COMPASS Listeria Agar
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1. Dans le flacon de 1 L de milieu de base ajouter st rilement d abord les 10 mL de suppl ment s lectif et ensuite les 30 mL de suppl ment d enrichissement BS070 Homog n iser parfaitement apr s l introduction de chaque suppl ment Couler en bo tes de Petri st riles ceci dans le cadre de l utilisation de COMPASS Listeria Agar dans un protocole de recherche ou de d nombrement par ensemencement en surface Faire s cher les bo tes l tuve couvercle entrouvert PREPARATION DU MILIEU COMPLET A PARTIR DU KIT BTO08 Faire fondre le milieu de base r actif R1 BM12800 du kit BT008 pendant le minimum de temps n cessaire sa reliqu faction totale _ Refroidir et maintenir 44 47 C Reprendre le lyophilisat du suppl ment s lectif r actif R2 BS06700 du kit BT008 en y ajoutant aseptiquement 2 mL d eau distill e st rile Dans chaque flacon de 200 mL de milieu de base ajouter st rilement d abord 2 mL de suppl ment s lectif et ensuite 6 mL de suppl ment d enrichissement r actif R3 BS06800 du kit BTO08 _ Homog n iser parfaitement apr s l introduction de chaque suppl ment Couler en bo tes de Petri st riles ceci dans le cadre de l utilisation de COMPASS Listeria Agar dans un protocole de recherche ou de d nombrement par ensemencement en surface Faire s cher les bo tes l tuve couvercle entrouvert 218 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther2. Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr MODE D EMPLOI m thode alternative rapide de recherche Pr parer une suspension m re de l chantillon analyser dans un bouillon de Fraser demi BK133 BS030 ou BS032 ou BK173 BS059 ou BS062 ou BM016 par exemple en respectant un rapport prise d essai milieu d enrichissement de 1 10 me __Incuber la suspension m re 30 1 C pendant 24 2 heures D poser 100 uL de la culture obtenue sur une bo te de COMPASS Listeria Agar pr par e ou pr coul e BM123 ou BM124 et r aliser un isolement l aide d une anse boucl e ou d une pipette Pasteur __Incuber 37 1 C pendant 24 2 heures Il est possible de prolonger l incubation jusqu 48 heures NOTA 1 Lors de l tude de validation pour deux chantillons de produits laitiers les halos sont apparus 48 heures d incubation MODE D EMPLOI m thode alternative rapide de d nombrement Pr parer une suspension m re de l chantillon analyser dans de l eau pepton e tamponn e BK018 BK131 ou BM010 BM056 BMOS57 par exemple __Incuber la suspension 20 2 C pendant 60 5 minutes Transf rer 0 1 mL de la suspension et si n cessaire de ses dilutions d cimales successives la surface d une seule bo te par dilution de COMPASS Listeria Agar pr par e ou pr
3. V 08 104 2 Janvier 2004 Microbiologie des aliments Guide pour la pr paration et la production des milieux de culture Partie 2 Guide g n ral pour les essais de performance des milieux de culture NF EN ISO 11290 1 A1 V 08 028 1 A1 F vrier 2005 Microbiologie des aliments M thode horizontale pour la recherche et le d nombrement de Listeria monocytogenes Partie 1 M thode de recherche Amendement 1 Modification des milieux d isolement de la recherche de l h molyse et introduction de donn es de fid lit NF EN ISO 11290 2 A1 V 08 028 2 A1 F vrier 2005 Microbiologie des aliments M thode horizontale pour la recherche et le d nombrement de Listeria monocytogenes Partie 2 M thode de d nombrement Amendement 1 Modification du milieu d isolement NF EN ISO 7218 V 08 002 Octobre 2007 Microbiologie des Aliments Exigences g n rales et recommandations NF V45 008 Mars 2009 Poissons transform s M thode pour le d nombrement de Listeria monocytogenes aux faibles niveaux de contamination dans le saumon fum et la truite fum e ri l t f x L E BKR 23 2 11 02 et BKR 23 05 12 07 METHODES ALTERNATIVES D ANALYSE POUR L AGROALIMENT AIRE Certifi par AFNOR Certification www afnor validation org COMPASS et CONFIRM L mono Agar sont des marques de SOLABIA S A S Les mentions port es sur les tiquettes sont pr dominantes sur les formules ou les instructions d crites dans ce docume
4. inositol sp cifique PI PLC produite par les deux esp ces de Listeria pathog nes L ivanovii et L monocytogenes seule cette derni re l tant pour l Homme Ils ont sugg r que cette enzyme pouvait constituer un facteur de virulence La m me ann e NOTERMANS et al d velopp rent une m thode en double couche pour d tecter la PI PLC en milieu g los l aide de L a phosphatidylinositol Dans ces conditions les deux esp ces de Listeria pathog nes forment des colonies entour es d un halo opaque alors que les colonies des esp ces non pathog nes n en pr sentent pas Par ailleurs l utilisation d un substrat chromog ne le 5 bromo 4 chloro 3 indolyl B D glucopyranoside permet de remplacer l esculine qui tait utilis e dans les milieux Oxford et PALCAM La pr sence d esculinase B glucosidase peut ainsi tre mise en vidence par la formation d un pr cipit bleu sur la colonie Le m lange s lectif contenu dans le milieu permet l inhibition de la presque totalit des bact ries contaminantes En associant ces trois principes COMPASS Listeria Agar permet la mise en vidence de colonies bleues entour es d un halo opaque bien typiques de Listeria monocytogenes 1 8 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr PRINCIPES Les peptones et le
5. COMPASS Listeria Agar DOMAINE D UTILISATION COMPASS Listeria Agar est un milieu s lectif utilis pour les diff renciation isolement et d nombrement de Listeria monocytogenes dans les produits alimentaires les chantillons de l environnement et les pr l vements pathologiques d origine animale m me fortement contamin s Sa formulation correspond celles pr conis es dans les protocoles de recherche et de d nombrement des normes internationales EN ISO 11290 1 et 11290 2 incluant l amendement A1 COMPASS Listeria Agar est galement employ dans le cadre d une m thode alternative rapide de recherche de L monocytogenes dans les produits d alimentation humaine et chantillons de l environnement raccourcie une seule tape pr alable d enrichissement s lectif elle est officiellement certifi e par AFNOR Certification sous Attestation N BKR 23 2 11 02 dont le terme de validit est fix au 28 novembre 2010 COMPASS Listeria Agar peut aussi tre employ dans le cadre d une m thode alternative rapide de d nombrement de L monocytogenes dans les produits d alimentation humaine et chantillons de l environnement par ensemencement d une seule bo te en surface ou en profondeur elle est officiellement certifi e par AFNOR Certification sous Attestation N BKR 23 05 12 07 dont le terme de validit est fix au 4 d cembre 2011 HISTORIQUE En 1991 MENGAUD et al ont identifi une phospholipase C phosphatidyl
6. coul e BM123 ou BM124 Etaler l inoculum en surface l aide d un taleur st rile O Transf rer 1 mL de la suspension et si n cessaire de ses dilutions d cimales successives dans une seule bo te de Petri st rile par dilution Couler environ 15 mL de milieu complet _ Homog n iser parfaitement et laisser solidifier sur une surface froide __Incuber 37 1 C pendant 24 2 heures En l absence de colonies caract ristiques c est dire absence de colonies ou colonies bleues avec halos encore peu visibles 24 heures prolonger lincubation de 24 heures suppl mentaires L expression des r sultats se fera conform ment aux recommandations tablies dans la norme ISO 7218 ao t 2007 NOTA 2 COMPASS Listeria Agar s inscrit galement comme premier milieu d isolement obligatoire du protocole op ratoire de recherche de L monocytogenes tel que d crit dans le texte normatif EN ISO 11290 1 A1 ainsi que comme milieu unique du protocole op ratoire de d nombrement de L monocytogenes selon EN ISO 11290 2 A1 NOTA 3 Dans le cadre de la marque AFNOR VALIDATION les prises d essai sup rieures 25 g n ont pas t test es 3 8 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr LECTURE Les colonies caract ris
7. ia Agar R f BM12308 Incubation 24 heures 37 C surface Colonies caract ristiques bleu vert entour es d un halo opaque hydrolyse du X B glucoside et d gradation du L a phosphatidyl inositol 118 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES MENGAUD J BRAUN BRETON C and COSSART P 1991 Identification of phosphatidylinositol specific phospholipase C activity in Listeria monocytogenes a novel type of virulence factor Molecular Microbiology 5 2 367 372 NOTERMANS S H DUFRENNE J LEIMESTER W CHTER M DOMANN E and CHAKRABORTY T 1991 Phosphatidylinositol specific phospholipase C activity as a marker to distinguish between pathogenic and nonpathogenic Listeria species Applied and Environmental Microbiology 57 9 2666 2670 OTTAVIANI F OTTAVIANI M AGOSTI M 1997 Esperienza su un agar selettivo e differenziale per Listeria monocytogenes Industrie Alimentari 36 1 3 OTTAVIANI F OTTAVIANI M and AGOSTI M 1997 Differential agar medium for Listeria monocytogenes Quimper Froid Symposium Proceedings p6 ADRIA Quimper France 16 18 June 1997 NF EN ISO 16140 V 08 103 Octobre 2003 Microbiologie des aliments Protocole pour la validation des m thodes alternatives XP CEN ISO TS 11133 2
8. ne B sulfate 00n00nn0nn0nnnannannonnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnenne 76700 Ul CVCIONEXIMIAS nn E TESS 0 05 g Agar agar bact riologique nnnnenennennunnennnnnnnnnrnnnnnrnnrnnrnrernrnnne 12 00 g pH du milieu pr t l emploi 25 C 7 2 0 2 CONTR LE QUALITE Aspect couleur milieu de base d shydrat poudre beige fluide et homog ne Aspect couleur milieu pr par complet et pr t l emploi complet g lose ambr e opalescente R ponse culturale typique apr s 24 48 heures d incubation 37 C Croissance Microorganismes Rapport de productivit Caract ristiques R Listeria monocytogenes CIP 59 53 PR gt 50 colonies bleu vert entour es d un halo opaque Listeria monocytogenes CIP 78 31 PR gt 50 colonies bleu vert entour es d un halo opaque Listeria innocua ATCC 33090 Bonne score 2 colonies bleu vert sans halo Enterococcus faecalis ATCC 29212 inhib e score 0 Escherichia coli ATCC 25922 inhib e score 0 STOCKAGE CONSERVATION Milieu de base d shydrat Stocker entre 2 et 30 C l abri de la lumi re La date de p remption est mentionn e sur l tiquette Milieu complet pr par en bo tes avec suppl ments 15 jours 2 8 C titre indicatif Milieu pr coul en bo tes de Petri et Kit Suppl ment d enrichissement et suppl ment s lectif Stocker entre 2 et 8 C l abri de la lumi re La date de p remption est mentionn e sur l
9. nt Les informations et les sp cifications contenues dans cette fiche technique ont t tablies la date du 2009 06 08 Elles sont susceptibles d tre modifi es tout moment sans pr avis Code document BM123 F 2007 05 6 8 8 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr
10. oire devra mettre en uvre les moyens suffisants pour s assurer de la validit du r sultat rendu NOTA 4 Lorsque la pr sence de Listeria monocytogenes a d j t confirm e lors de la recherche il est possible de s affranchir de l tape de confirmation l issue du d nombrement en cas de r sultat positif 4 8 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr FORMULE TYPE du milieu complet pouvant tre ajust e de fa on obtenir des performances optimales Pour 1 litre de milieu Peptone pepsique de viande noanonnnnnnnennnnennnrnnrnrnnrnrnnrnrnnenne 18 00 g NOR 6 00 g lt Extrait de TNT nnii aE EEEE 10 00 g Pyruvate de sodium 4 2 00 gq UCO E OR D N 2 00 g Glyc rophosphate de magn sium sennonnnnnnennnnnnnnnnnnnennnnennnnnne 1 00 g Sulfate de magn sium anhydre sannnnnnennennnnnnnnnnnnennnnnnnnnnnnnennnnne 0 50 g Chlorure de SOUIUME 2 d mt 5 00 g L a phosphatidyl inositol 2 00 q Hydrog nophosphate disodique anhydre 2 50 g COURS de AAA a nn 10 00 g 5 bromo 4 chloro 3 indolyl B D glucopyranoside 0 05 g Acide nalidixi UG SE ee 0 02 g 210121 162 7410 11 ER E EERE S 0 02 g Polymyxi
11. s facteurs de croissance extrait de levure pyruvate de sodium et sulfate de magn sium favorisent la croissance de Listeria monocytogenes L extrait de levure est une source du complexe vitaminique B Le chlorure de sodium maintient l quilibre osmotique du milieu Les Listeria hydrolysent le 5 bromo 4 chloro 3 indolyl B D glucopyranoside ou X B glucoside Le produit r sultant subit une dim risation oxydative qui se traduit par la formation d un pr cipit bleu sur les colonies Le phosphatidyl inositol est utilis comme substrat pour la d tection de la phospholipase C de Listeria monocytogenes Lorsqu il est d grad un pr cipit opaque appara t autour des colonies Le chlorure de lithium et le m lange s lectif constitu de plusieurs antibiotiques et d un antifongique assurent l inhibition de la microflore secondaire PREPARATION DU MILIEU COMPLET A PARTIR DU DESHYDRATE BK192 ET DE SES SUPPLEMENTS BS070 BS071 Mettre en suspension 71 9 g de milieu de base d shydrat BK192 dans 1 litre d eau distill e ou d min ralis e Porter lentement le milieu bullition sous agitation constante et l y maintenir durant le temps n cessaire sa dissolution R partir en flacons de 1 L _ St riliser l autoclave 121 C pendant 15 minutes Refroidir et maintenir 44 47 C Reprendre le lyophilisat du suppl ment s lectif BS071 en y ajoutant aseptiquement 10 mL d eau distill e st rile
12. tiques de Listeria monocytogenes apparaissent bleues bleu vert et sont entour es d un halo opaque Les autres esp ces de Listeria forment des colonies bleues bleu vert sans halo Il est noter que des souches de Listeria ivanovii peuvent pr senter des colonies caract ristiques de tailles n anmoins plus r duites CONFIRMATION Dans le cadre de la marque AFNOR VALIDATION tous les r sultats positifs doivent tre confirm s de la l une des mani re s suivante s Option 1 Mise en uvre des tests classiques d crits dans les m thodes normalis es par le CEN ou FISO en incluant l tape de purification en repartant des colonies caract ristiques isol es sur COMPASS Listeria Agar Pour les modalit s de confirmation se reporter la norme NF EN ISO 7218 Option 2 Mise en uvre de CONFIRM L mono Agar Option 3 Utilisation de toute autre m thode certifi e AFNOR VALIDATION de principe diff rent Le protocole valid de la seconde m thode devra tre respect dans son ensemble c est dire que toutes les tapes ant rieures l tape interm diaire de laquelle on repart pour la confirmation doivent tre communes aux deux m thodes Les deux m thodes valid es l une utilis e en d tection et l autre en confirmation doivent donc avoir un tronc commun En cas de r sultats discordants positifs par la m thode alternative non confirm s par l une des options d crites ci dessus le laborat
13. tiquette 5 8 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr PRESENTATION Code Milieu de base d shydrat Flacon de 500 g BK192HA Suppl ment d enrichissement Pack de 8 flacons pour 8 x 1 L de milieu de base BS07008 Suppl ment s lectif Coffret de 8 flacons pour 8 x 1 L de milieu de base BS07108 Milieu pr coul en bo tes de Petri 90 mm Coffret de 20 bo tes BM12308 Coffret de 120 bo tes BM12408 Kit Coffret compos de 6 flacons de 200 mL de milieu de base R1 BT00808 de 6 flacons qsp 200 mL de suppl ment s lectif lyophilis R2 et de 6 flacons qsp 200 mL de suppl ment d enrichissement liquide R3 6 8 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr SUPPORT PHOTO AA Biokar a diagnostics R f rence BK192HA BS07008 BS07108 BM12308 12408 BT00808 Domaine d utilisation Recherche et d nombrement des Listeria monocytogenes Listeria monocytogenes Colonie caract ristique Couleur bleu vert entour e d un halo opaque Listeria sp Colonie non caract ristique Si croissance couleur bleu vert sans halo COMPASS Lister
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