AquaPhenol
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1. AquaPhenol DESCRIPTION Le ph nol bidistill est satur en eau bidistill et conditionn sous argon Il est en phase liquide pr t tre utilis directement ou avec le tampon de votre choix Il ne contient n1 additif n1 antioxydant UTILISATION Le ph nol est satur en eau Pour de nombreuses applications la phase aqueuse doit tre tamponn e et ramen e au pH d sir Vous trouverez ci dessous un protocole pour obtenir un ph nol satur en Tris HCI 10 mM pH 7 5 EDTA 1 mM en utilisant vos propres solutions Un protocole simplifi utilisant les solutions pHMaker livr es avec chaque flacon d AquaPhenol est galement disponible voir fiche pHMaker solutions Les 250 ml de ph nol satur en eau sont livr s dans un flacon de 500ml Ainsi la neutralisation peut se d rouler en toute s curit dans le m me flacon 1 Ajouter 150 200 ml de Tris HCI 0 1M pH 8 M langer laisser d canter enlever la phase aqueuse phase sup rieure la trompe vide 2 R p ter cette tape 1 2 fois jusqu obtenir un pH de 7 5 8 dans la phase aqueuse 3 Ajouter 150 200 ml de Tris HCI 10 mM pH 8 EDTA 1 mM M langer laisser d canter enlever la phase aqueuse phase sup rieure la trompe vide 4 R p ter 2 fois cette tape La phase aqueuse tamponn e que vous utilisez doit tre d gaz e pour viter l oxydation du ph nol Vous pouvez votre convenance ajouter un antioxydant que vous choisirez2. selon votre application par exemple 8 hydroxyquinol ine CONSERVATION APRES NEUTRALISATION En fonction du d bit d utilisation de ce ph nol satur et tamponn conservez le 4 C ou aliquotez le dans des flacons opaques l abri de la lumi re et conservez le au cong lateur 20 C PH MAKER Mode d emploi AquaPhenolTM est un ph nol en phase liquide satur en eau Il a donc un pH acide qui convient en utilisation directe pour les extractions d ARN Pour les extractions d ADN il est important d utiliser un ph nol satur ayant un pH voisin de celui de la solution aqueuse d ADN extraire Pour faciliter cette neutralisation deux flacons pHMakerTM de 6 ml chacun sont livr s avec chaque flacons d AquaPheno TM Ces deux solutions aqueuses pHMakerTM permettent de ramener le pH du ph nol 7 5 ou 8 Comment obtenir du Ph nol pH 7 5 Prendre 5 ml de solution pHMakerTM 7 5 compl ter 50 ml avec de l eau bidistill e dilution 10 x rajouter les 50 ml directement au flacon d AquaPhenolTM bien m langer et laisser d canter Apr s 1 5 mn les deux phases sont d cant es Le pH de la phase aqueuse phase sup rieure peut tre mesur e au pH m tre sur un aliquot dilu 2 fois dans l eau bidistill e ne pas utiliser de papier pH la pr sence de ph nol fausserait la mesure de pH Le pH de la phase aqueuse est alors de 7 5 0 05 Comment obtenir du Ph nol pH 8 Prendre 5 ml de solu
3. tion pHMakerTM 8 compl ter 50 ml avec de l eau bidistill e dilution 10 x rajouter les 50 ml directement au flacon d AquaPhenolTM bien m langer et laisser d canter Apr s 1 5 mn les deux phases sont d cant es Le pH de la phase aqueuse phase sup rieure peut tre mesur e au pH m tre sur un aliquot dilu 2 fois dans l eau bidistill e ne pas utiliser de papier pH la pr sence de ph nol fausserait la mesure de pH Le pH de la phase aqueuse est alors de 8 0 1 Importance de la concentration saline AquaPhenolTM ph nol satur en eau contient environ 30 d eau Lors d une extraction d ADN si la phase aqueuse saturante du ph nol a une composition en sels diff rente de celle de la solution d ADN cette derni re aura sa composition modifi e par l extraction Par exemple 1 ml de solution d ADN 50 mM NaCI extraite par 2 x 1 ml de ph nol satur sans NaCl aura apr s extraction une concentration saline de l ordre de 30 mM NaCl FTAquaP 09 02 11
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