader e Photographier l aide de l appareil photo FlashGe utilis pour les gels au bromure d thidium standards e Pour un film Polaroid de type 57 avec un transilluminateur ultraviolet commencer par une exposition de 1 2 secondes e Pour les syst mes CCD utiliser le filtre au bromure d thidium existant du syst me e Le marqueur pour ADN FlashGel 100 bp 4 Kb est
29. nsion et un courant suffisants pour causer un choc lectrique mortel Pour viter tout risque de blessure le syst me ne doit tre utilis que par du personnel d ment form et toujours selon les directives fournies Avant d allumer la source d alimentation lectrique en courant continu s assurer que le fil noir est raccord la borne n gative et que le fil rouge est raccord la borne positive Ne pas toucher la cuve ou la cassette FlashGel lorsque l alimentation haute tension est activ e Ne pas submerger la cuve ajouter des chantillons ou extraire des bandes pendant que les fils haute tension sont branch s l alimentation lectrique La non observation de ces directives peut entra ner des dangers de blessures aux personnes ou des dommages au laboratoire de m me qu invalider la garantie Toujours couper la source d alimentation lectrique en courant continu avant d enlever les cassettes de la cuve Pour une s curit maximale toujours utiliser ce syst me dans un endroit isol o la circulation est faible et qui n est pas accessible au personnel non autoris Ne jamais utiliser du mat riel endommag ou cass Pr cautions La cuve FlashGel V utilise la technologie du transilluminateur Dark Reader Clare Chemical Research Inc pour examiner les fragments On peut examiner en toute s curit les cassettes sur la cuve illumin e sans utiliser de protection contre les rayons ultraviolets Allumer la lumi
30. nt 5 mois partir de la date de fabrication Ne pas d passer un chantillon de 5 Hl puits Ne pas d passer un chantillon de 5 ul puits Ne pas d passer un chantillon de 12 ul puits Dimension du gel 70 mm L X 84 mm I X 2 mm h Dimension des cassettes 115 mm L X 107 mm 1 X 17 mm h Dimension de la cuve 134 mm L X 120 mm I X 54 mm h Contenu des cassettes Gel d agarose colorant et substance tampon Caract ristiques nominales de l appareil Alimentation de l lectrophor se courant continu haute tension Tension 0 300 V CC Puissance 15 W Courant 50 mA Alimentation de l clairage de la cuve courant continu basse tension Tension 18 V CC Courant 1 11 A Alimentation du transformateur de l clairage de la cuve tension de ligne CA Tension 100 240 V CA 50 60 Hz Courant 1 0 A Connexions lectriques Haute tension lectrophor se fiches bananes blind es r tractables Basse tension clairage prise 2 1 x 5 5 x 14 mm Guide de d marrage rapide du Syst me FlashGel Points importants Ne pas d passer un volume d chantillon de 5 ul par couloir pour la cassette puits 12 1 et 16 1 et un volume d chantillon de 12 ul par couloir pour les cassettes puits 8 1 La concentration optimale des chantillons est d environ 1 5 de la concentration type par bande d un gel au bromure d thidium Pour de meilleurs r sultats rempl
31. nt du gel MISE EN GARDE Porter des gants une blouse de laboratoire et des lunettes de s curit pour la manipulation des cassettes FlashGel 1 Pr parer les chantillons Consulter le tableau 1 pages 8 et 9 au sujet de la pr paration recommand e pour les chantillons 2 Ouvrir le sachet et sortir la cassette REMARQUE Si la cassette est humide l essuyer avec un linge propre REMARQUE I peut y avoir des poches d air entre le gel et la cassette Cela n affectera pas la migration des bandes 3 Placer la cassette sur une surface plane et tirer sur la languette pour retirer le mat riau de scellement blanc du puits Ne pas enlever le mat riau de scellement transparent qui recouvre le trou d a ration lat ral 4 Remplir tous les puits d chantillons avec de l eau distill e ou d sionis e Incliner la cassette et utiliser un linge non pelucheux ou un petit morceau de papier buvard pour retirer l exc s de liquide Ne pas ponger les puits directement AMISE EN GARDE Pour viter l exposition accidentelle une haute tension ne pas remplir les puits alors que la cassette est branch e l alimentation haute tension REMARQUE Pour de meilleurs r sultats remplir les puits avec de l eau biologique mol culaire AccuGENE n de r f 51200 5 Placer la cassette dans la cuve et la faire glisser en place la cassette devrait se mettre en place solidement dans la cuve 12 6 Charger les chant
32. observer les bandes en regardant la cuve directement vers le bas dans un environnement o l intensit lumineuse et les reflets sont r duits Les bandes d ARN seront visibles sur la cuve pendant les 3 ou 4 premi res minutes de traitement apr s quoi elles p liront puis r appara tront environ 10 minutes apr s le traitement Le marqueur pour ADN FlashGel peut tre utilis pour surveiller la migration de l ARN 19 Colorant de charge et marqueurs Le syst me FlashGel pour ARN est compatible avec les colorants de charge au formald hyde et les marqueurs d ARN Le colorant bleu de bromoph nol ne migre pas dans les cassettes FlashGel toutefois les chantillons contenant du bleu de bromoph nol peuvent tre utilis s puisque la migration des chantillons n est pas affect e Utiliser la substance tampon au formald hyde Lonza ou le colorant de charge FlashGel pour l ARN natif et les marqueurs d ARN FlashGel pour obtenir de meilleurs r sultats Pr paration du gel pour le traitement Pour obtenir de meilleurs r sultats utiliser une pipette de transfert ou une bouteille bouchon gicleur pour remplir les puits d chantillons d eau exempte de Rnase avant de charger les chantillons ou les marqueurs Cela assurera une humidit ad quate dans le puits Remplir les puits puis incliner la cassette et utiliser un linge non pelucheux ou un petit morceau de papier buvard pour retirer l exc s de liquide de la cassette
33. r s 31 Figure 8 R cup ration d une grande vari t de dimension de fragments d ADN sur une cassette pour ADN FlashGel Des chantillons 100 ng de fragments d ADN ont t s par s et r cup r s en utilisant le syst me de r cup ration FlashGelTM L image ci dessus montre une analyse d aliquotes de 3 il d ADN r cup r en utilisant une cassette pour ADN FlashGelTM de 1 2 Echantillons r cup r s d ADN g nomique lambda fragment Les couloirs contiennent de l ADN extrait de diverses exp riences partir d une cassette de r cup ration FlashGelTM de 1 2 Couloirs d Couloir 1 chantillon Marqueur FlashGel d ADN de 100 bp 4 000 bp Couloir 2 Couloir 3 Couloir 4 Couloir 5 Couloir 6 Couloir 7 Couloir 8 QuantLadder FlashGel 2 5 ul Fragment d ADN de 50 bp Fragment d ADN de 200 bp Fragment d ADN de 500 bp Fragment d ADN de 1 000 bp Fragment d ADN de 2 000 bp Fragment d ADN de 4 000 bp 32 Couloirs d chantillon Couloir 1 280 550 bp Couloir 2 650 1 190 bp Couloir 3 425 800 bp Couloir 4 425 800 bp volume de charge minimum du couloir 3 Couloir 5 800 3 000 bp Les tailles ont t d termin es par lectrophor se sur gel Renseignements pour commander le Syst me FlashGe No de r f rence 57025 57040 57067 Description Cuve FlashGel Appareil photo F
34. reil REMARQUE La lumi re s teindra automatiquement apr s 10 minutes Rallumer en appuyant sur le bouton orange 9 Brancher les fils haute tension l alimentation lectrique et r gler la puissance selon la tension recommand e tableau 1 pages 8 et 9 REMARQUE Les courants de d marrage typiques devraient tre de 25 30 mA Traiter jusqu ce que la s paration cherch e soit obtenue des fragments d sir s REMARQUE Le traitement successif et rapide de plusieurs cassettes peut exiger un l ger ajustement des conditions de traitement puisque les bandes seront trait es plus vite mesure que la cuve deviendra plus chaude Surveiller la s paration et r duire la tension et la dur e de traitement au besoin REMARQUE L expression d un peu de substance tampon hors des puits est normale 10 Traiter les cassettes pour ARN pendant 8 minutes puis couper la tension et d brancher les fils de l alimentation lectrique avant de retirer la cassette AMISE EN GARDE Manipuler les cassettes seulement apr s avoir coup la tension et d branch les fils 11 Retirer la cassette et la laisser reposer la temp rature ambiante pendant au moins 10 minutes ou jusqu ce que les fragments soient visibles selon l intensit d sir e L intensit maximale est atteinte apr s 45 minutes environ Enregistrer les donn es du gel en utilisant l appareil photo FlashGel une photographie Polaroid ou un autre sy
35. st me de saisie d images Voir les figures 5 et 6 p 23 24 pour des images d ARN 22 Renseignements de r f rence Figure 5 D tection des fragments d ARN sur une cassette pour ARN FlashGel 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 bd gt L Cassette trait e pendant 8 minutes 225 V photographi e 20 minutes apr s le traitement Couloirs d chantillon Couloirs 1 6 11 Marqueur d ADN pour observation pendant le traitement Couloirs 2 7 12 chelle de 100 ng d ARN Couloirs 3 8 13 100 ng d ARN total de E coli Ambion Couloirs 4 et 9 100 ng d ARN total de S cervevisiae purifi e l aide de RiboPure Kit de levure Ambion Couloirs 5 et 10 100 ng d ARN total de thymus de souris Ambion 23 Figure 6 V rification rapide des fragments d ARN natif sur une cassette pour ARN FlashGel 1 2 12 1 plateau simple Cassette trait e pendant 4 minutes 225 V suivi imm diatement de l imagerie Couloirs d chantillon Couloir 1 Marqueur Lonza 50 ng Couloir 2 ARN total de E coli 50 ng Couloir 3 Marqueur Lonza 250 ng Couloir 4 ARN total de E coli 250 ng 24 Mode d emploi du Syst me de r cup ration FlashGel Introduction Le Syst me de r cup ration FlashGel est recommand pour la s paration rapide et et la r cup ration de l ADN d coup et des fragments d ADN de 100 bp 4 Kb La s paration des fragments d ADN peut tre surveill
36. ttes pour Cassettes de ARN r cup ration Gamme de 1 2 50 bp 10 Kb 1 2 0 5 Kb 9 Kb 1 2 50 bp 10 Kb s paration 2 2 10 bp 1 Kb 2 2 10 bp 1 Kb La s paration des fragments gt 4 kb sera meilleure avec un temps de traitement plus long et une tension plus faible La s paration des fragments gt 4 kb sera meilleure avec un temps de traitement plus long et une tension plus faible Pr paration de l chantillon Pour obtenir de meilleurs r sultats diluer les chantillons d ADN dans 1 X colorant de charge FlashGel chantillons d ARN d natur s Pr parer les chantillons dans une substance tampon de formald hyde 50 et d eau exempte de RNase d naturer pendant 5 minutes 65 C chantillons d ARN natif Utiliser le colorant de charge FlashGel Pour obtenir de meilleurs r sultats diluer les chantillons d ADN dans 1X colorant de charge FlashGel Concentration de l chantillon et limites de d tection Le niveau optimal de charge d ADN est de 5 20 ng bande pour une charge de 5 ul pour obtenir de meilleurs r sultats ne pas d passer 20 ng bande Le niveau optimal de charge d ARN varie selon l chantillon d ARN pour obtenir de meilleurs r sultats ne pas d passer 200 ng bande pour une charge de 5 pl Le niveau optimal de charge d ADN est de 50 500 ng bande pour des volumes de charge allant jusqu 12 ul Tension et dur
37. ue les bandes seront trait es plus vite mesure que la cuve deviendra plus chaude Surveiller la s paration et r duire la tension et la dur e de traitement au besoin REMARQUE L expression d un peu de substance tampon hors des puits est normale AMISE EN GARDE Manipuler les cassettes seulement apr s avoir coup la tension et d branch les fils 13 10 Traiter les cassettes pour ADN jusqu ce que la s paration des fragments d sir s soit atteinte 11 Couper la tension et d brancher les fils de l alimentation lectrique avant de retirer la cassette 12 Enregistrer les donn es du gel en utilisant l appareil photo FlashGel gr ce une photographie Polaroid ou en utilisant un autre syst me de saisie d images Voir la figure 2 page 16 pour des d tails sur les appareils photo types Renseignements de r f rence Tableau 2 Quantit d ADN visible sur les cassettes pour ADN FlashGel sous diverses conditions Fragment de 1 500 bp Fragment de 400 bp Observ la lumi re 1 6 3 2 ng 1 6 3 2 ng ambiante Observ en chambre 0 39 0 78 ng 0 39 0 78 ng noire Observ l appareil 0 10 0 20 ng 0 10 0 20 ng photo FlashGel Photo d appareil photo 0 10 0 20 ng 0 10 0 20 ng FlashGel Observ sur le 0 05 0 01 ng 0 10 0 20 ng transilluminateur Dark Reader Photo de Dark Reader 0 10 0 20 ng 0 10 0 20 ng Observ sous les rayo
Download Pdf Manuals
Related Search