HIV BLOT 2.2 - MP Biomedicals
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1. 5 Ajouter 20 ul de s rum du patient ou 20 pl autant de contr le dans les puits appropri s Veiller ne pas d poser les pr l vements directement sur les bandelettes 6 Recouvrir la plaque avec le couvre plaque 60 minutes fourni et incuber pendant 1 heure temp rature ambiante 25 3 C sur le plateau bascule 7 Retirer le couvre plaque avec pr caution de fa on viter d clabousser ou de m langer les chantillons Incliner la plaque pour aspirer le m lange dans les puits Changer l embout de l aspirateur chaque chantillon afin d viter toute contamination crois e 8 Laver chaque bandelette 3 reprises avec 3x2ml 2 ml de TAMPON DE LAVAGE DILUE en laissant tremper pendant 5 minutes sur le plateau bascule entre chaque lavage 9 Ajouter 2 ml de SOLUTION DE 2ml CONJUGUE DE TRAVAIL dans chaque puits 10 Couvrir la plaque et incuber pendant 60 minutes 1 heure temp rature ambiante 25 3 C sur le plateau bascule 11 Aspirer le CONJUGU dans les puits 3x2ml Laver comme indiqu l tape 8 12 Ajouter 2 ml de SOLUTION DE 2m SUBSTRAT dans chaque puits 13 Couvrir la plaque et incuber pendant 15 minutes 15 minutes sur le plateau bascule Note La r action peut tre arr t e avant 15 minutes si toutes les bandes sont videntes 14 Aspirer le SUBSTRAT et rincer les 3x2ml bandelettes au moins trois reprises l aide d eau de qualit r actif afin d arr ter la r2. AU VIH 1 Mi IND TERMIN S N GATIFS Donneurs normaux 208 0 11 197 HTLV 1 5 0 0 5 CMV 5 0 1 4 Virus Epstein 5 0 1 4 Barr VEB IgM Zona IgG 5 0 1 4 Rougeole 6 0 2 4 Rub ole 5 0 1 4 Oreillons 4 0 1 3 Ad novirus 5 0 2 3 HSV 5 0 0 5 Dengue 5 0 1 4 Total 258 0 21 237 3 Tous pr sentaient une bande p24 ou p17 seulement Tableau 3 tude de sensibilit de la bande peptide VIH 2 sur des chantillons s ropositifs au VIH 2 Nombre d chantillons 178 VIH 2 Western Blot R activit peptide VIH 2 Profile s rologique Positif N gatif GAG POL et 2 ENV 160 0 GAG POL et 1 ENV 18 0 S rums trouv s positifs avec le nouveau test LAV Blot 2 de Pasteur R sultats fournis par Dr Oliviero E Varnier et Dr Flavia Lillo Laboratoire des r trovirus humains Universit de G nes Tableau 4 tude de sp cificit de la bande peptide VIH 2 sur des s rums s ropositifs au VIH 1 des chantillons de donneurs normaux et des s rums porteurs d autres infections virales TYPE NOMBRE R ACTIVIT PEPTIDE VIH 2 D ECHANTICLON POSITIFS N GATIFS S ropositifs au VIH 1 197 16 181 Donneurs normaux 208 0 208 S ropositifs au HTLV 1 5 0 5 CMV 5 0 5 Virus Epstein Barr 5 0 5 VEB IgM Zona IgG 5 0 5 Rougeole 6 0 6 Rub ole 5 0 5 Oreillons 4 0 4 Ad novirus 5 0 5 HSV 5 0 5 Dengue 5 0 5 Total 455 16 439
3. Forme polym rique Glycoprot ine de gp41 Bande large diffuse gp 120 ENV Extra membranaire Glycoprot ine Bande diffuse p66 POL Transcriptase Bande troite inverse p55 GAG Prot ine pr curseur Bande troite p51 POL Transcriptase Bande troite juste inverse en dessous de p55 p39 GAG Fragment de p55 Bande troite gp41 ENV Transmembranaire Glycoprot ine diffuse p31 POL Endonucl ase Double bande p24 GAG Prot ine Bande large nucl ocapsidique p17 GAG Prot ine Bande large nucl ocapsidique Certains antig nes pr sents dans ce tableau sont d riv s du m me pr curseur et peuvent avoir des pitopes en commun Ceci doit tre pris en compte lors de l interpr tation du sch ma par exemple 1 Il est improbable de d tecter gp41 en l absence de gp160 car gp160 est la forme polym rique de gp41 et la concentration en gp160 est plus lev e que celle en gp41 dans le test HIV BLOT 2 2 de MPD Le gp41 appara t sous la forme d une bande diffuse Une bande nette et troite au niveau de la r gion du gp4i ne doit pas tre interpr t e comme tant une bande gp41 De nombreux pr l vements normaux et non infect s par le VIH pr sentent une r action positive cet antig ne non VIH ce qui a probablement pour origine la lign e cellulaire humaine utilis e pour la croissance du virus VIH 2 La bande p55 est g n ralement d tect e en pr sence d une forte r activit au p24 et ou au p17 Le
4. MP Diagnostics HIV BLOT 2 2 TEST PAR WESTERN BLOT CE 0123 DATE DE R VISION 03 07 Remarque modifications en MAE 0011 FRA 1 surbrillance Kit pour 18 tests 11030 018 Kit pour 36 tests 11030 036 NOM ET APPLICATIONS Le test HIV BLOT 2 2 de MP Diagnostics MPD est un test immunoenzymatique qualitatif de d tection in vitro des anticorps du virus d immunod ficience humaine de type 1 VIH 1 et de ype 2 VIH 2 dans le s rum ou le plasma humain II est destin tre utilis comme test compl mentaire plus sp cifique sur les chantillons s riques ou plasmatiques ayant pr sent une r action positive r p t e aux tests de d pistage de type essai par immunoadsorption avec enzyme conjugu ELISA INTRODUCTION De nombreux tests de d pistage sont disponibles pour la d tection des anticorps sp cifiques des virus VIH 1 et VIH 2 agents tiologiques du syndrome d immunod ficience acquise SIDA Les tests de ce type peuvent tre extr mement sensibles mais sont susceptibles d tre moins sp cifiques ce qui risque de conduire des interpr tations de faux positifs Des tests suppl mentaires ind pendants et hautement sp cifiques sont donc n cessaires pour confirmer la pr sence d anticorps anti VIH 1et ou anti VIH 2 Le test HIV BLOT 2 2 de MP Diagnostics est destin tre utilis comme test suppl mentaire plus sp cifique sur les chantillons s riques ou plas
5. 2 C et 8 C pour conservation d s que possible Un pr cipit peut se former lorsque le substrat est conserv entre 2 C et 8 C Ceci n a aucune incidence sur le fonctionnement de la trousse Attention viter toute exposition inutile du substrat la lumi re 3 CONTR LE POSITIF FAIBLE Le contr le positif faible permet de mesurer la sensibilit de la trousse Des bandes peu marqu es doivent appara tre en p24 et ou gp41 et gp120 gp160 D autres bandes peu marqu es peuvent tre ou non pr sentes La bande de contr le s rique est visible voir fig 1b INTERPRETATION DES R SULTATS REMARQUE Les bandelettes r v l es doivent tre totalement s ches afin d viter toute erreur d interpr tation La pr sence ou l absence d anticorps anti VIH 1 dans un chantillon est d termin e en comparant chaque bandelette de nitrocellulose aux bandelettes de contr les n gatifs et positifs aible et fort La figure 1a est donn e en exemple pour faciliter l identification des diverses bandes apparaissant sur les bandelettes soumises au contr le POSITIF FORT REMARQUE IMPORTANTE L extr mit num rot e des bandelettes doit tre dirig e vers le bas comme indiqu sur la igure c est dire que les bandes gp120 gp160 doivent tre en position distale par rapport l extr mit num rot e POIDS G NE ANTIG NE DESCRIPTION MOL CULAIRE gp 160 ENV
6. Utiliser des proc d s aseptiques notamment les pipettes ou les embouts jetables de pipette lors de pr l vements dans les flacons 5 Les contr les de la trousse doivent tre test s en m me temps que les chantillons des patients chaque cycle de test 6 Afin d viter toute contamination crois e utiliser un nouvel embout de pipette pour chaque nouvel d chantillon 7 Pour obtenir des r sultats optimaux verser les r actifs encore froids et les replacer le plus rapidement possible entre 2 C et 8 C pour conservation 8 Il est recommand de nettoyer la verrerie devant tre utilis e avec les r actifs l aide d acide chlorhydrique 2 M et de la rincer abondamment l eau distill e ou d sionis e avant utilisation 9 Utiliser exclusivement de l eau d sionis e ou distill e de qualit r actif pour diluer les r actifs 10 Tous les r actifs doivent tre convenablement m lang s avant utilisation 11 La solution de conjugu de travail le tampon de lavage dilu et le tampon de blotting doivent tre pr par s juste avant utilisation 12 La solution de conjugu de travail doit tre pr par e l aide d un b cher ou d un r cipient en polypropyl ne R SUM DES PROTOCOLES DE TEST R actifs Qt Temp ambiante Temp ambiante Test rapide Test sur 2 jours Bandelette de 1 nitrocellulose Tampon de 2ml 1 2 min 1 2 min lavage Tampon de
7. aTest s avec HIV 2 Western Blot de MPD 6 de ces chantillons sont apparus r actifs aux ENV et GAG ou POL 9 de ces chantillons ont eu une r activit uniquement avec GAG et ou POL et un chantillon tait n gatif Le test HIV Blot 2 2 de MPD a t pratiqu sur 15 panels commerciaux de s roconversion au VIH 1 Les r sultats ont montr que le test tait capable de d tecter les anticorps au VIH plus pr cocement ou dans le m me chantillon pour tous les panels LIMITES DE GARANTIE Le fabricant ne garantit la trousse de test que pour un usage diagnostique in vitro sous r serve que soient respect es les sp cifications et limites d crites dans le mode d emploi du produit et que celui ci soit utilis conform ment aux pr sentes instructions Le fabricant d cline toute responsabilit explicite ou implicite y compris celle implicite ou explicite li e la qualit marchande l aptitude l emploi ou le fonctionnement implicite une fin particuli re Le fabricant ne peut s engager que sur un remplacement o un remboursement du produit Le fabricant ne peut tre tenu responsable par l acheteur ou toute autre partie d aucune d t rioration blessure ou perte financi re r sultant de l utilisation du produit PROBL MES TECHNIQUES R CLAMATIONS Dans l ventualit d un probl me technique d une r clamation proc der comme suit 1 Noter le num ro de lot de la trousse la date d
8. action Une coloration de fond sombre peut appara tre si le lavage est insuffisant cette tape 15 l aide de pinces placer d licatement les bandelettes sur du papier absorbant Couvrir avec le papier absorbant et s cher Il est galement possible de laisser les bandelettes s cher dans les puits de la plaque 16 Fixer les bandelettes sur une feuille de r sultats papier blanc non absorbant Ne pas appliquer de ruban adh sif au niveau des bandelettes r v l es Examiner les bandelettes voir l interpr tation des r sultats et reporter les r sultats Pour les stocker maintenir les bandelettes dans l obscurit MODE OP RATOIRE ALTERNATIF TEST SUR 2 JOURS Marche suivre 1 Ajouter 2 ml de TAMPON DE LAVAGE 2ml DILUE dans chaque puits 2 l aide de pinces extraire avec pr caution le nombre n cessaire de BANDELETTES du tube et les disposer face num rot e vers le haut dans chaque puits Placer des bandelettes pour les contr les positif fort positif faible et n gatif PR CAUTIONS D UTILISATION 1 Utilisation r serv e au diagnostic in vitro 2 Utilisation r serv e aux professionnels 3 Consulter l emballage du produit pour conna tre les composants susceptibles de pr senter un risque biologique INFORMATIONS RELATIVES LA S CURIT ET LA SANT ATTENTION Cette trousse contient des substances d origine humaine Aucune technique de test ne permet
9. titrage en anticorps anti VIH 80 yl 1 et anti VIH 2 et non r actif l AgHBs et l anti VHC Contient de l azide de sodium et du thiomersal comme conservateurs D gt CONTR LE POSITIF CONTROL wEaK FAIBLE 1 flacon S rum humain inactiv faible 80 pl titrage en anticorps anti VIH 1 SEULEMENT et non r actif l AgHBs et aux anticorps anti VIH 2 et anti VHC Contient de l azide de sodium et du thiomersal comme conservateurs TAMPON CONCENTR DE eur srock ix STOCKAGE 10x 1 bouteille Tampon Tris contenant du 20 ml s rum normal de ch vre inactiv par chauffage Contient du thiomersal comme conservateur TAMPON CONCENTR DE Bur wasn 20 LAVAGE 20x 1 bouteille Tampon Tris contenant du 70 ml Tween 20 Contient du thiomersal comme conservateur CONJUGU Anti IgG humain de ch vre 1 flacon conjugu e de la 120 ul phosphatase alcaline Contient de l azide de sodium comme conservateur SUBSTRAT sues eciP neT Solution de 5 bromo 4 chloro 1 bouteille A 3 indolyl phosphate BCIP et 100 mi de nitrobleu de t trazolium NBT POUDRE DE BLOTTING Lait cr m d shydrat 10 sachets 1 g chacun Plaques d incubation de 9 puits chacune 2 ou 4 plaques Mode d emploi 1 exemplaire Pinces 1 paire Remarque Le volume de r actifs fourni permet de r aliser 4 cycles 4 Ajouter 2 mi de TAMPON DE BLOTTING 2ml dans chaque puits
10. assays for HIV 1 HIV 2 and HTLV I HTLV II Weekly Epidemiological Record 65 37 281 283 7 F Clavel D Guetard F Brun Vezinet et al 1986 Isolation of a new human retrovirus from West African patients with AIDS Science 233 343 346 8 F Clavel 1987 HIV 2 the West African AIDS virus AIDS 1 135 140 9 R S Tedder A Hughes T Corrah et al 1988 Envelope cross reactivity in Western Blot for HIV 1 and HIV 2 may not indicate dual infection Lancet 11 927 930 10 Bottiger B A Karlsson F Andreasson et al 1990 Envelope cross reactivity between Human Immunodeficiency Virus Type 1 and Type 2 detected by different serological methods Correlation between cross neutralization and reactivity against the main neutralizing site J Virol 64 7 3492 3499 11 Centers for Disease Control 2001 Revised Guidelines for HIV Counseling Testing and Referral and Revised Recommendations for HIV Screening of Pregnant Women United States Morbid Mortal Weekly Rep 50 RR 19 12 Fiebig E W D J Wright B D Rawal P E Garrett R T Schumacher L Peddada C Heldebrant R Smith A Conrad S H Kleinman and M P Busch 2003 Dynamics of HIV viremia and antibody seroconversion in plasma donors implications for diagnosis and staging of primary HIV infection AIDS 17 1871 1879 13 Ly T D C Edlinger and A Vabret 2000 Contribution of combined detection assays of p24 antigen and anti human immunodeficiency v
11. et gp120 et GAG POSITIF AU VIH 1 p17 p24 p55 ou POL avec p31 p51 p66 et bande sp cifique VIH 2 POSSIBLE au VIH 2 visible Bandes virales sp cifiques pr sentes mais profil ne remplissant pas les crit res de POSITIVITE Bandes virales sp cifiques pr sentes profil ne remplissant IND TERMIN pas les crit res de POSITIVIT avec mais bande sp cifique au VIH 2 VIH 2 POSSIBLE visible POSITIF AU VIH 1 IND TERMIN 2INTERPRETATION DES RESULTATS POUR LES TESTS INDETERMINES Les r sultats INDETERMINES ne doivent pas tre utilis s comme base de diagnostic de l infection HIV1 En se basant sur le fait que la plupart des personnes ayant un r sultat initial INDETERMINE et qui sont infect s avec le virus HIV1 vont d velopper en moins d un mois des anticorps HIV d tectables le CDC 2001 a recommand que de telles personnes soient retest es plus ou moins un mois plus tard Les personnes dont le r sultat INDETERMINE persiste apr s un mois ne sont probablement pas infect es sauf si une exposition r cente au virus est suspect e D apr s une r cente tude de FIEBIG et al 2003 bien que la fen tre de d tection pour une infection primaire HIV1 puisse atteindre 22 jours l volution du Blot d INDETERMINE franchement POSITIF ne prend pas plus que 8 jours De plus ce laboratoire affirme que les Western Blot INDETERMINE sont toujours accompagn s d ARN HIV1 d tectables dans le ca
12. ou les deux Bien que plus de 95 des cas de vrais positifs identifi s par une technique de 4 me g n ration soient r ellement confirm s par Western Blot Ly et al 2000 un test suppl mentaire utilisant la d tection ARN est apparu in vitable pour la petite part de r activit li e l antig ne P24 De nouveau les personnes non consid r es comme risque ne sont probablement pas infect es par le HIV si elles sont d tect es positives par l ELISA de 4 me g n ration avec un Western Blot INDETERMINE et un r sultat ne pouvant tre confirm comme positif par la technique ARN couvrant les HIV 1 2 0 N anmoins les tests ADN et ARN du HIV pour la d tection des acides nucl iques NAT n taient pas reconnus des fins de diagnostic par les autorit s comp tentes US CDC 2001 Constantine amp Zink 2005 jusqu il y a peu de temps A ce jour un seul test qualitatif ARN est reconnu par la FDA des US pour le diagnostic primaire des infections aigues HIV Donc les algorithmes recommand s par le CDC des US 2001 et de l OMS 2004 doivent encore tre mis jour et les tests acides nucl iques NAT doivent y tre inclus comme m thodes permettant de r soudre les r sultats INDETERMINE en Western Blot Cependant le CDC des US 2001 reconnaissait qu en pr sence des sp cialistes clinique et de laboratoire les tests nucl iques NAT pouvaient tre utiles pour d terminer le statut infectieux des personnes ayant u
13. patients peuvent tre inactiv s mais ceci n est pas indispensable au fonctionnement optimal du test Pour les inactiver proc der comme suit 1 Retirer le couvercle du r cipient contenant les pr l vements 2 Chauffer le pr l vement 56 C pendant 30 minutes au bain marie 8 Laisser refroidir le pr l vement avant de refermer le couvercle 4 Le pr l vement peut tre congel pour tre conserv jusqu l analyse Il est d conseill de soumettre le pr l vement des patients des cycles r p t s de cong lation d cong lation avant l analyse MAT RIEL SUPPL MENTAIRE N CESSAIRE NON FOURNI AVEC LA TROUSSE _ Eau d ionis e ou distill e Gants jetables Un plateau bascule offrant une vitesse de basculement allant de 12 16 oscillations par minute et un angle d inclinaison de 5 10 degr s afin de permettre un lavage homog ne des membranes Pipetteurs et embouts de contenance appropri e __ Aspirateur avec collecteur l hypochlorite de sodium _ Bain marie 56 C facultatif Hypochlorite de sodium pour la d contamination PR PARATION DES R ACTIFS 1 TAMPON DE LAVAGE DILU a Le TAMPON DE LAVAGE DILU doit tre pr par juste avant utilisation b Diluer 1 volume de TAMPON DE LAVAGE CONCENTR 20X dans 19 volumes d eau de qualit r actif Bien m langer 2 TAMPON DE BLOTTING a Le TAMPON DE BLOTTING doit tre pr par juste av
14. 2ml blotting Pr l vement 20 ul 60 min D un jour sur l autre 16 20 heures Tampon de 3x2ml 3x5 min 3 x 5 min lavage Conjugu 2ml 60 min 30 min Tampon de 3x2ml 3x5 min 3 x 5 min lavage Substrat 2ml 15 min 15 min pr t l emploi ou moins ou moins Eau distill e 3x2ml QUANTIT DE R ACTIF N CESSAIRE SELON LE NOMBRE DE BANDELETTES R actifs NOMBRE DE BANDELETTES UTILIS ES 3 6 9 15 20 27 36 Tampon de lavage 60 1100 140 240 300 400 520 1X ml Tampon de blotting 20 40 60 80 100 120 160 1X ml Conjugu ul 11117 23 35 45 59 77 Substrat ml 11117 23 35 45 59 77 Poudre de blotting 112 13 4 5 6 8 9 CONTR LE DE QUALIT Il est recommand de recourir aux contr les n gatif positif fort et positif faible chaque test quel que soit le nombre d chantillons test s Pour que les r sultats obtenus l issu d un test soient valables les conditions suivantes doivent tre remplies 1 CONTROLE N GATIF Aucune bande sp cifique au VIH 1 ou au VIH 2 ne doit appara tre sur les bandelettes de contr le n gatif La bande correspondant au contr le du d p t s rique doit tre visible voir fig 1c 2 CONTROLE POSITIF FORT Toutes les bandes des poids mol culaires pertinents doivent appara tre La figure 1a d crit l emplacement relatif des bandes visualis es avec le test HIV BLOT 2 2 de MPD
15. TIF IND TERMIN E En pareil cas l interpr tation des r sultats doit tre fond e sur les tests de blot cons cutifs et les valuations cliniques En raison de sa nature hautement sp cifique l absence de r activit des chantillons au peptide d enveloppe sp cifique au VIH 2 dans le cadre d un profil ind termin ne doit pas exclure la possibilit d une infection avec d autres souches de VIH 2 Les chantillons pr sentant une infection possible au VIH 2 doivent tre analys s plus avant l aide d un test de HIV 2 Western Blot CARACT RISTIQUES DE FONCTIONNEMENT SP CIFIQUES Le fonctionnement du test HIV BLOT 2 2 de MPD de d tection des anticorps au VIH 1 ou au VIH 2 a t valu par des essais cliniques Tableau 1 tude de sensibilit sur la r activit de l antig ne viral VIH 1 avec des chantillons s ropositifs au VIH 1 Nombre d chantillons 197 PROFILE HIV BLOT 2 2 DUPONT ORTHO S ROLOGIQUE NOMBRE VIH 1 WB NOMBRE GAG POL et ENV 192 97 5 188 95 4 p24 p31 gp41 et ou 187 94 9 179 90 9 gp120 gp160 ENV et GAG ou POL 197 100 0 197 100 0 Tableau 2 tude de sp cificit sur la r activit de l antig ne viral VIH 1 avec des chantillons de donneurs normaux et des s rums porteurs d autres infections virales CHANTILLON NOMBRE POSITIFS R ACTIVIT
16. ant utilisation b Diluer 1 volume de TAMPON CONCENTR DE STOCKAGE 10X dans 9 volumes d eau de qualit r actif Bien m langer Ajouter 1 g de POUDRE DE BLOTTING pour chaque volume de 20 ml de TAMPON DE STOCKAGE dilu pr par l tape 2 b ci dessus M langer afin de garantir la dissolution totale de la poudre d M langer nouveau avant de verser c DESCRIPTION DES SYMBOLES UTILIS S Il s agit des symboles graphiques utilis s sur les produits et emballages des produits diagnostiques de MP Diagnostics Ce sont les symboles apparaissant le plus fr quemment sur les quipements m dicaux et sur leurs emballages Ils sont d crits plus en d tails dans la notice de normalisation British and European Standard BS EN 980 2008 Ne pas r utiliser z el avant quipement ynonyme m dical usage Date de p remption diagnostique in vitro Code du lot de abrication Num ro du Synonymes catalogue Lo Num ro de lot Num ro de lot de Attention abrication Voir les A instructions Limites de d utilisation temp rature Repr sentant Fabricant agr dans la eas Ec rer Communaut europ enne Y Contenance suffisante p pour lt n gt tests ci Consulter les instructions d utilisation PRINCIPES CHIMIQUES amp BIOLOGIQUES DU TEST Les bandelettes de nitrocellulose sont sensibilis es par des prot ines antig niques s par es et fix es partir du virus VIH 1 i
17. de garantir totalement que les produits sanguins humains ne sont pas susceptibles de transmettre une infection MANIPULER LES PR L VEMENTS TESTER ET LES CONTR LES POSITIFS FORT ET FAIBLE ET N GATIFS COMME S IL S AGISSAIT D AGENTS POTENTIELLEMENT INFECTIEUX est recommand de manipuler les composants et les sp cimens analyser conform ment aux Bonnes pratiques de laboratoire lls doivent galement tre limin s dans le respect des r gles de s curit en vigueur Le Contr le positif fort le Contr le positif faible et le Contr le n gatif contiennent du thiomersal et de l azide de sodium le tampon concentr de stockage et le tampon concentr de lavage contiennent du thiomersal et le conjugu contient de l azide de sodium L azide de sodium peut r agir au contact du cuivre et du plomb pr sents dans certaines tuyauteries et former des sels explosifs Les quantit s utilis es dans cette trousse sont limit es Toutefois lors de leur limination les substances contenant des azides doivent tre rinc es abondamment afin d viter la formation d azides m tallis s dans les tuyauteries Ci apr s figurent les nonc s des dangers R correspondants R22 Nocif par ingestion Le substrat contient du 5 bromo 4 chloro 3 indolyl phosphate et du nitrobleu de t trazolium lequel est class comme nocif Xn par les directives applicables de la Communaut europ enne CEECi apr s figurent les nonc s des danger
18. e p remption et le num ro de lot de la bandelette Conserver les trousse set les r sultats obtenus Contacter le bureau MP Biomedicals le plus proche ou votre distributeur local w D TABLEAU DE D PANNAGE BIBLIOGRAPHIE 1 V C W Tsang K Hancock M Wilson D F Palmer S Whaley J S Mc Dougal and S Kennedy March 1985 Developmental Procedure Enzyme linked Immunoelectro transfer Blot technique for HTLV III LAV antibodies CDC Altanta 2 H Towbin T Staehlin and J Gordon 1979 Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets procedure and some applications Proc Natl Acad Sci USA 76 4350 4354 3 J Schupbach M Popovic R V Gilden M A Gonda M G Sarngadharan and R C Gallo 1984 Serological Analysis of subgroup of Human T Lymphotropic retroviruses HTLV Ill associated with AIDS Science 224 503 505 4 M G Sarngadharan M Popovic L Bruch J Schupbach and R C Gallo 1984 Antibodies reactive with human T Lymphotropic retroviruses HTLV II in the serum of patients with AIDS Science 224 506 608 5 CDC 1985 Provisional public health service inter agency recommendations for screening donated blood and plasma for antibody to the virus causing Acquired Immune Deficiency Syndrome United States Morbidity and Mortality Weekly Report 34 1 1 5 6 Proposed World Health Organization 1990 criteria for interpreting results from Western blot
19. es marques aqueuses sur les bandes d velopp es pour quelques sp cimens 4 Ajouter 2 ml de TAMPON DE BLOTTING 2ml dans chaque puits 5 Ajouter 20 ul de s rum du patient ou 20 pl autant de contr le dans les puits appropri s 6 Recouvrir la plaque avec le couvre plaque toute la nuit fourni et incuber jusqu au lendemain 16 20 heures temp rature ambiante 25 3 C sur le plateau bascule 7 Retirer le couvre plaque avec pr caution de fa on viter d clabousser ou de m langer les chantillons Incliner la plaque pour aspirer le m lange des puits Changer l embout de l aspirateur chaque chantillon afin d viter toute contamination crois e 8 Laver chaque bandelette 3 reprises avec 3x2ml 2ml TAMPON DE LAVAGE DILU en laissant tremper pendant 5 minutes sur le plateau bascule entre chaque lavage 9 Ajouter 2 ml de SOLUTION DE 2 ml CONJUGU DE TRAVAIL dans chaque puits 10 Couvrir la plaque et incuber pendant 30 minutes 30 minutes temp rature ambiante 25 3 C sur le plateau bascule 11 Aspirer le CONJUGU dans les puits 3x2ml Laver comme indiqu l tape 8 12 Ajouter 2 mil de SOLUTION DE 2ml SUBSTRAT dans chaque puits 13 Couvrir la plaque et incuber pendant 15 minutes 15 minutes sur le plateau bascule Note La r action peut tre arr t e avant 15 minutes si toutes les bandes sont videntes 14 Aspirer le SUBSTRAT et rincer les 3x2ml bandelettes au
20. et permet d identifier les bandes observ es pour le CONTR LE POSITIF FORT Les diff rentes bandes sont les p17 p24 p31 gp41 p51 p55 p66 gp120 gp160 D autres bandes associ es aux antig nes nucl ocapsidiques p39 p42 peuvent galement tre visibles Veiller ne pas les interpr ter tort comme des gp41 Les antig nes d enveloppe gp41 gp120 gp160 apparaissent comme des bandes diffuses typiques des glycoprot ines La bande de contr le s rique est visible La bande sp cifique au VIH 2 doit galement tre visible comme indiqu dans la figure 1a 13 Ne pas manipuler les r actifs dans une zone contenant un niveau lev de vapeurs d sinfectantes chimiques par exemple les vapeurs d hypochlorite au cours de leur conservation ou de l incubation et ne pas effectuer le test dans une telle zone La mise contact inhibe la r action de coloration Ne pas exposer non plus les r actifs une forte luminosit 14 Il est pr f rable d effectuer le test temp rature ambiante 25 C 3 C 15 Veiller ce que les bandelettes de test soient dispos es de fa on ce que les num ros inscrits sur les bandelettes soient dirig s vers le haut 16 Pour le test de Western Blot il est important d utiliser un agitateur bascule et non un agitateur rotatif Dans le cas contraire le fonctionnement de la trousse serait compromis La vitesse et l angle d inclinaison recommand s pour l agitateur sont respectivemen
21. irus HIV antibodies in diagnosis of primary HIV infection by routine testing J Clin Microbiol 38 2459 2461 14 Sethoe S Y A E Ling E H Sng E H Monteiro R K Chan 1995 PCR as a confirmatory test for human immunodeficiency virus type 1 infection in individuals with indeterminate western blot immunoblot profiles J Clin Microbiol 33 3034 3036 15 Constantine N T and H Zink 2005 HIV testing technologies after two decades of evolution Indian J Med Res 121 519 538 16 World Health Organization 2004 Guidelines for HIV Diagnosis and monitoring of antiretroviral therapy Regional Office for South East Asia New Delhi India Des points sombres se d veloppent sur les bandelettes Des marques blanches se d veloppent sur les bandelettes 1 Bandelettes retourn es au cours du test 2 Plaques mal lav es avant utilisation 3 Faible dissolution de la poudre de blotting 4 Interf rence par lectrotransblot au cours de la fabrication 1 Contamination bact rienne ou fongique de l chantillon de test Les bandes attendues ne se d veloppent pas ou sont de faible intensit V rifier le contr e positif Des bandes non sp cifiques n indiquant pas d infection possible au VIH 2 se d veloppent Une forte coloration de fond se d veloppe sur la bandelette en l absence ou la pr sence de bandes positives 1 L chantillon est trop fort et r agit des quantit
22. l ouverture initiale des tubes de bandelettes Toutefois si des points sombres se d veloppent apr s l ouverture initiale du tube le probl me provient de conditions de conservation inad quates au site de l utilisateur Bande nette et troite au niveau de la r gion du gp41 Marques aqueuses sur les bandelettes d velopp es 1 Bandelettes laiss es s cher apr s l tape de pr trempage avant l ajout du tampon de blotting 1 11 ne s agit pas de la r gion du gp41 car le gp41 appara t sous la forme d une bande diffuse 2 Ne pas interpr ter comme tant gp41 8 11 s agit probablement d une prot ine de lign e cellulaire p42
23. matiques humains ayant pr sent une r action positive r p t e au test ELISA Des antig nes viraux sp cifiques du VIH 1 sont s par s et d pos s sur des bandelettes par lectrophor se et lectrotransblot Un peptide synth tique sp cifique de VIH 2 est dispos sur la m me bandelette Le test permet une caract risation plus pouss e de la r ponse s rologique aux prot ines virales sp cifiques pr sentes Chaque bandelette poss de galement un contr le interne de d p t d chantillon ce qui permet de r duire au maximum le risque de faux n gatif li des erreurs de manipulation et v rifier que les chantillons ont t correctement d pos s COLLECTE TRANSPORT ET CONSERVATION DES PR LEVEMENTS Les chantillons s riques ou plasmatiques recueillis dans l EDTA l h parine ou le citrate de sodium peuvent tre utilis s Avant de les stocker v rifier que les caillots sanguins ou les cellules sanguines ont t s par s par centrifugation Les chantillons doivent tre conserv s entre 2 et 8 C si le test est pratiqu dans les 7 jours suivant le pr l vement et congel s 20 C ou temp rature inf rieure si le test est pratiqu apr s plus de 7 jours Il est pr f rable d utiliser des pr l vements clairs non h molys s Les chantillons lip miques ict riques ou contamin s par des particules doivent tre filtr s 0 45 um ou centrifug s avant le test Les pr l vements des
24. moins trois reprises l aide d eau de qualit r actif afin d arr ter la r action Une coloration de fond sombre peut appara tre si le lavage est insuffisant cette tape 15 l aide de pinces placer d licatement les bandelettes sur du papier absorbant Couvrir avec le papier absorbant et s cher Il est galement possible de laisser les bandelettes s cher dans les puits de la plaque 16 Fixer les bandelettes sur une feuille de r sultats papier blanc non absorbant Ne pas appliquer de ruban adh sif au niveau des bandelettes r v l es Examiner les bandelettes voir l interpr tation des r sultats et reporter les r sultats Pour les stocker maintenir les bandelettes dans l obscurit 9 Essuyer imm diatement les claboussures de substances potentiellement infectieuses l aide de papier absorbant et nettoyer la zone contamin e l aide d une solution d hypochlorite de sodium 1 avant de reprendre le travail L hypochlorite de sodium ne peut tre utilis sur les claboussures contenant de l acide que si la zone a pr alablement t essuy e et s ch e l aide de papier absorbant Le mat riel utilis y compris les gants jetables doit tre limin comme les mat riaux susceptibles de pr senter un risque biologique Ne pas autoclaver les mat riaux contenant de l hypochlorite de sodium 10 Autoclaver tous les mat riaux utilis s et contamin s 121 C 15 p s i pendant 30 mi
25. n r sultat en Western Blot INDETERMINE LIMITES DE LA M THODE La d tection d anticorps du VIH 1 ne permet pas d tablir un diagnostic du syndrome d immunod ficience acquise SIDA Un BLOT N GATIF n offre pas la garantie que le virus du SIDA n est pas pr sent Bien qu un blot POSITIF en anticorps du VIH 1 indique la pr sence d une infection par le virus le diagnostic du SIDA ne peut tre tabli que sur un tableau clinique selon des crit res d finis par le Centre de contr le des maladies tats Unis l Organisation mondiale de la sant ou autre organisme pertinent Il est reconnu que des personnes ayant fait une s roconversion r cente peuvent pr senter des profils incomplets mais elles d veloppent une r activit accrue en nombre comme en intensit de bandes apr s deux six mois La plupart des Blots POSITIFS pr senteront d autres bandes virales sp cifiques visibles Les Blots IND TERMIN S ne doivent pas tre utilis s comme base pour le diagnostic de l infection par le VIH 1 Pour tous les BLOTS IND TERMINES il est recommand de renouveler le test sur le pr l vement d origine et sur des chantillons cons cutifs Les donneurs de sang dont les blots sont IND TERMIN S doivent tre retest s partir d un nouveau pr l vement au bout de deux six mois De plus anticorps anti p24 et anti p31 augmentent au cours de l volution du SIDA faisant passer l interpr tation du blot de POSI
26. nactiv partiellement purifi puis incorpor es l aide d un ransfert blotting par lectrophor se Un peptide de synth se sp cifique du VIH 2 est ajout sur ces m mes bandelettes Chaque bandelette de nitrocellulose est incub e avec le s rum ou le plasma dilu et avec les contr les Les anticorps sp cifiques au VIH 1 et au VIH 2 s ils sont pr sents dans les chantillons se lieront aux prot ines VIH 1 et au peptide VIH 2 des bandelettes Les substances non li es sont ensuite limin es par lavage des bandelettes Les anticorps fix s sp cifiquement sur les prot ines VIH peuvent tre visualis s l aide d une s rie de r actions une immunoglobuline de ch vre anti IgG humaine conjugu e la phosphatase alcaline et un substrat BCIP NBT Cette m thode est suffisamment sensible pour d tecter de tr s faibles quantit s d anticorps sp cifiques au VIH dans le s rum ou le plasma L MENTS DU KIT Description du contenu Quantit fournie BANDELETTES DE Disponible mea NITROCELLULOSE par 18 ou 36 Comporte un lysat viral de bandelettes VIH 1 un peptide d enveloppe sp cifique VIH 2 et une bandelette de contr le de d p t s rique Conserver au sec et l abri de la lumi re CONTR LE N GATIF 3 SOLUTION DE CONJUGU DE TRAVAIL Remarque Pr parer la solution dans un b cher r cipient en polypropyl ne a La SOLUTION DE CONJUGU DE TRAVAIL doit tre pr par e j
27. ntillon de test 1 Mauvaise dilution de l chantillon de test 2 chantillon de test contamin par le conjugu 3 chantillons de test contenant une forte concentration de complexes immuns 4 1gG de l chantillon de test d t rior ou d natur par des cycles r p t s de cong lation d contamination ou une conservation inadapt e 5 Utilisation d un plateau rotatif au lieu d un plateau bascule 6 1 s agit d un chantillon de test ELISA faux positif Absence de bande de contr le s rique Des bandes autres que la bande de contr le s rique se d veloppent sur le contr le n gatif Des bandes non sp cifiques et ou une coloration de fond sombre se d veloppent sur les bandelettes Les cupules de plaque ou le contr le ont fait l objet d une contamination crois e 1 Mauvaise dilution de l chantillon de test ou du conjugu 2 Incubation de l chantillon de test du r actif trop longue 8 Lavage incomplet au cours du test 4 Temp rature d incubation sup rieure 30 C 5 chantillon de test r actif aux prot ines non virales Les bandelettes sont d fectueuses 1 Elles sont craquel es 2 Elles contiennent des bulles d air provoquant l apparition de points blancs dans les zones r actives points suffisamment gros pour emp cher toute d tection 3 Elles pr sentent des points sombres caus s par un d veloppement fongique lors de
28. nutes avant de les vacuer Il est galement possible de d contaminer les mat riaux dans une solution d hypochlorite de sodium 5 pendant 30 60 minutes avant de les liminer dans des sacs poubelle pour produits risque biologique 11 D contaminer tous les produits chimiques et r actifs utilis s en y ajoutant le volume d hypochlorite de sodium n cessaire pour arriver une concentration finale d au moins 1 Laisser en contact pendant 30 minutes pour garantir le succ s de la d contamination 12 Il est d conseill de r utiliser les plaques d incubation PR CAUTIONS ANALYTIQUES 1 Le fonctionnement optimal du test n est possible que dans le RESPECT ABSOLU du mode op ratoire d crit dans ce mode d emploi Le non respect de ce mode op ratoire peut entra ner l obtention de r sultats aberrants 2 NE PAS MODIFIER OU CHANGER DES R ACTIFS DE TROUSSES DIFF RENTES L assemblage des contr les conjugu et bandelettes de Western Blot est tudi pour un fonctionnement optimal Utiliser uniquement les r actifs fournis avec la trousse 3 Ne pas utiliser les composants de la trousse au del de la date de p remption figurant sur l emballage de la trousse 4 viter toute contamination microbienne des r actifs lors de l ouverture des flacons ou bouteilles et de pr l vements de produit Une contamination r duirait la dur e de conservation des trousses et entra nerait l obtention de r sultats erron s
29. ois tous les chantillons d pos s remettre la plaque plat Veiller ce que les bandelettes restent humides en permanence au cours de l op ration iii Si l utilisateur ne souhaite pas incliner la plaque il lui est galement possible de d poser les chantillons l extr mit sup rieure ou inf rieure du puits Ainsi l apparition ventuelle de marques sombres n emp cherait pas la lecture des r sultats sur la bandelette Marche suivre 1 Ajouter 2 ml de TAMPON DE LAVAGE 2 ml DILUE dans chaque puits 2 l aide de pinces extraire avec pr caution le nombre n cessaire de BANDELETTES du tube et les disposer face num rot e vers le haut dans chaque puits Placer des bandelettes pour les contr les positif fort positif faible et n gatif 3 Incuber les bandelettes pendant 1 2 2 minutes minutes temp rature ambiante 25 3 C sur un plateau bascule vitesse de 12 16 cycles par minute liminer le tampon par aspiration Note Ne laissez pas les bandes s cher l chec peut avoir comme cons quence les marques aqueuses sur les bandes d velopp es pour quelques sp cimens CONTROL S rum humain normal inactiv 1 flacon A et non r actif l antig ne de 80 pl surface de l h patite B AgHBs et aux anticorps anti VIH 1 2 et anti VHC Contient de l azide de sodium et du thiomersal comme conservateurs CONTR LE POSITIF FORT ONTROL S rum humain inactiv fort 1 flacon
30. pr sence de bandes sp cifiques selon les recommandations des autorit s comp tentes savoir le minist re de la sant l Organisation Mondiale de la Sant etc Les recommandations applicables pour l interpr tation peuvent varier en fonction des politiques locales MPD recommande de suivre la l gislation en vigueur dans le pays o le test est utilis Certains des crit res recommand s par diff rentes organisations internationales sont r pertori s ci dessous CRIT RES D INTERPR TATION POSITIVE DES TESTS WESTERN BLOT Au moins 2 bandes parmi P24 gp41 gp120 160 ORGANISATION Association of State and Territorial Public Health Laboratory Directors Centers for Disease Control ASTPHLD CDC 1989 USA Centre National de Transfusion Deux bandes ENV 2 avec GAG ou Sanguine POL Organisation Mondiale de la Sant Deux bandes ENV avec ou sans GAG OMS 1990 ou POL MP Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd 85 Science Park Drive 04 01 The Cavendish Singapore Science Park Singapour 118259 T l 65 6775 0008 Fax 65 6775 4536 Courriel enquiry_ap mpbio com Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D 66386 St Ingbert Allemagne T l 49 68 94 58 1020 Fax 49 68 94 58 1021 Courriel info mt procons com Bureaux r gionaux MP Biomedicals Parc d innovation BP 50067 67402 ILLKIRCH CEDEX France T l 33 388 67 46 07 Fax 33 388 67 54 20 Cou
31. rriel custserv eur mpbio com tats Unis Brevet 5 721 095 Le nom et le logo Genelabs sont conc d s sous licence par Genelabs Technologies Inc Consortium for Retrovirus Serology Standardization CRSS Consortium pour la standardisation des tests s rologiques sur r trovirus 1988 USA American Red Cross Croix rouge GAG POL et ENV une bande de am ricaine 1988 USA chaque Chinese Center for Disease Control Deux bandes ENV ou une bande and Prevention CCDCP 2004 Chine ENV avec P24 National and State Reference Une bande ENV avec au moins Laboratories NRL 1987 Australie une des bandes GAG ou POL Soci t allemande de lutte contre Une bande ENV avec au moins une les maladies virales DVV bande GAG ou POL voir aussi DIN 58 969 section 41 Une bande ENV avec p24 ou p31 ASTPHLD a t rebaptis Association of Public Health Laboratories en 1998 Pour l interpr tation du test HIV BLOT 2 2 de MPD nous recommandons les crit res d finis ci dessous Les r sultats doivent tre enregistr s pour chaque bande d tect e et tre interpr t s comme tant N GATIFS POSITIFS ou IND TERMIN S PROFIL DE L CHANTILLON INTERPR TATION Aucune bande virale sp cifique N GATIF n est pr sente D tection d anticorps p17 N GATIF UNIQUEMENT pas d autre bande D tection de 2 ENV gp160 gp41 et gp120 et GAG p17 p24 p55 ou POL p31 p51 p66 D tection de 2 ENV gp160 gp41
32. s R correspondants R20 21 22 Nocif par inhalation par contact avec la peau et par ingestion 1 viter toute contamination microbienne des r actifs lors de l ouverture des flacons ou bouteilles et de l extraction d chantillons de produit 2 Ne pas pipeter la bouche 83 Manipuler les chantillons tester les bandelettes de nitrocellulose et les contr les positif positif faible et n gatif comme des agents potentiellement infectieux 4 Porter une blouse de laboratoire et des gants jetables pendant le d roulement du test Jeter les gants dans des sacs poubelle destin s aux mat riaux pr sentant un risque biologique Se laver abondamment les mains par la suite 5 Il est fortement recommand de proc der ce test dans un local pr vu pour les op rations risque biologique 6 Ne pas placer d aliments et de boissons proximit des produits 7 En cas d accident ou de contact avec les yeux rincer imm diatement sous une grande quantit d eau et consulter un m decin 8 Consulter imm diatement un m decin en cas d ingestion de substances contamin es ou de mise en contact avec des plaies ouvertes ou autres l sions cutan es 3 Incuber les bandelettes pendant 1 2 2 minutes minutes temp rature ambiante 25 3 C sur un plateau bascule vitesse de 12 16 cycles par minute liminer le tampon par aspiration Note Ne laissez pas les bandes s cher l chec peut avoir comme cons quence l
33. s de r elles infections Inversement aucune s roconversion ne FIGURE 1 a b c d gp 160 aai gp 120 p 66 p 55 A p51 m gp 41 i p 39 p 17 Contr le s rique VIH 2 30 a Contr le positif fort r actif au VIH 1 et au VIH 2 b Contr le positif faible r actif uniquement au VIH 1 Contr le n gatif S rum typique s ropositif au VIH 2 29o s est av r e lors du suivi de personnes ayant t test es positives avec un Western Blot INDETERMINE une fois confirm es comme n gatives par la PCR Sethoe et al 1995 Donc il est raisonnable de consid rer les personnes ayant un r sultat Western Blot INDETERMINE avec un test ARN n gatif comme probablement non infect s par le VIH surtout quand les individus test s sont connus comme n tant pas risque En particulier les personnes test es INDETERMINE en Western Blot et ayant t test s avec un ELISA de 4 me g n ration devraient de plus subir le test ARN utilisant une base mol culaire comme le RT PCR couvrant les HIV 1 2 0 Si n cessaire un suivi doit tre men un mois plus tard avec un test suppl mentaire La seule raison d utiliser la technique ELISA de 4 me g n ration est la d tection simultan e des antig nes et des anticorps Par cons quent les chantillons identifi s comme positifs avec une technique ELISA de 4 me g n ration doivent contenir ou les antig nes ou les anticorps
34. s insignifiantes d interm diaires 2 L chantillon interagit avec les prot ines H 9 pr sentes dans la pr paration virale HLA ABC DR par exemple 3 Bandes l gitimes antig ne d enveloppe d glycosyl identifi es environ 80 90 kD dans certains chantillons de test 1 Bandelettes surd velopp es arr ter la r action plus t t 2 Pr cipitation de complexes immuns dans un chantillon de test ancien 3 Contamination bact rienne ou fongique sur la bandelette en raison d une conservation Contr le positif faible d aux r actifs 1 R actifs incorrectement Le probl me est probablement inadapt e pr par s 4 Bandelettes 2 Mauvaise dilution du physiquement conjugu endommag es 3 R actifs instables en raison craquel es ou d une exposition une ray es temp rature inappropri e 4 Conjugu contamin par de 5 Bandelettes mal lav es entre les l IgG humain tapes du test 5 pH incorrect du substrat caus par une exposition une forte lumi re ultraviolet ou un r ducteur 6 Plaques r actif s ou eau contenant une forte concentration de phosphate 7 Utilisation d un plateau rotatif au lieu d un plateau bascule 11 2 Lavage incomplet Contr le positif OK 1 S rum non ajout 2 Bandelettes retourn es au cours du test 3 Conjugu non ajout 4 Substrat non ajout Le probl me est probablement d l cha
35. s bandes apparaissant comme p42 et p39 correspondent toutes deux des fragments de GAG et ne doivent pas tre interpr t es comme gp41 ENV 3 Les bandes POL p66 p51 et p31 sont g n ralement d tect es simultan ment La sensibilit des p66 et p31 est toutefois plus importante que celle de la p51 4 La r activit crois e du VIH 2 est variable mais pr sente g n ralement une r activit aux antig nes GAG et ou POL Une r activit crois e avec la bande gp160 est toutefois possible dans certains cas mais rarement avec la gp41 o Il existe galement une bande de poids mol culaire lev d environ 160 KD qui est suppos e correspondre une prot ine pr curseur GAG POL Ceci est observ avec certains s rums fort titrage en anti VIH 2 ou ind termin s r activit GAG seulement mais la bande appara t alors nette et troite contrairement la bande diffuse correspondant la gp160 ENV Le processus d interpr tation se d roule comme suit 1 S assurer que la bande de contr le est visible En l absence de cette bande de contr le les r sultats doivent tre consid r s comme invalides du fait d une erreur technique telle que l oubli de l chantillon du conjugu ou du substrat 2 Identifier le poids mol culaire de chaque bande visible sur la bandelette en utilisant comme r f rence les contr les POSTIFS FORT et ou FAIBLE 3 L interpr tation de la bandelette est ensuite bas e sur la
36. t de 12 16 cycles par minute et de 5 10 degr s 17 Avant utilisation v rifier que les quipements automatis s s ils sont utilis s sont valid s 18 Veiller ce que l ajout des chantillons se fasse distance des bandelettes La plaque peut tre inclin e et l chantillon tre ajout l emplacement de collecte du tampon l extr mit inf rieure Ceci permet d viter la formation de points sombres li e au d p t de l chantillon sur la bandelette 19 viter de conserver les r actifs et les chantillons dans un cong lateur auto d givrant 20 Nous d conseillons l utilisation d chantillons dilu s ou lyophilis s car ils peuvent fausser les r sultats S ils forment tout ou partie d un panel de contr le qualit QC ils doivent tre valid s INSTRUCTIONS DE CONSERVATION 1 Conserver la kit HIV BLOT 2 2 de MPD et ses composants entre 2 et 8 C en dehors des p riodes d utilisation 2 Lorsqu ils sont conserv s entre 2 C et 8 C tous les r actifs et toutes les bandelettes restent stables jusqu la date de p remption indiqu e sur la trousse Ne pas congeler les r actifs A Bandelettes antig nes viter toute exposition inutile des bandelettes d antig nes la lumi re B R actifs e Les r actifs doivent tre conserv s dans les flacons ou bouteilles d origine dont le bouchon doit tre en place e Verser tous les r actifs encore froids et les replacer entre
37. uste avant utilisation b Pr parer la SOLUTION DE CONJUGU DE TRAVAIL en diluant le CONJUGU 1 1000 dans le TAMPON DE BLOTTING par exemple 5 uI de CONJUGU dans 5 mi de TAMPON DE BLOTTING 4 SOLUTION DE SUBSTRAT pr te l emploi a Verser directement le volume n cessaire depuis la bouteille Utiliser une pipette propre Reboucher fermement apr s utilisation MODE OP RATOIRE TEST RAPIDE Remarque a Les utilisateurs peuvent employer l analyse rapide ou durant la nuit pour ex cuter les essais Les bandes d HIV sont plus d velopp es et plus de bandes peuvent appara tre avec l analyse durant la nuit mais l ex cution globale des deux analyses est identique b Aspirer tous les produits chimiques et r actifs utilis s dans un collecteur contenant de l hypochlorite de sodium c Toutes les incubations doivent tre effectu es sur un plateau bascule Attention Certains chantillons entra nent l apparition de marques sombres l emplacement de la bandelette o ils sont d pos s Pour viter ce probl me veiller proc der comme suit i L chantillon ne doit tre d pos qu une fois le TAMPON DE BLOTTING ajout ii Incliner l g rement la plaque en en soulevant l extr mit sup rieure ou inf rieure Le tampon de blotting s coule alors jusqu l extr mit inf rieure de la plaque D poser l chantillon l emplacement o le tampon de blotting est recueilli Une f
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