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Agilent ChemStation Informationen zu Ihrer ChemStation

1. 2 i SIMPREG 004F0501 F 05 01 Sample3 C 13 1 _ SIMPREG C1F06001 F 06 01_ 1 01 AV AV Calibration A MT 14 1 _ SIMPREG C1F06002 F 06 02_ 1 01 AV AV Calibration A C jis 1 _ SIMPREG C2F06001 F 06 01_ 2 02 Av AV Calibration A L 18 1 __ sIMPREG C2F06001 F 06 01 Control 1 SIMPREG C1F07001 F 07 01 1 01 AV AV Calibration A 206 Automatisierung Logbuchdatei einer Sequenz Logbuchdatei einer Sequenz Es wird eine Logbuchdatei angelegt die alle Ereignisse enth lt die w hrend der Ausf hrung der Analyse auftraten Dies ist zur Fehlererkennung bei unbeobachtet ausgef hrten Sequenzen zum Beispiel ber Nacht von Nutzen Die Logbuchdatei tr gt stets die Dateinamenerweiterung log Die Logbuchdatei wird in dem Verzeichnis abgelegt in dem sich die Datens tze der Sequenz befinden 207 Abbildung 40 Automatisierung Was geschieht w hrend der Ausf hrung einer Sequenz Was geschieht w hrend der Ausf hrung einer Sequenz e Beivorhandenem Autosampler sucht die ChemStation Software zuerst die Probe im Autosampler gem der Zahl in der Spalte Vial e Die Methodenparameter werden an die Analysenger te weitergegeben e Das Makro vor dem Analysenlauf Prerun Macro wird ausgef hrt e Die Probe wird entweder manuell oder automatisch injiziert e Die Datenauswertung der Methode wird durchgef hrt Dies umfa t Integration Quantifizierung Reporterstellung
2. Mit der graphischen Darstellung der Kalibrierkurve wird ein Korrelationskoeffizient angegeben Der Der Korrelationskoeffizient ist die Wurzel aus dem Regressionkoeffizienten und ist ein Ma f r die Anpassung der Kalibrierkurve an die Datenpunkte Der Koeffizient wird mit drei Dezimalstellen im Wertebereich von 0 000 bis1 000 angegeben mit 0 000 keine bereinstimmung 1 000 beste bereinstimmung 181 Kalibrierung Kalibrierkurve F r jede Kalibrierstufe wird die relative Abweichung angezeigt Sie wird mit folgender Formel berechnet Response Jiprated _ Response 1culated relRES 100 Response Iculated mit relRES relative Abweichung in Prozent Der berechnete Response entspricht einem Punkt der Kalibrierkurve Die Standardabweichung kann durch Wahl von Print calibration table and curves auf einigen Reports angegeben werden und wird mit folgender Formel berechnet n 2 Respeatipratedi ReSPeatculareai 2 ResSTD j n 2 mit ResSTD Standardabweichung Resp alibratedi Kalibrierter Response im Punkt i Resp aiculatedi berechneter Response im Punkt i n Anzahl der Kalibrierpunkte 182 Abbildung 34 Kalibrierung Unbekannte Proben Unbekannte Proben Eine unbekannte Probe ist eine Probe die eine unbekannte Menge einer Substanz enth lt die quantifiziert werden soll Zur Ermittlung der Menge dieser Substanz in der Probe m ssen Sie folgende Schritte durc
3. PICTURES LANGUAGE I HELPENU 1024 800 LANGUAGE SYS HELPENU LANGUAGE BACKUP LC GC CE HELPENU DRIVERS LANGUAGE 800 ___ TEMP 1 DATA DEMO I METHODS I SEQUENCE L VERIFY SPECLIBS 37 ChemStation Konzepte Die Verzeichnisstruktur der ChemStation Folgende sind die Unterverzeichnisse der ChemsStation Verzeichnis HPCHEM REPSTYLE CORE PICTURES LANGUAGE 1024 and 800 SYS HELPENU LANGUAGE BACKUP DRIVERS Inhalte In diesem Verzeichnis stehen alle Programme zum Konfigurieren und Starten der ChemStation Es mu in der Umgebungsvariable PATH enthalten sein Dieses Verzeichnis wird vom Installationsprogramm automatisch angelegt au er wenn eine Alternative eingegeben wird Hier befinden sich alle Reportvorlagen die mit dem Reportdesigner definiert wurden Hier befinden sich die Basiskomponenten der Software die von allen chromatographischen Ger ten benutzt werden Es ist auch das Arbeitsverzeichnis der ChemsStation Die f r die ChemsStation erforderlichen Graphiken befinden sich in diesem Verzeichnis Hier befinden sich spezifische Sprachmodule dieses Teils der Software Hier befinden sich Intitialisierungsdateien f r die Softwareschnittstelle f r Anwender Diese nicht ndern Hier befinden sich die allgemeinen Komponenten die von allen chromatographischen Ger temodulen genutzt werden hpchem sys mu in der Umgebungsvariablen PATH enthalten s
4. gt Agilent ChemStation informationen zu Ihrer ChemsStation Copyright Agilent Technologies 2000 nderungen vorbehalten Die Reproduktion Anpassung oder bersetzung in eine andere Sprache ist ohne vorherige schriftliche Genehmigung unzul ssig es sei denn diese erfolgen innerhalb der Grenzen des Urheberrechtes Publikationsnummer G2070 92113 Ausgabe 04 00 Gedruckt in Deutschland Dieses Handbuch bezieht sich auf die Version A 08 xx der ChemsStation Software wobei xx eine Zahl von 00 bis 99 ist und kleinere nderungen der Software bezeichnet die keinen Einflu auf die technische Richtigkeit dieses Handbuches haben Adobe ist ein Waren zeichen der Adobe Systems Incorporated Microsoft MS DOS MS Windows Windows und Windows NT sind eingetragenen Warenzeichen der Microsoft Corp Pentium ist ein eingetragenes Warenzeichen der Intel Corporation PostScript ist ein eingetragenes Warenzeichen der Adobe Systems Incorporated Gew hrleistung Alle Informationen in diesem Dokument k n nen ge ndert werden ohne dass es daf r einer Ank ndigung bedarf Agilent Technologies bernimmt f r dieses Material in keiner Weise eine Garantie und macht keinerlei Zusagen zur Nutzbar keit oder Eignung die ses Materials f r einen bestimmten Zweck Agilent Technologies kann nicht f r etwaige enthaltene Ausstattung Fehler und die zuf lligen od
5. 95 Konfidenzintervall f r 6 Proben 1 a 0 95 N 6 Der korrekte Wert f r t muss aus der t Verteilungstabelle f r 5 N 1 Freiheitsgrade genommen werden und f r den Wert a 2 der 0 025 entspricht Daraus ergibt sich die folgende Berechnungsformel f r CI 1 CI 2571 8 J6 M Regressionsanalyse Mit N Anzahl der Einzelbeobachtungen X Unabh ngige Variable i Beobachtung Y Abh ngige Variable i Beobachtung Geradengleichung yx a bX Koeffizienten a gex MADIS Ex yal i 1 i 1 i 1 280 Ermittlung der Systemleistung Definitionen der Reproduzierbarkeit b A X i 1 i 1 i 1 u pang gt 281 Ermittlung der Systemleistung Definitionen der Reproduzierbarkeit mit Ax N 23 i 1 i 1 Regressionskoeffizient i 1 i 1 i 1 A A t mit Ay N pEr i 1 i 1 Standardabweichung S N Y Y a bX i 1 282 Ermittlung der Systemleistung Interner gespeicherter Doppelpr zisions Zahlenzugriff Interner gespeicherter Doppelpr zisions Zahlenzugriff F r Validierungszwecke kann eine manuelle Neuberechnung der ChemsStation Ergebnisse wie Kalibrierkurven Korrelationskoeffizienten theoretische Trennb den u s w notwendig sein Dabei muss das in der ChemsStation verwendete Zahlenformat ber cksichtigt werden F r alle in der ChemsStation intern gespeicherte Zahlen wird der C Datentyp DOUBLE verwendet Dies bedeutet dass f r jede Zah
6. Autointegration Die Autointegration untersucht den vorderen und den hinteren Bereich eines Chromatogramms um ein Ma f r das Rauschen abzusch tzen und entsprechende Anfangseinstellungen f r den Schwellenwert Threshold und die Mindestfl che Area Reject festzulegen Au erdem bestimmt die Autointegration auch einen tempor ren Wert f r die Peakbreite Peak Width der von der Laufzeit und den unteren Detektionskriterien abh ngt Mit einem Wert f r Area Reject von null wird probeweise eine Integration durchgef hrt Wenn bei der probeweisen Integration keine Peaks erkannt werden erfolgt eine Anpassung der Parameter und es wird erneut integriert Diese Integration auf Probe kann so notwendig mehrere Male wiederholt werden Aus den Breiten der ersten gefundenen Peaks wird die Anfangseinstellung f r die Peakbreite ermittelt die die Autointegration f r das bearbeitete Chromatogramm verwendet Begrenzung Die Autointegration ist eine n tzliche Startplattform f r die Integration der meisten Chromatogramme und die ersten Schritte der Methodenentwicklung Allerdings sollte die Autointegration nicht als Ersatz f r eine gute Probenvorbereitung oder Chromatographie verstanden werden Die Autointegration bestimmt Werte f r den Anfang des Chromatogramms was die F higkeit der Autointegration beschr nkt mit ungew hnlichen Peaks umzugehen die sp ter im Chromatogramm auftreten k nnen 100 Der Standardintegrationsalg
7. Basislinienrauschen und Drift k nnen automatisch gemessen werden Damit kann ber die Peakh he eine Nachweisgrenze f r jede kalibrierte Substanz der Methode berechnet werden Schlie lich k nnen die Ger tekonfiguration die Seriennummern der Ger te die S ulenkennung und Ihre eigenen Kommentare in jeden Report aufgenommen werden 263 Ermi ttlung der Systemleistung Erweiterte Leistungswerte k nnen nur f r kalibrierte Substanzen berechnet werden womit die Identifizierung ber Retentions bzw Migrationszeiten und mit Substanznamen sichergestellt wird Ein typischer Report ber einen Systemleistungstest umfa t Ergebnisse zu folgenden Leistungspr fungen Details zu den Analysenger ten Details zur Trenns ule Kapillare Die analytische Methode Informationen zur Probe Informationen zur Datenerfassung Signalbeschreibung und Bestimmung des Basislinienrauschens Beschriftung von Chromatogramm Elektropherogramm mit Retentions Migrationszeiten und Substanznamen Zus tzlich werden folgende Informationen f r jede kalibrierte Substanz in das Chromatogramm Elektropherogramm aufgenommen Retentions Migrationszeiten k Symmetrie Peakbreite Anzahl der theoretischen Trennb den Aufl sung Verh ltnis von Signal zu Rauschen Substanznamen 264 Abbildung 42 Abbildung 43 Ermittlung der Systemleistung Bestimmung des Rauschens Bestimmung des Rauschens Die Rauschh he wird aus den D
8. Talpunkte All Valleys ist ein aktiver oder inaktiver Men punkt Wenn er aktiv ist werden Peaks an allen Talpunkten im Bereich der manuellen Integration abgetrennt wenn einer der 103 Der Standardintegrationsalgorithmus Manuelle Integration Men punkte Draw Baseline Negative Peaks oder Tangent Skim verwendet wird Trace Mode Verfolgen des Signals Aktiviert einen vertikalen Pfeilcursor der nicht vom Signal getrennt werden kann Damit wird sichergestellt da Start und Endpunkte des Peaks auf dem Chromatogramm oder Elektropherogramm liegen L schen von Peaks L scht einen oder mehrere Peaks aus den Integrationsergebnissen Kodierung zur Peaktrennung e Manuell integrierte Peaks werden im Integrationsreport mit der Kodierung MM markiert e Falls vor dem manuell integrierten Peak ein Peak erscheint dessen Ende wegen diesem Peak ver ndert wird tr gt er die Kodierung F f r forced erzwungen e Ein L sungsmittelpeak der durch manuelle Integration beeinflu t wurde zum Beispiel durch tangentiale Anpassung tr gt die Kodierung R f r re calculated solvent neuberechneter L sungsmittelpeak anstatt S Vorgehensweise in der manuellen Integration e Der erste Schritt einer manuellen Integration besteht in der Wahl eines Signalbereiches zur manuellen Integration Dies geschieht durch Herausvergr ern zoomen des interessierenden Bereiches e Im n chsten Schritt wird Draw Baseline Negative Peaks Tangent
9. ber verf gbare Reportvorlagen finden Sie in Kapitell2 Verwendung der ChemStation Reports Datenauswertung Spezielle Reports Umfassendere Reportm glichkeiten stehen in der ChemsStation f r Anwendungen zur Verf gung die spezielle Reports erfordern Sie umfassen die statistische Auswertung der Trennleistung Trendanalysen sowie Anwender definierbare Reportvorlagen Reports zur Systemeignung Reports zur Systemeignung erm glichen dem Anwender die Systemleistung f r einzelne Analysen zu berpr fen Hierf r stehen drei Reportvorlagen zur Verf gung Der StandardPerformance Reportdruckt folgende Parameter f r unkalibrierte Methoden aus e Retentionszeit e k bi 23 ChemStation Konzepte Zur ChemStation Software e Peakfl che e Peakh he e Symmetrie e Halbwertbreite der Peaks e Effizienz als Anzahl der theoretischen Trennstufen e Aufl sung und e Selektivit t Bei Methoden mit Kalibrierungen werden die Spalten f r Peakfl che Peakh he und Selektivit t durch den Substanznamen und Gehalt ersetzt Die Kopfzeile f r den Report enth lt die Standardkopf und fu zeile die Probeninformation die Parameter zur Trenns ule und optional eine Abbildung des Chromatogramms Die Reportvorlage Performance and Noise style f gt zum Performance Report eine Bewertung des Signalrauschens in bis zu sieben anwenderdefinierten Bereichen hinzu Die Angabe des Rauschens erfolgt mit Signal zu Rausch Verh
10. der Analyse 195 Ger t Response 226 Status des 65 Ger testeuerung 33 Netzwerke 33 Gewichtung der Kalibrierpunkte 188 gleich 188 linear 188 quadratisch 188 GLPSave Reg 54 mit der Methode speichern 54 Grenzwerte 239 Gute Laborpraxis Good Laboratory Practice GLP 29 H Height Berechnung 167 Report 248 I Integration 53 102 Anpassung 96 137 Ergebnistabelle 53 isolierte Peaks 79 Kontrollparameter 97 manuell 103 Methoden 99 neuen 71 Parameter 77 91 134 Parametertabelle 102 139 Peakschultern 81 Strichmarkierungen 70 berlappender Peaks 81 Was ist eine Integration 77 Integrationsparameter 53 interner Standard 172 Intervall der Rekalibrierung 214 ISTD Berechnung 172 Peaks auffinden 159 Report 247 Verfahren 172 K Kalibrierkurve Anpassung 188 Arten 184 Beschreibung der 181 Einpunktkalibrierung 184 Gewichtung des Kalibrierpunkts 188 Mehrpunktkalibrierung 185 Verlauf durch Ursprung erzwingen 188 Was ist eine Kalibrierkurve 181 Kalibriertabelle 149 Was ist eine Kalibriertabelle 180 Kalibrierung 179 Bereiche der 186 explizite 217 H ufigkeit 214 Kurve 181 Kurvenanpassung 188 Mehrpunkt 185 Probe 179 185 Punkt 179 Stufe 179 Substanz 179 umschlie ende 214 zyklische 218 Kapazit tsfaktor 274 Kapazit tsverh ltnis 274 Kardinalpunkte 80 Konfidenzintervall 279 Konfiguration 17 angepa te 110 Konstruktion einer modifizier
11. 201 Automatisierung Sequenztabelle Sequenztabelle In der Sequenztabelle werden die Methoden zur Analyse der Proben und die Reihenfolge der Probenfl schchen in der Messung festgelegt Diese Tabelle enth lt auch Informationen zu jeder Probe einschlie lich eines Namens und Parametern zur Quantifizierung und Rekalibrierung Das Gruppenfeld Injector wird beim Einsatz mit Ger ten angezeigt die Dual Sampling unterst tzen z B ein GC Die Wahl von Front oder Back zeigt die Zeilen in der Sequenztabelle neben dem aktiven Status dieses Injektors an Eine Beschreibung der einzelnen Spalten dieser Tabelle und das Zusammenwirken mit Informationen aus der Methode finden Sie in der Online Hilfe 202 Automatisierung Erstellen einer Sequenz Erstellen einer Sequenz Verwenden Sie die Sequenztabelle zur Festlegung der Proben Methoden und Probenfl schchen in der Sequenz Die Sequenztabelle zeigt jede Probe der Sequenz in der Reihenfolge in der die Messung erfolgt und enth lt die notwendigen Informationen bez glich Probenfl schchen Methode und Kalibrierung f r jede Probe Verwenden der Schaltfl che Insert Vial Range Falls Sie sehr viele Proben zur Vermessung mit einer Methode haben k nnen Sie diese schnell in die Sequenztabelle einf gen indem Sie die Funktion Insert Vial Range Probenbereich einf gen nutzen Diese Funktion kopiert Methodenname Bereich der Probenfl schchen Anzahl der Injektionen
12. Beispiel hei t der Rohdatensatz ADC1A CH wenn der ADC das Modul ist 1 die Modulnummer und A die Signalidentifikation Die Erweiterung f r Chromatographie ist CH Datens tze mit UV Spektren Der Dateiname besteht aus Detektortyp und Ger tenummer nur bei Dioden Array Detektor und Fluorszenzdetektor Reportdatens tze f r die zugeh rigen Rohdatens tze Der Dateiname besteht aus Detektortyp Ger tenummer und Signal oder Kanalidentifikation z B ADC1A TXT Makro zur Probeninformation Logbucheintr ge die w hrend eines Analysenlaufes aufgenommen wurden Das Logbuch zeichnet alle Vorg nge w hrend der Analyse auf Es werden alle etwaigen Fehlermeldungen und wichtige Status nderungen der ChemStation aufgezeichnet Nur bei LC Enth lt Kurven zum Ger teverhalten Gradienten Temperaturen Dr cke etc Injektionsvolumina und L sungsmittelbeschreibungen Enth lt die S uleninformation Bei GC Systemen enth lt die Datei auch das Aufgabevolumen Teil des Datensatzes wenn Save GLP Data angegeben ist 60 Datenerfassung Datens tze Die Methode kann zusammen mit den Ergebnisdateien gespeichert werden In diesem Fall wird das Methodenverzeichnis als Unterverzeichnis des Verzeichnisses des Datensatzes angelegt 61 Datenerfassung Online Monitore Online Monitore Es gibt zwei verschiedene Online Monitore Einen Online Monitor f r das Signal und einen weiteren f r Spektren Online Monitor
13. Die Beschr nkungen des Reports mit externem Standard entfallen bei der Verwendung eines internen Standards Eine exakt bekannte Menge des internen Standards wird sowohl zur Kalibrierl sung als auch zur Probenl sung gemischt Die Responsefaktoren jeder interessierenden Substanz werden durch die Response des internen Standards dividiert womit das Response Verh ltnis errechnet wird Die Kalibrierkurven werden als Auftragung dieses Response Verh ltnisses gegen das Mengenverh ltnis gewonnen Mit dieser Information werden die Ergebnisse im Report berechnet Mit diesem Verfahren werden Fehler des Injektionsvolumens oder leichte Schwankungen des chromatographischen Systems mit Auswirkungen auf alle Substanzen ber cksichtigt Im ISTD Report werden die Ergebnisse mit Einheiten Ihrer Wahl ausgegeben Control Charts Report Beim Control Charts Report wird ein einzelnes Ergebnis f r eine bestimmte kalibrierte Substanz ber mehrere L ufe hinweg verfolgt Die Control Chart Funktion wird erst installiert wenn die ChemsStation betriebsbereit ist Am Ende eines Laufes dessen Methode diese Funktion beinhaltet wird das verfolgte Ergebnis direkt in ein Microsoft Excel Datenblatt berf hrt Schlie lich wird der Report auch ber Excel ausgedruckt 247 Verwendung der ChemStation Reports Quantitative Ergebnisse Quantitative Ergebnisse Der Reporttyp tr gt den Namen der Rechenmethode die zur Auswertung verwendet wurde zum Beispiel ISTD Re
14. Peaks mit Tailing haben eine positive Verzerrung mit einem 1 Moment das gr er als die Retentionszeit ist Peaks mit Fronting haben eine negative Verzerrung und ihr 1 Moment ist kleiner als die Retentionszeit Das 4 Moment oder der berschu ist ein Ma f r die Stauchung oder Zerrung eines Peaks l ngs einer vertikalen Achse als Vergleich zur idealen Gau form die ein 4 Moment von Null aufweist Eine visuelle Vergleichsdarstellung w re das Verschieben der Seiten eines Gau peaks bei konstanter Fl che Wenn ein Peak in diesem Vergleich komprimiert wird weist er einen negativen berschu auf Wenn er h her und schmaler wird ist der berschu positiv Der Wert des berschusses wird im Report Performance amp Extended als dimensionsloser Wert pr sentiert 273 Ermittlung der Systemleistung Definitionen des Leistungstests Wahre Peakbreite W min W width of peak at height x of total height Spezialf lle WR Basisbreite 4 Sigma wird erhalten indem Tangenten durch die Wendepunkte gelegt werden die die Basislinie schneiden Tangenten Peakbreite siehe Abbildung 46 auf Seite 275 W44 Breite bei 4 4 der H he 5 Sigma Breite W350 Breite bei 5 der H he Tailing Peakbreite wird f r den USP Tailingfaktor verwendet W500 Breite bei 50 der H he wahre Peakbreite bei halber H he oder 2 35 Sigma Detaillierte Informationen finden Sie in Abbildung 46 Kapazit tsfaktor USP Kapazit tsverh
15. Signal wird dann in Zonen aufgeteilt Innerhalb jeder Zone wird dann eine lineare Abweichung der aktuellen von der erwarteten Retentions bzw Migrationszeit ermittelt Der Algorithmus f r die Zeitkorrektur kann scheitern wenn die Retentionszeiten der Referenzpeaks zu eng zusammen liegen und nicht ber den gesamten Analysenlauf verteilt sind 155 Abbildung 31 Peak Identification Peakerkennung Peakqualifier Peakqualifier Viele Komponenten k nnen mit mehreren Signalen detektiert werden Grunds tzlich ist diese Methode auf alle Arten der Chromatographie anwendbar die mit mehreren Detektoren arbeiten oder mit Detektoren die ber mehrere Signalausg nge verf gen Sie wird aber haupts chlich in der LC mit Multiwellenl ngendetektoren oder Dioden Array Detektoren eingesetzt Diese Detektoren werden normalerweise so eingestellt da eine Wellenl nge nahe der maximalen Absorption des Hauptpeaks in der Kalibriertabelle eingesetzt wird In Abbildung 31 ist das 4 Die beiden anderen detektierten Wellenl ngen k nnen zur Best tigung des Peaks dienen In Abbildung 31 sind dies A und Aa Peakqualifier A Wellenl nge des Hauptpeaks Response R Wellenl nge eines Peakqualifiers Ra R3 A Ag Az gt Wellenl nge Peaks ohne Verunreinigungen weisen ein konstantes Verh ltnis des Response ber verschiedene Wellenl ngen auf Der Peakqualifier weist einen anteiligen Response des
16. he in eine Einheit die Sie durch die Wahl des Verfahrens festlegen k nnen 168 Quantifizierung Berechnungen mit externem Standard ESTD Berechnungen mit externem Standard ESTD Das ESTD Verfahren dient zur Quantifizierung wobei Standards und Proben unter identischen Bedingungen aufgenommen wurden Die Ergebnisse der unbekannten Proben werden mit der Kalibriertabelle verglichen und damit die Menge der unbekannten Probe errechnet Das ESTD Verfahren verwendet absolute Responsefaktoren und unterscheidet sich damit vom ISTD Verfahren Die Responsefaktoren werden in einer Kalibrierung gewonnen und gespeichert In den nachfolgenden Probenl ufen werden die Substanzmengen durch Anwendung dieser Responsefaktoren auf die gemessenen Mengen errechnet Bei Verfahren dieses Typs mu beachtet werden da die injizierte Probenmenge von einem Lauf zum n chsten reproduzierbar sein mu da in der Probe kein Standard enthalten ist der Abweichungen des Injektionsvolumens oder aus der Probenvorbereitung korrigiert Bei der Erstellung eines ESTD Reports erfolgt die Berechnung der Menge einer bestimmten Substanz in der unbekannten Probe in zwei Schritten 1 F r diese Substanz wird eine passende Kalibrierkurve errechnet die in den Dialogfeldern Calibration Settings oder Calibration Curve gew hlt wurde 2 Die Substanzmenge der Substanz in der unbekannten Probe wird mit der unten beschriebenen Formel berechnet Diese Menge kann
17. igen Abst nden Kalibrierl sung aus demselben Probenfl schchen Das Intervall in der Sequenztabelle legt fest wie oft die Rekalibrierung durchgef hrt wird Ein Intervall von 2 f hrt zu einer Rekalibrierung nach jeweils zwei vermessenen Proben der Sequenz 218 Automatisierung Zyklische Kalibriersequenzen mit mehrerer Kalibrierpunkte Zyklische Kalibriersequenzen mit mehrerer Kalibrierpunkte Dieser Sequenztyp benutzt mehrereKalibrierproben zur Rekalibrierung einer Mehrpunktkalibriermethode Das folgende Beispiel beschreibt eine Sequenz die aus den beiden Methoden A und B zur Kalibrierung zweier verschiedener Probengruppen besteht Beide Methoden sind Mehrpunktkalibrierungen die in definierten Intervallen automatisch rekalibriert werden lt 1 gt F r jede Methode existieren drei Eintr ge in der Sequenztabelle e Zwei Kalibrierpunkte Sequenzzeilen 1 und 2 in Methode A Sequenzzeilen 8 und 9 in Methode B e F nf Eintr ge f r Proben Sequenzzeilen 3 bis 7 f r Methode A Sequenzzeilen 10 bis 14 f r Methode B Die Angabe der regelm igen Intervalle erfolgt durch Eintr ge unter Recalibration Interval in der Rekalibriertabelle der Sequenz e Methode A wird nach der Vermessung von jeweils 2 Proben rekalibriert e Methode B wird nach der Vermessung von jeweils 3 Proben rekalibriert Die unten aufgef hrte Sequenztabelle ist zur Vereinfachung des Beispiels verk rzt Tabelle 11 Sequenztabelle f r M
18. ltnis ASTM kK RT er mit Tr Retentionszeit des Peaks min To Nullzeit min Peaktailing nach USP t z t 5 N Ww wobei tw Abstand in min zwischen der Peakfront und Tp gemessen bei 5 der Peakh he siehe Abbildung 46 W o Peakbreite bei 5 der Peakh he min 274 Ermittlung der Systemleistung Definitionen des Leistungstests Abbildung 46 Leistungsparameter Basislinie l Zeit Anzahl der theoretischen Trennstufen der S ule USP ASTM n Tangentenmethode USP ASTM Taya n Wg wobei Wp Basisbreite min siehe Abbildung 46 auf Seite 275 Methode unter Verwendung der Halbwertsbreite ASTM T s2 n 5 sa 5 50 wobei W o Peakbreite bei halber H he min siehe Abbildung 46 auf Seite 275 275 Ermittlung der Systemleistung Definitionen des Leistungstests Methode unter Verwendung von 5Sigma T 2 n 2 W44 wobei W44 Peakbreite bei 4 4 der Peakh he min Methode unter Verwendung der Varianz MI n M2 wobei Mx x th statistischer Moment Siehe auch Statistische Momenteauf Seite 272 Anzahl der theoretischen Trennb den pro Meter N 1 m n N 100 wobei n Anzahl theoretischer B den l S ulenl nge cm Relative Retention USP ASTM Selektivit t Alpha Bezogen auf zwei Peaks a und b mit Tg des Peaks a lt Tg des Peaks b k b 7 a alpha alpha gt 1 mit K
19. ngigen Auditoren akzeptiert werden Die statistischen Daten umfassen e Retentionszeiten der Peaks e Peakfl chen e Berechnete Mengen e Peakh he 262 Ermittlung der Systemleistung e Peakbreite in halber H he e Peaksymmetrie e Peaktailing e Kapazit tsfaktoren k e Anzahl theoretischer Trennstufen e Aufl sung zwischen Peaks e Selektivit t relativ zu einem vorausgegangenen Peak e Verzerrung e berschu Der Mittelwert die Standardabweichung die relative Standardabweichung und die Konfidenzintervalle werden berechnet Sie k nnen Grenzwerte entweder f r die Standardabweichung die relative Standardabweichung oder die Konfidenzintervalle dieser Parameter angeben Sollten die Werte die vorgegebenen Grenzwerte berschreiten werden entsprechende Anmerkungen zur besonderen Beachtung im Report aufgenommen Die Qualit t der analytischen Daten kann mit Aufzeichnungen der Me bedingungen zum Analysenzeitpunkt belegt werden Die ChemStation tr gt die apparativen Bedingungen vor und nach einem Analysenlauf in ein Logbuch ein Diese Informationen werden zusammen mit den Daten gespeichert und in Reports aufgenommen Daten zur Beschreibung der Ger teleistung werden w hrend des gesamten Analysenlaufes aufgezeichnet und im Datensatz gespeichert Diese Ger tedaten k nnen wenn vom Analysenger t unterst tzt dem Chromatogramm bzw Elektropherogramm unterlegt werden und bei Bedarf zum Beispiel einem Audit abgerufen werden
20. 011 0301 012 0301 c1 03003 c1 03004 c2 03003 c2 03004 013 0301 014 0301 c1 03005 c1 03006 c2 03005 c2 03006 013 0301 014 0301 c1 03005 c1 03006 c2 03005 c2 03006 anpanannannaadaana mannana aaaarnagQa DOHH DOHH Nyer Upd Upd RE Ret R R A R R R A R A R A R A R A R R A R A A R A R A R A R R A R A Where A R Report for Calibration Run No Report for Calibration Run No Report for Calibration Run No Report for Calibration Run No Print Calibration Table Sample Analysis no report Sample Analysis no report Sample Analysis no report Calibration Analysis no Calibration Analysis no Calibration Analysis no Calibration Analysis no Print Calibration Table Report for Sample Run No Report for Sample Run No Report for Sample Run No Report for Calibration Run No Report for Calibration Run No Report for Calibration Run No Report for Calibration Run No report report report report Hrvosouo Ho Sample Analysis no report Sample Analysis no report Calibration Analysis no Calibration Analysis no Calibration Analysis no Calibration Analysis no Print Calibration Table Report for Sample Run No Report for Sample Run No report report report report 12 13 Report for Calibration Run No 14 Report for Calibration Run No 15 Report for Calibration Run No 16 Report for Calibration Run No 17 Mittelwert Average Ersetzten Repla
21. 1 Brkt Brkt 1 4 Cal1d Calib Methode A 1 1 Brkt Brkt 1 10 Sample10 Sample Methode A 11 Sample11 Sample Methode A 12 Sample12 Sample Methode A Die Sequenz wird in folgender Reihenfolge durchgef hrt e Probenfl schchen 1 Calla Kalibrierlauf vor dem 1 Probensatz e Probenfl schchen 10 Probe 10 e Probenfl schchen 2 Callb Kalibrierlauf nach dem 1 und vor dem 2 Probensatz e Probenfl schchen 11 Probe 11 e Probenfl schchen 3 Callc Kalibrierlauf nach dem 2 und vor dem 3 Probensatz e Probenfl schchen 12 Probe 12 e Probenfl schchen 4 Calld Kalibrierlauf nach dem 3 Probensatz 233 Automatisierung Zyklische Rekalibriersequenzen mit mehreren Probenfl schchen die dieselbe Standardverd nnung enthalten 234 11 Batch Review Batch Review In diesem Kapitel werden folgende Themen behandelt e Was versteht man unter Batch Review e Batch Konfiguration e Funktionen f r den Review e Batch Reports 236 Batch Review Was versteht man unter Batch Review Was versteht man unter Batch Review Unter Batch Review versteht man die M glichkeit schnell einen ersten berblick ber die Ergebnisse einer Sequenz oder einer Auswahl von Analysenl ufen zu erhalten Dies ist vor allem bei gro en Probenzahlen sehr zeitsparend Immer wenn eine Sequenz ausgef hrt wird wird automatisch eine Batch Datei mit der Dateinamenwerweiterung b erstellt und mit den Datens tzen im Date
22. 50 Parameter f r die Datenauswertung 50 Microsoft Excel Datei 241 Mindesth he 134 Mittelwert average 214 Monitor f r Signale 62 Ger testatus 65 Multiplikationsfaktor 165 170 N Name einer Sequenzdatei 209 negative Peaks 104 145 negativer Peak 84 125 neuer HP Integrator Anwendung 140 Nicht zugeordnete Peaks 130 nicht zugeordnete Peaks 125 nicht linear Kurvenanpassung 187 No Update 213 Norm Berechnung 171 Report 171 248 Normalisierungsfaktor 172 Not Ready Timeout 211 Nullprobe Analysenlauf 209 Nullzeit 271 o Online Monitore 62 Online Hilfe 34 P Parameter Anfangs 91 arten 91 Integrations 91 zeitprogrammierbare 97 partielle Rekalibrierung 195 pausieren einer Sequenz 205 Peak Algorithmus f r Maximum 121 anfang 80 113 Ausschlu kriterien 94 breite 91 117 B ndeln 119 Codes zur Trennung 84 125 Durchf hrung der Identifizierung 159 ende 80 113 Erkennung 79 erkennung 117 Fl chenberechnung 131 h he 167 Identifizierung 53 149 Integration 77 Kr mmung 80 L sungsmittel 86 maximum 113 parameter 91 Qualifier 150 151 qualifier 156 Quantifizierung 53 163 Regeln zur bereinstimmung 150 Response 156 Retentionszeit 154 Retentionszeitfenster 153 schulter 81 Steigung 80 berlappend 81 Peakbreite 274 2 35 Sigma 274 4 4 der H he 274 5 Sigma Breite 274 ausw hlen 135 Bas
23. A Wavelength 254 nm of NV 0019 D ChemStation Verification Test Results Test Module Selected For Test Test Result Digital electronics test No N A Integration test yes Pass Quantification test yes Pass Print Analytical Report No N A ChemStation Verification Test Overall Results Pass Darstellungen f r berpr fungen und Fehlererkennungen Die ChemsStation bietet zur Durchf hrung von berpr fungen und Fehlererkennungen zwei zus tzliche Darstellungen wenn dies vom konfigurierten Ger t unterst tzt wird wie z B den LC Modulen der Serie Agilent 1100 Weitere Informationen dazu finden Sie in der Online Hilfe und im Handbuch Performance Verification 290 berpr fung des Systems Das Register GLPsave Das Register GLPsave Das Register GLPsave wird am Ende jeder Analyse gespeichert wenn diese Option in der Runtime Checkliste angew hlt ist Es enth lt folgende Informationen e die Signale e das Logbuch e die Tabelle mit den Integrationsergebnissen e die Tabelle mit den Quantifizierungsergebnissen e Daten zur Ger tefunktion e die Methode zur Datenauswertung Dieses Register ist eine vollst ndige gesch tzte Aufnahme die beim Analysenlauf erstellt wird Sie k nnen es jederzeit aufrufen wenn Sie einmal Ihre Analysenmethode berpr fen wollen Die Option GLPsave Register unter Data Analysis erm glicht es Ihnen die Daten im Register GLPsave jederzeit einzusehen Die entsprech
24. Basislinie und besagen da das Signal den linearen Bereich des Detektors berschritten hat e Wenn ein Peak in einem nachfolgenden Tal endet der folgende Peak aber die Vorgabe des Wertes f r Area Reject Mindestfl che nicht erreicht wird die Basislinie vom Anfang des Peaks zum n chsten gefundenen Basislinienpunkt gem Punkt 3 in Abbildung 7 gezogen Bei einem Peakstart unter denselben Umst nden wird dieselbe Regel angewandt e Zur verbesserten Behandlung von Peaks mit Tailing werden die Zeiten registriert in welchen der Peak die Kriterien f r Anstieg und Abfall berschreitet und es wird ein Viertel dieser Zeit am Peakende zu diesem Peak addiert vgl Punkt 4 in Abbildung 7 Schneiden der Basislinie Ein Schnittpunkt tritt auf wenn das Signal unter die konstruierte Basislinie f llt Wenn ein Schnittpunkt mit der Basislinie vorliegt wird dieser Teil der Basislinie neu festgelegt Unterschreiten der Basislinie urspr ng Basislinie Korrektur f r das Schneiden Tangentiale Anpassung Tangentiale Anpassung ist eine M glichkeit der Basislinienkonstruktion f r Peaks die auf der abfallenden Flanke eines L sungsmittelpeaks erscheinen Der Integrator legt die Tangente durch den Talpunkt vor dem aufgesetzten Peak zum Tangentenpunkt nach dem aufgesetzten Peak wo die Steigung des Signals gleich der Steigung der Tangenten ist 86 Der Standardintegrationsalgorithmus Codes zur Beschreibung der Pe
25. Beschreibung einer speziellen Trennung Sie enth lt alle Parameter zur Ger testeuerung der Datenerfassung und Auswertung einschlie lich Integration Quantifizierung und Reporterstellung Das System kann so konfiguriert werden da es Daten von verschiedenen Proben mit verschiedenen Methoden aufnimmt Die Steuerdatei f r eine solche Folge hei t Sequenz und enth lt Informationen zu den einzelnen Proben Sie greift auf die geeigneten Methoden und die Angaben zur Rekalibrierung zu Weitere Informationen zu Methoden und Sequenzen entnehmen Sie bitte KapitellO Automatisierung und dem Online Hilfesystem Systemkonfiguration Die Konfiguration eines Analysenger tes erfolgt mit Hilfe des Konfigurationsprogrammes Es erm glicht Ihnen die Definition Ihres Analysenger tes dessen GPIB oder LAN Adressen die Verzeichnisse zur Speicherung von Daten Sequenzen Methoden und Farbdefinitionen der ChemsStation Software Weitere Informationen entnehmen Sie bitte dem Handbuch das mit Ihren zus tzlichen ChemStation Modulen mitgeliefert wurde Datenmodell Das Datensystem der ChemsStation basiert auf bestimmten Speicherstrukturen die als Register bezeichnet werden Register sind zweckm ige Strukturen die analystische Daten und Informationen zweidimensional z B mit Zeit und Intensit tsachse und dreidimensional z B mit Zeit Intensit ts und Wellenl ngenachse ablegen k nnen Mittels 17 ChemStation Konzepte Zur ChemStation
26. Bestimmen Sie ber die Anzahl der Kalibrierungen innerhalb einer Sequenz die Menge an Kalibrierfl schchen f r jede Stufe Legen Sie f r jedes Kalibrierfl schchen eine gesonderte Zeile f r die zyklische Rekalibrierung an Informationen f r dieselbe Kalibrierstufe m ssen in angrenzenden Zeilen der Sequenztabelle stehen und auch die festgelegten Positionen der Kalibrierfl schchen m ssen nebeneinander liegen W hlen Sie f r alle Kalibrierzeilen identische Intervalle f r die Rekalibrierung Wenn Ihre Sequenz beispielsweise alle 6 Probeninjektionen eine Kalibrierung durchf hren soll m ssen Sie das Rekalibrierintervall auf 6 stellen Die Proben werden in folgender Reihenfolge abgearbeitet e Probenfl schchen 1 Calla 230 Automatisierung Zyklische Rekalibriersequenzen mit mehreren Probenfl schchen die dieselbe Standardverd nnung enthalten Tabelle 17 Zyklische Rekalibriersequenz mit drei Fl schchen f r jede Kalibrierstufe Vial No Sample Name Sample Type Method Name No ofin Lvi UpdRT UpdRF Intervall 1 Calla Calib Methode A 1 1 Avg Avg 6 2 Cal1b Calib Methode A 1 1 Avg Avg 6 3 Callc Calib Methode A 1 Avg Avg 6 5 Cal2a Calib Methode A 2 Ag Avg 6 6 Cal2b Calib Methode A 2 Ag Avg 6 7 Cal2c Calib Methode A 2 Ag Avg 6 10 Sample10 Sample Methode A 6 11 Sample11 Sample Methode A 6 12 Sample12 Sample Methode A 6 13 Sample13 Sample Methode A 6 14 Sample14 Sample Methode A 6 Probenfl schchen 5
27. Die Art der Methodenerstellung ist frei w hlbar Sie k nnen eine Methode erstellen die entweder einen oder alle Teile einer Analyse steuert Sie k nnen also eine Methode zum Beispiel nur f r die Datenerfassung erstellen F r die Datenauswertung mit Report zur Bibliothekssuche von Spektren k nnen Sie die Methode dann um diese Aufgaben erweitern L schen Sie nicht die Standardmethoden DEF_LC M DEF_CE M oder DEF_GC M Diese Methoden dienen bei der Erstellung neuer Methoden als Vorlagen 47 Methoden Editieren von Methoden Editieren von Methoden Sie k nnen eine existierende Methode editieren indem Sie den Men punkt Edit Entire Method im Men Method aufrufen Sie werden durch alle Dialogfelder gef hrt und schlie lich kann die Methode gespeichert werden Dieser Ablauf wird unten verdeutlicht Methode auf Festplatte Laden der Methode Methode wird in den Speicher geladen und wird zur aktuellen Methode Wahl von Edit Entire Method im Men Method Editieren der Methode Speichern der Methode Speichern unter neuem Namen Speichern unter selbem Namen Erstellt eine neue Methode berscheibt aktuelle auf Festplatte Methode Editierbare Methodenteile Jede Methode besteht aus f nf Komponenten die separat editierbar sind Es folgen nun Abschnitte die sich auf bestimmte Dialogfelder beziehen sowie allgemeine Beschreibungen e die Methodeninformation besteht aus 48 Methoden Editieren von Methode
28. Die M glichkeiten der ChemStation zur berpr fung nach GLP sind so ausgelegt da Ihnen folgende Hilfen zur Verf gung stehen berpr fung korrekter Funktionsweise der Software oder wichtiger Softwarekomponenten zum jetzigen Zeitpunkt oder zum Zeitpunkt einer bestimmten Analyse Die Funktion zur berpr fung der ChemStation erm glicht Ihnen die berpr fung der korrekten Funktion Ihrer ChemStation Software Sie k nnen dies durch Nachbearbeitung Ihrer Datens tze mit speziellen Methoden erreichen und die Ergebnisse mit definierten Standards vergleichen Die berpr fung ist besonders wichtig zur Sicherstellung der Zuverl ssigkeit der Daten aus Integration und Quantifizierung Sie k nnen den Standard Test zur berpr fung verwenden oder Ihre eigenen Tests mit unterschiedlichen Methoden und Datens tzen definieren um die Kombinationen der bei Ihrer Methode verwendeten Rechensoftware zu pr fen Der berpr fungstest ist eine gesch tzte Datei die nicht ge ndert oder gel scht weden kann Der Befehl Verification unter Data Analysis erm glicht es Ihnen eine der folgenden Optionen auszuw hlen e Durchf hrung einer berpr fung aus der Datenbank e Definition eines neuen Verfahrens f r eine berpr fung und Hinzuf gen zur Datenbank e L schen einer berpr fung aus der Datenbank Im Abschnitt How To des Online Hilfe Systems wird beschrieben wie diese Aufgaben durchgef hrt werden k nnen W hrend eine
29. Ergebnissen in Textform und Kalibrierkurven Der Kopfteil stammt aus der Datei RPTHEAD TXT im Methodenverzeichnis Sie k nnen den Kopfteil mit einem Texteditor an Ihre Methode anpassen Header Short Kopfteil Kurz Besteht aus Kopfteil und quantitativen Ergebnissen Der Kopfteil stammt aus der Datei RPTHEAD TXT im Methodenverzeichnis Sie k nnen den Kopfteil mit einem Texteditor an Ihre Methode anpassen GLP Short GLP Kurz besteht aus Kopfteil Probeninformation apparativen Bedingungen Logbuch Signal und quantitativen Ergebnissen Der Kopfteil stammt aus der Datei RPTHEAD TXT im Methodenverzeichnis Sie k nnen den Kopfteil mit einem Texteditor an Ihre Methode anpassen GLP Detail GLP Genau besteht aus Kopfteil Probeninformation apparativen Bedingungen Logbuch Signal Kalibrierkurven und quantitativen Ergebnissen Der Kopfteil stammt aus der Datei RPTHEAD TXT im Methodenverzeichnis Sie k nnen den Kopfteil mit einem Texteditor an Ihre Methode anpassen Full Vollst ndig besteht aus Kopfteil Probeninformation apparativen Bedingungen Logbuch Signale und quantitativen Ergebnissen Der Kopfteil stammt aus der Datei RPTHEAD TXT im Methodenverzeichnis Sie k nnen den Kopfteil mit einem Texteditor an Ihre Methode anpassen Performance Systemleistung produziert einen Report gem der Grenzen aus dem Dialogfeld Edit Performance Limits aus dem Men 250 Verwendung der ChemStation Reports Reportvorlag
30. Hauptpeaks auf Die akzeptierten Grenzen des Response Bereiches k nnen in der Kalibriertabelle eingestellt werden wenn die Option Identification Details angew hlt ist Wenn das Verh ltnis zwischen dem Hauptpeak und einem Peakqualifier zum Beispiel g innerhalb vorgegebener Grenzen liegt wird die Peakidentit t best tigt 156 Peak Identification Peakerkennung Peakqualifier Signalkorrelation Unter Signalkorrelation versteht man da zwei Peaks die von unterschiedlichen Detektoren innerhalb eines bestimmten Zeitfensters gemessen wurden derselben Substanz zugeordnet werden Das Fenster f r die Signalkorrelation kann ber den Parameter SignalCorrWin der Tabelle QuantParm innerhalb des _DaMethod Registers festgelegt werden Wenn das Fenster f r die Signalkorrelation auf 0 0 gestellt ist ist die Signalkorrelation ausgeschaltet weitere Informationen finden Sie im Macro Programming Guide Wenn die Signalkorrelation ausgeschaltet ist werden Peaks die zur selben Retentionszeit in zwei unterschiedlichen Detektoren erfa t werden als unterschiedliche Substanzen behandelt Standardm ig ist das Fenster f r die Signalkorrelation f r LC LC MS und CE Daten auf 0 03 Minuten und f r GC Daten auf 0 0 Minuten eingestellt berpr fung der Qualifier Wenn die Signalkorrelation eingeschaltet ist werden standardm ig die Qualifier f r alle Arten von Datendateien berpr ft Diese Option kann abgestellt werden
31. ISTD eliminiert die Nachteile des ESTD Verfahrens durch Hinzuf gen einer bekannten Menge einer Substanz in die Proben Diese Substanz der interne Standard wird sowohl zu Kalibrier als auch zu unbekannten Proben gegeben Die Software verwendet die entsprechenden Responsefaktoren aus der in der Methode gespeicherten Kalibrierung Mit der Konzentration des internen Standards und den Peakfl chen oder Peakh hen des Analysenlaufes berechnet die Software die Konzentration unbekannter Substanzen Die Substanz die als interner Standard eingesetzt wird sollte ein hnliches Verhalten wie die brigen Substanzen haben sowohl chemisch als auch in der Retentions bzw Migrationszeit mu aber chromatographisch oder elektrophoretisch klar unterscheidbar sein Das ISTD Verfahren Vorteile Nachteile Variierende Probenmengen sind nicht Der interen Standard mu jeder Probe kritisch beigemengt werden Drift des Analysenger tes wird durch internen Standard kompensiert Verluste in der Probenvorbereitung werden minimiert wenn das chemische Verhalten von ISTD und Probe hnlich ist Wenn das ISTD Verfahren f r Kalibrierungen mit nicht linearer Charakteristik verwendet wird mu sichergestellt werden da die Rechenmethode keine systematischen Fehler erzeugt Bei Mehrpunktkalibrierungen mu die Menge des internen Standards konstant gehalten werden das heifst in jedem Kalibrierlevel ist dieselbe Menge enthalten 172 Abbildu
32. Kr mmung ber die zweite Ableitung bestimmt Der Anfangswert der Basislinie der zu Beginn der Analyse festgelegt wurde wird dann immer wieder neu bestimmt wobei das Bestimmungsintervall von der Peakbreite abh ngt Der Wert f r die Basislinie ergibt sich dann aus dem sich ndernden Mittelwert der Datenpunkte die ber einen von der Peakbreite abh ngigen Zeitraum innerhalb des Basislinienbereiches liegen 112 Abbildung 16 Der neue Integrationsalgorithmus Funktion des verbesserten Integrators Der Integrator verfolgt den Lauf der Basislinie und legt ihren Wert periodisch neu fest um ein m gliches Abdriften der Basislinie zu kompensieren bis ein Peakanstieg wie in Abbildung 16 dargestellt erkannt wird Basislinienbestimmung Der Integrator bestimmt w hrend der Analyse die chromatographische Basislinie in regelm igen Abst nden neu Der Wert f r die Peakbreite legt die H ufigkeit der Basislinienbestimmung fest Wenn der Integrator eine bestimmte Anzahl an Datenpunkten gemittelt hat legt er den Wert f r die Basislinie vom anf nglichen Wert auf den Wert des aktuellen Datenpunktes Der Integrator verfolgt den Basislinienverlauf ber den n chsten Datensatz und stellt den Wert f r die Basislinie erneut ein Dieser Vorgang wird solange fortgef hrt bis der Integrator den Startpunkt eines Peaks erkennt Basisinie Legende lt T gt Erwartete Peakbreite Anfangswert der Basislinie Startpunkt o Datanpunkt
33. Lauf nicht auf der Basislinie endet wird das Ende der Basislinie ber den letzten g ltigen Basislinienpunkt unter Ber cksichtigung des ermittelten Driftens berechnet 124 Der neue Integrationsalgorithmus Codes zur Beschreibung der Peaktrennung Codes zur Beschreibung der Peaktrennung In den Reports wird jedem Peak ein Code aus zwei Buchstaben zugeordnet der angibt wie die Basislinie konstruiert wurde Falls ein dritter Buchstabe angegeben ist gibt dieser Auskunft ber die Peakart Diese Codes werden bei den tabellarischen Ergebnisse in einer Spalte namens Type aufgef hrt Der erste Buchstabe beschreibt die Basislinie am Peakanfang der zweite die Basislinie am Peakende Codes f r die Peaktrennung Alle in den ChemsStation Reports verwendeten Codes sind in alphabetischer Reihenfolge aufgelistet A Die Peakintegration wurde abgebrochen Peakart Peakanfang oder Peakende auf der Basislinie Peakanfang oder Peakende auf horizontaler Basislinie Dies ist ein negativer Peak Peakart S zZ uT Peakanfang oder Peakende durch Schneiden der Basislinie S Der Integrator erkannte den Peak als L sungsmittelpeak Peakart T Der Peak begann oder endete w hrend die Funktion tangentiale Anpassung Tangent Skim gerade Linie eingeschaltet war Peakart U Markiert den Anfang oder das Ende eines nicht zugeordneten Peaks V Peakanfang oder Peakende durch Lotf llung von einem Talpunkt X Exponentiale tangentiale Peak
34. Rauschen keine Peaks gefunden werden und andererseits die chromatographische bzw elektrophoretische Information nicht verzerrt wird Bei einer zu geringen Einstellung der Peakbreite wird Rauschen als Peak interpretiert Die anf ngliche Peakbreite soll der Breite des schmalsten Peaks entsprechen Normalerweise nehmen die Peakbreiten in isokratischen bzw isothermen Analysenl ufen mit der Retentionszeit zu In solchen F llen k nnte es erforderlich sein die Peakbreite im Dialogfeld Integration Events f r einen Analysenlauf dieser Verbreiterung anzupassen Es k nnen auch breitere und schmalere Peaks gemischt auftreten Die Peakbreite kann im Dialogfeld Integration Events mit Peak Width Event zeitprogrammiert werden um erforderliche Anpassungen vorzunehmen Die Peakbreite wird w hrend der Integration automatisch aktualisiert wenn Peaks identifiziert werden Die Aktualisierung geschieht mit folgender Gewichtung 0 75 x existing peak width 0 25 x width of current peak Die Aktualisierung ist auf eine nderung von 25 beschr nkt Bei Verwendung eines zeitprogrammierten Integrationsparameters im Integrationsprozess wird die automatische Anpassung der Peakbreite deaktiviert 92 Der Standardintegrationsalgorithmus Integrationsparameter Peak Width Range Peakbreitenbereich Der Peakbreitenbereich ist ein Bereich innerhalb dessen ein Peak erkannt wird Ein Peak mit einer Breite oberhalb oder unterhalb dieser Grenze
35. Reports Zusammenfassende Reports werden am Ende einer automatischen Analysensequenz erstellt Es stehen verschiedene M glichkeiten von einer kurzen Zusammenfassung der gemessenen Proben bis zur genauen graphischen Auswertung von Reproduzierbarkeit oder Trendanalysen nach Benutzervorgaben zur Verf gung Diese Reports werden aus folgenden neun Informationsquellen zusammengestellt e Titelseite mit Informationen nach Anwendervorgaben e Ger tekonfiguration mit Revisionsnummern und Angaben zur analytischen S ule f r LC und CE Systeme e eine Liste der Proben Sequenz e ein Ausdruck des Logbuches mit Angaben zu den Proben und Dokumentationen zur Datenerfassung und auswertung sowie unerwarteten Ereignissen e ein Ausdruck der analytischen Methoden e Reports zu den einzelnen Proben e Statistische Angaben zu kalibrierten Proben e Statistische Angaben zu den Proben unbekannten Gehaltes und e Eine Zusammenfassung die entweder aus einer Zusammenfassung der Proben eine Zeile Information je Probe oder als kurze Substanztabelle in Erg nzung der Probenzusammenfassung ausgegeben wird Weitere Informationen zu Sequence Summary Reporting entnehmen Sie bitte der Online Hilfe und dem Abschnitt Sequence Summary Reporting auf Seite 256 25 ChemStation Konzepte Zur ChemStation Software Report Layout Im Men zur Erstellung angepa ter Reports der ChemStation k nnen Anwender den genauen Inhalt Ihrer eigenen Re
36. Skim oder Delete Peak s gew hlt e Die Basislinie kann nun gezeichnet werden indem die Maus mit gedr ckter linker Maustaste bewegt wird W hrend der Mausbewegung wird eine Linie vom Startpunkt bis zur aktuellen Position der Maus gezeichnet Im Falle von Delete Peak s wird ein Auswahlrechteck um die zu l schenden Peaks ge ffnet e Die graphische Eingabe kann in den zwei Modi Absolute das ist der Standardwert und Trace Verfolgen des Signals erfolgen In beiden F llen wird in der Mitteilungszeile die Zeit und die H he des Cursors angezeigt 104 Der Standardintegrationsalgorithmus Manuelle Integration e Im Modus Trace ist der Cursor ein abw rts weisender Pfeil und folgt dem Profil des Signals indem er sich von Datenpunkt zu Datenpunkt bewegt Sie k nnen den Trace Modus aktivieren wenn sich der Cursor am gew nschten Peakstart befindet indem Sie den rechten Mausknopf dr cken e Im Modus Absolute ist der Cursor ein Fadenkreuz und folgt dem Signal erlaubt jedoch eine Positionierung an jeder Stelle des Bildschirmes Sie k nnen von einem Modus in den anderen umschalten indem Sie den rechten Mausknopf dr cken e F r jeden manuell integrierten Peak werden die Fl chenwerte Area Counts zusammen mit der Retentions bzw Migrationszeit auf dem Bildschirm angezeigt Einf gen manueller Parameter in die Methode Der Befehl Copy Manual Events to Method im Men Integration erm glicht Ihnen das Einf g
37. auch zur Identifizierung verwendet Siehe Kapitel Peak Identification Peakerkennung Substanz Eine chemische Substanz kann bei einer Mehrfachsignalkalibrierung mehrere Peaks liefern normalerweise einen Peak pro Signal Bei einer Einfachsignalkalibrierung wird die Substanz nur auf einen Peak bezogen Kalibrierstufen Level Eine Kalibrierstufe enth lt die Kalibrierpunkte f r die Kalibrierung einer Probenkonzentration an Bei einer Mehrfachsignalkalibrierung k nnen die Kalibrierpunkte auf mehrere Signale verteilt sein Kalibrierpunkt Ein Kalibrierpunkt bezieht sich auf das Mengen Response Verh ltnis eines Peaks auf der Kalibrierkurve Kalibrierprobe Eine Kalibrierprobe auch Kalibrierstandard oder Standardmischung genannt ist eine Probe mit einem bekannten Gehalt der Substanz die quantifiziert werden soll In der Software wird die Kalibrierprobe als Injektion aus dem Kalibrierfl schchen bezeichnet Kalibrierproben sind bei den Anbietern von Feinchemikalien erh ltlich oder k nnen durch sorgf ltiges Verd nnen einer bekannten Menge eines reinen Stoffes hergestellt werden Die Menge des Stoffes in der Kalibrierprobe wird meist in Konzentrationseinheiten angegeben oft in der Einheit ng ml 179 Kalibrierung Kalibriertabelle Kalibriertabelle Eine Kalibriertabelle enth lt Umrechnungen von Peakfl chen oder Peakh hen in Einheiten die Sie selbst w hlen k nnen Sie enth lt eine Liste mit Retentions b
38. der ChemsStation zeigt eine Zusammenfassung des Status der ChemStation Software Wenn eine einzige Analyse l uft zeigt sie folgendes an e In der ersten Zeile des Statusfensters der ChemStation wird Run in Progress angezeigt e Inder zweiten Zeile des Statusfensters der ChemStation wird der aktuelle Status der Methode angezeigt e Inder dritten Zeile wird der Name des Rohdatensatzes zusammen mit der aktuellen Laufzeit angezeigt bei einem GC System werden auch Dateien f r Front und Back Injektor angezeigt Das Statusfenster des Analysenger tes bietet Informationen ber die Ger temodule und die Detektoren Sie zeigen den Status der einzelnen Komponenten und je nach System die aktuellen Bedingungen von zum Beispiel Druck Gradient oder Flu an Statuszeile Der graphische Anwenderzugriff des ChemStation Systems enth lt Symbolzeilen und eine Statuszeile in der Darstellung Method and Run Control der ChemStation Die Statuszeile enth lt den Systemstatus und Informationen ber die aktuelle Methode und Sequenz Wenn diese nach dem Laden ge ndert wurden sind sie mit einem roten Dreieck markiert Bei einem LC Modul der Agilent 1100 Serie macht ein gelbes EMF Symbol den Anwender darauf aufmerksam wenn Haltbarkeitsgrenzen von Vebrauchsmaterialien wie z B der Lampe berschritten wurden System bersicht Sie k nnen zu Ihrem ChemsStation System eine graphische Benutzeroberfl che aufrufen wenn diese Funktion v
39. der abfallenden Flanke des 129 Abbildung 25 Der neue Integrationsalgorithmus Codes zur Beschreibung der Peaktrennung L sungsmittelpeaks Area 2321 43 Basislinie k urspr ngliche Basislinie die zu einer punkt negativen Fl che f hrt neue Basislinie zur Tangente gef hrt Nicht zugeordnete Peaks Manche Basislinienf hrungen ergeben kleine Fl che zwischen der Basislinie und dem Signal die jedoch keinem bekannten Peak zugeordnet werden k nnen Normalerweise werden solche Fl chen weder gemessen noch im Report aufgef hrt Wenn die Funktion unassigned peaks eingeschaltet ist werden diese Fl chen mitgemessen und im Report als Unassigned Peaks nicht zugeordnete Peaks aufgef hrt Die Retentionszeit f r solche Fl chen ergibt sich aus dem Mittelpunkt zwischen Anfang und Ende der Fl che siehe Abbildung 25 Nicht zugeordnete Peaks 130 Abbildung 26 Der neue Integrationsalgorithmus Berechnung der Peakfl che Berechnung der Peakfl che Der letzte Schritt einer Integration besteht aus der Bestimmung der Peakfl che W hrend einer Analyse werden die Fl chen unter der Basislinie aufsummiert und gespeichert Die Peakfl chen werden ber die Daten aus den Kardinalpunktdateien berechnet Die Kardinalpunkte sind die Punkte die der Integrator ausw hlt um einen Peak zu definieren und zu quantifizieren Sie bestehen aus den Basislinienpunkten den Talpunkten dem Peakmaximum und den Punkt
40. des Detektorresponse in Abh ngigkeit von der Konzentration zu ber cksichtigen und die Reponsefaktoren daf r zu berechnen Diese Mehrpunktkalibrierkurve hat drei Kalibrierpunkte und eine lineare Kurvenanpassung die durch den Koordinatenursprung verl uft Eine solche lineare Anpassung hnelt der Einpunktkalibrierung insofern als ebenfalls ein lineares Verh ltnis zwischen Detektorresponse und Konzentration angenommen wird Der Unterschied besteht darin da die Geradensteigung durch die beste Anpassung an die Kalibrierpunkte erhalten wird 185 Abbildung 37 Tabelle 9 Kalibrierung Kalibrierverfahren Mehrpunktkalibrierkurve mit drei Kalibrierpunkten Response 10007 Kalibrierkurve 500 F 100 l l J 1 5 10 Menge ng ul Die zugeh rige Kalibriertabelle die tabellarische Zusammenstellung der Kalibrierdaten wird in Tabelle 9 dargestellt Kalibriertabelle Kalibrier stufe Menge ng ml Response Fl cheneinheiten 2 5 500 3 10 1000 In diesem Beispiel wurden die Kalibrierproben zur Erzeugung der drei Kalibrierpunkte mit 1 2 und 3 bezeichnet Kalibrierbereiche Jede Mehrpunktkalibrierung ist ber den Konzentrationsbereich g ltig der durch die Kalibrierproben vorgegeben wurde Eine Extrapolation der Kalibrierkurve besonders im nichtlinearen Fall ist bestenfalls eine N herung Der g ltige Konzentrationsbereich kann f r jede Substanz im Dialogfeld Compound Details definier
41. e Aktueller Wert O0000000000000000000000000000000000000000 124 1212 19 19 1090 21 2T Einstellung der T Basislinie 21 Erkennen von Peakanfang ende und maximum Der Integrator erkennt einen eventuellen Peakanfang daran da m gliche Basislinienpunkte au erhalb des Basislinienbereiches liegen und die Kr mmung der Basislinie einen durch den Integrationsparameter slope sensitivity Steigungsempfindlichkeit bestimmten Wert berschreitet Wird diese Bedingung weiterhin erf llt erkennt der Integrator definitiv da er sich auf einem Peakanstieg befindet und der Peak wird nach folgendem Schema behandelt Siehe Abbildung 17 Peakanfang 113 Abbildung 17 Der neue Integrationsalgorithmus Funktion des verbesserten Integrators 1 Steigung und Kr mmung unter Schwellenwert Basislinie pr fen Steigung und Kr mmung ber Schwellenwert M glichkeit eines Peaks Steigung bleibt ber Schwellenwert Peak erkannt Kardinalpunkt festgelegt 4 Kr mmung wird negativ Wendepunkt der Anstiegsflanke Peakmaximum 5 Steigung wird negativ Peakmaximum Kardinalpunkt festgelegt 6 Kr mmung wird positiv Wendepunkt der Abstiegsflanke Peakende 7 Steigung und Kr mmung unter Schwellenwert Peakende erreicht 8 Steigung und Kr mmung unter Schwellenwert Peakende erreicht Kardinalpunkt festgelgegt 9 Integrator kehrt in den Modus zur Basislinienauswertung zur c
42. einem Logbuch des Systems abgelegt ein Auszug wird in jedem Datensatz gespeichert Ger tebedingungen wie Flu rate Temperatur Druck und die L sungsmittelzusammensetzung von LC Systemen k nnen aufgezeichnet und in jedem Datensatz gespeichert werden Diese Bedingungen k nnen angezeigt und als Beleg der Analysenqualit t ausgedruckt werden Genaue Einzelheiten der gespeicherten Parameter h ngen von der Methode und den M glichkeiten des gew hlten Analysenger tes ab Ein weiteres Darstellungsfenster kann dazu verwendet werden die vom Ger t aufgenommen Daten in einer Echzeit Anzeige anzugeben Die Daten werden in ihrer tats chlichen Me einheit wie mAU Volt oder bar angegeben Jedes der Fenster kann meherere bereinander gelegte Chromatographiesignale oder Ger teparameter wie z B den Druck enthalten Die Voreinstellung der Anzeige kann angepa t werden und wird vom System gespeichert so da der Anwender eine eigene bevorzugte Einstellung als Standardeinstellung f r das Ger t festsetzen kann Das Fenster ist zoomf hig und mit Hilfe des Cursors kann der Wert f r ein bestimmtes Signal zu jeder Zeit der Messung abgerufen werden Die gesamte Funktionalit t der ChemStation kann auch w hrend laufender Analysen durch eine Offline Session genutzt werden F r Anwender die mit der Datenauswertung beginnen wollen bevor die Datenerfassung abgeschlossen ist steht der Snapshot Befehl zur Verf gung Die Layouts der Signal und Status
43. f r Signale Der Online Monitor f r Signale erm glicht es Ihnen mehrere Signale und Aufzeichnungen der Ger teleistung wenn dies vom angeschlossenen Ger t her unterst tzt wird im selben Fenster darzustellen Sie k nnen bequem die gew nschten Signale ausw hlen um die Zeit und Intesit tsachse zu formatieren F r Detektoren die diese Funktion unterst tzen gibt es eine Ausgleichtaste Wenn Sie mit dem Cursor in die Darstellung gehen k nnen Sie den absoluten Signalresponse aus der Meldungszeile ablesen Online Monitor f r Spektren Den Online Monitor f r Spektren gibt es nur in Verbindung mit ChemsStations die Spektrenauswertungen unterst tzen Er zeigt eine Auftragung der Absorption als Funktion der Wellenl nge Sie k nnen sowohl den angezeigten Wellenl ngenbereich als auch die Absorptionsskala einstellen 62 Datenerfassung Logbuch Logbuch Das Logbuch zeigt Meldungen an die vom analytischen System erzeugt wurden Diese Meldungen k nnen Fehlermeldungen Systemmeldungen oder Ereignismeldungen aus einem Modul sein Das Logbuch zeichnet diese Ereignisse auf wobei es keine Rolle spielt ob die Meldungen auch auf dem Bildschirm angezeigt werden F r weitere Informationen zu einem Ereignis klicken Sie die entsprechende Zeile doppelt an um eine Beschreibung als Hilfstext aufzurufen 63 Datenerfassung Statusinformationen Statusinformationen Die Statusanzeige der ChemStation Das Statusfenster
44. fortgesetzt wie der Wert unter dem vorgegebenen Schwellenwert Threshold liegt Bei berschreiten dieses Wertes kann ein Peakanfang vorliegen Wird der Wert weiter berschritten handelt es sich um die Anstiegsflanke eines Peaks Der Peak wird bearbeitet und der Integrator kehrt in den Modus zur Basislinienauswertung zur ck Der Prozess zur Erkennung eines positiven Peaks besteht aus folgenden Schritten siehe Abbildung 2 Steigung und Kr mmung unter Schwellenwert Basislinie pr fen Steigung und Kr mmung ber Schwellenwert M glichkeit eines Peaks Steigung bleibt ber Schwellenwert Peak erkannt Kr mmung wird negativ Wendepunkt der Anstiegsflanke 1 2 3 4 5 Steigung wird negativ Peakmaximum 6 Kr mmung wird positiv Wendepunkt der Abstiegsflanke 7 Steigung und Kr mmung unter Schwellenwert Peakende erreicht 8 Steigung und Kr mmung unter Schwellenwert Peakende erreicht Basis linie pr fen 79 Abbildung 2 Abbildung 3 Der Standardintegrationsalgorithmus Peakerkennung Kardinalpunkte Die Schritte 3 5 und 8 definieren die Kardinalpunkte die den Peakstart das Peakmaximum und das Peakende markieren Der Peak wird best tigt wenn die resultierende Peakbreite in halber Peakh he die Schwellenwerte erf llt die mit der Option Peakwidth Peakbreite im Dialogfeld Integration Events vorgegeben wurden Sie finden weitere Einzelheiten im Abschnitt Peakbreite Peak Width auf
45. im Report erscheinen oder zuvor durch Anwendung von Multiplikationsfaktor Verd nnungsfaktor oder Probenmenge weiter bearbeitet werden bevor sie im Report erscheint Die Formel des ESTD Verfahrens zur Berechnung einer Absolutmenge der Substanz x lautet Absolute Amt ofx Response RF M D Erl uterung Response ist der Response der Substanz im Peak x Amount RF ist der Responsefaktor der Substanz x gem RF Response 169 Quantifizierung Berechnungen mit externem Standard ESTD M ist der Multiplikationsfaktor D ist der Verd nnungsfaktor Response RF x Response x Menge x Menge Multiplikations und Verd nnungsfaktor werden den Dialogfeldern Calibration Settings oder Sample Information entnommen Wenn der Report ESTD Report gew hlt wird und die Probenmenge nicht Null ist wird der relative Anteil in einer Substanz mit der unten gezeigten Formel berechnet Absolute Amt of x 100 Sample Amount Relative Amt of x Erl uterung Absolute Menge von x wird analog zur oben gezeigten ESTD Methode berechnet Probenmenge Sample Amount wird dem Feld Sample Information oder dem Dialogfeld Calibration Settings bei Einzelanalysen entnommen Wenn die Probenmenge Null ist wird der ESTD berechnet 170 Quantifizierung Berechnung von Norm Berechnung von Norm In der Normierungsmethode werden Responsefaktoren auf die Peakfl chen
46. ltnissen f r jeden Peak oder jede kalibrierte Komponente und einer Rauschtabelle f r jedes Signal Jede Rauschtabelle enth lt Werte aus der sechsfachen Standardabweichung des Rauschens dem Peak zu Peak Abstand nach ASTM Berechnungen sowie Angaben zu Abweichungen und Drift Die Reportvorlage Extended Performance zeigt von jedem einzelnen Peak eine Darstellung in der graphisch der Peakstart das Peakende die Halbwertbreiten und die Basislinie eingetragen sind Zus tzlich werden folgende Parameter angegeben e Fl che H he und berechnete Substanzmenge e Verzerrung Skew e berschu Excess e Tailingfaktor nach der USP Methode e Zeitintervall zwischen den Datenpunkten und Anzahl der Datenpunkte im Peak e Die Statistischen Momente MO bis M4 e Peakbreite in halber H he wahrer Wert Berechnung mit f nf Sigma Tangenten und Tailingmethode 24 ChemStation Konzepte Zur ChemStation Software e Anzahl theoretischer Trennb den pro S ule und pro Meter berechnet mit der Halbwertbreite des Peaks f nf Sigma Tangenten und statistischen Methode Anwender k nnen eigene Bereiche zur Berechnung der Rauschh he und eigene Akzeptanzkriterien angeben Werte au erhalb des Anwender definierten Akzeptanzbereiches werden im Report markiert Weitere Informationen zur Berechnung der Systemeignung entnehmen Sie bitte Kapitell3 Ermittlung der Systemleistung Zusammenfassende Reports einer Sequenz Sequence Summary
47. neue Integrator kann eine schlechte Chromatographie zwar nicht ausgleichen aber er kann Rauschen Driften oder eine unvollst ndige Peaktrennung besser ausgleichen und somit f r schwierige Chromatogramme reproduzierbare Ergebnisse erzielen 115 Der neue Integrationsalgorithmus Mehr ber den neuen Integrator Mehr ber den neuen Integrator Nun soll genauer betrachtet werden wie der Integrator den Peakanfang das Peakmaximum und das Peakende erkennt wie er die Kardinalpunkte f r die Basislinienbestimmung festlegt und wie die Fl chen berechnet werden Der Integrationsprozess besteht aus folgenden Schritten e Peakerkennung Definition der Kardinalpunkte e Basislinienbestimmung e Berechnung der Peakfl che 116 Der neue Integrationsalgorithmus Peakerkennung Peakerkennung Der neue Integrator verwendet verschiedene Mittel um einen Peak zu erkennen e Peakbreite e Peakerkennungsfilter e B ndeln Bunching e Peakerkennungsalgorithmus e Algorithmus f r das Peakmaximum e Berechnungen zu Abweichungen von der Gau Kurve Tailing berlappende Peaks usw Peakbreite Die Voreinstellung der Peakbreite steuert die Selektivit t des Integrators in der Unterscheidung zwischen Peaks und Basislinienrauschen Um gute Leistungen zu erzielen mu die Peakbreite auf einen Wert eingestellt werden der der tats chlichen Breite der Chromatographiepeaks nahe kommt Die Peakbreite kann auf drei Arten ver nder
48. pro Probenfl schchen und nach Wunsch die Probenmenge Menge des internen Standards Multiplikations und Verd nnungsfaktor Das System f gt die erforderlichen Informationen f r jede Probe innerhalb dieses Bereiches in die Sequenztabelle ein Verwenden der Schaltfl che Append Line Wenn Sie eine leere Zeile an die Sequenz anh ngen wollen w hlen Sie die Schaltfl che Append Line an 203 Automatisierung Arbeiten mit Sequenzen Arbeiten mit Sequenzen Sequenzen werden im Men Sequence aufgerufen und erstellt Sequenzen werden in derselben Weise erstellt und gespeichert wie Methoden Beim Speichern einer Sequenz wird eine Datei mit der Erweiterung S abgelegt Wenn Sie die Sequenz erneut editieren oder laden wollen erfolgt der Zugriff mit Load Sequence im Men Sequence Vorzugsproben Priority Samples Eine aktuell laufende Sequenz kann nach Abschlu einer aktuell laufenden Methode unterbrochen werden Eine dazwischengeschobene Vorzugsprobe kann dann mit derselben oder einer anderen Methode vermessen werden Die Sequenz wird anschlie end mit derjenigen Probe fortgesetzt mit der die Sequenz auch ohne Unterbrechung weitergelaufen w re Durchf hrung von Sequenzen mit Kontrollproben Eine Probe kann im Feld Sample Type der Sequenztabelle als Kontrollprobe festgelegt werden Die Methode mit der diese Probe abgearbeitet wird mu eine Kalibriertabelle besitzen in der Grenzwerte f r
49. sein Dabei handelt es sich normalerweise um eine Gruppe gemischter Peaks wobei der erste Peak weit gr er ist als der Rest Eine einfache Lotf llung erg be dann eine zu gro e Fl che f r sp tere Peaks weil sie nur auf dem ersten Peak aufsitzen Durch Erzwingen der Erkennung des ersten Peaks als L sungsmittelpeak werden die restlichen Peaks durch tangentiale Anpassung integriert e Negative Peaks liegen unterhalb der Basislinie und haben wie in Abbildung 28 gezeigt eine positive Fl che 132 Der neue Integrationsalgorithmus Berechnung der Peakfl che Abbildung 28 Fl chenbestimmung bei negativen Peaks Totale Fl che Fl che unter der Basislinie Basislinien korrigierte F ee ng Be u R 4 in 1 T i ij o w Y 1 v Symmetrie Der neue Integrator behandelt die Peaksymmetrie auf folgende Weise e wenn die Berechnung der Peakbreite ber das Verh ltnis von Fl che H he erfolgt wird die Symmetrie ber das Verh ltnis von vorderer Fl che hinterer Fl che bestimmt die Berechnung erfolgt auch dann auf diese Weise wenn der vordere bzw der hintere Wendepunkt nicht bestimmt wurde ansonsten wird die Symmetrie entsprechend den Berechnungen des Standardintegrators bestimmt 133 Der neue Integrationsalgorithmus Integrationsparameter Integrationsparameter Der neue Integrator stellt dem Anwender Anfangsparameter und zeitprogrammierbare Parameter Even
50. sind der Schwellenwert und die Peakbreite Threshold Peak Width Die ChemStation erm glicht die Eingabe von Anfangswerten f r diese und andere Parameter Die Werte gelten f r den Beginn eines Signaldatensatzes In den meisten F llen gen gen diese Werte f r eine gute Integration des gesamten Signals Es k nnten jedoch F lle auftreten wo Sie die Integration mit einem Zeitprogramm durchf hren m chten Dies kann mit zeitprogrammierbaren Parametern der ChemsStation erreicht werden Sie finden weitere Informationen ber zeitabh ngige Parameter unter Integrationsparameter auf Seite 91 77 Der Standardintegrationsalgorithmus Funktionsweise der Integration Funktionsweise der Integration Der Integrationsprozess besteht aus folgenden Schritten e Peakerkennung Definition der Kardinalpunkte e Konstruktion der Basislinie e Berechnung der Peakfl che 78 Der Standardintegrationsalgorithmus Peakerkennung Peakerkennung Der erste Schritt der Integration ist die Peakerkennung die aus folgenden Teilen besteht e Erkennen des Peakanfangs e Definition des Peakmaximums e Erkennen des Peakendes Integration isolierter Peaks Der Integrator pr ft die digitalen Signaldaten mit der Annahme da der erste Punkt des Signals auf der Basislinie liegt Gleichzeitig wird ein der anf nglichen Peakhalbwertsbreite entspechender gleitender Durchschnitt berechnet und als Basislinie definiert Dieser Prozess wird solange
51. um die Integration zu optimieren Ausw hlen der Peakbreite Eine gute Einstellung der Peakbreite sollte Rauschen mindestens so gut ausfiltern da im Rauschen keine Peaks gefunden werden und andererseits die Informationen des Signals nicht verzerrt werden e Eine geeignete Voreinstellung f r die Peakbreite bei einem einzigen interessierenden Peak ist seine Breite in Zeiteinheiten als Basiswert e Eine geeigneten Voreinstellung f r die Peakbreite wenn der Lauf mehrere interessierende Peaks aufweist ist der Wert der der Breite des schmalsten 135 Der neue Integrationsalgorithmus Integrationsparameter Peaks entspricht Damit wird optimale Selektivit t erreicht Wenn die Voreinstellung f r die Peakbreite zu klein gew hlt wurde kann Rauschen als Peaks interpretiert werden Wenn breite und schmale Peaks vermischt auftreten k nnen Sie durch die Programmierung von zeitabh ngigen Parametern die Peakbreite f r bestimmte Peaks festlegen Manchmal k nnen die Peaks im Analysenverlauf deutlich breiter werden Diese Charakteristik ist typisch f r isothermische GC und isokratische LC Analysen Um dies auszugleichen vergibt der Integrator automatisch neue Werte f r die Peakbreite sowie die Peaks im Laufe einer Analyse breiter werden Er f hrt diese Funktion solange durch bis sie deaktiviert oder die Peakbreite durch einen zeitabh ngigen Parameter festgelegt wird Die neue Einstellung f r die Peakbreite wird folgenderma en gewi
52. und eventuelle Makros des Anwenders e Das Makro nach dem Analysenlauf Postrun Macro wird ausgef hrt e W hrend des gesamten Vorganges verfolgt die ChemStation den Fortschritt der Sequenz in Echtzeit und legt eine Logbuchdatei an Statusfolge einer Sequenz Post Run Makro Datenauswertung Injektion und Analysenlauf Pre Run Makro Laden d Methode Status der ChemStation Injektion Y Statusebenen Rohdaten geschlossene _ gt _ Start der Sequenz Datei _ 208 Automatisierung Vergabe von Dateinamen in einer Sequenz Vergabe von Dateinamen in einer Sequenz In einer Sequenz k nnen Dateinamen folgenderma en vergeben werden e automatisch e manuell e mit Prefix Z hler Sie sollten auf jeden Fall ein Unterverzeichnis angeben in dem die Datens tze gem Abschnitt Sequenzparameter auf Seite 201 gespeichert werden sollen Automatische Vergabe von Dateinamen in einer Sequenz Probenfl schchen Beispiel 017 0103 D mit e Die ersten drei Stellen nennen die Nummer des Probenfl schchens hier 017 e Die vierte Stelle ist bei LC und Elektrophorese ein Trennstrich In der Gaschromatographie erscheinen entweder F f r Front oder B f r Back o Inder f nften und sechsten Stelle steht die Zeilennummer der Sequenz die die verwendete Methode vorgibt hier 01 f r die erste Zeile der Sequenz e Inder siebten und achten Stelle stehen die Injektio
53. von Microsoft Windows NT 4 0 ausgelegt Die Software wird als Einzelger te ChemsStation in f nf Versionen verkauft Alle Versionen umfassen die Datenerfassung Ger testeuerung Datenauswertung Integration Quantifizierung und Reporterstellung sowie die Automatisierung und Anpassung eines Analysenger tes Jedes Ger temodul hat seinen eigenen Zeitablauf und kann dabei Daten simultan aus verschiedenen Detektoren aufzeichnen Die f nf Versionen sind eine Einzelger te ChemStation f r Gaschromatographiesysteme GC Bestellnummer G2070AA eine Einzelger te ChemsStation f r Fl ssigkeitschromatographie Systeme LC Bestellnummer G2170AA eine Einzelger te ChemsStation f r Fl ssigkeitschromatographie Systeme mit massenselektivem Detektor LC MSD Bestellnummer G2710AA eine Einzelger te ChemsStation f r Kapillarelektrophorese Systeme CE Bestellnummerr G1601A und eine Einzelger te A D ChemsStation f r f r die Erfassung von Analogdaten mit externer Ger testeuerung Bestellnummer G2072AA Die M glichkeiten zur Ger testeuerung mit der ChemStation Software k nnen durch den Erwerb zus tzlicher Ger temodule erweitert werden Dies erm glicht gemischte Konfigurationen mit mehreren Analysenger ten 13 ChemStation Konzepte Allgemeine Beschreibung Zus tzliche Ger temodule Folgende zus tzlichen Ger temodule stehen zur Verf gung e Zus tzliches Modul zur GC Steuerung und Datenaufnahme Bestellnummer G20
54. vorgestellt In dieser Version der Software empfiehlen wir den Einsatz des Standard Algorithmus f r bereits vorhandene validierte Methoden und des neuen Algorithmus f r neue Methoden 109 Der neue Integrationsalgorithmus Wie wird der neue Integrator an eine Konfiguration angepa t Wie wird der neue Integrator an eine Konfiguration angepa t Der neue Integrator wurde f r optimale Integration unterschiedlicher Analysensysteme LC GC CE entwickelt Zu diesem Zweck beinhaltet er e festgelegte Integrationsparameter und e ver nderbare Integrationsparameter Festgelegte Integrationsparameter Festgelegte Integrationsparameter k nnen nicht ber den normalen Benutzerzugriff ver ndert werden Die meisten dieser Parameter wurden von Agilent Technologies f r eine bestimmte Hardware Software Konfiguration festgelegt Allerdings werden einige davon ber Informationen aus den Methoden und Datens tzen bestimmt F r verschiedene chromatographische Systeme mu das Peakmaximum unterschiedlich berechnet werden Der neue Integrator berechnet z B das Peakmaximum ber eine der folgenden Methoden Er kann den h chsten Datenpunkt eine quadratische Anpassung den ersten Moment oder eine Gau anpassung verwenden Die geeignete Berechnungsart wird festgelegt um den Integrator f r die jeweilige Hardware Detektor S ulenart usw und die Anwendung zu optimieren Wir haben die Berechnung des Peakmaximums gew hlt um das Konze
55. vorhanden sind e keine Peaks gefunden werden Autolntegrate versucht ein Signal Rausch Verh ltnis von 10 1 einzuhalten auch wenn dann keine Peaks mehr detektiert werden 142 Der neue Integrationsalgorithmus Autointegration Begrenzung Die Autointegration ist eine n tzliche Startplattform f r die Integration der meisten Chromatogramme und die ersten Schritte der Methodenentwicklung Allerdings sollte die Autointegration nicht als Ersatz f r eine gute Probenvorbereitung oder Chromatographie verstanden werden Die Autointegration bestimmt Werte f r den Anfang des Chromatogramms was die F higkeit der Autointegration beschr nkt mit ungew hnlichen Peaks umzugehen die sp ter im Chromatogramm auftreten k nnen Mit der Autointegration kann es bei Chromatogrammen die St rungen oder Peaks zu Beginn oder am Ende aufweisen zu Problemen kommen ad Bei der Autointegration gibt es Schwierigkeiten wenn ein Chromatogramm zeitprogrammierte Integrationsparamter erfordert um z B die folgenden St rungen zu umgehen e umgekehrte Peaks e St rungen oder Einschwingen der Basislinie Ventil oder Signalschaltungen e ansteigende Basislinie am Ende eines Laufs S ulenbluten Im obigen Chromatogramm wurden folgende zeitprogrammierten Integrationsparameter verwendet Integrator Off Integrator On Baseline All Valleys Set Baseline Wenn der erforderliche zeitabh ngige Parameter gesetzt ist kann die Autointegration se
56. w Kapazit tsfaktor des Peaks x wobei Aufl sung USP ASTM R bezogen auf Peaks a und b Tg von Peak a lt Tg von Peak b Tg in min Tangentenmethode USP ASTM R TR Tray Wg WBa 276 Ermittlung der Systemleistung Definitionen des Leistungstests Methode unter Verwendung von 5 Sigma r Tr Tri W44 Waa Methode unter Verwendung der Halbwertsbreite r 235 2 lTro Tro W W 50 b 50 a Statistische Methode _ Mlo Mlo Wet Wsi mit MI mittlere Retentionszeit f r Peak x 1 statistischer Moment min WB Basisbreite von Peak x min W4 1 Breite bei 4 4 H he f r Peak x min W50 x Breite bei 50 H he f r Peak x min Ws Breite erhalten aus statistischen Momenten M2 f r Peak x Siehe auch Statistische Momenteauf Seite 272 min 277 Ermittlung der Systemleistung Definitionen der Reproduzierbarkeit Definitionen der Reproduzierbarkeit F r die statistische Betrachtung der Analysendaten mit Hinblick auf die Reproduzierbarkeit wird die Sequenz als eine kleine zuf llig aus einer unendlichen Anzahl m glicher experimenteller Ergebnisse herausgenommene Probe betrachtet Um einen kompletten Ergebnissatz zu erreichen br uchte man eine unbegrenzte Menge Probenmaterial und Zeit Strikte statistische Daten beziehen sich ausschlie lich auf einen kompletten in sich selbst geschlossenen Satz oder Datenpopulation Aus diesem Grund ist die Voraussetzung f r so
57. wird nicht als Peak erkannt vgl Abbildung 15 Die Gr e dieses Bereiches h ngt vom Signal Rausch Verh ltnis ab Bei einem guten Signal Rausch Verh ltnis zum Beispiel 100 1 oder dar ber betr gt die Untergrenze des Breitenbereiches etwa ein Drittel und die Obergrenze etwa den dreifachen Wert der Breite des angegebenen Peaks Bei einem schlechten Signal Rausch Verh ltnis zum Beispiel 5 1 wird der Bereich der Peakbreite auf 90 bzw 110 der Breite des fraglichen Peaks reduziert Threshold Schwellenwert Der Schwellenwert steuert die Rauscherkennung f r die Integration Der Schwellenwert legt eine minimale Signalh he fest Peaks die eine geringere H he als den Schwellenwert aufweisen werden vom Integrator ignoriert Umso h her der Schwellenwert gew hlt wird desto h her mu ein Datenpunkt ber der erkannten Basislinie liegen damit ein Peakstart erkannt wird Der Schwellenwert wird mit folgender Formel errechnet Threshold c2 mit c eine Konstante ist deren Wert vom Detektor abh ngt und n dem Schwellenwert entspricht Der Schwellenwert basiert auf einer Skala die von 20 bis 25 reicht Die folgende Tabelle zeigt den Zusammenhang zwischen der Einstellung des Schwellenwertes und der Signalintensit t mAU der Detektoren die mit der ChemsStation eingesetzt werden k nnen Es handelt sich dabei um folgende Detektoren den HP 1090 Dioden Array Detektor den Agilent CE Dioden Array Detektor den HP 1046 Fluoresz
58. 0 Minuten in den nachfolgenden Analysen nach Ablauf von 1 95 bis 2 05 Minuten erscheinen Ein Fenster mit der Absolutbreite von 0 20 Minuten und einer relativen Anpassung von 10 ergibt also ein Retentions bzw Migrationszeitfenster zwischen 1 80 und 2 20 Minuten 1 80 min 2 00 min 0 10 min 0 20 min 2 0 10 min 10 of 2 00 min 2 20 min 2 00 min 0 10 min 0 20 min 2 0 10 min 10 von 2 00 min 153 Peak Identification Peakerkennung Korrigierte Retentions bzw Migrationszeiten Korrigierte Retentions bzw Migrationszeiten Die bereinstimmung von Peaks auf der Basis absoluter Retentions bzw Migrationszeiten ist leicht anwendbar aber nicht immer zuverl ssig Einzelne Retentions bzw Migrationszeiten k nnen leichte Abweichungen aufgrund schwankender chromatographischer Bedingungen aufweisen Daher k nnen Peaks auch au erhalb des Fensters f r die Peak bereinstimmung auftreten und werden nicht identifiziert Eine M glichkeit zur Begegnung unvermeidlicher Schwankungen der absoluten Retentions bzw Migrationszeiten ist die Festlegung einer Retentions bzw Migrationszeit relativ zu einem oder mehreren Referenzpeaks Referenzpeaks werden in der Referenzspalte der Kalibriertabelle definiert Die Methode einer relativen Peak bereinstimmung verwendet einen oder mehrere Referenzpeaks zur Positionsanpassung des Fensters zur Peak bereinstimmung Hierdurch werden Verschiebungen der Retentions bzw M
59. 118 Tabelle 4 Der neue Integrationsalgorithmus Peakerkennung B ndeln Bunching Der Integrator kann die Peakbreite bei Verbreiterung der Peaks nicht unendlich heraufsetzen Die Peaks k nnten dabei so breit werden da sie von den Peakerkennungsfiltern nicht mehr erkannt werden Um das Problem dieser Begrenzung zu umgehen verwendet der Integrator das B ndeln Bunching Durch das B ndeln der Datenpunkte verringert der Integrator die Breite der Peaks betr chtlich und erh lt dennoch dieselbe Peakfl che B ndeln ist demnach das Mittel mit dem der Integrator breiter werdende Peaks innerhalb des Bereiches des Peakerkennungsfilters h lt und so eine gute Selektivit t sicher stellt Wenn es aktiviert ist wird das B ndeln in Abh ngigkeit von der erwarteten oder erfahrungsgem en Peakbreite durchgef hrt Der Algorithmus f r das B ndeln ist in Tabelle 4 zusammengefa t Kriterien f r das B ndeln erwartete Peakbreite T verwendeter Filter B ndeln durchgef hrt 0 10 Datenpunkte erster nicht 8 16 Datenpunkte zweiter nicht 12 24 Datenpunkte dritter nicht 16 32 Datenpunkte zweiter einmal 24 48 Datenpunkte dritter einmal 32 96 Datenpunkte dritter zweiter zweimal 64 192 Datenpunkte dritter zweiter dreimal Der Peakerkennungsalgorithmus Der Integrator erkennt den Peakanfang anhand eines Basislinienpunktes der durch den Peakerkennungsalgorithmus bestimmt wurde Der Peakerkennungsal
60. 71AA e Zus tzliches Modul zur LC Steuerung und Datenaufnahme Bestellnummer G2171AA e Zus tzliches Modul zur LC MSD Steuerung und Datenaufnahme erweiterbar auf die Datenauswertung Bestellnummer G2715AA e Zus tzliches Modul zur CE Steuerung Datenaufnahme und verarbeitung Bestellnummer G2172AA e Zusatzmodul zur analogen Datenerfassung Bestellnummer G2073AA Zus tzliche Datenbearbeitungsmodule Die M glichkeiten zur Datenbearbeitung mit der ChemStation k nnen durch den Erwerb zus tzlicher Datenbearbeitungsmodule erweitert werden haupts chlich f r Spezialanwendungen e Zus tzliches Modul zur Spektrenauswertung des Dioden Array Detektors DAD Bestellnummer G2180AA e Zus tzliches Datenbankmodul ChemStore zur Organisation von Daten und Ergebnissen Bestellnummer G2181AA e Zus tzliches Datenbearbeitungsmodul f r die Auswertung und Bioanalyse von LC MSD Daten Bestellnummer G2720AA nur f r die LC MSD ChemsStation An jede ChemsStation k nnen bis zu vier chromatographische Ger te angeschlossen werden Wenn Ger te mit spektroskopischen Detektoren Dioden Array Detektoren f r LC oder CE angeschlossen sind k nnen von einer ChemsStation lediglich zwei Dioden Array Detektoren gesteuert werden die Anzahl der zu steuernden Ger te verringert sich auf drei Wenn die ChemStation f r den LC MSD zur Steuerung eines LC MSD Moduls der Serie 1100 optional mit einer LC der Serie Agilent 1100 oder HP 1090 Series II v
61. Aufgabe ist in eine Anzahl leicht verst ndlicher Schritte unterteilt die der Anwender automatsch von der Software ausf hren lassen und anschlie end selbst ben kann Anwenden der Software Zwei zus tzliche Kategorien von Online Informationen wurden f r den Routineanwender entworfen Die ChemsStation enth lt eine verst ndliche an den Kontext anlehnende katalogisierte Online Hilfe im Windowsformat Sie liefert zu jeder Bildschirmdarstellung und zur Bedeutung der wichtigsten darauf enthaltenen Parameter detaillierte Erkl rungen Die Erkl rungen werden wenn n tig durch Graphiken erg nzt und k nnen in die Windows Zwischenablage kopiert werden Von dort k nnen sie in Anwenderdokumentationen eingebunden oder ausgedruckt werden Der Abschnitt How to Wie man der Online Hilfe enth lt Checklisten ber die technikorientierten und die chromatographischen Aufgaben Sie 34 ChemStation Konzepte Dokumentation helfen dem weniger routinierten Anwender das System richtig einzurichten Diese Checklisten sind direkt mit den detaillierten Informationen der Online Hilfe verbunden Verstehehen der Prinzipien Das Handbuch ChemsStation Konzepte dokumentiert die Prinzipien der Software Bedienung und die Algorithmen bei der Datenbearbeitung Anpassung Erfahrene Anwender die die Bedienungsweise der ChemStation an ihre Bed rfnisse anpassen oder zus tliche M glichkeiten einbauen wollen k nnen dies durch Schreiben von
62. Batch Tabelle aufgef hrt sind Proben und Kontrollen also versteckt sind enth lt die Substanztabelle zus tzliche Spalten f r weitere Informationen zum Standard erwartete Menge relativer und absoluter Fehler e wenn nur Kontrollen in der Batch Tabelle aufgef hrt sind Proben und Standards also versteckt sind enth lt die Substanztabelle zus tzliche Spalten f r m gliche Grenzwerte F r Spalten die Substanz spezifische Informationen enthalten k nnen Sie den Namen der Substanz in den Titel der Tabelle aufnehmen indem Sie in die Spaltenbedingungen s aufnehmen Batch Report Der Batch Report enth lt zwei Tabellen die im Allgemeinen der Batch und der Substanztabelle entsprechen auch diese Tabellen sind individuell definierbar F r Spalten die Substanz spezifische Informationen enthalten k nnen Sie den Namen der Substanz in den Titel der Tabelle aufnehmen indem Sie in die Spaltenbedingungen s aufnehmen Auch mehrzeilige Kopfzeilen sind erlaubt ber Eingabe des Zeichens erfolgt ein Zeilenumbruch an dieser Stelle Benutzeroberfl che Der Batch Review erm glicht die Auswahl zwischen zwei Benutzeroberfl chen e die Standardoberfl che enth lt eine Leiste mit Schaltfl chen die den Zugriff auf die meisten Men eintr ge f r den Batch erm glichen einschlie lich der Batch und Substanztabelle e eine minimale Benutzeroberfl che bietet eine ganz hnliche Symbolleiste wobei allerdings die Batch und
63. Cal2a e 6 Injektionen aus Probenfl schchen 10 Probe 10 e Probenfl schchen 2 Callb e Probenfl schchen 6 Cal2b e 6 Injektionen aus Probenfl schchen 11 Probe 11 e Probenfl schchen 3 Callc e Probenfl schchen 7 Cal2c e 6 Injektionen aus Probenfl schchen 12 Probe 12 e Probenfl schchen 1 Calla e Probenfl schchen 5 Cal2a e 6 Injektionen aus Probenfl schchen 13 Probe 13 e Probenfl schchen 2 Callb e Probenfl schchen 6 Cal2b e USW 231 Automatisierung Zyklische Rekalibriersequenzen mit mehreren Probenfl schchen die dieselbe Standardverd nnung enthalten Zyklische Rekalibrierung aus verschiedenen Kalibrierfl schehen Um sicherzustellen da aus jedem Kalibrierfl schchen nur einmal injiziert wird mu die Sequenz eine ausreichende Anzahl von verschiedenen Kalibrierfl schchen festlegen so da die zyklische Abfolge die im folgenden Beispiel beschrieben wird nicht vorliegt Wenn in einer Sequenz zum Beispiel 80 Proben analysiert und nach jeweils 10 Proben Rekalibrierungen erfolgen sollen mu die Sequenztabelle f r jede Stufe 80 10 1 9 Kalibrierzeilen enthalten Wie im letzten Beispiel m ssen die Zeilen die aneinandergrenzende Positionen kennzeichnen auch in der Sequenztabelle benachbart sein Umschlie ende Sequenz mit verschiedenen Kalibierfl schchen vor und nach den Probeninjektionen Diese M glichkeit l t sich auch bei umschlie enden Sequenzen anwenden Eine umschlie ende Sequ
64. Makros erreichen Das erste Referenzhandbuch Macro Programming Guide das ber die Online Hilfe verf gbar ist enth lt leicht verst ndliche Beispiele die durch die vollst ndige Beschreibung der internen Datenarten und Strukturen erg nzt sind Die Hilfedatei zu den Befehlen dient dem Programmierer als Arbeitsreferenz und ist direkt ber das Hilfemen der ChemStation oder ber das Dialogfeld Show Command zug nglich Sie enth lt Erkl rungen zu Syntax und den Parametern mit Beispielmakros die den Einsatz vieler der Befehle erl utern Dadurch daf sie sich online befinden kann der Anwender ganze Beispiele oder nur eine Befehlssyntax direkt in das eigene Makro kopieren 35 ChemStation Konzepte Die Verzeichnisstruktur der ChemStation Die Verzeichnisstruktur der ChemStation Die Verzeichnisstruktur der ChemStation wird im Folgenden als Beispiel gezeigt Sie besteht aus allgemeinen Verzeichnissen die von allen angeschlossenen Analysenger ten benutzt werden sowie aus ger tespezifischen Verzeichnissen Das Installationsprogramm legt ein Unterverzeichnis des Verzeichnisses der ChemStation Standardname HPCHEM f r jedes angeschlossene Analysenger t mit dessen Ger tenummer an In diesem Verzeichnis werden standardm ig alle Daten Methoden und Sequenzen f r dieses Analysenger t gespeichert 36 ChemStation Konzepte Die Verzeichnisstruktur der ChemStation HPCHEM REPSTYLE CORE
65. Mausbewegung wird eine Linie vom Startpunkt bis zur aktuellen Position der Maus gezeichnet Im Falle von Delete Peak s wird ein Auswahlrechteck um die zu l schenden Peaks ge ffnet Die graphische Eingabe kann in den zwei Modi Absolute das ist der Standardwert und Trace Verfolgen des Signals erfolgen In beiden F llen wird in der Mitteilungszeile die Zeit und die H he des Cursors angezeigt Im Modus Trace ist der Cursor ein abw rts weisender Pfeil und folgt dem Profil des Signals indem er sich von Datenpunkt zu Datenpunkt bewegt Sie k nnen den Trace Modus aktivieren wenn sich der Cursor am gew nschten Peakstart befindet indem Sie den rechten Mausknopf dr cken Im Modus Absolute ist der Cursor ein Fadenkreuz und folgt dem Signal erlaubt jedoch eine Positionierung an jeder Stelle des Bildschirmes Sie k nnen von einem Modus in den anderen umschalten indem Sie den rechten Mausknopf dr cken 145 Der neue Integrationsalgorithmus Manuelle Integration e F r jeden manuell integrierten Peak werden die Fl chenwerte Area Counts zusammen mit der Retentions bzw Migrationszeit auf dem Bildschirm angezeigt Einf gen manueller Parameter in die Methode Die Software erm glicht Ihnen ber den Befehl Copy Manual Events to Method im Men Integration das Einf gen Ihrer manuell definierten Integration in die aktuelle Methode Diese manuellen Parameter werden in der Methode separat gespeichert Sie k nnen i
66. Replace Ersetzen Replace Bracket Umschlie en Delta Mittelwert Average Aus den Responsefaktoren Fl chen oder H hen der Originalkalibrierung und allen nachfolgenden Kalibrierungen werden Mittelwerte gebildet Wenn ein Peak in einem der Rekalibrierl ufe fehlt wird der durchschnittliche Response nicht beeintr chtigt Umschlie en Bracket Die Analysenl ufe werden von Kalibrierungen vor und nach der Messung umschlossen Die Auswertung wird durchgef hrt nachdem die letzte Kalibrierprobe vermessen wurde Die zuvor durchgef hrten Kalibrierdaten werden durch die neuen Ergebnisse ersetzt die nachfolgenden Kalibrierungen werden zur Mittelwertbildung mit dieser Kalibriertabelle verwendet Intervall Das Intervall legt die H ufigkeit von Rekalibrierungen w hrend der Durchf hrung einer Sequenz fest Die Kalibrierh ufigkeit nennt die Anzahl durchzuf hrender Analysenl ufe bevor Kalibrierproben injiziert werden Zu Beginn des Analysenlaufes wird eine Kalibriertabelle mit den Ergebnissen Responsefaktoren erstellt Diese Ergebnisse werden in den nachfolgenden quantitativen Berechnungen verwendet Nach der vorgegebenen Zahl von Injektionen wird eine erneute Kalibrierung durchgef hrt Deren Ergebnisse werden in die Kalibriertabelle eingegeben und berschreiben die fr heren Ergebnisse 214 Automatisierung Spezifizieren von Rekalibrierungen Delta Mit Hilfe der Delta Berechnung lassen sich die Responsefakt
67. Reports Fl chen und H hen Diese Reports werden haupts chlich zur Vorbereitung kalibrierter Reports verwendet Sie k nnen auch als endg ltiger Report benutzt werden wenn die Substanzen vergleichbare Responsefaktoren aufweisen so da sich auch hnliche Fl chen oder H henwerte ergeben Kalibrierte Reports In kalibrierten Reports werden die unterschiedlichen Responsefaktoren der untersuchten Substanzen ber cksichtigt Eine oder mehrere Kalibrierproben mit bekanntem Gehalt dieser Substanzen m ssen dazu unter identischen Bedingungen vermessen werden Die integrierten Daten dieser Kalibrierprobe n werden zur Erstellung einer Kalibriertabelle ben tigt Das ist eine Liste von Retentions oder Migrationszeiten Mengen und Responsefaktoren die zur Reporterstellung ben tigt werden Der kalibrierte Report basiert auf zwei Kalibrierverfahren externer oder interner Standard Report mit externem Standard Der ESTD Report erstellt eine Ergebnisliste mit Konzentrationseinheiten Ihrer Wahl oder Angaben der prozentualen Anteile an der Gesamtmenge der Substanzen Das Verfahren des externen Standards erfordert die genaue Kenntnis der injizierten Volumina von Kalibrier und Probenl sung Die Verl lichkeit dieses Reports h ngt von der Reproduzierbarkeit der Injektionsvolumina und anderer Faktoren ab die sich von Probe zu Probe ndern k nnen 246 Verwendung der ChemStation Reports Reportergebnisse Report mit internem Standard
68. Retentionszeit und Fl che Weitere Informationen zu den Control Chart Reports finden Sie in der Online Hilfe M glichkeiten und Kompatibilit ten Allgemein Die ChemsStation kann Datendateien in das ANDI Analytical Data Interchange Chromatographieformat der Analytical Instrument Association AIA Version 1 0 Copyright 1992 importieren und daraus exportieren Der Datenimport wird durch den Compliance Level eins Probeninformation und 26 ChemStation Konzepte Zur ChemStation Software Signaldaten unterst tzt und der Datenexport duch den Compliance Level zwei Probeninformation Signaldaten und Intgrationsergebnisse Die ChemStation enth lt Befehle und Funktionen mit denen der dynamische Datenaustausch DDE auf der Ebene von Microsoft Windows sowohl als DDE Empf nger als auch als DDE Verteiler durchgef hrt werden kann Die Befehlsreihe enth lt Befehle zum Verbinden und Trennen zum beidseitigen Austausch von Informationen sowie zum ferngesteuerten Ausf hren von Funktionen Die ChemStation enth lt Befehle und Funktionen mit denen der Open Database Connectivity ODBC Standard von Microsoft gen tzt werden kann Der ODBC Standard wird ber den Erweiterungslevel eins unterst tzt Weitere Informationen befinden sich in den Spezifikationen f r das Produkt Agilent ChemsStore ChemsStations f r LC und CE Methoden Datendateien Spektrenbibliotheken und Sequenzen aus fr heren Versionen der ChemsStations f r LC ein
69. Seite 91 Bestimmung des Peakmaximums An der h chsten Stelle des Peaks wird die positive Steigung negativ Zur Berechnung der Retentions bzw Migrationszeiten und der Peakh he nimmt der Integrator den h chstgelegenen Datenpunkt auf beiden Seiten des Peaks An diese beiden Punkte wird eine quadratische Gleichung angepa t deren L sung den h chsten Punkt des Peaks ergibt Bestimmung des Peakmaximums Peakmaximum F D 80 Abbildung 4 Der Standardintegrationsalgorithmus Peakerkennung Integration berlappender Peaks Manchmal berlappen zwei Peaks so da zwischen ihnen kein Basislinienpunkt vorhanden ist Im Falle eines Basislinie Valley BV und eines Valley Basislinie VB Peaks trennt der Integrator die berlappenden Peaks durch Lotf llung vom Talpunkt zwischen den beiden Peaks Der Integrator erkennt den Start des ersten Peaks und integriert die Fl che bis er einen Talpunkt findet Am Talpunkt endet die Integration des ersten Peaks Nun beginnt die Fl chenaddition f r den zweiten Peak Wenn der Integrator das Ende des zweiten Peaks erkennt wird die Fl chenaddition beendet Sie finden Einzelheiten zur Trennung berlappender Peaks im Abschnitt Kodierung zur Peaktrennung auf Seite 104 berlappende Peaks Integration von Peakschultern Eine Schulter ist ein nicht aufgetrennter Peak auf der vorderen oder hinteren Flanke eines gr eren Peaks Es ist kein Tal
70. Signalen bei deren Auswertung auf das Retentionszeitfenster der aktuellen Substanz hingewiesen wurde der Kalibriertabelle deren Darstellung aus einer umfassenden Auswahl von Kalibrierparametern festgelegt werden kann und der Kalibrierkurve f r die zu bestimmende Substanz 22 ChemStation Konzepte Zur ChemStation Software Alle Fenster des Kalibriermodus sind miteinander verbunden so da Ver nderungen die in einem Fenster vorgenommen werden auf alle anderen bertragen werden Der Modus erm glicht die graphische Auswahl und Ver nderung der Kalibrierdaten Die Quantifizierung erfolgt als Berechnung von Werten normierten Werten bez glich externem Standard externen Standard internem Standard und internen Standard f r Peakfl che oder Peakh he Sie kann Mehrpunktkalibrierungen und mehrfache Definitionen eines internen Standards umfassen Ver nderungen der Kalibrierung Histories werden automatisch gespeichert und zur Gewichtung von Berechnungen mit Rekalibrierungen verwendet Weitere Informationen zur Kalibrierung und Quantifizierung finden Sie in Kapitell ChemStation Konzepte und Kapitel9 Kalibrierung Datenauswertung Standardreports Anwender definierbare Reportvorlagen f r die Analysenberichte sind auf dem Bildschirm Report Specification w hlbar Jede Standard Reportvorlage umfa t standardisierte Informationsgruppen und eine Reihe optionaler Informationsgruppen Weitere Informationen
71. Software verschiedener Befehle und Fuktionen l t sich die Funktionalit t der ChemsStation erweitern Weitere Informationen entnehmen Sie bitte dem Macro Programming Guide der ber die Online Hilfe verf gbar ist Gliederung der Software ChemsStation Software ist in mehrere Hauptmen s gegliedert In die Softwarekonfiguration sind standardm ig folgende drei Hauptmen s eingebunden e Method und Run Control zur Kontrolle des Ger ts und zur Datenaufnahme e Data Analysis zum Wiederaufrufen und Auswerten bereits aufgenommener Daten und e Report Layout zum Erstellen bestimmter Reportvorlagen F r weitere Datenauswertungsmodule oder bestimmte Ger tekonfigurationen die Fehlerdiagnosen und Ger te berpr fungen erm glichen gibt es weitere Hauptmen s Zudem kann zu der ChemStation das Hauptmen Companion installiert werden wenn Ger tebediener Proben bequem ber eine vorgefertigte Tabelle abarbeiten k nnen sollen Jedes Hauptmen besteht aus einer Reihe der standardm igen Anwenderelemente wie Men s und Symbolleisten Die voreingestellte Symbolleiste bietet schnellen Zugriff auf allgemeine Informationen zur Ger tespezifikation wie Methoden und Sequenzen Das Hauptmen Method und Run Control enth lt zus tzlich eine Informationszeile ber den Ger testatus ein Informationsfeld zur Probe das sowohl f r einzelne als auch automatisierte L ufe festgelegt werden kann und f r GC LC und CE Ko
72. Standard ISTD 172 10 Inhalt Kalibrierung Definition der Begriffe 179 Kalibriertabelle 180 Kalibrierkurve 181 Unbekannte Proben 183 Kalibrierverfahren 184 Gruppenkalibrierung 191 Peakaddition 192 Rekalibrierung 193 Automatisierung Was ist Automatisierung 199 Was ist eine Sequenz 200 Sequenzparameter 201 Sequenztabelle 202 Erstellen einer Sequenz 203 Arbeiten mit Sequenzen 204 Logbuchdatei einer Sequenz 207 Was geschieht w hrend der Ausf hrung einer Sequenz 208 Vergabe von Dateinamen in einer Sequenz 209 Aktionen nach der Sequenz 211 Automatische Rekalibrierung 212 Spezifizieren von Rekalibrierungen 213 Sequenztypen 216 Explizite Kalibriersequenzen 217 Zyklische Kalibriersequenzen eines Kalibrierpunkts 218 Zyklische Kalibriersequenzen mit mehrerer Kalibrierpunkte 219 Kombination aus expliziter und zyklischer Kalibrierung 223 11 12 13 Inhalt Umschlie ende zyklische Kalibriersequenzen Bracketing 226 Zyklische Rekalibriersequenzen mit mehreren Probenfl sch chen die dieselbe Standardverd nnung enthalten 230 Batch Review Was versteht man unter Batch Review 237 Batch Konfiguration 238 Funktionen f r den Review 240 Batch Reports 241 Verwendung der ChemsStation Reports Was ist ein Report 245 Reportergebnisse 246 Quantitative Ergebnisse 248 Reportvorlagen 250 Weitere Parameter f r die Reportvorlagen 253 Reportausgabe 254 Sequence Summary Reporting 256 Ermit
73. Wahl von Partial Sequence im Men Sequence auch teilweise ausgef hrt werden Das System zeigt das Dialogfeld Partial Sequence an und erm glicht Ihnen die Auswahl einzelner Proben zur Analyse Jede Zeile des Dialogfeldes Partial Sequence entspricht einem Analysenlauf F r jeden Analysenlauf werden Probenfl schchen Methode Datensatz und Probenname angegeben Zus tzlich stehen in den Spalten Seq Tbl und Calib RF RT kodierte Informationen zur Sequenztabelle und den Kalibrierproben In der Online Hilfe finden Sie die Erl uterungen dieser Kodierungen ber die Druckschaltfl che k nnen Sie die Teilsequenz ausdrucken Das folgende Dialogfeld Partial Sequence wird erstellt wenn die Methode SimpReg Method und die Sequenztabelle die unter Tabelle 14 und Tabelle 15 dargestellt ist gew hlt werden Die Proben 1 2 4 5 und 8 sind f r eine Bearbeitung markiert 205 Automatisierung Arbeiten mit Sequenzen Abbildung 39 Dialogfeld f r eine Teilsequenz Select the parts of the sequence to run Spacebar toggles selection Sel Run Vial Method Data File Seq Tb Calib RF RT Sample Name SIMPREG C1F03001 03 1 01 AV AV Calibration A SIMPREG C1F03002 03 LOLAVAV Calibration A SIMPREG C2F03001 03 2 02 AV AV Calibration 002F0301 03 Sample1 C1F04001 04 1 01 BV AV Calibration A C1F04002 04 1 01 BV AV Calibration A C2F04001 04 2 02 AV AV Calibration A 003F0401 04 Sample 2
74. Zus tzlich zur Identifizierung von Peaks mit ihrer Retentions bzw Migrationszeit k nnen Sie Peakqualifier zur Erreichung eines noch genaueren Ergebnisses einsetzen Wenn mehr als ein Peak im Retentions bzw Migrationszeitfenster erscheint sollten Peakqualifier zur Identifizierung der korrekten Komponente eingesetzt werden Mengenangaben Amount Limits Die Grenzwerte f r die Mengenangaben werden im Dialogfeld Compound Details definiert und zur qualifizierten Peakidentifizierung benutzt Wenn die Mengenangabe einer identifizierten Komponente im vorgegebenen Bereich liegt wird die Peakidentifizierung im Report aufgef hrt 151 Abbildung 30 Peak Identification Peakerkennung Absolute Retentions bzw Migrationzeit Absolute Retentions bzw Migrationzeit Zur Feststellung einer Peak bereinstimmung wird ein Zeitfenster f r die Retentions bzw Migrationszeit verwendet Dieses Zeitfenster wird um die erwartete Retentions bzw Migrationszeit f r einen erwarteten Peak zentriert Jeder Probenpeak der innerhalb dieses Fensters liegt wird zur Identifizierung dieser Komponente herangezogen In Abbildung 30 ist ein Retentions bzw Migrationszeitfenster f r Peak 2 zwischen 1 809 und 2 631 Minuten eingetragen die erwartete Retentions bzw Migrationszeit betr gt 2 22 Minuten F r Peak 2 bestehen also zwei M glichkeiten Eine bei 1 85 und eine andere bei 2 33 Minuten Wenn der erwartete Peak kein Referenzpeak ist wird b
75. aktrennung Abbildung 9 Tangentiale Anpassung Talpunkt aufgesetzter Peak Tangenten punkt Tang Anpassung 87 Der Standardintegrationsalgorithmus Berechnung der Peakfl che Berechnung der Peakfl che Der letzte Schritt einer Integration besteht aus der Bestimmung der Peakfl che Die Fl che die der Integrator bei der Integration berechnet wird folgenderma en bestimmt e bei Basislinien getrennten BB Peaks liegt die Fl che oberhalb der Basislinie zwischen den Strichmarkierungen Abbildung 10 Fl chenbestimmung f r Basislinien getrennte Peaks BB e f r nicht getrennte Peaks Valley to Valley VV wird die Fl che oberhalb der Basislinie durch Lotf llung zwischen den Strichmarkierungen unterteilt Abbildung 11 Fl chenbestimmung f r Tal zuTal getrennte Peaks VV e beitangentialen Peaks T liegt die Fl che oberhalb der neu bestimmten Basislinie 88 Abbildung 12 Der Standardintegrationsalgorithmus Berechnung der Peakfl che e bei L sungsmittelpeaks S liegt die Fl che oberhalb der horizontalen Verl ngerung vom letzten gefundenen Basislinienpunkt und unterhalb der korrigierten Basislinie des tangentialen Peaks T Ein L sungsmittelpeak kann eventuell zu langsam ansteigen um erkannt zu werden oder eine Peakgruppe kann der Erfahrung zufolge ein L sungsmittelpeak mit einigen Aufsetzern sein Dabei handelt es sich normalerweise um e
76. als auch Peakbreite sind n tzlich wo dominante Komponenten bei starkem Rauschen entdeckt und quantifiziert werden m ssen Eine Erh hung der Peakbreite f hrt zu einer 94 Der Standardintegrationsalgorithmus Integrationsparameter st rkeren Filterung des Signals und eine Erh hung des Schwellenwertes stellt sicher da das Rauschen ignoriert wird e Eine Reduzierung von Schwellenwert und Peakbreite sind zur Entdeckung und Quantifizierung von Spurenkomponenten n tzlich deren H hen mit der Rauschh he vergleichbar sind Eine Reduzierung der Peakbreite f hrt zu schw cherer Signalfilterung die Reduzierung des Schwellenwertes stellt sicher da kleine Peaks nicht aufgrund einer zu geringen H he ignoriert werden e Wo sowohl breite als auch schmale Peaks detektiert und quantifiziert werden m ssen ohne da die Peakbreite individuell angepa t wird sollte eine schmale Peakbreite eingestellt werden und der Schwellenwert sollte ebenfalls reduziert werden 95 Der Standardintegrationsalgorithmus Integrationsparameter Anpassung der Integration Oft ist es n tzlich die Werte f r Peakbreite Schwellenwerte und Mindestfl che so zu ndern da Sie eine optimierte Integration Ihres Signals erhalten Abbildung 15 zeigt den Einflu von Schwellenwert Peakbreite und Mindestfl che auf die f nf Peaks des Chromatogramms Abbildung 15 Verwendung von Anfangsparametern 7 Obere Grenz
77. anpassung Tangent Skim Peakart Der Peak ist ein fl chenaufsummierter Peak Area Summed Peak Peakart Bei manueller Integration k nnen einige andere Codes als Basislinien oder Peaktrennungscodes erscheinen M Der Peak wurde manuell integriert 125 Der neue Integrationsalgorithmus Codes zur Beschreibung der Peaktrennung f Der Peak wurde durch manuelle Integration erzwungen Falls ein Peak vor einem manuell integrierten Peak erscheint und sein Ende von einer manuellen Integration beeinflu t wird erh lt der Peak die Klassifizierung erzwungen forced R Ein L sungsmittelpeak wurde von manueller Integration betroffen Eine solche tangentiale Peakanpassung Tangent Skim wird als neuberechneter L sungsmittelpeak klassifiziert Peakart Bei eingeschalteter Option Schultererkennung Shoulder Detection und detektierten Schultern enthalten Spalten drei und vier des Peaktrennungscodes einen der folgenden Buchstaben f Auf der Anstiegsflanke des Peaks wurde eine Schulter entdeckt Front Shoulder Fl chenbestimmung ber Lotf llung b Auf der Abstiegsflanke des Peaks wurde eine Schulter entdeckt Rear Shoulder Fl chenbestimmung ber Lotf llung f Auf der Anstiegsflanke des Peaks wurde eine Schulter entdeckt Front Shoulder Fl chenbestimmung ber tangentiale Anpassung b Auf der Abstiegsflanke des Peaks wurde eine Schulter entdeckt Rear Shoulder Fl chenbestimmung ber tangentiale Anpass
78. as Mengenverh ltnis f r die unbekannte Probe wird mit der Kurven anpassung aus Schritt 2 oben und der Menge an internem Standard ermittelt Berechnung mit ISTD f r kalibrierte Peaks Die Gleichungen zur Berechnung der Menge einer kalibrierten Substanz x f r eine Einpunktkalibrierung lauten Response Response Ratio Response spp Actual Amt of x Response Ratio RF Actual Amount of ISTD M D Erl uterung RF ist der Responsefaktor der Substanz x Die Menge des internen Standards in der Probe Actual Amt ist der Wert der in den Dialogfeldern Calibration Settings oder Sample Info eingegeben wurde M ist der Multiplikationsfaktor D ist der Verd nnungsfaktor Bei gew hltem Reporttyp ISTD wird die relative Menge in der Menge x in der Probe mit folgender Gleichung berechnet Actual Amount of x 100 Sample Amount Relative Amt of x Berechnung unkalibrierter Peaks mit ISTD Zur Definition des Responsefaktors nicht identifizierter Peaks gibt es zwei M glichkeiten 1 Verwendung eines festen Responsefaktors With Rsp Factor der im Dialog feld Calibration Settings eingegeben wird Sie k nnen einen festen Responsefaktor durch Angabe einer ISTD Korrektur korrigieren 174 Quantifizierung Berechnungen mit internem Standard ISTD Actual Amount of x RF Response Ratio Actual Amount of ISTD M D Response Response Ratio Response spp RF ist der R
79. asResponse gemessener Response Ersetzen Replace Die alten Werte f r den Response werden durch die neuen Werte ersetzt M glichkeiten der Rekalibrierung Mit der ChemsStation Software k nnen Rekalibrierungen auf zwei Arten durchgef hrt werden Sie k nnen interaktiv oder automatisch w hrend einer Sequenz rekalibrieren Die interaktive Rekalibrierung ist die direkte Durchf hrung aller Rekalibrierschritte mit der ChemStation nach der Injektion einer oder mehrerer Proben Rekalibrierungen mit einer Sequenz erfordern die Angabe des Rekalibrierzeitpunktes die Rekalibrierung wird von der Software dann automatisch vorgenommen F r weitere Informationen schlagen Sie bitte unter Automatische Rekalibrierung on page 212 nach Weitere Informationen ber die Durchf hrung einer Rekalibrierung mit Hilfe der Software finden Sie im Abschnitt How To des Hilfe Systems oder im integrierten Tutorial Rekalibrierung unidentifizierter Peaks Es gibt drei M glichkeiten zur Rekalibrierung unidentifizierter Peaks Keine Rekalibrierung Wenn ein Peak der Kalibriertabelle bei der Ausgabe der Integrationsergebnisse nicht identifiziert werden kann wird die Kalibrierung abgebrochen Wenn dies innerhalb einer Sequenz auftritt wird die Sequenz ebenfalls abgebrochen Partielle Rekalibrierung Diese M glichkeit gestattet die Rekalibrierung der identifizierten Peaks Fehlende Peaks f hren nicht zum Abbruch der Kalibrierung aber zu einem e
80. aten eines Zeitintervalls im Chromatogramm Elektropherogramm bestimmt Rauschen kann auf drei Arten beschrieben werden 1 Alssechsfache Standardabweichung aus der linearen Regression der Drift 2 Als Peak zu Peak Wert mit Driftkorrektur 3 Durch Bestimmung mit der ASTM Methode ASTM E 685 93 Bestimmung des Rauschens als sechsfache Standardabweichung linear regression BED SE gt time Bestimmung des Rauschens als maximaler Peak zu Peak Spitzenabstand noise max peak minus j min peak gt time Die Drift wird als Steigung der Regressionsgeraden gem Abbildung 42 ermittelt Die mittlere Abweichung wird gem Abbildung 44 als Peak zu Peak Rauschh he der Mittelwerte der ASTM Abschnitte bestimmt 265 Ermittlung der Systemleistung Bestimmung des Rauschens Abbildung 44 Bestimmung des Rauschens mit der ASTM Methode Die Bestimmung des Rauschens mit der ASTM Methode ASTM E 685 93 basiert auf einem Standardverfahren zum Testen von Detektoren variabler Wellenl nge nach einer Definition der American Society for Testing and Materials Es werden drei Typen von Rauschen nach dem Zeitintervall zur Bestimmung unterschieden Die Bestimmung von Rauschen basiert auf der Messung der Abst nde von Peak zu Peak innerhalb bestimmter Zeitintervalle 1 Langzeitrauschen Es ist die maximale Amplitude aller zuf lligen Schwankungen des Detektorsignals mit Frequenzen von 6 bis 60 Zyklen pro Stunde Lan
81. atenauswertung startet nach dem Speichern der Rohdaten Integration e Chromatographische elektrophoretische Objekte im Signal werden so integriert wie im Dialogfeld Integration Events festgelegt e Peakstart Peakmaximum Retentions bzw Migrationszeit sowie das Peakende werden ermittelt e Unter jedem Peak wird der Verlauf der Basislinie zur Bestimmung von Peakfl che und Peakh he definiert e Die Integrationsergebnisse Integration Results werden als Liste dargestellt Peakidentifizierung und Quantifizierung e Mit den Retentions bzw Migrationszeiten und optionalen Peakqualifiern identifiziert die Software die Peaks durch Vergleich mit bekannten Stoffen deren Daten in der Kalibriertabelle Calibration Table enthalten sind e Mit den Peakh hen oder Peakfl chen berechnet die Software die gefundene Menge jeder integrierten Substanz durch die Verwendung der Kalibrierparameter aus der Kalibriertabelle Bibliothekssuche mit Spektren nur bei ChemStations f r LC 3D Systeme LC MS Systeme und CE Systeme F r alle Peaks mit gemessenen UV VIS Spektren kann eine automatische Suche in vorgegebenen Spektrenbibliotheken zur Identifizierung erfolgen Weitere Informationen hierzu finden Sie im Buch Installation und Funktion des Spektrenmoduls berpr fen der Peakreinheit nur bei ChemStations f r LC 3D Systeme LC MS Systeme und CE Systeme F r Peaks mit vorhandenen UV VIS Spektren kann ein Reinheitsfaktor errechnet und i
82. belle f r SIMPREG 7 6 SimpReg 1 Die Tabelle hat zwei Eintr ge f r einen Kalibrierpunkt e Die erste Zeile bezieht sich auf denselben Kalibrierpunkt und gibt die Mittelwertbildung der Rekalibrierparameter vor Das Rekalibrierintervall gibt an da nach je drei Proben eine Rekalibrierung durchgef hrt wird e Mit dem zweiten Eintrag werden alle Kalibrierparameter ersetzt das bedeuted da eine komplette Rekalibrierung ohne Rekalibrierintervall durchgef hrt wird Sequenztabelle Die Sequenztabelle besteht aus sieben Zeilen Die erste Zeile spezifiziert die Probe zur zyklischen Rekalibrierung Die zweite Zeile spezifiziert die explizite Rekalibrierung die zu Beginn der Sequenz durchgef hrt wird Die dritte bis siebte Zeile spezifiziert die zu analysierenden Proben Die Reihenfolge der Eintr ge in die Sequenztabelle ist sehr wichtig Alle Eintr ge zu Probenfl schchen f r zyklische Rekalibrierungen m ssen vor den Eintr gen der Proben oder den Eintr gen zur expliziten Rekalibrierung der Methode stehen Analysenfolge der Methode SimpReg In diesem Abschnitt wird die Analysenfolge der Methode SimpReg beschrieben 224 Automatisierung Kombination aus expliziter und zyklischer Kalibrierung Tabelle 15 Analysenfolge der Methode SimpReg Seq Zeile Inj Nr Methode Vial Operation 2 1 SimpReg 1 einfache Kalibrierung 1 2 SimpReg 1 regelm ige Kalibrierung 3 3 SimpRe
83. blaufes einer Methode wenn alle Bestandteile der Checkliste zur Ausf hrung gew hlt wurden 51 Methoden Was geschieht w hrend der Ausf hrung einer Methode Abbildung 1 Methodenablauf Status der ChemStation Post Run Makro Injektion a en DE a N Datenauswertung Injektion und Analysenlauf 2 Lg Schlie en des Pre Run Makro Rohdatensatzes amp Pre Run Methodenlauf mit der ChemStation gestartet Befehl oder Makro vor dem Analysenlauf Pre Run Wenn ein Makro oder ein Befehl zur Ausf hrung vor dem Analysenlauf angegeben wird erfolgt die Ausf hrung vor dem Start der Analyse Dieser Teil dient normalerweise der Systemanpassung in Verbindung mit anderen Softwarepaketen Datenerfassung e Alle Parameter werden auf die Anfangsbedingungen gesetzt die in der aktuellen Methode angegeben sind e Wenn angegeben wird ein Injektionsprogramm ausgef hrt und eine Injektion erfolgt aus dem aktuell definierten Probenfl schchen e Auf dem Bildschirm wird der Verlauf der Analyse zusammen mit chromatographischen oder elektrophoretischen Informationen sowie gegebenenfalls den Spektren dargestellt e Daten werden erfa t und in einer Datei gespeichert 52 Methoden Was geschieht w hrend der Ausf hrung einer Methode Datenauswertung Bei Erreichen der Stopzeit wird der Analysenlauf beendet und die Rohdaten werden auf der Festplatte des Computers gespeichert Der Softwareteil zur D
84. bstanz w hrend einer Sequenz leicht vom berechneten Mittelwert abweichen kann k nnen die Daten einer anderen Sequenz z B durch Umgebungstemperatur nderungen Abbau des S ulenmaterials mit der Zeit u s w viel mehr differieren Um diese Abweichung zu bestimmen kann die Standardabweichung des Probenmittelwertes Sy mit der oben genannten Formel berechnet werden Konfidenzintervall CI Das Konfidenzintervall wird berechnet um Informationen ber die G te der Einsch tzung des Mittelwertes zu erhalten wenn dieser auf die ganze Population und nicht nur auf eine Probe angewandt wird Das 100 1 a Konfidenzintervall f r den gesamten Mittelwert ist gegeben durch 279 Beispiel Ermittlung der Systemleistung Definitionen der Reproduzierbarkeit CI tayayn Sm mit Prozentpunkt der t Verteilungstabelle bei einer Risikowahrscheinlichkeit von a Kor2y N 1 F r die erweiterte Statistik im Sequenz Summary Report kann das 95 Konfidenzintervall verwendet werden a 0 05 Die t Verteilung oder Student Verteilung muss bei kleinen Probenvolumen verwendet werden Im Falle gro er Probenvolumina differieren die Ergebnisse f r die t Verteilung und die Normal Gauss Verteilung nicht mehr Deshalb kann bei 30 oder mehr Proben stattdessen die Normalverteilung verwendet werden es w re sehr schwierig die t Verteilung f r eine gro e Probenanzahl zu berechnen die Normalverteilung ist die beste Ann herung daran
85. ce 229 Automatisierung Zyklische Rekalibriersequenzen mit mehreren Probenfl schchen die dieselbe Standardverd nnung enthalten Zyklische Rekalibriersequenzen mit mehreren Probenfl schchen die dieselbe Standardverd nnung enthalten Zyklische Rekalibriersequenz unter zyklischer Verwendung von mehreren Kalibrierfl schehen Wenn man eine lange Sequenz mit zyklischer Rekalibrierung laufen l t das hei t eine automatische Rekalibrierung nach einer festen Anzahl von Probeninjektionen durchf hrt besteht die Gefahr da das Kalibrierfl schchen im Lauf der Sequenz geleert wird Die Sequenztabelle der ChemsStation bietet die M glichkeit eine Reihe von Probengef en mit derselben Standardverd nnung 2yklisch nacheinander zu verwenden ber diese M glichkeit lassen sich lange Sequenzen mit automatischen Rekalibrierl ufen nach festen Intervallen definieren bei denen die Kalibriersubstanzen f r jede Stufe aus mehreren Probenfl schchen pipettiert und gleichm ig verbraucht werden Wenn man die passende Anzahl von Kalibrierfl schchen einsetzt wird jedes Kalibrierfl schchen nur einmal verwendet Dies ist besonders bei solchen F llen erforderlich bei denen f r jede Rekalibrierung ein neues Kalibrierfl schchen verwendet werden mu weil L sungsmittel oder oder reagieren k nnen Der folgende Abschnitt beschreibt wie die Sequenztabelle der ChemStation ausgef llt werden mu um diese Anforderungen zu erf llen
86. chtet 0 75 x existing peak width 0 25 x width of current peak Wenn die Peakbreite durch eine zeitabh ngige Programmierung eingestellt wird wird die automatische Peakbreitenanpassung deaktiviert Ver ndern der Mindesth he und der Peakbreite Sowohl die Peakbreite als auch die Mindesh he sind sehr wichtig f r den Integrationsvorgang Sie k nnen durch Ver ndern dieser Werte unterschiedliche Ergebnisse erzielen e Erh hen Sie sowohl die Mindesth he als auch die Peakbreite wenn relativ dominierende Bestandteile detektiert und in einer Umgebung mit starkem Rauschen quantifiziert werden sollen Eine Erh hung der Peakbreite verbessert die Rauschfilterung w hrend eine Erh hung der Mindesth he hin und wieder auftretendes Rauschen unterdr ckt e Verringern Sie sowohl die Mindesth he als auch die Peakbreite um Spurenkomponenten deren H he dem Rauschen nahe kommt zu detektiern und zu quantifizieren Eine Verringerung der Peakbreite vermindert die Signalfilterung w hrend eine Verringerung der Mindesth he sicher stellt da auch kleine Peaks nicht aufgrund ihrer geringen H he vernachl ssigt werden Wenn eine Analyse Peaks unterschiedlicher Peakbreiten ergibt sollte die Peakbreite an die schmalen Peaks angepa t sein Die Mindesth he sollte reduziert werden um sicher zu stellen da breite Peaks nicht aufgrund ihrer geringen H he vernachl ssigt werden 136 Abbildung 29 Der neue Integrationsalgorithmus In
87. de 277 Methode der Halbwertsbreite 277 statistische Methode 277 Tangentenmethode 276 Ausgabe von Reports 254 Autointegration 100 142 automatisch Rekalibrierung 212 Shutdown 211 automatische Bibliothekssuche 53 automatischer Batch Review 240 Automatisierung 28 B baseline penetration 128 Basisilinie Auswertung 112 Basislinie 79 Anfang der 124 angepafste Konstruktion 97 Auswertung 79 113 Bestimmung 112 113 123 Definition 112 Ende der 124 Kodierung 104 145 Konstruktion einer modifizierten 126 Konstruktionsparameter 97 modifizierte 86 Schneiden der 86 standardm ige Konstruktion 123 Basislinie ziehen 104 145 Batch 238 Batch History 241 Batch Report 239 Batch Tabelle 238 Benutzeroberfl che 239 Berechnung kalibrierte Rechenverfahren 168 mit ESTD 169 mit ISTD 172 Norm 171 unkalibrierte Rechenmethoden 167 zur Quantifizierung 164 Berechnung der Peaksymmetrie 268 Bereiche der Kalibrierung 186 Bestimmung des Rauschens 265 266 mit der ASTM Methode 266 Bestimmungsgrenzen 185 C Checkliste zur Ausf hrung Datenauswertung 53 Datenerfassung 52 Post Run Befehl 54 Post Run Makro 54 Pre Run Befehl 52 Pre Run Makro 52 Speichern der GLP Daten 54 Speichern einer Kopie der Methode 55 ChemStation allgemeine Beschreibung 13 Anschlie en einer LC der Agilent 1100 Serie 230 weitgehende Anpassung 28 CI 279 Control Chart Reports 26 CSV Datei 241 D Datei Dat
88. der Dioden Array sind nicht an diesem Test beteiligt Sie k nnen mit Hilfe des Abschnitts Die Funktion DAD Test auf Seite 293 berpr ft werden Peakintegration Der Datensatz wird noch einmal mit der Ursprungsmethode integriert und die Ergebnisse mit den im berpr fungsregister gespeicherten Ursprungsdaten verglichen Wenn die Werte nicht bereinstimmen gilt der Test als nicht bestanden Quantifizierung der Substanzen Die Substanzen des Datensatzes werden noch einmal quantifiziert und die Ergegnisse mit den im berpr fungsregister gespeicherten Ursprungsdaten verglichen Wenn die Werte nicht bereinstimmen gilt der Test als nicht bestanden Drucken der Reports Der Originalreport wird noch einmal gedruckt Folgende Seite zeigt ein Beispiel f r einen erfolgreich durchgef hrten Verifikationstest 289 berpr fung des Systems berpr fung des Systems LC 2D ChemStation A 05 01 N A Microsoft Windows 3 95 enhanced mode N A MS DOS TED N A Processor Pentium N A CoProcessor yes N A ChemStation Verification Test Details Test Name C HPCHEM 1 VERIFY DEFAULT M Original Data File C HPCHEM 1 VERIFY DATA NV 0019 D Original Acquisition Method TC11SO2 M Original Data Analysis Method TC1ISO2 M Original Operator Agilent Technologies Original Injection Date WEd Feb 17 08 59 51 1997 Original Sample Name Signals Tested Signal 1 DAD1 A Sig 254 4 Ref 450 80 of NV 0019 D Signal 2 VWD1
89. die Substanztabelle durch ein Feld ersetzt sind das nur die Information f r die festgelegte Batch Tabelle enth lt Die Symbolleiste f r die minimale Benutzeroberfl che enth lt keine direkte Schaltfl chen f r die Batch oder die Substanztabelle 239 Batch Review Funktionen f r den Review Funktionen f r den Review Datendateien k nnen auf zwei unterschiedliche Arten dargestellt werden e manuell indem aus der Tabelle ein darzustellender Lauf ausgew hlt wird e automatisch mit festgelegten Intervallen zwischen den einzelnen Datens tzen Bei der automatischen Darstellung werden nur die Probenarten dargestellt die auch in der Tabelle zu sehen sind die L ufe werden entsprechend der Reihenfolge in der sie in der Tabelle aufgef hrt sind dargestellt Der automatische berblick kann angehalten und sp ter weitergef hrt oder ganz gestoppt werden Die Standardfunktionen der ChemsStation sind auch im Batch Review verf gbar Sie beinhalten die Kalibrierung die manuelle nderung von Chromatogrammen wie z B die Gl ttung oder die manuelle Integration Alle nderungen die an einer Datendatei vorgenommen werden lassen sich kennzeichnen und mit dem Datensatz abspeichern Chromatogramme die nachbearbeitet wurden werden in der Batch Tabelle mit einem Sternchen markiert Sie k nnen auch die nderungen des aktuellen Chromatogrammes oder die nderungen aller Chromatogramme des Batches wieder verwerfen Wenn ein Lauf aufge
90. e und Performance Extended eingebunden Wenn in einer gegebenen Definition ASTM oder USP angegeben wird entsprechen die Definitionen der Referenz Es ist jedoch zu beachten da die hier verwendeten Symbole von jenen der Referenzen abweichen k nnen Die beiden Referenzen in diesem Zusammenhang sind 1 ASTM Abschnitt E 682 93 Jahrbuch der ASTM Standards Band 14 01 2 USP Die Pharmacopeia der Vereinigten Staaten XX Version pp 943 946 270 Ermittlung der Systemleistung Allgemeine Definitionen Allgemeine Definitionen Totvolumen V d2nl f 4 mit d Durchmesser der S ule cm rt Konstante Wert f r das Verh ltnis von Durchmesser zu Fl che eines Kreises l S ulenl nge cm f Anteil am S ulenvolumen das nicht durch die station re Phase ausgef llt wird und mobile Phase aufnehmen kann Standardwert betr gt f 0 68 f r Hypersil Retentionszeit einer nicht retardierten Substanz T m min Andere Bezeichnung Totzeit oder Nullzeit T V F mit F Flu rate der mobilen Phase der LC ml min 271 Ermittlung der Systemleistung Definitionen des Leistungstests Definitionen des Leistungstests Statistische Momente M0 d X x MI td E amp 2 M2 L i 1 A x 1 i 1 3 N M3 2 u 1 2 Ai X 1 i 1 4 N ma u 1 8 Ai x 1 i 1 mit N Anzahl der Fl chenabschnitte A Fl che des Abschnitts i N Summenbildung ber die Einzelbe
91. e des Bereiches der Peakbreite H Untere Grenze des Bereiches der Peakbreite 7A Mindestfl che 3 a gt Peakbreite hh 7 I N p Schwelle a _ VDE Dr BEER Tabelle 2 Fl chenwerte Peak 1 Peak 2 Peak 3 Peak 4 Peak 5 Peak 6 110 50 200 32 30 241 Ein Peak wird nur integriert wenn die Vorgaben aller drei Integrationsparameter erf llt werden Mit der Peakbreite des Peaks 3 der 96 Tabelle 3 Der Standardintegrationsalgorithmus Integrationsparameter Mindestfl che und des Schwellenwertes aus Abbildung 15 werden nur die Peaks 1 und 3 integriert Schwellenwerte Integrationsparam eter Peak 1 Peak2 Peak3 Peak4 Peak5 Peak6 Schwelle Peakbreitenbereich Mindestfl che Peak integriert dar ber dar ber dar ber darunter dar ber dar ber innerhalb innerhalb innerhalb innerhalb darunter dar ber dar ber darunter dar ber darunter darunter dar ber ja nein ja nein nein nein Peak 1 Peak 2 Peak 3 Peak 4 Peak 5 Peak 6 wird integriert da alle drei Vorgaben erf llt werden wird nicht integriert da die Fl che nicht die Mindestfl che erreicht wird integriert da alle drei Vorgaben erf llt werden wird nicht integriert weil die Peakh he den Schwellenwert nicht bertrifft wird nicht integriert weil die Peakbreite die Untergrenze des Bereiches der Peakbreite nicht erreicht wird nicht integriert weil die Peakbreite den Wert der Obergrenze berschreitet Zeitprogrammierbare Paramet
92. e des aktuellen Peaks 21 ChemStation Konzepte Zur ChemStation Software Kontrolle der Fl chenaddition negative Peakerkennung Abtastprozesse einschlie lich Befehlen zur Festlegung des L sungsmittelpeaks und Befehle zur Integratorsteuerung die Retentionszeitbereiche festlegen in denen der Integrator wirksam ist Der neue Integrationsalgorithmus Der neue Integrationsalgorithmus bietet Verbesserungen bez glich Basislinienzuweisungen f r Peaks bei Chromatogrammen und Elektropherogrammen mit driftender Basislinie Erkennung negativer Fl chen bei tangential angepassten Peaks das Problem wird ber eine nderung des Basislinienverlaufes beseitigt optionale Messung und Berechnung von Fl chen die zwischen der Basislinie und dem Signal auftreten und keinem bekannten Peak zugewiesen werden k nnen zus tzliche Anfangsparameter zum Ausschlu von Peaks die durch Rauschen entstanden sind anf ngliche Peakh he bessere Peakerkennung bei verrauschten Signalen Schultererkennung bei Peaks durch Verwendung der zweiten Ableitung oder des zweiten Grades bei Kurvenberechnungen und Anwenderfreundlichkeit der neue Integrationsalgorithmus ist auf der Benutzeroberfl che ber Symbolleisten und auch ber Tastenkombinationen zug nglich Datenauswertung Quantifizierung Der Kalibriermodus innerhalb der Datenauswertung der ChemStation erm glicht die gleichzeitige Darstellung von einem oder mehreren
93. e im Dialogfeld Calibration Settings eingestellt wurde 160 Quantifizierung Q uantifizierung In diesem Kapitel werden folgende Themen behandelt Was ist Quantifizierung Rechenmethoden in der Quantifizierung Berechnung von Area und Height Fl chen und H hen Berechnungen mit einem externen Standard ESTD Berechnung von normierten Fl chenprozenten Norm Berechnungen mit einem internen Standard ISTD Quantifizierung unidentifizierter Peaks 162 Quantifizierung Was ist Quantifizierung Was ist Quantifizierung Nach Integration und Identifizierung der Peaks ist der n chste Auswertungsschritt die Quantifizierung Die Quantifizierung bestimmt aufgrund der Peakfl che oder Peakh he die Konzentration einer Substanz in einer Probe Eine quantitative Analyse besteht aus mehreren Schritten die wie folgt zusammengefa t werden k nnen Die zu analysierende Substanz mu bekannt sein Eine Analysenmethode zur Vermessung von Proben mit dieser Substanz mu vorhanden sein Es m ssen eine oder mehrere Proben vermessen werden die eine bekannte Konzentration der Substanz erhalten so da deren Responsefaktor ermittelt werden kann Alternativ k nnen auch mehrere Proben mit unterschiedlichen Konzentrationen dieser Substanzen vermessen werden falls Ihr Detektor einen nichtlinearen Response aufweist Dieser Proze wird Mehrpunktkalibrierung Multi Level Calibration genannt Die Probe mit
94. e in der Online Hilfe beschrieben werden Ein Satz bestehend aus Daten Methode und Registerdatei wird f r jeden berpr fungstest ben tigt Das Unterverzeichnis TEMP enth lt tempor re Arbeitsdateien und Logbuchdateien Zum Beispiel wird bei Ger t 1 das Online Logbuch INSTR1 LOG und das Offline Logbuch INSTR1 2 LOG genannt Hier befinden sich Dateien die f r die Ger tetreiber erforderlich sind zum Beispiel die Initialisierungsdatei INI Diese Verzeichnisse sind nur vorhanden wenn die entsprechenden Ger te vorhanden sind Hier stehen alle Spektrenbibliotheken nur f r ChemsStations mit 3D LC Systemen LC MS Systemen und CE Systemen 39 ChemStation Konzepte Die Verzeichnisstruktur der ChemStation 40 Methoden Methoden In diesem Kapitel werden folgende Themen behandelt Was ist eine Methode Die Bestandteile einer Methode Der Status von Methoden Erstellen von Methoden Editieren von Methoden Die Verzeichnisstruktur von Methoden Was geschieht w hrend der Ausf hrung einer Methode 42 Methoden Was ist eine Methode Was ist eine Methode Eine Methode besteht aus allen erforderlichen Parametern zur Datenerfassung und Datenauswertung und gegebenenfalls aus den Aktionen vor und nach der Messung Pre und Post Run Tasks f r bestimmte Proben 43 Methoden Die Bestandteile einer Methode Die Bestandteile einer Methode Eine Methode tr gt einen Namen der aus bis zu ac
95. e tabellarisch zusammen und nennt Ergebnisse der Quantifizierung f r jede kalibrierte Komponente oder f r jeden Peak was von dem in der Methode festgelegten Report abh ngt Sequence Output Spezifikationen zur Ausgabe Im Dialogfeld Sequence output k nnen Sie auch festlegen wohin der Summmary Report der Sequenz gedruckt werden soll 258 Verwendung der ChemStation Reports Sequence Summary Reporting Die Wahl von Report to file und Eingabe eines Dateinamens sichert den Report in dieser Datei Die Standardeinstellung ist die Ausgabe in die Datei GLPrprt txt Bei GC Systemen mit Dual Injektion werden die Dateien GLPrptF txt und GLPrptB txt f r den vorderen bzw hinteren Injektor angelegt Durch die Wahl von Report to printer wird der Report auf dem aktiven Drucker des Systems ausgedruckt Print individual reports for each run aktiviert auch das Drucken von Reports nach jeder Analyse Diese Reports werden zus tzlich zu den zusammenfassenden Reports am Ende der Sequenz ausgegeben Sie k nnen f r diesen Ausdruck ein neues Ausgabeziel im Dialogfeld Sequence Output angeben oder das Ausgabeziel verwenden das in der einzelnen Methode bestimmt wurde 259 Verwendung der ChemStation Reports Sequence Summary Reporting 260 13 Ermittlung der Systemleistung Ermittlung der Systemleistung Es ist Bestandteil der guten Laborpraxis die Leistungsf higkeit von Analysenger t und Method
96. e vor der Vermessung von Proben und dem Routineeinsatz zu berpr fen Dazu z hlt auch die berpr fung des Analysensystems vor w hrend und nach Routineanalysen Die ChemStation Software bietet Hilfsmittel zur automatischen Durchf hrung dieser drei Tests Der Test eines Analysenger tes kann die berpr fung der Detektorempfindlichkeit die Reproduzierbarkeit von Retentionszeiten und Peakfl chen umfassen Der Test einer Methode kann die berpr fung der Reproduzierbarkeit von Retentionszeiten und berechneten Mengen die Selektivit t und die Stabilit t der Methode hinsichtlich Abweichungen im t glichen Einsatz umfassen Ein Systemtest kann die berpr fung der berechneten Mengen die Aufl sung zwischen zwei bestimmten Peaks und des Tailings umfassen Laboratorien die nach den Vorschriften der e GLP Good Laboratory Practice e GMP Good Manufacturing Practice und cGMP Current Good Manufacturing Practice oder e GALP Good Automated Laboratory Practice arbeiten sollten diese Tests durchf hren und s mtliche Ergebnisse dokumentieren Laboratorien die einem Qualit tssicherungssystem zum Beispiel nach ISO9000 unterliegen m ssen die korrekte Funktion ihrer Analysenger te dokumentieren Die ChemStation sammelt Ergebnisse aus mehreren Analysenl ufen und wertet diese im zusammenfassenden Report einer Sequenz statistisch aus Die Testergebnisse werden in einer Form dokumentiert die von beh rdlichen Stellen oder von unabh
97. eben Datenpunkte zur Berechnung verwendet Die Zyklen in der automatischen Bestimmung der Rauschh he berlappen um 10 267 Ermittlung der Systemleistung Berechnung der Peaksymmetrie Berechnung der Peaksymmetrie Die ChemsStation f hrt keine Bestimmung der Peakasymmetrie durch Vergleich der halben Peakbreiten in 10 oder wie von der FDA empfohlen in 5 der Peakh he durch Die Peaksymmetrie wird vom Integrator als Pseudomoment mit folgenden Gleichungen berechnet ai m a lt i L5H 2 az m 0 5H 1 5H 2 a3 m 0 5H 1 5H a4 m afat 5H m m Peak symmetry RTA 3 4 Wenn nur ein Wendepunkt oder keine Wendepunkte gefunden werden dient folgende Formel zur Berechnung der Peaksymmetrie aj a Peak symmetry a a4 268 Ermittlung der Systemleistung Berechnung der Peaksymmetrie Abbildung 45 Berechnung der Peaksymmetrie mit a Fl chenwert des Abschnittes ti Zeit des Abschnittes H H he des vorderen Wendepunktes H H he des hinteren Wendepunktes H H he im Maximum 269 Ermittlung der Systemleistung Formeln und Rechenmethoden zur Beurteilung der Systemleistung Formeln und Rechenmethoden zur Beurteilung der Systemleistung Die ChemsStation verwendet die folgenden Formeln zur Berechnung der Systemleistung in den verschiedenen Tests Die Ergebnisse werden in den Reportvorlagen Performance Performance Nois
98. ect Mindestfl che nicht erreicht wird die Basislinie vom Anfang des Peaks zum n chsten gefundenen Basislinienpunkt gem Punkt 3 in Abbildung 21 gezogen Bei einem Peakstart unter denselben Umst nden wird dieselbe Regel angewandt Schneiden der Basislinie Ein Schnittpunkt tritt auf wenn das Signal unter die konstruierte Basislinie f llt Punkt a Wenn ein Schnittpunkt mit der Basislinie vorliegt wird dieser Teil der Basislinie neu festgelegt wie bei Punkt b dargestellt 127 Der neue Integrationsalgorithmus Codes zur Beschreibung der Peaktrennung Abbildung 22 Schneiden der Basisline Tangentiale Anpassung Tangentiale Anpassung ist eine M glichkeit der Basislinienkonstruktion f r Peaks die auf der abfallenden Flanke eines L sungsmittelpeaks erscheinen Wenn die Funktion vom Anwender als zeitabh ngiger Parameter eingegeben wurde kann der L sungsmittelpeak folgenderma en tangential angepa t werden e als Geradenberechnung e als exponentielle Berechnung e als Kombination aus exponentieller und Geradenberechnung f r beste bereinstimmung Standardeinstellung Die geeignete Berechnung f r die tangentiale Anpassung wird bei der Konfigurierung der ChemStation Software f r eine bestimmte Anwendung festgelegt Die Standardeinstellung ist die Kombination aus exponentieller und Geradenberechnung Der Standardalgorithmus verwendet dieselbe Berechnung Der Wechsel von der exponentiellen zur Geradenbe
99. ei 2 22 Minuten der n chstgelegene Peak gew hlt Wenn der erwartete Peak eine Zeitreferenz oder ein interner Standard ist wird der gr te Peak innerhalb des Fensters gew hlt In beiden F llen w hlt die ChemStation den Peak bei 2 33 Minuten Wenn die Peaks gleichgro w ren w rde der Peak der dem Mittelpunkt des Zeitfensters am n chsten liegt gew hlt Zeitfenster f r die Retentions bzw Migrationszeiten Peakt Peak Be EA gg 1 809 2 631 Fenster f r Peak 2 Beim Versuch Peaks zu lokalisieren werden drei Fenstertypen benutzt e Fenster f r Referenzpeaks die nur auf Referenzpeaks angewendet werden 152 Peak Identification Peakerkennung Absolute Retentions bzw Migrationzeit e Fenster f r nicht Referenzpeaks werden auf alle anderen kalibrierten Peaks angewendet e Spezielle Fenster mit Werten f r einzelne Komponenten die im Dialogfeld Compound Details eingestellt werden Die Standardwerte f r diese Fenster werden im Dialogfeld Calibration Settings eingegeben Die Lage jeder Seite des Fensters der Retentions bzw Migrationszeit f r die Peak bereinstimmung ist die Summe aus absolutem und prozentual angepa tem Fenster Ein Fenster von 5 definiert eine Retentions bzw Migrationszeit die innerhalb eines Rahmens von plus minus 2 5 der kalibrierten Retentions bzw Migrationszeit des Peaks liegt Beispielsweise mu ein Peak mit einer Retentions bzw Migrationszeit von 2 0
100. ein Das Installationsprogramm f gt es standardm ig hinzu Hier befindet sich die US Englische Version der Hilfedateien f r die passenden Teile der Software Hier werden andere Sprachen spezifische Teile der Software gespeichert Hier werden w hrend der Installation Sicherungskopien alter Dateien abgelegt Hier befinden sich die Ger tetreiber der konfigurierten Analysenger te Verwendung f r das jeweilige Ger t 1 bis 4 Dieses Verzeichnis enth lt f nf weitere Unterverzeichnisse DATA METHODS SEQUENCE VERIFY und TEMP 38 ChemStation Konzepte Die Verzeichnisstruktur der ChemStation DATA METHODS SEQUENCE VERIFY TEMP LC GC CE SPECLIBS Hier stehen alle Verzeichnisse mit den Analysenergebnissen Es k nnen noch weitere Unterverzeichnisse enthalten sein deren Definition im Dialogfeld Sample Information oder Sequence Parameters m glich ist Unterverzeichnisse mit Ergebnissen tragen die Dateinamenerweiterung D Zu weiteren Informationen zur Struktur von Datens tzen siehe Datens tze auf Seite 60 Hier stehen alle Methodenverzeichnisse mit der Dateinamenerweiterung M Zu weiteren Informationen siehe Verzeichnisstruktur von Methoden auf Seite 50 Hier stehen die Sequenztabellen Die Sequenzdateien tragen die Dateinamenerweiterung S Hier stehen Datens tze Methoden und Ergebnisse der Datenbearbeitung in Registerdateien REG Diese Dateien f hren die Pr froutinen aus di
101. eine der enthaltenen Substanzen eingegeben sind Wenn die festgelegten Grenzwerte f r die Kontrollprobe berschritten werden wird die Sequenz gestoppt und eine Meldung in das Logbuch geschrieben Wenn Sie einen der Reportarten der ChemStation verwenden werden die Grenzwerte f r die Kontrollproben in den Analysenreport mit aufgenommen Weitere Informationen ber das Festlegen einer Sequenz mit Kontrollproben finden Sie im Abschnitt How To Ihres Online Hilfe Systems Stoppen einer Sequenz Der aktuelle Lauf wird vor dem Stop der Sequenz vollst ndig durchgef hrt Eine gestoppte Sequenz kann nicht mehr fortgesetzt werden Abbrechen einer Sequenz Die Funktion Abort unterbricht eine Sequenz sofort 204 Automatisierung Arbeiten mit Sequenzen Pausieren einer Sequenz W hrend einer Pause im Sequenzablauf k nnen die Namen von Sequenztabelle und Datens tzen nicht ge ndert werden Sie k nnen in der Sequenztabelle nur die Zeilen die noch nicht bearbeitet wurden oder in der aktuellen Zeile die Nummer des Probenfl schchens ver ndern Sie k nnen bei anstehenden Analysen Zeilen hinzuf gen l schen und ver ndern Es k nnte zum Beispiel erforderlich sein zu einer aktiven Sequenz weitere Proben hinzuzuf gen Sie k nnen die Sequenz editieren und eingeben da diese Proben im Anschlu an die aktuell laufende Sequenz bearbeitet werden Ausf hren einer Teilsequenz Eine bereits erstellte Sequenztabelle kann durch
102. einer unbekannten Konzentration der Substanz wird zur Ermittlung von Peakfl che oder Peakh he vermessen Bei bekanntem Responsefaktor kann die unbekannte Konzentration ermittelt werden F r einen korrekten Vergleich einer Probe mit unbekannter und einer mit bekannter Konzentration m ssen die Daten unter identischen Bedingungen erfa t und bearbeitet werden 163 Quantifizierung Rechenmethoden in der Quantifizierung Rechenmethoden in der Quantifizierung Die ChemStation bietet folgende Berechnungsm glichkeiten zur Konzentrationsbestimmung der Substanz einer Mischung e Prozentualer Anteil e Normalisierungen e Berechnungen mit einem externen Standard ESTD e Prozentualer Anteil relativ zu einem externen Standard ESTD e Berechnungen mit einem internen Standard ISTD e Prozentualer Anteil relativ zu einem internen Standard ISTD Die Berechnungen zur Konzentrationsbestimmung einer Substanz in einer unbekannten Probe h ngen vom Typ der Quantifizierung ab Jede Berechnungsart verwendet Peakfl che oder Peakh he erzeugt jedoch einen unterschiedlichen Report 164 Quantifizierung Korrekturfaktoren Korrekturfaktoren Zur quantitativen Berechnung werden vier verschiedene Korrekturfaktoren eingesetzt Absolute Response Factor absoluter Responsefaktor Multiplier Multiplikationsfaktor Dilution Factor Verd nnungsfaktor und Sample Amount Probenmenge Diese Faktoren dienen der Korrektur von Kalibrieru
103. em Fall wird die Kalibriertabelle manuell erstellt indem die Peaks und ihre Responsefaktoren in die Kalibriertabelle eingetragen werden Au erdem mu die Methode mit einem Standard der mindestens einen Referenzpeak enth lt rekalibriert und Abweichung aktualisiert werden Rekalibrierung mit Peakaddition Wenn eine Rekalibrierung durchgef hrt wird werden die Bereiche f r die Retentionszeiten in der Peaksummen Tabelle vor der eigentlichen Rekalibrierung aktualisiert Rekalibrierungen der Peaksumme werden auf diese Weise durchgef hrt um sicherzustellen da Abweichungen in die Zeitberechnungen aufgenommen werden Optionen f r die Rekalibrierung Es gibt mehrere M glichkeiten die Werte f r den Response in der Kalibriertabelle durch neue Kalibrierdaten zu ersetzen Mittelwert Average Der Mittelwert aus allen Ergebnissen der Kalibrierl ufe wird nach folgender Formel berechnet n Response MeasResponse Response n 1 mit n Anzahl der vorherigen Kalibrierungen MeasResponse gemessener Response Flie ender Mittelwert Floating Average Aus allen Kalibrierl ufen wird ein gewichteter Mittelwert berechnet Die neue Gewichtung wird im Dialogfeld Recalibration Settings eingetragen Weight Weight Response i I Response r MeasResponse mit Prozentanteil neue Gewichtung f r den Response in den Einstellungen f r die Rekalibrierung 194 Kalibrierung Rekalibrierung Me
104. en System Suitability Bei unkalibrierten Reports enhalten die Reportparameter die Peaknummer Retentions bzw Migrationszeit Peakfl che Peakh he Signalbeschreibung wahre Halbwertsbreite siehe auch Wahre Peakbreite Wx min auf Seite 274 Symmetrie kK Effizienz Anzahl Trennb den und Aufl sung f r jeden Peak F r kalibrierte Methoden besteht der Report aus Peaknummer Retentions bzw Migrationszeit Substanzname Menge Signalbeschreibung wahre Halbwertsbreite Symmetrie K Effizienz Anzahl Trennb den und Aufl sung f r jeden Peak Die Halbwertsbreite wird an den Wendepunkten der Peakflanke berechnet und nicht mit der komplexeren Formel des Integrators Die Werte f r Effizienz und Aufl sung basieren auf dieser berechneten Halbwertsbreite Der Kopfteil des Reports umfa t alle relevanten Informationen zur Methode einschlie lich Analysenger t S ule Kapillare Probe und Parameter der Datenerfassung Auch das Signal wird dargestellt e Performance Noise Systemleistung Rauschen kombiniert die Reportvorlage Systemleistung mit Berechnungen zum Rauschen f r einen Bereich der im Dialogfeld Edit Noise Range aus dem Men System Suitability festgelegt wird Zus tzlich wird das Rauschen als sechsfache Standardabweichung Peak zu Peak und als ASTM Rauschen angegeben Drift und Abweichungen werden ebenfalls bestimmt e Performance Extended Systemleistung Erweitert erzeugt einen erwe
105. en 61 Erweiterung 61 Methode 50 Name 61 Report 61 Datenauswertung angepa te 54 Integration 21 Quantifizierung 22 Reports 23 Spezielle Reports 23 Datenerfassung 19 Was ist Datenerfassung 59 Datensatz chromatographisch 61 spektral 61 Definition f r Linearit tstests 278 Definitionen der Reproduzierbarkeit 278 delta 215 Detektorresponse 184 185 246 Dialogfeld Calibration Settings 175 DIF Datei 241 digitales Signal 59 Drift der Response 226 E Einpunktkalibrierkurve 184 295 Index einzelne Referenzpeaks 154 Ereignismeldungen 63 Ersetzen Replace 213 Erweiterung Datei 61 ESTD Berechnung 169 Report 246 248 Verfahren 169 Excel Datei 241 explizit Kalibriersequenzen 217 externer Standard 169 Extrapolation 186 226 F Fehlermeldungen 63 einer Sequenz 207 Fenster Referenz 153 Retentionszeit 153 Fl che Mindest 94 Parameter 97 Formeln allgemeine Definitionen 271 Definitionen des Leistungstests 272 Formeln f r die Systemleistung Anzahl der Trennb den 275 Aufl sung 276 Kapazit tsfaktor 274 Mittelwert 278 Nullzeit 271 Peakbreite 274 Peaktailing nach USP 274 Regressionsanalyse 280 Regressionskoeffizient 282 relative Retention 276 relative Standardabweichung 279 Retentionszeit einer nicht re tardiertenSubstanz 271 Standardabweichung 278 282 Totvolumen 271 Totzeit 271 Funktion des neuen Integrators 111 G Genauigkeit
106. en Ihrer manuell definierten Integration in die aktuelle Methode Diese manuellen Parameter werden in der Methode separat gespeichert Sie k nnen im Dialogfeld Integration Events nicht eingesehen werden Nach Laden eines Signales werden sie nur durch Aktivieren von Apply Manual Integration Events im Dialogfeld Integration Events oder durch Wahl von Apply Manual Events from Method im Men Integration angewendet Die manuellen Integrationsparameter verwenden absolute Zeitfenster Sie f hren keine Anpassung bei einer Signalverschiebung durch 105 Der Standardintegrationsalgorithmus Manuelle Integration 106 Der neue Integrationsalgorithmus D er neue Integrationsalgorithmus In diesem Kapitel werden folgende Themen behandelt Der neue Integrator Wie wird der neue Integrator an eine Konfiguration angepa t Ein berblick ber die Funktionen des neuen Integrators Integrieren von Peaks in der Praxis Mehr ber den neuen Integrator Basislinienzuweisung Codes zur Beschreibung der Peaktrennung Tangentiale Anpassung von Peaks Berechnung der Peakfl che Integrationsparameter Anwendung des neuen Integrators 108 Der neue Integrationsalgorithmus Der neue Integratoralgorithmus Der neue Integratoralgorithmus Der neue Integratoralgorithmus zielt auf bessere bessere Robustheit Zuverl ssigkeit und Anwenderfreundlichkeit ab und wurde in der Version A 04 01 der ChemsStation
107. en Methode gespeichert womit eine vollst ndige Reproduzierbarkeit der Daten zu einem sp teren 31 ChemStation Konzepte Zur ChemStation Software Zeitpunkt m glich ist Die Methode wird nach Abschlu aller analytischer Schritte gespeichert Alle Reports tragen Datumseintr ge und eine nachvollziehbare Seitennummerierung Seite x von y Der Anwender kann einen Reportumfang von einer einfachen Zusammenfassung bis zur Darstellung aller Ger tedetails w hlen vgl Abschnitt zu Reports oben GLP Registerdateien die als Teil einer Methode definiert werden sichern alle Originaldaten mit Probeninformation die Datenauswertemethode die chromatographischen Me werte die Ger teeinstellungen die Ergebnisse aus Integration und Quantifizierung die Daten des Reports und das Logbuch des Analysenlaufes in einer bin ren Registerdatei mit einem Pr fsummenschutz Dieses Bin rformat kann nicht editiert werden und sichert daher die Originalit t der Ergebnisse Die Datei enth lt ein Revisionsschema welches anzeigt wenn die Daten erneut bearbeitet werden In der Sequenztabelle k nnen Kontrollen definiert und dazu verwendet werden die Leistungsf higkeit des Ger tes ber einen Vergleich zu den Ergebnissen der Kontrollproben automatisch zu berpr fen wenn das Ger t unbeobachtet l uft Ergebnisse die au erhalb eines vom Anwender festgelegten Akzeptanzbereiches liegen f hren zum Abruch der automatischen Abarbeitung von Sequenzen durc
108. en auf halber Peakh he Kardinalpunkte besitzen eine horizontale Koordinate in Form der verstrichenen Zeit eine vertikale Koordinate in Form der H he von der Basislinie aus sowie andere Parameter die der Integrator zur Berechnung der Peakfl chen verwendet Fl chenbestimmung f r Basislinien getrennte Peaks BB AN y Im Fall eines einfachen getrennten Peaks wird die Peakfl che als Fl che oberhalb der Basislinie zwischen Peakanfang und Peakende bestimmt ber Strichmarkierungen gekennzeichnet Die Fl che die der Integrator bei der Integration berechnet wird folgenderma en bestimmt e bei Basislinien getrennten BB Peaks liegt die Fl che oberhalb der Basislinie zwischen den Strichmarkierungen e Bei Tal zu Tal getrennten VV Peaks wird die Fl che oberhalb der Basislinie mittels Lotf llung von den Strichmarkierungen aus geteilt 131 Der neue Integrationsalgorithmus Berechnung der Peakfl che Abbildung 27 Fl chenbestimmung f r Tal zuTal getrennte Peaks e beitangentialen Peaks T liegt die Fl che oberhalb der neu bestimmten Basislinie e bei L sungsmittelpeaks S liegt die Fl che oberhalb der horizontalen Verl ngerung vom letzten gefundenen Basislinienpunkt und unterhalb der korrigierten Basislinie des tangentialen Peaks T Ein L sungsmittelpeak kann eventuell zu langsam ansteigen um erkannt zu werden oder eine Peakgruppe kann der Erfahrung zufolge ein L sungsmittelpeak mit einigen Aufsetzern
109. en zug nglich Die beiden Integrationsalgorithmen sind genauer in Kapitel5 Der Standardintegrationsalgorithmus und Kapitel6 Der neue Integrationsalgorithmus 73 Integration Die Integrationsalgorithmen der ChemStation 74 Der Standardintegrations algorithmus Der Standardintegrationsalgorit hmus In diesem Kapitel werden folgende Themen behandelt e Der Standardintegrationsalgorithmus e Integrationsparameter e Integrationsarten e Autointegration e Integration e manuelle Integration 76 Der Standardintegrationsalgorithmus Der Standardintegrationsalgorithmus Der Standardintegrationsalgorithmus Der Standardintegrationsalgorithmus war Bestandteil fr herer Versionen der ChemsStation und ist Bestandteil der meisten anderen Auswertungssoftware Pakete f r analytische Daten von Agilent Technologies In diesem Kapitel wird die Funktionsweise des Standardintegrationsalgorithmus behandelt Zur Integration eines Signals f hrt der Standardintegrationsalgorithmus folgende Aktionen aus e F rjeden Peak werden die Start und Endzeiten bestimmt und mit vertikalen Strichmarkierungen markiert e Das Maximum jedes Peaks wird bestimmt Es entspricht der Retentions bzw Migrationszeit e er konstruiert eine Basislinie e Fl che H he und Peakbreite werden f r jeden Peak berechnet Dieser Vorgang wird mit den sogenannten Integrationsparametern kontrolliert Die beiden wichtigsten Parameter
110. end of the current peak r ckw rtige Anpassung der Basislinie vom Ende des aktuellen Peaks Kontrolle der Fl chenaddition negative Peakerkennung Abtastprozesse einschlie lich Befehlen zur Festlegung des L sungsmittelpeaks und Befehle zur Integratorsteuerung die Retentionszeitbereiche festlegen in denen der Integrator wirksam ist 72 Integration Die Integrationsalgorithmen der ChemStation F higkeiten des neuen Integrators Der neue Integrator bietet folgende F higkeiten die im Vergleich zum Standardintegrator verbessert wurden optimierte Basislinienzuweisung unter Verwendung von Parametern aus individuellen Methoden und Datens tzen zus tzliche Anfangsparameter zum Ausschlu von Peaks die durch Rauschen entstanden sind anf ngliche Peakh he bessere Peakerkennung bei verrauschten Signalen Schultererkennung bei Peaks durch Verwendung der zweiten Ableitung oder des zweiten Grades bei Kurvenberechnungen und Erweiterung der Rechenmodi f r die tangentiale Anpassung durch die Funktion geradlinig exponentiell bei der die tangentiale Anpassung von einem exponentiellen Verlauf in eine gerade Linie bergeht verbesserte Aufnahme von Datenpunkten mit unterschiedlichen Abst nden zur Verbesserung der DAD LC Datens tze die aus DAD Spektren rekonstruiert wurden Anwenderfreundlichkeit der neue Integrationsalgorithmus ist auf der Benutzeroberfl che ber Symbolleisten und auch ber Tastenkombination
111. ende Datei ist durch eine Kontrollzahlsumme gesch tzt und als Bin rcode verschl sselt damit sie nicht ver ndert werden kann Im Dialogfeld zur Ansicht des Registers GLPsave k nnen Sie folgende Optionen ausw hlen e Laden der Ursprungsmethode e Laden der Ursprungssignale e Laden der Daten zur Ger tefunktion e Ausdruck der Ursprungsmethode e Ausdruck der urspr nglichen Integrationsergebnisse e Ausdruck der urspr nglichen Quantifizierungsergebnisse e Erstellen eines Originalreports aus Ursprungsmethode und signalen Mit Hilfe der Funktion zur Ansicht der GLP k nnen Sie zeigen da es sich bei Ihren Chromatogrammen um Originaldaten handelt Weiterhin l t sich anhand der Daten zur Ger tefunktion die Qualit t der Analyse unter Beweis stellen und die Berechtigung der Datenbewertung demonstrieren 291 berpr fung des Systems Das Register GLPsave Sie k nnen beispielsweise e den Datenauswertungsteil der Methode die zum Zeitpunkt der Datenauswertung verwendet wurde neu laden und ausdrucken um zu beweisen da die in den Ergebnissen dargestellte Datenauswertung f r die Analyse in keiner Weise ver ndert wurde e die Integrations und Quantifizierungsergebnisse ohne erneute Berechnung aufrufen um die Echtheit des Reports unter Beweis zu stellen 292 berpr fung des Systems Die Funktion DAD Test Die Funktion DAD Test In einem Labor mit GLP Standard k nnen Detektortest
112. ene Variablen definieren Verzweigungen und Schleifen sowie Ein Ausgabeoperationen festlegen Diese umfassen Dateioperationen Interaktionen mit dem Anwender eigene verschachtelte Makros und Datenabgleich und Austausch mit anderen MS DOS oder Windows Anwendungen F r weitere Informationen zur weitgehenden Anpassung schlagen Sie bitte im Macro Programming Guide nach der ber die Online Hilfe verf gbar ist Die ChemsStation unterst tzt das Microsoft ODBC Protokoll mit Befehlen um Verbindungen zu Datenbanken herzustellen und wieder zu trennen den Status einer bestimmten Verbindung abzulesen und die Structured Query Language SQL auszuf hren Automatisierung Die ChemStation kann Sequenzen ausf hren die mehrere Methoden beinhalten Im Parametersatz einer Sequenz kann die Verwendung automatisch erzeugter Dateien oder von sequentiell numerierten Dateien mit einem Prefix nach Benutzervorgaben von 7 Zeichen L nge eingestellt werden Der Anwender kann vollst ndige Sequenzen w hlen oder solche die nur die Datenauswertung durchf hren Weiter kann unter mehreren Abschlu befehlen oder einem Anwender definierten Abschlu makro gew hlt werden das dann ausgef hrt wird wenn eine Sequenz durch eine Fehlerbedingung beendet wird oder alle Analysen durchgef hrt wurden Die Sequenztabelle mit den auszuf hrenden Analysen wird hnlich einer Tabellenkalkulation bedient Hier k nnen die Nummern von Probenfl schchen Probennamen Analysenmet
113. enn die Ergebnisse nach Retentions bzw Migrationszeit sortiert werden ist nur eine Datei f r die vollst ndige Tabelle erforderlich zum Beispiel REPORT01 CSV Wenn die Ergebnisse nach dem Signal sortiert werden ist f r jedes Signal eine getrennte Tabelle erforderlich In diesem Fall lautet die Namensgebung Report01 CSV bis ReportNN CSV wobei NN die Nummer des Signals ist XLS Der Report wird in das XLS Format der Tabellen von Microsoft Excel exportiert Die Daten m ssen im Allgemeinen nachbearbeitet werden 255 Verwendung der ChemStation Reports Sequence Summary Reporting Sequence Summary Reporting berblick Die ChemsStation kann verschiedene Standardreports f r einzelne Analysenl ufe ausgeben Der zusammenfassende Report einer Sequenz ist eine weitere M glichkeit der Reporterstellung und erm glicht Ihnen Berechnungen und Parameterausgaben ber mehrere Analysen zu erstellen Das ist zum Beispiel als Beleg der Stabilit t des Instrumentes oder einer neuen Methode erforderlich Ein zusammenfassender Report kann folgende Bestandteile aufweisen e Eine Titelseite e Konfiguration der Analysenger te einschlie lich Revisionsnummer von Ger t und Einzelheiten zur analytischen S ule Kapillare e Eine Sequenztabelle mit einer Beschreibung des vorgesehenen Ablaufs der automatischen Analysen e Logbucheintr ge mit einer Beschreibung des Ablaufes der Sequenz mit unerwarteten Ereignissen die w hrend des Ablaufes auf
114. enz kann so definiert werden da f r den Kalibrierlauf vor den Proben ein anderes Fl schchen benutzt wird als f r den nach den Proben indem die entsprechende Anzahl von Kalibrierfl schchen eingesetzt wird Auch in diesem Fall m ssen die Kalibrierzeilen innerhalb der Sequenz wie auch die Positionen der Kalibrierfl schchen aneinandergrenzen Ob die Kalibrierfl schchen f r die umschlie ende Sequenz zyklisch nacheinander oder nur einmal injiziert werden h ngt einzig von der Anzahl der Kalibrierfl schchen f r jede Stufe ab und davon wie h ufig innerhalb der Sequenz rekalibriert werden soll Im folgenden Beispiel sind 3 Injektionen mit umschlie ender Kalibrierung definiert Die Kalibriersubstanz f r den anf nglichen Kalibrierlauf wird aus einem anderen Fl schchen entnommen als die f r den abschlie enden Kalibrierlauf Nach jeder Probeninjektion soll rekalibriert werden folglich 232 Automatisierung Zyklische Rekalibriersequenzen mit mehreren Probenfl schchen die dieselbe Standardverd nnung enthalten mu das Rekalibrierintervall 1 betragen Die Anzahl an Kalibierzeilen pro Stufe entspricht der Anzahl der Proben plus eins Tabelle 18 Verschiedene Fl schchen f r die Kalibrierl ufe vor und nach den Probeninjektionen Vial No Sample Name Sample Type Method Name No ofinj Lvi UpdRT UpdRF Intervall 1 Calla Calib Methode A 1 1 Brkt Brkt 1 2 Cal1b Calib Methode A 1 1 Brkt Brkt 1 3 Callc Calib Methode A 1
115. enzdetektor den HP 1050 Dioden Array Detektor den variablen Wellenl ngendetektor der HP 1050 Serie und den HP 1050 Multiwellenl ngendetektor Beim Zweikanal A D Wandler Agilent 35900C D E werden dieselben Werte in der Einheit mV angewandt Der Schwellenwert sollte nicht dazu verwendet werden Peaks auszuschlie en deren H he mit den kleinsten interessierenden Peaks vergleichbar ist weil dieser Parameter daf r nicht ausgelegt ist Zum 93 Tabelle 1 Der Standardintegrationsalgorithmus Integrationsparameter Schwellenwerte f r LC Detektoren Einstellung LC Detektor mAU A D Wandler mV 7 0 03125 6 0 0625 5 0 125 4 0 25 3 0 5 2 1 1 2 0 4 1 8 2 16 3 31 4 62 5 125 6 250 7 500 8 1000 Ausschlu kleiner Peaks wird der Einsatz der Funktion Area Reject Mindestfl che empfohlen Area Reject Mindestfl che Die Einstellung der Mindestfl che schlie t Peaks aufgrund ihrer Fl che aus Peaks deren Fl chen kleiner sind als die Mindestfl che werden nicht in den Report aufgenommen Shoulder Detection Schultererkennung Bei aktivierter Schultererkennung benutzt der Integrator einen erweiterten Algorithmus der auch Schultern eines Peaks erkennen kann Anpassung von Schwellenwert und Peakbreite Sowohl Peakbreite als auch Schwellenwert sind wichtige Vorgaben f r die Integration Ver nderungen f hren zu anderen Ergebnissen e Eine Erh hung von sowohl Schwellenwert
116. er Timed Events Sie k nnen die Konstruktion der Basislinie mit zeitabh ngigen Integrationsparametern optimieren wenn die standardm ige Konstruktion nicht ausreicht Diese Parameter k nnen zur Bestimmung der endg ltigen Peakfl chen und zur Korrektur schneller oder langsamer Abweichungen der Basislinie dienen Weitere Informationen zu Integrationsparametern finden Sie in Ihrer Online Hilfe 97 Der Standardintegrationsalgorithmus Tabellen mit Integrationsparametern Tabellen mit Integrationsparametern Jedes Signal Chromatogramm oder Elektropherogramm das mit einer bestimmten Methode erfa t wurde kann ber seine eigenen Integrationsparameter verf gen die in einer Tabelle zur Signalintegration eingestellt werden Diese Tabellen werden nicht benutzt bis sie speziell eingerichtet werden e Anwender k nnen diese ausw hlen und Parameter im Dialogfeld Integration Events definieren e Anwender k nnen Autointegrate w hlen wodurch die Parameter f r jedes Signal optimiert werden Falls die individuelle Parametertabelle des Signals nicht benutzt wird werden alle Signale mit der Standardtabelle der Integrationsparameter integriert 98 Der Standardintegrationsalgorithmus Integrationsmethoden Integrationsmethoden Die ChemsStation bietet folgende Integrationsmethoden e Autointegration e Integration e manuelle Integration 99 Der Standardintegrationsalgorithmus Autointegration
117. er zwingenden Fol gen im Zusammenhang mit Ausstattung Lei stungsf higkeit oder Gebrauch dieses Materi als haftbar gemacht wer den Agilent Technologies Deutschland GmbH Hewlett Packard Strasse 8 76337 Waldbronn Deutschland Agilent ChemStation Informationen zu Ihrer ChemsStation In diesem Handbuch In diesem Handbuch werden die verschiedenen Konzepte der ChemStation beschrieben Sie k nnen damit einen Einblick in die Funktionsweise Ihrer ChemsStation gewinnen Informationen zur Verwendung der ChemsStation finden Sie im Online Hilfesystem sowie im integrierten Tutorial Inhalt ChemsStation Konzepte Allgemeine Beschreibung 13 ChemsStation Hardware 16 Zur ChemsStation Software 17 Ger testeuerung 33 Dokumentation 34 Die Verzeichnisstruktur der ChemStation 36 Methoden Was ist eine Methode 43 Die Bestandteile einer Methode 44 Der Status von Methoden 46 Erstellen von Methoden 47 Editieren von Methoden 48 Verzeichnisstruktur von Methoden 50 Was geschieht w hrend der Ausf hrung einer Methode 51 Zusammenfassung des Methodenablaufs 56 Datenerfassung Was ist Datenerfassung 59 Datens tze 60 Online Monitore 62 Logbuch 63 Statusinformationen 64 Inhalt Integration Was ist eine Integration 69 Was wird bei der Integration durchgef hrt 70 Die Integrationsalgorithmen der ChemStation 71 Der Standardintegrationsalgorithmus Der Standardintegrationsalgorithmus 77 Funkti
118. erer kalibrierter Peaks Im dritten Durchgang werden alle anderen Peaks aus der Kalibriertabelle gesucht Diese nicht Referenzpeaks der Kalibriertabelle werden mit dem Retentions bzw Migrationszeitfenster auf bereinstimmung mit den Peaks des Analysenlaufes untersucht Jeder kalibrierte Nicht Referenzpeak wird in der Kalibriertabelle mit seiner Retentions bzw Migrationszeit angegeben Diese wird an den 159 Peak Identification Peakerkennung Die Durchf hrung der Identifizierung entsprechenden Lauf anhand der Vor Identifizierung der Zeitreferenzpeaks angepa t Das Fenster f r die Retentions bzw Migrationszeit des kalibrierten Peaks wird anhand der korrigierten Retentions bzw Migrationszeiten des kalibrierten Peaks angepa t Werden mehrere Peaks in demselben Fenster gefunden wird der Peak mit der Retentions bzw Migrationszeit gew hlt die am n chsten der erwarteten Retentions bzw Migrationszeit liegt und die auch die Vorgaben zum Qualifier erf llt Klassifizierung unidentifizierter Peaks Falls Peaks verbleiben die nicht identifiziert sind werden sie als unbekannt klassifiziert Die ChemStation versucht die unbekannten Peaks derselben Komponente zu einer Gruppe zusammenzufassen Wenn ein Peak in mehreren Signalen entdeckt wurde werden die Peaks mit derselben Retentions bzw Migrationszeit in jedem Signal dieser Komponente zugeordnet Unbekannte Peaks werden im Report aufgenommen wenn die entsprechende Vorgab
119. erwendet wird kann vom PC kein weiteres Ger t unterst tzt werden 14 ChemStation Konzepte Allgemeine Beschreibung Produkte zur Datenauswertung Es sind auch drei Produkte zur Datenauswertung verf gbar die ohne angeschlossene Analysensysteme funktionieren Sie sind zur Datenauswertung in B roumgebungen ausgelegt e Die ChemStation f r die Datenauswertung Bestellnummer G2090AA verf gt ber dieselben M glichkeiten der Datenauswertung wie die ChemsStations e Die ChemStation f r LC 3D Datenauswertung Bestellnummer G2190AA verf gt ber eine Diodenarray Spektrenauswertung und die M glichkeiten der ChemsStation f r die Datenauswertung e Die ChemsStation f r LC MSD Datenauswertung Bestellnummer G2730AA verf gt ber Diodenarray Spektrenauswertung Massenspektrenauswertung sowie die M glichkeiten der ChemsStation f r Datenauswertung 15 ChemStation Konzepte ChemsStation Hardware ChemsStation Hardware N here Informationen zur ChemStation Hardware finden Sie bei Installieren Ihrer ChemsStation 16 ChemStation Konzepte Zur ChemStation Software Zur ChemsStation Software Betriebssystem Die ChemsStation erfordert entweder Microsoft Windows NT 4 0 erweitert mit dem Micrsoft Service Pack 3 SP3 oder das Betriebssystem Windows 95 F r die Control Charts Funktion der ChemStation ben tigt man Microsoft Excel 97 Methoden und Sequenzen Eine analytische Methode ist die vollst ndige
120. esponsefaktor aus dem Dialogfeld Calibration Settings Sie k nnen an diesen Formeln sehen daf die Variationen des ISTD Response zur Korrektur in der Mengenbestimmung der unbekannten Substanz benutzt werden 2 Verwendung eines kalibrierten Peaks Damit wird sichergestellt da zur Quantifizierung aller Peaks derselbe Responsefaktor benutzt wird Der Responsefaktor der ausgew hlten Substanz und die unkalibrierten Peaks werden durch Rekalibrierungen korrigiert nderungen des Responsefaktors des kalibrierten Peaks f hren zur gleichen nderung des Responsefaktors des unbekannten Peaks Falls eine Kalibriertabelle erstellt wurde k nnen Sie in Using Compound des Dialogfeldes Calibration Settings eine Substanz ausw hlen Die Gleichungen zur Berechnung der Menge einer Substanz eines unkalibrierten Peaks x sind oben aufgef hrt 175 Quantifizierung Berechnungen mit internem Standard ISTD 176 Kalibrierung Kalibrierung In diesem Kapitel werden folgende Themen behandelt Definition der Bergriffe Kalibriertabelle Kalibrierkurve Unbekannte Proben Kalibrierverfahren Gruppenkalibrierung Rekalibrierung 178 Kalibrierung Definition der Begriffe Definition der Begriffe Kalibrierung Eine Kalibrierung ist ein Verfahren zur Berechnung absoluter Substanzkonzentrationen Hierzu werden spezielle Kalibrierproben Standards gemessen und ihr Response ermittelt Die Kalibriertabelle wird
121. eters tze f r die chromatographischen oder elektrophoretischen Bedingungen und in der Datenauswertung verwendet werden 200 Automatisierung Sequenzparameter Sequenzparameter Das Dialogfeld Sequence Parameters enth lt Informationen die f r alle Proben einer Sequenz gleich bleiben Sie k nnen in diesem Dialogfeld folgende Parameter einstellen e Informationen zum Verzeichnis der Datens tze und zum Anwender der Anwendername aus dem Dialogfeld Operator Name wird angezeigt e Angaben zur Ausf hrung der Sequenz durch Wahl von Parametern im Dialogfeld Part of Methods to Run Hier k nnen zum Beispiel folgende Eingaben gemacht werden e Durchf hrung der Sequenz entsprechend der RunTime Checkliste e Nur die Datenerfassung durchf hren e Nur die Datenauswertung durchf hren Wenn die Option Datenauswertung Reprocessing gew hlt wird k nnen Sie zwischen den Probendaten die bei der urspr nglichen Auswertung der Proben gew hlt wurden oder aktualisierten Daten w hlen Dies geschieht durch Aktivieren des Ankreuzk stchens Use Sequence Table oder Eingabe der Daten in die Sequenztabelle e Mit dem Parameter Shutdown kann festgelegt werden was nach Ende der Sequenz geschehen soll e Legen Sie fest ob Strichcodes verwendet werden sollen und was bei einer Nicht bereinstimmung der Strichcodes geschehen soll dies setzt voraus da Sie einen Strichcodeleser an Ihrem System installiert haben
122. ethode A und Methode B Zei l Proben Methoden lnj V Pobenart CAL Update Update e Vial Iname name ial level IRF RT Intervall 1 1 Methode A 1 Kalibrierung 1 Mittelwert No update 2 Average Kein Update 2 2 Methode A 1 Kalibrierung 2 Mittelwert No update 2 Average Kein Update 219 Automatisierung Zyklische Kalibriersequenzen mit mehrerer Kalibrierpunkte Tabelle 11 Sequenztabelle f r Methode A und Methode B continued Zei l Proben Methoden lnj V Pobenart CAL Update Update e Wial name name ial level IRF RT Intervall 3 110 Methode A 4 1 Methode A 5 12 Methode A 6 13 Methode A 7 14 Methode A 8 3 Methode B Kalibrierung 1 Mittelwert No update 3 Average Kein Update 9 5 Methode B 2 Kalibrierung 2 Mittelwert No update 3 Average Kein Update 10 120 Methode B 11 121 Methode B 12 122 Methode B 13 123 Methode B 14 124 Methode B Analysenfolge der Methode A Dieser Abschnitt beschreibt die Analysenfolge der Methode A die den ersten Teil der Sequenz mit zwei Methoden darstellt Analysenfolge der Methode B Dieser Abschnitt beschreibt die Analysenfolge der Methode B die den zweiten Teil der Sequenz mit zwei Methoden darstellt Methode B unterscheidet sich in folgenden Punkten von Methode A e Der Level 2 wird mit 2 Injektionen pro Probenfl schchen gewonnen Das Intervall wird auf 3
123. ext Die Auswahl des Dialogfeldes Items and Limits for Extended Statistics werden nur bei Wahl der Option Extended Statistic im Dialogfeld Sequence Summary Parameters verwendet Bei Wahl der Option Standard Statistic im Dialogfeld Sequence Summary Parameters werden folgende statistische Auswertungen angeboten Retentions bzw Migrationszeit Fl che H he Menge Halbwertsbreite des Peaks Symmetrie Die statistische Auswertung unterscheidet nicht zwischen verschiedenen Kalibrierpunkten in einer Sequenz mit Mehrpunktkalibrierung Das bedeutet da konzentrationsabh ngige Angaben Fl che H he Menge siehe Dialogfeld zu Angaben und Grenzen von Extended Statistics gemeinsam betrachtet werden Die Werte von Statistics for Calibration Runs sind bei Mehrpunktkalibrierungen in Sequenzen daher nicht anwendbar Summary Zusammenfassung Die Wahl von Summary druckt eine bersicht ber die analysierte Probenreihe und die verwendeten Methoden Wenn Summary zusammen mit anderen Wahlm glichkeiten aus Sequence Summary gew hlt wird werden Verweise mit Seitenzahlen auf andere Teile der Zusammenfassung eingef gt Es sind zwei Vorlagen f r Summary verf gbar Sample Summary pr sentiert die Analysenl ufe der Sequenz tabellarisch mit Probeninformationen wie Probenname Name des Datensatzes Methode und Nummer des Probenfl schchens Compound Summary fa t die Ergebniss
124. findet das Peakmaximum und legt die Retentions bzw Migrationszeit ab e er erkennt das Peakende und markiert es mit einer vertikalen Strichmarkierung e er konstruiert eine Basislinie e er berechnet f r jeden Peak die Fl che H he und Peakbreite Dieser Vorgang wird mit den sogenannten Integrationsparametern kontrolliert Die wichtigsten Parameter sind die anf ngliche Steigungsempfindlichkeit Slope Sensitivity Peakbreite Peak Width und Mindesth he Height Reject Die ChemStation erm glicht die Eingabe von Anfangswerten f r diese und andere Parameter Die Werte gelten f r den Beginn eines Signaldatensatzes In den meisten F llen gen gen diese Werte f r eine gute Integration des gesamten Signals Es k nnen jedoch F lle auftreten wo Sie eine Integration auf bestimmte Weise durchf hren wollen Zur weiteren Optimierung einer Integration gibt es folgende M glichkeiten e die Verwendung der zeitprogrammierten Parameter der ChemStation e die Verwendung eines Makros um die Funktionsweise des Integrators anzupassen 111 Der neue Integrationsalgorithmus Funktion des verbesserten Integrators Weitere Informationen finden Sie unter dem Abschnitt Einstellungen der festen Parameter f r den neuen Integrator und im Macro Programming Guide der ber die Online Hilfe verf gbar ist Definition der Anfangsbasislinie Der Integrator verwendet Parameter aus der Methode und den Datens tzen um die Basislinie f r die je
125. g geschieht durch Multiplikation der Gewichtung mit der kleinsten Response Beispielsweise ist die Gewichtung eines Kalibrierpunktes mit der Menge y 1 y b wobei b die Reponse bezogen auf die kleinste Menge Kalibriersubstanz die in den Kalibrierstandards enthalten ist darstellt Wenn der Ursprung einbezogen ist wird ihm der Mittelwert der Gewichtungen der anderen Kalibrierpunkte zugewiesen Ein Kalibrierpunkt der Menge x erh lt die Gewichtung 1x normiert auf die niedrigste Konzentration So ergibt sich f r den h chsten Gewichtungsfaktor der Wert 1 Die Normierung wird ber die Multiplikation der Gewichtung mit der niedrigsten Konzentration durchgef hrt Beispielsweise resultiert die Gewichtung f r einen Kalibrierpunkt der Menge x aus 1 wobei a die kleinste Menge Kalibriersubstanz darstellt die in den Kalibrierstandards enthalten ist Ein Kalibrierpunkt mit der Response y hat die Gewichtung 1 y auf die niedrigste Response normalisiert so dass der gr te Gewichtungsfaktor 1 ist Die Normalisierung geschieht durch Multiplikation der Gewichtung mit der kleinsten Response Beispielsweise ist die Gewichtung eines Kalibrierpunktes mit der Response y 1 y b wobei b die Reponse bezogen auf die kleinste Menge Kalibriersubstanz die in den Kalibrierstandards enthalten ist darstellt Jeder Kalibrierpunkt erh lt eine Gewichtung entsprechend der vorliegenden Anzahl an Rekalibrierungen f r diesen Punkt Es wird keine Normie
126. g 2 Analysenlauf 3 4 SimpReg 3 Analysenlauf 4 5 SimpReg 4 Analysenlauf 5 6 SimpReg 1 regelm ige Kalibrierung 6 7 SimpReg 5 Analysenlauf 7 8 SimpReg 6 Analysenlauf 225 Automatisierung Umschlie ende zyklische Kalibriersequenzen Bracketing Umschlie ende zyklische Kalibriersequenzen Bracketing Dieser Sequenztyp interpoliert Kalibrierungen ber eine oder mehrere unbekannte Proben Dies dient einer exakteren Ber cksichtigung des Response des Analysenger tes zum Analysenzeitpunkt Durch die Verwendung einer umschlie enden Kalibrierung k nnen die Auswirkungen einer instrumentellen Drift minimiert werden Beispiel Folgende Situation soll betrachtet werden e Das Analysenger t zeigt einen Response mit Drift e Es werden drei Injektionen identischer Mischungen mit drei Substanzen durchgef hrt e Zweidieser Injektionen werden als Kalibrierproben eine weitere als Probe spezifiziert e Die erste und dritte Probe sind die Kalibrierproben e Die zweite Injektion ist eine Probe gem Abbildung 41 Zur Berechnung eines m glichst exakten Ergebnisses f r die zweite Injektion der Probe mu zwischen den beiden Kalibrierungen eine Interpolation durchgef hrt werden wie in Abbildung 41 gezeigt Dieser Proze hei t umschlie ende Kalibrierung Bracketing 226 Abbildung 41 Automatisierung Umschlie ende zyklische Kalibriersequenzen Bracketing Umschlie ende Kalibrierung Zeit Ger tedrift l
127. geben ist gibt dieser Auskunft ber die Peakart Diese Codes werden bei den tabellarischen Ergebnisse in einer Spalte namens Type aufgef hrt Der erste Buchstabe beschreibt die Basislinie am Peakanfang der zweite die Basislinie am Peakende Codes f r die Peaktrennung Alle in den ChemsStation Reports verwendeten Codes sind in alphabetischer Reihenfolge aufgelistet A Die Peakintegration wurde abgebrochen Peakart Peakanfang oder Peakende auf der Basislinie Peakanfang oder Peakende auf horizontaler Basislinie Dies ist ein negativer Peak Peakart S zZ uo Peakanfang oder Peakende durch Schneiden der Basislinie S Der Integrator erkannte den Peak als L sungsmittelpeak Peakart T Der Peak begann oder endete w hrend die Funktion tangentiale Anpassung Tangent Skim gerade Linie eingeschaltet war Peakart V Peakanfang oder Peakende durch Lotf llung von einem Talpunkt Der Peak ist ein fl chenaufsummierter Peak Area Summed Peak Peakart Der Peak ist negativ liegt also unterhalb der Basislinie Peakart Bei manueller Integration k nnen einige andere Codes als Basislinien oder Peaktrennungscodes erscheinen M Der Peak wurde manuell integriert f Der Peak wurde durch manuelle Integration erzwungen Falls ein Peak vor einem manuell integrierten Peak erscheint und sein Ende von einer manuellen Integration 84 Abbildung 7 Der Standardintegrationsalgorithmus Codes zur Beschreibung der Peaktre
128. gestellt 220 Tabelle 12 Automatisierung Zyklische Kalibriersequenzen mit mehrerer Kalibrierpunkte Analysenfolge der Methode A Inj Nr Methode Vial Operation 1 Methode A Level 1 und Report 2 Methode A 2 Level 2 und Report 3 Methode A 10 Analysenlauf und Report 4 Methode A 11 Analysenlauf und Report 5 Methode A Level 1 und Report 6 Methode A 2 Level 2 und Report 7 Methode A 12 Analysenlauf und Report 8 Methode A 13 Analysenlauf und Report 9 Methode A Level 1 und Report 10 Methode A 2 Level 2 und Report 11 Methode A 14 Analysenlauf und Report Bitte beachten Sie da die Ergebnisse in Tabelle 12 und Tabelle 13 durch Verwendung von Partial Sequence dargestellt werden k nnen Nachdem die Sequenztabelle erstellt wurde kann damit eine Vorschau auf die Ablauffolge aufgerufen werden 221 Automatisierung Zyklische Kalibriersequenzen mit mehrerer Kalibrierpunkte Tabelle 13 Analysenfolge der Methode B Inj Nr Methode Vial Operation 12 Methode B 3 Level 1 und Report 13 Methode B 5 Level 2 und Report 14 Methode B 5 Level 2 und Report 15 Methode B 20 Analysenlauf und Report 16 Methode B 21 Analysenlauf und Report 17 Methode B 22 Analysenlauf und Report 18 Methode B 3 Level 1 und Report 19 Methode B 5 Level 2 und Report 20 Methode B 5 Level 2 und Report 21 Methode B 23 Analysenlauf und Report 22 Methode B 24 Analysenlauf und Report 222 Automatisierung K
129. gorithmus vergleicht zun chst die Ausgangswerte aus den Peakerkennungsfiltern mit der anf nglichen Slope Sensitivity Steigungsempfindlichkeit um den Anstiegsakkumulator zu erh hen oder zu senken Wenn sein Wert 2 15 betr gt legt der Integrator diesen Punkt als Indikator f r einen Peakanfang fest Der Peakerkennungsalgorithmus ist in Tabelle 5 und Tabelle 6 zusammengefa t 119 Tabelle 5 Tabelle 6 Der neue Integrationsalgorithmus Peakerkennung Steigende Werte f r den Anstiegsakkumulator Ableitungsfilter 1 3 Ausgangswerte gegen ber Steigungsempfindlichkeit Filter 1 Filter 2 Filter 3 Steigung gt Steigungsempfindlichkeit 8 5 3 Kr mmung gt Steigungsempfindlichkeit 0 2 1 Steigung lt Steigungsempfindlichkeit 8 5 3 Steigung lt Steigungsempfindlichkeit 4 2 1 Kr mmung lt Steigungsempfindlichkeit 0 2 1 In Tabelle 5 bestimmt die erwartete Peakbreite den Filter dessen Wert f r Steigung und Kr mmung mit der Steigungsempfindlichkeit verglichen werden So werden beispielsweise die Zahlen f r Filter 1 zu dem Anstiegsakkumulator hinzugef gt wenn die erwartete Peakbreite klein ist Wenn die Werte f r die erwartete Peakbreite gr er werden kommen die Zahlen f r Filter 2 und m glicherweise Filter 3 zum Einsatz Wenn der Wert f r den Anstiegsakkumulator gr er oder gleich 15 betr gt erkennt der Algorithmus an dieser Stelle einen m glichen Peakanfang Steigende Wer
130. gration ausgew hlter Peaks oder Peakgruppen Mit Ausnahme des anf nglichen Wertes f r die Mindestfl che werden im Bereich der manuellen Integration die Parametertabellen der ChemStation ignoriert Die manuelle Integration erlaubt Ihnen die Definitionen von Peakstart und Peakende und die Einbeziehung der damit ermittelten Peakfl chen in die Quantifizierung und Reporterstellung Manuell integrierte Peaks werden in einem Report mit dem Code M markiert Die manuelle Integration bietet folgende M glichkeiten Draw Baseline Basislinie ziehen Es wird festgelegt wo die Basislinie f r einen Peak oder eine Peakgruppe verl uft Sie k nnen au erdem angeben ob die Peaks dieses Bereiches an allen Talpunkten automatisch getrennt werden sollen Negative Peaks Es wird festgelegt wann Fl chen unterhalb der Basislinie als negative Peaks behandelt werden Sie k nnen au erdem angeben ob die Peaks dieses Bereiches an allen Talpunkten automatisch getrennt werden sollen Tang Anpassung Es werden die Fl chen von Peaks bestimmt indem sie durch tangentiale Anpassung von der Flanke eines Hauptpeaks abgetrennt werden Sie k nnen au erdem angeben ob die Peaks dieses Bereiches an allen Talpunkten automatisch getrennt werden sollen Die Fl che des tangential abgetrennten Peaks wird von der Fl che des Hauptpeaks abgezogen Split Peak Peaktrennung Angabe des Punktes an dem ein Peak durch Lotf llung abgetrennt wird All Valleys Alle
131. gt k IN PR K Kalibrierung 2 o ibrierung 1 Die Kalibriertabelle zur quantitativen Auswertung der Probe wird bei einer zyklisch kalibrierten Sequenz durch Mittelwertbildung aus den Ergebnissen der aktuellen und der vorherigen Kalibrierung gewonnen Diese neue Kalibriertabelle stellt eine exaktere Ber cksichtigung des Response des Analysenger tes zum Zeitpunkt der Probenvermessung dar Arbeitsschritte einer umschlie enden Kalibrierung Die ersten Probenfl schchen der Kalibrierung werden analysiert Die Proben werden analysiert Die n chsten Kalibrierproben werden analysiert In der Kalibriertabelle werden die Responsefaktoren durch Mittelwertbildung aus den Ergebnissen der umschlie enden Kalibrierung berechnet Die Datens tze der Proben werden ausgewertet und die Reports werden erstellt Die Sequenz wiederholt Schritt 2 falls weitere Proben analysiert werden m ssen 227 Automatisierung Umschlie ende zyklische Kalibriersequenzen Bracketing Beispiel In diesem Abschnitt wird eine umschlie ende Kalibrierung beschrieben die aus einer Methode mit dem Namen Brack M besteht Die Methode Brack M ist eine Methode mit zwei Kalibrierpunkten und internem Standard mit zyklischer Kalibrierung Sequenztabelle Die Sequenztabelle f r die Methode Brack M n chste Seite ist zur Vereinfachung des Beispiels verk rzt Sie besteht aus sieben Zeilen wovon die ersten beiden Ze
132. gzeitrauschen wird in einem Zeitintervall bestimmt das l nger als eine Stunde ist Die Zeitintervalle f r jeden Zyklus dt werden auf 10 Minuten eingestellt so daf im gew hlten Zeitbereich mindestens sechs Zyklen erfa t werden 2 Kurzzeitrauschen Es ist die maximale Amplitude aller zuf lligen Schwankungen des Detektorsignals mit einer Frequenz von mehr als einem Zyklus pro Minute Kurzzeitrauschen wird in einem Zeitintervall zwischen 10 und 60 Minuten bestimmt Als Zeitintervall eines Zyklus dt wird eine Minute gew hlt so da im gew hlten Zeitbereich mindestens 10 Zyklen erfa t werden 3 Schnelles Kurzzeitrauschen kein Bestandteil von ASTM E 685 93 Diese Definition wird zur Beschreibung der maximalen Amplitude aller zuf lligen Schwankungen des Detektorsignals mit einer Frequenz von mehr als einem Zyklus in 0 1 Minuten eingef hrt Schnelles Kurzzeitrauschen wird in einem Zeitintervall zwischen 1 und 10 Min bestimmt Als Zeitintervall eines Zyklus dt wird eine Minute gew hlt so da im gew hlten Zeitbereich mindestens 10 Zyklen erfa t werden Eine Bestimmung des Rauschens nach ASTM wird nicht durchgef hrt wenn der gew hlte Zeitbereich k rzer ist als eine Minute Bei gew hlten Zeitintervallen von gr er oder gleich einer Minute wird die Rauschh he mit 266 Ermittlung der Systemleistung Bestimmung des Rauschens einer der oben beschriebenen ASTM Methoden beschrieben In jedem Zyklus werden mindestens si
133. h das Ger t 32 ChemStation Konzepte Ger testeuerung Ger testeuerung Die M glichkeiten der Ger testeuerung mit der ChemStation k nnen durch den Erwerb zus tzlicher Ger temodule zu einer Mehrger te Konfiguration erweitert werden Weitere Informationen finden Sie in den Ger tehandb chern der zus tzlichen ChemStation Module Einsatz von Netzwerken Die ChemStation wurde erfolgreich auf die Kompatibilit t mit der LanManager Software der Novell NetWare sowie Microsoft Windows 95 und Microsoft Windows NT Produkten die auf IEEE 802 3 CSMA CD Spezifikationen basieren getestet Sie sollte mit jeder Netzwerk Software kompatibel sein die dem Programmierstandard von Microsoft Windows entspricht Diese Produkte erm glichen es der ChemsStation physikalisch vorhandene Ger te wie Plotter und Drucker und Informationen wie Daten oder Methodendateien mit anderen Laboratorien und deren Computern zu teilen Client Server Die ChemsStation Software kann auf einem geeigneten Netzwerkserver installiert und nach Bedarf auf einen damit verbundenen PC geladen werden Die spezielle Konfigurierung jedes angebundenen PCs gew hrleistet eine angemessene Umgebung f r verschiedenen Techniken und einzelne Anwender Die zentralisierte Installation der Software l st das Problem viele Kopien derselben ChemsStation innerhalb einer Abteilung zu verwalten Ger testeuerung ber LAN Die ChemsStation Software erm glicht die Ger testeuer
134. hen Breite der Chromatographiepeaks nahe kommt Wenn notwendig vergibt der Integrator w hrend der Analyse neue Werte f r die Peakbreite um die Integration zu optimieren Der neue Integrator kann je nach Ger t die neuen Werte f r die Peakbreite auf verschiedene Arten berechnen F r LCO CE Konfigurationen berechnet der neue Integrator die Peakbreite standardm ig ber folgende zusammengesetzte Formel 0 3 x rechter Wendepunkt linker Wendepunkt 0 7 x Fl che H he F r GC Konfigurationen berechnet der neuer Integrator die Peakbreite standardm ig als Verh ltnis von Fl che H he Diese Berechnung f hrt zu keiner bersch tzung der Breite wenn die Peaks oberhalb der halben H he berlappen Bei manchen Analysen k nnen die Peaks im Analysenverlauf deutlich breiter werden Diese Charakteristik ist typisch f r isothermische GC und isokratische LC Analysen Um dies auszugleichen vergibt der Integrator automatisch neue Werte f r die Peakbreite sowie die Peaks im Laufe einer Analyse breiter werden Er f hrt dies automatisch durch bis die Funktion ausgeschaltet oder durch eine zeitabh ngige Programmierung ein bestimmter Wert eingestellt wird Die neue Einstellung f r die Peakbreite wird folgenderma en gewichtet 0 75 x existing peak width 0 25 x width of current peak Wenn die Peakbreite durch eine zeitabh ngige Programmierung eingestellt wird wird die automatische Peakbreitenanpassung deaktiviert
135. hen abzusch tzen und entsprechende Anfangseinstellungen f r die Steigungsempfindlichkeit Slope Sensitivity und die Mindesth he Height Reject festzulegen Au erdem bestimmt die Autointegration auch einen tempor ren Wert f r die Peakbreite Peak Width der von der Laufzeit und den unteren Detektionskriterien abh ngt Mit einem Wert f r Area Reject von null wird probeweise eine Integration durchgef hrt Wenn bei dieser Integration weniger Peaks erkannt werden erfolgt eine Anpassung der Parameter und es wird erneut integriert Diese Integration kann bei Bedarf mehrere Male wiederholt werden Nach einer geeigneten probeweisen Integration wird bei der Autointegration die Breite des ersten gefundenen Peaks als Anfangswert f r die Peakbreite eingesetzt Die Peaksymmetrie wird dazu verwendet Peaks mit inakzeptablen Peakformen aus der Berechnung auszuschlie en Autolntegrate sucht zwischen den detektierten Peaks nach einem sicheren Basisliniensegment Es wird bei der Autointegration zusammen mit der Peakbreite dazu verwendet die Werte f r die Steigungsempfindlichkeit und die Mindesth he neu zu definieren Der Wert f r die Mindestfl che wird ber die anf ngliche Peakbreite und das Ma f r das Rauschen bestimmt Autolntegrate gibt einen Warnhinweis in der Meldungszeile aus wenn e die Anforderungen f r die Peaksymmetrie zur Berechnung der Peakbreite gelockert wurden e zu wenig Peaks f r einen genaue Berechnung der Peakbreite
136. hf hren e Erstellen einer Kalibrierkurve f r diese Substanz e Ein Aliquot der unbekannten Probe injizieren und eine Analyse auf exakt dieselbe Weise ausf hren wie bei der Kalibrierprobe e Ermitteln des Response der als Fl che oder H he des Peaks entsprechend des unbekannten Gehaltes an der Substanz gemessen wird e Berechnen des Gehaltes der unbekannten Substanz mit Hilfe der Kalibrierkurve Wenn zum Beispiel f r eine Probe unbekannten Gehaltes eine Fl che von 500 gemessen wird wird mit der unter gezeigten Kalibrierkurve ein Gehalt der unbekannten Probe von 5 ng ml ermittelt Abbildung 34 Signal einer unbekannten Probe und Kalibrierkurve Response Response 1000 FH Response der Fl che 500 unb Probe fees 500 Menge der unb Probe 5 ng yl L i i 5 10 5 10 Zeit min Menge ng yl 183 Abbildung 35 Kalibrierung Kalibrierverfahren Kalibrierverfahren Die ChemsStation bietet die beiden Kalibrierverfahren Einpunktkalibrierung Single Level Calibration und Mehrpunktkalibrierung Multilevel Calibration an Einpunktkalibrierung Die Kalibrierkurve aus Abbildung 35 enth lt einen einzigen Kalibrierpunkt Einer Einpunktkalibrierung liegt die Annahme zugrunde da der Detektorresponse ber den interessierenden Konzentrationsbereich linear ist Der Responsefaktor einer bestimmten Substanz wird durch die inverse Steigung der Kalibrierkurve durch Me punkt und Koordinatenurspru
137. hnung zu tragen Allgemeine Integrationsm glichkeiten Die wichtigsten M glichkeiten beider Integrationsalgorithmen sind folgende eine Autointegrationsfunktion zur Einstellung anf nglicher Integrationsparameter die F higkeit f r jedes Chromatographiesignal eine eigene Tabelle mit Integrationsparametern festzulegen wenn mehrere Signale oder mehr als ein Detektor verwendet werden die interaktive Festlegung von Integrationsparametern die es dem Anwender erm glichen die Zeiten f r die Ereignisse graphisch zu bestimmen manuelle oder Rubber Band Integration f r Chromatogramme oder Elektropherogramme die eine spezielle Interpretation erfordern diese Parameter k nnen auch in die Methode integriert und somit automatisch aufgerufen werden Darstellung und Ausdruck von Integrationsergebnissen und die F higkeit mindestens 1000 Peaks pro Chromatogramm zu integrieren Beide Integrationsalgorithmen enthalten folgende Befehlsgruppen Definitionen f r Integrationsparameter um die Grundeinstellungen f r den Integrator Area Rejection Peak Width und Threshold als Parameter f r die Rauschunterdr ckung festzusetzen oder zu ver ndern Parameter zur Kontrolle der Basislinie wie force baseline Basislinie erzwingen hold baseline Basislinie halten baseline at all valleys Basislinie zu jedem Tal baseline at the next valley Basislinie beim n chsten Tal fit baseline backwards from the
138. hnungen ben tigt werden erreicht werden k nnen In allen F llen muss vor der Eingabe der aufgelisteten Befehle eine Datendatei geladen und ein Report mit der geeigneten Reportvorlage erstellt werden Alle Befehle werden in der ChemsStation Befehlszeile eingegeben die vom Men View aus verf gbar gemacht werden kann Die Information in der Datei 283 Ermittlung der Systemleistung Inte rner gespeicherter Doppelpr zisions Zahlenzugriff C HPCHEM TEMP TXT kann mit Hilfe von NOTEPAD oder einem gee igneten Text Editor angesehen werden Rohpeakinformation Retentionszeit Fl che Mindest Breite Integrator Symmetrie Peak Startzeit Peak Endzeit Verwenden Sie folgenden Eintrag in der Befehlszeile DUMPTABLE CHROMREG INTRESULTS C HPCHEM 1 TEMP INTRES TXT Bearbeitete Peakinformation Gemessene Retentionszeit Erwartete Retentionszeit Fl che Mindest Breite Integrator Symmetrie Halbe Breite Halbe Peakh he Leistungstest amp Erweiterter Leistungstest Tailingfaktor Leistungstest amp Erweiterter Leistungstest Selektivit t Leistungstest amp Erweiterter Leistungstest K Erweiterter Leistungstest Tangenten Peakbreite Erweiterter Leistungstest Verzerrung Erweiterter Leistungstest Theoretische Trennb den Halbe Breite Leistungstest amp Erweiterter Leistungstest Theoretische Trennb den Tangente Erweiterter Leistungstest 284 Ermittlung der Systemleistu
139. hoden Parameter zur quantitativen Auswertung mit Angaben zur gefundenen Menge ein Multiplikations oder Verd nnungsfaktor Angaben zur Kalibrierung sowie die Zahl der Injektionswiederholungen festgelegt werden Es ist m glich zwischen den Zellen der Tabelle zu springen und dabei deren Inhalte oder ganze Reihen oder mehrere ganze Reihen zu kopieren auszuschneiden oder einzusetzen Damit k nnen Sequenzen leicht und schnell erstellt werden 28 ChemStation Konzepte Zur ChemStation Software Proben k nnen in der Sequenztabelle als Unbekannte Standard oder Kontrolle festgelegt werden Der Probentyp bestimmt ob die Probe einer speziellen Datenauswertung unterzogen wird e unbekannte Proben werden entsprechend der Methodenspezifikationen ausgewertet und als Report abgelegt e Standards werden dazu verwendet die Substanzen zur Quantifizierung der Methode wie unten beschrieben neu zu kalibrieren e Kontrollen werden bezogen auf den in der Methode festgelegten Grenzwert f r eine Substanz ausgewertet Wenn das Ergebnis au erhalb eines bestimmten Bereiches liegt wird die Sequenz angehalten Kalibrierungsstandards k nnen als einfach zyklisch oder umschlie end definiert werden Einfache Rekalibrierung bedeutet da eine Rekalibrierung immer dann durchgef hrt wird wenn ein Kalibrierungsstandard in der Sequenz vorkommt Zyklische Rekalibrierungen werden w hrend einer Analysenserie in festgelegten Intervallen durchgef hrt Bei der
140. hr leistungsf hig arbeiten 143 Der neue Integrationsalgorithmus Manuelle Integration Manuelle Integration Dieser Integrationstyp erm glicht Ihnen die Integration ausgew hlter Peaks oder Peakgruppen Mit Ausnahme des anf nglichen Wertes f r die Mindestfl che werden im Bereich der manuellen Integration die Parametertabellen der ChemStation ignoriert Die manuelle Integration erlaubt Ihnen die Definitionen von Peakstart und Peakende und die Einbeziehung der damit ermittelten Peakfl chen in die Quantifizierung und Reporterstellung Manuell integrierte Peaks werden in einem Report mit dem Code M markiert Die manuelle Integration bietet folgende M glichkeiten Basislinie ziehen Es wird festgelegt wo die Basislinie f r einen Peak oder eine Peakgruppe verl uft Sie k nnen au erdem angeben ob die Peaks dieses Bereiches an allen Talpunkten automatisch getrennt werden sollen Negative Peaks Es wird festgelegt wann Fl chen unterhalb der Basislinie als negative Peaks behandelt werden Sie k nnen au erdem angeben ob die Peaks dieses Bereiches an allen Talpunkten automatisch getrennt werden sollen Tangentiale Anpassung Es werden die Fl chen von Peaks bestimmt indem sie durch tangentiale Anpassung von der Flanke eines Hauptpeaks abgetrennt werden Sie k nnen au erdem angeben ob die Peaks dieses Bereiches an allen Talpunkten automatisch getrennt werden sollen Die Fl che des tangential abgetrennten Peaks wird
141. hromatographischen Signal die Peaks bestimmt und ihre Gr e berechnet Die Integration ist erforderlich f r die Quantifizierung Berechnung der Peakreinheit nur bei ChemsStations f r LC 3D LC MS Systeme und CE Systeme Bibliothekssuchen mit Spektren nur bei ChemStations f r LC 3D LC MS Systeme und CE Systeme 69 Integration Was wird bei der Integration durchgef hrt Was wird bei der Integration durchgef hrt Zur Integration eines Peaks f hrt die Software folgende Aktionen aus e F rjeden Peak werden die Start und Endpunkte bestimmt und mit vertikalen Strichmarkierungen markiert e Das Maximum jedes Peaks wird bestimmt Es entspricht der Retentions bzw Migrationszeit e er konstruiert eine Basislinie e Fl che H he und Peakbreite werden f r jeden Peak berechnet Dieser Prozess wird mit Integrationsparametern Integration Events kontrolliert 70 Integration Die Integrationsalgorithmen der ChemStation Die Integrationsalgorithmen der ChemsStation Die ChemStation enth lt zwei Integrationsalgorithmen Der Standardintegrationsalgorithmus war Bestandteil der fr heren Versionen der ChemsStation und befindet sich in den meisten anderen Auswertungssoftware Paketen f r analytische Daten von Agilent Technologies Der neue Integrationsalgorithmus zielt auf bessere Robustheit Zuverl ssigkeit und Anwenderfreundlichkeit ab Agilent Technologies empfiehlt den Einsatz des traditionellen Algor
142. ht alphanumerischen Zeichen bestehen kann An der Dateinamenerweiterung M kann man stets erkennen da es sich um eine Methode handelt Methoden werden als MS DOS Verzeichnisse gespeichert und enthalten bestimmte Dateien f r die einzelnen Teile einer Methode Jede Methode besteht aus f nf Komponenten e Methodeninformation e Steuerung der Analysenger te e Datenauswertung und e Checkliste zur Ausf hrung Methodeninformation In diesem Abschnitt werden Informationen zur Methode gespeichert Die Steuerung der Analysenger te Hier werden Parameter zur Steuerung von Analysenger ten oder deren Komponenten definiert Bei LC Ger ten dienen Angaben wie Zusammensetzung der mobilen Phase Flu rate Injektionsvolumen Wellenl nge des Detektors etc zur Steuerung von Pumpe Probengeber und Detektor Bei GC Ger ten steuern die Angaben zur Einla temperatur Einla druck Flu rate auf gepackter S ule etc das Analysenger t Datenauswertung Hier werden Parameter zur Durchf hrung der Datenauswertung definiert Signaldetails Hier werden Signale und ihre Eigenschaften f r die Datenauswertung definiert 44 Methoden Die Bestandteile einer Methode Integration Events Integrationsparameter Hier werden zeitabh ngige Parameter definiert die innerhalb eines Chromatogrammes oder Elektropherogrammes zu einer bestimmten Retentions bzw Migrationszeit auftreten ber die zeitabh ngigen Parameter kann die Art der Integrati
143. ie Rekalibrierparameter in der Sequenztabelle Der Responsefaktor und die Retentions bzw Migrationszeiten k nnen auf mehrere Arten aktualisiert werden Der Kalibrierpunkt der aktualisierte Responsefaktor und aktualisierte Retentions bzw Migrationszeiten werden in der Datenauswertung benutzt wenn die Kalibriertabelle rekalibriert wurde Wenn in der Spalte mit der Beschriftung SampleType der Probentabelle Calibration eingegeben ist werden folgende Spalten aktiviert und somit editierbar e CAL level e Update RT e Update RF e Intervall Die Werte die man f r jede dieser Spalten eingeben kann sind in Tabelle 10 aufgef hrt Tabelle 10 zeigt die Spalten der Sequenztabelle die die Rekalibrierparameter enthalten sowie die verwendbaren Werte Keine Aktualisierung No Update Responsfaktoren oder Retentions bzw Migrationszeiten werden nicht aktualisiert Ersetzen Replace Ersetzt die vorigen Responsefaktoren Fl chen oder H hen mit den Werten des aktuellen Laufes Der Response wird f r Peaks die in diesem Lauf nicht gefunden wurden nicht ge ndert 213 Tabelle 10 Automatisierung Spezifizieren von Rekalibrierungen Rekalibrierparameter in der Sequenztabelle CAL level Update RT Update RF Intervall Kalibriertabelle Stufe No update Kein No update Kein Zyklisches Level 1 999 Update Update Rekalibrierintervall 1 999 Mittelwert Average Mittelwert Blank Average Ersetzen
144. igrationszeiten der Probenpeaks kompensiert Falls in der Methode kein Referenzpeak definiert ist oder die ChemStation nicht mindestens einen Referenzpeak w hrend des Analysenlaufes erkennen kann werden von der Software die absoluten Retentions bzw Migrationszeiten verwendet Einzelne Referenzpeaks Es wird f r den Referenzpeak ein Fenster mit der Retentions bzw Migrationszeit bei seiner erwarteten Retentions bzw Migrationszeit erzeugt Der gr te Peak in diesem Fenster wird als Referenzpeak identifiziert Die erwarteten Retentions bzw Migrationszeiten aller anderen Peaks in der Kalibriertabelle werden korrigiert Dazu wird das Verh ltnis der erwarteten zur aktuell gefundenen Retentions bzw Migrationszeit des Referenzpeaks herangezogen Mehrere Referenzpeaks Die Korrektur der Retentions bzw Migrationszeit mit einem einzelnen Peak basiert auf der Annahme da die Abweichung der aktuellen von der 154 HINWEIS Peak Identification Peakerkennung Korrigierte Retentions bzw Migrationszeiten erwarteten Retentions bzw Migrationszeit gleichm ig bzw linear mit zunehmender Retentions bzw Migrationszeit im Analysenlauf erfolgt W hrend l ngerer Analysenl ufe ndern sich die Retentions bzw Migrationszeiten jedoch uneinheitlich In solchen F llen k nnen bessere Ergebnisse erhalten werden wenn mehrere Referenzpeaks eingesetzt werden die in geeigneten Abst nden ber den Analysenlauf verteilt sind Das
145. iguration 17 Speichern der GLP Daten 54 Standard 238 externer 169 interner 172 Standardabweichung 182 Proben Standardabweichung 278 Standardabweichung des Mittelw ertes 279 Standardabweichung RSD 279 Standardabweichung S 282 Standby Status 211 Status des Ger tes 65 Fenster 65 stoppen einer Sequenz 204 Strichmarkierungen 70 83 124 Substanz 179 Substanztabelle 238 System Meldungen 63 Shutdown 211 Status 64 Systemleistung Grenzen der 263 mit Statistik 262 T t Verteilung 280 Table der Peaksummen 253 Talpunkt 81 tangentiale Anpassung 104 128 145 Totvolumen 271 Totzeit 271 Trace Mode 104 144 aktivieren 104 145 manuelle Integration 104 144 TXT Datei 241 U berlappende Peaks Integration 81 berpr fen Unterverzeichnis 39 berpr fen der Peakreinheit als Teil der Methode 53 berpr fung 288 berpr fung des Systems 288 Umschlie en bracket 214 Umschlie end Kalibrierung 214 umschlie ende Kalibriersequenz 226 unbekannte Probe 183 unidentifizierte Peaks Klassifizierung 160 Rekalibrierung 195 unkalibrierte Rechenmethoden 167 Update der Retentionszeit 213 des Responsefaktors 213 vV ver nderbare Integration Parameter 110 Verd nnungsfaktor 165 170 Verification 288 Verzeichnis Methode 50 Vorlagen f r Reports 250 Vorzugsprobe 204 WwW Weitgehende Anpassung 28 Wendepunkt Abstiegsflanke 80 Anstiegsflanke 80 X XLS Datei 241 Z zeit
146. ilen die Rekalibrierbedingungen f r jede Stufe festlegen In den verbleibenden Zeilen werden die zu analysierenden Proben definiert Die Sequenztabelle f r die Methode Brack M besteht aus e Dem Eintrag Bracket in der Spalte Update Response Factor wodurch die Umschlie ung der Proben mit Kalibrierungen spezifiziert wird e Dem Eintrag Replace in der Spalte Update Retention Migration Times wodurch Retentions bzw Migrationszeiten ersetzt werden e Dem Eintrag 3 in der Spalte Recalib Interval wodurch eine Rekalibrierung nach jeweils drei Proben spezifiziert wird Tabelle 16 Sequenztabelle der Methode BRACK M 1 1 BRACK M 2 Kalibrierung 1 Bracket Ersetzen 3 Umschlie e Replace n 2 2 BRACK M 2 Kalibrierung 2 Bracket Ersetzen 3 Umschlie e Replace n 3 10 BRACK M 4 f1 BRACK M 5 112 BRACK M 6 13 BRACK M 7 4 BRACK M 228 Automatisierung Umschlie ende zyklische Kalibriersequenzen Bracketing Analysenfolge der Sequenz mit umschlie ender Kalibrierung Name DataFile Name 12 13 14 15 16 17 Brack Brack Brack Brack Brack Brack KEkEEkk Rr Vial Inj No No 1 1 1 2 2 1 2 2 10 1 11 1 12 1 1 Ki 1 2 2 1 2 2 13 1 14 1 L Ki 1 2 2 1 2 2 c1 03001 c1 03002 c2 03001 c2 03002 010 0301 011 0301 012 0301 c1 03003 c1 03004 c2 03003 c2 03004 010 0301
147. indem man in der Methode innerhalb der Tabelle der Quantification Parameters die UseQualifiers Flag setzt weitere Informationen entnehmen Sie bitte dem Macro Programming Guide Die berpr fung der Qualifier wird auch dann abgeschaltet wenn die Signalkorrelation abgestellt ist Berechnung des Qualifierverh ltnisses Wenn die berpr fung der Qualifier f r eine Substanz eingeschaltet ist wird das G enverh ltnis des Qualifiers zum Hauptpeak gegen ber den kalibrierten Grenzwerten berpr ft Je nach der Einstellung unter Specify Report kann die Gr e ber die H he oder die Fl che ermittelt werden Die Peakqualifier k nnen genauso kalibriert werden wie die Zielsubstanzen Der Anwender mu die erwarteten Qualifierverh ltnisse nicht angeben Sie werden automatisch berechnet QualRespRatio Response des Qualifiers Response des Hauptpeaks beide werden zur Retentionszeit der Substanz bestimmt Der Parameter QualTolerance bestimmt den akzeptabeln Bereich f r das Qualifierverh ltnis zum Beispiel 20 157 Peak Identification Peakerkennung Peakqualifier Die Toleranz kann in der Kalibriertabelle ber die Benutzeroberfl che Identification Details eingestellt werden und wird in absoluten Prozent angegeben Zum Beispiel Akzeptabler Bereich 50 20 30 70 158 Peak Identification Peakerkennung Die Durchf hrung der Identifizierung Die Durchf hrung der Identifizierung Beim Vers
148. ine Gruppe gemischter Peaks wobei der erste Peak weit gr er ist als der Rest Eine einfache Lotf llung erg be dann eine zu gro e Fl che f r sp tere Peaks weil sie nur auf dem ersten Peak aufsitzen Durch Erzwingen der Erkennung des ersten Peaks als L sungsmittelpeak werden die restlichen Peaks durch tangentiale Anpassung integriert Obwohl in CE Analysen kein L sungsmittelpeak auftritt kann diese Bezeichnung dennoch von der ChemStation f r CE Systeme f r gro e Peaks eingef gt werden Fl chenbestimmung f r L sungsmittelpeaks und tangential abgetrennte Peaks L sungsmittelpeak Tangentenpeak L N e Negative Peaks liegen unterhalb der Basislinie und haben wie in Abbildung 13 gezeigt eine positive Fl che 89 Der Standardintegrationsalgorithmus Berechnung der Peakfl che Abbildung 13 Fl chenbestimmung bei negativen Peaks Totale Fl che Fl che unter der Basislinie Basislinien korrigierte Fl che n RT Jar ART Du FLAT au a aa ae Dan Dar a RR a i a at oa a a et ae u o a w at at t a a e a t a ut Pl Ay fl FR ar ar PUB ER a a a w m fl Tuer ar atot t a 90 Der Standardintegrationsalgorithmus Integrationsparameter Integrationsparameter F r den Integrator stehen vier Anfangsparameter und neunzehn zeitprogrammierbare Parameter Events zur Verf gung Viele Parameter si
149. inen Namen aus bis zu acht alphanumerischen Zeichen gefolgt von der Dateinamenerweiterung M Aktuelle Methode Current Method Wenn eine gespeicherte Methode von der Festplatte aufgerufen wird ist sie die aktuelle Methode Im Speicher existiert immer eine aktuelle Methode Beim ersten Start der ChemStation wird die von Agilent Technologies gelieferte Standardmethode als Teil des Startprozesses geladen Es k nnte eine der folgenden Methoden sein e DEF_LC M bei einem LC Ger t e DEF_GC M bei einem GC Ger t oder e DEF_CE M bei einem CE Ger t Eine Kopie der Standardmethode wird im Hauptspeicher abgelegt und wird zur aktuellen Methode Sie k nnen an dieser Stelle eine andere Methode laden die dann zur aktuellen Methode wird Die oben aufgef hrten Methoden verwenden den neuen Integrationsalgorithmus Wenn Sie den Standardintegrationsalgorithmus verwenden wollen m ssen Sie Ihre Methode aus eine der folgenden Methoden aufbauen e DEFOLDLC M f r einen Fl ssigkeitschromatographen e DEFOLDGC M f r einen GC oder e DEFOLDCE M f r eine CE 46 VORSICHT Methoden Erstellen von Methoden Erstellen von Methoden Das Erstellen einer neuen Methode l uft immer ber Ab ndern der aktuellen Methode und anschlie ende Speicherung der Modifikation unter einem neuen Methodennamen Beachten sie da nach der nderung einer Methode die Version auf der Festplatte unver ndert bleibt bis die nderungen gespeichert werden
150. informations Fenster einschlie lich der Bestandteile der schematisch dargestelllten Ger teschnittstelle werden automatisch gespeichert Weitere Informationen zur Datenaufnahme entnehmen Sie bitte Kapitel3 Datenerfassung und dem Online Hilfesystem 19 ChemStation Konzepte Zur ChemStation Software Datenauswertung Darstellung Die Ansicht von Data Analysis Datenauswertung enth lt die Standardsymbolleiste um aufgabenorientierte Funktionen zur Datenauswertung einschlie lich der Symbole f r Integration Kalibrierung Reporterstellung Beschriftungsm glichkeiten und Signalvergleich auszuf hren Im folgenden sind die wichtigsten Graphikfunktionen aufgef hrt Darstellungen im Einzel oder Mehrfachsignalmodus w hlbar beim Laden des Chromatogramms berlagern von Chromatogrammen verschiedener Proben Abziehen eines Chromatogramms von einem anderen graphische Anpassung der Signale in vertikaler und horizontaler Richtung um den visuellen Vergleich zu vereinfachen Signalumkehr oder spiegelung um den visuellen Vergleich zu vereinfachen graphische Funktionen zum Zoomen oder Verschieben Festlegung der Darstellungsmerkmale wie z B der Auswahl von Markierungen Basislinien Achsen Retentionszeiten und Substanznamen der Anwender kann auch die Schriftart der Retentionszeit und der Substanznamen festlegen die Gr e und Ausrichtung der Darstellung bestimmen ausw hlen ob die Darstellung berlagert
151. ingegebenen Prefix bestehend aus 1 bis 7 alphanumerischen Zeichen und einem Z hler 8 weniger der Anzahl der Zeichen im Prefix Im unten aufgef hrten Beispiel ist TEST der Prefix und 0001 der Z hler TEST0001 Der Z hler wird mit jedem erstellten Datensatz um eins erh ht 210 Automatisierung Aktionen nach der Sequenz Aktionen nach der Sequenz Sie k nnen angeben was nach dem Ende der planm igen Sequenzausf hrung oder wenn die ChemStation w hrend der Ausf hrung einen Fehler entdeckt geschehen soll F r LC Sequenzen erm glicht das Ankreuzk stchen Post Sequence Cmd Macro des Dialogfeldes Sequence Parameters folgende Wahlm glichkeiten e Aktivieren eines STANDBY Status mit ausgeschalteten Pumpen und Lampen e Aktivieren eines LAMPOFF Status mit ausgeschalteten Lampen nur LC und CE e Aktivieren eines PUMPOFF Status mit ausgeschalteten Pumpen nur LC und CE e Aktivieren eines SHUTDOWN Makros oder Modifikation von SHUTDOWN MAC zur Festlegung bestimmter Operationen So k nnen Sie Ihr System nach der Ausf hrung der Sequenz abschalten Das Makro SHUTDOWN kann auch zum Reduzieren oder Abschalten der Flu rate benutzt werden Im Dialogfeld Sequence Parameters k nnen Sie die Ausf hrung eines beliebigen Makros festlegen indem Sie dessen Namen im Feld Post Sequence Cmd Macro eintragen und das Kontrollk stchen aktivieren Not Ready Timeout nur f r LC und CE Der Parameter No
152. isbreite WB 274 bei 5 der H he 274 Bereich 93 Einflu der 94 halbe H he 274 Tangente 274 297 Index ver ndern 94 Peakidentifizierung M glichkeiten 151 Was ist Peakidentifizierung 149 Peakreinheit 53 Peaks in der Praxis 115 Peakschultern Detektion 91 94 Peaktailing 274 Peaktailing nach USP 274 Post Run Befehl 54 Makro 54 Post Sequenz Aktionen 211 Pr zision Zahlenformat 283 Pre Run Befehl 52 Makro 52 Probe Kalibrierung 179 185 menge 165 unbekannte 183 Vorzugsproben 204 Probenart 238 Probenart removed entfernt 238 prozentuale Berechnung 167 Q Qualifier 156 Quantifizierung Berechnungen 164 ESTD Verfahren 169 ISTD Verfahren 172 Was ist Quantifizierung 163 quantitative Ergebnisse 248 R Referenzfenster 153 Referenzpeaks Anwendung 154 auffinden 159 einzelne 154 mehrere 155 Regression Regressionskoeffizient 282 Regressionsanalyse 280 Rekalibrierung 195 automatische 212 Intervall 214 partielle 195 Retentionszeit 195 unidentifizierter Peaks 195 vollst ndige 195 Warum Rekalibrierung wichtig ist 195 Was ist Rekalibrierung 195 relative Retention 276 Report Area 248 Ausgabe 254 Control Chart 26 Dateiformate 254 Datensatz 61 ESTD 246 248 Height 248 kalibrierter 246 Layout 26 Norm 248 Sequence Summary 25 unkalibrierter 246 vorlagen 250 Was ist ein Report 245 248 zur Systemeignung 23 Report z
153. istory um eine Zeile mit Datum und Zeitangabe dem Namen des derzeitigen Anwenders sowie einer Beschreibung des Vorganges Sie k nnen der Batch History auch eigene Kommentare hinzuf gen Vorhandene Eintr ge in der Batch History lassen sich nicht ndern Die Auflistung kann nur ber die Men eintr ge f r Batch History aufgerufen werden 241 Batch Review Batch Reports 242 12 Verwendung der ChemsStation Reports Verwendung der ChemsStation Reports In diesem Kapitel werden folgende Themen behandelt Was ist ein Report Reportergebnisse Quantitative Ergebnisse Reportvorlagen Reportausgabe Zusammenfassende Reports einer Sequenz 244 Verwendung der ChemStation Reports Was ist ein Report Was ist ein Report Ein Report kann aus qualitativen und quantitativen Informationen zu einer analysierten Probe bestehen Der Report kann als Ausdruck als Bildschirmdarstellung oder als elektronische Datei ausgegeben werden Der Report kann Details der Peakerkennung eines Analysenlaufes enthalten und Darstellungen der Chromatogramme bzw Elektropherogramme 245 Verwendung der ChemStation Reports Reportergebnisse Reportergebnisse Es stehen zwei Reporttypen zur Verf gung e Ein unkalibrierter Report ohne Korrektur des Detektor Response e Ein kalibrierter Report mit korrigiertem Detektor Response f r unterschiedliche Substanzen Unkalibrierte Reports Unkalibrierte Reports umfassen die
154. it Druckt einen Report Angepafste Datenauswertung F hrt Ihre Makros aus Speichern von GLP Daten Speichert die bin re Registerdatei GLPSave Reg Befehl oder Makro nach dem Analysenlauf F hrt eine Aufgabe nach vollst ndigem Abschlu der Analyse durch Zum Beispiel wird ein Report nach Benutzervorgaben ausgedruckt 56 Datenerfassung Datenerfassung In diesem Kapitel werden folgende Themen behandelt Was ist Datenerfassung Datens tze Verzeichnisstruktur Online Monitore Logbuch Systemstatus Die System bersicht 58 Datenerfassung Was ist Datenerfassung Was ist Datenerfassung W hrend der Datenerfassung werden alle analogen Signale im Analysenger t in digitale Signale konvertiert Das digitale Signal wird elektronisch zur ChemsStation bertragen und in einem Rohdatensatz abgelegt 59 Datenerfassung Datens tze Datens tze Ein Datensatz besteht aus einer Gruppe von Dateien die im Verzeichnis DATA als Unterverzeichnisse angelegt werden Sie tragen einen Namen und die Dateinamenerweiterung D Jede Datei im Verzeichnis wird nach folgender Konvention benannt Name CH UV REPORT TXT SAMPLE MAC RUN LOG LCDIAG REG ACQRES REG GLPSAVE REG Description Rohdatensatz mit Daten aus Chromatographie oder Elektrophorese Der Dateiname besteht aus dem Modul oder Detektortyp der Modulnummer und einer Identifikationsnummer f r das Signal oder den Kanal Zum
155. it Integrationsparametern zum Beispiel f r FID ECD oder DAD Die Standardtabellen mit Integrationsparametern k nnen nicht gel scht werden und sind immer fester Bestandteil der Methode zur Datenauswertung 139 Der neue Integrationsalgorithmus Anwendung des neuen Integrators Anwendung des neuen Integrators Der neue Integrator der ChemStation bietet folgende Methoden zur Integration eines Datensatzes e Integration e Autointegration e manuelle Integration 140 Der neue Integrationsalgorithmus Integration Integration Das Signal wird entsprechend der Integrationsparametertabelle integriert Sie k nnen diese Tabelle zur Optimierung der Integrationsergebnisse f r eine nachfolgende Reintegration verwenden Sowohl Autointegrate als auch Integrate liefern Integrationsergebnisse Autointegrate berechnet jedoch automatisch Anfangswerte f r die Steigungsempfindlichkeit und Peakbreite w hrend es die Funktion Edit Integration Event erm glicht zwischen selbst bestimmten und den Standardwerten zu w hlen 141 Der neue Integrationsalgorithmus Autointegration Autointegration F r den neuen Integrator wurde die Autointegration so ver ndert da die gew hlten Parameter stabiler sind und der Anwender mehr Informationen ber die Probleme erh lt die bei der Autointegration auftreten Die Autointegration untersucht den vorderen und den hinteren Bereich eines Chromatogramms um ein Ma f r das Rausc
156. iterten Report mit allen Parametern aus den Leistungsberechnungen der Peaks und einzelnen Peakdarstellungen Die Darstellungen umfassen die Basislinie die Tangenten und die Peakbreiten in definierten H hen Dieser Reporttyp ber cksichtigt nur kalibrierte Peaks Zus tzlich zu den Parametern die f r den Performance Report ausgedruckt werden werden weitere Parameter zur Peakleistung bestimmt Anfangs und Endzeiten des Peaks Verzerrung berschu Peakbreite USP f r das Peaktailing Zeitintervall zwischen Datenpunkten Anzahl der Datenpunkte statistische Momente Anzahl der Trennstufen Trennstufen pro Meter Selektivit t und Peakaufl sung werden mit ausgedruckt Die Peakbreite Anzahl Trennb den Trennb den pro Meter Selektivit t und Aufl sung werden mit der wahren Halbwertsbreite 5 Sigma Tangenten und Tailing Methode berechnet genauere Beschreibungen finden Sie unter Definitionen des Leistungstestsauf Seite 272 251 HINWEIS Verwendung der ChemStation Reports Reportvorlagen Der Kopfteil des Reports umfa t alle relevanten Informationen zur Methode einschlie lich Analysenger t S ule Kapillare Probe und Parameter der Datenerfassung das Signal wird ebenfalls dargestellt Eine vollst ndige Liste der Algorithmen zur Berechnung der Leistungsparameter finden Sie unter Definitionen des Leistungstests auf Seite 272 Die Spektrenreportvorlagen Short Spectrum Kurz Spektrum Detail Spectrum Au
157. ithmus f r bereits vorhandene validierte Methoden und des neuen Algorithmus f r neue Methoden Eine kurze Abhandlung zum Standardintegrationsalgorithmus Um 1980 wurde der Standardintegrationsalgorithmus mit dem HP 3350 Labordatensystem eingef hrt Sp ter wurde er in das HP 3365 ChemsStation System eingegliedert und schlie lich auch in die neue ChemsStation Der Standardintegrationsalgorithmus war dazu ausgelegt bei m glichst geringem Optimierungsaufwand durch den Anwender den vollen Bereich der analytischen Anwendungen abzudecken Mit steigender Zahl an analytischen Anwendungen wurde erkannt da ein einziger Standardintegrator nicht f r alle m glichen Anwendungen ohne Kompromisse bez glich der Leistungsf higkeit optimiert werden kann Kompatibilit t Den Standardintegrator gibt es auch weiterhin f r Anwender die bereits Methoden f r den Standardintegrator entwickelt haben oder im Augenblick nicht zu dem neuen Integrator wechseln wollen F r Datens tze die mit dem Standardintegrator aufgenommen oder neuberechnet wurden k nnen beide Integratoren verwendet werden Eine Vorstellung des neuen Integrationsalgorithmus Hewlett Packard hat den neuen Integrator auf Empfehlungen von Kunden entwickelt Wir sind uns bewu t da ein Integratoralgorithmus variabel sein 71 Integration Die Integrationsalgorithmen der ChemStation sollte um der verschiedenen analytischen Techniken heutzutage und in der Zukunft Rec
158. k Integrierter Peak Kardinalpunkte sind Punkte die der Integrator ausw hlt um einen Peak zu definieren und zu quantifizieren Basislinienpunkte Talpunkte Peakmaximum und Wendepunkte werden als Kardinalpunkte festgelegt und gespeichert Jeder Kardinalpunkt erh lt eine horizontale Koordinate in Form der abgelaufenen Zeit und eine vertikale Koordinate in Form der H he von der Basislinie aus betrachtet sowie andere Parameter die der Integrator zur Berechnung der Peakfl chen verwendet 114 Der neue Integrationsalgorithmus Integrieren von Peaks in der Praxis Integrieren von Peaks in der Praxis In der Praxis mu der Integrator normalerweise mit mehr als einem komplizierten chromatographischen Problem umgehen k nnen Die Gr e der Peaks kann innerhalb einer Analyse stark variieren wobei die interessierenden Peaks oft nur geringe Konzentrationen aufweisen St rungen wie Systemrauschen Driften und Wandern k nnen die Basislinie beeinflussen von der aus der Integrator die Peakfl chen und h hen bestimmt Au erdem kann es manchmal unm glich sein die Peaks durch einen chromatographischen Vorgang vollst ndig zu trennen Wann immer m glich sollte die Chromatographie so weit optimiert sein da es zu einer vollst ndigen Trennung kommt Wenn dies aus irgendwelchen Gr nden nicht m glich ist mu der Integrator mit berlappenden Peaks umgehen k nnen Die Integration komplexer Chromatogramme ist nicht immer einfach Der
159. l 14 signifikante Stellen gespeichert werden Die Implementierung dieses Datentyps folgt der Microsoft Implementierung des IEEE Standards f r den C Datentyp und die damit verbundenen Rundungsregeln siehe Microsoft Dokumentationen 42980 Q145889 und Q125056 Entsprechend der unbegrenzten Anzahl Parameter die f r die Berechnung der Kalibriertabelle verwendet werden k nnen ist es nicht m glich den exakten Fehler zu berechnen der sich durch die Fortpflanzung und Aufaddierung von Rundungsfehlern ergibt Gr ndliches Testen mit verschiedenen Kalibrierkurven Konstruktionen hat jedoch gezeigt dass die Genauigkeit von bis zu 10 Stellen garantiert werden kann Da die Wiederholbarkeit von chromatographischen Analysen die Fl che H he und Retentionszeit betreffend 3 signifikante Stellen besitzt ist die Verwendung von 10 signifikanten Stellen w hrend der Berechnung ausreichend Aus diesem Grund werden bei der Kalibrierung und anderen Tabellen maximal 10 signifikante Stellen angegeben Wird f r die Validierung eine externe manuelle Berechnung ben tigt wird empfohlen alle f r die interne Berechnung angewendeten Stellen zu benutzen Die Verwendung der angezeigten und oder gerundeten Daten bei der externen Berechnung kann durch Rundungsfehler zu anderen Ergebnissen f hren als die ChemStation ermittelt hat Im folgenden Abschnitt wird beschrieben wie alle intern gespeicherten Stellen f r Zahlen die typischerweise f r manuelle Berec
160. lch eine Datenbehandlung dass die ausgew hlte Probe als repr sentativ f r alle Daten betrachtet werden kann Probenmittelwert M Der Mittelwert M einer zuf llig ausgew hlten Probe die N mal gemessen wurde wird aus diesem begrenzten Satz von N einzeln ermittelten Werten X mit dem Index i als fortlaufendem Z hler entsprechend folgender Formel berechnet mit N Anzahl der Einzelbeobachtungen X Wert der Einzelbeobachtung mit dem Index i Probe Standardabweichung S Eine zuf llige Probe der Gr e N wird angenommen Die Proben Standardabweichung S f r die ausgew hlte begrenzte Probe aus der gro en Datenpopulation wird ermittelt durch 278 Beispiel Ermittlung der Systemleistung Definitionen der Reproduzierbarkeit Die Proben Standardabweichung S unterscheidet sich in zwei Punkten von der Standardabweichung s f r die gesamte Population e anstelle des wirklichen Mittelwertes wird nur der Proben Mittelwert M verwendet und e die Division durch N 1 anstelle von N Relative Standardabweichung RSD USP Die relative Standardabweichung ist definiert als S RSD 100 S 005 Standardabweichung des Mittelwertes Sy M stellt den Probenmittelwert dar und S die Proben oder N 1 Standardabweichung Die Standardabweichung Sy vom Probenmittelwert M wird folgenderma en ermittelt S JN Su Dies kann durch ein Beispiel verdeutlicht werden W hrend die Retentionszeit einer bestimmten Su
161. ldschirm angesehen und ausgedruckt werden In jeder Methode k nnen f r eine Reihe von Chromatographie und Ger teleistungsparametern Grenzwerte auf der Basis von einzelnen Substanzen festgelegt werden Eine genauere Beschreibung hierzu befindet sich im Abschnitt Datenauswertung Quantifizierung Ergebnisse die diese Parameterbereiche berschreiten werden dazu verwendet die Durchf hrung automatischer Sequenzen wie unter Automatisierung beschrieben zu kontrollieren Sie werden auf dem entsprechenden Analysenreport vermerkt Reports zur Systemeignung und Systemleistung siehe den Abschnitt zur Reporterstellung oben liefern genaue Daten zur Trennleistung 30 ChemStation Konzepte Zur ChemStation Software Die ChemStation kann mit Zugangsbeschr nkungen auf zwei Ebenen einer Bediener und einer Managerebene konfiguriert werden Die Manager Ebene kann durch ein Passwort gesch tzt werden und erm glicht den Zugriff auf alle Funktionen der ChemsStation Die Bedienerebene ist auf die Nutzung einer Grundfunktionalit t und die Ausf hrung definierter analytischer Methoden beschr nkt Die Bedienerebene ist zum Einsatz in Routinelabors gedacht und hindert Bediener insbesondere daran Methoden zu ver ndern oder neu zu erstellen Stabilit t von Methoden e Zusammenfassende Reports von Sequenzen vgl Datenauswertung Spezielle Reports auf Seite 23 bieten die M glichkeit Methoden auf Stabilit t zu testen Erwei
162. librierung dient zur Sicherstellung der Genauigkeit der Quantifizierung Falls zum Beispiel eine Kalibriertabelle zur quantitativen Bestimmung von Coffein angelegt wurde mu nach einem etwaigen S ulen bzw Kapillarenwechsel eine Rekalibrierung durchgef hrt werden Auch wenn es sich um denselben S ulen bzw Kapillarentyp handelt besitzt die S ule bzw Kapillare nicht genau dieselben Eigenschaften wie die mit der die Kalibriertabelle f r Coffein erstellt wurde Daher sollten die Stufen der Kalibriertabelle mit der neuen S ule bzw Kapillare nochmals ermittelt werden bevor die unbekannte Probe auf ihren Coffeingehalt untersucht wird Durch diese Vorgehensweise werden die Proben unter denselben Bedingungen analysiert Manuelle Rekalibrierung Sie k nnen Informationen f r Peakkalibrierungen auch manuell eingeben und die Kalibriertabelle mit Hilfe der Schaltfl che Manual Setup im Dialogfeld New Calibration Table normieren Normalerweise wird eine neue Kalibriermethode erstellt indem man eine Standardmischung analysiert eine Kalibriertabelle erstellt und die Menge aller kalibrierter Peaks angibt um die Responsefaktoren zu berechnen F r einige Anwendungen z B in der petrochemischen Industrie ist dieser Ansatz sehr ineffizient da dieselben Substanzen seit Jahren untersucht werden und die Responsefaktoren der verschiedenen Substanzen f r verschiedene Detektoren bereits vorliegen 193 Kalibrierung Rekalibrierung In dies
163. m Dialogfeld Integration Events nicht eingesehen werden Nach Laden eines Signales werden sie nur durch Aktivieren von Apply Manual Integration Events im Dialogfeld Integration Events oder durch Wahl von Apply Manual Events from Method im Men Integration angewendet Die manuellen Integrationsparameter verwenden absolute Zeitfenster Sie f hren keine Anpassung bei einer Signalverschiebung durch 146 Peak Identification Peakerkennung Peak Identification Peakerkennung In diesem Kapitel werden folgende Themen behandelt Was ist eine Peakidentifizierung Regeln zur Peak bereinstimmung M glichkeiten der Peakidentifizierung Absolute Retentionszeiten Relative Retentionszeiten Peakqualifier Der Ablauf der Identifizierung 148 Peak Identification Peakerkennung Was ist eine Peakidentifizierung Was ist eine Peakidentifizierung Die Peakidentifizierung ist die Identifizierung der Komponenten einer unbekannten Probe auf der Basis ihrer chromatographischen oder elektrophoretischen Eigenschaften mit einer definierten Standard oder Kalibrierprobe Die Identifizierung von Komponenten ist die Voraussetzung zur Quantifizierung Eigenschaften jeder interessierenden Komponente werden in der Kalibriertabelle einer Methode gespeichert Die Peakidentifizierung erfolgt durch Vergleich jedes Peaks im Signal mit den Peaks in der Kalibriertabelle Die Kalibriertabelle enth lt die erwarte
164. n Text zur Beschreibung einer Methode e die Ger testeuerung ist von der Konfiguration abh ngig und kann beispielsweise Folgendes enthalten Ofenparameter Parameter des automatischen Probengebers Detektorparameter e die Datenauswertung besteht aus Signaldetails Integrationsparametern Parametern zur Quantifizierung Parametern zur Kalibrierung Parametern zur Reporterstellung e die Checkliste zur Ausf hrung eines Analysenlaufes besteht aus den Teilen der Methode die ausgef hrt werden Methoden Verzeichnisstruktur von Methoden Verzeichnisstruktur von Methoden Eine Methode besteht aus einer Gruppe von Dateien die im Methodenverzeichnis gespeichert werden Im Verzeichnis METHODS stehen alle Methoden Sie besitzen die Dateinamenerweiterung M Methodendateien mit der Erweiterung MTH enthalten die Parameters tze und liegen im ASCII Format vor Die Datei INFO MTH fa t die Kontrollparameter der Methode zusammen Methodendateien mit Parametern zur Ger testeuerung tragen den Namen des zugeh rigen Analysenger tes Einige Beispiele LC1090 MTH Datenerfassungsmethode des HP 1090 GC5890 MTH Datenerfassungsmethode des HP 5890 HPCE1 MTH Datenerfassungsmethode der Agilent Kapillarelektrophorese DAD1 MTH Datenerfassungsmethode des HP 1090 HP 1050 oder HP 1040 Dioden Array Detektors FLD1 MTH Datenerfassungsmethode des HP 1046 Fluoreszenzdetektors ECD1 MTH Datenerfassungsmethode des Agilent 1049 Elektrochemische
165. n Diese Liste umfa t die vorgesehenen Aufgaben des Systems Logbook Logbuch Mit der Wahl von Logbook k nnen Sie eine Liste mit den vermessenen Proben den Ger tebedingungen und allen unerwarteten Ereignissen w hrend der Messungen erstellen Methods Methoden Mit der Wahl von Methods k nnen Sie eine Liste aller Methoden die in einer Serie von Messungen benutzt wurden erstellen Analysis Reports Analysenreports Mit der Wahl von Analysis reports erhalten Sie Reports der einzelnen Analysen gem der in der Methode gew hlten Vorlage Einzelne Analysenreports k nnen nach jeder Analyse mit der gew hlten Reportvorlage der Methode ausgedruckt werden Dies erfolgt zus tzlich zu den Reportabschnitten des zusammenfassenden Reports der Sequenz Siehe Sequence Output Spezifikationen zur Ausgabe auf Seite 258 Statistics for Calibrated and Sample Runs Statistik f r Standards und Analysen Mit der Wahl von Statistics cal runs werden statistische Trendanalysen der Kalibrierproben erzeugt Mit der Wahl von Statistics sample runs werden statistische Trendanalysen f r die unbekannten Proben erstellt Beide Wahlm glichkeiten bieten die Gestaltungsvorlagen Standard Statistic und Extended Statistic Extended Statistics druckt die statistischen Trends der Analysen graphisch Standard Statistics druckt 257 Verwendung der ChemStation Reports Sequence Summary Reporting nur T
166. n Detektors ADC1 MTH Datenerfassungsmethode des Agilent 35900 Wenn zwei identische Module angeschlossen sind hei en die Methoden ADC1 MTH ADC2 MTH 1050VWD Datenerfassungsmethode von Modulen der Serie HP 1050 Das Modul wird in den letzten drei Buchstaben beschrieben wie hier z B der Variable Wellenl ngendetektor DAMETHOD REG f r die Datenauswertung LALS1 REG Parameter f r die automatischen Probengeber der Agilent 1100 Serie Die Methodendatei f r andere Module der Agilent 1100 Series folgt derselben Regel Ixxxl reg wobei xxx dem Initialwort f r das Modul entspricht 50 Methoden Was geschieht w hrend der Ausf hrung einer Methode Was geschieht w hrend der Ausf hrung einer Methode Die Checkliste zur Ausf hrung legt in einem Dialogfeld fest welcher Teil einer Methode in einem Analysenlauf ausgef hrt wird Die Checkliste zur Ausf hrung besteht aus acht Teilen e Befehl oder Makro vor dem Analysenlauf Pre Run e Datenerfassung e Standard Datenauswertung e Auswertemethode des zweiten Datensignals nur bei GC Ger ten e Angepa te Datenauswertung e Speicherung von GLP Daten e Befehl oder Makro nach dem Analysenlauf Post Run e Speicherung einer Kopie der Methode mit Daten Bei der Ausf hrung einer Methode werden die im Dialogfeld RunTime Checklist spezifizierten Teile ausgef hrt Ablauf einer Methode Abbildung 1 vermittelt einen berblick ber den Status der ChemStation w hrend des A
167. n des Kontrollk stchens in der RunTime Checklist gew hlt wurde Sie k nnen diese Daten ber das Men Data Analysis der ChemStation einsehen aber nicht ver ndern Befehl oder Makro nach dem Analyselauf Post Run Falls ein Befehl oder ein Makro zur Ausf hrung nach dem Analysenlauf gew hlt wurde erfolgt die Ausf hrung zum Beispiel das Anfertigen einer Sicherungskopie der Daten auf Diskette nach der Datenauswertung 54 Methoden Was geschieht w hrend der Ausf hrung einer Methode Speichern einer Kopie der Methode mit den Daten Dies erfolgt nach der Datenerfassung nur wenn in der RunTime Checklist Save Method with Data aktiviert wurde Hiermit wird die aktuelle Methode in das Datenverzeichnis kopiert 55 Methoden Zusammenfassung des Methodenablaufs Zusammenfassung des Methodenablaufs Die folgende Liste fa t den Ablauf der Methode zusammen f r den Fall da alle Teile der RunTime Checklist gew hlt wurden 1 Befehl oder Makro vor dem Analysenlauf F hrt eine Aufgabe aus bevor der Analysenlauf gestartet wird Datenerfassung F hrt ein Programm im automatischen Probegeber aus Injiziert die Probe Erfa t die Rohdaten Speichert diese Daten Speichern der Methode mit den Daten Datenauswertung Datenbearbeitung L dt den Datensatz Integriert den Datensatz Identifiziert und quantifiziert Peaks Durchsucht wenn m glich Spektrenbibliotheken berpr ft wenn m glich die Peakreinhe
168. n einem Register gespeichert werden Die Peakreinheit kann auch automatisch am Ende eines Analysenlaufes als Teil einer Methode ermittelt werden Hierzu mu das Ankreuzk stchen Check Purity aktiviert werden wenn die automatische Bibliothekssuche oder eine geeignete 53 Methoden Was geschieht w hrend der Ausf hrung einer Methode Reportvorlage gew hlt wird Weitere Informationen hierzu finden Sie im Buch Installation und Funktion des Spektrenmoduls Ausdruck eines Reports Ein Report mit qualitativen und quantitativen Ergebnissen des Analysenlaufs wird erzeugt Angepa te Datenauswertung Die angepa te Datenauswertung erm glicht Ihnen die Ausf hrung spezieller Makros zur Auswertung Ihrer analytischen Daten Speichern von GLP Daten Das Bin rregister GLPSave Reg wird zusammen mit der Methode der Datenauswertung im Standardverzeichnis der Datens tze gespeichert Dies dient zur Sicherung von Datenqualit t und Datenherkunft Die bin re Registerdatei GLPSave Reg enth lt folgende Informationen in einem Format das nicht editiert werden kann und durch eine Pr fsumme gesch tzt ist e die wichtigsten Eingabeparameter des Analysenger tes k nnen graphisch betrachtet werden e chromatographische oder elektrophoretische Signale e Integrationsergebnisse e Ergebnisse der quantitativen Auswertung e Methode der Datenauswertung e Logbuch Diese Daten werden nur gesichert wenn die Option Save GLP Data durch Aktiviere
169. nd Paare und bestehen aus An und Aus bzw Start und Stop Anfangsparameter Initial events Anf ngliche Peakbreite Initial Peakwidth Anf ngliche Peakbreite in halber H he Initial Threshold Minimale Signalh he zur Peakerkennung Initial Area Reject Minimale Peakfl che zur Peakerkennung Shoulder Detection Aktiviert on oder deaktiviert off die Erkennung von Peakschultern Peakbreite Peak Width Der Standardintegrator berechnet die Peakbreite W mit Hilfe der folgenden Formel siehe Abbildung 14 f r weitere Informationen W 03x t t 0 7x5 mit ti Zeitabschnitt A Peakfl che H Peakh he Dies entspricht der Breite bei halber H he eines Gauss Peaks wobei t t3 und A H identisch sind Peaks mit Tailing weisen relativ zu ihrer Halbwertbreite eine gr ere Breite auf so da die Berechnung der Anzahl theoretischer Trennb den mit dieser Breite eine zu kleine Zahl ergibt Dennoch gibt der Integrator gute Werte f r die Peakbreite berlappender Peaks an 91 Der Standardintegrationsalgorithmus Integrationsparameter Abbildung 14 Peakbreitenberechnung Wendepunkte Peakanfang Die Voreinstellung der Peakbreite steuert die Selektivit t des Integrators in der Unterscheidung zwischen Peaks und Basislinienrauschen Eine geeignete Voreinstellung ist die Halbwertbreite eines einzelnen Peaks in Minuten Eine gute Einstellung der Peakbreite soll Rauschen mindestens so gut ausfiltern da im
170. nente identifiziert Wenn ein Peak als Zeitreferenz oder interner Standard dient wird der gr te Peak im Zeitfenster als diese Komponente identifiziert Wenn Peakqualifier verwendet werden wird das Signalverh ltnis in Kombination mit dem Zeitfenster zur Identifizierug der Komponente benutzt Wenn der Peak ein Peakqualifier ist wird der gemessene Peak identifiziert der dem Hauptpeak der Komponente am n chsten benachbart ist Wenn ein Probenpeak nicht in eines der vorgegebenen Zeitfenster f llt wird er als unbekannte Komponente aufgelistet 150 Peak Identification Peakerkennung M glichkeiten der Peakidentifizierung M glichkeiten der Peakidentifizierung Eine bereinstimmung von Probenpeaks mit den Peaks in der Kalibriertabelle der ChemStation Software kann mit verschiedenen Methoden festgestellt werden Absolute Retentions bzw Migrationszeit Die Retentions bzw Migrationszeit des Probenpeaks wird mit der erwarteten Retentions bzw Migrationszeit der Komponente in der Kalibriertabelle verglichen Korrigierte Retentions bzw Migrationszeit Die erwartete Retentions bzw Migrationszeit von Peaks wird ber die aktuellen Retentions bzw Migrationszeiten von einem oder mehreren Referenzpeaks korrigiert Die Peak bereinstimmung erfolgt dann auf der Basis dieser korrigierten relativen Retentions bzw Migrationszeiten Die Referenzpeaks m ssen in der Kalibriertabelle spezifiziert werden Peakqualifier
171. nfigurierungen eine schematisch dargestellete Ger teschnittstelle ber dieses schematisch Benutzerinterface kann man sehr schnell auf die Ger teparameter zugreifen wobei ein graphischer berblick ber den Status jeder folgenden Analyse gegeben wird Man kann die schematisch dargestelllte Ger teschnittstelle auch ausschalten um Arbeitsspeicherplatz und andere Speicherquellen von Windows zu sparen Das Hauptmen Data Analysis Datenauswertung erweitert die Standardsymbolleiste um bestimmte Datenauswertungsmodi einschlie lich Integration Kalibrierung Reporterstellung Beschriftungsm glichkeiten Signalvergleich und eventuell speziellen weiteren Modi Jeder dieser einzelnen Datenauswertungsmodi wird durch ein artspezifisches Symbolset unterst tzt 18 ChemStation Konzepte Zur ChemStation Software Das Hauptmen Report Layout erm glicht es Ihnen die u ere Form einer bestimmten Reportart bezogen auf die Objekte graphisch festzulegen Auch dieses Hauptmen enth lt eine Symbolleiste die speziell f r diese Aufgaben ausgelegt ist Datenerfassung Der Status der Analysenger te wird kontinuierlich verfolgt und auf dem Bildschirm zusammen mit der abgelaufenen Analysenzeit angegeben wenn die ChemsStation als sichtbares Fenster oder als Symbol ausgef hrt wird Alle Ereignisse aus einem Analysenlauf einschlie lich aller Fehlermeldungen und der Bedingungen der Analysenger te bei Start und Ende des Laufes werden in
172. ng Interner gespeicherter Doppelpr zisions Zahlenzugriff e Theoretische Trennb den 5 Sigma Erweiterter Leistungstest e Theoretische Trennb den Statistisch Erweiterter Leistungstest e Aufl sung Halbe Breite Leistungstest amp Erweiterter Leistungstest e Aufl sung Tangente Erweiterter Leistungstest e Aufl sung 5 Sigma Erweiterter Leistungstest e Aufl sung Statistisch Erweiterter Leistungstest Verwenden Sie den Befehlszeileneintrag DUMPTABLE CHROMRES PEAK C HPCHEM 1 TEMP PEAK TXT Bearbeitete Substanzinformation e Berechnete Menge Verwenden Sie den Befehlszeileneintrag DUMPTABLE CHROMRES COMPOUND C HPCHEM 1 TEMP COMPOUND TXT Kalibriertabelleninformation e Stufenzahl e Menge e Fl che e Mindest Verwenden Sie folgenden Eintrag in der Befehlszeile DUMPTABLE _DAMETHOD CALPOINT C HPCHEM 1 TEMP CALIB TXT Lineare Regressionsinformation e Y Achsenabschnitt CurveParml e Steigung CurveParm2 e Korrelationskoeffizient Verwenden Sie folgenden Eintrag in der Befehlszeile DUMPTABLE _DAMETHOD PEAK C HPCHEM 1 TEMP REGRESS TXT 285 Ermittlung der Systemleistung Interner gespeicherter Doppelpr zisions Zahlenzugriff 286 14 berpr fung des Systems berpr fung des Systems berpr fung des Systems Die System berpr fung ist ein Schl sselbaustein in der Qualit tssicherung des Routinebetriebs eines analytischen Labors
173. ng bestimmt Nachteile der Einpunktkalibrierung sind die Annahmen von Detektorlinearit t und Verlauf der Kurve durch den Ursprung Dies stimmt nicht immer und kann daher zu unkorrekten Ergebnissen f hren Einpunktkalibrierkurve Response 1000 Kalibrierkurve Konzentration ng ul Zur Erzielung korrekter Ergebnisse sollte eine Kalibrierkurve mindestens zwei Kalibrierpunkte aufweisen Diese Kalibrierpunkte sollten die in der Probe erwarteten Mengen umschlie en d h dar ber und darunter liegen 184 Abbildung 36 Kalibrierung Kalibrierverfahren Zweipunktkalibrierkurve Response 1000 Kalibrierkurve 100 F J 10 Konzentration ng ul Wenn Sie zum Beispiel eine Probe vermessen wollen deren Gehalt im Bereich von 1 bis 10 ng ml erwartet wird sollte die Kalibrierkurve mindestens die beiden Punkte gem Abbildung 36 aufweisen Bestimmungsgrenzen Die ChemsStation erlaubt Ihnen die Definition von Bestimmungsgrenzen in absoluten Einheiten f r jede Komponente Mehrpunktkalibrierung Mehrpunktkalibrierungen k nnen bei nichtlinearem Verhalten einer Substanz im kalibrierten Bereich oder zur Best tigung der Linearit t eingesetzt werden Jeder Kalibrierpunkt wird mit einer Probe einer bestimmten Konzentration gewonnen Die Kalibrierproben sollen mit Konzentrationen angesetzt werden die den Bereich der erwarteten Probenkonzentrationen umschlie en Dann ist es m glich nderungen
174. ng 32 Quantifizierung Berechnungen mit internem Standard ISTD Bei einer Analyse mit internem Standard wird die Menge der interessierenden Substanz ber das Responseverh ltnis der beiden Peaks auf die Menge an internem Standard bezogen Bei einer ISTD Kalibrierung mit zwei L ufen wird die Berechnung eines korrigierten Mengenverh ltnisses einer bestimmten Substanz in einer unbekannten Probe mit folgenden Schritten durchgef hrt Lauf 1 Kalibrierung 1 Die Kalibrierkurve wird erstellt indem f r jeden Punkt ein Mengenverh ltnis und ein Responseverh ltnis berechnet wird Das Mengenverh ltnis ist die Menge der Substanz dividiert durch die Menge des internen Standards f r diesen Kalibrierpunkt Das Responseverh ltnis errechnet sich als Peakfl che der Substanz dividiert durch Peakfl che oder H he des internen Standards f r diesen Kalibrierpunkt 2 Die Kalibrierkurve wird auf der Basis der Anpassung Fit berechnet die in den Dialogfeldern Calibration Settings oder Calibration Curve angegeben wurde RF Amount Ratio Response Ratio Mengenverh ltnis Responseverh ltnis Mengenverh ltnis 173 Quantifizierung Berechnungen mit internem Standard ISTD Lauf 2 Unbekannte Probe 1 Zur Ermittlung des Responseverh ltnisses der unbekannten Probe wird der Response der Substanz in der unbekannten Probe durch den Response des internen Standards in der unbekannten Probe dividiert 2 D
175. ngen hinsichtlich variierendem Detektorresponse verschiedenen Konzentrationen Probenverd nnung Probenmengen und zur Umrechnung von Konzentr tionseinheiten Absoluter Responsefaktor Der absolute Responsefaktor einer Substanz ist definiert als Quotient der Substanzmenge geteilt durch die gemessene Fl che oder H he des zugeh rigen Standardpeaks Der absolute Responsefaktor wird stets f r Kalibrierungen verwendet und korrigiert den Detektorresponse f r einzelne Probenbestandteile Multiplikationsfaktor Mit dem Multiplikationsfaktor k nnen die Ergebnisse jeder Substanz multipliziert werden Multiplikatoren k nnen dazu eingesetzt werden Konzentrationseinheiten umzurechnen Verd nnungsfaktor Der Verd nnungsfaktor ist eine Zahl mit der alle Ergebnisse multipliziert werden bevor der Report gedruckt wird Sie k nnen den Verd nnungsfaktor zur Anpassung der Skala in der die Ergebnisse angegeben werden oder zur Korrektur von Konzentrations nderungen zum Beispiel durch eine Probenvorbereitung verwenden Er dient auch f r alle anderen Berechnung mit einem konstanten Faktor Probenmenge Bei der Wahl der Rechenmethoden ESTD oder ISTD werden in den Reporttypen ESTD und ISTD relative anstelle absoluter Werte angegeben Das bedeuted da die Menge jeder Substanz als prozentualer Anteil an der Probengesamtmenge angegeben wird Die Probenmenge dient in den Reports 165 Quantifizierung Korrekturfaktoren ESTD und ISTD
176. nnung beeinflu t wird erh lt der Peak die Klassifizierung erzwungen forced R Ein L sungsmittelpeak wurde von manueller Integration betroffen Eine solche tangentiale Peakanpassung Tangent Skim wird als neuberechneter L sungsmittelpeak klassifiziert Peakart Bei eingeschalteter Option Schultererkennung shoulder detection wird in die Spalte Type ein vier Buchstabencode eingef gt FSHO Auf der Anstiegsflanke des Peaks wurde eine Schulter entdeckt Front Shoulder RSHO Auf der Abstiegsflanke des Peaks wurde eine Schulter entdeckt Rear Shoulder Konstruktion einer modifizierten Basislinie Unter bestimmten Bedingungen modifiziert der Integrator die Basislinie und schlie t Punkte durch Anwendung bestimmter Regeln siehe Abbildung 7 ein Konstrunktion einer modifizierten Basislinie OSHB e Wenn ein Peak die Basislinie schneidet BP und PB geht die Basislinie durch den niedrigsten Punkt des Peaks gem Punkt 1 in Abbildung 7 e Wenn ein L sungsmittelpeak nach Verwendung einer tagentialen Anpassung nicht auf der Basislinie beginnt wird die Basislinie durch einen Punkt gelegt der auf einer horizontalen Verl ngerung des letzten gefundenen Basislinienpunktes und dem Anfang des L sungsmittelpeaks 85 Abbildung 8 Der Standardintegrationsalgorithmus Codes zur Beschreibung der Peaktrennung liegt vgl Punkt 2 in Abbildung 7 Die Buchstaben OSHB bedeuten Overflow solvent horizontal
177. nsnummern dieses Probenfl schchens mit dieser Methode hier 03 f r die dritte Injektion Nullproben als Analysenl ufe Beispiel NV 0499 D mit e NV steht f r no vial kein Probenfl schchen e ist der Trennstrich e 0499 ist die 99 Nullprobe aus der Sequenzzeile 4 209 Automatisierung Vergabe von Dateinamen in einer Sequenz Manuelle Vergabe von Dateinamen Eine Spalte in der Sequenztabelle hat die Beschriftung Datafile Wenn hier nichts eingetragen wird werden die Dateinamen nach einer der anderen M glichkeiten automatisch oder ber Prefix Z hler vergeben Wird in die Spalte mit der Beschriftung Datafile irgendein Text eingegeben verwendet die ChemStation diesen Text als Dateinamen f r den Analysenlauf Wenn in einer Zeile mit einem manuell vergebenen Dateinamen f r ein Probenfl schchen mehrere Injektionen vorgesehen sind schneidet die ChemsStation automatisch Buchstaben vom eingegebenen Namen ab und h ngt die Injektionsnummer an Dies verhindert daf derselbe Dateiname f r mehrere Injektionen vergeben wird Vergabe von Dateinamen ber einen Prefix Z hler Wenn Sie f r die Benennung von Datens tzen den Prefix Z hler verwenden erstellt die ChemStation f r jede Analyse einen Namen Bei Ger ten die Analysen mit Doppelsignalen erm glichen wie z B dem GC erstellt die ChemsStation f r jedes Signal einen Dateinamen Die ChemsStation erstellt die Dateinamen aus einem vom Anwender e
178. nstruktion der Basislinie Im einfachsten Fall konstruiert der Integrator die Basislinie als Folge gerader Linienst cke zwischen folgenden Punkten e dem Anfang der Basislinie e den Strichmarkierungen e dem Peakende Standardm ige Konstruktion der Basislinie o 4 N N III 7 Basislinie Strichmarkierungen 123 Der neue Integrationsalgorithmus Basislinienbestimmung Anfang der Basislinie Wenn zu Beginn eines Laufes keine Basislinie gefunden wird wird der Anfang der Basislinie auf eine der folgenden Wege festgelegt e Vom Startpunkt der Analyse zum ersten Basislinienpunkt wenn der Startpunkt der Analyse niedriger ist als der erste Basislinienpunkt e Vom Startpunkt der Analyse zum ersten Talpunkt wenn der Startpunkt der Analyse niedriger ist als der erste Talpunkt e Vom Startpunkt der Analyse zum ersten Talpunkt wenn das erste Tal eine imagin re Linie zwischen dem Startpunkt der Analyse und dem ersten Basislinienpunkt schneidet e Vom Startpunkt der Analyse zu einer horizontalen Basislinie die zum ersten Basislinienpunkt verl ngert wird Strichmarkierungen Strichmarkierungen kennzeichnen den Peakanfang und das Peakende Ihre Position wird von den Zeiten f r Peakanfang und Peakende bestimmt die in der Peaktabelle abgelegt werden Ende der Basislinie Der letzte g ltige Basislinienpunkt wird dazu verwendet das Ende der Basislinie zu kennzeichnen In den F llen in denen der
179. ntsprechenden Hinweis im Report Rekalibrierung aller Retentions bzw Migrationszeiten Diese M glichkeit gestattet die Rekalibrierung von Retentions bzw Migrationszeit aller identifizierten und unidentifizierten Peaks Dies geschieht mit Hilfe der Retentions bzw Migrationszeiten aller identifizierten 195 Kalibrierung Rekalibrierung Peaks Die Responsefaktoren unidentifizierter Peaks werden nicht aktualisiert 196 10 Automatisierung A utomatisierung In diesem Kapitel werden folgende Themen behandelt Was ist Automatisierung Was ist eine Sequenz Mit Sequenzen arbeiten Sequenztypen Sequenzen editieren Was geschieht w hrend der Ausf hrung einer Sequenz und Anpassung von Sequenzen 198 Automatisierung Was ist Automatisierung Was ist Automatisierung Unter Automatisierung versteht man die unbeaufsichtigte Ausf hrung mehrerer Analysen Der Sequenzteil der ChemsStation Software erm glicht Ihnen die automatische Datenerfassung Datenauswertung und Reporterstellung 199 Automatisierung Was ist eine Sequenz Was ist eine Sequenz Eine Sequenz ist eine Folge von Anweisungen zur Automatisierung der Analyse von Proben Eine Sequenz kann eine Probe automatisch injizieren und die Daten gem der gew hlten Methode erfassen und auswerten Jede Probe in einer Sequenz kann mit einer anderen analytischen Methode vermessen werden Daher k nnen unterschiedliche Param
180. nverzeichnis abgelegt Diese Batch Datei enth lt Zeiger auf die entsprechenden Datens tze des Batch Reviews Um einen Batch zu laden mu der Anwender nur eine Methode f r den Batch anw hlen und dann die einzelnen Datens tze aussuchen die innerhalb des Batches bearbeitet werden sollen Man kann die Genauigkeit der Kalibrierung die Leistungsf higkeit des Systems und die einzelnen Integrationen berpr fen ehe man die Ergebnisse verbessert Alle Integrationsparameter die f r ein Chromatogramm spezifisch sind sowie ihre nderungen werden aus Gr nden der Nachvollziehbarkeit der Ergebnisse mit dem Datensatz gespeichert Diese interaktive Umgebung bietet auch den vollen Zugriff auf alle anderen Funktionen der Datenauswertung wie die berpr fung der Peakreinheit die Bibliothekssuche usw Der Batch Review verwendet dieselben Register f r die Datenauswertung ChromReg and ChromRes wie die Standard Datenauswertung und sollte daher nicht innerhalb einer Online Sitzung zum Einsatz kommen in der gerade Analysen duchgef hrt werden 237 Batch Review Batch Konfiguration Batch Konfiguration Als Batch bezeichnet man eine individuelle Auswahl von Datens tzen die mit einer indviduell bestimmten Methode ausgewertet werden Dabei wird f r alle Datens tze innerhalb eines Batches dieselbe Methode verwendet Die Auswertungsschritte die f r jede zu bearbeitende Probe im Review durchgef hrt werden sollen sind frei w hlbar Integra
181. obachtungen mit dem Index 1 1S zum letzten Index N bis d Zeitintervall zwischen benachbarten Fl chenabschnitten der Peakfl che t Zeit des ersten Fl chenabschnittes der Peakfl che N X JA i 1 272 Ermittlung der Systemleistung Definitionen des Leistungstests N Y G A i 1 Statistische Momente Verzerrung Skew und berschu Excess Die statistischen Momente werden zur Beschreibung asymmetrischer Peakformen verwendet Es existiert eine unendliche Anzahl statistischer Momente zu einem Peak es werden jedoch nur die ersten f nf zur Beschreibung chromatographischer Peaks verwendet Diese werden das 0 Moment 1 Moment 4 Moment genannt Das 0 Moment repr sentiert die Peakfl che Das 1 Moment repr sentiert die mittlere Retentionszeit gemessen am Peakschwerpunkt Dies unterscheidet sich von der chromatographischen Retentionszeit die am Peakmaximum gemessen wird vorausgesetzt es handelt sich um einen symmetrischen Peak Das 2 Moment ist eine Repr sentation der Peakvarianz die ein Ma f r die Peakerweiterung ist Es ist eine Summe der Varianzen aus verschiedenen Beitr gen der Analysenger te Das 3 Moment beschreibt die vertikale Symmetrie oder Verzerrung Es ist ein Ma f r die Abweichung der Peakform von der idealen Gau form Die Verzerrung wird im Report Performance amp Extended zus tzlich dimensionslos angegeben Ein symmetrischer Peak hat eine Verzerrung von Null
182. oder Peakh hen angewendet um Schwankungen der Detektorempfindlichkeit f r verschiedene Probenbestandteile auszugleichen Der Report Norm wird genauso berechnet wie der Report ESTD au er da ber einen zus tzlichen Rechenschritt die relativen Mengen anstelle der absoluten Mengen der Substanzen berechnet werden Der Report Norm hat dieselben Nachteile wie die Reports Fl chen und H hen Jede nderung mit einem Einflu auf die Gesamtpeakfl che hat auch einen Einflu auf die berechneten Konzentrationen der Einzelsubstanzen Der Report Normierung sollte nur eingesetzt werden wenn alle interessierenden Substanzen eluiert bzw migriert sind und integriert wurden Die Herausnahme von Peaks aus dem Report Normierung ver ndert die Ergebnisse dieser Probe im Report Die Formel zur Berechnung der Norm einer Substanz x lautet Response RF 100 M D Norm of x Y Response RF Erl uterung Response ist die Fl che oder H he des Peaks x RF ist der Responsefaktor Response RF ist die Summe aller Produkte RESPONSE RF f r e Peaks einschlie lich des Peaks x M ist der Multiplikationsfaktor D ist der Verd nnungsfaktor Multiplikations und Verd nnungsfaktor werden den Dialogfeldern Calibration Settings oder Sample Information entnommen 171 Tabelle 8 Quantifizierung Berechnungen mit internem Standard ISTD Berechnungen mit internem Standard ISTD Die Berechnung
183. oder getrennt erfolgen soll und die Skalierungsfaktoren festsetzen die Darstellung des Chromatogramms kann je nach den M glichkeiten des angeschlossenen Ger tes auch mit Verl ufen der Ger teparameter berlagert sein Anmerkungen k nnen vom Anwender definiert und in die Darstellung eingef gt werden wobei die Schriftart und gr e sowie die Ausrichtung und Farbe w hlbar sind eine einmal definierte Anmerkung kann graphisch verschoben editiert oder gel scht werden Kopieren der Darstellung in die Windows Zwischenablage als Metafile oder im Bitmap Format eine pick mode Funktion erm glicht die Ausgabe von Werten f r einzelne Datenpunkte in Detektoreinheiten Export von digitalisierten Werten in die Windows Zwischenablage 20 ChemStation Konzepte Zur ChemStation Software Datenauswertung Integration Die ChemStation enth lt zwei Integrationsalgorithmen Der traditionelle Integrationsalgorithmus war Bestandteil der fr heren Versionen der ChemsStation und befindet sich in den meisten anderen Auswertesoftware Paketen f r analytische Daten von Agilent Technologies Der neue Integrationsalgorithmus zielt auf bessere Robustheit Zuverl ssigkeit und Anwenderfreundlichkeit ab F r diese Softwareversion empfehlen wir den Einsatz des traditionellen Algorithmus f r bereits vorhandene validierte Methoden und des neuen Algorithmus f r neue Methoden Allgemeine Integrationsm glichkeiten Die wichtigsten M glichkei
184. ombination aus expliziter und zyklischer Kalibrierung Kombination aus expliziter und zyklischer Kalibrierung Dieser Sequenztyp besteht aus expliziten und zyklischen Kalibrierungen in derselben Sequenz Diese M glichkeit erlaubt Ihnen eine komplette Rekalibrierung der Methode zu Beginn einer Sequenz explizite Rekalibrierung und danach die Aktualisierung der Kalibrierung zyklische Rekalibrierung w hrend der Sequenz e Es m ssen f r jeden Kalibrierpunkt Level in der Tabelle Sequence Recalibration zwei Zeilen f r die Kalibrierung angegeben werden Eine Zeile enth lt die Eintr ge f r die explizite die andere f r die zyklische Rekalibrierung e Die Sequenztabelle mu Eintr ge f r jede Kalibrierzeile aufweisen Alle Probenfl schchen der zyklischen Rekalibrierungen m ssen vor den Eintr gen der expliziten Rekalibrierung und der Proben selbst eingetragen werden Beispiel Die unten dargestellte Sequenztabelle zeigt eine Methode mit Einpunktkalibrierung namens SimpReg Sie ist zur Vereinfachung des Beispiels verk rzt Tabelle 14 Sequenztabelle f r SIMPREG 1 1 impReg 1 Kalibrierung 1 Mittelwert Mittelwert 3 Average Average 2 1 impReg 1 Kalibrierung 1 Ersetzen Ersetzen Replace Replace 3 2 impReg 4 3 impReg 5 4 impReg 6 5 impReg 223 Tabelle 14 Automatisierung Kombination aus expliziter und zyklischer Kalibrierung Sequenzta
185. on Die Tabelle der Peaksummen wird f r einige Anwendungen f r die petrochemische oder pharmazeutische Industrie geliefert und l t sich folgenderma en sehr wirksam einsetzen e Addition der Peakfl chen die innerhalb eines benutzerdefinierten Bereiches liegen e Addition der Fl chen eines Peakbereiches und Berechnung mit einem einzigen Multiplikator e Addieren Sie die Fl chen aller Peaks die denselben Namen haben Die Tabelle der Peaksummen hnelt in mancher Hinsicht der Kalibriertabelle Wie die Kalibriertabelle ist sie mit der aktuellen Methode verkn pft Sie m ssen erst eine Kalibriertabelle f r eine Analyse erstellen bevor Sie eine Tabelle der Peaksummen anlegen k nnen 192 Kalibrierung Rekalibrierung Rekalibrierung Was ist Rekalibrierung Unter Rekalibrierung versteht man die Aktualisierung eines Kalibrierpunktes auf einer Kalibriergeraden Bei einer Rekalibrierung wird eine Probe vermessen die dieselben Substanzen in denselben Mengen enth lt wie die Originalprobe Durch Vermessen dieser Kalibrierprobe erhalten Sie aktualisierte Responsefaktoren und Retentions bzw Migrationszeiten Sie k nnen auch eine Mittelwertbildung aus mehreren L ufen zur Gewichtung der Responsefaktoren w hlen Warum ist die Rekalibrierung wichtig Die meisten Kalibrierungen sind nur f r eine beschr nkte Zeit g ltig weil sich die chromatographischen bzw elektropherographischen Rahmenbedingungen ver ndern Die Reka
186. on dem angeschlossenen Analysenger t wie z B von den LC Modulen der Agilent 1100 Serie oder den Agilent 6890 Series GCs unterst tzt wird Dies erm glicht es Ihnen den Systemstatus mit einem Blick zu berpr fen 64 Datenerfassung Statusinformationen W hlen Sie den Befehl System Diagram aus dem Darstellungsmen f r Method and Run Control auf um die bersicht aufzurufen Sie ist eine graphische Darstellung Ihres ChemStation Systems Jeder Bestandteil wird durch ein Symbol representiert Unter Verwendung des folgenden Farbcodes wird der aktuelle Status angezeigt Farbe Status grau inaktiv oder abgeschaltet gelb nicht bereit gr n bereit blau in Funktion rot Fehler Zus tzlich k nnen Sie Auflistungen ber die aktuellen Einstellungen der Parameter aufrufen Abgesehen von der Status bersicht erm glicht die Darstellung einen schnellen Zugriff auf die Dialogfelder der Parametereinstellungen f r jede Komponente des Systems Weitere Informationen ber die System bersicht finden Sie im Ger teabschnitt der Online Hilfe 65 Datenerfassung Statusinformationen 66 Integration Integration In diesem Kapitel werden folgende Themen behandelt e Was ist eine Integration e Was wird bei einer Integration durchgef hrt e Die Integrationsalgorithmen der ChemStation 68 Integration Was ist eine Integration Was ist eine Integration ber die Integration werden in einem c
187. on ge ndert werden Peak Identification Peakerkennung Hier werden Parameter definiert die zur Peakerkennung in Chromatogrammen oder Elektropherogrammen dienen Peak Quantification Mengenbestimmung Hier werden Parameter zur Konzentrations oder Mengenberechnung eines Peaks definiert Calibration and Recalibration Kalibrierung und Rekalibrierung Hier werden Parameter f r die Kalibrierung definiert die festlegen wie oft eine Kalibrierung ausgef hrt wird Report Hier wird das Format des Reports festgelegt der nach einem Analysenlauf gedruckt wird Run Time Checklist Checkliste zum Analysenlauf Hier wird definiert welcher Teil einer laufenden Methode ausgef hrt wird Sie k nnen die Checkliste zum Analysenlauf f r folgende Funktionen verwenden e zum Erfassen Speichern und Bearbeiten von Daten bis zur Reporterstellung e zum Ausf hren von nur einem Methodenteil e zum Erfassen und Speichern von Daten ohne Bearbeitung e zum erneuten Nachbearbeiten von Datens tzen e zum Einsatz eigener Makros zur Datenanalyse und Aktionen vor und nach dem Analysenlauf Pre und Postrun Processing und e zum Ablegen der Analysenergebnisse in Registern f r GLP Zwecke 45 Methoden Der Status von Methoden Der Status von Methoden Eine Methode kann auf zwei Arten vorliegen Gespeicherte Methode Stored Method Dies ist eine Methode die auf der Festplatte des Computers gespeichert ist Gespeicherte Methoden haben e
188. onsweise der Integration 78 Peakerkennung 79 Konstruktion der Basislinie 83 Codes zur Beschreibung der Peaktrennung 84 Berechnung der Peakfl che 88 Integrationsparameter 91 Tabellen mit Integrationsparametern 98 Integrationsmethoden 99 Autointegration 100 Integration 102 Manuelle Integration 103 Der neue Integrationsalgorithmus Der neue Integratoralgorithmus 109 Wie wird der neue Integrator an eine Konfiguration angepa t 110 Funktion des verbesserten Integrators 111 Integrieren von Peaks in der Praxis 115 Mehr ber den neuen Integrator 116 Peakerkennung 117 Basislinienbestimmung 123 Inhalt Codes zur Beschreibung der Peaktrennung 125 Berechnung der Peakfl che 131 Integrationsparameter 134 Tabellen mit Integrationsparametern 139 Anwendung des neuen Integrators 140 Integration 141 Autointegration 142 Manuelle Integration 144 Peak Identification Peakerkennung Was ist eine Peakidentifizierung 149 Regeln zur Peak bereinstimmung 150 M glichkeiten der Peakidentifizierung 151 Absolute Retentions bzw Migrationzeit 152 Korrigierte Retentions bzw Migrationszeiten 154 Peakqualifier 156 Die Durchf hrung der Identifizierung 159 Quantifizierung Was ist Quantifizierung 163 Rechenmethoden in der Quantifizierung 164 Korrekturfaktoren 165 Unkalibrierte Rechenmethoden 167 Kalibrierte Rechenverfahren 168 Berechnungen mit externem Standard ESTD 169 Berechnung von Norm 171 Berechnungen mit internem
189. oren einer Analyse mit Responsefaktoren vergleichen die von Hand in eine Kalibriertabelle eingetragen wurden Dabei wird Delta auf alle kalibrierten Peaks der Tabelle angewendet Sie k nnen verschiedene interne Standards bestimmen ber deren gemessene Responsefaktoren dann die neuen Responsefaktoren der anderen Peaks berechnet werden Sie legen f r jeden Peak in der Kalibriertabelle fest welcher interne Standard f r die Delta Berechnung verwendet werden soll 215 Automatisierung Seq uenztypen Sequenztypen Es gibt folgende Sequenztypen Explizite Kalibriersequenzen Explizite Kalibriersequenzen eines Kalibrierpunkts Zyklische Kalibriersequenzen mehrerer Kalibrierpunkte Explizite und zyklische Kalibrierungen in einer Sequenz Umschlie ende zyklische Kalibriersequenzen 216 Automatisierung Explizite Kalibriersequenzen Explizite Kalibriersequenzen Dieser Sequenztyp f hrt eine Rekalibrierung in Intervallen durch die Sie in der Sequenztabelle eingeben k nnen Zur Durchf hrung expliziter Kalibriersequenzen werden die Kalibrierproben in die Sequenz eingegeben ohne da ein Eintrag f r ein Intervall in der Sequenztabelle erfolgt Eine Rekalibrierung wird mit jeder in der Sequenztabelle eingetragenen Kalibrierprobe durchgef hrt 217 Automatisierung Zyklische Kalibriersequenzen eines Kalibrierpunkts Zyklische Kalibriersequenzen eines Kalibrierpunkts Dieser Sequenztyp entnimmt in regelm
190. orithmus Autointegration Mit der Autointegration kann es bei Chromatogrammen die St rungen oder Peaks zu Beginn oder am Ende aufweisen zu Problemen kommen Dabei sind folgende St rungen denkbar e umgekehrte Peaks e St rungen oder Einschwingen der Basislinie Ventil oder Signalschaltungen e ansteigende Basislinie am Ende eines Laufs S ulenbluten Wenn die Autointegration allein keine zufriedenstellenden Ergebnisse liefert k nnen zus tzliche Integrationsparameter programmiert werden Im obigen Chromatogramm wurden folgende zeitprogrammierten Integrationsparameter verwendet Integrator Off Integrator On Baseline All Valleys Set Baseline Mit Hilfe der zeitabh ngigen Integrationsparameter kann Autointegrate Funktion gute Ergebnisse liefern 101 Der Standardintegrationsalgorithmus Integration Integration Das Signal wird entsprechend der Integrationsparametertabelle integriert Sie k nnen diese Tabelle zur Optimierung der Integrationsergebnisse f r eine nachfolgende Reintegration verwenden Sowohl Autointegrate als auch Integrate liefern Integrationsergebnisse Autointegrate berechnet jedoch automatisch Anfangswerte von Schwellenwert und Peakbreite ber Edit Integration k nnen Sie Werte f r diese Parameter vorgeben oder die Standardwerte zu verwenden 102 Der Standardintegrationsalgorithmus Manuelle Integration Manuelle Integration Dieser Integrationstyp erm glicht Ihnen die Inte
191. port Jeder Typ wird unten kurz beschrieben Die Rechenmethoden werden in Kapitel8 Quantifizierung ausf hrlich besprochen Area Fl chen erzeugt den einfachsten Report und erfordert keine Kalibrierdaten da keine Korrektur des Detektor Response f r unterschiedliche Substanzen erfolgt Dieser Reporttyp kann zur Entwicklung einer Kalibriertabelle zur Verwendung mit anderen Reportoptionen genutzt werden Dieser Report ist f r Substanzen anwendbar deren Responsefaktoren gleich sind Height H hen ergibt einen Report hnlich des Typs Area wobei anstelle der Peakfl che die Peakh he zur Berechnung verwendet wird Norm ergibt einen Report in dem jede Komponente als prozentualer Anteil an der Gesamtmenge ausgedr ckt wird Die Peaks werden vor der Berechnung hinsichtlich ihres Detektor Response korrigiert ESTD Externer Standard ergibt einen Report der aktuellen Menge jeder Substanz in frei w hlbaren Einheiten Die Mengenberechnung erfolgt mit einer zuvor erstellten Kalibriertabelle Die Verwendung eines externen Standards erfordert die Kenntnis des Injektionsvolumens der Kalibriermischung ESTD erzeugt einen Report der relativen Mengen jeder Substanz als prozentualer Anteil der injizierten Probe Die Mengenberechnung erfolgt mit einer zuvor erstellten Kalibriertabelle Die Verwendung eines externen Standards erfordert die Kenntnis des Injektionsvolumens der Kalibriermischung ISTD Interner Standard erzeugt einen Repor
192. ports festlegen Sie k nnen Reportvorlagen graphisch gestalten darin allgemeine Informationen zu den Proben den Signalen die Integration und die quantitativen analytischen Ergebnisse aufnehmen Sie k nnen eigene Gestaltungselemente wie Texte Tabellen und Graphiken aufnehmen und die Informationen graphisch in Abschnitte gliedern sowie die Relativpositionen und Ausrichtung aller Elemente graphisch festlegen Eigene Abschnitte k nnen hinzugef gt gel scht sortiert oder verschachtelt werden Anwender k nnen eigene Kopf und Fu zeilen f r alle Seiten definieren und Datumseintr ge sowie Seitenzahlen f r beliebige Seiten im gew nschten Format festlegen Informationen zur Aufnahme in den Report k nnen alle Parameter der ChemStation oder alle Benutzer definierten Parameter sein Ein Reportdesign kann mit jeder Methode verbunden werden und zum Standardformat f r einen bestimmten Analysentyp werden Angepaf te Reports k nnen ber den Bildschirm den Drucker oder auf eine Datei ausgegeben werden Reports auf dem Bildschirm enthalten auch Graphiken Weitere Informationen zu Reportformatierungen finden Sie in der Online Hilfe Control Chart Reports In der ChemStation Software ist die Funktion Control Chart enthalten Sobald diese Funktion installiert und angew hlt ist kann der Anwender beim Ausf hren der Methode automatisch einen bestimmten Substanzparameter verfolgen Als Parameter kommen dabei in Frage Menge Responsefaktor
193. ppenden Peaks umgeht berlappende Peaks Talpunkt A Der Integrator behandelt berlappende Peaks nach folgender Vorgehensweise 1 Der Integrator summiert die Fl che des ersten Peaks bis zum Talpunkt auf 2 Am Talpunkt endet die Fl chensummierung f r den ersten Peak und die Aufsummierung f r den zweiten Peak beginnt 3 Wenn der Integrator das Ende des zweiten Peaks erkennt endet die Fl chensummierung Der Vorgang kann veranschaulicht werden indem 121 Abbildung 19 Der neue Integrationsalgorithmus Peakerkennung man die berlappenden Peaks mittels einer Lotf llung vom Talpunkt zwischen den beiden Peaks auf die Basislinie trennt Schultern Sind nicht aufgetrennte Peaks auf der vorderen oder hinteren Flanke eines gr eren Peaks Bei einer Schulter ist kein Talpunkt vorhanden an dem sich eine negative Steigung in eine positive Steigung ndert Ein Peak kann eine beliebige Anzahl an Schultern auf der vorderen und oder hinteren Flanke aufweisen Peakschultern a Schultern werden ber die Kr mmung des Peaks die ber die zweite Ableitung berechnet wird erkannt Wenn die Kr mmung gegen null geht erkennt der Integrator einen Wendepunkt wie Punkt a in Abbildung 19 e Eine m gliche Schulter auf der vorderen Flanke erkennt man am Vorhandensein eines zweiten Wendepunktes vor dem Peakmaximum Wenn sie sich best tigt wird der Anfang der Schulter auf den Punkt mit der maximalen positiven Kr mmung
194. programmierbare Parameter 97 138 zusammenfassende Reports einer Se quenz Sequence Summary Re ports 25 zyklisch Kalibriersequenzen 218 219 226 299 Index 300 Agilent Technologies In diesem Handbuch In diesem Handbuch werden die verschiedenen Konzepte der ChemStation beschrieben Sie k nnen damit einen Einblick in die Funktionsweise Ihrer ChemsStation gewinnen Informationen zur Verwendung der ChemsStation finden Sie im Online Hilfesystem sowie im integrierten Tutorial G2070 92113 III
195. pt der festgelegten Integrationsparameter zu veranschaulichen Gegenw rtig gibt es mehr als ein Dutzend weiterer festgelegter Parameter die allerdings f r die meisten Anwender als unver nderlich betrachtet werden sollten Erfahrene Anwender k nnen ber den Einsatz geeigneter Makros auf sie zugreifen was im Macro Programming Guide beschrieben ist Ver nderliche Integrationsparameter Die ver nderlichen Integrationsparameter lassen sich dadurch als solche erkennen da sie f r den Anwender zug nglich sind Zu den ver nderbaren Integrationsparametern geh ren e Integrationsparameter die vom Anwender vor einer Analyse festgelegt werden wie Initial Area Reject Initial PW usw und e Parameter die zeitabh ngig ver ndert werden k nnen 110 Der neue Integrationsalgorithmus Funktion des verbesserten Integrators Funktion des verbesserten Integrators Wenn Sie die Integrationsvorg nge in ihre grunds tzlichen Schritte trennen mu der verbesserte Integrator genauso funktionieren wie jeder Integrator Die Genauigkeit und Reproduzierbarkeit der Integrationsergebnisse h ngt davon ab wie der Integrator die einzelnen Integrationsschritte ausf hrt Der Integrator f hrt beim Integrieren der Peaks folgende Schritte durch e er bestimmt die anf ngliche Basislinie e er verfolgt den Verlauf der Basislinie und legt sie neu fest e er erkennt den Peakanfang und markiert ihn mit einer vertikalen Strichmarkierung e er
196. punkt vorhanden an dem sich eine negative Steigung in eine positive Steigung ndert 81 Der Standardintegrationsalgorithmus Peakerkennung Abbildung 5 Peakschultern Schulterpunkt Die gefundenen Schultern werden einer Retentionszeit zugeordnet wo die negative Steigung maximal ist Die Fl che die f r den Hauptpeak angegeben wird umfa t die Fl che der Schultern 82 Abbildung 6 Der Standardintegrationsalgorithmus Konstruktion der Basislinie Konstruktion der Basislinie Nach Erkennung eines Peaks wird die Basislinie konstruiert damit die Fl che des Peaks berechnet werden kann Die Konstruktion der Basislinie folgt der nderung des Signals Der Integrator konstruiert die Basislinie als Folge gerader Linienst cke zwischen folgenden Punkten e Wert des Signals zu Beginn des Analysenlaufes e den Strichmarkierungen die Anfang und Ende eines Peaks markieren e Wert des Signals am Ende des Analysenlaufes ein Punkt der sich zur Stopzeit auf einer horizontalen Verl ngerung des letzten erkannten Punktes der Basislinie befindet Standardm ige Konstruktion der Basislinie Strichmarke Basislinie 83 Der Standardintegrationsalgorithmus Codes zur Beschreibung der Peaktrennung Codes zur Beschreibung der Peaktrennung In den Reports wird jedem Peak ein Code aus zwei Buchstaben zugeordnet der angibt wie die Basislinie konstruiert wurde Falls ein dritter Buchstabe ange
197. r dar ber dar ber dar ber darunter dar ber dar ber dar ber darunter dar ber darunter dar ber dar ber dar ber dar ber dar ber dar ber dar ber darunter dar ber Peak integriert ja nein ja nein ja nein ja Zeitprogrammierbare Parameter Timed Events Sie k nnen die Konstruktion der Basislinie mit zeitabh ngigen Integrationsparametern optimieren wenn die standardm ige Konstruktion nicht ausreicht Diese Parameter k nnen zur Bestimmung der endg ltigen Peakfl chen und zur Korrektur schneller oder langsamer Abweichungen der Basislinie dienen Weitere Informationen zu Integrationsparametern finden Sie in Ihrer Online Hilfe 138 Der neue Integrationsalgorithmus Tabellen mit Integrationsparametern Tabellen mit Integrationsparametern Jedes Signal Chromatogramm oder Elektropherogramm kann ber seine eigenen Integrationsparameter verf gen die in einer Tabelle zur Signalintegration eingestellt werden Zum Erstellen einer Tabelle mit Integrationsparametern hat ein Anwender folgende M glichkeiten e er kann die Integrationsparameter manuell eingeben oder e Autointegrate ausw hlen um f r jedes Signal die Anfangswerte festzusetzen Falls die individuelle Parametertabelle des Signals nicht benutzt wird werden alle Signale mit der Standardtabelle mit Integrationsparameter f r den entsprechenden Detektor integriert F r jede Detektorart gibt es eine Standardtabelle m
198. r berpr fung der ChemsStation k nnen Sie w hlen ob der gesamte Test oder nur Teile des Test durchlaufen werden sollen Die Ergebnisse aus berpr fungstests werden im Bin rformat standardm ig im Verzeichnis c hpchem l Verify zusammen mit Methoden 288 berpr fung des Systems berpr fung des Systems und Datens tzen gespeichert Das Unterverzeichnis Verify steht auf derselben Ebene wie die Verzeichnisse der Sequenzen Methoden und Datens tze Sie k nnen die Ergebnisse an eine Datei oder auf einem Drucker ausgeben Die Testergebnisse einschlie lich der Testergebnisse f r kombinierte berpr fungen werden mit Test bestanden bzw Test nicht bestanden bewertet F r die berpr fungstests stehen folgende Komponenten zur Verf gung Digitale Elektronik nur f r HP 1050 DAD und Agilent 1100 Series DAD Im Dioden Array Detektor ist ein Testchromatogramm gespeichert Dieses Chromatogramm wird zur ChemStation geschickt nachdem es dieselben Bearbeitungsschritte durchlaufen hat wie normale Rohdatens tze von den Photodioden Die daraus resultierenden Daten werden mit den Ursprungsdaten verglichen die f r dieses Testchromatogramm in der ChemsStation abgelegt sind Wenn die Werte nicht bereinstimmen gilt der Test als nicht bestanden Dieser Test stellt sicher da die Elektronik des DAD die die Daten bearbeitet richtig funktioniert Es wird ein gespeichertes Testchromatogramm verwendet d h die Lampe und
199. rechnung wird so vollzogen da eine pl tzliche Diskontinuit t der H hen oder Fl chen ausgeschlossen ist e Wenn ein Signal weit ber der Basislinie liegt wird zur Berechnung des Tailens die Exponentialfunktion herangezogen e Wenn sich das Signal innerhalb des Basisliniebereiches befindet wird zur Berechnung des Tailens die Geradenfunktion herangezogen Die kombinierten Berechnungen gehen in den Report als exponentielle oder tangentiale Anpassung ein 128 Abbildung 23 Abbildung 24 Der neue Integrationsalgorithmus Codes zur Beschreibung der Peaktrennung Wenn die tangentiale Anpassung laufzeitabh ngig angegeben ist vergleicht der Integrator das Signal mit dem Tangentenpunkt Der Tangentenpunkt wird durch die Ann herung an den Startpunkt des anzupassenden Peaks bestimmt wie in Abbildung 23 dargestellt Tangentiale Anpassung lt L sungsmittelpeak Tangentenpeak Manchmal f hrt die normale Basislinienf hreung zu einer gro en negativen Fl che Das ist besonders dann der Fall wenn kleine Peaks auf der abfallenden Flanke des L sungsmittelpeaks tangential angepa t werden Wenn diese Fl che zur Fl che ber der Basislinie addiert wird resultiert daraus eine deutlich kleinere Peakfl che als tats chlich vorliegt Um derartige Fehler zu vermeiden sucht der Integrator negative Fl chen und zieht die Basislinie entsprechend der Darstellung in Abbildung 24 neu Tangentiale Anpassung kleiner Peaks auf
200. rufen wird werden die ausgew hlten Bearbeitungsschritte durchgef hrt wenn der Lauf bereits bearbeitet und mit den nderungen abgespeichert wurde wird er in seiner nachbearbeiteten Form aufgerufen Dies geht nat rlich schneller da die Bearbeitungsschritte nicht mehr durchgef hrt werden m ssen 240 Batch Review Batch Reports Batch Reports Die individuell definierbare Batch Tabelle siehe Seite238 kann direkt auf dem Drucker auf dem Bildschirm oder in eine Datei ausgegeben werden Die Datei besteht aus einem w hlbarem Prefix und kann in einem der folgenden Formate abgelegt werden e als ASCII Textdatei mit der Dateinamenerweiterung TXT e im Data Interchange Format mit der Dateinamenerweiterung DIF e im CSV Format Comma Separated Values mit der Dateinamenerweiterung CSV e im Microsoft Excel Format mit der Dateinamenerweiterung XLS Die Optionen f r die Reporterstellung erm glichen es auch die Proben unabh ngig von der Reihenfolge in der Batch Tabelle zu sortieren ber den Laufindex die Probenart oder die Methode Die Priorit ten f r die Reihenfolge entsprechen denen f r die Batch Tabelle siehe Seite238 Batch History Der Batch Review zeichnet alle Aktionen innerhalb des aktuellen Batches auf Aktionen die zu nderungen des Batches f hren zum Beispiel eine nderung des dargestellten Chromatogrammes eine nderung der Probenart Laden und Speichern des Batches erweitert die Batch H
201. rung durchgef hrt Quadratische Kalibrierpunkt Gewichtung kann z B zur Anpassung bei streuenden Kalibrierpunkten verwendet werden Sie f hrt dazu dass 189 Kalibrierung Kalibrierverfahren Kalibrierpunkte die n her am Ursprung liegen und somit genauer bestimmt werden k nnen h her gewichtet werden als Kalibrierpunkte die weiter vom Ursprung entfernt sind und eher streuen k nnen Sie sollten Ihre Entscheidung bez glich der Kalibrierpunktgewichtung von den Anforderungen Ihrer Methode abh ngig machen 190 Kalibrierung Gruppenkalibrierung Gruppenkalibrierung Gruppenkalibrierungen k nnen f r Substanzen verwendet werden bei denen f r einzelne Komponenten keine Konzentrationen bekannt sind sondern nur die Konzentrationen einer Gruppe von Komponenten Ein Beispiel daf r sind Isomere Es werden vollst ndige Substanzgruppen kalibriert dabei kommen folgende Formeln zum Einsatz Kalibrierung Conc AB RF Response RF Response A mit Concapg ist die Konzentration der Substanzgruppe die aus Substanz A und B besteht Response ist die Fl che bzw H he der Substanz A RF ist der Responsefaktor Dabei werden f r die Substanzen einer Gruppe dieselben Responsefaktoren vorausgesetzt RF RFz Folglich wird die Konzentration einer Substanz aus einer Substanzgruppe wie folgt berechnet Conca g Respa onca Resp Respg 191 HINWEIS Kalibrierung Peakaddition Peakadditi
202. s dazu verwendet werden routinem ig Systembewertungen f r ein Analysenger t durchzuf hren Der DAD Test pr ft die Funktionen Ihres Dioden Array Detektors Wenn Sie aus dem Men Instrument nur f r LC3D an 3DCE den DAD Test ausw hlen wird das Ger t auf seine Intensit t und Wellenl ngenkalibrierung hin gepr ft Wenn Sie Save bet tigen werden die Testergebnisse automatisch in der DADTest Datenbank gespeichert Dabei handelt es sich um ein Datenregister das mit DADTest Reg benannt und im Standardverzeichnis f r das Ger t abgelegt ist Die Funktion Review DAD Test Die Funktion Review DAD Test im Men View der Datenanalyse erm glicht es Ihnen die Datei DADTest Reg jederzeit einzusehen Die Datei wird durch eine Kontrollzahlsumme gesch tzt und als Bin rcode verschl sselt damit sie nicht ver ndert werden kann Sie k nnen folgende Teile des DAD Tests zur Wiedereinsicht ausw hlen Anzeige der Heliumspektren Show Holium Spectra Stellt alle in der Anzeigetabelle des DAD Tests aufgef hrten Holmiumspektren dar Das aktive Spektrum ist markiert Anzeige der Intensit sspektren Show Intensity Spectra Stellt alle in der Anzeigetabelle des DAD Tests aufgef hrten Intensit tsspektren dar Das aktive Spektrum ist markiert Speichern unter einer neuen Datenbank Save as New Database Wenn Sie die Lampe Ihres DAD auswechseln k nnen Sie den DAD Test wieder in die Ausgangssituation zur cks
203. schlie lich der Versionen A 01 00 bis A 04 02 sind mit der ChemsStation Software kompatibel Die ChemsStation Software enth lt M glichkeiten zur Umwandlung von Dateien mit Fl ssigkeitschromatographiedaten und Spektrenbibliotheken f r die LC ChemsStation Pascal Series Diese k nnen auch automatisch durch das Anwenden von Makros siehe den Abschnitt Weitgehende Anpassung ablaufen um Chromatographiedaten in das neue ChemStation Format f r LC umzuwandeln Beachten Sie jedoch da die Umwandlungsroutine nur von Windows 95 unters tzt wird Der Datentransfer zwischen der Pascal und der DOS Umgebung kann ber 3 5 Zoll Disketten serielle Verbindungen oder lokale Netzwerke durchgef hrt werden HP 3365 ChemStations Methoden Datendateien und Sequenzen aus der Reihe der HP 3365 ChemsStation DOS Series m ssen ber geeignete in der ChemStation installierte Importfunktionen umgewandelt werden Nach der Umwandlung sind sowohl die Methoden als auch die Datendateien mit der ChemStation kompatibel Importierte Sequenzen k nnen lediglich zum wiederholten Berechnen der Datendateien verwendet werden 27 ChemStation Konzepte Zur ChemStation Software Weitgehende Anpassung Die ChemsStation kann mit Hilfe des umfangreichen Befehlssatzes angepasst werden Die enthaltenen Befehle k nnen zu automatischen Funktionen kombiniert werden Eine solche Kombination von Befehlen hei t Makro Anwender k nnen zur Erstellung von Makros eig
204. sf hrlich Spektrum Performance Library Search Leistungsf higkeit Bibliothekssuche sind bei Informationen zu Ihrem Spektrenmodul beschrieben Hinzuf gen eines individuellen Reports zu den Reportvorlagen Sie k nnen zur Liste der verf gbaren Reportvorlagen eine individuelle Reportvorlage hinzuf gen die Sie in der Ansicht Report Layout der ChemsStation erstellen k nnen Bei alle Reports ausser der Leistungsf higkeitsreports sind die aufgelisteten Peakbreiten vom Integrator mit einer komplexeren Formel berechnet worden genauere Informationen zur Peakbreitenberechnung finden Sie unter Peakbreite Peak Width auf Seite 91 252 Verwendung der ChemStation Reports Weitere Parameter f r die Reportvorlagen Weitere Parameter f r die Reportvorlagen Summed Peaks Table Die Tabelle der Peaksummen existiert f r einige Anwendungen der petrochemischen und pharmazeutischen Industrie und dient der vereinfachten Durchf hrung folgender Schritte e Addition der Peakfl chen die innerhalb eines benutzerdefinierten Bereiches liegen e Addition der Fl chen eines Peakbereiches und Berechnung mit einem einzigen Multiplikator e Addition der Fl chen aller Peaks mit gleichem Namen Wenn der Report erstellt ist verwendet die ChemsStation die Tabelle der Peaksummen dazu den Peaksummenreport zu generieren Die Berechnungen erfolgen analog dem Standardreport au er da Norm durch den Peaksummenreport ersetzt ist Report
205. sichtlich ihrer Eignung f r ein Me vorhaben auf die Funktionskontrolle im System und stellen die Nachvollziehbarkeit Herkunft und Qualit t der Daten sicher Entwicklungsproze Ein Zertifikat zur Validierung wird mit jedem Softwarepaket geliefert und dokumentiert die Schritte der Softwareentwicklung und Erprobung als Teil des Entwicklungsprozesses Der Entwicklungsproze entspricht der Qualit tsnorm ISO 9001 Er ist zusammen mit den Protokollen zur Revalidierung im Validation Binder der ChemStation f r LC dokumentiert Spezifikation und Anwendung von Methoden Globale Methoden alle Spezifikationen f r Analysenger te und zur Datenauswertung werden an einem Ort gespeichert Methoden beinhalten Spezifikationen des Mengenbereiches von Komponenten Hierdurch wird sichergestellt da Mengenangaben nicht au erhalb des Kalibrierungsbereiches erfolgen Das Logbuch ber nderungen der Methode History erm glicht es den Anwendern einer validierten Methode automatisch zu dokumentieren wie und wann die Methode ver ndert wurde Anwender k nnen optional eine Begr ndung f r die Ver nderung der Methode mit ins History Logbuch eintragen Das History Logbuch wird automatisch als Teil der Methode im Bin rformat abgelegt Um einen unerlaubten Eingriff in die Dokumentationen zu verhindern wird es entsprechend des Schemas zur Anmeldung eines Anwenders wie unten beschrieben gesch tzt Jede Ver nderung im History Logbuch kann auf dem Bi
206. sponse 1000 Bu Kalibrierkurve 500 F 100F l l J 1 5 10 lt Menge ng ul ge ng H Z Z 7 OR Weitere Informationen zu Kurvenanpassungen in Kalibrierungen und zur Behandlung des Achsenabschnittes finden Sie in Ihrer Online Hilfe Gewichtung von Kalibrierpunkten Bei der Erstellung Ihrer Standardkalibrierkurve k nnen Sie eine relative Gewichtung der verschiedenen Kalibrierpunkte angeben Folgende Optionen k nnen zur Gewichtung gew hlt werden Gewichtung Gleich Linear Menge Description Alle Kalibrierpunkte der Kurve werden gleich gewichtet Ein Kalibrierpunkt der Menge x erh lt die Gewichtung 1 x normiert auf die niedrigste Konzentration So ergibt sich f r den h chsten Gewichtungsfaktor der Wert 1 Die Normierung wird ber die Multiplikation der Gewichtung mit der niedrigsten Konzentration durchgef hrt Beispielsweise resultiert die Gewichtung f r einen Kalibrierpunkt der Menge x aus 1 x a wobei a die kleinste Menge Kalibriersubstanz darstellt die in den Kalibrierstandards enthalten ist Wenn der Ursprung einbezogen ist wird ihm der 188 Kalibrierung Kalibrierverfahren Linear Resp Quadratisch Menge Quadratisch Resp kalibriert Mittelwert der Gewichtungen der anderen Kalibrierpunkte zugewiesen Ein Kalibrierpunkt mit der Response y hat die Gewichtung 1 y auf die niedrigste Response normalisiert so dass der gr te Gewichtungsfaktor 1 ist Die Normalisierun
207. t Ready Timeout im Dialogfeld Sequence Parameters bestimmt die Zeitdauer die das System maximal darauf wartet da ein Analysenger t bereit ist Nach einer Zeit berschreitung erfolgt eine Abschaltung Shutdown Wait Time nur f r LC und CE Im Dialogfeld Sequence Parameters kann eine Wartezeit spezifiziert werden die nach Laden der Methode und vor der ersten Injektion mit dieser Methode verstreicht Dies k nnte der Equilibrierung von S ule oder Kapillare unter neuen analytischen Bedingungen dienen 211 Automatisierung Automatische Rekalibrierung Automatische Rekalibrierung Eine Kalibrierung wird meistens nach einer nderung der Arbeitsbedingungen zum Beispiel nach dem Wechsel einer S ule oder Kapillare durchgef hrt Eine automatische Rekalibrierung wird normalerweise beim Start einer Analysensequenz oder in regelm igen Abst nden w hrend der Sequenz zur Kompensation von Faktoren durchgef hrt die das analytische Ergebnis beeinflussen Zwei M glichkeiten stehen zur Durchf hrung einer automatischen Sequenzrekalibrierung zur Verf gung e Explizit angegebene Kalibriersequenzen e Zyklische Kalibriersequenzen 212 Automatisierung Spezifizieren von Rekalibrierungen Spezifizieren von Rekalibrierungen Die Parameter zur Rekalibrierung einer Sequenz werden direkt in die Sequenztabelle eingetragen Diese Parameter legen fest wie die Methode im Lauf einer Sequenz rekalibriert wird D
208. t mit den aktuellen Mengen jeder Substanz Die Mengen werden mit einer zuvor erstellen Kalibrierkurve berechnet Die Verwendung eines internen Standards in der Probe und der Kalibriermischung erfordert keine so exakte Kontrolle des Injektionsvolumens Diese Methode korrigiert Schwankungen der instrumentellen Leistungen zwischen einzelnen Analysenl ufen ISTD erzeugt einen Report mit den relativen Mengen jeder Substanz als prozentualer Anteil an der injizierten Probe Die Verwendung eines internen Standards in der Probe und der Kalibriermischung erfordert keine so exakte 248 Verwendung der ChemStation Reports Quantitative Ergebnisse Kontrolle des Injektionsvolumens Diese Methode korrigiert Schwankungen der instrumentellen Leistungen zwischen einzelnen Analysenl ufen 249 Verwendung der ChemStation Reports Rep ortvorlagen Reportvorlagen Folgende Reportvorlagen sind verf gbar Sie k nnen die gew nschte Reportvorlage durch Aktivieren des entsprechenden Ankreuzk stchens in Specify Report ausw hlen None keiner Es wird keinerlei Text in den Report aufgenommen Das Chromatogramm wird nur dann als Report ausgegeben wenn die Option Add Chromatogram Output angew hlt ist Short Kurz besteht aus quantitativen Ergebnissen aller integrierten Signale die im Dialogfeld Signal Details nur bei LC oder Signal nur GC aufgef hrt sind Detail Genau besteht aus Signalen quantitativen
209. t werden e vor der Analyse kann der Anwender die anf ngliche Peakbreite bestimmen e w hrend der Analyse vergibt der Integrator automatisch neue Werte f r die Peakbreite sobald dies zum Einhalten der Peakerkennungsfilter notwendig ist e w hrend der Analyse kann die Peakbreite mit Hilfe einer zeitabh ngigen Programmierung eingestellt oder ver ndert werden Peakerkennungsfilter Der Integrator verwendet drei Peakerkennungsfilter als Mittel zur Peakerkennung wobei er Ver nderungen der Steigung und Kr mmung innerhalb einer Reihe aufeinanderfolgender Datenpunkte erkennt Diese Filter enthalten die erste Ableitung zur Bestimmung der Steigung und die 117 Der neue Integrationsalgorithmus Peakerkennung zweite Ableitung zur Bestimmung der Kr mmung der vom Integrator untersuchten Datenpunkte Die Erkennungsfilter sind wie folgt definiert Filter 1 Steigung und Kr mmung zweier aufeinanderfolgender Datenpunkte Filter 2 Steigung und Kr mmumg von vier aufeinanderfolgenden Datenpunkten Filter 3 Steigung und Kr mmumg von acht aufeinanderfolgenden Datenpunkten Der gerade verwendete Filter h ngt von der Einstellung f r die Peakbreite ab Beispielsweise kann zu Beginn einer Analyse Filter 1 verwendet werden W rde die Peakbreite im Lauf der Analyse ansteigen k men Filter 2 und m glicherweise Filter 3 zum Einsatz Um gute Leistungen zu erzielen mu die Peakbreite auf einen Wert eingestellt werden der der tats chlic
210. t werden Jeder Eintrag besteht aus einer Ober und einer Untergrenze Bei berschreiten dieser Grenzen wird ein Hinweis in den Report eingef gt 186 Kalibrierung Kalibrierverfahren Anpassungsverfahren an Kalibrierkurven F r die Mehrpunktkalibrierung sind verschiedene Anpassungsverfahren verf gbar e Punkt zu Punkt e Linear e Logarithmisch e Potenziert e Exponentiell e Quadratisch e Kubisch e Mittelwertbildung Response Menge Nichtlineare Anpassungsverfahren In einigen F llen ndert sich der Detektorresponse nicht linear mit der Probenkonzentration In diesen F llen ist eine Kalibrierung auf der Basis einer linearen Regression unzul ssig und es sollte eine Mehrpunktkalibrierung eingesetzt werden Behandlung des Koordinatenursprunges Es stehen vier M glichkeiten zur Einbeziehung des Koordinatenursprunges zur Verf gung e Ursprung ignorieren e Ursprung einbeziehen e Verlauf durch Koordinatenursprung erzwingen e Mit Koordinatenursprung verbinden Um zu erzwingen dass der Koordinatenursprung in der Kalibrierkurve enthalten ist werden die Kalibrierpunkte am Ursprung vom ersten Quadranten in den dritten gespiegelt Die Verwendung aller Punkte f r die Regressionsberechnung sichert dass die Kalibrierkurve durch den Ursprung l uft Dies wird auch in Abbildung 38 auf Seite 188 erkl rt 187 Abbildung 38 Kalibrierung Kalibrierverfahren Verlauf durch Koordinatenursprung erzwingen Re
211. t zu w hlen TXT WMF DIF Der Text des Reports wird als ASCI Textdatei gedruckt Jede Grafik eines Reports Signal oder Kalibrierkurve wird als Microsoft Windows Metadatei WMF gesichert Es k nnen mehrere Metadateien f r einen Report gespeichert werden Dieses Dateiformat entspricht dem Microsoft Standard f r das Metadateiformat gem der Dokumentation zur Windows Softwareentwicklung Diese Dateien sind mit dem Format der Aldus Placeable Metafiles APM kompatibel das von einer Reihe von Softwarepaketen unterst tzt wird Tabellarische Reportdaten werden im Data Interchange Format DIF gespeichert Dieses Format wird von Tabellenkalkulationsprogrammen wie Microsoft Excel unterst tzt Unabh ngig vom gew hlten Reportformat werden nur die Informationen der Reportvorlage Short 254 Verwendung der ChemStation Reports Reportausgabe gespeichert CSV Dieses Format hei t Comma Separated Values CSV Werte mit Kommatrennung Es ist ein sehr einfaches Format f r tabellarische Daten und wird von vielen Tabellenkalkulationsprogrammen und Datenbanken akzeptiert Unabh ngig vom gew hlten Reportformat werden nur die Informationen der Reportvorlage Short gespeichert F r einen Report k nnen mehrere Dateien der Formate DIF und CSV angelegt werden F r jeden Reportblock enth lt die erste Datei zum Beispiel REPORT00 CSV den Kopfteil Die nachfolgenden Dateien enthalten die tabellarischen Ergebnisse W
212. te f r den Abfallakkumulator Ableitungsfilter 1 3 Ausgangswerte gegen ber Steigungsempfindlichkeit Filter 1 Filter 2 Filter 3 Steigung gt Steigungsempfindlichkeit 8 5 3 Kr mmung gt Steigungsempfindlichkeit 0 2 1 Steigung lt Steigungsempfindlichkeit 11 7 4 Steigung lt Steigungsempfindlichkeit 28 18 11 Kr mmung lt Steigungsempfindlichkeit 0 2 1 In Tabelle 6 bestimmt die erwartete Peakbreite den Filter dessen Werte f r die Steigung und Kr mmung mit der Steigungsempfindlichkeit verglichen werden So werden beispielsweise die Zahlen f r Filter 1 zu dem Anstiegsakkumulator hinzugef gt wenn die erwartete Peakbreite klein ist 120 Abbildung 18 Der neue Integrationsalgorithmus Peakerkennung Wenn die Werte f r die erwartete Peakbreite gr er werden kommen die Zahlen f r Filter 2 und m glicherweise Filter 3 zum Einsatz Wenn der Wert f r den Anstiegsakkumulator gr er oder gleich 15 betr gt erkennt der Algorithmus an dieser Stelle ein m gliches Peakende Der Algorithmus f r das Peakmaximum Das Peakmaximum wird als h chster Punkt im Chromatogramm erkannt indem eine parabolisch verlaufende Kurve durch die h chsten Datenpunkte gelegt wird Berechnungen zur Abweichung von der Gau Kurve berlappende Peaks Treten auf wenn ein neuer Peak anf ngt ehe das Ende des ersten Peaks festgelegt wurde Die folgende Abbildung verdeutlicht wie der Integrator mit berla
213. tegrationsparameter Anpassung der Integration Oft ist es n tzlich die Werte f r die Steigungsempfindlichkeit die Peakbreite und die Mindesth he und Mindestfl che so zu ndern da Sie eine optimierte Integration Ihres Signals erhalten Abbildung 29 zeigt den Einflu dieser Parameter auf die Integration der sieben Peaks des Chromatogramms Verwendung von Anfangsparametern ee Mindesth he Basislinie Peakbreite Mindest ee ALL IN h he N Ein Peak wird nur integriert wenn die Vorgaben aller dreier Integrationsparameter erf llt werden Mit einer Peakbreite von Peak 3 und der Mindestfl che und Steigungsempfindlichkeit aus Abbildung 29 werden nur die Peaks 1 und 3 und sieben integriert Peak 1 wird integriert da alle drei Vorgaben erf llt werden Peak 2 wird nicht integriert da die Fl che nicht die Mindestfl che erreicht Peak 3 wird integriert da alle drei Vorgaben erf llt werden Peak 4 wird nicht integriert weil die Peakh he unterhalb der Mindesth he liegt Peak 5 wird integriert Peak 6 wird nicht integriert weil der Peak als Spike interpretiert wird Peak 7 wird integriert 137 Tabelle 7 Der neue Integrationsalgorithmus Integrationsparameter Werte f r Slope Sensitivity Steigungsempfindlichkeit Integrationsparame ter Peak 1 Peak2 Peak3 Peak4 Peak5 Peak6 Peak7 Mindesth he Mindestfl che kleinste Mindesth he dar ber dar be
214. tellen um ungewollte Testergebnisse aus der Tabelle zu l schen Danach k nnen Sie die Funktion Save As New Database einsetzen Anzeige der gew hlten Spektren Show Selected Spectra Stellt nur die in der Tabelle ausgew hlten Spektren dar 293 berpr fung des Systems Die Funktion DAD Test Anzeige eines Intensit sschaubilds Show Intensity Graph Sie k nnen ein Intensit tsschaubild auf dem Bildschirm darstellen um die Lebensdauer der Lampe Ihres Dioden Array Detektors absch tzen zu k nnen Das Schaubild liefert eine Funktion der maximalen Lampenintensit t gegen die Zeit 294 Index A abbrechen einer Sequenz 204 Abhandlung ber den HP Standardinte grationsalgorithmus 71 absolut Responsefaktor 165 Retentionszeit 151 152 Abweichung 182 Abweichung von Gau Kurve 121 Agilent 1100 Series 230 Agilent 1100 Series LC anschlie en 230 aktuell Methode 46 All Valleys 104 145 analoges Signal 59 Analyse Genauigkeit der 195 Anfangsparameter 91 134 Mindestfl che 91 Peakbreite 91 Schwellenwert 91 angepa te Datenauswertung 54 angepa te Konfiguration 110 angepa te Reports 26 Anpassung Kurve 188 nicht lineare 187 Anzahl der Trennb den 275 Methode der Halbwertsbreite 275 Methode unter Verwendung der Vari anz 276 Tangentenmethode 275 276 Anzahl der Trennb den pro Meter 276 Area Berechnung 167 Report 248 ASCII Datei 241 Aufl sung 276 5 Sigma Metho
215. ten Ba sislinie 86 Kontrolle 238 Koordinatenursprung Behandlung 188 einbeziehen 188 erzwingen 188 ignorieren 188 verbinden 188 Kopfzeile mehrzeilig 239 Korrekturfaktoren 165 korrigierte Retentionszeit 151 154 Kurve Anpassung 188 Kalibrierung 181 296 Index L Laufindex 238 Leistungstest Definitionen statistische Momente 272 Logbuch 61 63 Logbuchdatei einer Sequenz 207 L schen von Peaks 104 145 L sungsmittelpeak 84 86 89 125 132 Lotf llung 81 M Makro Shutdown 211 Manuelle Integration 144 manuelle Integration 103 alle Talpunkte 104 145 Basislinie ziehen 104 145 Codes zur Trennung 104 145 L schen von Peaks 104 145 negative Peaks 104 145 Peaktrennung 104 145 tangentiale Anpassung 104 145 Trace Mode 104 145 Vorgehensweise 104 145 manuelle Parameter einf gen 146 manueller Batch Review 240 Maus rechter Mausknopf 104 145 mehrere Referenzpeaks 155 Mehrpunktkalibrierung 172 185 Kalibrierkurve 185 mehrzeilige Kopfzeile 239 Mengenangaben 151 Methode 238 Ablauf 51 aktuelle 46 automatische Bibliothekssuche 53 Bestandteile 44 editieren 48 erstellen 47 gespeicherte 46 GLPSave Reg 54 Information 44 Integration 53 Integrationsparameter 53 Standard 46 Status 46 65 berpr fen der Peakreinheit 53 ver ndern 47 Verzeichnis 50 Warten 211 Was ist eine Methode 43 Zusammenfassung des Ablaufs 56 Methodendatei Ger teparameter
216. ten Retentions bzw Migrationszeiten der interessierenden Komponenten Ein Peak der mit der Retentions bzw Migrationszeit eines Peaks aus der Kalibriertabelle bereinstimmt erh lt die Attribute dieser Komponente zum Beispiel Name und Responsefaktor Peaks ohne bereinstimmung mit einem Peak der Kalibriertabelle werden als unbekannt eingestuft Dieser Proze wird durch folgende Faktoren kontrolliert e Retentions bzw Migrationszeiten f r Peaks in der Kalibriertabelle die als Zeitreferenz vorgesehen wurden e Festgelegte Retentions bzw Migrationszeitfenster der Referenzpeaks e Retentions bzw Migrationszeiten kalibrierter Peaks der Kalibriertabelle die keine Zeitreferenzpeaks sind e Festgelegte Retentions bzw Migrationszeitfenster dieser nicht Referenzpeaks e die Gegenwart weiterer qualifizierender Peaks in richtigen Verh ltnissen 149 Peak Identification Peakerkennung Regeln zur Peak bereinstimmung Regeln zur Peak bereinstimmung Folgende Regeln werden zur Feststellung einer bereinstimmung zwischen Peaks angewandt Wenn ein Probenpeak innerhalb des vorgegebenen Zeitfensters Peak Matching Window eines Peaks der Kalibriertabelle liegt werden diesem die Attribute der Komponente der Kalibriertabelle zugeordnet Wenn mehr als ein Probenpeak innerhalb des vorgegebenen Zeitfensters liegt wird der Peak mit der geringsten Abweichung von der vorgegebenen Retentions bzw Migrationszeit als diese Kompo
217. ten beider Integrationsalgorithmen sind folgende e eine Autointegrationsfunktion zur Einstellung anf nglicher Integrationsparameter e die F higkeit f r jedes Chromatographiesignal eine eigene Tabelle mit Integrationsparametern festzulegen wenn mehrere Signale oder mehr als ein Detektor verwendet werden e die interaktive Festlegung von Integrationsparametern die es dem Anwender erm glichen die Zeiten f r die Ereignisse graphisch zu bestimmen e manuelle oder Rubber Band Integration f r Chromatogramme oder Elektropherogramme die eine spezielle Interpretation erfordern diese Parameter k nnen auch in die Methode integriert und somit automatisch aufgerufen werden e Darstellung und Ausdruck von Integrationsergebnissen und e die F higkeit mindestens 1000 Peaks pro Chromatogramm zu integrieren Beide Integrationsalgorithmen enthalten folgende Befehlsgruppen e Definitionen f r Integrationsparameter um die Grundeinstellungen f r den Integrator Area Rejection Peak Width und Threshold als Parameter f r die Rauschunterdr ckung festzusetzen oder zu ver ndern e Parameter zur Kontrolle der Basislinie wie force baseline Basislinie erzwingen hold baseline Basislinie halten baseline at all valleys Basislinie zu jedem Tal baseline at the next valley Basislinie beim n chsten Tal fit baseline backwards from the end of the current peak r ckw rtige Anpassung der Basislinie vom End
218. terte Reportformate mit Anwender definierbaren Kriterien werden als Trendgraphiken ausgegeben und k nnen zur Beurteilung der realistischen Betriebsgrenzen dienen Die Betriebsgrenzen k nnen in eine Methode aufgenommen werden wodurch zusammen mit Kontrollproben sichergestellt wird da die Methode innerhalb dieser Grenzen arbeitet Systembetrieb e Das Verification Kit der ChemsStation ist ein Teil der Standardsoftware und berpr ft automatisch auf korrekte Installation und Funktion der Datenauswertung der Software indem bekannte Ergebnisse mit einer Testauswertung verglichen werden Das Verification Kit erm glicht die Definition eigener Datens tze und Methoden zur Durchf hrung des Tests Nachvollziehbarkeit Herkunft und Qualit t der Daten Das Logbuch liefert ein Protokoll ber das komplette System Es speichert alle unerwarteten Ereignisse Fehler Parameterver nderungen w hrend der Analyse sowie die Ger tebedingungen vor und nach jeder Analyse Eine Kopie des relevanten Logbuchauszuges wird mit jedem Datensatz gespeichert Die aktuellen Ger tebedingungen wie zum Beispiel Druck Flu rate und Temperatur w hrend einer Analyse werden ebenfalls gespeichert falls das entsprechende Ger t diese M glichkeit bietet Diese Daten k nnen sp ter mit dem Chromatogramm graphisch dargestellt werden um den Ger tezustand w hrend dieser Analyse zu zeigen und in den Report aufzunehmen Mit den Datens tzen werden Kopien der verwendet
219. tion Identifizierung Quantifizierung Reporterstellung Die Ergebnissse aller Kalibrierl ufe eines Batches gehen ber gemittelte Response Faktoren in eine Kalibriertabelle ein die dann zur Quantifizierung verwendet wird Batch Tabelle Die L ufe werden in einer frei definierbaren Batch Tabelle angezeigt e die Anzahl und der Inhalt der Tabellenspalten kann festgelegt werden e die L ufe k nnen folgenderma en sortiert werden nach dem Laufindex in der Reihenfolge in der sie aufgenommen wurden unabh ngig von allen anderen Kriterien nach der Probenart erst die Kontrollen dann die Standards dann die Proben und innerhalb einer Probenart nach dem Laufindex nach der Methode wenn mehr als eine Methode zur Datenaufnahme verwendet wurde und innerhalb jeder Methode nach dem Laufindex e Proben Standards und Kontrollen k nnen in der Tabelle angezeigt oder versteckt werden Jeder Lauf macht eine Zeile der Batch Tabelle aus Sie k nnen einzelne L ufe aus der Batch Tabelle ausblenden indem Sie sie auf die Probenart Removed entfernt setzen Substanztabelle Die Ergebnisse f r die Substanzen werden in einer individuell definierbaren Substanztabelle dargestellt deren Inhalt von den Probenarten der Batch Tabelle abh ngt e Die Substanzliste enth lt alle Substanzen die in der Methode aufgef hrt 238 Batch Review Batch Konfiguration wurden die im Batch Review zum Einsatz kam e wenn nur Standards in der
220. tlung der Systemleistung Bestimmung des Rauschens 265 Berechnung der Peaksymmetrie 268 Formeln und Rechenmethoden zur Beurteilung der Systemleistung 270 Allgemeine Definitionen 271 14 Inhalt Definitionen des Leistungstests 272 Definitionen der Reproduzierbarkeit 278 Interner gespeicherter Doppelpr zisions Zahlenzugriff 283 berpr fung des Systems berpr fung des Systems 288 Das Register GLPsave 291 Die Funktion DAD Test 293 10 ChemsStation Konzepte ChemsStation Konzepte In diesem Kapitel werden die Hauptkomponenten und die wichtigsten Merkmale der ChemStation beschrieben Aufgabenspezifische Hilfe zu Ihrer ChemsStation finden Sie in der Online Hilfe oder dem ChemsStation Tutorial das zusammen mit Ihrer Software geliefert wird 12 ChemStation Konzepte Allgemeine Beschreibung Allgemeine Beschreibung Die ChemStations f r GC LC LC MSD CE und A D Systeme dienen der Ger testeuerung der Datenaufnahme und der Datenauswertung f r HP 5890 Gaschromatographen der Serie II und der Agilent 6890 Serie Module und LC Systeme der Agilent 1100 Serie LC MSD der Agilent 1100 Serie Fl ssigkeitschromatographen der HP 1090 Serie Module f r Fl ssigkeitschromatographen der HP 1050 Serie Agilent Kapillarelektrophorese System und Agilent 35900C D E Zweikanalschnittstellen f r A D Wandler Die Software ist zum Einsatz auf IBM kompatiblen Personalcomputern unter der Arbeitsumgebung
221. traten e Eine Methodenliste e Einzelreports f r jede Probe e Eine statistische Auswertung der Analysen mit auszuw hlenden Kriterien Statistische Daten werden nur f r kalibrierte Substanzen errechnet e Ein Inhaltsverzeichnis mit Querverweisen auf die Seitennummern der Abschnitte mit detaillierten Informationen Erstellung eines zusammenfassenden Reports f r Sequenzen Bei der Erstellung eines zusammenfassenden Reports f r Sequenzen k nnen Sie beliebige Kombinationen der folgenden neun Kategorien w hlen indem Sie die entsprechenden Ankreuzk stchen aktivieren und wo m glich eine Reportvorlage mit der Auswahl Template vornehmen Jede Vorlage spezifiziert Inhalt und Layout des bestimmten Abschnittes des zusammenfassenden Reports 256 Verwendung der ChemStation Reports Sequence Summary Reporting Sie k nnen unter folgenden Reportvorlagen f r zusammenfassende Reports w hlen One Page Header Kopfzeilen auf einer Seite Die Vorlage GLP druckt GLP mit gro en Buchstaben als Titelseite f r den folgenden Report Datum und Platz f r eine Unterschrift sind vorgesehen Configuration Konfiguration Mit der Wahl von Configuration k nnen Sie die Ger tekonfiguration und die Daten der analytischen S ule Kapillare in den Report aufnehmen Sequence Table Seqzuenztabelle Mit der Wahl von Sequence table k nnen Sie eine Probenliste Parameter zur Quantifizierung und Methodennamen im Report aufnehme
222. ts zur Verf gung Viele Parameter sind Paare und bestehen aus An und Aus bzw Start und Stop Anfangsparameter Initial Events Anf ngliche Peakbreite Initial Peakwidth Interne Peakbreite des Integrators zu Beginn der Analyse Die anf ngliche Peakbreite wird dazu verwendet um die Gr e des Akkumulators festzulegen der Peakanstieg Peakabfall und Tailing erkennt Der Integrator kann diesen Wert im Laufe der Analyse ab ndern um die Integration zu optimieren Er wird vom Anwender als die Anzahl an Zeiteinheiten angegeben die der Peakbreite auf halber H he des ersten Peaks entspricht den L sungsmittelpeak ausgenommen Steigungsempfin dlichkeit Slope Sensitivity Einstellung der Empfindlichkeit Beim neuen Integrator ist die Steigungsempfindlichkeit ein Wert f r die Steigung die sich linear ver ndert Darin unterscheidet er sich vom Standardintegrator der die H he der Steigungsempfindlichkeit in Form von Zweierpotenzen ausdr ckt Mindesth he Height reject Die Mindesth he ist ein Parameter der vom Anwender bei der Integration zur Rauschverringerung festgesetzt wird Peaks die diesen Wert unterschreiten werden vom Integrator ignoriert Je h her die Einstellung f r die Mindesth he ist desto weiter mu ein Datenpunkt ber der fest gelegten Basislinie liegen ehe er als Peakanfang qualifiziert werden kann Die Mindesth he sollte nicht dazu verwendet werden 134 Der neue Integrationsalgorithm
223. uch der Peakidentifizierung durchl uft die Software die integrierten Daten dreimal Auffinden des Referenzpeaks Im ersten Durchlauf werden die Zeitreferenzpeaks gesucht Die Software sucht im Analysenlauf nach Retentions bzw Migrationszeiten die mit denen der Referenzpeaks aus der Kalibriertabelle bereinstimmen Ein Peak eines Analysenlaufes wird als Referenzpeak der Kalibriertabelle identifiziert wenn dessen Retentions bzw Migrationszeit innerhalb des angegebenen Fensters des Peaks aus der Kalibriertabelle liegt Werden in diesem Fenster mehrere Peaks gefunden wird der Peak mit der gr ten Fl che oder H he gegebenenfalls mit einer positiven bereinstimmung der Peakqualifier als Referenzpeak gew hlt F r jeden gefundenen Zeitreferenzpeak wird die Abweichung zwischen der gefundenen Retentions bzw Migrationszeit und der in der Kalibriertabelle festgelegten ermittelt Dann werden alle anderen erwarteten Retentions bzw Migrationszeiten in der Kalibriertabelle angepa t Auffinden der Internen Standardpeaks ISTD Peak Im zweiten Durchlauf werden alle definierten internen Standardpeaks gesucht Falls sie nicht bereits als ISTD identifiziert wurden k nnen Peaks auch als Zeitreferenz identifiziert werden ISTD Peaks werden durch ihre Fenster f r Retentions bzw Migrationszeiten und Peakqualifier identifiziert Werden in demselben ISTD Fenster mehrere Peaks gefunden dann wird der gr te Peak gew hlt Suchen aller and
224. umschlie enden Rekalibrierung wird je ein Standard vor und einer nach einer Reihe unbekannter Proben gemessen Zur quantitativen Auswertung der unbekannten Proben wird eine Kalibriertabelle aus den Mittelwerten der beiden Kalibrierungen verwendet Die Funktion f r Teilsequenzen erlaubt einen Einblick in die Reihenfolge der Sequenzbearbeitung und stellt eine Wiederholungsm glichkeit zur Vermessung oder Nachbearbeitung einzelner Proben zur Verf gung Bei der wiederholten Auswertung kann f r die Quantifizierung zwischen den Originaldaten oder neuen Eintr gen der Probentabelle gew hlt werden Sequenzen k nnen zur schnellen Vermessung von Vorzugsproben unterbrochen werden Danach kann die Sequenz ohne eine Beeinflussung des automatischen Ablaufs fortgesetzt werden Proben k nnen zu einer Sequenztabelle hinzugef gt werden w hrend die Sequenz bearbeitet wird Sowohl die Sequenz als auch die Teilsequenz k nnen ausgedruckt werden Weitere Informationen zu Sequenzen entnehmen Sie bitte Kapitel10 Automatisierung und dem Online Hilfesystem Gute Laborpraxis Good Laboratory Practice GLP Die ChemStation wurde gem internationaler Konzeptions und Design Richtlinien entwickelt und verf gt ber eine Reihe von Merkmalen die den Betrieb unter beh rdlicher Kontrolle erleichtern Diese Merkmale beziehen sich auf die umfassende Spezifikation und berpr fung von 29 ChemStation Konzepte Zur ChemStation Software Methoden hin
225. ung FALLS ein vierter Buchstabe vorhanden ist gibt dieser zus tzliche Peakinformation Peak flag Ein O im Peakcode weist darauf hin dass der Messbereich berschritten wurde U bedeutet dass der Messbereich unterschritten wurde und D bedeutet einen verzogenen Peak Konstruktion einer modifizierten Basislinie Die meisten Analysen ergeben ein komplizierteres Chromatogramm als das welches in Abbildung 21 dargestellt ist Der Integrator ver ndert die Basislinie nach folgenden Regeln 126 Abbildung 21 Der neue Integrationsalgorithmus Codes zur Beschreibung der Peaktrennung Konstrunktion einer modifizierten Basislinie HBOS BP PB BV vv ii BV BB BE jJ I J N ji BB NL Ki Par St KT e Wenn ein Peak die Basislinie schneidet BP und PB geht die Basislinie durch den niedrigsten Punkt des Peaks gem Punkt 1 in Abbildung 21 e Wenn ein L sungsmittelpeak nach Verwendung einer tangentialen Anpassung nicht auf der Basislinie beginnt wird die Basislinie durch einen Punkt gelegt der auf einer horizontalen Verl ngerung des letzten gefundenen Basislinienpunktes und dem Anfang des L sungsmittelpeaks liegt vgl Punkt 2 in Abbildung 21 Die Buchstaben HBOS bedeuten Overflow solvent horizontal Baseline und besagen daf das Signal den linearen Bereich des Detektors berschritten hat e Wenn ein Peak in einem nachfolgenden Tal endet der folgende Peak aber die Vorgabe des Wertes f r Area Rej
226. ung ber LAN und die Datenaufnahme f r Agilent 6890 Gaschromatographen Agilent 35900E A D Steuermodule und Fl ssigkeitschromatographen der Agilent 1100 Serie Ger te k nnen leicht eingebunden werden indem man sie an ein LAN anschlie t an dem auch der ChemStation PC angeschlossen ist Diese Anordnung erm glicht es den ChemStation PC von den Ger ten die er ansteuert rtlich zu trennnen 33 ChemStation Konzepte Dokumentation Dokumentation Die Dokumentation enth lt bestimmte Abschnitte ber e die Installation und das Erlernen der ChemsStation Software e das Anwenden der ChemsStation Software e das Verstehen der Arbeitsprinzipien der Software und e die Anpassung der ChemsStation Installation und Erlernen Jede ChemsStation Software wird mit einem Installationshandbuch geliefert das Details ber die wichtigsten Punkte der PC Hardware und Softwareanforderungen den Einbau der Schnittstelle die Installation der ChemsStation und die Voraussetzungen f r die Installation enth lt Das Installationshandbuch ist spezifisch f r die gekaufte Konfiguration und kann Anweisungen zu Troubleshooting Systemdokumentationen und Instandhaltung des Systems beinhalten Jede ChemsStation enth lt ein aufgabenorientiertes Tutorial das in die Software integriert werden kann Das Tutorial ist in erster Linie eine Lernhilfe und so ausgelegt da der Anwender selbst ndig die notwendigen Anwendungen erlernen kann Jede analytische
227. ur Systemeignung Extended Performance 24 Performance and Noise style 24 Performance Report 23 Reports zur Systemeignung 23 Response 163 183 Detektor 184 Drift 226 Verh ltnis 156 Responsefaktor absoluter 165 Update 213 Retentionszeit 271 absolute 151 152 Fenster 153 korrigierte 151 154 Rekalibrierung 195 Update 213 Run Time Checkliste 45 49 51 S Schneiden der Basislinie 86 Schultererkennung 135 Schultern Integration 81 Schwellenwert 93 Einflu des 94 ver ndern 94 Sequence Summary Report Analysenreports 257 Festlegung der Ausgabe 258 Konfiguration 257 Kopfzeilen 257 Logbuch 257 Methoden 257 Probentabelle 257 Sequenztabelle 257 Statistik 257 Zusammenfassung 258 Sequenz abbrechen 204 Arbeitsschritte zur umschlie enden Kalibrierung 227 Dateiname 209 editieren 204 erstellen 203 204 explizite Kalibrierung 217 Fehlermeldungen 207 Logbuchdatei 207 Nullproben 209 pausieren 205 Probengef e 209 speichern 204 stoppen 204 umschlie ende Kalibrierung 226 Unterverzeichnis 39 Was ist eine Sequenz 200 zyklische Kalibrierung 218 219 226 Sequenzparameter Tabelle 201 Sequenztabelle 202 Rekalibrierparameter 213 Shutdown automatisch 211 des Systems 211 Makro 211 Signal 298 Index analog 59 Details 44 digital 59 79 Kennzeichnung 61 Monitor 62 Software berblick Bertriebssystem 17 Datenmodell 17 Methoden und Sequenzen 17 Systemkonf
228. us Integrationsparameter Peaks zu unterdr cken deren H he der H he des kleinsten interessierenden Peaks nahe kommt Verwenden Sie statt dessen den Parameter der Mindestfl che Area Reject um kleine Peaks auszuschlie en Mindestfl che Die Einstellung der Mindestfl che schlie t Peaks aufgrund ihrer Fl che aus Peaks deren Fl chen kleiner sind als die Mindestfl che werden nicht in den Report aufgenommen Schulter erkenn ung Shoulder detection Wenn die Schultererkennung aktiviert ist erkennt der Integrator Schultern anhand der Kr mmung des Peaks die durch die zweite Ableitung gegeben ist Wenn die Kr mmung gegen null geht wertet der Integrator diesen Wendepunkt als m glichen Anfang einer Schulter Wenn der Integrator vor dem Peakmaximum einen weiteren Wendepunkt findet ist die Schulter identifiziert Peakbreite Der Berechnungsalgorithmus f r die Peakbreite hat sich hinsichtlich des Standardintegrators nicht ge ndert Informationen finden Sie im entsprechenden Abschnitt ber den Standardintegrator siehe Peakbreite Peak Width auf Seite 91 Die Voreinstellung der Peakbreite steuert die Selektivit t des Integrators in der Unterscheidung zwischen Peaks und Basislinienrauschen Um gute Leistungsf higkeit zu sichern mu der Wert der Peakbreite nahe an den Breiten auf halber H he der tats chlichen Chromatographiepeaks liegen Der Integrator kann den Wert f r die Peakbreite im Lauf der Analyse neu festlegen
229. von der Fl che des Hauptpeaks abgezogen Peak trennung Angabe des Punktes an dem ein Peak durch Lotf llung abgetrennt wird Alle Talpunkte Die Einstellung Alle Talpunkte All Valleys legt fest da die Peaks innerhalb eines ausgew hlten Integrationsbereiches ber eine Basislinienkonstruktion von allen Talpunkten aus getrennt werden 144 Der neue Integrationsalgorithmus Manuelle Integration L schen von Peaks L scht einen oder mehrere Peaks aus den Integrationsergebnissen Kodierung zur Peaktrennung Manuell integrierte Peaks werden im Integrationsreport mit der Kodierung MM markiert Falls vor dem manuell integrierten Peak ein Peak erscheint dessen Ende wegen diesem Peak ver ndert wird tr gt er die Kodierung F f r forced erzwungen Ein L sungsmittelpeak der durch manuelle Integration beeinflu t wurde zum Beispiel durch tangentiale Anpassung tr gt die Kodierung R f r re calculated solvent neuberechneter L sungsmittelpeak anstatt S Vorgehensweise in der manuellen Integration Der erste Schritt einer manuellen Integration besteht in der Wahl eines Signalbereiches zur manuellen Integration Dies geschieht durch Herausvergr ern zoomen des interessierenden Bereiches Im n chsten Schritt wird Draw Baseline Negative Peaks Tangent Skim oder Delete Peak s gew hlt Die Basislinie kann nun gezeichnet werden indem die Maus mit gedr ckter linker Maustaste bewegt wird W hrend der
230. vor dem Wendepunkt festgelegt e Eine m gliche Schulter auf der hinteren Flanke erkennt man am Vorhandensein eines zweiten Wendepunktes vor dem Peakende oder einem Tal Wenn sie sich best tigt wird der Anfang der Schulter auf den Anfangspunkt der Kr mmung gelegt Die Retentionszeit wird ber den Punkt der Schulter bestimmt wo die negative Kr mmung maximal ist Mit Hilfe eines programmierten Integrationsparameters kann der neue Integrator auch die Schulterfl chen ber Lotf llung vom Wendepunkt der Peakschulter aus als normale Peaks berechnen Die Fl che der Schulter wird vom Hauptpeak abgezogen Peakschultern k nnen mit Hilfe eines zeitabh ngigen Integrationsparameters wie normale Peaks behandelt werden 122 Abbildung 20 Der neue Integrationsalgorithmus Basislinienbestimmung Basislinienbestimmung Nachdem alle Peakgruppen bestimmt und die Basislinie gefunden wurde ben tigt der Integrator den Algorithmus zur Basisliniebestimmung der die Basislinie mit Hilfe einer pegs and thread Technik bestimmt Er verwendet Ann herungen an trapezf rmige Fl chen und die entsprechenden H hen um den Lauf zu normalisieren und die niedrigste Basislinie zu erhalten Zu den Eingangsdaten f r den Algorithmus zur Basislinienbestimmung geh ren auch Parameter aus der Methode und den Datens tzen die den Detektor und die Anwendung die der Integrator zur Optimierung seiner Berechnungen verwendet kennzeichnen Standardm ige Ko
231. vorlage f r unkalibrierte Peaks Wenn Sie die Reportvorlage f r unkalibrierte Peaks ver ndern wollen m ssen Sie einen der folgenden Reports im Dialogfeld Specify Report ausw hlen e ber Separately werden die unkalibrierten Peaks in einer gesonderten Tabelle wenn die Peaks nach der Retentionszeit sortiert sind oder in getrennten Tabellen wenn die Peaks nach dem Signal sortiert sind im Report aufgef hrt e ber With Calibrated Peaks werden die unkalibrierten Peaks zusammen mit den kalibrierten Peaks im Report aufgef hrt e ber Do Not Report werden die unkalibrierten Peaks gar nicht in den Report aufgenommen 253 Verwendung der ChemStation Reports Reportausgabe Reportausgabe Der Report kann an folgende Stellen ausgegeben werden e Bildschirm Ein Report bestehend aus Text und Graphiken wird auf dem Bildschirm im Fenster des Reportanzeigers dargestellt und kann von dort aus gedruckt werden e Drucker Ein Report der aus Text und Grafik besteht wird auf dem aktuellen Drucker ausgegeben e Datei Der Report wird in eine Datei gesichert Nachdem Daten in einer Datei gespeichert wurden ist eine Nachbearbeitung der Daten mit einem anderen Programm zum Beispiel Microsoft EXCEL m glich Dateiformate f r Reports Jeder Report kann in vier verschiedenen Formaten gespeichert werden Jedes Format weist eine eigene Dateinamenerweiterung auf Es ist m glich mehr als ein Format f r einen Repor
232. weilige Anwendung zu optimieren Bevor der Integrator damit beginnen kann die Peaks zu integrieren versucht er einen Punkt auf der Basislinie zu bestimmen Zu Beginn der Analyse richtet der Integrator einen Anfangslevel f r die Basislinie ein wobei der erste Punkt des Signals als vorl ufiger Basislinienpunkt verwendet wird Danach versucht er den Anfangswert der Basislinie bezogen auf den Mittelwert des ankommenden Signals neu zu definieren Wenn der Integrator keinen neu definierten Anfangswert f r die Basislinie erzielt beh lt er den Wert des ersten Datenpunktes als m glichen Anfangswert f r die Basislinie bei Basislinienauswertung Der Integrator betrachtet die digitalen Daten in Intervallen entsprechend der anf nglichen Peakbreite oder im Lauf der Analyse anhand der berechneten Peakbreite Er behandelt jeden Datenpunkt als m glichen Basislinienpunkt Um als Basislinienpunkt zu gelten mu ein Datenpunkt folgende Bedingungen erf llen e der Datenpunkt mu innerhalb des festgelegten Basislinienbereiches liegen e die Kr mmung der Basislinie am Datenpunkt bestimmt ber die zweite Ableitung mu unterhalb des kritischen Wertes liegen der von der aktuellen Slope Sensitivity Steigungsempfindlichkeit festgelegt wird Der Integrator legt einen Basislinienbereich mittels der Steigung der Basislinie unter Verwendung des Algorithmus der Basislinienauswertung fest Die Steigung wird dabei ber die erste Ableitung und die
233. zur Umrechnung der Absolutmenge der analysierten Substanzen in relative Werte Dies geschieht mit einer Division durch den angegebenen Wert 166 Quantifizierung Unkalibrierte Rechenmethoden Unkalibrierte Rechenmethoden Unkalibrierte Rechenmethoden erfordern keine Kalibriertabelle Area und Height Fl chen und H hen Die Berechnungsart Fl chen berechnet die Fl che jedes Peaks der Probe als prozentualen Anteil an der Gesamtfl che aller Peaks eines Analysenlaufes Die Berechnung von Fl chen erfordert keine vorherige Kalibrierung und h ngt in bestimmten Grenzen des Detektors nicht von der injizierten Probenmenge ab Es werden keine Responsefaktoren ber cksichtigt Falls alle Substanzen identische Responsefaktoren aufweisen kann die Angabe Fl chen eine N herung f r die vorhandenen Mengen der Substanzen darstellen Fl chen wird routinem ig dort eingesetzt wo die qualitative Information ausreicht oder zur Erstellung von Kalibriertabellen f r andere Kalibrierverfahren Die Angabe H hen berechnet die H he jedes Peaks der Probe als prozentualen Anteil an der Gesamth he aller Peaks eines Analysenlaufes 167 Quantifizierung Kalibrierte Rechenverfahren Kalibrierte Rechenverfahren Die Methoden Externer Standard ESTD Normierung und Interner Standard ISTD erfordern jeweils bekannte Responsefaktoren und daher eine Kalibriertabelle Die Kalibriertabelle steuert die Umrechnung einer Fl che oder H
234. zw Migrationszeiten aus einem Kalibrierlauf Diese Retentions bzw Migrationszeiten werden mit denen des Analysenlaufes verglichen Wenn eine bereinstimmung vorliegt wird f r den Peak der Probe mit den Verfahren aus Kapitel Peak Identification Peakerkennung angenommen da es sich um dieselbe Substanz handelt wie in der Kalibriertabelle Bei der Analyse oder der Reporterstellung werden die Mengen jedes eingetragenen Peaks dazu verwendet die Mengen f r das ausgew hlte Kalibrierverfahren zu bestimmen Die Art und Menge an Information die zur Erstellung einer Kalibriertabelle notwendig ist h ngt von der Art des Kalibrierverfahrens ab Folgende Informationen sind zur Erstellung einer Kalibriertabelle erforderlich e Die Retentions bzw Migrationszeiten aller Komponenten der Kalibrier mischung e Eine Mengenangabe f r jede Komponente der Kalibriermischung in konsistenten Einheiten 180 Abbildung 33 Kalibrierung Kalibrierkurve Kalibrierkurve Eine Kalibrierkurve ist eine graphische Auftragung von Menge und Response Peakfl che oder Peakh he f r eine Komponente aus einer oder mehreren Kalibrierproben Normalerweise wird ein Aliquot der Kalibrierprobe injiziert ein Signal gemessen und der Response mit der Peakfl che oder Peakh he gem Abbildung 33 berechnet Kalibrierprobe 10 ng pl Signal und Kalibrierkurve Response Response 1000 F l J J 5 10 10 Zeit min Menge ng ul

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