Mode d`emploi – ChromoQuant QF
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1. X Y aen O E LEE ne CMA e L A n E CO LL 901 112 412 Q07 127 FR03 4 5 ChromoQuant Extra marqeurs P N 313 002 Chromosome 13 tubes PCR rouge ChromoQuant Extra marqeurs P N 318 002 Chromosome 18 tubes PCR violet D18S878 18q22 1 EL 158 192 HEX ChromoQuant Extra marqeurs P N 321 002 Chromosome 21 tubes PCR jaune CyberGene AB Box 30057 RS 104 25 Stockholm Su de 901 112 412 007 127 FR03 5 52. la pr paration de la PCR veillez ce qu une nouvelle extr mit soit utilis e pour la pipette pour chaque puits remplir d ADN Le sel interf re avec la s paration des fragments pendant l lectrophor se du gel Il est conseill de proc der un dessalage apr s la PCR La qualit de la formamide ou de l eau ajout e l chantillon d ADN avant le chargement ou l injection lectrocin tique affectera la sensibilit Veillez utiliser la meilleure qualit Les r actifs pour la purification de l ADN g nomique ne sont pas inclus dans le kit Composition du kit P N 412 001 48u e 6 bandes de 8 tubes Chaque tube de PCR contient une solution primer mix pr te l emploi e Bouchons de bandes PCR e 1 Tampon de dilution d enzyme 300uL dans un tube bouchon viss blanc Tampon Tris EDTA e 1 Tampon QF PCR 1 5 mL dans un tube bouchon viss jaune o MgCl NH4SO4 2 ANTPs B mercaptoethanol s rumalbumine bovine lla technique PCR est prot g e par les brevets d pos s aux Etats Unis sous les num ros 4 683 195 et 4 683 202 et leurs homologues trangers d tenus par Hoffman La Roche AB L utilisateur doit d tenir une licence aupr s de Hoffman La Roche pour utiliser la technologie PCR 901 112 412 007 127 FR03 1 5 Instructions de stockage et dur e de conservation apr s ouverture e Conserver le tampon QF PCR et les tubes PCR de primer mix non utilis s dans le noir une temp rature inf r
3. st rilis e Amplification PCR Multiplex d ADN g nomique 1 D congeler le tampon de QF PCR et le tampon de dilution d enzyme temp rature ambiante et les placer sur de la glace 2 D terminer le nombre total de tubes PCR c est dire de solution N 3 M langer dans un microtube de polypropyl ne s par par ex tube Eppendorf 1 5 ml e 1 6 ul Tampon de dilution d enzyme 0 4 uL de Taq Polym rase et tampon QF PCR de 13 uL multipli s par N Pr parer toujours quelques l ments suppl mentaires Les tubes PCR fournis avec le kit sont rang s par bandes de 8 Une bande permettra d analyser respectivement 8 chantillons de patients Pour obtenir de meilleurs r sultats il est recommand de travailler rapidement sur de la glace 4 Ajouter 15 uL du m lange principal de l tape 3 dans chaque tube de PCR 5 Ajouter 10 uL d chantillon d ADN 15 150 ng M langer en pompant 5 fois avec une pipette Volume final 25uL 6 Taper d licatement contre la paillasse les tubes plac s sur la bande ou les passer dans une micro centrifugeuse pour s assurer que tous les r actifs retombent au fond du tube PCR 7 Proc der imm diatement l amplification PCR 901 112 412 007 127 FR03 25 Protocole PCR Les tapes 2 4 sont r p t es sur 26 cycles Choisir l tape 1 de la PCR en fonction de la Taq polymerase utilis e 94 C 3 min pour la Taq Promega ou 95 C 15 min pour la Taq Qiagen 2 Roae foc 308 CNT 2 mi
4. Mode d emploi ChromoQuant QF PCR kit P N 412 001 48u ChromoQuanf Diagnostic QF PCR in vitro ChromoQuant kit d analyse d anomalies chromosomiques courantes des chromosomes 13 18 et 21 412 001 48u L Voir conditionnement Voir conditionnement 18 C gt K 48 FN C y AN 250 Mises en garde S utilise avec des s quenceurs fluorescents acceptant l ensemble de filtre D pour les biosyst mes appliqu s ABI Prism 3100 310 les analyseurs g n tiques 3130 et l ensemble de filtre 2 pour Amersham Biosciences MegaBACET 500 1000 Veillez ce que votre s quenceur accepte les marqueurs fluorescents 6 FAM HEX et NED Il est recommand d utiliser avec ce kit de l ADN purifi provenant du liquide amniotique de pr l vements buccaux de salive ou de sang Le fonctionnement du kit ne peut tre garanti que s il est utilis avec la Taq Polym rase recommand e La Taq polym rase n est PAS inclue dans ce kit Pour obtenir des r sultats de qualit utilisez toujours gt 15 ng lt 150 ng d ADN par chantillon PCR Pour des r sultats PCR optimum suivez les instructions communiqu es pour l instrument PCR disponible Les bouchons de PCR cass s doivent tre remplac s avant de passer l amplification PCR Les chantillons de patients contamin s de sang ne doivent pas tre analys s avec ce kit par exemple lorsque l ADN utilis provient du liquide amniotique Pour viter tout risque de contamination crois e pendant
5. ieure 18 C Le tampon de dilution d enzyme peut tre conserv entre 20 et 8 C Il est recommand de toujours conserver le mat riel non utilis dans son sachet d aluminium refermable d origine e Utiliser du papier d aluminium chaque fois que n cessaire pour prot ger les tubes d une exposition inutile la lumi re par exemple lorsque vous travaillez avec le kit sur la paillasse du laboratoire avant la PCR e Dur e de conservation Voir date limite d utilisation R actifs sp cifiques suppl mentaires devant tre fournis par l utilisateur e Taq polymerase HotStar Taq Qiagen Ref 203203 250U 5U UL OU e Fluorescent pour lectrophor se sur gel taille standard par ex ABI GeneScan 500 ROX M Ref 401734 ou Amersham Biosciences ET ROX Ref 25 6550 01 Celui ci sera ajout l chantillon d ADN apr s la PCR mais avant l lectrophor se sur gel e Colonnes pour le dessalage du produit de PCR avant l lectrophor se sur gel capillaire e Autres r actifs pour la purification de l ADN g nomique Comment utiliser ce kit Purification et pr paration de l ADN Les r actifs n cessaires pour purifier l ADN provenant de tissus humains NE sont PAS inclus dans le kit Il est recommand d utiliser des technologies de pr paration d ADN commerciales fournissant un ADN g nomique pur Quelle que soit la m thode de pr paration diluer l ADN pour obtenir une concentration finale de 1 5 15 ng uL en utilisant de l eau
6. n 5 min Lh 4 C l l 2 C PE Electrophor se sur gel des fragments d ADN amplifi s 1 Dessaler individuellement chaque chantillon de PCR avant injection lectrocin tique dans les capillaires 2 Proc der l lectrophorese sur gel selon le manuel d utilisation de l instrument ou la meilleure routine du laboratoire pour obtenir la meilleure r solution de fragments entre 135 et 500 nucl otides Limites de la m thode et caract ristiques de performances L information concernant les marqueurs de chaque chromosome est 4 fois redondante Chr 13 18 et 21 Un r sultat analytique dans lequel deux des marqueurs d un chromosome sp cifique sont r v lateurs doit tre consid r comme r ussi et peut tre utilis comme une indication de diagnostic Ce kit n a pas t con u pour valuer ou d terminer si une translocation a t effectu e impliquant les chromosomes 13 18 ou 21 Cependant il peut toujours tre possible de d tecter un tat trisomique au niveau chromosomique Ce kit ne doit pas tre utilis pour d tecter des aberrations g n tiques en mosa ques par ex lyonisation Normal 1 1 Homozygote Heterozygote Non r velateur Trisomie Trisomie 2 1 1 11 Dans le cadre d une STR le ratio de pic est de 0 8 1 4 Le ratio de pic de la trisomie est de lt 0 65 et gt 1 8 Zone ou hauteur de l all le le plus court divis e par la zone ou hauteur de l all le le plus long Les ratios d all les
7. se situant entre les marges de variations normale et anormale sont consid r s comme non concluants et doivent faire l objet d une nouvelle analyse Si pour un m me chromosome on obtient des sch mas d all le normaux et anormaux il est impossible d interpr ter le r sultat final comme tant normal ou anormal Des tudes plus approfondies doivent tre effectu es NS Pour une information d taill e sur l interpr tation des r sultats se reporter au Guide de l Utilisateur de ChromoQuant Le Guide de Utilisateur peut tre t l charg sur le site web de ChromoQuant ou command directement aupr s de CyberGene AB Ref 901 115 00 901 112 412 007 127 FR03 3 5 ChromoQuant kit PIN 412 001 48u Mel Roule ot ul Mi A id 2 E me mst separar mw tora sais Gen ue e paras zapra 21 ter iso velo wo s osesero ina w tora mo e orm co osn za 2 ia 22025 vnw neo f e onsa pas o1 ia 2627 ome orm m mara rais 1 tora 20 creon nx fe parais wwe 29 ia zx ome orm n omesse sos mw tora sas creon nx fe onses rras 1 ia oss pme orm c mass sri to tora amours velo neo n man saa n tora asaro creon no 1 pmssas s23 mw ia asosos ewe orm s ChromoQuant produits No de tests Couleur des Marqeurs des tubes PCR 311 002 1 48u Chromosomes 13 18 X Y Chromosomes 21
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