Mode d`emploi de la HPLC
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1. Mode d emploi de la HPLC Mise en route Mettre sous tension les trois appareils Pompe D tecteur et Imprimante dans cet ordre Ouvrir d visser la valve de By Pass robinet en aluminium en bas droite de la pompe Sur la pompe appuyer sur le bouton MANUAL SET appuyer sur 1 flush puis appuyer sur Appuyer sur puis sur PURGE La pompe se met en route fort d bit v rifier l vacuation afin de chasser toutes les bulles d air qui pourraient se trouver dans les tubulures Appuyer alternativement sur les boutons A et B de mani re nettoyer les deux voies Une fois toutes les bulles chass es appuyer sur pour terminer la purge Revisser la valve de By Pass de mani re diriger le flux vers la colonne Sur l imprimante appuyer sur ICHART SPEED fixer la valeur 5 mm min puis appuyer sur ENTER Appuyer sur PLOT ATT fixer la valeur 9 puis appuyer sur ENTER Appuyer sur INTEG PARAM puis avec la fl che droite choisir noise et valider avec ENTER il s agit du seuil minimal partir duquel l imprimante consid re un signal comme tant un pic et l int gre Fixer la valeur entre 100 uV et 200 uV en fonction de la concentration de l chantillon Valider par ENTER Sur la pompe appuyer sur RUN PROG v rifier Steps 1 Prog No 2 et Cycles 1 puis appuyer deux fois sur ENTER v rifier que pour l entr e step 2 Prog No est bien gal O puis appuyer sur Si la pompe n est pas d j en ro2. Sol Solvant B 400 mL d ac tonitrile HPLC 100 mL d eau permut e 168 uL d acide trifluoroac tique UVSol Les deux flacons doivent avoir t plac s au bain d ultrasons pendant au moins 20 minutes d gazage Gradients Programme N 1 produits polaires temps de r tentions petits test de puret ou s paration facile ss Temps min sowani B D bit mL min 80 20 25 30 35 Minutes Programme N 2 standard 10 Temps min owani B D bit mL min 80 20 25 30 35 Minutes Programme N 3 produits apolaires temps de r tention lev s s paration difficile us Temps min sowani B D bit mL min 50 80 70 60 50 40 30 2 20 10 o o 5 10 20 25 30 35 Minutes Pour une colonne NUCLEODUR Cig 50 solvant B 30 20 10 e 5 10 ren un solvant B 30 20 10 0 o 5 10 un solvant B re un Tests Solution de test 5 mg de phenol 5 mg de tolu ne 5 mg de 9 10 Phenanthrenequinone Dim thylsulfoxyde HPLC q s p 10 mL Avec le programme N 2 les temps de r tention doivent tre 14 4 min 17 35 min et 18 63 min
3. ute appuyer sur Pump Dans tous les cas appuyer ensuite sur pour lancer l quilibrage de la colonne Analyse en routine d un chantillon Pr parer un chantillon dans un solvant HPLC DMSO ou MeOH C 0 1 1 mg ml ou 0 1 1 mM Attendre 15 minutes que la colonne s quilibre puis effectuer une mesure du bruit Pour cela appuyer sur et laisser le temps l imprimante d analyser le signal Une fois ceci fait le syst me est pr t Placer l injecteur sur la position LOAD Ins rer l aiguille de la seringue et injecter le produit 20 50 uL dans la boucle d injection Laisser l aiguille dans l injecteur Tourner l injecteur sur la position INJECT Le gradient et l imprimante d marrent automatiquement A ce moment seulement retirer l aiguille de l injecteur Deux Bip de 5 s signalent la fin de l analyse sur l imprimante appuyer sur pour arr ter le trac apr s quelques seconde l imprimante imprime le rapport d int gration Apr s 3 5 minutes la colonne est pr te pour une nouvelle analyse Pour utiliser le m me programme reprendre au point de ce paragraphe sinon au point du paragraphe pr c dent Extinction du syst me Sur la pompe appuyer sur de mani re teindre la pompe la pression doit retomber 0 Eteindre les trois appareils Imprimante Pompe et D tecteur dans cet ordre Solvants Solvant A 500 mL d eau permut e 168 uL d acide trifluoroac tique UV
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