Pak12 coffret
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1. ensemble de test substitution de composantes autres que ceux fournies dans ce coffret peut entra ner des r sultats incoh rents erron s Apr s chaque essai jeter toute pr paration inutilis e conjugu dilu des contr les positif et n gatif dilu s r actif PNPP reconstitu et dilu Lors de la pr paration des dilutions pipetter selon les instructions du fabricant afin d assurer des techniques de distribution et de rin age appropri es La r action entre et le substrat se produisant lors de l incubation finale est sensible la temp rature et la lumi re et doit tre ex cut e dans un environnement contr l de 22 25 l abri de lumi re AVERTISSEMENTS Tous les s rums d origine humaine utilis s dans les contr les n gatifs et positifs ont t test s et trouv s n gatifs concernant les anticorps anti VIH 1 2 l h patite C et l antig ne HBs Cependant aucune m thode ne peut offrir une totale assurance de l absence de ces virus ou autres agents infectieux Par cons quent ces mat riaux doivent tre manipul s comme des produits potentiellement infectieux Certains r actifs fournis dans ce coffret contiennent l azide de sodium comme agent de conservation MISE EN GARDE L azide de sodium r agit avec le plomb et le cuivre de la plomberie pour former des m taux azides hautement explosifs Lorsque jet dans l vier il est recommand de rincer avec beaucou2. MODE D EMPLOI IMMUCOR PAK12 4 8 C TABLE DE MATI RES UTILISATIONS PR VUES 5 i Aa iA A A aa aaa E aaa Gelaen Nain anse 2 SOMMAIRE ET EXPLICATION nana de tannins nine Ant 2 PRINGIPE nn E RAS 2 AATE 2 PR CAUTIONS 3 AVERTISSEMENTS 2 du cons ar Matane Que 3 CHANTILEONS tan honda eme ennuis 3 MODE enr en et 3 Mat riel ONEAN E teur 3 Mat riel N cessaire FOUMI retre trente 4 Proc dure dant detre retard tea 4 CONTROLE QUALIT reetarako aiaee aoaea Nariai aaa aAa area teen 5 INTERPR TATION DES R SULTATS 2 2 6 LIMITES TECHNIQUE 6 PERFORMANCES een 6 te ei 7 Pak12 coffret 1 303461 IFUFR REV D UTILISATIONS PR VUES Pak12 coffret est un essai qualitatif par la m thode LISA enzyme linked immunosorbent assay en phase solide c
3. aques 9 Centrifugeuse capable de s parer le serum ou le plasma des chantillons de patients 10 Incubateur ou bain marie 37 C Proc dure 1 Amener tous les r actifs la temp rature de la pi ce 2 Pr parer une solution de lavage de travail en diluant la solution de lavage concentr e Ajouter 1 volume de solution de lavage concentr e 9 volumes d eau d ionis e ou distill e Bien m langer 3 D terminer le nombre d chantillons de patients tester Utiliser le tableau de r sultats pour assigner chaque chantillon un emplacement consistant en deux puits duplicata Noter l identit de chaque chantillon sur le tableau de r sultats Pr paration des chantillons et des Contr les 4 Diluer comme suit et bien m langer Volume de tampon pour chantillon Volume d chantillon PC 150 yl 50 1 NC 600 200 ul chantillon de patient 600 200 ul 5 Retirer la monture de micropuits du sachet Retirer rapidement et resceller toutes barrettes non utilis es dans le sachet protecteur NOTE Une seule monture est fournie par coffret Ne pas la jeter avant que toutes les barrettes aient t utilis es NOTE Orienter la plaque afin que le puits se situe dans le coin en haut gauche Soyez certain que toutes les barrettes soient mises de fa on appropri es et ins r es la plaque Etiqueter ou num roter chaque barrette afin d viter des erreurs Maintenir la m me orie
4. avage r siduelle Inverser sur du tissu ponge absorbant pour emp cher s ass cher Poursuivre rapidement les trois prochaines tapes 17 Ajouter 100 il de la solution de PNPP dilu e chaque puits SAUF ceux d sign s VIERGES 18 Incuber les micropuits dans l obscurit pendant 30 minutes la TEMP RATURE DE LA PIECE 22 25 NOTE Le temps et la temp rature d incubation suite l ajout du PNPP sont critiques NE PAS varier le temps et la temp rature d incubation tablis des fins d uniformit d buter le chronom trage rapidement apr s l ajout du r actif au premier puits 19 Arr ter la r action par de 100 pl de solution d arr t chaque puits dans le m me ordre que celui utilis lors de l ajout du substrat Ajouter 200 de la solution d arr t aux puits vierges 20 Lire la densit optique de chaque puits 405 ou 410 nm en utilisant un filtre de r f rence de 490 nm Si les r sultats ne peuvent tre lus imm diatement laisser les puits dans l obscurit jusqu 30 minutes 21 Soustraire la valeur obtenue pour les puits vierges de tous les puits contenant les contr les et les chantillons Plusieurs instruments de lecture ELISA sont programm s pour faire ce calcul automatiquement 22 Noterles r sultats obtenus sur le tableau de r sultats CONTROLE QUALIT Le contr le de qualit de Pak12 coffret est b ti l int rieur de cet ensemble de test par l inclusion de
5. dans Pak12 coffret sont les glycoprot ines individuelles et par cons quent ne d tecteront pas des agglutinines froides ou des anticorps contre des antig nes de cellules rouges tels que Lewis REFERENCES 1 Kunicki TJ Aster RH Isolation and immunologic characterization of the human platelet isoantigen 1 Mol Immunol 1979 16 353 2 Van der Schoot et al Characterization of platelet specific alloantigens by Immunoblotting localization of Zw and Bak antigens Brit J Haemat 1986 64 715 723 3 Kuijpers R W A M et al Localization of the platelet specific Ko system antigen in GP Ib IX Blood 1989 74 Suppl I 226a gt A Kieffer N et al Immunochemical characterization of the platelet specific alloantigen a comparative study with the alloantigen Blood 1984 64 1212 1219 Furihata et al On the association of platelet specific alloantigen with glycoprotein J Clin Invest 1987 80 1624 1630 Kiefel V et al The Br a Br b alloantigen systems on platelets 1989 Blood 73 2219 2223 Howard Perkins HA The natural history of alloimmunization to platelets Transfusion 1978 18 496 Dutcher JP Schiffer CA Aisner J Wiernik PH Alloimmunization following platelet transfusion the absence of a dose response relationship Blood 1981 57 395 Schiffer CA Clinical importance of antiplatelet antibody testing for the blood bank In seminar on antige
6. de faible fr quence peuvent ne pas tre d tect s lors de l utilisation de test Certains anticorps anti HLA non cytotoxiques peuvent tre d tect s par cette technique alors qu ils ne r agissent pas dans le test de lymphocytotoxicit PERFORMANCES SP CIFIQUES Lorsque bien entrepos et utilis selon le mode op ratoire d crit ci dessus ce produit peut d tecter les anticorps contre les mol cules HLA de classe 1 et les antig nes sp cifiques de plaquettes identifi s sur le tableau de r sultats inclus Afin d assurer une r activit et une sp cificit ad quates chaque lot de Pak12 coffret est test avant la mise en vente avec des chantillons connus pour poss der les glycoprot ines identifi es sur le tableau de r sultats inclus ainsi que des chantillons connus pour ne pas inclure ces m mes anticorps valuation de la Performance M thode Comparative Se Positif N gatif Total a coffret Positif 97 5 102 N gatif 13 266 279 Total 110 271 381 Concordance 95 3 Co positivit 88 2 Co n gativit 98 2 M thode Comparative Test d H magglutination Passive Invers e Pak12 6 303461 IFUFR REV D Puisque la m thode comparative comprend des plaquettes intactes enti res comme cibles pour la d tection des anticorps elle peut donner des r sultats positifs avec tout antig ne exprim sur les plaquettes Les cibles pour la d tection des anticorps
7. ictime en porte et si elles peuvent tre facilement enlev es Continuer rincer P310 Appeler imm diatement un CENTRE ANTIPOISON un m decin P330 Rincer la bouche Pak12 7 303461 IFUFR REV D
8. ienne des mat riaux du test des p riodes d incubation inad quates un mauvais lavage ou d cantage des puits une exposition du substrat la lumi re omission de r actifs une exposition des temp ratures plus lev es ou plus faibles que celles prescrites ou l omission d tapes pr sence de complexes immuns ou autres agr gats d immunoglobulines dans les chantillons de patients peut causer augmentation de la liaison non sp cifique et produire de faux positifs dans cet essai Les r sultats d un test qui ne sont pas conformes une sp cificit d allo anticorps sont consid r s comme tant ind termin s Les r sultats de cet essai ne doivent pas tre utilis s comme le seul fondement d un jugement clinique Certains anticorps faible titre et faible avidit peuvent ne pas tre d tect s dans cet essai Les anticorps dirig s contre des antig nes sp cifiques de plaquettes qui ne sont pas repr sent s dans le tableau de r sultats peuvent ne pas tre d tect s La pr sence d autres antig nes sp cifiques de plaquettes situ s sur GPIib Illa tels que HPA 4b HPA 6a Cab HPA 6b HPA 7a HPA 7b HPA 8a SRP et HPA 8b 18 pas t d termin e pour les plaquettes isol es dans le puits GPIlb Illa Il est possible que des allo anticorps dirig s contre ces syst mes soient r actifs dans ce test Des anticorps contre les antig nes HLA de classe
9. ns on blood cells and body fluids Washington DC American Association of Blood Banks 1980 189 208 10 No 4 113 4 Immucor GTI Diagnostics Inc 20925 Crossroads Circle Waukesha WI 53186 USA Garratty Review Platelet immunology similarities and differences with red cell immunology 1995 Immunohematology 11 Immucor Medizinische Diagnostik GmbH Adam Opel Strasse 26A Rodermark 63322 Germany US and International Contact Information Technical Support wWww immucor com waukeshatechsupport immucor com 1996 2015 Immucor GTI Diagnostics Inc 303461 IFUFR Rev D 2015 05 18 Warning Attention Danger Danger H302 en cas d ingestion H318 Provoque des l sions oculaires graves H412 Nocif pour les organismes aquatiques entra ne des effets n fastes long terme EUH032 Au contact d un acide d gage un gaz tr s toxique P264 Se laver les mains soigneusement apr s manipulation P270 Ne pas manger boire ou fumer en manipulant ce produit P273 viter le rejet dans l environnement P280 Porter des gants de protection des v tements de protection un quipement de protection des yeux du visage P301 P312 EN CAS D INGESTION Appeler un CENTRE ANTIPOISON un m decin en cas de malaise P305 P351 P338 EN CAS DE CONTACT AVEC LES YEUX rincer avec pr caution l eau pendant plusieurs minutes Enlever les lentilles de contact si la v
10. ntation de plaque durant tout l essai 6 Ajouter 300 de solution de lavage de travail chaque puits et laisser reposer 5 10 minutes la temp rature de la pi ce 7 Aspirer ou d canter nergiquement et inverser sur tissu ponge absorbant pour emp cher de s ass cher 8 Ajouter 50 ll de la dilution appropri e du contr le ou de l chantillon aux puits d sign s sur le tableau de r sultats NOTE Ne pas ajouter d chantillons ou de r actifs aux puits vierges NOTE Si plusieurs chantillons de patients diff rents sont test s en m me temps une seule s rie de contr les est n cessaire tiquetter chaque barrettes pour viter les erreurs 9 Sceller les micropuits avec un scellant pour plaques et incuber de 30 35 minutes 37 C au bain marie Si un incubateur sec est utilis au lieu du bain marie augmenter le temps d incubation de 10 minutes 10 Diluer le conjugu 1 dans 100 dans le tampon pour chantillon Utiliser un contenant en polypropyl ne Barrettes 2 2 8 6 2 8 20 pl 60 ll SD 2 0 6 0 ml Pak12 coffret 4 303461 IFUFR REV D Le conjugu est une solution visqueuse Amorcer les embouts pipette pr levant distribuant 2 3 fois dans le conjugu avant de l ajouter au tampon pour chantillon rincer apr s chaque distribution Bien m langer 11 TAPES DE LAVAGE a Aspirer ou d canter le contenu de chaque puits et presser sur de tissu ponge abso
11. on u pour d tecter des anticorps contre des antig nes HLA de classe et des pitopes sur les glycoprot ines la lla et SOMMAIRE ET EXPLICATION L existence d antig nes sp cifiques de plaquettes sur diverses glycoprot ines plaquettaires a t d crite par plusieurs investigateurs 56 Les anticorps dirig s contre des antig nes sp cifiques de plaquettes ou contre des mol cules HLA de classe 1 g n r s lors d une grossesse ou d une transfusion peuvent causer limmuno destruction des plaquettes transfus es La confirmation de la pr sence de ces anticorps dans le s rum des patients peut aider la recherche de produits sanguins potentiellement compatibles Les micropuits LISA en phase solide Pak12 fournissent les glycoprot ines plaquettaires Ilb Illa et la Ila isol es par anticorps monoclonaux et provenant de donneurs du groupe type plaquettaire connu Les mol cules de classe et les glycoprot ines plaquettaires sont fournies sous forme de glycoprot ines purifi es par affinit Ce test est con u pour d tecter et diff rencier les anticorps dirig s contre les mol cules HLA de classe et les antig nes sp cifiques de plaquettes La configuration des puits se trouve sur le tableau de r sultats PRINCIPE Le s rum ou le plasma est ajout aux micropuits enrob s de glycoprot ines plaquettaires de mol cules HLA permettant l anticorps si pr sent de se lier Les anticorps n
12. on li s sont alors lav s Un r actif anti globuline humaine conjugu la phosphatase alcaline Anti IgG A M est ajout aux puits et incub Les Anti IgG A M non li s sont lav s et le substrat PNPP p nitroph nyl phosphate est ajout Apr s 30 min d incubation la r action est arr t e La densit optique de la couleur qui se d veloppe est mesur e au spectrophotom tre COMPOSITION DU COFFRET Nombre maximum de tests par coffret 12 coffret 5 tests par coffret Tous les r actifs doivent tre entrepos s selon les instructions indiqu es sur l tiquette 404551 Micropuits barrettes avec micropuits fond plat auxquels des glycoprot ines plaquettaires et des mol cules HLA ont t attach es Les barrettes sont incluses dans des sachets refermables Pr t l emploi g TCW 403622 Solution de lavage concentr e 10X solution tamponn e de Tris hydroxym thyl aminom thane contenant du chlorure de sodium et du Tween 20 1 d azide de sodium Diluer avec de l eau d ionis e ou distill e avant utilisation Conserver la solution de lavage de travail jusqu 48 heures la temp rature de la pi ce ou jusqu 7 jours une temp rature de 2 8 C 403831 Tampon pour chantillon solution saline tamponn e au phosphate contenant de l albumine bovine et du s rum de souris 0 1 d azide de sodium Pr t l emploi 403613 Tampon de substrat Cette solution contient du di thanolamine et du chl
13. orure de magn sium 0 02 d azide de sodium Pr t l emploi A prot ger de la lumi re 403603 Solution d arr t Pr t l emploi 404589 Conjugu Anticorps de ch vre anti immunoglobuline IgG A M humaine purifi par affinit et conjugu phosphatase alcaline 0 1 d azide de sodium Diluer avec le tampon pour chantillon avant utilisation 403594 Substrat PNPP p nitroph nyl phosphate Poudre crystalline Reconstituer avec de l eau d ionis e ou distill e et diluer avec le tampon de substrat avant utilisation A prot ger de la lumi re 404596 S rum contr le positif s rum humain 0 1 d azide de sodium A diluer dans le tampon pour chantillon avant utilisation lel lel e 818 Pak12 coffret 2 303461 IFUFR REV D NC 404572 S rum contr le n gatif s rum humain 0 1 d azide de sodium A diluer dans le tampon pour chantillon avant utilisation 503019 Scellants pour plaques PR CAUTIONS pas utiliser de r actifs qui sont troubles ou contamin s Prendre des pr cautions pour viter la contamination du tampon pour chantillon et conjugu Une contamination involontaire de ces r actifs avec du s rum humain ou du plasma entra nera la neutralisation du conjugu et ainsi l chec du test Ne pas utiliser de r actifs au del de la date de p remption Les micropuits et les r actifs inclus dans ce coffret ne doivent pas tre utilis s conjointement avec aucun autre
14. p d eau pour viter la concentration d azide L azide de sodium est un poison toxique si ing r Jeter les r ctifs termin s selon les r glements locaux CHANTILLONS Le sang devrait tre pr lev dans de ou de EDTA plasma ou sans anticoagulant s rum selon des techniques aseptiques Le sang devrait tre test pendant qu il est encore frais afin de minimiser les risques d obtenir de faux positifs ou de faux n gatifs caus s par un mauvais entreposage ou une contamination de l chantillon Les chantillons qui ne peuvent tre test s imm diatement doivent tre conserv s une temp rature de 2 8 C jusqu 48 heures suivant le pr l vement ou congel s Les chantillons congel s une temp rature lt 20 se conservent bien pendant plusieurs ann es 2 ans Cependant pour viter les effets n fastes de cycles r p t s de cong lation d cong lation il est recommand d aliquoter les chantillons en petits volumes avant de les congeler viter les cong lateurs d grivrage automatique Le s rum ou le plasma doit tre s par des globules rouges lorsque conserv exp di Des particules ou des agr gats dans l chantillon peuvent causer des r sultats faux positifs ou de mauvaises valeurs de duplicata Ces chantillons doivent tre clarifi s par centrifugation avant d tre test s Seul le s rum humain entier ou le plasma est appropri pour cet essai La dilu
15. rbant b Ajouter 300 ul de solution de lavage de travail ou d canter d R p ter les tapes b et c pour un total de 3 4 lavages e D canter vigoureusement pour enlever toute solution de lavage r siduelle Inverser sur du tissu ponge absorbant pour emp cher de s ass cher NOTE Il est important d enlever compl tement toute la solution de lavage apr s le dernier lavage 12 Ajouter 50 ul de conjugu dilu pr par pr c demment chaque puits SAUF aux puits d sign s VIERGES 13 Sceller les micropuits avec un scellant pour plaques et incuber de 30 35 minutes 37 C au bain marie Si un incubateur sec est utilis au lieu du bain marie augmenter le temps d incubation de 10 minutes 14 Dissoudre le substrat PNPP en ajoutant 0 5 d eau d ionis e ou distill e la fiole Remettre le bouchon et bien m langer Prot ger de la lumi re jusqu utilisation 15 Diluer le PNPP 1 dans 100 dans le tampon de substrat Barrettes 2 2 8 6 2 8 40 ul 120 yl SB 4 0 12 0 Bien m langer Prot ger de la lumi re jusqu utilisation 16 TAPES DE LAVAGE a Aspirer ou d canter le contenu de chaque puits et presser sur de tissu ponge absorbant b Ajouter 300 de solution de lavage de travail ou d canter d R p ter les tapes b et c pour un total de 3 4 lavages e D canter vigoureusement pour enlever toute solution de l
16. s rums contr les positifs et n gatifs Ces contr les doivent tre inclus lors de chaque essai pour aider d terminer si des erreurs techniques ou des checs de r actifs se sont produits Pak12 coffret 5 303461 IFUFR REV D Crit res pour valider le test Contr le N gatif rang es Contr le Positif Valeur moyenne de la densit optique OD lt 0 175 gt 1 000 Les valeurs de densit optique obtenues pour les duplicata doivent tre l int rieur 20 de la moyenne des deux valeurs Les chantillons pour lesquels les r sultats sont l xt rieur de cette limite doivent tre retest s NOTE De mauvaises valeurs de duplicata peuvent tre caus es d un r actif ou de l chantillon l ajout in gal des r actifs une temp rature d incubation in gale une exposition la lumi re lors de l incubation finale ou une contamination entre puits L absence de r sultats de tests en duplicata peut mener l approbation de r sultats erron s INTERPR TATION DES R SULTATS Les r sultats de tests d montrant des valeurs de densit optique gales ou plus grandes que 2X la valeur obtenue pour la moyenne des contr les n gatifs des glycoprot ines correspondantes 2 valeurs de contr les n gatifs pour chaque glycoprot ine sont consid r s comme r sultats positifs LIMITES DE LA TECHNIQUE Des r sultats erron s peuvent tre caus s par une contamination bact r
17. tion pr alable des chantillons avec tout autre chose que le s rum humain normal n gatif pour ELISA peut modifier les r sultats Des chantillons contamin s par des microbes h molys s lip miques ict riques ou inactiv s par la chaleur peuvent donner des r sultats incoh rents et doivent tre vit s MODE OP RATOIRE Mat riel Fourni Les flacons peuvent contenir une quantit de r actif plus grande que celle indiqu e sur l tiquette Bien mesurer le r actif avec instrument appropri pour pr parer les dilutions 6 2 x 8 barrettes micropuits cod es par couleurs avec support 1 x 50 ml solution de lavage concentr e 10X 1 x 14 ml tampon pour chantillon 1 x 14 ml tampon de substrat 1 x 14 ml solution d arr t Pak12 coffret 3 303461 IFUFR REV D 6 1 80 ul conjugu anti IgG A M humain 7 3 50 mg substrat PNPP 8 1 0 3 ml s rum contr le positif 9 1 0 7 s rum contr le n gatif 10 6 scellants pour plaques Mat riel N cessaire non Fourni 1 Tubes essai pour chantillons de patients dilution des contr les et dilution des r actifs 2 Pipettes de transfert 8 Micropipettes ajustables pour distribuer 10 100 ul et 100 1000 lil avec des embouts jetables 4 Chronom tre 5 Lecteur de microplaque capable de mesurer des densit s optiques de 405 410 et 490 nm 6 Eau d ionis e ou distill e 7 Papier absorbant 8 Instrument pour laver les micropl
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