PDF - Menarini Diagnostics
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1. ZENIT RA GBM REF 43735 REF 43735 Vertrieb durch zent ZENIT RA GBM I A MENARINI GEBRAUCHS en wenne FWD 7 ce VERWENDUNGSZWECK Der Test ZENIT RA GBM ist ein Chemilumineszenz Immunoassay CLIA f r die quantitative Bestimmung mit dem speziellen Analyseger t ZENIT RA von spezifischen Antik rpern der Klasse IgG gegen die glomerul re Basalmembran Glomerular Basement Membrane oder GBM in humanen Serum oder Plasmaproben EDTA Natriumcitrat Dieser Test dient als diagnostisches Hilfsmittel bei der Beurteilung von Goodpasture Syndrom und bei der Differentialdiagnose von Vaskulitiden ACHTUNG rztliche Entscheidungen d rfen nicht ausschlie lich auf dem Ergebnis dieses Tests beruhen sondern sind auf der Grundlage der Beurteilung aller verf gbaren klinischen und Labordaten zu treffen KLINISCHE BEDEUTUNG Antik rper gegen die glomerul re Basalmembran GBM AK sind der serologische Marker einer seltenen Autoimmunkrankheit die klinisch durch das Vorliegen einer rasch progressiven Glomerulonephritis und histologisch durch nekrotisierende extrakapill re Glomerulonephritis mit linearer Immunfluoreszenz Glomerulonephritis durch GBM Antik rper gekennzeichnet ist Wenn gleichzeitig die Lungen betroffen sind alveol re H morrhagie wird diese Erkrankung als Goodpasture Syndrom GPS bezeichnet An der pathogenetischen Rolle der Antik rper besteht kein Zweifel tats chlic2. 27 A 1120 Wien Eine Division der Berlin Chemie AG Tel 43 1 80 41 5760 Fax 43 1 80 43 194 Glienicker Weg 125 12489 Berlin Tel 49 30 67 07 30 00 Fax 49 30 67 07 30 20 www menarinidiagnostics at balers www menarinidiagnostics de IFU031ZENIT RA Version 01 27 November 2012 Seite 15 von 15
3. Hersteller vorgesehene Art innerhalb dieser Spezifikationen funktioniert Pr zision und Wiederholbarkeit Die Pr zision wurde berechnet indem die Ergebnisse von 20 Wiederholungen von vier Seren einem negativen und drei positiven mit verschiedenen Konzentrationen von GBM IgG AK die mit zwei verschiedenen Reagenzienchargen w hrend desselben analytischen Laufs untersucht wurden analysiert wurden Die Konzentration des f r GBM IgG AK negativen Serums N4 lag im Bereich von 0 0 bis 0 4 AU mL mit der Reagenziencharge 2 und bei 0 0 AU mL mit der Reagenziencharge 3 IFU031ZENIT RA Version 01 27 November 2012 Seite 11 von 15 ZENIT RA GBM REF 43735 Die nachfolgende Tabelle zeigt die Ergebnisse der 3 positiven Seren Probe a En SD AU mL VK AU mL ee ad a 252 31 0 3 64 7 2 07 3 2 2 dir 2 000 28 18 82 Zu 3 270 9 11 88 4 4 Bi 0 EE e Os eee een ne eee ae 3 371 9 12 06 3 2 Die Wiederholbarkeit wurde berechnet indem die Ergebnisse der einfachen Bestimmung von sechs Seren einem negativen und f nf positiven mit verschiedenen Konzentrationen von GBM IgG AK durchgef hrt in 14 verschiedenen L ufen mit einer Reagenziencharge analysiert wurden Die Konzentration des f r GBM IgG AK negativen Serums EBV N1 lag im Bereich von 0 5 bis 2 2 AU mL Die nachfolgende Tabelle zeigt die Ergebnisse der f nf positiven Seren Mittlere
4. Sensitivit t Heute sind immunometrische quantitative und antigen spezifische Nachweismethoden verf gbar die auf ELISA Fluoreszenzimmunoassay und Cheminlumineszenz Methoden beruhen und aufgel ste komplette GBM die a3 IV Kette des Kollagens und seit Kurzem GP Antigene in humaner rekombinanter Form verwenden Die diagnostische Sensitivit t der antigen spezifischen Tests ist sehr hoch zwischen 94 7 und 100 w hrend die Spezifit t bei pathologischen Kontrollseren zwischen 90 9 und 100 liegt Neuere Daten best tigen dass trotz der hervorragenden diagnostischen Leistungen dieser Methoden bei etwa 5 der Patienten mit Erkrankung durch GBM Antik rper Goodpasture Syndrom keine zirkulierenden Antik rper nachweisbar sind Aufgrund ihrer hohen klinischen Bedeutung und des hohen Vorhersagewertes ist die Bestimmung von GBM AK bei der Diagnose von Patienten mit einem klinischen Bild mit Niereninsuffizienz unbekannter Ursache mit Mikrohamaturie angezeigt insbesondere bei rasch fortschreitenden Fallen Der Titer der zirkulierenden GBM Antik rper ist von Nutzen f r die Prognose Bei Vorliegen eines die Nieren und Lungen betreffenden Syndroms k nnen GBM Antik rper bei etwa einem Drittel der Patienten nachgewiesen werden GBM Antik rper sind direkt f r die Organsch den verantwortlich ihre berwachung gilt daher als u erst hilfreich f r die Kontrolle der Behandlung insbesondere bei Behandlung mit Plasmapherese Andauernde ne
5. en und bis zu ihrer n chsten Anwendung bei 2 8 C aufzubewahren Die Kalibratoren k nnen h chstens viermal verwendet werden Einsetzen der Kontrollseren Setzen Sie die Kontrollseren in den Probenbereich des Ger tes ein Informationen zu ihrer Identifizierung im Ger t finden Sie in der Bedienungsanleitung des Ger tes Falls das Kontrollserum nicht mit einem Barcode IFU031ZENIT RA Version 01 27 November 2012 Seite 7 von 15 ZENIT RA GBM REF 43735 versehen ist oder der Barcode nicht abgelesen wird k nnen die identifizierenden Daten des Kontrollserums von Hand eingegeben werden Wenn Sie Kontrollseren der Reihe Zenit RA verwenden lesen Sie deren Gebrauchsanleitung Die Konzentrationswerte der in den Kontrollseren der Reihe Zenit RA vorliegenden IgG Antik rper gegen GBM sind auf der DATA DISK verzeichnet und werden automatisch an das Analyseger t bertragen W hlen Sie f r jedes Kontrollserum die angeforderten Parameter aus Einsetzen der Proben Setzen Sie die Proben in den Probenbereich des Ger tes ein Informationen zu ihrer Identifizierung im Ger t finden Sie in der Bedienungsanleitung des Ger tes Falls die Probe nicht mit einem Barcode versehen ist oder der Barcode nicht abgelesen wird k nnen die identifizierenden Daten der Probe von Hand eingegeben werden W hlen Sie f r jede Probe die angeforderten Parameter aus Kalibrierung Das Analyseger t ZENIT RA verwendet eine gespeicherte Kalib
6. f r die Kalibratoren wird das positive Serum mit dem Probenverd nnungsmittel vorverd nnt geliefert und das entnommene Volumen betr gt 110 ul Die angesaugten L sungen und Suspensionen werden in die Reaktionsk vette gegeben 2 Die Reaktionsk vette wird 10 Minuten lang bei 37 C im Karussell inkubiert 3 Nach dieser Inkubationsphase werden die Magnetpartikel getrennt und gewaschen 4 In die K vette werden 200 ul Konjugat gegeben 5 Die Reaktionsk vette wird 10 Minuten lang bei 37 C im Karussell inkubiert IFU031ZENIT RA Version 01 27 November 2012 Seite 8 von 15 ZENIT RA GBM REF 43735 6 Nach dieser letzten Inkubationsphase werden die Magnetpartikel getrennt und gewaschen und die K vette wird in die Messkammer berf hrt 7 Die in RLU angegebene Menge des an die Festphase gebundenen Konjugats ist direkt proportional zu der Konzentration der in der Probe vorliegenden GBM IgG Antik rper 8 Die erhaltenen Ergebnisse werden auf die Kalibrierungskurve aufgetragen und in Konzentrationen umgerechnet Proben mit Konzentrationswerten ber dem oberen Messgrenzwert k nnen verd nnt und erneut getestet werden Der neue Wert wird mit dem verwendeten Verd nnungsfaktor multipliziert um das Endergebnis zu erhalten QUALIT TSKONTROLLE Um die G ltigkeit der Bestimmung zu garantieren m ssen an jedem Tag an dem dieser Test durchgef hrt wird Kontrollseren mit unterschiedlichen Konzentrationen
7. mindestens ein negatives und ein positives Serum gemessen werden Falls Ihr Labor f r die berpr fung der Ergebnisse der Bestimmung die h ufigere Anwendung oder die Anwendung einer h heren Anzahl von Kontrollseren erfordert befolgen Sie die im Labor festgelegten Qualit tskontrollverfahren Wenn Kontrollseren der Reihe ZENIT RA verwendet werden sind die erwarteten Mittelwerte und die Akzeptanzgrenzen in der auch mit den Kontrollseren gelieferten DATA DISK angegeben Falls andere Kontrollseren angewendet werden sind vor deren Anwendung die mit den Reagenzien und dem System ZENIT RA erwarteten Werte zu bestimmen Wenn die Werte der Kontrollseren nicht in den angegebenen Akzeptanzbereich fallen sind die zugeh rigen Testergebnisse nicht g ltig und die entsprechenden Proben m ssen erneut getestet werden In diesen F llen ist es vor der Wiederholung der Bestimmung n tig das Verfahren zur Nachkalibrierung durchzuf hren BERECHNUNG UND INTERPRETATION DER ERGEBNISSE Berechnung der Ergebnisse Das System berechnet automatisch die Konzentration der in den untersuchten Proben vorliegenden GBM IgG Antik rper Die Werte k nnen auf dem Bildschirm eingesehen oder ausgedruckt werden Die Konzentrationen werden in AU ml angegeben Die Konzentration des Analyten in der Probe wird berechnet indem das erhaltene Ergebnis jeder Probe auf einer Kalibrierungskurve abgelesen wird letztere wird mittels einer 4 Parameter Logistic Fit Funktion e
8. von normalen Versuchspersonen Bei 5 Proben stimmten die Ergebnisse des ZENIT RA Tests und des im Handel erh ltlichen ELISA Tests nicht berein Die relative bereinstimmung ist daher 96 8 Konfidenzintervall bei 95 92 3 98 8 151 156 Proben Die relative Sensitivit t ist 90 9 Konfidenzintervall bei 95 74 5 97 6 30 33 Proben Die relative Spezifit t ist 98 4 Konfidenzintervall bei 95 93 7 98 7 121 123 Proben Von den drei Proben die mit dem Kit ZENIT RA GBM negativ und mit dem ELISA Kit positiv waren geh rte 1 zur Gruppe der Proben mit Infektionskrankheiten 1 zur Gruppe mit weiteren Krankheiten und 1 zur Gruppe der Proben von normalen Versuchspersonen Die zwei Proben die mit dem Kit ZENIT RA GBM positiv und mit dem ELISA Kit negativ waren geh rten beide zur Gruppe der Proben mit Goodpasture Syndrom LITERATUR 1 Salama AD Levy JB Lightstone Pusey CD Goodpasture s disease Lancet 2001 358 917 20 2 Lerner RA Glassock RJ Dixon FJ The role of anti glomerular basement membrane antibody in the pathogenesis of human glomerulonephritis J Exp Med 1967 126 989 1004 IFU031ZENIT RA Version 01 27 November 2012 Seite 14 von 15 ZENIT RA GBM REF 43735 3 Hudson BG Tryggvason K Sundaramoorthy M Neilson EG Alport s syndrome Goodpasture s syndrome and type IV collagen N Engl J Med 2003 348 2543 56 4 Levy JB Turner AN Rees AJ Pusey CD Long te
9. Probe Konzentration SD AU mL VK AU mL GBM P1 51 2 4 62 9 0 GBM P2 205 0 15 06 7 3 GBM P3 296 3 28 84 9 7 GBM P4 91 6 7 16 7 8 GBM P5 222 8 18 68 8 4 Linearit t der Verd nnungen Zur Beurteilung der Linearit t der Verd nnungen mit dem Kit ZENIT RA GBM wurden abgestufte Verd nnungen von 3 Seren mit hohen Konzentrationen von GBM IgG AK untersucht zur Verd nnung wurde die Systemfl ssigkeit verwendet Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle zusammengefasst Gemessene Erwartete Wiederfindun Probe Verd nnungsfaktor Konzentration Konzentration o g AU ml AU ml d 1 8 42 1 42 3 99 5 2 1 353 3 100 IFU031ZENIT RA Version 01 27 November 2012 Seite 12 von 15 ZENIT RA GBM REF 43735 8 33 9 28 0 121 1 Es ist darauf hinzuweisen dass m glicherweise einige Seren bei Messung verschiedener Verd nnungen innerhalb des Messbereiches nicht lineare Ergebnisse erbringen da das Ergebnis nicht nur von der Konzentration sondern auch von der Affinit t der in der Probe vorliegenden Antik rper abh ngt Analytische Sensitivit t Die analytische Sensitivit t des Kits ZENIT RA GBM die als Nachweisgrenze Limit of Detection LoD d h die geringste Menge des Analyten die mit der Methode gemessen werden kann angegeben wird wurde mit der Gleichung LoD LoB Cg SD bewertet wobei LoB die Leerwertgrenze und SD d
10. ackung mit 2 Flaschen mit je 1 Liter gebrauchsfertiger L sung ZENIT RA Cartridge Checking System Best Nr 41401 ZENIT RA Top Cap Set Best Nr 41566 300 rote Verschlusskappen zum Verschlie en der Kalibratorenbeh lter nach der ersten Anwendung Das Analyseger t ZENIT RA und die mit einem Sternchen identifizierten Zubeh rteile werden von Immunodiagnostic Systems S A Rue E Solvay 101 B 4000 Liege Belgien hergestellt und von A Menarini Diagnostics Srl vertrieben Weitere empfohlene Reagenzien ZENIT RA ANCA GBM Control Set Best Nr 41449 3 Fl schchen mit je 1 5 ml GBM AK negativem Humanserum und 3 Fl schchen mit je 1 5 ml GBM AK positivem Humanserum WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN Die mit dem Kit ZENIT RA GBM gelieferten Reagenzien dienen ausschlie lich der In vitro Diagnostik und durfen nicht in vivo bei Menschen oder Tieren verwendet werden Dieses Produkt ist von professionellen Anwendern unter strikter Beachtung der in diesem Dokument vorliegenden Anweisungen zu verwenden Menarini kann nicht f r Verluste oder Sch den verantwortlich gemacht werden die aus einer nicht den mitgelieferten Anweisungen entsprechenden Anwendung entstehen Sicherheitsma nahmen Dieses Produkt enth lt Materialien tierischer Herkunft und ist daher wie Infektionserreger enthaltendes Material zu behandeln Dieses Produkt enth lt Bestandteile menschlicher Herkunft Alle f r die Herstellung der Reagenzien in die
11. egeben werden Das Ger t sorgt automatisch f r das kontinuierliche Sch tteln der Magnetpartikel Wenn die Reagenzienkartusche aus dem Ger t entfernt wird ist sie bei 2 8 C aufrecht und im Dunkeln aufzubewahren Einsetzen der Kalibratoren Die Kalibratoren des Systems ZENIT RA sind gebrauchsfertig Lassen Sie die Kalibratoren 10 Minuten bei Raumtemperatur stehen und sch tteln Sie vorsichtig den Inhalt von Hand oder mit dem Vortex Mixer ohne dass sich dabei Schaum bildet Falls die Kalibratoren zum ersten Mal verwendet werden eliminieren Sie vor dem Einsetzen in das Ger t das Garantiesiegel und die wei e Verschlusskappe Falls die Kalibratoren bereits verwendet wurden ist der Beh lter mit einer oberen Kappe rote Kappe versehen und hat kein Garantiesiegel Entfernen Sie die rote Verschlusskappe vor dem Einsetzen der Kalibratoren in das Ger t Setzen Sie die Kalibratoren in den Probenbereich des Ger tes ein Informationen zu ihrer Identifizierung im Ger t finden Sie in der Bedienungsanleitung des Ger tes Falls das Etikett besch digt ist oder der Barcode nicht abgelesen wird m ssen die Daten des Barcodes von Hand eingegeben werden Die Konzentrationswerte der in den Kalibratoren vorliegenden IgG Antik rper gegen GBM sind auf der DATA DISK verzeichnet und werden automatisch an das Analyseger t bertragen Am Ende des Laufs sind die Beh lter der Kalibratoren mit den daf r bestimmten oberen Kappen rote Kappen zu verschlie
12. gative GBM AK Ergebnisse sind eine unerlassliche Voraussetzung f r Patienten die auf eine Transplantation warten um die Wahrscheinlichkeit des Wiederauftretens der Krankheit im verpflanzten Organ auf ein Minimum zu reduzieren Da auch ANCA assoziierte systemische Vaskulitiden mit einem klinischen Bild von rasch progressiver GN auftreten k nnen ist gleichzeitig mit der Bestimmung von GBM AK auch die Bestimmung von ANCA hilfreich Es sollte ber cksichtigt werden dass bei einem bedeutenden Anteil von Patienten mit GBM AK 10 38 gleichzeitig ANCA vorliegen im allgemeinen mit Spezifit t f r Myeloperoxidase ANCA MPO deren klinische Bedeutung nicht klar Be Bez glich des diagnostischen Nutzens der Labordaten ist zu ber cksichtigen dass die positiven und negativen Vorhersagewerte PVW NVW au er von der Sensitivit t und Spezifit t des Tests auch von der H ufigkeit der Krankheit in der untersuchten Bev lkerung abh ngen Eine angemessene Anforderung erh hte Wahrscheinlichkeit vor dem Test erm glicht es ein Ergebnis mit tats chlicher klinischer Bedeutung zu erhalten und verringert deutlich die M glichkeit von falschen positiven Ergebnissen PRINZIP DER METHODE Der Kit ZENIT GBM f r die quantitative Bestimmung von spezifischen IgG Antik rpern gegen die glomerul re Basalmembran verwendet eine indirekte immunologische Methode in zwei Schritten auf der Grundlage des Chemilumineszenzprinzips Das stark gereinigte NC1a3 IV Anti
13. gen wird zur Beschichtung der Magnetpartikel verwendet Festphase und ein Antik rper gegen humane IgG wird mit einem Acridiniumester Derivat markiert Konjugat W hrend der ersten Inkubation binden sich die spezifischen Antik rper in der Probe in den Kalibratoren oder in den Kontrollseren an die Festphase IFU031ZENIT RA Version 01 27 November 2012 Seite 2 von 15 ZENIT RA GBM REF 43735 W hrend der zweiten Inkubation reagiert das Konjugat mit den an die Festphase gebundenen GBM Antik rpern Nach jeder Inkubation wird das nicht an die Festphase gebundene Material durch Absaugen und anschlie endes Waschen entfernt Die Menge des markierten Konjugats das an die Festphase gebunden wurde wird mittels Aktivierung der Chemilumineszenzreaktion und Messung des Lichtsignals bewertet Das erzeugte Signal wird in relativen Lichteinheiten RLU Relative Light Units ausgedr ckt und zeigt die Konzentration der in der Probe in den Kalibratoren und in den Kontrollseren vorliegenden spezifischen Antik rper an AUTOMATISIERUNG Das Analyseger t ZENIT RA f hrt automatisch alle Schritte durch die im Protokoll f r den Test vorgesehen sind Hinzuf gen von Proben Kalibratoren Kontrollseren Magnetpartikeln Konjugat und Aktivierungsl sungen f r die Chemilumineszenz in den Reaktionsbeh lter magnetische Trennung und Waschen der Partikel Messen des emittierten Lichts Das System berechnet die Testergebnisse de
14. h entstehen die Gewebesch den durch die Bindung der GBM Antik rper an die glomerul re und alveol re Basalmembran Das Zielantigen wurde in der nicht kollagenen Dom ne NC1 auf der a3 Kette des Typ IV Kollagens das ausschlie lich in der Basalmembran der Nieren Lungen Cochlea und Augen zu finden ist identifiziert Goodpasture Syndrom ist eine sehr schwere Krankheit die ohne rechtzeitige und angemessene Behandlung h ufig fulminant verl uft Trotz der therapeutischen Fortschritte h ngen das berleben des Patienten und des Organs noch immer stark vom Schweregrad der Niereninsuffizienz zu Beginn der Untersuchungen ab so dass eine fr hzeitige Diagnose f r das berleben des Patienten und die Wiederherstellung der Nierenfunktion unabdingbar sind Die Diagnose der Erkrankung durch GBM Antik rper oder des GPS beruht auf dem Nachweis linearer Ablagerungen von Immunglobulinen auf der glomerularen Basalmembran mittels einer direkten Immunfluoreszenzmethode an einer Nierenbiopsie In vielen F llen kann eine Nierenbiopsie jedoch gar nicht oder erst zu einem sp teren Zeitpunkt durchgef hrt werden so dass die serologische Diagnose eine fundamentale Rolle spielt Zirkulierende GBM AK k nnen mittels indirekter Immunfluoreszenz auf IFU031ZENIT RA Version 01 27 November 2012 Seite 1 von 15 ZENIT RA GBM REF 43735 Primatennieren nachgewiesen werden diese Methode hat eine hohe Spezifit t aber eine unzureichende
15. ie gesch tzte Standardabweichung der Verteilung der Probe mit niedriger Konzentration ist und Cg vom 95 Perzentil der Standard Gau verteilung abgeleitet wird Es wurden 5 Proben mit niedriger Konzentration des Analyten verwendet die in 14 verschiedenen Versuchen mit einer Reagenziencharge einfach bestimmt wurden Als Nachweisgrenze des Kits ZENIT RA GBM wurde 13 5 AU ml bestimmt Zusammen mit klinischen berlegungen und den Ergebnissen von Vergleichen mit Referenzmethoden hat der Wert der Nachweisgrenze zur Definition des Cut Off Wertes beigetragen Analytische Spezifit t Interferenzen Die Leistungen des Tests werden durch das Vorliegen der in der nachfolgenden Tabelle angef hrten potentiell interferierenden Substanzen in der Probe bis zu der untersuchten Konzentration nicht beeinflusst Potentiel mierfenerende H chste untersuchte Konzentration Substanzen Freies Bilirubin 20 mg dL Konjugiertes Bilirubin 20 mg dL H moglobin 1000 mg dL Triglyceride 3000 mg dL Von der Verwendung lip mischer h molytischer oder tr ber Proben wird jedoch abgeraten Analytische Spezifit t Kreuzreaktionen IFU031ZENIT RA Version 01 27 November 2012 Seite 13 von 15 ZENIT RA GBM REF 43735 Um eventuelle Kreuzreaktionen des f r die Sensibilisierung der Mikropartikel verwendeten Antigens zu beurteilen wurde eine Untersuchung mit 49 Proben durchgef hrt die alle hohe Konzentrationen anderer Autoan
16. ienkartusche zusammengestellt Die Konzentrationen der Kalibratoren sind in AU ml Arbitrary Units willk rliche Einheiten angegeben und gegen einen internen Referenzstandard kalibriett Die f r jede Produktcharge spezifischen Konzentrationswerte sind in der im Kit enthaltenen DATA DISK verzeichnet DATA DISK Mini DVD mit Informationen zu allen Produkte der Reihe ZENIT RA Reagenzien Kalibratoren Kontrollseren aktualisiert bis zur letzten Produktionscharge unter Ausschluss der Produkte die zum Zeitpunkt der Zusammenstellung der neuen DATA DISK abgelaufen sind Es reicht aus die DATA DISK mit der h chsten Chargennummer aufzubewahren um die f r den korrekten Betrieb des Systems notwendigen Informationen auf dem jeweils aktuellsten Stand zu halten Ben tigte im Kit nicht mitgelieferte Materialien und Reagenzien ZENIT RA Analyseger t Best Nr 41400 ZENIT RA Cuvette Cube Best Nr 41402 Packung mit 960 K vetten ZENIT RA System Liquid Best Nr 41409 1 Flasche mit 0 5 Liter L sung 10x Systemfl ssigkeit ZENIT RA Wash Solution Best Nr 41407 1 Flasche mit 0 5 Liter L sung 20x Waschl sung ZENIT RA Trigger Set Best Nr 41403 1 Flasche mit 250 ml Trigger A Voraktivierungsl sung IFU031ZENIT RA Version 01 27 November 2012 Seite 4 von 15 ZENIT RA GBM REF 43735 1 Flasche mit 250 ml Trigger B Aktivierungsl sung ZENIT RA D SORB Solution Best Nr 41436 P
17. inaktivierung k nnen das Ergebnis der Bestimmung beeintr chtigen Heterophile Antik rper in Humanserumproben k nnen mit Reagenzien auf Immunglobulinbasis reagieren und so immunologische In vitro Bestimmungen beeintr chtigen Solche Proben k nnen bei Analyse mit dem Kit ZENIT RA GBM zu abnormalen Werten f hren Proben von Patienten mit chronischen Leberkrankheiten chronischen Infektionen Kollagenosen und Myelomen mit Hypergammaglobulin mie lIgG Konzentration ber 1800 mg dl k nnen in einigen Fallen positive Werte f r IgG Antik rper gegen GBM zeigen ERWARTETE WERTE Es wurden Proben von 100 gesunden Patienten untersucht um das Vorliegen von IgG Antik rpern gegen GBM zu berpr fen IFU031ZENIT RA Version 01 27 November 2012 Seite 10 von 15 ZENIT RA GBM REF 43735 Alle untersuchten Proben waren negativ mit einem Mittelwert von 1 1 AU ml und einer Standardabweichung von 3 2 AU ml Mit diesen Ergebnissen wurde die Leerwertgrenze berechnet Limit of Blank LoB der h chste Wert der in einer Reihe von Proben ohne den Analyten erwartet werden kann Die Leerwertgrenze wurde als das 95 Perzentil der negativen Bev lkerung bestimmt und liegt bei 6 3 AU ml mit der Reagenziencharge 2 KLINISCHE SENSITIVIT T UND SPEZIFIT T Mit dem Kit ZENIT RA GBM wurden insgesamt 156 Proben untersucht darunter 30 Proben von Patienten mit Goodpasture Syndrom GPS 2 Proben von Patienten mit rasch pr
18. mpen oder das Plasma von den roten Blutk rperchen und f llen Sie die Probe aus den prim ren Geltrennr hrchen in sekund re Reagenzr hrchen ohne Zus tze um Vor der Untersuchung k nnen die Proben h chstens 7 Tage lang im K hlschrank bei 2 8 C aufbewahrt werden Wenn die Bestimmung nach mehr als 7 Tagen durchgef hrt wird sind die Proben einzufrieren lt 20 C Vermeiden Sie wiederholtes Auftauen und Einfrieren IFU031ZENIT RA Version 01 27 November 2012 Seite 6 von 15 ZENIT RA GBM REF 43735 VERFAHREN Halten Sie sich genauestens an die Anweisungen in der Bedienungsanleitung des Ger tes um eine zuverl ssige Analyseleistung zu erhalten Einsetzen der Reagenzien Alle mit dem Kit gelieferten Reagenzien sind gebrauchsfertig Vor dem Einsetzen der Kartusche in das System muss der Beh lter mit den Magnetpartikeln durch horizontales Drehen gesch ttelt werden um die Resuspendierung der Partikel zu erleichtern Dabei ist die Bildung von Schaum zu vermeiden Setzen Sie die Reagenzienkartusche mit Hilfe der entsprechenden F hrung in den Reagenzienbereich des Ger tes ein und lassen Sie sie vor der Anwendung mindestens 60 Minuten lang sch tteln Bei Einsetzen der Reagenzienkartusche wird gleichzeitig deren identifizierender Barcode abgelesen Falls das Etikett der Kartusche besch digt ist oder der Barcode nicht abgelesen wird k nnen die identifizierenden Daten der Reagenzienkartusche von Hand eing
19. ogressiver Glomerulonephritis RPGN 95 Proben von Patienten mit anderen Krankheiten 18 systemische Kollagenosen 12 ANCA assoziierte Vaskulitiden 15 F lle von rheumatoider Arthritis 4 F lle von Z liakie 38 Infektionskrankheiten 8 sonstige Krankheiten 29 Proben von normalen Versuchspersonen In der mutma lich negativen untersuchten Bev lkerung 18 systemische Kollagenosen 12 ANCA assoziierte Vaskulitiden 15 F lle von rheumatoider Arthritis 4 F lle von Z liakie 38 Infektionskrankheiten 8 sonstige Krankheiten und 29 Proben von normalen Versuchspersonen wurden f r keine Probe positive Ergebnisse erhalten Diagnostische Spezifit t 100 Konfidenzintervall bei 95 96 3 99 9 von 124 Proben erbrachten 124 ein negatives Ergebnis In der mutma lich positiven untersuchten Bev lkerung 30 Proben von Patienten mit Goodpasture Syndrom GPS und 2 Proben von Patienten mit rasch progressiver Glomerulonephritis RPGN wurde f r alle Proben ein positives Ergebnis erhalten Diagnostische Sensitivit t 100 Konfidenzintervall bei 95 86 7 99 7 32 32 Proben Entsprechend den Ergebnissen der diagnostischen Spezifit t und Sensitivit t liegt die diagnostische bereinstimmung bei 100 Konfidenzintervall bei 95 96 7 99 9 156 156 Proben LEISTUNGEN Warnung Die angegebenen Daten stellen nicht die Funktionsspezifikationen des Kits dar sondern sind der experimentelle Nachweis daf r wie der Kit auf die vom
20. r Proben und Kontrollseren mittels der gespeicherten Kalibrierungskurve und druckt einen Bericht aus der alle Informationen bez glich des Tests und des Patienten enth lt MATERIALIEN UND REAGENZIEN Mitgelieferte Materialien und Reagenzien Magnetpartikel beschichtet mit stark gereinigtem NC1a3 IV Antigen in Phosphatpuffer mit Stabilisatorproteinen einem Tensid Pro Clin 300 und Natriumazid lt 0 1 als Konservierungsmittel Monoklonale Mausantik rper gegen humane IgG mit einem Acridiniumester Derivat markiert Konjugat in Phosphatpuffer mit Stabilisatorproteinen und Natriumazid lt 0 1 als Konservierungsmittel Probenverd nnungsmittel Phosphatpuffer mit bovinem Serumalbumin einem Tensid einem blauen Farbstoff und Natriumazid lt 0 1 als Konservierungsmiittel IFU031ZENIT RA Version 01 27 November 2012 Seite 3 von 15 ZENIT RA GBM REF 43735 Humanserum mit niedriger Konzentration von GBM IgG Antik rpern in Phosphatpuffer mit bovinem Serumalbumin einem Tensid einem inaktiven blauen Farbstoff Pro Clin 300 und Gentamicin SO als Konservierungsmittel Humanserum mit hoher Konzentration von GBM IgG Antik rpern in Phosphatpuffer mit bovinem Serumalbumin einem Tensid einem inaktiven blauen Farbstoff Pro Clin 300 und Gentamicin SO als Konservierungsmittel Alle Reagenzien sind gebrauchsfertig Die Reagenzien 1 2 und 3 sind in einem gemeinsamen Beh lter der Reagenz
21. rierungskurve Masterkurve die vom Hersteller f r jede Charge der Reagenzienkartuschen erzeugt wird Die Parameter der Masterkurve sind zusammen mit den Konzentrationswerten der Kalibratoren auf der DATA DISK gespeichert und werden in die Datenbank des Ger tes bertragen Die Kalibratoren A und B werden verwendet um entsprechend dem verwendeten Ger t und den Reagenzien im Ger t die Masterkurve nachzukalibrieren Analysieren Sie zum Nachkalibrieren die beiden Kalibratoren A und B dreifach und die Kontrollseren einfach Die mit den Kontrollseren erhaltenen Konzentrationswerte erm glichen es die neue Kalibrierung zu validieren Nachdem die Nachkalibrierung der Masterkurve akzeptiert und gespeichert wurde k nnen alle nachfolgenden Proben ohne weitere Kalibrierung analysiert werden es sei den es tritt einer der folgenden F lle ein eine Reagenzienkartusche einer neuen Charge wird in das Ger t eingesetzt die Werte der Kontrollseren liegen nicht innerhalb des Akzeptanzbereiches es wurden Wartungsverfahren am Ger t durchgef hrt die G ltigkeit der nachkalibrierten Masterkurve ist abgelaufen Die G ltigkeit der nachkalibrierten Masterkurve f r den Kit ZENIT RA GBM betr gt 21 Tage Die Nachkalibrierung wird vom Ger t automatisch verwaltet Bestimmung Dr cken Sie die Starttaste 1 Das System saugt 80 ul Probenverd nnungsmittel 40 ul Magnetpartikel 100 ul Probenverd nnungsmittel und 10 ul Probe oder Kontrollserum an
22. rm outcome of anti glomerular basement membrane antibody disease treated with plasma exchange and immunosuppression Ann Int Med 2001 134 1033 42 5 Wilson CB Dixon FJ Diagnosis of immunopathologic renal disease Kidney Int 1974 5 389 401 6 Sinico RA Radice A Corace C Sabadini E Anti glomerular basement membrane antibodies in the diagnosis of Goodpasture syndrome a comparison of different assays Nephrol Dial Transplant 2006 21 397 401 7 Mahler M Radice A Sinico RA Damoiseaux J Seaman A Buckmelter K et al Performance evaluation of a novel chemiluminescence assay for detection of anti GBM antibodies an International multicenter study Nephrol Dial Transplant 2012 27 1 243 52 8 Segelmark M Hellmark T Wieslander J The prognostic significance in Goodpasture s disease of specificity titre and affinity of anti glomerular basement membrane antibodies Nephron Clin Pract 2003 94 59 68 9 Hellmark T Niles JL Collins AB McCluskey RT Brunmark C Comparison of anti GBM antibodies in sera with or without ANCA J Am Soc Nephrol 1997 8 376 85 10 Levy JB Hammad T Coulthart A Dougan T Pusey CD Clinical feature and outcome of patients with both ANCA and anti GBM antibodies Kidney Int 2004 66 1535 40 TECHNOGENETICS S r l Via della Filanda 26 26900 Lodi Italien AUSTRIA GERMANY Vertrieb durch Vertrieb durch A Menarini G m b H A Menarini Diagnostics Deutschland Pottendorfer Strasse 25
23. rstellt 4PL Y erwogen und regelm ig entsprechend den mit der Bestimmung der Kalibratoren erhaltenen Ergebnissen korrigiert Detaillierte Informationen zur Berechnung der Ergebnisse durch das System finden Sie in dessen Bedienungsanleitung IFU031ZENIT RA Version 01 27 November 2012 Seite 9 von 15 ZENIT RA GBM REF 43735 Interpretation der Ergebnisse Der Messbereich f r die quantitative Bestimmung mit ZENIT RA GBM ist 0 0 1000 AU ml Werte unter 0 0 AU mL sind extrapolierte Werte es erscheint die Meldung OMR und oder ORA und die Werte werden als gleich 0 0 AU mL angegeben Bei Werten ber 1000 AU mL erscheint die Meldung OMR und oder ORA und die Proben k nnen nach geeigneter Verd nnung erneut getestet werden Die Ergebnisse der Proben k nnen wie folgt interpretiert werden AU ml Interpretation lt 40 Die Probe ist als negativ f r das Vorliegen von GBM IgG Antik rpern anzusehen 240 Die Probe ist als positiv f r das Vorliegen von GBM IgG Antik rpern anzusehen Die obengenannten Werte sind nur vorgeschlagene Werte Jedes Labor muss seine eigenen Referenzbereiche erstellen EINSCHR NKUNGEN DES TESTS F r Diagnosezwecke sind die mit dem Kit ZENIT RA GBM und dem Analysesystem ZENIT RA erhaltenen Ergebnisse zusammen mit anderen dem Arzt zur Verf gung stehenden klinischen und Labordaten zu verwenden Eine bakterielle Verunreinigung der Proben und W rme
24. sem Kit verwendeten Serum oder Plasmaeinheiten wurden mit von der FDA genehmigten Methoden auf das Vorliegen von HBsAg HCV Antik rpern HIV1 Antik rpern und HIV2 Antik rpern untersucht und f r nicht reaktiv befunden Da jedoch keine Untersuchungsmethode die Abwesenheit von Krankheitserregern garantieren kann sind alle Materialien menschlicher Herkunft als potentiell infiziert anzusehen und entsprechend zu handhaben Falls die Verpackung besch digt wird und Reagenzien austreten sch tzen Sie sich mit einer geeigneten pers nlichen Schutzausr stung Kittel Handschuhe Schutzbrille und dekontaminieren Sie den betroffenen Bereich mit einer verd nnten Natriumhypochloritl sung IFU031ZENIT RA Version 01 27 November 2012 Seite 5 von 15 ZENIT RA GBM REF 43735 Entsorgen Sie das f r die Reinigung verwendete Material und die von dem Materialaustritt betroffenen Verpackungen gem den nationalen Vorschriften f r die Entsorgung potentiell infizierter Abf lle Einige Reagenzien enthalten Natriumazid als Konservierungsmittel Da Natriumazid mit Blei Kupfer oder verbleitem Messing reagieren und so in den Abflussrohren explosive Azide bilden kann wird empfohlen die Reagenzien oder Abf lle nicht in den Abfluss zu entsorgen sondern die nationalen Vorschriften f r die Entsorgung potentiell gef hrlicher Abf lle zu befolgen Vorsichtsma nahmen f r die Anwendung Um zuverl ssige Ergebnisse zu erhalten ist es not
25. tik rper aufwiesen und negativ f r GBM IgG AK waren Die verwendeten Proben setzten sich wie folgt zusammen CCP und oder FR 15 Gliadin A und oder G und oder tTG A 4 ANCA positiv 12 und ANA und oder ENA 18 Die Untersuchung hat keine bedeutsamen Kreuzreaktionen des Antigens in der Festphase mit den anderen Autoantik rpern gezeigt S ttigqungseffekt bei hohen Konzentrationen Einige immunologische Methoden k nnen untersch tze Werte f r den Analyten anzeigen Hook Effekt wenn sie zur Bestimmung von Proben mit extrem hohen Analytenkonzentrationen verwendet werden Da die von dem Kit ZENIT RA GBM verwendete Methode eine Methode mit zwei Inkubationen ist ist sie von diesem Effekt nicht betroffen Eine Probe mit einer extrem hohen Konzentration oberhalb des Messbereiches von IgG Antik rpern gegen GBM hat best tigt dass bis zu einer Konzentration von 1552 AU ml kein Hook Effekt eintritt Relative Sensitivit t und Spezifit t Das Vorliegen von IgG Antik rpern gegen GBM wurde in 156 Proben mit dem Kit ZENIT RA GBM und mit einer im Handel erh ltlichen ELISA Methode bestimmt 30 Proben von Patienten mit Goodpasture Syndrom GPS 2 Proben von Patienten mit rasch progressiver Glomerulonephritis RPGN 95 Proben von Patienten mit anderen Krankheiten 18 systemische Kollagenosen 12 ANCA assoziierte Vaskulitiden 15 F lle von rheumatoider Arthritis 4 F lle von Z liakie 38 Infektionskrankheiten 8 sonstige Krankheiten 29 Proben
26. wendig dass Sie sich strikt an diese Gebrauchsanleitung halten und die Angaben in der Bedienungsanleitung des Analyseger tes genau befolgen Die mit dem Kit gelieferten Reagenzien sind nur mit dem Analyseger t ZENIT RA zu verwenden Die Bestandteile der Reagenzienkartusche k nnen nicht aus der Kartusche entfernt und neu zusammengestellt werden Den Kit nicht nach dem Verfallsdatum verwenden ZUBEREITUNG DER REAGENZIEN Alle mit dem Kit gelieferten Reagenzien sind gebrauchsfertig LAGERUNG UND HALTBARKEIT DER REAGENZIEN Die mit dem Kit gelieferten Reagenzien bei 2 8 C aufrecht und im Dunkeln aufbewahren Unter diesen Bedingungen sind die Reagenzienkartusche und die Kalibratoren vor dem ffnen bis zum Verfallsdatum haltbar Nach dem ffnen kann die Reagenzienkartusche 60 Tage lang angewendet werden wenn sie im K hlschrank bei 2 8 C oder im Ger t aufbewahrt wird Nach dem ffnen k nnen die Kalibratoren 60 Tage lang angewendet werden wenn sie im K hlschrank bei 2 8 C aufbewahrt werden und pro Lauf nicht l nger als 6 Stunden im Ger t verbleiben Reagenzien und Kalibratoren nicht einfrieren ZUBEREITUNG UND AUFBEWAHRUNG DER PROBEN Die Bestimmung ist mit humanen Serum oder Plasmaproben EDTA Natriumcitrat durchzuf hren Von der Verwendung lip mischer h molytischer und tr ber Proben wird abgeraten Wenn die Bestimmung mehr als 8 Stunden nach der Entnahme erfolgt trennen Sie das Serum von dem Blutklu
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