Gélose Tryptone-soja (base pour gélose au sang)
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1. de culture du microorganisme d terminer de fa on s en approcher le plus possible 2 3 mm sans toutefois l atteindre Les streptocoques du groupe B produisent une substance extracellulaire thermor sistante CAMP factor qui provoque un triangle d h molyse totale dans la zone d h molyse incompl te du staphylocoque la jonction des deux cultures Les pneumocoques apparaissent sous forme de colonies plates lisses gris tres et parfois muqueuses entour es d une zone d h molyse troite verd tre de type alpha Les staphylocoques donnent des colonies opaques jaune dor ou blanches avec ou sans zone d h molyse de type b ta Les Listeria pr sentent de petites zones d h molyse b ta Les autres germes non pathog nes peuvent galement cultiver sur ce milieu non s lectif FORMULE TYPE du milieu de base pouvant tre ajust e de fa on obtenir des performances optimales Pour 1 litre de milieu OO AEA aaa 15g Peptone papa nique de SOJA 25m nes 5g Chl r r de SOJU sssrinin a eede 5g Agar agar bact riologique 2 sss rss 15g pH du milieu pr t l emploi 25 C 7 3 0 2 2 4 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr CONTR LE QUALITE Milieu d shydrat poudre blanc cr me fluide et homog ne Milie2. 7 C Ajouter st rilement les additifs n cessaires la culture des bact ries recherch es sang d fibrin st rile de mouton ou de cheval acc l rateurs de croissance agents s lectifs Couler en bo tes de Petri st riles Laisser solidifier sur une surface froide Faire s cher les bo tes l tuve couvercle entrouvert _ Ensemencer l inoculum __Incuber 37 C pendant 24 48 heures en a robiose ou sous atmosph re enrichie en CO pour les Brucella 1 4 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr LECTURE Les streptocoques h molytiques du groupe A de Lancefield apparaissent sous la forme de petites colonies grises translucides ou opaques entour es d une zone d h molyse de type b ta D autres bact ries peuvent pr senter le m me type d h molyse les Listeria les staphylocoques h molytiques Escherichia coli et les Pseudomonas Il est donc n cessaire de pratiquer des colorations de Gram pour confirmer les r sultats Il est possible de r aliser le test de CAMP sur le milieu additionn de 5 de sang de mouton de la mani re suivante Ensemencer en une seule stries m diane une culture de 10 heures de Staphylococcus aureus ATCC 33862 b ta h molytique Perpendiculairement la strie initiale faire une strie
3. G lose Tryptone soja base pour g lose au sang DOMAINE D UTILISATION La g lose Tryptone soja qui est utilis e comme milieu de base destin tre additionn de sang est pr par e avec des mati res premi res s lectionn es qui ne la brunissent pas Elle est sp cialement con ue pour mettre en vidence les r actions h molytiques et pour favoriser la croissance des germes particuli rement exigeants a robies et ana robies Elle est galement utilis e pour pratiquer le test de CAMP ou encore pour la confirmation des Legionella dans les eaux PRINCIPES L association entre la Tryptone et la peptone de soja permet l obtention d une croissance optimale qui est due la synergie r alis e entre l apport protidique de la cas ine et l apport glucidique du soja Le chlorure de sodium maintient l quilibre osmotique Le sang de mouton d fibrin st rile utilis pour enrichir le milieu favorise l obtention d h molyses bien caract ristiques PREPARATION Mettre en suspension 40 0 g de milieu d shydrat BKO28 dans 1 litre d eau distill e ou d min ralis e Porter lentement le milieu bullition sous agitation constante et l y maintenir durant le temps n cessaire sa dissolution __ R partir en tubes ou en flacons __ St riliser l autoclave 121 C pendant 15 minutes MODE D EMPLOI Faire fondre le milieu s il est pr par l avance Refroidir et maintenir 44 4
4. fugation Les mentions port es sur l tiquette sont pr dominantes sur les formules ou les instructions d crites dans ce document Les informations et les sp cifications contenues dans cette fiche technique ont t tablies la date du 2009 02 10 Elles sont susceptibles d tre modifi es tout moment sans pr avis Code document BK028 F 2003 01 7 4 4 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr
5. ose Tryptone soja base au sang R f BKO28HA Incubation 24 heures 37 C Caract ristiques B h molytique zones d claircissement bien d finies et claires a h molytique zones d claircissement incompl tes avec une coloration verd tre REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES FACKLAM R R and CAREY R B 1985 Streptococci and Aerococci in LENNETTE E H BALOWS A HAUSLER W J and SHADOMY H J ed Manual of Clinical Microbiology 4 th Ed ASM Washington DC 154 175 MacFADDIN J F 1985 Media for isolation cultivation identification maintenance of medical bacteria Williams amp Wilklins Baltimore volume 1 794 806 XP CEN ISO TS 11133 2 V 08 104 2 Janvier 2004 Microbiologie des aliments Guide pour la pr paration et la production des milieux de culture Partie 2 Guide g n ral pour les essais de performance des milieux de culture NF T 90 461 Juillet 2001 et NF T 90 461 A1 Juin 2005 Qualit de l eau Microbiologie Contr le qualit des milieux de culture ISO 21871 Janvier 2006 Microbiologie des aliments M thode horizontale pour le d nombrement de Bacillus cereus pr sum s en petit nombre Technique du nombre le plus probable et m thode de recherche NF T 90 431 Septembre 2003 et NF T 90 431 A1 Avril 2006 Qualit de l eau Recherche et d nombrement de Legionella spp et de Legionella pneumophila M thode par ensemencement direct et apr s concentration par filtration sur membrane ou centri
6. u pr par avec 5 de sang de mouton d fibrin g lose rouge opaque R ponse culturale typique apr s 48 heures d incubation 37 C m thode qualitative d ensemencement Microorganismes Croissance Nature de l h molyse Streptococcus pneumoniae ATCC 6303 bonne score 2 Streptococcus pyogenes ATCC 19615 bonne score 2 Listeria monocytogenes CIP 79 31 bonne score 2 Listeria monocytogenes CIP 59 53 bonne score 2 Bacillus cereus ATCC 11778 bonne score 2 MEnterococcus faecalis CCM 2541 bonne Legionella pneumophila ATCC 35152 inhib e 72 heures d incubation 36 C m thode qualitative d ensemencement H molyse non applicable STOCKAGE CONSERVATION Milieu de base d shydrat 2 30 C La date de p remption est mentionn e sur l tiquette Milieu de base pr par en flacons 6 mois 2 8T titre indicatif Milieu complet pr par en bo tes avec sang de mouton 1 mois 2 8 titre indicatif PRESENTATION Code Milieu de base d shydrat Flacon de 500 g BKO28HA 3 4 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr SUPPORT PHOTO R f rence produit BKO28HA Utilisation Mise en vidence des r actions h molytiques et de la croissance des germes exigeants Streptocoques Groupe D fB h molyse G l
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