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ÄKTApurifier - GE Healthcare Life Sciences

1. Q o gt i Efi Fraktions Gi gt j sammler M 3 optional il ee Sicherungs Mi z halter mit I Sicherung Zur E Transformator SFR HENSEER ba am wu geerdet Abb 2 3 KTApurifier UPC die Anschl sse am KTApurifier sind hnlich 1 30 Schlie en Sie das Transformatorkabel an den Input Port an der CU 950 an Die CU 950 sollte an der linken Seite des Systems angebracht werden Schlie en Sie ein mitgeliefertes Netzkabel zwischen dem Transformator und der Stromversorgungsbuchse am System an KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 5 Installation 2 Wenn ein Fraktionssammler verwendet wird schlie en Sie ein mitgeliefertes Netzkabel zwischen dem Fraktionssammler und der Stromversorgungs buchse am System an Schlie en Sie ein mitgeliefertes Netzkabel zwischen dem KTApurifier und einer ordnungsgem geerdeten Netzsteckdose gem Abbildung 2 3 an Nicht anschalten Alle anderen Netzkabel sind bei Lieferung angeschlossen F llen Sie die ersten zwei Abschnitte des Installationsprotokolls aus Das Auspacken und die Installation des KTApurifier sind nun abgeschlossen 2 3 11 Einstellungen und Kalibrierung 1 Denken Sie daran das Delay Volumen zu ndern wenn ein Fraktions sammler verwendet werden soll Diese Einstellung finden Sie in System Control in System Settings Specials Zur Berec
2. KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 131 8 Referenzinformationen 8 1 Systembeschreibung KTApurifier 100 Im KTApurifier 100 ist eine PEEK Kapillare gr n mit einem Innendurchmesser von 0 75 mm von der Pumpe P 901 zum Auslass eingebaut Die nachstehende Tabelle zeigt die Kapillaren die f r KTApurifier 100 erh ltlich sind und ihre Lage im System Kapillare L nge Innen Au en Material Farbe 10 cm durchmesser durch Volumen der Kapillare messer der Kapillare G1 62 33 cm 0 75 mm 1 16 PEEK Gr n 44 2 ul G3 9 cm 0 75 Mmm 1 16 PEEK Gr n 44 2 ul G4 16 cm 0 75 Mmm 1 16 PEEK Gr n 44 2 ul G5 30 cm 0 75 Mmm 1 16 PEEK Gr n 44 2 ul G6 H6 16 cm 0 75 Mmm 1 16 PEEK Gr n 44 2 ul G7 H7 8 cm 0 75 MM 1 16 PEEK Gr n 44 2 ul G8 H8 14 cm 0 75 Mmm 1 16 PEEK Gr n 44 2 ul G9 H9 60 cm 0 75 Mmm 1 16 PEEK Gr n 44 2 ul W1 W3 100 cm 0 75 mm 1 16 Tefzel durchsichtig 44 2 ul W1 W3 100 cm 1 00 mm 1 16 Tefzel durchsichtig 78 5 ul A1 B2 170 cm 29mm 3 16 Teflon durchsichtig 660 ul A2 190 cm 29mm 3 16 Teflon durchsichtig 660 ul B1 150 cm 29mm 3 16 Teflon durchsichtig 660 ul A3 B3 15 cm 29mm 3 16 Teflon durchsichtig 660 ul Austauschen der Kapillarens tze KTApurifier 10 Zwei verschiedene Kapillareens tze mit unterschiedlichen Innendurchmessern sind f r die Verwendung vom Injektionsventil zum Auslassvent
3. Code Nr Bezeichnung der S ule 0 25 0 50 17 5177 01 ini Q 4 6 50 PE XP 17 5166 01 ono Q 5 50 GL X 17 5167 01 Mono Q 10 100 GL RF x 17 0506 01 ono Q HR 16 10 RF x 17 5178 01 ini S 4 6 50 PE X P 17 5168 01 Mono S 5 50 GL X 17 5169 01 Mono S 10 100 GL RF X 17 0507 01 ono S HR 16 10 RF X 17 5181 01 SOURCE 150 4 6 100 PE RF X 17 5182 01 SOURCE 15S 4 6 100 PE RF X KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 Code Nr Bezeichnung der S ule 0 25 0 50 17 1177 01 RESOURCE Q 1 ml x 17 1179 01 RESOURCE Q 6 ml X 17 1178 01 RESOURCES 1 ml X 17 1180 01 RESOURCE S 6 ml X 11 0013 02 HiTrap Capto Q 1 ml x 11 0013 03 HiTrap Capto Q 5 ml RF 11 0032 73 HiTrap Capto MMC 1 ml X 11 0032 75 HiTrap Capto MMC 5 ml RF 17 1153 01 HiTrap Q HP 1 ml X 17 1154 01 HiTrap Q HP 5 ml RF 17 1151 01 HiTrap SP HP 1 ml X 17 1152 01 HiTrap SP HP 5 ml RF 17 6002 33 HiTrap IEX Selection Kit 7x1 ml x 17 5053 01 HiTrap Q FF 1 ml X 17 5156 01 HiTrap Q FF 5 ml RF 17 5054 01 HiTrap SP FF 1 ml X 17 5157 01 HiTrap SP FF 5 ml RF 17 5055 01 HiTrap DEAE FF 1 ml X 17 5154 01 HiTrap DEAE FF 5 ml RF 17 5056 01 HiTrap CM FF 1 ml X 17 5155 01 HiTrap CM FF 5 ml RF 17 5162 01 HiTrap ANX FF high sub 1 ml X 17 5163 01 HiTrap ANX FF high sub 5 ml
4. Testprotokoll und Fotokopie des Registrationsformulars im Systemlogbuch aufbewahrt Registrationsformular an Service Administration versandt Installation Guide f r sp tere Verwendung in User Manual Box aufbewahrt Tabelle 2 1 Installationsprotokoll 2 4 Installationstest Der Installationstest pr ft die F rderleistung des Pumpensystems und die UV Detektion des KTApurifier Der Installationstest kann auch jederzeit verwendet werden um den Zustand des Systems zu pr fen zum Beispiel nach einer l ngeren Pause Die korrekte Gradientenbildung wird durch die Herstellung eines linearen Gradienten und einer Reihe von Konzentrationsstufen von Aceton gepr ft Die korrekte UV Detektion wird gepr ft durch die berwachung der Aceton Konzentration bei e 254 nm Monitor UPC 900 e 265 254 und 280 nm und Berechnung der Absorptionsverh ltnisse 265 nm 254 nm und 265 nm 280 nm Monitor UV 900 32 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Installation 2 WARNUNG Ergreifen Sie bei der Verwendung von gef hrlichen Chemikalien alle geeigneten Schutzma nahmen z B Tragen von Schutzbrillen und Hand schuhen die gegen ber den verwendeten Chemikalien resistent sind Befolgen Sie alle vor Ort geltenden Vorschriften und Anweisungen zum sicheren Betrieb und zur Wartung des Systems 2 4 1 Vorbereiten des KTApurifier Starten der Trenneinheit Schalten Sie die Trenneinheit mit
5. Wenn Sie Eluenten verwenden die schwieriger zu mischen sind wie zum Beispiel Isopropanol und Wasser kann ein gr eres Mischervolumen verwendet werden um eine optimale Vermischung zu erreichen KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 91 5 Optionale Funktionen 5 2 BufferPrep 92 Hinweis Wenn die pH und Leitf higkeitskurven auf eine ungleichm ige Vermischung Ihrer Pufferl sungen hindeuten unstetige Kurven verwenden Sie eine gr ere Mischkammer Hinweis Stellen Sie immer die Flaschen mit Pufferl sung unterhalb des Mischers auf wenn Sie die Mischkammern auswechseln um ein Auslaufen zu verhindern 5 2 BufferPrep 5 2 1 Was ist BufferPrep BufferPrep macht die zeitaufw ndige manuelle Vorbereitung und Titration der Pufferl sungen berfl ssig die normalerweise bei jeder pH nderung in der Chromatographie erforderlich sind BufferPrep berechnet und bereitet f r jeden eingegebenen pH Wert und f r jede Salzkonzentration automatisch die Zusam mensetzung der Pufferl sung in der Leitung aus vier Stamml sungen vor Lineare und Stufensalzgradienten k nnen verwendet werden und der pH Wert kann als variabler Scouting Parameter verwendet werden Hinweis Damit die BufferPrep Funktion genutzt werden kann muss der BufferPrep Satz einschlie lich zweier Umschaltventile an der Pumpe installiert werden siehe Abschnitt 5 2 2 Installieren des BufferPrep Satzes und Abschnitt 8 8 Bestellinformatio
6. 1 W hlen Sie Flow Regulation of the System Pump auf der ersten Seite im Method Wizard 2 Geben Sie geeignete Grenzwerte f r den Druck und die Durchflussgeschwin digkeit ein siehe nachfolgenden Abschnitt Hinweis Einschalten der Durchflussregelung bedeutet dass die selbstt tige Regelung in UNICORN aktiviert wird Sie wird nur w hrend der Probenaufgabe und der Auswaschung der ungebundenen Probe aktiviert KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Optionale Funktionen 5 Aufnehmen der Durchflussregelung in eine bestehende Methode 1 W hlen Sie View Run Setup im Method Editor 2 Klicken Sie auf die Registerkarte Variables und w hlen Sie Show details 3 W hlen Sie im Block Aut_PressureFlow_Regulation den Modus PressFlowControl f r die Variable System_Pump 4 Geben Sie den Druckgrenzwert in System_PressLevel ein w hlen Sie einen Wert knapp unter dem Druckgrenzwert der S ule und den zugelassenen Mindestdurchfluss in System_MinFlow Diese Parameterwerte sowie die PID Parameterwerte k nnen sp ter separat ge ndert werden indem Sie System Settings in System Control ausw hlen Hinweis Wenn die Durchflussgeschwindigkeit unter den Wert System_MinFlow f llt wird ein Alarm ausgel st und das System auf Pause gestellt Daher empfehlen wir die Verwendung einer Anweisung Watch WatchPar_Flow die ber diesem Wert aktiviert wird Eine geeignete Ma nahme muss sich im n chsten Block fortsetzen Um Druckspitze
7. SuRe 1 ml x 11 0034 94 HiTrap MabSelect SuRe 5 ml RF 17 5079 01 HiTrap rProtein A FF 1 ml x 17 5080 01 HiTrap rProtein A FF 5 ml RF 17 0402 01 HiTrap Protein A HP 1 ml x 17 0403 01 HiTrap Protein A HP 5 ml RF 17 0404 01 HiTrap Protein G HP 1 ml x 17 0405 01 HiTrap Protein G HP 5 ml RF 17 0406 01 HiTrap Heparin HP 1 ml x 17 0407 01 HiTrap Heparin HP 5 ml RF 17 5189 01 HiPrep 16 10 Heparin FF RF 17 0412 01 HiTrap Blue HP 1 ml x 17 0413 01 HiTrap Blue HP 5 ml RF 17 5110 01 HiTrap IgM Purification HP 1 ml x 17 5111 01 HiTrap IgY Purification HP 5 ml RF 146 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 Code Nr Bezeichnung der S ule 0 25 0 50 17 5112 01 HiTrap Streptavidin HP 1 ml x 17 5143 01 HiTrap Benzamidine FF high sub 1 ml x 17 5144 01 HiTrap Benzamidine FF high sub 5 ml RF S ulen f r Chromatofokussierung Code Nr Bezeichnung der S ule 0 25 0 50 17 5171 01 Mono P 5 200 GL x 17 5170 01 Mono P 5 50 GL x 8 4 2 KTApurifier 100 Hinweis Wenn sie Niederdrucks ulen wie HiTrap und HiLoad verwenden wechseln Sie zum Durchflussbegrenzer FR 902 Wenn der Druck den f r diese S ulen angegebenen Druckgrenzwert berschreitet muss eine zus tzliche Systemdruckmessung durchgef hrt werden Dies wird sp ter in diesem Abschnitt beschrieben X empfohlener Kapillarsatz kann die Trennsch rfe verbessern x k
8. sense Wa Einige Variablen sind normalerweise ausgeblendet Haken Sie das K stchen Show details an um sie anzuzeigen KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 75 4 Betrieb 4 6 Starten eines Laufs 5 Auf der Seite Evaluation Procedures w hlen Sie die automatisierten Vorg nge aus die das System nach dem Lauf durchf hren soll W hlen Sie Print_Chromatogram aus um nach dem Lauf einen automatischen Ausdruck zu erhalten 6 Die Seite Method Information enth lt eine Zusammenfassung der Informa tionen zum Lauf Unter dem Registerreiter Method Duration werden das durchschnittliche Volumen der verwendeten Pufferl sung A B und die Dauer der Methode angezeigt 7 Aufder Seite Result Name benennen Sie die Ergebnisdatei und legen fest wo sie gespeichert werden soll Standardm ig entspricht die Bezeichnung der Ergebnisdatei entweder der Bezeichnung der Methode dem Datum des Laufs oder einer vorher festgelegten Bezeichnung Die Bezeichnung der Methode wird mit einer dreistelligen Laufnummer beginnend mit 001 erg nzt Sie k nnen diese Bezeichnung ndern und ein neues Verzeichnis w hlen indem Sie auf Browse klicken 76 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 8 Klicken Sie auf START Der Lauf startet Sie k nnen den Lauf im Modul System Control anzeigen Das Fenster Curves zeigt die Das Fenster Run Data zeigt Kurven w hrend des
9. Wenn Sie Ihr Rezept erstellt haben klicken Sie auf Save As Geben Sie dem Rezept einen Namen Das Rezept wird gepr ft und wenn der ausgew hlte pH Bereich nicht m glich ist wird eine Warnung angezeigt die den Fehler zustand angibt und Vorschl ge zur Korrektur macht Korrigieren Sie das Rezept und klicken Sie erneut auf Save As Hinweis Die Pr fung schlie t nicht mit ein ob die Pufferkapazit t f r den gesamten pH Bereich gro genug ist Klicken Sie auf Close um den Dialog BufferPrep Recipes zu schlie en 8 5 2 Definieren einer neuen Puffersubstanz Stellen Sie sicher dass alle pKa Werte f r die Substanz verf gbar sind bevor Sie eine neue Puffersubstanz definieren Die eingegebenen pKa Werte sollten echte pKa Werte d h der pKa Wert bei unendlicher Verd nnung im Gegensatz zum scheinbaren pKa d h gemessen bei Konzentration ungleich Null sein Siehe Abschnitt 8 5 5 unter Beispiele und Tipps f r Informationen zu echtem und scheinbarem pKa Es sollten die pKa Werte bei 25 C angegeben sein 1 154 Klicken Sie auf New im Dialog BufferPrep Recipes um den Dialog New Recipe zu ffnen Klicken Sie auf die Schaltfl che Buffer substance und klicken Sie auf New im Dialog Define Buffer Substance Geben Sie im Dialog New Component den Namen der neuen Puffersubstanz ein Klicken Sie auf OK KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 Geben Sie in der Tabelle Define Buffer Sub
10. 1 Klicken Sie mit der rechten Maustaste in das Fenster Run Data und w hlen Sie Properties oder w hlen Sie View Properties aus dem Men System Control 2 W hlen Sie die Laufdaten die angezeigt werden sollen und klicken Sie auf OK Properties xi Curve Style and Color Flow Scheme l Logbook Run Data Groups Run Data Color Cuves xAxs Yaris YlInstruments New Group MlConnection YlRun Status Edit Group OScouting No MlAcc Volume Delete Group VIBlock Volume VlAcc Time VIBlock Time Flow Pressure ouy Conc OCond OCond_TC E Avbryt Help KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 Curves Das Fenster Curves zeigt die Monitorsignalwerte graphisch Zum Anpassen des Fensters Curves 1 Klicken Sie mit der rechten Maustaste in das Fenster Curves und w hlen Sie Properties oder w hlen Sie View Properties aus dem Men System Control um die Kurven auszuw hlen die angezeigt werden sollen Alle Kurven werden stets in der Ergebnisdatei gespeichert 2 Klicken Sie auf die verschiedenen Registerkarten im Fenster Curve Properties um die Eigenschaften f r die verschiedenen Kurven einzustellen Normal erweise wird der Ma stab der Kurven mit der automatischen Ma stabswahl festgelegt d h der Ma stab wird immer wieder an die h chsten und nie drigsten Werte f r jede Kurve angepasst Curve Style and Color Flow Scheme Lo
11. Referenzinformationen 8 8 2 5 Mischer M 925 Der Mischer M 925 ist ein dynamischer Einkam mermischer der von der Pumpe P 900 mit Strom versorgt und gesteuert wird Alle Eluenten die gew hnlich bei der Ionenaustausch hydrophoben Interaktions Affinit ts und Reversed Phase Chromatographie verwendet werden k nnen mit hoher Genauigkeit und Reproduzierbarkeit gemischt E35 werden Der Mischer wird direkt nach der Pumpe P 900 VA w positioniert Der Mischer M 925 wird mit einer Mischkammer der Gr e 0 6 ml geliefert die gegen gr ere Kammern ausgetauscht werden kann Mischkammern der Gr e 2 5 and 12 ml sind als Optionen erh ltlich um eine optimale Vermischung ber den gesamten Durchflussgeschwindigkeitsbereich des KTApurifier zu erreichen 8 2 6 Ventil INV 907 Ein Motorventil mit sieben Ports wird als Probeninjektionsventil verwendet Es hat drei verschiedene Betriebspositionen zum e Laden einer Probenschleife bei gleichzeitiger quilibrierung der S ule Stellung Load e Reinigen der Probenschleife w hrend die S ule in Betrieb ist Stellung Inject e Reinigen der Pumpe f r schnellen Eluentenwechsel ohne St ren der S ule Stellung Wash Probenvolumina bis zu 150 ml k nnen ber Probenschleifen aufgebracht werden die am Injektionsventil angeschlossen werden e _ unter Verwendung einer Auswahl von Probenschleifen mit festem Volumen f r die Aufbringung von Proben von 10
12. UniNet 1 5 m al 18 1117 75 UniNet 3 0 m 1 18 1109 75 UniNet 15 0 m 1 18 1117 74 etzkabel US Standard 1 19 2447 01 etzkabel EU Standard 1 19 2448 01 Signalkabel 6 Pol mini DIN offen 1 18 1110 64 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 173 8 Referenzinformationen 8 8 Bestellinformationen Artikel Menge Code Nr Packung Einlassfilter Einlassfiltersatz 5 11 0004 14 Filterhaltersatz 1 11 0004 07 Schraubdeckelsatz GL45 1 11 0004 10 Einlassfiltersatz 1 Filter 1 Netz 1 Deckel GL45 1 18 1113 15 Kapillaren PEEK Kapillare Innendurchmesser 0 25 mm em 18 1120 95 Au endurchmesser 1 16 PEEK Kapillare Innendurchmesser 0 50 mm em 18 1113 68 Au endurchmesser 1 16 PEEK Kapillare Innendurchmesser 0 75 mm em 18 1112 53 Au endurchmesser 1 16 PEEK Kapillare Innendurchmesser 1 0 mm em 18 1115 83 Au endurchmesser 1 16 Kapillaren Tefzel Kapillare Innendurchmesser 0 25 mm em 18 1121 36 Au endurchmesser 1 16 Tefzel Kapillare Innendurchmesser 0 50 mm em 18 1120 96 Au endurchmesser 1 16 Tefzel Kapillare Innendurchmesser 0 75 mm em 18 1119 74 Au endurchmesser 1 16 Teflon Kapillare Innendurchmesser 0 75 mm em 18 1112 54 Au endurchmesser 1 16 Teflon Kapillare Innendurchmesser 1 6 mm 3m 18 1121 16 Au endurchmesser 1 8 Teflon Kapillare Innendurchmesser 2 9 mm 3m 18 1112 47 Au
13. dass die maximale Druckgrenze nicht berschritten wird Die Durchflussregelung ist bei Anwendungen n tzlich bei denen ein hoher Gegendruck zu erwarten ist oder wenn der Gegendruck schwankt zum Beispiel wenn Proben mit hoher Viskosit t verwendet werden 5 5 1 _ Regelungsprinzip An der Abstimmung der Systempumpe sind zwei Regler beteiligt Der erste ist aktiv solange der Druck unter dem Sollwert liegt Dieser Regler passt die tat s chliche Durchflussgeschwindigkeit der Pumpe an die eingestellte Durchfluss geschwindigkeit an Wenn der Druck den Sollwert berschreitet vermindert ein anderer Regler die Durchflussgeschwindigkeit um den Druck zu verringern Wenn der Druck unter den Sollwert f llt passt der erste Regler wieder die tat s chliche Durchflussgeschwindigkeit an die eingestellte Durchflussgeschwindig keit an und so fort Die Regler verwenden die so genannte PID Durchflussreglung wobei P und D Parameter sind die die Abstimmungskriterien bestimmen Die standardm igen PID Werte in UNICORN liefern eine stabile Durchflussregelung die f r die meisten Zwecke geeignet ist Die Parameter k nnen jedoch f r eine spezielle Anwendung weiter optimiert werden siehe 5 5 4 Optimieren der PID Parameter 5 5 2 Aufnehmen der Durchflussregelung in eine Methode Method Wizard Die Durchflussregelung ist standardm ig nicht aktiv wenn Sie eine Methode mit dem Method Wizard erstellen Zur Aufnahme der Durchflussregelung
14. dene Men s zu w hlen aber es kann nicht dazu verwendet werden Parameter zu ver ndern e _ KeyAndDialLocked Weder eine Men auswahl noch Parameterver nde rungen k nnen durchgef hrt werden Zur Auswahl des Zugriffsmodus 1 W hlen Sie System settings in System Control und dann Specials Keyboard 2 W hlen Sie Open KeyLocked oder KeyAndDialLocked KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 4 8 Anzeigen und Ausdrucken des Ergebnisses Wenn Sie mit dem nach dem Lauf erhaltenen automatischen Ausdruck wenn ausgew hlt zufrieden sind m ssen Sie nichts ndern was in diesem Abschnitt beschrieben wird Wenn Sie jedoch das Layout des Chromatogramms ndern wollen lernen Sie in diesem Abschnitt die Grundlagen des Moduls Evaluation kennen 4 8 1 Anzeigen 1 Nach einem Lauf k nnen Sie das Ergebnis anzeigen Klicken Sie auf das Symbol UNICORN Manager F hren Sie einen Doppelklick auf das Symbol f r die Ergebnisdatei in der rechten Liste aus 2 Das Fenster Chromatogram wird automatisch im Evaluation Arbeitsbereich ge ffnet wenn Sie eine Ergebnisdatei ffnen Das Fenster Chromatogram enth lt alle Kurven Beachten Sie dass der Begriff Chromatogramm hier verwendet wird wenn wir von dem gesamten Fenster sprechen das alle verschiedenen Kurven enth lt No Peak name Retention min Area mAUtmin Height mAU 2 5 05 60 5051 236 020 2 Pesk 0 2 6 53 14 6082 3 Peak D 0 2 7 06 20 4977 4 Pe
15. e Erh hen Sie die Konzentration aller Pufferl sungen im Rezept f r den breiten Bereich Erh hen Sie die S urekonzentration um denselben Faktor wie die Pufferkonzentration Beachten Sie dass ein neues Rezept erstellt werden muss Die Ionenst rke des Starteluenten wird auch erh ht lonenst rke Pufferkomponenten mit mehreren pKa Werten liefern eine h here lonenst rke zu Beginn wenn der pH Wert bei sauren Pufferkomponenten ber dem zweiten pKa und sogar noch h her ber dem dritten pKa eingestellt wird Dies kann zu Problemen f hren wenn Sie Peaks haben die fr h im Gradienten eluieren Um dies zu verringern verwenden Sie geringe Konzentrationen oder wechseln Sie wenn m glich zu Pufferkomponenten die nur einen pKa Wert haben Beispiel Ein Rezept mit 0 1 M Citrat pKa 3 13 4 76 und 6 40 hat eine lonenst rke von ca 0 22 bei pH 6 aber nur 0 05 M bei pH 4 Verwenden Sie stattdessen eine L sung mit 0 03 M oder verwenden Sie 0 1 M MES bei pH 6 Wahl des Eluenten Um lokale St rungen des pH Wertes zu vermeiden die durch Pufferionen verursacht werden die am Ionenaustauschprozess beteiligt sind w hlen Sie einen Eluenten mit Pufferionen derselben Ladung wie die Liganden des lonenaustauschers W hlen Sie den pH Wert des Startpuffers so dass die an den lonenaustauscher zu bindenden Substanzen geladen werden z B mindestens 1 pH Einheit unter dem isoelektrischen Punkt f r Kationenaustauscher Beispiel Ein Rezept m
16. geschlossen die ebenfalls mit dem CE Symbol gekennzeichnet sind oder esist an andere in diesem Handbuch empfohlene oder beschriebene Produkte angeschlossen und wird in demselben Zustand verwendet in dem es von GE Healthcare geliefert wurde Ausgenommen davon sind die in diesem Handbuch beschriebenen nderungen Inhalt Inhalt 1 Einleitung KI Allgemeihes n uueensnuusesessunuussiuenenunsh 7 1 2 Schilde al 9 1 3 Sicherheit 10 14 Abf llentsorgung essusseiieeiusunuesssinniineant 12 1 5 _ Typografische Konventionen aeannaenneesennnnnnnnnennennennennnnnn 13 2 Installation 2 19 YSAIIGEMEINE SCH ee el 15 2 2 Voraussetzungen nessesseessenesesunssennsssenenssnnensanensennessanessensnsnnsnssnnessanensennsssane 17 2 3 Installation des KTApurifier sssr 18 24 lhstallati nstest 2 4 32 251 ESSEHLOLOKOlle re re ge ee 42 2 6 Registrationsformul r soninkai 43 3 System berblick 3 1 Trenneinheit sesen a aaka A 45 3 2 S ulen und Kapillaren ueeeen 48 3 3 UNICORN Software enneeunnsesennnsesennnnseeunnnnenennnneennnnnnenennnnenenunnenennnnennn 49 4 Betrieb 41 Inbetriebnahme des Systems uee 54 4 2 Erstellen einer Methode nnnnennennneennnnnne 55 43 _ Fraktionssammlung 60 44 Probenaufgabe uu 63 4 5 Vorbereiten des Systems f r einen Lauf 70 4 6 Starten eines LaUfs au tesiiineten alien ke 73 4 7 W hrendeines kd fssa aiieniesassen in an
17. ltnisse wie folgt 1 Subtrahieren Sie die Basislinienwerte 0 B die jeder UV Kurve entsprechen von den Werten in Spalte 2 der UV Detektions Tabelle des Testprotokolls siehe Seite 42 und tragen Sie die Ergebnisse in Spalte 3 ein 2 Berechnen Sie die Absorptionsverh ltnisse 265 nm 254 nm und 265 nm 280 nm mit Hilfe der Werte aus Spalte 3 und tragen Sie die Ergebnisse in Spalte 4 ein Die erhaltenen Ergebnisse sollten alle innerhalb der in Spalte 5 angegebenen Intervalle liegen 2 4 5 Berichtigen fehlerhafter Auswertungsergebnisse Wenn einer der ausgewerteten Werte au erhalb des festgelegten Bereichs liegt gehen Sie wie folgt vor e Wenn das System sich von der Standardkonfiguration unterscheidet werten Sie das Ergebnis manuell aus e Wenn das fehlerhafte Auswertungsergebnis fortbesteht gehen Sie wie unten angegeben vor Fehlerhafter Gradient e Der Gradient ist linear aber das Intervall ist zu klein die Mischkammer ist zu gro oder der Mischer ist fehlerhaft e St rungen k nnen durch Luft in der Pumpe den Pumpenventilen oder schlechten Dichtungen in der Pumpe verursacht werden Siehe Pump P 900 User Manual Fehlerhafter Stufengradient e Wenn alle Werte fehlerhaft sind Luft in der Pumpe oder fehlerhafte Pumpe e 5 und 95 fehlerhaft schlechte Dichtung in den Pumpen 5 fehlerhaft Pumpenmodul B 95 fehlerhaft Pumpenmodul A KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 41 42 2 I
18. r alle f r das Rezept aus gew hlten Puffersubstanzen zwischen 0 03 M und 0 2 M liegt normalerweise 0 1 M f r lonenaustauschchromatographie 5 W hlen Sie entweder Acid oder Base HCI oder NaOH aus der Pull down Liste und stellen Sie die Ausgangskonzentration ein normalerweise 0 1 M 6 W hlen Sie ein Salz aus der Pull down Liste Wenn das ben tigte Salz nicht aufgelistet ist kann ein neues Salz definiert werden siehe Abschnitt 8 5 3 unter Definieren eines neuen Salzes unten KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 153 8 Referenzinformationen 8 5 Einzelheiten zu BufferPrep 10 11 Stellen Sie die maximale Ausgangskonzentration des Salzes bei 100 B ein normalerweise 1 0 M Die maximale Endkonzentration des Salzes betr gt die H lfte der Konzentration der Ausgangsstamml sung Stellen Sie den f r die Pufferl sung ben tigten pH Bereich ein Hinweis Um einen sinnvollen pH Bereich einstellen zu k nnen muss der pKa Wert bekannt sein Klicken Sie auf die Schaltfl che Buffer substance und w hlen Sie die Pufferkomponente Die pKa Werte werden in der Liste angezeigt Normalerweise ist ein pH Bereich 0 5 Einheiten um den pKa sinnvoll Pr fen Sie die Puffertabellen um exakte Bereiche zu erhalten Um Anmerkungen zu den Rezepten hinzuzuf gen klicken Sie auf Notes und geben Sie den entsprechenden Text in das angezeigte K stchen ein Klicken Sie auf OK um den Dialog Recipe Notes zu schlie en
19. unter Curves Die Kurven werden als Result001 1_ Kurve bezeichnet wobei eine Kurve zum Beispiel UV_wavelength UV Wellenl ngel pressure Druck etc sein kann Klicken Sie auf OK unten im Fenster Chromatogram Layout Um die Kurven zu vergr ern klicken und ziehen Sie im Chromatogramm mit der linken Maustaste Ein Rechteck erscheint auf dem Bildschirm Wenn Sie die Maustaste loslassen wird der Teil innerhalb des Rechtecks vergr ert Sie k nnen den vergr erten Teil noch weiter vergr ern Um zum kompletten Chromatogramm zur ckzukehren f hren Sie einen Klick mit der rechten Maustaste aus und w hlen Undo oder Reset zoom Um zu einem Ma stab f r eine andere Kurve zu wechseln klicken Sie auf die Skala der Y axis Die Art und Farbe einer Kurve die Skalierung ihrer Y Achse und ihrer X Achse k nnen ge ndert werden KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 8 ffnen Sie erneut das Fenster Chromatogram Layout Klicken Sie auf die Registerkarten Y axis und X axis um die Ma st be f r die verschiedenen Kurven einzustellen Normalerweise werden die Ma st be der Kurven mit der automatischen Ma stabswohl festgelegt d h der Ma stab wird immer wieder an die h chsten und niedrigsten Werte f r jede Kurve angepasst 9 Um den Ma stab der Y Achse festzulegen markieren Sie eine Kurve klicken Sie auf Fixed und geben dann die Minimal und Maximalwerte f r diese Kurve ein Sie k nnen dies f r and
20. 42 Testpr tok ll ausf llen z u 2 208112 42 Registrierungsformular ausf llen 2 2 22ccceceeeenn 43 Den letzten Abschnitt des Installationsprotokolls ausf llen 31 Fotokopien aller Protokolle und Formulare im Systemlogbuch aufbewahren KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Installation 2 2 2 Voraussetzungen WARNUNG KTApurifier muss an eine geerdete Netzsteckdose angeschlossen sein e Zwei Personen sind n tig um KTApurifier auf den Arbeitstisch zu heben e Das System sollte auf einem stabilen Labortisch der eine angemessene Arbeitsfl che bietet installiert werden F r die Installation des KTApurifier wird eine Arbeitsfl che von ca 200 x 80 cm ben tigt Der Netzschalter des Systems muss immer gut zug nglich sein und der Netzstecker muss immer leicht zu trennen sein e Das Ger t ben tigt einen angemessenen freien Raum damit eine korrekte Bel ftung sichergestellt ist Blockieren Sie nicht den Lufteinlass an der Vorderseite oder die Auslasse an der R ckseite des Instruments e _ KTApurifier ben tigt eine Stromversorgung mit 100 120 220 240 V 50 60 Hz mit Sicherheitserdung e _ Ein Seitenschneider wird zum Zerschneiden der Plastikb nder empfohlen e Eine Abfallflasche e F r den Installationstest werden die folgenden L sungen ben tigt 1000 ml destilliertes Wasser zum F llen und Entl ften der Pumpe 200 ml destilliertes Wasser 2
21. 6 4 _Hardware Anforderungen Siehe Abschnitt System requirements in den mitgelieferten UNICORN User Manuals 8 6 5 Software Anforderungen Siehe Abschnitt System requirements in den mitgelieferten UNICORN User Manuals 8 6 6 _Netzwerk Anforderungen Siehe Abschnitt System requirements in den mitgelieferten UNICORN User Manuals KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 8 6 7 Materialien der KTApurifier Komponenten Die fl ssigkeitsf hrenden Materialien des KTApurifier sind nachstehend aufgelistet 4 3 S ix w w w W u 5 N z2 s 2 lels E E Ela s 5 85 3 3 3 55 u gt frag F gt VO a gt a gt cz D S O free A a a w O u oo g 28 5 E 2 3 e lt Pumpe P 900 X X X X X X X X X Monitor X X X x x UV 900 Monitor x x x x UPC 900 Durchfluss x x x x begrenzer Mischer x x x M 925 NV 907 X Anschluss x x st cke Anschl sse In Line Filter x Einlassfilter x x FFKM Perfluorkautschuk PEEKTM Polyetheretherketon PTFE Polytetrafluorethylen FEP Perfluorethylenpropylen Copolymer ETFE Ethylentetrafluorethylen CTFE Chlortrifluorethylen ECTFE Ethylenchlortrifluorethylen PP Polypropylen PVDF Polyvinylidenfluorid PE Polyethylen KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 167 8 Referenzinformationen 8 7 Chemische Best ndigkeit
22. 9 14 7 Frac 920 Innendurchmesser 0 25 mm Delay Volumen 207 8 Einstellen des Delay Volumens in UNICORN Zum ndern des Delay Volumens in UNICORN 1 W hlen Sie System Settings in System Control 2 W hlen Sie Specials und dann FracParameters 3 Geben Sie das Delay Volumen ein und klicken Sie auf OK 136 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 82 _Komponentenbeschreibung 8 2 1 Pumpe P 900 Pumpe P 900 ist die Sammelbezeichnung f r eine Pumpenfamilie P 900 ist eine Hochleistunglaborpumpe zur Anwendung berall dort wo ein genau gesteuerter Fl ssigkeits strom erforderlich ist Es handelt sich um eine Pumpe mit geringer Pulsation die mit zwei Pumpenmodulen ausgestattet ist A und B Dies erm glicht bin re Gradienten mit Hochdruckmischung Am Pumpenmodul A ist ein Drucksensor angeschlossen linkes Paar Pumpenk pfe Das Modell das im KTApurifier 100 eingebaut ist hat 100 ml Pumpenk pfe und wird in der Liste der Zubeh rteile als Pumpe P 901 bezeichnet P 901 hat einen Betriebsbereich der Durchflussgeschwindigkeit von 0 01 100 ml min sowohl im isokratischen als auch im Gradientenmodus und einen Druckbereich von 0 10 MPa 100 bar 1450 psi Das Modell das im KTApurifier 10 eingebaut ist hat mit 10 mI Pumpenk pfe und wird in der Liste der Zubeh rteile als Pumpe P 903 bezeichnet P 903 hat einen Betriebsbereich der Durchflussgeschwindigkeit von 0 001 10 ml m
23. Anschl sse fest 90 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Optionale Funktionen 5 5 Optionale Funktionen In diesem Kapitel wird beschrieben wie optionale Funktionen beim Betrieb des KTApurifier verwendet werden 5 1 Mischen von Gradienten 5 1 1 Gradienten Es gibt zwei verschiedene Techniken zum Mischen von Gradienten Bei der Standardtechnik werden zwei separate Pufferl sungen verwendet eine an jedem Pumpenmodul und die BufferPrep Technik verwendet vier L sungen zwei an jedem Pumpenmodul wobei die Pufferl sung in der Leitung mit einem Umschalt ventil vor jedem Pumpenmodul erzeugt wird Die Mindestflussgeschwindigkeit f r BufferPrep betr gt 1 0 ml min Die F rdermengen der Pumpenmodule werden zu einem Mischer geleitet Die BufferPrep Methode wird im Abschnitt 5 2 BufferPrep beschrieben 5 1 2 Mischer WARNUNG Werden gef hrliche Chemikalien verwendet sp len Sie die Mischkammer gr ndlich mit destilliertem Wasser bevor Sie sie entfernen Der Mischer wird mit einer Mischkammer der Gr e 0 6 ml geliefert Er kann mit Gradientenvolumina bis zu 5 ml bin re Gradienten verwendet werden Das empfohlene Mindestgradientenvolumen f r jede Mischkammer ist in der nachstehenden Tabelle angegeben Empfohlenes Mindestgradientenvolumen Mischkammervolumen Bin rer Gradient BufferPrep Gradient 0 6 ml 5ml 2ml 16ml 60 ml 5ml 38 ml 80 ml 12 ml 90 ml 113 ml
24. Anwendung beeintr chtigt KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 169 8 Referenzinformationen 8 7 Chemische Best ndigkeit und chemische Vertr glichkeit Chemikalie Exposition Anmerkungen lt 1 Tag bis 2 Monate Schwefels ure mittlere Vermeiden Vermeiden Konzentration Schwefels ure verd nnt OK Vermeiden PEEK und Titan werden durch langfristige Verwendung beeintr chtigt Tetrachlorethylen Vermeiden Vermeiden Silikon PP und PE sind nicht resistent Tetrahydrofuran Vermeiden Vermeiden Silikon ETFE CTFE PP und PE sind nicht resistent Toluol OK Vermeiden Druckgrenzwert f r PEEK nimmt ab Trichloressigs ure 1 OK OK Trifluoressigs ure 1 OK OK Zitronens ure OK OK o Xylol OK Vermeiden Silikon PP und PE werden durch lang p Xylol fristige Verwendung beeintr chtigt 170 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 8 8 _ Bestellinformationen Artikel Menge Code Nr Packung System KTApurifier 10 1 28 4062 64 System KTApurifier 100 1 28 4062 66 System KTApurifier UPC 10 T 28 4062 68 System KTApurifier UPC 100 1 28 4062 71 Monitor pH C 900 1 18 1107 76 Pumpe P 901 Pumpe P 901 1 18 1114 00 Dichtungssatz 100 ml einschlie lich 1 18 1113 12 4 Kolbendichtungen und 4 Sp lmembranen Kolbensatz 100 ml 1 18 1112 13 Einlassleitu
25. Beispiele und Tipps Bestellinformationen Einzelheiten Erstellen Ihrer eigenen Rezepte Feinabstimmung im K hlraum Mischen von Gradienten Strategie f r die Verwendung berblick ber die Rezepte Vorbereitung des Systems f r Was ist das BufferPrep Satz c CE Kennzeichen ira nei Chemische Best ndigkeit Computeranforderungen CU 950 D Definieren eines neuen Salzes Delay Volumen berechnen Drucken der Methodenanweisungen Durchflussbegrenzer FR 902 904 Durchflussfraktionierung Durchflussregelung Durchf hren des Installationstests KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 179 Stichwortverzeichnis 180 E Einhaltung der Sicherheitsstandards Einlasstfilter Elektrische Anschl sse Entl ften der Pumpe P 900 Entl ftungsleitung ane E R E AA Ergebnisdatei Scouting Ersatzteile Kapillaren Leitf higkeitszelle Mischer M 925 Pumpe P 901 Pumpe P 903 UV Durchflusszelle Ventil INV 907 Erstellen einer Methode Evaluation Procedures F Fehler und Ma nahmen Fehlerbehebung BufferPrep Druckkurve Leitf higkeitskurve Mischer M 925 Pumpe P 900 UPC 900 Monitor UV Kurve Fenster Run Setup Fl ssigkeitsf hrende Teile Frac 920 nstallationt sata na ie ki nl h 25 Frac 950 nstallation Pr p Modus Standardmodus Frakt
26. Fraktionierung siehe auch Abschnitt 4 3 Fraktionssammlung Gradient Reinigen nach Elution Re quilibrierung Einige der Bl cke enthalten eine Reihe von Variablen mit geeigneten Standardwerten Die Werte k nnen so ge ndert werden dass sie f r Ihre Anwendung geeignet sind Einige der Variablen sind normalerweise aus geblendet k nnen aber durch Anhaken des K stchens Show details angezeigt werden 8 Klicken Sie auf den Registerreiter Gradient um eine graphische Darstellung der Methode zu erhalten Evaluation Procedures l Method Information Start Protocol Questions Result Name Frac 350 Variables Scouting Notes Gradient BufferPrep l Columns Reference Curves Gradient Block name 0 00 Main Die L nge jedes Blockes ist unten am Graphen markiert Klicken Sie auf die x Achse um die Methode nach Zeit Volumen oder S ulenvolumen anzuzeigen 58 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 9 Klicken Sie auf den Registerreiter Start Protocol um zu entscheiden welche der Seiten des Run Setup beim Start eines Laufs angezeigt werden sollen Frac 350 Variables Scouting Notes Gradient BufferPrep Columns Reference Curves Evaluation Procedures Method Information Start Protocol Questions Result Name Checked items are displayed before method is started T HE BEREEIEENNE VVariables Scouting Text Method ViNotes Gradient BufferPrep Columns Referenc
27. H _ 7 S amp e mt amp 8 1 4 Elektrische Anschl sse WARNUNG Versuchen Sie niemals die Netzsicherung zu entfernen wenn das System mit Netzspannung versorgt wird F r den dauerhaften Schutz vor Brandgefahr ersetzen Sie Sicherungen nur durch solche der vorgegebenen Art und Leistung Daten zu den Sicherungen siehe Technische Spezifikationen Alle elektrischen Anschl sse des KTApurifier befinden sich an der R ckseite des Systems Es ist nur ein einziger Netzanschluss f r das gesamte System erforderlich Die Netzspannung f r die Komponenten im System und den Fraktionssammler wird ausgehend von der R ckseite des Systems verteilt 126 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 UniNet 1 UPC 900 Monitor na FRE Pumpe P 900 ZZZ ZIZ Fraktions sammler UniNet 1 Abschlusswiderstand Nur bei Frac 950 Frac 920 hot nur eine CU 950 Ne ESEA UniNet 1 UniNet 1 Buchse Zum Computer USB Kabel Abb 8 4 UniNet 1 Anschl sse am KTApurifier UPC Die Anschl sse am KTApurifier sind hnlich Der Computer kommuniziert ber ein USB Kabel mit der Steuereinheit CU 950 Das UniNet 1 Daten bertragungskabel l uft vom CU 950 zur R ckseite der Pumpe P 900 UniNet 1 endet am Monitor UPC 900 Monitor UV 900 mit einem Abschlusswiderstand oder falls verwendet am Fraktionssammler UniNet 2 KTApur
28. M Tris 6 0 9 0 pH AIEX Mischung 0 1 M HCI 6 0 9 0 0 0 0 0 2 5 0 4 ms cm 0 07 M Bis Tris 0 05 M Tris 0 1 M Bis Tris 0 1 M HCI 6 0 7 7 0 2 0 0 2 2 0 4 ms cm 0 1 M 1 Methyl Piperazin 0 1 M HCI 5 0 5 5 0 0 0 1 2 4 0 6 ms cm 8 6 10 3 0 1 0 2 3 3 2 8 ms cm 0 1 M Piperazin 0 1 M HCI 6 0 6 7 0 1 0 3 2 4 1 1 ms cm 9 4 10 5 0 2 0 4 3 4 2 9 ms cm 0 1 M Tris 0 1 M HCI 7 5 8 5 0 0 0 2 2 4 1 3 ms cm KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 159 8 Referenzinformationen 8 5 Einzelheiten zu BufferPrep 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 5 0 9 5 pH AIEX 5 0 95 6 0 9 0 PH CIEX 6 0 9 1 Methyl Piperazin 50 5 5 Bis Tris 6 0 7 7 Piperazin 6 6 7 Tris 7 5 8 5 1 Methyl Piperazin 8 6 cinn 10 3 Piperazin 9 4 10 5 e 3 a s e 7 s 9 o n z Daten f r vorprogrammierte CIEX Rezepte Gradient 0 0 1 0 M NaC Puffer Titrieren pH Standard Startleit f higkeit mit Bereich korrektur bei niedriger hoher 0 B 100 B pH Wert 3 0 7 5 pH CIEX 0 1 M HCI 3 0 7 5 0 001 ml min 0 2 4 2 5 7 ms cm 0 03 M Phosphat Na gt HPO 0 03 M Na Formiat 0 06 M Na Acetat 0 1 M Na Acetat 0 1 M HCI 4 0 5 7 0 0 0 1 3 2 3 8 mS cm 0 1 M Bicin 01MNaOH 7 0 9 0 0 1 0 0 0 4 1 7 ms cm 0 03 M Na3 Citrat 0 1 M HCI 2 5 6 2 0 08 0 2 4 2 3 0 mS cm 0 1 M Na Formiat 0 1 M HC
29. Phenyl FF low sub RF 17 5096 01 HiPrep 16 10 Butyl FF RF 17 5097 01 HiPrep 16 10 Octyl FF RF 17 1355 01 HiTrap Phenyl FF high sub 1 ml x 17 5193 01 HiTrap Phenyl FF high sub 5 ml RF 17 1353 01 HiTrap Phenyl FF low sub 1 ml x 17 5194 01 HiTrap Phenyl FF low sub 5 ml RF 17 1351 01 HiTrap Phenyl HP 1 ml x 17 5195 01 HiTrap Phenyl HP 5 ml RF 17 1359 01 HiTrap Octyl FF 1 ml x 17 5196 01 HiTrap Octyl FF 5 ml RF 17 1357 01 HiTrap Butyl FF 1 ml X 17 5197 01 HiTrap Butyl FF 5 ml RF 17 0978 13 HiTrap Butyl S FF 1 ml X 17 0978 14 HiTrap Butyl S FF 5 ml RF KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 145 8 Referenzinformationen 8 4 Empfohlene Kapillaren und S ulen Affinit tss ulen Code Nr Bezeichnung der S ule 0 25 0 50 17 5247 01 HisTrap HP 1 ml x 17 5248 01 HisTrap HP 5 ml RF 17 5319 01 HisTrap FF 1 ml x 17 5255 01 HisTrap FF 5 ml RF 17 5256 01 HisPrep FF 16 10 RF 11 0004 58 HisTrap FF crude 1 ml x 17 5286 01 HisTrap FF crude 5 ml RF 17 0408 01 HiTrap Chelating HP 1 ml x 17 0409 01 HiTrap Chelating HP 5 ml RF 17 0716 01 HiTrap NHS activated HP 1 ml x 17 0717 01 HiTrap NHS activated HP 5 ml RF 17 5281 01 GSTrap HP 1 ml x 17 5282 01 GSTrap HP 5 ml RF 17 5130 01 GSTrap FF 1 ml 5 Stck x 17 5131 01 GSTrap FF 5 ml RF 17 5234 01 GSTPrep FF 16 10 RF 11 0034 93 HiTrap MabSelect
30. Pr zisionsmessungen sollte die Kalibrierung mit der pH Elektrode in der Durchflusszelle bei der Durchflussgeschwindigkeit durchgef hrt werden die im Scouting Lauf verwendet wird Bereiten Sie die erforderlichen L sungen vor F r Einzelheiten zur Vorbereitung und zu den L sungen w hlen Sie View Run Setup im Method Editor und klicken Sie auf die Registerkarte BufferPrep Einlass Al Pufferstamml sung Einlass A2 HCl oder NaOH Einlass Bl H20 Einlass B2 Eluentenstamml sung KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Optionale Funktionen 5 3 F llen Sie manuell die Einlassleitung mit Stamml sung unter Verwendung der Anweisung PumpWash in UNICORN 4 Wenn die Herstellung des Gleichgewichts nicht in der Methode program miert ist stellen Sie das Gleichgewicht im System manuell ohne S ule mit dem eingestellten pH Wert her bevor Sie den Lauf starten e W hlen Sie in System Control Manual Other und klicken Sie auf BufferPrep_Recipe e W hlen Sie dasselbe Rezept wie in der Methoden aus Klicken Sie auf Execute e W hlen Sie Pump und w hlen Sie BufferPrep_pH und geben Sie denselben pH Wert wie in der Methode eigestellt ein Klicken Sie auf Execute e Stellen Sie eine Durchflussgeschwindigkeit ein und klicken Sie auf Execute 5 Klicken Sie auf die Seite Variables Verwenden Sie mindestens die quilibrierungsvolumina die in der nachstehenden Tabelle aufgelistet sind um einen stabilen PH Messwert zu erreich
31. Wellenl ngen gleichzeitig anzuzeigen indem Sie das Einstellrad einen Schritt weiter drehen nur drei Stellen KTApurifier UPC Das Hauptbedienungsmen 1 des UPC 900 Monitors zeigt die Absorptionswerte mit 6 Stellen f r die ausgew hlte Wellenl nge die Leitf higkeit als Prozentsatz des Vollausschlags und den pH Wert optional Wenn Sie das Einstellrad um eine Raste drehen wird eine alternative Darstellung der Leitf higkeit gezeigt Hautpmen 2 Diese Darstellung zeigt den pH Wert die Temperatur und den tats chlichen Leitf higkeitswert in mS cm oder uS cm zusammen mit dem Prozentanteil KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 4 7 2 Ver ndern der Parameter Ausgehend von UNICORN KTApurifier kann durch manuelle Anweisungen gesteuert werden die vom Men Manual im System Control in UNICORN ausgegeben werden Diese Anweisungen k nnen w hrend eines Laufs verwendet werden um Systemeinstellungen als Reaktion auf die erhaltenen Ergebnisse zu ndern Das Men Manual in System Control ffnet ein Dialogfenster das der Instruction box im Method Editor hnlich ist Beispiel Zum ndern der Durchflussgeschwindigkeit 1 W hlen Sie Manual Pump Der Dialog Instructions wird ge ffnet Instructions Parameters Pump Bw Pump f re radient Flowpath SystemPumpControlMode OFF C ON Bore SystemPIDParameters C Alarms amp Mon Pump washE xplorer PumpB C Frac OFF C
32. _ Entgasen Sie die Pufferl sung vor der Verwendung e Reinigen Sie die UV Durchflusszelle siehe Kapitel 4 des Monitor UPC 900 User Manual oder UV 900 User Manual 114 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 7 3 Fehlerbehebung 7 Druckkurve Fehlersymptom Unregelm iger Fluss verrauschtes Basisliniensignal unregelm ige Druckverfolgung M gliche Gr nde sind M glicher Grund Ma nahme Luftbl schen in der Pumpe oder im Durchlauf berpr fen Sie dass sich genug Eluent in den Beh ltern befindet berpr fen Sie alle Anschl sse auf Undichtigkeiten Beachten Sie die Anweisungen in Kapitel 4 im Pump P 900 User Manual Einlass oder Auslass Sperrventile funktionieren nicht korrekt Reinigen Sie die Ventile entsprechend Kapitel 4 im Pump P 900 User Manual Kolbendichtung undicht Wechseln Sie die Kolbendichtungen entsprechend den Anweisungen im Kapitel 4 im Pump P 900 User Manual aus Blockierung oder Teilblockierung des Str mungswegs Sp len Sie den Str mungsweg zur Behebung der Blockierung durch Wechseln Sie die Kapillaren aus wenn n tig Pr fen Sie den Filter in der Einlassleitung Er kann verstopfen wenn ungefilterte Pufferl sungen oder Proben eingebracht werden Siehe Anweisungen f r Durchsp lung am Ende des Laufs in Kapitel 3 im Pump P 900 User Manual 7 4 Leitf higkeitskurve Fehlersymptom Die Leitf higkeitsmessung m
33. dem Netzschalter links an der Grundplatte ein Starten des Computers Schalten Sie den Computer das Display und den Drucker gem den Anwei sungen in den Handb chern der Hersteller ein Starten der UNICORN Steuersoftware und Anmelden Starten Sie UNICORN wie im Abschnitt 3 3 UNICORN Software beschrieben Pr fen der optischen Einheit 1 berpr fen Sie dass die korrekte UV Zelle eingebaut ist UV 900 Monitor KTApurifier 10 wird mit eingebauter Zelle der Gr e 10 mm geliefert Eine Zelle der Gr e 2 mm optische Wegl nge 2 mm Innenvolumen 2 ul ist als Zubeh rteil erh ltlich Wenn aufgrund der Begrenzung des Ausgabesignals eine niedrigere Nachweisempfindlichkeit gew nscht wird sollte die Durch flusszelle der Gr e 2 mm verwendet werden KTApurifier 100 wird mit eingebauter Zelle der Gr e 2 mm geliefert Eine Zelle der Gr e 10 mm optische Wegl nge 10 mm Innenvolumen 8 yl ist als Zubeh rteil erh ltlich F r eine h here Nachweisempfindlichkeit sollte die Durchflusszelle der Gr e 10 mm verwendet werden KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 33 2 Installation 2 4 Installationstest 2 UPC 900 Monitor berpr fen Sie an der optischen Einheit dass die korrekte UV Wellenl nge eingestellt ist Falls dies nicht der Fall ist stellen Sie die Wellenl nge durch Auswahl der Position Optische Einheit der Lampe angezeigt durch einen Punkt auf dem Lampengeh use in Verbindung mit
34. dem geeigneten Filter ein der Punkt Para auf dem Lampengeh use sollte neben ee dem Symbol auf dem Filtergeh use liegen 6 eg das dem Symbol f r den gew nschten dem Filterrad Filter auf dem Filterrad entspricht Simboleaufden Ein Einrasten zeigt dass sich der Filter in Filtergeh use Position befindet Das Bild auf der rechten Seite zeigt die Einstellung der Wellenl nge 254 NM F llen der Kolbenhintersp lung der Pumpe P 900 1 Tauchen Sie die Sp lleitung in einen Glaskolben 1 mit 20 igem Ethanol in destilliertem Wasser 2 Schlie en Sie eine Spritze an die Sp lleitung an die unter dem linken Pumpen kopf 2 an Pumpe A angeschlossen ist Ziehen Sie langsam Sp ll sung in die Spritze Wenn Sp ll sung in die Spritze l uft ziehen Sie noch ein paar Milliliter mehr 3 L sen Sie die Spritze und tauchen Sie die Leitung in die Sp ll sung 1 Nun sollten sich beide Enden im Glaskolben befinden 1 Hinweis Ausf hrlichere Informationen finden Sie im User Manual der Pump P 900 Entl ften der Pumpe P 900 1 Tauchen Sie die Einlassleitung aller Pumpenmodule mit den Filtern in destilliertes Wasser Hinweis Stellen Sie niemals die Sammelflasche unter der H he des Pumpen einlasses auf 34 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Installation 2 2 Schlie en Sie eine Luer Spritze mit Au enkegel mit mindestens 30 ml an die Entl ftungsleitung an 3 Sc
35. die Funktion des Mischers Die Funktion des Mischers wird gepr ft indem ein R hrst bchen auf die Oberseite des ischergeh uses gelegt wird Das R hrst bchen sollte sich drehen wenn sich das System in Modus Run befindet Die Funktion des Mischers kann auch mittels Durchf hrung des Installationstests gepr ft werden 116 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Fehlerbehebung 7 7 5 Pumpe P 900 Fehlersymptom M glicher Grund Ma nahme Kein Text auf dem Frontdisplay Pr fen Sie ob das Netzkabel angeschlossen und der Hauptschalter auf der Position AN I steht Fl ssigkeit sickert zwischen dem b Pumpenkopf und der Seitenwand heraus Die Kolbendichtung oder die Sp lmembran ist nicht korrekt installiert oder ist abgenutzt 1 Wechseln Sie die Dichtung oder die Membran aus oder bauen Sie sie erneut ein 2 Lassen Sie sie vorsichtig einlaufen siehe Kapitel 4 im Pump P 900 User Manual Geringer Eluentstrom und Ger usche wenn sich der Kolben bewegt Bauen Sie den Pumpenzylinder auseinander und untersuchen Sie die Kolbenfeder entsprechend 4 im Pump P 900 User Manual Wechseln Sie sie aus wenn n tig Wenn die Feder korrodiert ist pr fen Sie die Kolbendichtung und die Sp lmembran Stellen Sie sicher dass die Kolben hintersp lung immer verwendet wird wenn mit w ssrigen Pufferl sungen mit hoher Salzkonzentration gearbeitet wird berpr fen Sie den Kolben auf Besch dig
36. e Leitungen und Anschl sse f r KTApurifier 100 Innendurchmesser 2 9 mm blaue Endringe Installieren des Satzes 1 Setzen Sie die zwei Umschaltventile zwischen die entsprechenden Pumpenk pfe indem Sie die Haken in die Rillen in der Pumpe einf hren Ventil A X Ventil B A2 A3 Al B2 B3 B1 2 Schlie en Sie das Kabel des Ventils A an die Buchse Valve A an der R ckseite der Pumpe an und das Kabel des Ventils B an die Buchse Valve B KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 5 Optionale Funktionen 5 W hlen Sie die f r Ihr System vorgesehenen Leitungen und Anschl sse Schlie en Sie die zwei kurzen Leitungen unter Verwendung der mitgelieferten Anschl sse und Endringe an Position A3 und B3 an siehe Abbildung Endring F oben Beachten Sie die Richtung der Endringe Schlie en Sie die vier langen Leitungen an die Position A1 A2 B1 und B2 an Einstellen des UNICORN f r BufferPrep Um die BufferPrep Funktion in UNICORN zu aktivieren m ssen die Umschalt ventile als Komponenten gew hlt werden 1 2 W hlen Sie in UNICORN Manager Administration System Setup W hlen sie im Dialog System Setup Ihr System und klicken Sie auf Edit Klicken Sie im Dialog Edit System auf Component Klicken Sie im Dialog Component auf Switch valves Klicken Sie zweimal auf OK und schlie lich auf Close 5 2 3 Strategie f r die Verwendung von BufferPrep BufferPrep sollte verwendet werden um schnell den optimalen
37. fen Sie die Kalibrierung der pH Elektrode indem Sie den pH Wert des gesammelten Eluenten mit einem separaten pH Monitor messen Wenn Sie Standardrezepte verwenden verwenden Sie die folgende Mischung um den pH Wert separat zu messen Mischen Sie mit einer 25 ml Pipette 25 ml Pufferstamml sung 25 ml der S ure und 50 ml Wasser Pr fen Sie den pH Wert mit einer bekannten pH Elektrode hoher Qualit t Die Werte sollten ungef hr wie folgt lauten 5 0 9 5 pH AIEX pH 6 5 6 0 9 0 pH AIEX pH 6 1 3 0 7 5 pH CIEX pH 3 7 Falls dies nicht der Fall ist bereiten Sie neue Pufferl sungen Wenn der pH Wert der Mischung korrekt ist Pr fen Sie ob eine pH Elektrode verschmutzt oder zerbrochen ist berpr fen Sie ob die Ventile korrekt funktionieren Wenn ein Nicht Standardrezept verwendet wird berpr fen Sie ob der pH Wert nicht zu weit vom pKa der Puffer l sungskomponenten entfernt eingestellt ist Pr fen Sie ob die Konzentration der Pufferl sungskomponenten zu niedrig ist was zu einer zu geringen Pufferungskapazit t f hrt berpr fen Sie ob die korrekten pKa Werte verwendet werden und ob alle pKa Werte eingegeben wurden pH Wert verschiebt sich Stellen Sie das Injektionsventil auf die Position WASTE Pumpen Sie mindestens 30 ml Pufferl sung mit dem eingestellten pH Wert durch um den pH Wert zu stabilisieren Stellen Sie das Injektions ventil zur ck auf die Position LOAD quilibrieren Sie die S ul
38. im Scouting Schema eine neue Spalte einf gen m chten setzen Sie den Cursor in die Spalte und klicken Sie auf Insert Eine neue Spalte mit identischen Werte erscheint direkt hinter der ausgew hlten Spalte Wiederholen Sie Schritt 6 bis Sie alle L ufe definiert haben die Sie ben tigen Falls erforderlich verwenden Sie den waagrechten Scrollbalken um mehr L ufe zu sehen Klicken Sie mit der rechten Maustaste auf Runl Run2 etc oben in der Aufstellung um f r die verschiedenen L ufe zwischen Run und Excluded umzuschalten Diejenigen die mit Excluded gekennzeichnet sind werden nicht durchgef hrt Nun haben Sie ein Scouting Schema festgelegt Um die Scouting Methode zu speichern w hlen Sie File Save Wenn die Methode gestartet wird werden automatisch alle L ufe im Schema durchgef hrt und der eingestellte Durchfluss f r jeden Lauf wird automatisch vorbereitet Jeder Lauf im Scouting Schema liefert eine separate Ergebnis datei die alle in einem speziellen Scouting Verzeichnis gespeichert werden KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Optionale Funktionen 5 5 4 Zus tzliche Systemdruckmessung Bei Niederdrucks ulen wie HiTrap und HiLoad ist es erforderlich den Vors ulen druck durch Messung des Druckes in Abwesenheit der S ule auszugleichen Dies wird durch das folgende Verfahren erreicht 1 Stellen Sie das Injektionsventil INV 907 auf die Position WASTE 2 Lassen Sie die Pumpe mit der vorgeschrie
39. in Kontakt mit den elektrischen Bauteilen kommen k nnen ist sofort das Netzkabel auszu stecken und ein zugelassener Wartungstechniker zu verst ndigen WARNUNG Werden gef hrliche Chemikalien verwendet so ist vor der Durchf hrung von Instandhaltungs und Wartungsma nahmen das gesamte System gr ndlich mit bakteriostatischer L sung z B NaOH und destilliertem Wasser durchzusp len WARNUNG Nur Ersatzteile die von GE Healthcare zugelassen sind oder geliefert werden d rfen f r die Wartung oder Instandsetzung des Systems verwendet werden VORSICHT Stellen Sie bei der Instandhaltung und bei der Durchf hrung von Wartungsarbeiten am System immer die Flaschen mit Pufferl sung auf den Labortisch um ein Auslaufen zu verhindern 6 1 2 Recycling und Entsorgung Dieses Symbol zeigt an dass elektrische und elektronische Komponenten nicht als unsortierter Hausm ll entsorgt werden d rfen sondern getrennt entsorgt werden m ssen Informationen zur Au erbetriebnahme Ihrer Ausr stung er halten Sie bei einem autorisierten Vertreter oder beim Hersteller KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 105 6 Wartung 6 1 Regelm ige Wartung 6 1 3 Wartungsplan Abstand Jeden Tag Ma nahme System e Pr fen Sie das gesamt System auf ein Auslaufen des Elutionsmittels e Das Systems kann mit Pufferl sung gef llt ber Nacht stehen gelassen werden Wenn Sie die Trenneinheit eini
40. mit den folgenden PumpWash Anweisungen 1 Tauchen Sie die Einlassleitungen in destilliertes Wasser 2 F hren Sie die folgende Anweisung durch KTApurifier KTApurifier UPC PumpWashPurifier PumpWashBasic 6 3 2 Wenn das System ein paar Tage lang nicht verwendet wird F hren Sie eine PumpWashPurifier PumpWashBasic mit destillierttem Wasser durch Wiederholen Sie das Verfahren mit bakteriostatischer L sung d h 20 igem Ethanol 6 3 3 Monatliche Reinigung Reinigen Sie das System jeden Monat oder wenn Probleme wie St rpeaks auf treten Verwenden Sie dieses Verfahren auch zum Reinigen des Str mungsweges vor Instandhaltungs oder Wartungsarbeiten 1 L sen Sie die Anschl sse der S ule und ersetzen Sie sie durch Kapillaren zur Umgehung 2 Wenn Sie eine ph Elektrode verwenden ersetzen Sie sie durch eine Dummy Elektrode 3 Tauchen Sie alle Einlassleitungen in 1 M NaOH KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Wartung 6 4 F hren Sie manuell PumpWashPurifier PumpWashBasic f r beide Einlassleitungen aus 5 Sp len Sie das gesamte System 20 Minuten lang mit 1 M NaOH 1 ml min 6 Wiederholen Sie sofort die Schritte 3 und 4 mit destilliertem Wasser um das NaOH aus dem System zu sp len 6 3 4 _Vor Ort Reinigung Nach wiederholten Trennzyklen kann sich kontaminierendes Material allm hlich im System und auf der S ule ansammeln Dieses Material wurde m glicherweise durch den oben beschriebenen
41. oberen Ecke jedes Moduls und w hlen Sie Help for um allgemeine Hilfe zur aktuellen Anweisung oder zum aktuellen Modul zu erhalten und neue Hilfethemen zu finden oder Index f r ein spezielles Thema Klicken Sie in jedem Dialog auf die Schaltfl che Help um Hilfe zur Benutzung des aktuell aktiven Dialogs zu erhalten KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 4 Betrieb In diesem Kapitel lernen Sie wie Sie KTApurifier von UNICORN aus bedienen Hinweis Zwei Versionen sind erh ltlich KTApurifier mit UV 900 Monitor f r Mehr wellenl ngen Detektion und KTApurifier UPC mit UPC 900 Monitor f r eine kombinierte Messung von UV Absorption pH Wert undLeitf higkeit Wenn die Anweisungen oder Spezifikationen f r beide Modelle hnlich sind wird nur die Bezeichnung KTApurifier verwendet Die folgenden Themen werden behandelt e Inbetriebnahme des Systems e Erstellen einer Methode e _ Vorbereiten des Systems f r einen Lauf e Durchf hren und berwachen eines Laufs e Durchf hren einfacher Ergebnisauswertungen e _ Anzeigen und Ausdrucken von Ergebnissen e _ Durchf hren einer automatischen Methodenoptimierung Scouting e Automatisches Vorbereiten von Pufferl sungen beliebiger PH Werte BufferPrep Das Kapitel enth lt auch Informationen zur Fraktionssammlung zum Betrieb in K hl umen zur Mischung von Gradienten und zur Feedback Abstimmung WARNUNG Ergreifen Sie bei der Ve
42. pH Wert f r Ihr Proteinreinigungsverfahren zu finden Verwenden Sie es wie folgt 1 Beginnen Sie mit einem Rezept das einen breiten pH Bereich abdeckt und suchen Sie in Schritten von zum Beispiel 0 5 1 pH Einheiten nach dem geeigneten pH Wert W hlen Sie den pH Wert aus der die besten Ergebnisse liefert Fahren Sie mit dem Rezept f r den breiten pH Bereich fort oder wechseln Sie zu einem Rezept mit einer einzelnen Pufferl sung innerhalb des pH Bereichs das die besten Ergebnisse geliefert hat KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 95 5 Optionale Funktionen 5 2 BufferPrep 96 5 2 4 Erstellen einer Methode f r pH Scouting 1 Erstellen Sie eine neue Methode im Method Wizard durch die Auswahl von BufferPrep auf der ersten Seite W hlen Sie auch aus welches Rezept Sie verwenden m chten und den erw nschten pH Wert Method Wizard for System UPC_10 x Main Selection Column and BufferPrep Main Selection Anion_Exchange v Column Any 7 I Flexible Flow Rates NOTE Different Flow Rates are Set on Variable Page Flow Regulation of the System Pump M BufferPrep BufferPrep Recipe 5 0 9 5 pH AIEX Global BufferPrep pH 0 14 7 Back Next gt Einer Cancel Help Set Default 5 2 5 Vorbereiten des Systems f r einen BufferPrep Lauf 1 Kalibrieren Sie den pH Monitor Siehe dazu KTApurifier Monitor pH C 900 User Manual KTApurifier UPC Monitor UPC 900 User Manual F r
43. verwendet wird muss die Durchflusszelle dennoch in einem Winkel von 30 von der Senkrechten installiert werden wobei der Auslass h her RS als der Einlass liegen muss um zu verhindern dass Luftblasen in der Zelle einge schlossen werden Die Durchflussrichtung ist auf der Durchflusszelle angegeben Durchflussrichtung KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 23 2 Installation 2 3 Installation des KTApurifier 24 Packen Sie die pH Elektrode aus Stellen Sie sicher dass sie nicht gebrochen oder trocken ist Bevor Sie die Elektrode zum ersten Mal verwenden entfernen Sie den Elektrodenverschlussdeckel und tauchen Sie den Glaskolben 30 Minuten lang in die Pufferl sung Entfernen Sie die Dummy Elektrode von Zur R ckseite der Durchflusszelle und setzen Sie sie in un den Durchflusszellenhalter en Elektrode J Ver schluss deckel Setzen Sie vorsichtig die Elektrode in die Durchflusszelle ein Ziehen Sie die Mutter von Hand an um die Elektrode zu befestigen Mutter Hinweis Wenn die Elektrode nicht voll st ndig eingesetzt ist leckt das System und ein Totvolumen entsteht im Halter Schneiden Sie eine neue Kapillare mit 90 mm Innendurchmesser 0 50 mm zu und verbinden Sie den Auslass Schrauben kopfende der Leitf higkeitsdurchflusszelle mit dem Einlass an der pH Durch flusszelle unterer Anschluss gekennzeichnet mit IN Durchfluss Durchfluss zellenhalter zelle Ver
44. w hlen Sie System Settings im Modul System Control und dann Specials W hlen Sie den PID Parameter der wiederhergestellt werden soll und klicken Sie auf Set Selected Parameter To Strategy Default Value Lassen Sie den D Parameter auf Null eingestellt d h verwenden Sie einen einfachen PI Regler Starten Sie die Pumpe bevor Sie den Regler aktivieren Eine Erh hung des Wertes P macht den Regler schneller Eine Erh hung des Wertes verringert Schwankungen KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 6 Wartung x gt gt oe Wartung 6 6 1 Regelm ige Wartung Eine regelm ige Wartung tr gt dazu bei die reibungslose Funktion Ihres KTApurifier aufrechtzuerhalten Beachten Sie die Empfehlungen in diesem Kapitel um das System in einem betriebsf higen Zustand zu halten Lassen Sie keine versch ttete Fl ssigkeit auf dem Ger t trocknen Reinigen Sie die Oberfl che regelm ig mit einem feuchten Tuch Lassen Sie das Ger t vor dem Betrieb vollst ndig trocknen F r Einzelheiten zur Durchf hrung der Wartungsarbeiten und f r den Austausch von Komponenten siehe die einzelnen User Manuals und Instructions 6 1 1 Allgemeine Sicherheitsvorkehrungen WARNUNG Bei Wartungsma nahmen muss vor dem Austausch von Systemkomponenten immer die Stromzufuhr unterbrochen werden WARNUNG Wenn die Gefahr besteht dass gro e Mengen versch tteter Fl ssigkeiten in das Geh use des Ger ts eindringen und
45. werden um die Sicherheit und die Funktion des Systems aufrechtzuerhalten Chemikalienflecken und Staub sollten entfernt werden Zum Reinigen der Oberfl che des Systems 1 Wischen Sie die Oberfl che regelm ig mit einem feuchten Tuch ab 2 _Umrlecken zu entfernen spr hen Sie das System mit 20 igem Ethanol ein und wischen Sie die Reste weg Hinweis Achten Sie darauf die Kapillaren nicht zu knicken 3 Lassen Sie das Ger t vor dem Betrieb vollst ndig trocknen KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 109 6 Wartung 6 3 Reinigen des Systemstr mungsweges 110 6 3 Reinigen des Systemstr mungsweges Das nachstehende Verfahren beschreibt wie Sie den Systemstr mungsweg reinigen k nnen Verwenden Sie eine Kapillarleitung die mit Ihrem System mitgeliefert wurde um die S ule zu umgehen Wenn die S ule im Str mungsweg bleiben muss achten Sie darauf dass der zul ssige Maximalstrom und druck f r die S ule nicht berschritten werden F r Verfahren zur Reinigung der S ule und Anweisungen zur Lagerung der S ule siehe mit der S ule gelieferte Anleitung 6 3 1 Am Ende des Tages Wenn das System am n chsten Tag mit denselben Pufferl sungen verwendet wird lassen Sie das System isokratisch mit einer geringen Durchflussgeschwin digkeit laufen ca 0 02 ml min Wenn das System am n chsten Tag mit anderen Pufferl sungen verwendet wird sp len Sie die Pumpe und das System mit destilliertem Wasser
46. 0 des Schleifenvolumens betragen Die volumetrische Genauigkeit und Pr zision entsprechen denjenigen der Spritze Die Teilf llung erm glicht es das injizierte Volumen zu ndern ohne die Schleife zu wechseln und es wird keine Probe verschwendet Die Probenschleife muss vollst ndig mit Pufferl sung gef llt werden bevor die Probe geladen werden kann Die Teilf llung wird folgenderma en durchgef hrt Hinweis Die Flussrate muss ausgeschaltet sein bevor Sie den F llvorgang beginnen 1 Stellen Sie das Injektionsventil auf die Position LOAD 2 Laden Sie die Spritze mit einer gro en Menge Pufferl sung 5 Faches des Schleifenvolumens 3 F llen Sie die Probenschleife vorsichtig mit Pufferl sung 4 Stellen Sie das Injektionsventil auf die Position INJECT bevor Sie die Spritze entfernen S ule Pumpe Hinweis Wenn die Spritze Proben entfernt wird solange spritze das Injektionsventil auf der Position LOAD Proben schleife steht kommt es zu einer Selbstentleerung und Luft tritt in die Probenschleife ein 5 Laden Sie die Spritze mit dem erforderlichen Probenvolumen Hinweis Es sollte nicht mehr Probe als die H lfte 50 eines Schleifenvolumens in die Schleife geladen werden 6 Setzen Sie die Spritze in den Injektionseinf llport am Injektionsventil ein Stellen Sie das Injektionsventil auf die Position LOAD Hinweis Laden Sie die Probe erst wenn das Ventil auf der Position LOAD steht KTApu
47. 00 ml 0 4 iges Aceton in destilliertem Wasser 100 ml 20 iges Ethanol in destilliertem Wasser KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 17 2 Installation 2 3 Installation des KTApurifier 2 3 Installation des KTApurifier Schaffen Sie eine saubere und trockene Arbeitsfl che der Gr e 200 x 80 cm die leicht zug nglich ist Folgen Sie den unten stehenden Anweisungen Schritt f r Schritt und f llen Sie dabei das Installationsprotokoll aus siehe Seite 32 Hinweis Einige Teile sind in separaten Kartons verpackt die mit dem System geliefert werden Hinweis Die Kartons enthalten Packlisten 2 3 1 Auspacken des Systems 1 Entfernen Sie den Deckel des gt Kartons und anderes Verpackungs m cia material vergleichen Sie dann den SZ Inhalt mit der beigelegten Packliste reine er berpr fen Sie auch alle beige f gten Kartons Bewahren Sie alle Kartons und Kunststoffbeutel an einem geeigneten Ort in der N he auf berpr fen Sie das System auf offensichtliche Sch den die w hrend des Transport entstanden sein k nnten Wenn Sie KTApurifier UPC auspacken fahren Sie fort mit Spezifisch f r KTApurifier UPC KTApurifier 3 18 Heben Sie den KTApurifier an den vier Trageschlaufen auf die Arbeitsfl che 2 Zwei Personen sind n tig um das System hochzuheben Stellen Sie das System noch nicht auf Legen Sie das System auf dieselbe Seite wie auf der P
48. 01 Superose 6 PC 3 2 30 x P 17 5173 01 Superose 12 10 300 GL x 17 0674 01 Superose 12 PC 3 2 30 x P 17 1408 01 HiTrap Desalting 5 ml RF 17 5087 01 HiPrep 26 10 Desalting RF 17 1139 01 HiLoad 16 60 Superdex 30 prep grade x 17 1140 01 HiLoad 26 60 Superdex 30 prep grade x 17 1068 01 HiLoad 16 60 Superdex 75 prep grade x 17 1070 01 HiLoad 26 60 Superdex 75 prep grade x 17 1069 01 HiLoad 16 60 Superdex 200 prep grade x 144 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 Code Nr Bezeichnung der S ule 0 25 0 50 17 1071 01 HiLoad 26 60 Superdex 200 prep grade x 17 1165 01 HiPrep 16 60 Sephacryl S 100 HR RF 17 1194 01 HiPrep 26 60 Sephacryl S 100 HR RF 17 1166 01 HiPrep 16 60 Sephacryl S 200 HR RF 17 1195 01 HiPrep 26 60 Sephacryl S 200 HR RF 17 1167 01 HiPrep 16 60 Sephacryl S 300 HR RF 17 1196 01 HiPrep 26 60 Sephacryl S 300 HR RF S ulen f r hydrophobe Interaktionschromatographie Code Nr Bezeichnung der S ule 0 25 0 50 17 1184 01 RESOURCE ETH 1 ml x 17 1185 01 RESOURCE ISO 1 ml x 17 1186 01 RESOURCE PHE 1 ml x 17 1187 01 RESOURCE HIC Test kit 3x1 ml x 11 0034 53 HiTrap HIC Selection Kit 6x1 ml x 17 1085 01 HiLoad 16 10 Phenyl Sepharose HP x 17 1086 01 HiLoad 26 10 Phenyl Sepharose HP x 17 5095 01 HiPrep 16 10 Phenyl FF high sub RF 17 5094 01 HiPrep 16 10
49. 1 Filter 405 nm 1 18 0625 01 Filter 436 nm 1 18 0626 01 Filter 546 nm 1 18 0627 01 Filterrad komplett 1 18 0647 01 UV 900 Monitor UV 900 Monitor komplett aber ohne 1 18 1108 35 Durchflusszellen Durchflusszelle UV 900 2 mm 1 18 1111 10 Durchflusszelle UV 900 10 mm 1 18 1111 11 Werkzeug zum L sen der Glasfasern 1 18 1111 16 pH und Leitf higkeits berwachung pH Elektrode mit Zelle und Halter runde Spitze 1 18 1134 84 pH Elektrode runde Spitze 1 18 1111 26 Dummy Elektrode runde Spitze 1 18 1111 03 Leitf higkeitszelle 1 18 1111 05 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 Artikel Menge Code Nr Packung Mischer M 925 Mischer M 925 einschlie lich ein UniNet Kabel 1 18 1118 89 Mischkammern 0 6 ml 1 18 1118 90 2ml 1 18 1118 91 5ml 1 18 1118 92 12 ml 1 18 1118 93 Ventil INV 907 Ventil INV 907 einschlie lich ein UniNet Kabel 1 18 1108 40 Einf llport Nadel und Spritzenhalter nicht eingeschlossen Injektionssatz INV 907 einschlie lich 1 18 1110 89 Einf llport 0 7 mm Nadel und Spritzenhalter Ventilsatz INV 907 einschlie lich 1 18 1109 05 Kanalplatte und Verteilerplatte Befestigungsb gel 1 18 1109 11 Probenschleifen 10 ul 1 18 1120 39 100 ul 1 18 1113 98 500 ul 1 18 1113 99 1ml 1 18 1114 01 2ml 1 18 1114 02 Kabel UniNet 0 18 m 1 18 1109 72 UniNet 0 3 m 1 18 1109 73 UniNet 0 7 m 1 18 1109 74
50. 1 HiLoad 26 60 Superdex 200 X prep grade 17 1165 01 HiPrep 16 60 Sephacryl S 100 HR X 17 1194 01 HiPrep 26 60 Sephacryl S 100 HR X 17 1166 01 HiPrep 16 60 Sephacryl S 200 HR X 17 1195 01 HiPrep 26 60 Sephacryl S 200 HR X 17 1167 01 HiPrep 16 60 Sephacryl S 300 HR X 17 1196 01 HiPrep 26 60 Sephacryl S 300 HR X KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 149 8 Referenzinformationen 8 4 Empfohlene Kapillaren und S ulen 150 S ulen f r hydrophobe Interaktionschromatographie Code Nr Bezeichnung der S ule 0 50 0 75 1 0 17 1184 01 RESOURCE ETH 1 ml x 17 1185 01 RESOURCE ISO 1 ml x 17 1186 01 RESOURCE PHE 1 ml x 17 1187 01 RESOURCE HIC Test kit 3x 1 ml x 11 0034 53 HiTrap HIC Selection Kit 6x1 ml x 17 1085 01 HiLoad 16 10 Phenyl Sepharose HP x x 17 1086 01 HiLoad 26 10 Phenyl Sepharose HP x x 17 5095 01 HiPrep 16 10 Phenyl FF high sub x 17 5094 01 HiPrep 16 10 Phenyl FF low sub x 17 5096 01 HiPrep 16 10 Butyl FF x 17 5097 01 HiPrep 16 10 Octyl FF x 17 1355 01 HiTrap Phenyl FF high sub 1 ml x 17 5193 01 HiTrap Phenyl FF high sub 5 ml RF 17 1353 01 HiTrap Phenyl FF low sub 1 ml x 17 5194 01 HiTrap Phenyl FF low sub 5 ml RF 17 1351 01 HiTrap Phenyl HP 1 ml x 17 5195 01 HiTrap Phenyl HP 5 ml RF 17 1359 01 HiTrap Octyl FF 1 ml x 17 5196 01 HiTrap Octyl FF 5 ml RF 17 1357 01 HiTrap
51. 163 01 HiTrap ANX FF high sub 5 ml x 17 5158 01 HiTrap Q XL 1 ml x 17 5159 01 HiTrap Q XL 5 ml x 17 5160 01 HiTrap SP XL 1 ml x 17 5161 01 HiTrap SP XL 5 ml x 17 5092 01 HiPrep 16 10 Q XL x 17 5093 01 HiPrep 16 10 SP XL x 17 5090 01 HiPrep 16 10 DEAE FF x 17 5091 01 HiPrep 16 10 CM FF x 17 5190 01 HiPrep 16 10 Q FF x 17 5191 01 HiPrep 16 10 ANX FF high sub x 17 5192 01 HiPrep 16 10 SP FF x 17 5181 01 SOURCE 150 4 6 100 PE x 17 5182 01 SOURCE 155 4 6 100 PE x 17 1064 01 HiLoad 16 10 Q Sepharose HP x 17 1066 01 HiLoad 26 10 Q Sepharose HP x 17 1137 01 HiLoad 16 10 SP Sepharose HP x 17 1138 01 HiLoad 26 10 SP Sepharose HP x 148 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Gr enausschlusss ulen Referenzinformationen 8 Code Nr Bezeichnung der S ule 0 50 0 75 1 0 17 5176 01 Superdex Peptide 10 300 GL x 17 5174 01 Superdex 75 HR 10 300 GL x 17 5175 01 Superdex 200 HR 10 300 GL x 17 5172 01 Superose 6 HR 10 300 GL x 17 5173 01 Superose 12 HR 10 300 GL x 17 1408 01 HiTrap Desalting 5 ml x 17 5087 01 HiPrep 26 10 Desalting x 17 1139 01 HiLoad 16 60 Superdex 30 X prep grade 17 1140 01 HiLoad 26 60 Superdex 30 X prep grade 17 1068 01 HiLoad 16 60 Superdex 75 X prep grade 17 1070 01 HiLoad 26 60 Superdex 75 X prep grade 17 1069 01 HiLoad 16 60 Superdex 200 X prep grade 17 1071 0
52. 5 mm von der Pumpe zur UV Zelle installiert und eine Tefzel Kapillare mit einem Innendurchmesser von 0 25 mm ist vom Auslass der UV Zelle bis zum Fraktionssammler wenn zutreffend installiert Die S ule wird entweder unter Verwendung der mit der S ule mitgelieferten Kapillaren oder mit St cken von PEEK Kapillare mit 0 25 mm installiert die vom Benutzer auf die geeignete L nge geschnitten wurden PEEK Kapillare mit 0 25 mm blau wird mit dem System KTApurifier 10 geliefert Kapillare L nge Innen Au en Material Farbe 10 cm durchmesser durch Volumen der Kapillare messer der Kapillare INV 907 0 25 mm 1 16 PEEK blau 4 9 ul S ule G5 40 cm 0 50 mm 1 16 PEEK orange 19 6 u Uv Frak omm ae Pek bau a9 G1 33 cm 0 50 mm 1 16 PEEK orange 19 6 u G2 33 cm 0 50 mm 1 16 PEEK orange 19 6 u G3 20 cm 0 50 mm 1 16 PEEK orange 19 6 u G4 18 cm 0 50 mm 1 16 PEEK orange 19 6 u H6 16 cm 0 50 mm 1 16 Tefzel durchsichtig 19 6 u H7 8 cm 0 50 mm 1 16 Tefzel durchsichtig 19 6 u H8 14 cm 0 50 mm 1 16 Tefzel durchsichtig 19 6 u H9 60 cm 0 50 mm 1 16 Tefzel durchsichtig 19 6 u W1 W3 100 cm 0 75 mm 1 16 Tefzel durchsichtig 44 2 u A1 B2 170 cm 1 6 mm 1 8 Teflon durchsichtig 201 1 ul A2 190 cm 16mm 1 8 Teflon durchsichtig 201 1 ul B1 150 cm 1 6 mm 1 8 Teflon durchsichtig 201 1 ul A3 B3 15 cm 1 6 mm 1 8 Teflon durchsichtig 201 1 ul
53. 65 580 410 Fax 0165 580 401 Norwegen Tel 815 65 555 Fax 815 65 666 e sterreich Tel 01 57606 1619 Fax 01 57606 1627 e Portugal Tel 21 417 7035 Fax 21 417 3184 Russland und andere GUS Staaten Tel 7 095 232 0250 956 1137 Fax 7 095 230 6377 Schweden Tel 018 612 1900 Fax 018 612 1910 e Schweiz Tel 0848 8028 12 Fax 0848 8028 13 Spanien Tel 93 594 49 50 Fax 93 594 49 55 e S dosasien Tel 60 3 8024 2080 Fax 60 3 8024 2090 USA Tel 800 526 3593 Fax 877 295 8102 imagination at work Benutzerhandbuch 28 9192 39 AB Erster Druck 04 2006
54. AB 61 4 Betrieb 4 3 Fraktionssammlung 62 Peak Fraktionierung mit festem Volumen Die Fraktionierung mit festem Volumen kann auch mit der Peak Fraktionierung w hrend der Elution kombiniert werden In diesem Fall werden feste Volumina Fraktionierungsvolumen gesammelt none rate Ail bis ein Peak erkannt wird Der Peak wird dann mit Hilfe der Parameter f r das Fraktionsvolumen Peak Peak Fraktionierungs Volumen Fraktionierungs entweder in einem oder in mehreren Fraktionsvolumina gesammelt Wenn das Peak Ende entdeckt wird wird die Fraktionierung mit festem Volumen fortgesetzt 4 3 2 Auslassventil optional Ein Auslassventil kann dazu verwendet werden den Fl ssigkeitsstrom entweder zum Abfall oder zur Fraktionierung zu leiten Zur Durchf hrung der Auslass fraktionierung w hlen Sie Outlet Valve im Dialog Elution Fractionation im Wizard e Port 1 Ventilstandardposition sollte immer an eine Abfallflasche geeigneter Gr e angeschlossen werden W3 e Ein Fraktionssammler kann mit einer Leitung G9 H9 an das Auslassventil angeschlossen werden e Die Ports 2 8 des Auslassventils k nnen auch f r die Sammlung gr erer Fraktionen verwendet werden KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 4 4 Probenaufgabe Mit dem KTApurifier kann die Probe je nach Anwendung und Probenvolumen auf verschiedene Arten aufgebracht werden Unter Verwendung von Probenschleifen die manuell mit ein
55. Aufbewahrung Die pH Elektrode enth lt eine versiegelte Ag AgCI Referenz die nicht wieder bef llt werden kann eine innere Elektrolytbr cke mit 4 M KCI ges ttigt mit Ag AgCI eine u ere Elektrolytbr cke mit 1 M KNO3 ein ringf rmiges Keramik Diaphragma und eine pH Membran mit geringem Profil Dies ist allgemein als versiegelter Doppeldiaphragma Kombinationstyp bekannt Die ph Elektrode wird mit einer schwarzen Abdichtung geliefert Hinweis Die Durchflusszelle sollte nicht mit anderen pH Elektroden verwendet werden Hinweis Verwenden Sie immer den 0 50 mm Kapillarsatz und den Durchfluss begrenzer FR 902 wenn die Durchflusszelle eingebaut wird Installation VORSICHT Verwenden Sie niemals Kapillaren mit Innendurchmesser 0 25 mm blau wenn die pH Durchflusszelle im System eingebaut ist Die Elektrode k nnte aufgrund zu hohen Gegendrucks zerbrechen Zum Einbau der pH Durchflusszelle und der pH Elektrode zwischen der Leitf higkeitszelle und dem Durchflussbegrenzer weitere Einzelheiten siehe Monitor UPC 900 Monitor pH C 900 User Manual 1 Entfernen Sie den Durchflussbegrenzer und das Anschlussst ck mit Au engewinde Au engewinde von der Leitf higkeitsdurchflusszelle 2 H ngen Sie den Durchflusszellenhalter direkt rechts der optischen Einheit ein Sichern Sie ihn mit der Befestigungsklammer Die optische Einheit muss eventuell etwas nach links verschoben werden Wenn der Durchflusszellenhalter nicht
56. Benutzer und individuelle Passw rter eingeben bevor Sie KTApurifier regelm ig nutzen Siehe UNICORN User manuals Logon x Ak Y A UNICORN logon User name default hi Password pe Cancel Help KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 49 3 System berblick 3 3 UNICORN Software 4 Schlie lich erscheint das Modul UNICORN Manager auf dem Bildschirm uncon manson n 75 2 Fe Vew Admadtraton foch Window Help 3 J BAS UPC Alfi Sogm DAS_UPCIOF 239KB Mathod File 2004 09 29 2004 09 29 Dar sk j 5 Das Modul UNICORN Manager ist das Kernst ck der UNICORN Anzeigen Es wird haupts chlich f r die Dateibearbeitung und verwaltung verwendet Von diesem Modul aus navigieren Sie durch das Steuersystem Im Fenster Methods links werden alle Methoden die Sie erstellt haben an gezeigt Eine Methode enth lt eine Reihe von Anweisungen zur Steuerung eines Laufs Im Fenster Results rechts werden alle Ergebnisdateien angezeigt Eine Ergebnisdatei ist das Ergebnis eines Laufs einschlie lich der gesamten Dokumentation d h verwendete Methode und des erzeugten Chromatogrammas 50 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB System berblick 3 3 3 2 _UNICORN Module und Schaltfl chen Im Allgemeinen besteht UNICORN aus 4 verschiedenen Modulen zu denen der UNICORN Manager geh rt Die anderen Module werden durch Symbole in der Symbolleiste dargestellt Diese Module sind e M
57. Butyl FF 1 ml x 17 5197 01 HiTrap Butyl FF 5 ml RF 17 0978 13 HiTrap Butyl S FF 1 ml x 17 0978 14 HiTrap Butyl S FF 5 ml RF Reversed Phase S ulen Code Nr Bezeichnung der S ule 0 50 0 75 1 0 17 5116 01 SOURCE 5RPC ST 4 6 150 x 17 5068 01 SOURCE 15RPC ST 4 6 100 x 17 1181 01 RESOURCE RPC 1 ml x 17 1182 01 RESOURCE RPC 3 ml x 17 0704 01 URPC C2 C18 SC 2 1 10 x P 17 5057 01 uRPC C2 C18 ST 4 6 100 xX P KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 Affinit tss ulen Code Nr Bezeichnung der S ule 0 50 0 75 1 0 17 5247 01 HisTrap HP 1 ml X 17 5248 01 HisTrap HP 5 ml X 17 5319 01 HisTrap FF 1 ml X 17 5255 01 HisTrap FF 5 ml X 17 5256 01 HisPrep FF 16 10 X 11 0004 58 HisTrap FF crude 1 ml x 17 5286 01 HisTrap FF crude 5 ml x 17 0408 01 HiTrap Chelating HP 1 ml x 17 0409 01 HiTrap Chelating HP 5 ml x 17 0716 01 HiTrap NHS activated HP 1 ml x 17 0717 01 HiTrap NHS activated HP 5 ml x 17 5281 01 GSTrap HP 1 ml X 17 5282 01 GSTrap HP 5 ml X 17 5130 01 GSTrap FF 1 ml X 17 5131 01 GSTrap FF 5 ml X 17 5234 01 GSTPrep FF 16 10 X 11 0034 93 HiTrap MabSelect SuRe 1 ml x 11 0034 94 HiTrap MabSelect SuRe 5 ml x 17 5079 01 HiTrap rProtein A FF 1 ml X 17 5080 01 HiTrap rProtein A FF 5 ml X 17 0402 01 HiTrap Protein A HP 1 ml
58. Die Optionen in den folgenden Dialogen h ngen von Ihren Entscheidungen in den vorherigen Dialogen ab Der Method Wizard deckt die am h ufigsten verwendeten Chromatographie methoden ab Hinweis Screenshots des KTApurifier UPC werden in den Beispielen gezeigt Zur Erstellung einer Methode Fe Tr 1 Klicken Sie auf das Symbol S im Modul Method Editor Der Method Wizard wird gestartet Oder W hlen Sie File New im Modul Method Editor Der Dialog New Method erscheint W hlen Sie Wizard New Method For system Use W hlen Sie EEE vis 02 Oe das System Template selection en Method notes bme o y Template F column bmo l Cancel Help Um detaillierte Hilfetexte zu erhalten klicken Sie auf Help e W hlen Sie Wizard aus den Optionen unter Use Klicken Sie auf OK e W hlen Sie welches System Sie verwenden m chten e Klicken Sie auf OK Der Method Wizard wird gestartet KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 55 4 Betrieb 4 2 Erstellen einer Methode 2 W hlen Sie eine Chromatographiemethode zum Beispiel Anion_Exchange aus der Liste Main Selection Method Wizard for System UPC_10 x Main Selection and Column Main Selection T Flexible Flow Rates NOTE Different Flow Rates are Set on Variable Page I Flow Regulation of the System Pump c Back Next gt Finish Cancel Help Set Default 3 W hlen Sie aus welche S ul
59. GE Healthcare AKTApurifier Benutzerhandbuch Wichtige Hinweise f r den Benutzer Alle Benutzer m ssen das gesamte Handbuch vollst ndig durchlesen damit die sichere Benutzung des KTApurifier gew hrleistet werden kann WARNUNG Das Warnsymbol macht auf eine Anwei A sung aufmerksam die zur Vermeidung von Verletzungen strengstens eingehalten werden muss Fahren Sie erst mit der Arbeit fort wenn Sie ganz sicher sind dass die Anweisungen eindeutig verstanden wurden und alle vorgeschriebenen Voraussetzungen erf llt sind VORSICHT Das Vorsichtzeichen signalisiert Anwei sungen oder Bedingungen die zur Ver meidung von Sch den am Produkt oder an anderen Ger ten befolgt werden m ssen Fahren Sie erst mit der Arbeit fort wenn Sie ganz sicher sind dass die Anwei sungen eindeutig verstanden wurden und alle vorgeschriebenen Voraussetzungen erf llt sind Hinweis Das Hinweiszeichen macht auf wichtige Informationen f r den problemlosen und optimalen Gebrauch des Produkts auf merksam CE Kennzeichnung Dieses Produkt erf llt alle Anforderungen der geltenden CE Richtlinien Auf Anfrage ist eine Kopie der entsprechenden Konformit tserkl rung er h ltlich Die G ltigkeit des CE Symbols und der ent sprechenden Konformit tserkl rung f r das Ger t ist von folgenden Bedingungen abh ngig das Instrument wird als unabh ngiges Ger t verwendet oder es ist an andere Ger te von GE Healthcare an
60. Gr en erh ltlich ist Volumen Max zugelassener S ulendruck Code Nr TE 50 ml 4 MPa 18 1113 82 150 ml 2 MPa 18 1023 85 Die gesamte Probe wird aufgebracht was zu einer guten Reproduzierbarkeit und einer hohen Ausbeute f hrt Die Probe wird nicht verd nnt da die Pufferl sung die die bewegliche Dichtung vorw rtsdr ckt von der Probe getrennt bleibt Die geladene Probe kann auf einmal oder in mehreren kleinen Volumina injiziert werden bis zu Portionen von 1 ml was die automatisierte Wiederholung der Probeninjektion erlaubt Der Superloop sollte manuell gef llt werden bevor die Methode gestartet wird Vorbereitung Bereiten Sie das Injektionsventil wie folgt vor und schlie en Sie den Superloop an 1 Schlie en Sie das Luer Verbin Pos 1 LOAD dungsst ck mit Innengewinde g 1 1 16 AuBengewinde an den Saul 2 7 TAS s Pumpe Port 3 des Injektionsventils an Proben 6 Oben 2 Stellen Sie sicher dass die spritze Superloop Leitung f r den Abfall an Port 4 des Injektionsventils ange Unten schlossen ist Abfall Abfall 3 Stellen Sie sicher dass der Superloop mit Fl ssigkeit gef llt ist siehe separate Superloop Instruction KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Befestigen Sie den Superloop in einem S ulenhalter so nahe am Injektionsventil wie m glich Schlie en Sie die untere Leitung an den Injektionsventilport 2 an Schlie en Sie die obere Leitung an den I
61. I 2 5 4 5 0 0 0 2 4 4 3 5 ms cm 0 1 M HEPES 01MNaOH 6 8 8 0 0 2 0 3 0 6 1 6 ms cm 0 1 M MES 01MNaOH 5 5 6 7 0 1 0 1 0 7 1 6 ms cm 0 03 M Phosphat Na HPO 0 1 M HCI 2 2 3 0 0 0 0 3 2 4 2 6 ms cm 6 4 7 4 0 0 0 3 5 0 2 6 ms cm 160 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 2 3 4 5 E 7 E 9 Io u 22 3 0 7 5 pH CIEX eA E E 7 5 Phosphat 2 2 3 0 Formiat 2 5 4 5 Citrat 2 5 6 2 Acetat 4 0 5 7 MES 5 5 6 7 Phosphat 64 74 HEPES 6 8 8 0 Bicin 7 0 9 0 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 8 6 Technische Spezifikationen F r die vollst ndigen Spezifikationen f r jede Komponente siehe die einzelnen User Manuals und Instructions Die relevanten Systemspezifikationen werden nachstehend aufgef hrt 8 6 1 Betriebsdaten Pumpe P 901 Bereich der Durchfluss geschwindigkeit 0 01 100 ml min Stufen der Durchfluss geschwindigkeit 0 01 ml min Druckbereich 0 10 MPa 100 bar 1450 psi Bereich der pH Stabilit t 1 13 1 14 lt 1 Tag Exposition Viskosit t Max 5 cP Genauigkeit der Durchfluss geschwindigkeit 2 oder 20 ul min je nachdem was gr er ist Reproduzierbarkeit der Durchflussgeschwindigkeit rsd lt 0 5 bei Durchflussgeschwindigkeit 0 5 ml min KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 161 8 Referenzinform
62. Laufs die aktuellen Werte f r die Laufparameter 00 min Base CV 0 96 mi RESOURCE_O_1_mil 0 05 min Block Start_Conditions 0 05 min Base SameAsMa n 0 05 min ColumnPosition Posion 0 05 min Wavelength 280 nm OFF OFF 0 05 min AveragingT mel V 1 28 sec min Run 1999 11 04 09 1653 Method Manual Injection FP Segmented Result c Detsult Manusl Injection FP Segmented l ros Logbook j nm Prassi sa Fnahlad 150MPaA_NONMPA Pe me i r n i Das Flow Scheme ist eine i i graphische Darstellung des Das Fenster Logbook zeigt an wann die Systemstr mungsweges Anweisungen der Methode w hrend des Laufs durchgef hrt werden 77 4 Betrieb 4 7 W hrend eines Laufs 78 4 7 W hrend eines Laufs 4 7 1 berwachen des Laufs Anzeigen des Fortschritts Der Fortschritt der verwendeten Methode kann in Einzelheiten in UNICORN an gezeigt werden und der Status bestimmter Parameter der Instrumentenmodule kann direkt auf ihrem Frontdisplays angezeigt werden Das Modul System Control in UNICORN zeigt den aktuellen Status des KTApurifier und kann bis zu vier Fenster zur berwachung der verschiedenen Aspekte des Laufs anzeigen Klicken Sie auf die Schaltfl che Customize panes in der Systemleiste oder w hlen Sie View Panes aus dem Men um auszuw hlen welche Fenster angezeigt werden sollen Run Data Das Fenster Run Data zeigt die aktuellen Werte f r ausgew hlte Laufparameter Zum Anpassen des Fensters Run Data
63. Men ebenen File Open bezieht sich also auf den Befehl Open im Men File Angaben zur Hardware wie zum Beispiel die Bezeichnungen von Tasten auf der Tastatur Tastenkombinationen Tastenfolgen Bezeichnungen von Hardkeys am Ger t und Bezeichnungen von Anschlussports sind im Text fett dargestellt KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 13 1 Einleitung 1 5 Typografische Konventionen 14 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Installation 2 2 Installation 2 1 Allgemeines KTApurifier wird vor der Auslieferung montiert und umfassend getestet Um einen sicheren Transport zu gew hrleisten wurden jedoch einige Komponenten gesichert und m ssen daher gel st werden bevor das System getestet und ver wendet werden kann Kabel Kapillaren Zubeh rteile S ulenhalter etc sind in Kartons verpackt und beigelegt In diesem Kapitel wird beschrieben wie der KTApurifier installiert wird Es ist in zwei Teile aufgeteilt Ein Teil beschreibt die Installation der andere beschreibt wie der Installationstest durchgef hrt wird Wenn der Installationsvorgang durchge f hrt wurde ist Ihr KTApurifier bereit f r Reinigungsarbeiten Hinweis Zwei Versionen sind erh ltlich KTApurifier mit UV 900 Monitor f r Mehrwellenl ngen Detektion und KTApurifier UPC mit UPC 900 Monitor f r eine kombinierte Messung von UV Absorption pH Wert und Leitf higkeit Wenn die Anweisungen oder Spezifikationen f r beide Mode
64. ON Close C Other _Cose EEE I Auto update If this is checked the parameter fields will be updated during method run 2 W hlen Sie Pump und dann Flow 3 Geben Sie unter Parameters eine neue Durchflussgeschwindigkeit ein und klicken Sie dann auf Execute Die neue Durchflussgeschwindigkeit wird bis zum Ende des Laufs verwendet oder bis eine neue Anweisung zur Durch flussgeschwindigkeit in der Methode erreicht wird 4 Schlie en Sie das K stchen durch Klicken auf Close Alle manuellen Eingriffe werden im Logbook gespeichert Einige Anweisungen zum Beispiel Anweisungen zu Gradienten oder Fraktionen k nnen etwas Zeit ben tigen bis sie abgeschlossen sind Um den Lauf anzuhalten bevor er abgeschlossen ist klicken Sie auf die Schaltfl che End oben Run Continue End 45 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 81 4 Betrieb 4 7 W hrend eines Laufs 82 Ausgehend von den Modulen Manuelle nderungen k nnen auch an der Pumpe und an den UV Monitoren mit dem W hlrad durchgef hrt werden Manuelle nderungen in UNICORN oder an den Modulen sind gleichbedeutend Manuelle Eingriffe werden normalerweise im Logbook gespeichert Drei verschie dene Zugriffsmodi f r das W hlrad an den Modulen k nnen eingestellt werden e Open Das W hlrad am Modul kann f r manuelle nderungen verwendet werden e _ KeyLocked Das W hlrad am Modul kann verwendet werden um verschie
65. Prep alle pKa Werte f r die Pufferkomponente wissen muss verwenden Sie keine Zwitterionen Pufferkomponente wenn die pKa Werte nicht bekannt sind Zweitens ist es wichtig zu wissen in welcher Form die Komponente vorliegt d h ob das Molek l acide Protonen enth lt Beispiel Diese Beispiele k nnen als Muster f r Zwitterionen verwendet werden Bicin pKal 1 84 pKa2 8 33 dpKa1 dT Wert unbekannt f gen Sie 0 ein dpKa2 dT 0 017 Anzahl der aciden Protonen 1 Ladung des depronierten lons 1 HEPES pKal 3 pKa 7 39 dpKa1 dT Wert unbekannt f gen Sie 0 ein dpKa2 dT 0 014 Anzahl der aciden Protonen 1 Ladung des depronierten lons 1 158 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB K hlraum Referenzinformationen 8 Wenn die Werte dpKa dT korrekt sind kann BufferPrep ohne Probleme im K hlraum verwendet werden Verwenden Sie die folgenden Korrekturfaktoren um die AIEX und CIEX Rezepte fein abzustimmen AIEX bei 5 C 0 B 0 10 100 B 0 00 CIEX bei 5 C 0 B 0 00 100 B 0 40 8 5 6 berblick ber die Rezepte Daten der vorprogrammierten AIEX Rezepte Gradient 0 0 1 0 M NaCl Puffer Titrieren pH Standard Startleitf higkeit mit Bereich korrektur bei niedriger hoher 0 B 100 B pH Wert 5 0 9 5 pH AIEX Mischung 0 1 M HCI 5 0 9 5 0 0 0 0 3 2 0 8 ms cm 0 05 M 1 Methyl Piperazin 0 05 M Bis Tris 0 025
66. RF 17 5158 01 HiTrap Q XL 1 ml X 17 5159 01 HiTrap Q XL 5 ml RF 17 5160 01 HiTrap SP XL 1 ml X 17 5161 01 HiTrap SP XL 5 ml RF 17 5092 01 HiPrep 16 10 Q XL RF 17 5093 01 HiPrep 16 10 SP XL RF 17 5090 01 HiPrep 16 10 DEAE FF RF 17 5091 01 HiPrep 16 10 CM FF RF 17 5190 01 HiPrep 16 10 Q FF RF 17 5191 01 HiPrep 16 10 ANX FF high sub RF KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 143 8 Referenzinformationen 8 4 Empfohlene Kapillaren und S ulen Code Nr Bezeichnung der S ule 0 25 0 50 17 5192 01 HiPrep 16 10 SP FF RF 17 1064 01 HiLoad 16 10 Q Sepharose HP x 17 1066 01 HiLoad 26 10 Q Sepharose HP x 17 1137 01 HiLoad 16 10 SP Sepharose HP x 17 1138 01 HiLoad 26 10 SP Sepharose HP x Reversed Phase S ulen Code Nr Bezeichnung der S ule 0 25 0 50 17 5068 01 SOURCE 15RPC ST 4 6 100 x 17 5116 01 SOURCE 5RPC ST 4 6 150 x 17 1181 01 RESOURCE RPC 1 ml RF x 17 1182 01 RESOURCE RPC 3 ml RF x 17 0704 01 uRPC C2 C18 SC 2 1 10 X P 17 5057 01 uRPC C2 C18 ST 4 6 100 xX P Gr enausschlusss ulen Code Nr Bezeichnung der S ule 0 25 0 50 17 1458 01 Superdex Peptide PC 3 2 30 XP 17 5176 01 Superdex Peptide 10 300 GL x 17 0771 01 Superdex 75 PC 3 2 30 xX P 17 5174 01 Superdex 75 10 300 GL X 17 1089 01 Superdex 200 PC 3 2 30 X P 17 5175 01 Superdex 200 10 300 GL X 17 5172 01 Superose 6 10 300 GL X 17 0673
67. Reinigungsschritt nicht entfernt Die Art und der Grad der Kontamination h ngen von der Probe und den angewandten Chroma tographiebedingungen ab Dies sollte bei der Gestaltung eines Reinigungsvor gangs ber cksichtigt werden 6 4 Kalibrierungsverfahren Die nachfolgende Tabelle zeigt die Arten und die H ufigkeit der Kalibrierungen die am KTApurifier durchgef hrt werden k nnen F r Beschreibungen zur Durchf hrung dieser Kalibrierungen siehe UNICORN User Manuals und die User Manuals und Instructions der einzelnen Komponenten Die Kalibrierung wird in UNICORN durch Auswahl von System Calibrate in System Control durchgef hrt Komponente H ufigkeit Leitf higkeitszelle Zellkonstante Nur erforderlich wenn eine bestimmte Leitf higkeit mit hoher Genauigkeit gemessen wird Cond_Calib Temperatur Muss beim Auswechseln der Leitf higkeitszelle Temp durchgef hrt werden Eingeben einer neuen Muss beim Auswechseln der Leitf higkeitszelle Zell konstante Cond_Cell durchgef hrt werden Druckanzeige Einmal im Jahr oder wenn erforderlich pH Elektrode optional Jeden Tag KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 111 6 Wartung 6 5 Transportieren des Systems 112 6 5 _Transportieren des Systems KTApurifier Zwei Personen sind n tig um das System hochzuheben KTApurifier UPC Zwei Personen sind empfehlenswert um das System hochzuheben VORSICHT Heben Sie das System nie
68. Sie dass der Abfallbeh lter nicht voll ist und noch Platz f r das entsprechende im Lauf anfallende Volumen bietet 4 berpr fen Sie dass die Pumpe entl ftet wurde d h keine Luft in der Einlassleitung Falls dies nicht der Fall ist entl ften Sie die Pumpe mit einer Spritze wie in 2 4 1 Vorbereiten des KTApurifier oder im Kapitel 2 im Pump P 900 User Manual beschrieben KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 73 4 Betrieb 4 6 Starten eines Laufs berpr fen Sie dass die korrekte S ule installiert und quilibriert wurde wenn nicht in der Methode eingeschlossen berpr fen Sie dass der korrekte Maximaldruck f r die ausgew hlte S ule eingestellt ist berpr fen Sie dass die korrekte Mischkammer und die korrekten Kapillaren f r die ausgew hlte Methode installiert wurden Pr fen Sie dass der Fraktionssammler optional mit einer ausreichenden Anzahl an R hrchen versehen ist und an den Durchflussbegrenzer ange schlossen ist 4 6 2 Einstellen und Starten der Methode 74 Hinweis Screenshots des KTApurifier UPC werden in den Beispielen unten gezeigt Klicken Sie auf das Symbol System Control W hlen Sie File Run W hlen Sie die zu startende Methode Klicken Sie auf OK die Methode startet noch nicht Die Methode wird auf einer Reihe von Seiten in Run Setup in System Control initiiert Hinweis Nur die Seiten die im Start Protocol f r die Methode eingestellt wurden er
69. Sie auf OK Geben Sie die Ladung des Anions bei Charge of the Anion ein Beispiel f r CI geben Sie 1 ein f r SO geben Sie 2 ein Geben Sie die Ladung des Kations unter Charge of the Cation ein Beispiel f r Na geben Sie 1 ein f r Mg geben Sie 2 ein Klicken Sie auf OK um die neuen Salze zur Liste der verf gbaren Salze hinzuzuf gen KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 155 8 Referenzinformationen 8 5 Einzelheiten zu BufferPrep 8 5 4 _Korrekturfaktoren Um eine h here pH Genauigkeit zu erreichen kann das Rezept bei der zu verwendenden Durchflussgeschwindigkeit um einen spezifischen pH Wert herum fein abgestimmt werden Wenn Sie das Scouting f r einen breiten pH Bereich durchf hren ist die Feinabstimmung weniger n tzlich F hren Sie BufferPrep manuell bei O und 100 B wie folgt aus 1 W hlen Sie im Men System Control Manual die Option Other aus W hlen Sie im Dialog Other instructions die Option BufferPrep Recipe W hlen Sie das Rezept in der Liste Recipe Name Klicken Sie auf Execute W hlen Sie Pump um zum Dialog Pump instructions zu gelangen W hlen Sie Flow W hlen Sie FlowRate Klicken Sie auf Execute 2 Starten Sie einen Lauf manuell bei 0 B Stellen Sie sicher dass das Puffer ventil optional auf den entsprechenden Einlass A11 A18 eingestellt ist 3 Pr fen Sie den pH Messwert wenn er stabil ist 4 Wechseln Sie zu 100 B durch Einstellung der Anweisung Gradient i
70. Sie sicher dass die korrekte Schleife oder der korrekte Superloop zwischen den Ports 2 und 6 am Injektionsventil angeschlossen ist 2 Schlie en Sie einen Injektionseinf llport oder ein Luer Verbindungsst ck mit Innengewinde 1 16 Au engewinde an den Port 3 des Injektionsventils an 3 Bringen Sie die Probe manuell mit einer Spritze ein Weitere Informationen zum F llen der Schleifen finden Sie im Abschnitt 4 4 Probenaufgabe Bei der Verwendung eines Fraktionssammlers 1 Pr fen Sie dass die Kapillare aus dem Durchflussbegrenzer an den Fraktionssammler angeschlossen ist 2 F hren Sie die Abfallleitung vom Fraktionssammler in eine leere Abfallflasche 3 Setzen Sie eine ausreichende Anzahl von R hrchen in den Fraktionssammler ein Hinweis Das Delay Volumen UV Zelle zum Auslass des Fraktionssammlers wird nicht bei der Auslieferung des Systems eingestellt da es von der L nge Ihrer Auslassleitung abh ngt Zum Einstellen des Delay Volumens in UNICORN siehe Abschnitt 8 1 6 Einstellen des Delay Volumens 4 6 Starten eines Laufs 4 6 1 Letzte Pr fungen Vor dem Starten einer Methode empfehlen wir die Durchf hrung einer Reihe von Tests um sicherzustellen dass nach dem Start des Laufs keine Probleme auftreten 1 berpr fen Sie ob die Einlassleitungen in die korrekten Flaschen f r die ausgew hlte Methode getaucht sind 2 berpr fen Sie ob eine ausreichende Menge an Eluent verf gbar ist 3 berpr fen
71. Tefzel durchsichtig 44 2 u 134 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 8 1 6 Einstellen des Delay Volumens Das Delay Volumen ist das gesamte Volumen der Kapillare und Komponenten zwischen der UV Zelle und dem Auslass des Fraktionssammlers Dieses Volumen wird in UNICORN verwendet um die UV Peak Erkennung mit dem Fraktions sammler zu synchronisieren Hinweis Das Delay Volumen wird nicht bei der Auslieferung des Systems ein gestellt da es von der L nge der Auslasskapillare abh ngt Wenn die Installation beendet ist sollte das Delay Volumen berechnet und dann in UNICORN eingestellt werden Wenn die Systemkonfiguration nach der UV Zelle ge ndert wurde zum Beispiel durch Austausch einer Komponente oder einer Kapillare kann sich auch das Delay Volumen ndern Das neue Delay Volumen muss dann berechnet und in UNICORN eingestellt werden Berechnen des Delay Volumens Berechnen Sie den Beitrag jeder Komponente und jeder Kapillare von der UV Zelle bis zum Auslass des Fraktionssammlers In der nachstehenden Tabelle sind die theoretischen Volumina einer Reihe von Komponenten und Kapillaren aufgelistet Komponente Kapillare Volumen pl Ventil PV 908 7 Ventil IV 908 27 Ventil FV 903 113 Leitf higkeitszelle 24 pH Durchflusszelle 100 Akkumulator Frac 950 40 Anschlussst ck 1 16 Au engewinde 1 16 1 8 Au engewinde 0 25 mm Innendurch
72. X 17 0403 01 HiTrap Protein A HP 5 ml X 17 0404 01 HiTrap Protein G HP 1 ml X 17 0405 01 HiTrap Protein G HP 5 ml X 17 0406 01 HiTrap Heparin HP 1 ml X 17 0407 01 HiTrap Heparin HP 5 ml RF 17 5189 01 HiPrep 16 10 Heparin FF x 17 0412 01 HiTrap Blue HP 1 ml x 17 0413 01 HiTrap Blue HP 5 ml RF 17 5110 01 HiTrap IgM Purification HP 1 ml x 17 5111 01 HiTrap IgY Purification HP 5 ml x 17 5112 01 HiTrap Streptavidin HP 1 ml x KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 151 8 Referenzinformationen 8 4 Empfohlene Kapillaren und S ulen 152 Code Nr Bezeichnung der S ule 0 50 0 75 1 0 17 5143 01 HiTrap Benzamidine FF high sub 1 ml x 17 5144 01 HiTrap Benzamidine FF high sub 5 ml RF S ulen f r Chromatofokussierung Code Nr Bezeichnung der S ule 0 25 0 75 1 0 17 5171 01 Mono P 5 200 GL x 17 5170 01 Mono P 5 50 GL x 8 4 3 Ausw hlen von Kapillars tzen f r andere S ulen W hlen Sie die Kapillars tze wie unten beschrieben f r die S ulen die in den Tabellen in 8 4 unter Empfohlene Kapillaren und S ulen nicht aufgef hrt sind Hinweis Stellen Sie sicher dass die S ule selbst sauber ist und keinen zu hohen r N UN gt Gegendruck erzeugt bevor Sie damit beginnen das nachstehend beschriebene Verfahren durchzuf hren W hlen Sie View Run Setup im Method Editor f r die Methode die ver wendet w
73. aaa 78 4 8 Anzeigen und Ausdrucken des Ergebnisses uuuune 83 49 Abschluss eines Laufs und Lagerung e 89 4 10 Betrieb im K hlraum eeeeeeeeeeeneeeneneeeeeeeeeneeneeee 89 5 Optionale Funktionen 5 1 Mischen von Gradienten uussssssssssessesssssessennensennneesenneennnnnnnnne 91 5 2 BUTERPrEB SSsnee nea AENA 92 5 3 Scouting 99 5 4 Zus tzliche Systemdruckmessung ue 101 5 5 B rchflussregeling a naa 102 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB vV Inhalt 6 Wartung 6 1 Regelm ige Wartung uuuaeeneennnnnnsesnseeennnnnnnnnnne 105 6 2 _ Reinigen der Oberfl che des Systems n 109 6 3 Reinigen des Systemstr mungswege amp s naannnanannaeenenennnnnnn 110 6 4 Kalibrierungsverfahren neeneee 111 6 5 Transportieren des Systems een 112 7 Fehlerbehebung 7 1 Fehler und Ma nahmen aeeeeeennnnnaeeeeennnnnneeennnnnnnnnennnnn 113 7 2 KU SS 87 aa aa SEEN RIENON NER RUE PRESENT 114 7 3 Drekkur Tanini e N e eaa 115 742 Leitf higkeitsk fve ass nisesessnneseeine 115 7 5 Pumpe P 900 eat E 117 7 6 UV 900 Monitor aasnsasenneesensennsnnnennennnennennnnnnannnnnnnnnnnnnennennnannennennnnnnen 118 7 7 UPC 900 Monitor asseneesennennsennennnnnnennnnnnenennnnnnenennnnnennn 118 7 8 Mischer M 92 5 u ae a N nn ia 119 7 9 Ventil INV 907 7 10 2BUufferPrep anne el 8 Referenzinformationen 8 1 Systemb schrebung enisinia 8 2 Komponentenbeschreibung ueee
74. abe arm NC Hinweis Verwenden Sie Kapillaren mit demselben Innendurchmesser wie G5 f r den Anschluss an n pei m PaA IN und NC Ports egrenzer HN 4 Schlie en Sie eine Kapillare vom NC normalerweise geschlossen Port am Fraktionsventil zum Abgabearm am Frac 920 an Befolgen Sie die Anwei sungen im Frac 920 User Manual 5 Schlie en Sie eine Kapillare W3 vom NO normalerweise ge ffnet Port am Fraktionsventil zum Abfallbeh lter an 6 Setzen Sie das Ventil in das Loch hinter der Schale 7 Verbinden Sie die Abfallleitung W3 vom Frac 920 34 mit einer geeigneten Abfallflasche 8 Stellen Sie das Delay Volumen in UNCORN ein siehe Abschnitt 8 1 6 Abfallleitung Einstellen des Delay Volumens 26 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Installation 2 2 3 7 Installieren des Fraktionssammlers Frac 950 optional 1 Standardmodus Pr p Modus Der Frac 950 kann sowohl f r Reinigungen im kleinen Ma stab Standardmodus als auch im pr parativen Ma stab Pr p Modus mit dem KTApurifier verwendet werden Bis zu 392 Fraktionen k nnen auf Zeit oder Volumenbasis als Fraktionie rung mit festem Volumen und oder Peak Erkennung gesammelt werden Als Fraktionierungsreihenfolge kann m anderf rmig nach Reihe Reihe f r Reihe m anderf rmig nach Spalte oder Spalte f r Spalte gew hlt werden F r den Standardmodus sind vier Gr e
75. al Angeschlossen Umgehung zwischen Leitf und char p ian nnnnnnnnunn Durchfluss Durchfluss Mischer begrenzer begrenzer Injektions ventil V1 W3 Fraktionssammler optional U Abb 8 7 Str mungsdiagramm KTApurifier UPC Die Kapillare G5 wird im Werk als Ersatz f r die S ule installiert Sie wird als Umgehung verwendet wenn die S ule von der Trenneinheit entfernt wird z B bei der Systemreinigung Bitte beachten Sie dass f r das System zwei Durchflussbegrenzer erh ltlich sind e FR 902 Im Werk installiert und auf einen Gegendruck von 0 2 MPa voreingestellt Dieser Durchflussbegrenzer wird verwendet wenn eine pH Zelle optional im System eingebaut ist oder wenn eine Niederdrucks ule wie HiLoad oder HiTrap verwendet werden soll e FR 904 Auf einen Gegendruck von 0 4 MPa voreingestellt Dieser Durchfluss begrenzer wird verwendet wenn mit organischen L sungsmitteln gearbeitet wird wie zum Beispiel bei RPC Anwendungen um die Bildung von Luftblasen in der Durchflusszelle zu verhindern Die nachstehende Tabelle zeigt die Abmessungen der Kapillaren die im Werk eingebaut wurden und ihre Lage im System KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 KTApurifier 10 Die nachstehende Tabelle zeigt die Kapillaren die f r KTApurifier 10 erh ltlich sind und ihre Lage im System Bei Lieferung ist eine PEEK Kapillare mit einem Innendurchmesser von 0
76. alette L sen Sie die zwei roten B nder mit den Trageschlaufen Lassen Sie die B nder auf der Kunststoffabdeckung kleben Ziehen Sie die Kunststoffabdeckung 3 zur ck um die drehbare Plattform 4 freizulegen und stellen Sie das System auf KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Installation 2 Spezifisch f r KTApurifier UPC 3 Stellen Sie das System auf der Palette auf 4 Heben Sie den KTApurifier UPC auf die Arbeitsfl che benutzen Sie dazu den Griff an der Oberseite vorne und die Aussparung unter der Montageplatte an der Oberseite hinten Hinweis Zwei Personen sind n tig um das System hochzuheben 5 Schneiden Sie das Band an der Vorderseite durch und entfernen Sie den Griff und weiteres Verpackungsmaterial Hinweis Achten Sie darauf die Kapillaren nicht zu besch digen 6 Ziehen sie Kunststoffabdeckung ab um das System freizulegen 7 Bewahren Sie das gesamte Original Verpackungsmaterial auf Wenn das Ger t aus irgendeinem Grund zum Transport oder f r einen anderen Zweck wieder verpackt werden muss ist es wichtig dass das System mit dem Original Verpackungsmaterial sicher verpackt werden kann 2 3 2 Auspacken der fl ssigkeitsf hrenden Komponenten Drehen Sie das System um auf die Seite der Fl ssigkeitskomponenten des Systems zugreifen zu k nnen 2 L sen Sie die folgenden Teile indem Sie die B nder durchschneiden und das rote Klebeband entfernen Entfernen Sie auch di
77. ann verwendet werden wenn Durchfluss lt 5 ml min 0 sollte verwendet werden wenn Durchfluss gt 30 ml min lonenaustauschers ulen Code Nr Bezeichnung der S ule 0 50 0 75 1 0 17 5166 01 Mono Q 5 50 GL x 17 5167 01 Mono Q 10 100 GL x 17 5168 01 Mono S 5 50 GL x 17 5169 01 Mono S 10 100 GL x 17 1177 01 RESOURCE Q 1 ml x 17 1179 01 RESOURCE Q 6 ml x 0 17 1178 01 RESOURCES 1 ml x 17 1180 01 RESOURCE S 6 ml x 0 11 0013 02 HiTrap Capto Q 1 ml x 11 0013 03 HiTrap Capto Q 5 ml X 11 0032 73 HiTrap Capto MMC 1 ml x 11 0032 75 HiTrap Capto MMC 5 ml x 17 1153 01 HiTrapQ HP 1 ml x 17 1154 01 HiTrap Q HP 5 ml x KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 147 8 Referenzinformationen 8 4 Empfohlene Kapillaren und S ulen Code Nr Bezeichnung der S ule 0 50 0 75 1 0 17 1151 01 HiTrap SP HP 1 ml X 17 1152 01 HiTrap SP HP 5 ml X 17 6002 33 HiTrap IEX Selection Kit 7 x 1 ml x 17 5053 01 HiTrap Q FF 1 ml X 17 5156 01 HiTrap Q FF 5 ml X 17 5054 01 HiTrap SP FF 1 ml X 17 5157 01 HiTrap SP FF 5 ml x 17 5055 01 HiTrap DEAE FF 1 ml x 17 5154 01 HiTrap DEAE FF 5 ml x 17 5056 01 HiTrap CM FF 1 ml x 17 5155 01 HiTrap CM FF 5 ml x 17 5162 01 HiTrap ANX FF high sub 1 ml x 17 5
78. ardtechnik werden zwei separate Pufferl sungen verwendet eine an jedem Pumpenmodul und die BufferPrep Technik verwendet vier L sungen zwei an jedem Pumpenmodul wobei die Puffermischung in der Leitung mit einem Umschalt ventil vor jedem Pumpenmodul erzeugt wird Die Mindestflussgeschwindigkeit f r BufferPrep betr gt 1 0 ml min Die F rdermengen der Pumpenmodule werden zu einem Mischer geleitet Die BufferPrep Methode wird im Abschnitt 5 2 BufferPrep beschrieben Hinweis Damit die BufferPrep Funktion genutzt werden kann muss der BufferPrep Satz einschlie lich zweier Umschaltventile an der Pumpe installiert werden siehe Abschnitt 5 2 2 Installieren des BufferPrep Satzes 4 5 Vorbereiten des Systems f r einen Lauf 4 5 1 Systemanschluss 1 Klicken Sie auf die Schaltfl che 1 System Control in der Taskleiste am unteren Ende des Monitors 2 Wenn im Feld Connection im Fenster Run Data YES angezeigt wird ist UNICORN mit einem System verbunden Pr fen Sie dass es sich um das korrekte System handelt Der Name des Systems wird in der Titelleiste des Fensters angezeigt Connection Wenn es sich um das korrekte System handelt gehen Sie zu 4 5 2 Vorbereiten der Str mungswegkomponenten re Wenn das falsche System angeschlossen ist oder wenn das Feld Connection NO 3 NO anzeigt w hlen Sie System Disconnect und klicken Sie dann auf OK 4 W hlen Sie System Connect Das Dialogfenster System Connect erschein
79. arit t lt 2 Abweichung bis zu 2 AU bei 260 nm mit Uracil bei pH 2 Rauschen bei 230 nm lt 6x10 AU mit 10 mm Zelle H O bei 1 ml min Drift1 bei 254 nm lt 2x10 AU h Durchflusszelle Max Durchfluss geschwindigkeit Max Druck 100 ml min 2 MPa 20 bar 290 psi 1 Typische Werte bei Raumtemperatur nach Warmlaufen UPC 900 Monitor UV Messung Absorptionsbereich 0 01 5 0 AU Vollausschlag Bereich der automatischen Nullpunkteinstellung 0 2 2 0 AU Anpassung der Basislinie 0 100 des Vollausschlags anpassbar Wellenl ngen Hg Lampe fest angebracht durch Filterwechsel 254 und 280 nm 313 365 405 436 und 546 nm Zn Lampe Option 214 nm UV Durchflusszelle 2 mm Durchflussgeschwindigkeit 0 100 ml min ax Druck 4 0 MPa 40 bar 580 psi ax Gegendruck 0 05 MPa bei 100 ml min Temperaturbereich der Fl ssigkeit 4 bis 60 C L nge des Strahlengangs 2 mMm KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 163 8 Referenzinformationen 8 6 Technische Spezifikationen 164 Zellenvolumen 2 ul 30 ul Detektorvolumen UV Durchflusszelle 5 mm Durchflussgeschwindigkeit 0 20 ml min Max Druck 4 0 MPa 40 bar 580 psi Max Gegendruck 0 02 MPa bei 20 ml min L nge des Strahlengangs 5 mm Zellenvolumen 6 ul 10 ul Detektorvolumen Leitf higkeitseinhei
80. ationen 8 6 Technische Spezifikationen Gradientenzusammensetzung Genauigkeit Reproduzierbarkeit 1 bei 0 5 100 ml min rsd lt 0 25 bei Durchflussgeschwindigkeit lt 0 5 100 ml min Innenvolumen Hubvolumen Gesamtvolumen 286 pl 1850 ul Pumpe P 903 Bereich der Durchfluss geschwindigkeit Stufen der Durchfluss geschwindigkeit 0 001 10 ml min 0 001 ml min Druckbereich 0 25 MPa 250 bar 3625 psi Bereich der pH Stabilit t 1 13 1 14 lt 1 Tag Exposition Viskosit t Max 5 cP Genauigkeit der Durchflussg eschwindigkeit 2 oder 2 ul min je nachdem was gr er ist bei aktiviertem Kompressionsausgleich Reproduzierbarkeit der Durchflussgeschwindigkeit rsd lt 0 5 bei Durchflussgeschwindigkeit 0 05 ml min Gradientenzusammensetzung Genauigkeit Reproduzierbarkeit 1 bei 0 05 10 ml min rsd lt 0 25 bei Durchflussgeschwindigkeit lt 0 05 10 ml min Innenvolumen Hubvolumen Gesamtvolumen 35 6 ul 556 yl UV 900 Monitor Wellenl ngenbereich 190 700 nm in Schritten von of 1 nm 3 Wellenl ngen gleichzeitig Bandbreite 4 nm Genauigkeit der Wellenl ngen 2 nm Reproduzierbarkeit der 0 01 nm Wellenl ngen Umschaltzeit zwischen Wellenl ngen lt 500 ms ein Zyklus von 214 nm auf 254 nm und zur ck auf 214 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 Line
81. auch gegen Kapillaren mit einem Innendurchmesser von 0 50 mm ausgetauscht werden wenn eine pH Elektrode optional verwendet wird Hinweis Verwenden Sie nur maximal 80 Acetonitril Eluent bei Dr cken ber 10 MPa Sonst wird die Lebensdauer der Kapillaren verk rzt 3 2 2 Kapillaren f r KTApurifier 100 Bei Lieferung ist das System von der Pumpe bis zur Leitf higkeitszelle mit Kapillaren mit einem Innendurchmesser von 0 75 mm PEEK gr n ausgestattet KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB System berblick 3 3 3 _UNICORN Software UNICORN ist ein Softwarepaket zur Steuerung und berwachung des KTAdesign Chromatographiesystems Es l uft auf IBM kompatiblen PC mit Windows Betriebssystem von Microsoft und umfasst Hardware um den Steuer PC an den KTApurifier anzuschlie en 3 3 1 Starten von UNICORN Zum Starten von UNICORN 1 Schalten Sie den Computer an Melden Sie sich bei Windows an indem Sie zuerst Strg Alt Entf dr cken und dann auf OK klicken Nach einem Augenblick erscheint der Windows Desktop k g p ED 2 Starten Sie UNICORN mit einem Doppelklick auf das UNICORN Symbol W hrend des Startvorgangs erscheint ein Informationsfenster 3 W hlen Sie im Logon Dialog einen Benutzer aus der Liste der Users und geben Sie das Passwort ein Wenn Sie sich das erste Mal anmelden w hlen Sie als Benutzer default und geben Sie dann das Passwort default ein Klicken Sie auf OK Hinweis Sie sollten
82. aufgabe 64 Die nachfolgenden Abschnitte beschreiben e _ Aufbringen kleiner Probenvolumina mit einer Probenschleife e _ Aufbringen gro er Probenvolumina mit einem Superloop 4 4 1 Aufbringen kleiner Probenvolumina mit einer Probenschleife Die Probenschleife sollte manuell gef llt werden bevor die Methode gestartet wird Vorbereitung Bereiten Sie das Injektionsventil wie folgt vor 1 Schrauben Sie die mitgelieferte Injection fill port Schraube locker in den Ventilport 3 2 F hren Sie die mitgelieferte Injektionsnadel Au endurchmesser 0 7 mm in den Injektionseinf llport 3 Ziehen Sie den Einf llport fest bis die D se eine Dichtung rund um die Nadelspitze gebildet hat d h wenn es sich anf hlt als ob Sie ein Septum am Ende des Injektionseinf llports durchsto en Die Dichtung sollte ein einfaches Einf hren und eine einfache Entfernung der Nadel erlauben 4 Befestigen Sie den Spritzenhalter am Einf llport 5 Stellen Sie sicher dass die Abfallleitung an Port 4 des Injektionsventils angeschlossen ist 6 Bringen Sie die Probenschleife Pos 1 LOAD zwischen den Ports 2 und 6 des Injektionsventils an S ule Hinweis Wenn die Spritze entfernt Proben wird bevor die Probe auf spritze die S ule injiziert wurde kann es zu einer Selbstent ladung kommen und die Schleife wird entleert Ein Luer Verbindungsst ck mit Innengewinde 1 16 Au engewinde ist im Lieferumfang des KTApurifier enthal
83. benen oder gew nschten Durch flussgeschwindigkeit laufen 3 _ Notieren Sie den Gegendruck am Pumpendisplay oder im Fenster Run Data UNICORN 4 Addieren Sie diesen Wert zum Druckgrenzwert f r die S ule z B 0 5 MPa f r HiLoad oder 0 3 MPa f r HiTrap Der neue Gesamtdruckwert gemessener Druck max S ulendruck muss in die UNICORN S ulenliste hinzugef gt und als pers nliche S ule definiert werden 1 W hlen Sie im Method Editor Edit Column list um den Dialog Column List zu ffnen Wenn Sie auf eine S ule in der Liste klicken werden ihre Parameter im Feld rechts des Kastens angezeigt 2 Klicken Sie auf Edit um den Dialog Edit Column anzuzeigen Geben Sie in der Spalte Parameter in das Feld f r Max pressure den neuen Systemgrenzwert ein 0 5 MPa gemessener Wert 3 Klicken Sie auf Save as und geben Sie eine neue Bezeichnung Ihrer S ule ein Sie k nnen die S ule allgemein d h f r alle Benutzer verf gbar speichern indem Sie das K stchen Save as global anhaken Wir empfehlen jedoch das K stchen Save as global in diesem Fall nicht auszuw hlen Klicken Sie auf OK Weitere Informationen siehe UNICORN User Manuals KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 101 5 Optionale Funktionen 5 5 Durchflussregelung 102 5 5 Durchflussregelung Die Durchflussregelung der Systempumpe wird verwendet e um die erforderliche Durchflussgeschwindigkeit der Pumpe aufrechtzuerhalten e um sicherzustellen
84. binden Sie den Auslass der pH Durchflusszelle markiert mit OUT mit dem Einlass am FR 902 markiert mit IN mit Hilfe des Verbindungsst cks mit Au engewinde Au engewinde Verbinden Sie den BNC Anschluss der pH Elektrode mit dem Anschluss pH Probe pH Sonde an der R ckseite des Monitors p HC 900 UPC 900 Sollten St rungen durch elektrostatische Felder entstehen verbinden Sie die PH Durchflusszelle auch mit dem Anschluss pH Ground pH Erdung mit einem Standardlaborkabel mit 4 mm Bananenstecker Hinweis Wenn Sie die pH Elektrode verwenden muss der Durchflussbegrenzer FR 904 durch den mitgelieferten Durchflussbegrenzer FR 902 ersetzt werden Sonst werden die Langzeitstabilit t und die Lebensdauer der pH Elektrode verk rzt KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Installation 2 2 3 5 Installieren des Computers und des Druckers Packen Sie den Computer und den Drucker aus und installieren Sie sie gem den Herstelleranweisungen Stellen Sie sie an der linken Seite des Systems auf Hinweis Schalten Sie sie noch nicht an WARNUNG F r Notf lle muss der Netzschalter des Systems immer gut zug nglich sein und der Netzstecker muss immer leicht zu trennen sein WARNUNG Der Computer muss an einem trockenen Ort und entsprechend den in den Herstelleranweisungen genannten Umgebungsanforderungen aufgestellt werden 2 3 6 Installieren des Fraktionssammlers Frac 920 optional Der Frac 920 kan
85. ch langfristige Verwendung beeintr chtigt Essigs ure lt 5 OK OK 168 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 Chemikalie Exposition Anmerkungen lt 1 Tag bis 2 Monate Essigs ure 70 OK OK Ethanol OK OK Ethylacetat OK Vermeiden Silikon nicht resistent Druckgrenzwert f r PEEK nimmt ab Ethylenglycol OK OK Glycerol OK OK Guanidiniumhydrochlorid OK OK Harnstoff OK OK Hexan OK Vermeiden Silikon nicht resistent Druckgrenzwert f r PEEK nimmt ab Isopropanol OK OK Kaliumcarbonat OK OK Kaliumchlorid OK OK Methanol OK OK atriumacetat OK OK atriumbicarbonat OK OK atriumcarbonat OK OK atriumchlorid OK OK atriumhydrogensulfat OK OK atriumhydroxid 2 M OK Vermeiden Titan PVDF und Borosilicatglas werden durch langfristige Verwendung beein tr chtigt atriumsulfat OK OK atriumtetraborat OK OK Phosphors ure 10 OK Vermeiden Titan und Aluminiumoxid werden durch langfristige Verwendung beeintr chtigt Pyridin Vermeiden Vermeiden ETFE PP und PE nicht resistent Reinigungsmittel OK OK Salpeters ure verd nnt OK Vermeiden Silikon nicht resistent Salpeters ure 30 Vermeiden Vermeiden Elgiloy wird durch langfristige Verwen dung beeintr chtigt Salzs ure 0 1 M OK OK Silikon nicht resistent Salzs ure gt 0 1 M OK Vermeiden Silikon nicht resistent Titan wird bei langfristiger
86. ch sind wird nur die Bezeichnung KTApurifier gew hlt Funktionen des KTApurifier e _ Durchflussgeschwindigkeiten bis zu KTApurifier 100 P 901 100 ml min bei einem Druck von bis zu 10 MPa KTApurifier 10 P 903 10 ml min bei einem Druck von bis zu 25 MPa e _ BufferPrep f r eine schnelle Optimierung des pH Wertes e Eine Arbeitsplattform f r die meisten Fl ssigkeitschromatographiemethoden vom Mikrogramm bis zum Grammma stab Abb 1 1 Links KTApurifier und rechts KTApurifier UPC KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 7 1 Einleitung 1 1 Allgemeines Box 900 UV 900 Monitor Pumpe P 900 P 901 P 903 AN AUS Schalter S ulenhalter Der KTApurifier besteht aus einer kompakten Trenneinheit einem Computer mit UNICORNTM Steuerung Version 5 01 oder h her und als Option e einem Fraktionssammler und e einem Monitor zur Messung des pH Wertes und der Leitf higkeit nicht bei KTApurifier UPC Das Chromatographiesystem wird im Abschnitt 8 1 unter Systembeschreibung ausf hrlich beschrieben Eine kurze Beschreibung der einzelnen Komponenten finden Sie im Abschnitt 8 2 unter Komponentenbeschreibung Ausf hrliche Informationen zu den Komponenten finden Sie in den entsprechenden User Manuals und Instructions Die UNICORN Steuerung wird im separaten UNICORN User Manual beschrieben Die folgende Abbildung zeigt die Lage der Module und Komponenten der Trenn einhei
87. den USA und oder anderen L ndern Teflon und Tefzel sind eingetragene Warenzeichen von E I du Pont de Nemours and Company UniNet ist ein Warenzeichen von Custom Produkt Design Inc PEEK ist ein eingetragenes Warenzeichen von Victrecs Company Alle G ter und Dienstleistungen werden gem den Verkaufsbedingungen des Unternehmens in GE Healthcare verkauft das sie liefert GE Healthcare beh lt sich das Recht vor in Abh ngigkeit von beh rdlicher und vertraglicher Zustim mung falls erforderlich Ver nderungen an hier aufgef hrten Spezifikationen und Funktionen vorzunehmen oder das beschriebene Produkt jederzeit ohne Ank ndigung oder Verpflichtungen einzustellen Neueste Informationen erhalten Sie von Ihrem Vertreter von GE Healthcare vor Ort Die Abtrennung von Viruspartikeln mit Capto Q Produkten kann eine Lizenz unter der US Patentnummer 6 537 793 B2 und hnlichen Patenten und Patent anmeldungen von Centelion SAS in anderen L ndern voraussetzen Eine solche Lizenz ist nicht im Kauf von Capto Q eingeschlossen aber im Kauf von Capto ViralQ Produkten enthalten Mit dem Kauf von Capto ViralQ wird dem Kunden eine kostenlose unbegrezte Lizenz unter der US Patentnummer 6 537 793 B2 und hnlichen Patenten und Patentanmeldungen von Centelion SAS in anderen L ndern zur Abtrennung von Viruspartikeln ausschlie lich unter Verwendung des gekauften Produktes erteilt UNICORN Die Nutzung dieser Software unterliegt dem Standardsoftware Endb
88. e KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 121 7 Fehlerbehebung 7 10 BufferPrep 122 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 8 Referenzinformationen 81 _Systembeschreibung Hinweis Zwei Versionen sind erh ltlich KTApurifier mit UV 900 Monitor f r Mehrwellenl ngen Detektion und KTApurifier UPC mit UPC 900 Monitor f r eine kombinierte Messung von UV Absorption pH Wert und Leitf higkeit Wenn die Anweisungen oder Spezifikationen f r beide Modelle hnlich sind wird nur die Bezeichnung KTApurifier verwendet 8 1 1 berblick ber die Systeme Abb 8 1 KTApurifier links und KTApurifier UPC rechts Der KTApurifier besteht aus einer kompakten Trenneinheit und einem Computer mit UNICORN Steuerung Version 5 01 oder h her Die einzelnen Module und Komponenten werden in diesem Kapitel kurz beschrieben Ausf hrliche Informationen zu den Komponenten finden Sie in den entsprechenden User Manuals und Instructions Die UNICORN Steuerung wird in der separaten mitgelieferten UNICORN Benutzerdokumentation beschrieben Die Kommunikation zwischen dem Computer und den verschiedenen Kompo nenten des KTApurifier wird ber Hochgeschwindigkeits Datennetzwerkver bindungen erreicht UniNet 1 und UniNet 2 Alle Komponenten des KTApurifier die Fl ssigkeiten f hren werden auf derselben Seite der Hauptkomponenten angebracht Dies erm glicht einen l
89. e Curves Evaluation Procedures Method Information Settings Calibration MQuestions MResult Name OKK r Scouting start protocol First run only C Alltuns 10 Um die Methode zu speichern w hlen Sie File Save Geben Sie eine Bezeichnung im Dialog Save As ein Speichern Sie die Methode in das Verzeichnis Ihrer Wahl durch Doppelklick auf ein Verzeichnis Klicken Sie auf OK Im Modul UNICORN Manager erscheint die Bezeichnung der Methode im Fenster Methods Die Bezeichnung der Methode gefolgt von drei fortlaufen den Zahlen beginnend bei 001 wird dann als Standardbezeichnung f r die Ergebnisdatei Ihrer Methode nach den L ufen verwendet Sie k nnen nun einen Lauf starten Gehen Sie zum Abschnitt 4 6 Starten eines Laufs F r weitere Informationen zur e _ Fraktionssammlung siehe Abschnitt 4 3 Fraktionssammlung e _ Verwendung von Scouting in einer Methode siehe Abschnitt 5 3 Scouting e Verwendung von BufferPrep in einer Methode siehe Abschnitt 5 2 BufferPrep KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 59 4 Betrieb 4 3 Fraktionssammlung 60 43 _Fraktionssammlung Die Fraktionen k nnen vor bzw w hrend der Elution mit Hilfe eines Fraktionssammlers gesammelt werden Die Software bietet die folgenden Methoden f r das Sammeln von Fraktionen e Durchflussfraktionierung e Fraktionierung mit festem Volumen e Peak Fraktionierung F r weitere Informationen zur V
90. e Sie verwenden wollen Das korrekte S ulen volumen die empfohlene Durchflussgeschwindigkeit und die korrekte Druckgrenze f r diese S ule werden dann automatisch in die Methode bernommen Hinweis Wenn Sie Ihre S ule in der Liste nicht finden k nnen Sie diese hinzuf gen Siehe UNICORN User Manual und Abschnitt 8 4 3 Ausw hlen von Kapillars tzen f r andere S ulen Hinweis Wenn Sie die Standardwerte der S ule manuell ndern und damit die empfohlenen Werte f r die ausgew hlte S ule berschreiten erhalten Sie eine Warnung wenn Sie Ihre Methode speichern Hinweis Wenn Sie einen Testlauf ohne S ule durchf hren m chten sollten Sie dennoch eine S ule w hlen eine kleine wird empfohlen um geeignete Standardparameter f r Ihre Methode zu erhalten Wenn Sie den Lauf durchf hren verwenden Sie dann ein St ck Kapillare um die S ule zu ersetzen 56 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 4 Falls erforderlich w hlen Sie Flexible Flow Rates bzw Flow Regulation of the System Pump 5 Klicken Sie auf Next um zu den folgenden Dialogen zu gelangen W hlen Sie in jedem Dialog die geeigneten Parameterwerte aus Hinweis Die im Method Wizard verf gbaren Optionen sind von der aktuellen Systemkonfiguration abh ngig Wenn zum Beispiel ein Fraktions sammler installiert ist erscheinen die Optionen f r die Einstellung der Fraktionierung im Wizard Hinweis Klicken Sie im Dialog auf Help
91. e T tchen mit Trockenmiittel Hinweis Verwenden Sie einen Seitenschneider Achten Sie darauf nicht versehentlich in die Kapillaren zu schneiden Achten Sie darauf keines der Beschriftungsschilder der Kapillaren zu verlieren KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 19 2 Installation 2 3 Installation des KTApurifier Ventil INV 907 befindet sich oben rechts Heben Sie das Ventil ab um den Schaumstoff zu entfernen Setzen Sie das Ventilwieder I in den obersten Schlitz am Befestigungsst ck ein Der Mischer M 925 befindet sich unter dem Ventil INV 907 im KTApurifier Heben Sie den Mischer ab um den Schaumstoff zu entfernen und setzen Sie ihn dann wieder ein Optische Einheit Heben Sie die optische Einheit vorsichtig ab um den Schaumstoff zu entfernen Kapillarschleifen Entfernen Sie alle roten Klebeb nder die die Kapillaren und Schleifen befestigen die am Ventil INV 907 angebracht sind Die Abdeckung der UV Zelle KTApurifier befindet sich ber der UV Durchflusszelle Entfernen Sie die roten Klebeb nder 20 INV 907 Abdeckung der UV Zelle Mischer M 925 KTApurifier KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Installation 2 Sollte sich die Abdeckung ber dem Fach der UV Zelle l sen wird sie wie folgt wieder angebracht 1 Die Abdeckung wird einfach auf den Zellenhalter aufgeschoben Zw
92. ei kleine Zapfen an der Abdeckung greifen in Aussparungen an der Vorder und R ck seite des Zellenhalters 2 Die Abdeckung wird dann ber den Zellenhalter gesenkt e Abfallleitungen F hren Sie die mit W1 W2 und W3 markierten Abfall leitungen in eine Abfallflasche und stellen Sie die Flasche an einen geeigneten Ort e Einlassleitung Packen Sie die Einlassleitung aus die sich in einem Kunststoffbeutel befindet der mit einem Klebeband an der Pufferschale an der Oberseite der Box 900 befestigt ist e Achten Sie darauf dass alle Teile sicher befestigt sind und dass sich keine Kapillarverbindung gel st oder verheddert hat e S ulenhalter KTApurifier Bringen Sie den S ulenhalter der sich in der Box 900 befindet ber der UV Zelle an W hlen Sie einen Schlitz der f r die H he der zu ver wendenden S ule geeignet ist KTApurifier UPC W hlen Sie eine Position durch die der Abstand zwischen der S ule und der optischen Einheit minimiert wird KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 21 2 Installation 2 3 Installation des KTApurifier 22 2 3 3 Installieren von pH C 900 optional Der Monitor pH C 900 ist ein Hochpr zisions Online Monitor zur Messung des pH Werts und der Leitf higkeit in der Fl ssigkeitschromatographie Der Monitor PH C 900 ist eine Option f r den KTApurifier ausf hrliche Beschreibungen siehe Monitor pH C 900 User Manual Abb 2 1 Monit
93. eichten Zugang zu allen Komponenten Kapillaren und anderen Fl ssigkeits komponenten die sich an der Pumpe P 900 und dem UV 900 Monitor UPC 900 Monitor befinden KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 123 8 Referenzinformationen 8 1 Systembeschreibung 8 1 2 Lage der Komponenten Das nachstehende Bild zeigt die Lage der Komponenten der Trenneinheit S ulenhalter Box 900 Injektionsventil INV 907 UV 900 Monitor UV Durchflusszelle Pumpe P 900 P 901 P 903 Mischer M 925 AN AUS Schalt an Mischkammer Leitungen zur Abfallflasche W1 W2 und W3 Abb 8 2 Lage der Komponenten des KTApurifier 124 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Leitf higkeitszelle S ule S ulenhalter UPC 900 Monitor ir Pumpe P 900 J 5 Referenzinformationen 8 Abb 8 3 Lage der Komponenten des KTApurifier UPC KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Optische Einheit UV Zelle c Injektionsventil INV 907 NRO Mischer M 925 Mischkammer Durchflussbegrenzer 125 8 Referenzinformationen 8 1 Systembeschreibung 8 1 3 _Entl ftungskomponenten Das nachstehende Bild zeigt die Entl ftungskomponenten f r die Pumpe P 900 Entl ftungsventil Auslassverteiler Pumpenmodul N o Entl ftungsleitung arg 7
94. eisungen f r die S ule e berpr fen Sie dass der Mischer korrekt funktioniert und dass die korrekte Mischkammer verwendet wird Verrauschtes UV Signal Signalabweichung oder instabilit t e Die Pufferl sung ist m glicherweise verschmutzt Pr fen Sie ob das Signal bei Wasser immer noch verrauscht ist e Es befindet sich m glicherweise Luft in derUV Durchflusszelle Pr fen Sie dass der Durchflussbegrenzer den folgenden Gegen druck erzeugt FR 904 0 4 0 05 MPa FR 902 0 2 0 05 MPa Pr fen Sie den Gegendruck wie folgt 1 L sen Sie die Anschl sse des Durchflussbegrenzers 2 Schlie en Sie ein St ck Kapillare ca 1 m Innendurchmesser 1 0 mm an einen freien Port im Injektionsventil V2 an Stellen Sie das Ventil manuell auf diesen Port ein H ngen Sie das offene Ende in den Abfallbeh lter 3 Lassen Sie die Pumpe manuell bei 10 ml min mit Wasser laufen Notieren Sie den Gegendruck Bp1 am Pumpendisplay oder im Fenster Run Data 4 Schlie en Sie den Durchflussbegrenzer an das offene Ende der Kapillare an beachten Sie die Markierung IN Setzen Sie den Durchflussbegrenzer in den Abfallbeh lter 5 Lassen Sie die Pumpe bei 10 ml min mit Wasser laufen Notieren Sie den Gegendruck Bp2 am Pumpendisplay oder im Fenster Run Data 6 Berechnen Sie den Gegendruck Bp2 Bp1 des Durchfluss begrenzers Wenn er nicht innerhalb der Grenzwerte liegt wechseln Sie ihn aus oder wenden Sie sich an GE Healthcare e
95. ektionsventil wird der Strom durch die S ule und die UV Zelle in die optische Einheit und die Leitf higkeitszelle unter der optischen Ein heit geleitet Wenn eine pH Durchflusszelle optional im Str mungsweg eingeschlossen ist wird sie nach der Leitf higkeitszelle angebracht 6 Der Str mungsweg setzt sich dann ber den Durchflussbegrenzer fort Der Durchflussbegrenzer erzeugt einen konstanten Gegendruck um die Gefahr des Eindringens von Luftblasen in die UV Zelle zu verhindern 7 Im KTApurifier setzt sich der Strom zum Auslassventil fort das verwendet wird um den Auslassstrom zwischen Abfall Fraktionssammler oder Aus trittsfraktion umzuschalten 8 Wenn ein Frac 920 eingeschlossen ist leitet das Fraktionsventil am Frac 920 den Strom zu den Sammelr hrchen oder zum Abfall Wenn ein Frac 950 eingeschlossen ist wird der Strom zum Akkumulator wenn angeschlossen und dann zu den Sammelr hrchen oder zum Abfall geleitet KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 47 3 System berblick 3 2 S ulen und Kapillaren 48 3 2 S ulen und Kapillaren Eine gro e Auswahl vorgepackter S ulen f r lonenaustausch Gr enausschluss hydrophobe Wechselwirkungs Reversed Phase und Affinit tschromatographie ist f r die Verwendung mit KTApurifier geeignet Eine umfassende Liste der empfohlenen vorgepackten S ulen finden Sie im Abschnitt 8 4 unter Empfohlene Kapillaren und S ulen zusammen mit Informationen zu d
96. en Die Mischkammer der Gr e 0 6 ml ist im Lieferumfang des Systems enthalten andere Mischkammern sind optional System Mischkammer quilibrierungs volumen mi volumen mi KTApurifier 10 0 6 9 2 14 KTApurifier 100 0 6 20 2 30 5 50 12 100 6 Beider Durchf hrung eines pH Scouting sollte die Probe wenn m glich einen pH Wert haben der nahe dem h chsten pH Wert im Scouting Lauf f r AIEX und dem niedrigsten pH Wert f r CIEX liegt Die Leitf higkeit der Probe sollte unter 5 ms cm liegen 7 Speichern Sie die Methode KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 97 5 Optionale Funktionen 5 2 BufferPrep 5 2 6 _Feinabstimmung Um eine h here pH Genauigkeit zu erreichen kann das Rezept um einen spezifischen pH Wert herum fein abgestimmt werden Wenn Sie das Scouting f r einen breiten pH Bereich durchf hren ist die Feinabstimmung weniger n tzlich F hren Sie BufferPrep manuell bei O und 100 B wie folgt aus 1 W hlen Sie ausgehend vom Men System Control Manual das Rezept unter Other BufferPrep_pH und Flow unter Pump Starten Sie einen Lauf manuell bei 0 B Stellen Sie sicher dass das Umschaltventil korrekt auf den Einlass A1 eingestellt ist 2 Pr fen Sie den pH Messwert wenn er stabil ist 3 Wechseln Sie zu 100 B durch Einstellung der Anweisung Gradient in Manual Pump auf 100 B f r Target und 0 f r Length Klicken Sie auf Execute 4 Pr fen Sie den pH Me
97. en Ecke Documentation x Fso Variablen Scosina Temmmenod Noes Comas Meferemeluner Evalsstion Proceder Method Induernatioen Resa Irdomasiorn Stat Piotoccd Settings Caitraton Logbock EvakastiomLog Questore Rend Nane 0 00 mi Method Run 10 7 2004 30852 PM US Easton Standard Time Method 1010 Aosda QW m Balch ID B27E207BE ICH NICH AULU IEEBIHIF 7AF 0 n Biek Sia A van Purei ah Dask 00O mi poek SNN 0 00 m Purmgwaihd siie OIN OI nd Bloch nd Block 501 m Bloch AutaZern UV 501 mi Bare SamesMan 501 m Aitozerol IV 501 mi SystemiumgConliolMode Noms QSOMPa 0100 m min 501 m End Binck S0 m Block Fkmirough_Fiactonston 4 8 2 Drucken und Erstellen eines Berichts 1 Zum Drucken des Chromatogramms w hlen Sie File Report Der Dialog Generate Report wird ge ffnet Format Contents Global BP_Chromatogr_Report Customized Report Format New Global BP_Full_Report n Global Chromatofacusing Global Chromatogram Delte Global Chromatogram_Peaks Global Chromatogram_Quant Edit Global Chromatogram_Report Global Full_Report Global Installation_Test Print Preview Close Help 2 W hlen Sie zum Beispiel das Format Global Chromatogram Es wird ein Bericht erstellt der das Chromatogramm und die Fragen auf einer Seite enth lt 86 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 3 Klicken Sie auf Preview um den Bericht auf dem B
98. en empfohlenen Kapillaren f r jede S ule Es ist sehr wichtig dass die richtigen Kapillaren verwendet werden Beachten Sie den zugelassenen H chstdruck f r die S ule und die S ulengr e Bei Niederdrucks ulen wie HiTrap und HiLoad ist es erforderlich den Vor s ulendruck wie in Abschnitt 5 4 unter Zus tzliche Systemdruckmessung beschrieben auszugleichen 3 2 1 Kapillaren f r KTApurifier10 WARNUNG Verwenden Sie niemals Kapillaren mit einem Innendurchmesser von 0 25 mm oder kleiner mit S ulen die nur einem geringen H chstdruck standhalten und die hohe Durchflussgeschwindigkeiten erm glichen da die S ulen zerbrechen k nnen was zu Verletzungen f hren kann Bei Lieferung ist das System von der Pumpe bis zum Injektionsventil mit Kapillaren mit einem Innendurchmesser von 0 50 mm PEEK orange und vom Injektionsventil bis zur Leitf higkeitszelle mit Kapillaren mit einem Innendurchmesser von 0 25 mm PEEK blau ausgestattet Kapillaren mit einem Innendurchmesser von 0 50 mm k nnen auch vom Injektions ventil bis zur Leitf higkeitszelle verwendet werden Dieser Durchmesser sollte bei S ulen verwendet werden die einen niedrigen Maximaldruck haben und hohe Durchflussraten erlauben Wenn Kapillaren mit einem kleineren Innendurchmesser verwendet werden besteht die Gefahr dass der Gegendruck zu hoch ist und die S ulen brechen k nnen Die Kapillaren mit einem Innendurchmesser von 0 25 mm sollten
99. en mit einem Innendurchmesser von 0 25 mm oder kleiner mit S ulen die nur einem geringen H chstdruck standhalten und die hohe Durchflussgeschwindigkeiten erm glichen da die S ulen zerbrechen k nnen was zu Verletzungen f hren kann WARNUNG Verwenden Sie im KTApurifier 100 niemals Kapillaren mit einem Innendurchmesser von 0 50 oder 0 75 mm oder kleiner zusammen mit S ulen die nur einem geringen H chstdruck standhalten und die hohe Durchflussge schwindigkeiten erlauben da die S ulen zerbrechen k nnten was zu Verlet zungen f hren kann WARNUNG Versuchen Sie niemals die Netzsicherung zu entfernen wenn das System mit Netzspannung versorgt wird F r den dauerhaften Schutz vor Brandgefahr ersetzen Sie Sicherungen nur mit solchen der vorgegebenen Art und Leistung Daten zu den Sicherungen siehe Technische Spezifikationen 1 4 Abfallentsorgung Dieses Symbol zeigt an dass elektrische und elektronische Komponenten nicht als unsortierter Hausm ll entsorgt werden d rfen sondern getrennt entsorgt werden m ssen Wenden Sie sich an einen autorisierten Vertreter oder den Hersteller wenn Sie Informationen ber die Au erbetriebnahme Ihrer Ausr stung ben tigen KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Einleitung 1 1 5 _Typografische Konventionen Men befehle die Bezeichnungen der Felder und Aufforderungen in Dialogfeldern sind im Text fett und kursiv dargestellt Ein Doppelpunkt trennt
100. endurchmesser 3 16 Kapillarensatz KTApurifier 10 Innendurchmesser 1 18 1123 34 0 25 mm Kapillarensatz KTApurifier 10 Innendurchmesser 1 18 1123 33 0 5 mm 174 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB EEG Referenzinformationen 8 Artikel Menge Code Nr Packung Verbindungsst cke und Anschl sse Fingertight Anschluss 1 16 10 18 1112 55 f r Kapillaren mit Au endurchmesser 1 16 PEEK Anschluss f r Leitungen 10 18 1112 49 f r Leitungen mit Au endurchmesser 3 16 PEEK Endringe f r Leitungen mit Au endurchmesser 10 18 1112 48 3 16 PEEK Anschluss f r Leitungen 10 18 1121 17 f r Leitungen mit Au endurchmesser 1 8 PEEK Endringe f r Leitungen mit Au endurchmesser 10 18 1121 18 1 8 PEEK Anschluss f r Kapillaren 10 18 1127 07 f r Kapillaren mit Au endurchmesser 1 16 PEEK Endringe f r Kapillaren mit Au endurchmesser 10 18 1127 06 1 16 PEEK Verbindungsst ck 1 16 Innengewinde 6 18 1112 57 M6 Au engewinde PEEK Verbindungsst ck Luer Innengewinde 1 16 2 18 1112 51 Au engewinde PEEK Verbindungsst ck M6 Innengewinde 1 16 8 18 1112 58 Au engewinde PEEK Verbindungsst ck 5 16 32 Innengewinde HPLC 8 18 1142 08 Au engewinde PEEK Anschlussst ck 1 16 Au engewinde 1 16 10 18 1120 92 Au engewinde f r Leitungen mit Au endurchmesser 1 16 PEEK KTApur
101. enen Komponenten im System wird unten gezeigt und beschrieben Systempumpe Mischer Probe S ule berwachung Fraktionierung Leitf higkeitsmonitor UV Monitor Auslassventil Durchfluss KTA purifier begrenzer optional I pH Monitor optional Injektionsventil In line Filter KTApurifier Umschaltventile optional Austrittsfraktion Abfall Zum Fraktionssammler optional Abfall 1 Die Pumpe hat vier Pumpenk pfe zwei f r das Pumpenmodul A und zwei f r das Pumpenmodul B Das Pumpenmodul A ist n her an der Vorderseite 2 Die Pumpeneinlasse A und B werden in die Pufferl sung A bzw B getaucht Die Pufferl sungen werden von der Pumpe zu einem Mischer gepumpt Die Einlasse A1 und B1 werden in die Pufferl sung A bzw B getaucht Die Einlasse A2 und B2 werden verwendet wenn die Pufferl sungen automatisch von BufferPrep vorbereitet werden Sie k nnen auch zum Auswechseln der Pufferl sung w hrend der laufenden Methode verwendet werden 46 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB System berblick 3 3 Der Str mungsweg l uft ber den Mischer zum Injektionsventil weiter Beim KTApurifier ber einen In Line Filter 4 Zwischen den Ports 2 und 6 am Injektionsventil ist eine Probenschleife an geschlossen Die Probenschleife wird manuell mit einer Spritze und einem Einf llport gef llt der an Port 3 im Injektionsventil angeschlossen wird 5 Nach dem Inj
102. enutzerlizenzvertrag von GE Healthcare f r Softwareprodukte von Life Sciences 2006 General Electric Company Alle Rechte vorbehalten GE Healthcare Bio Sciences AB ein Unternehmen der General Electric GE Healthcare Bio Sciences AB Bj rkgatan 30 SE 751 84 Uppsala Schweden GE Healthcare Europe GmbH Munzinger Strasse 5 D 79111 Freiburg Deutschland GE Healthcare UK Ltd Amersham Place Little Chalfont Buckinghamshire HP7 9NA UK GE Healthcare Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue PO Box 1327 Piscataway NJ 08855 1327 USA GE Healthcare Bio Sciences KK Sanken Bldg 3 25 1 Hyakunincho Shinjuku ku Tokyo 169 0073 Japan Asien und Pazifik Tel 852 2811 8693 Fax 852 2811 5251 Australien Tel 61 2 9899 0999 Fax 61 2 9899 7511 e Belgien Tel 0800 73 888 Fax 03 272 1637 D nemark Tel 45 16 2400 Fax 45 16 2424 Deutschland Tel 0761 4903 490 Fax 0761 4903 405 e Finnland und Baltische Staaten Tel 358 0 9 512 39 40 Fax 358 0 9 512 39 439 e Frankreich Tel 01 69 35 67 00 Fax 01 69 41 96 77 GB Tel 0800 616928 Fax 0800 616927 e Italien Tel 02 27322 1 Fax 02 27302 212 e Japan Tel 81 3 5331 9336 Fax 81 3 5331 9370 e Kanada Tel 800 463 5800 Fax 800 567 1008 Lateinamerika Tel 55 11 3933 7300 Fax 55 11 3933 7304 e Mittel Ost und S dosteuropa Tel 43 1 982 3826 Fax 43 1 985 8327 Naher Osten und Afrika Tel 30 210 9600 687 Fax 30 210 9600 693 Niederlande Tel 01
103. er Spritze gef llt werden oder mit einem Superloop Optional kann die Probe auch unter Verwendung einer Probenpumpe aufgebracht werden zum Beispiel der Pumpe P 960 Weitere Informationen finden Sie in der Packung der Pumpe P 960 optional Direkt auf die S ule unter Verwendung der Pumpe P 960 oder der Systempumpe optional Mit einem Autosampler A 900 oder A 905 Die nachstehende Tabelle zeigt welche Technik f r verschiedene Probenvolumina empfohlen wird Probenaufgabetechnik Zu injizierendes Volumen Probenschleife manuelles F llen 0 2 ml automatisches F llen optional 0 1 21 optional Direkt auf die S ule unter Verwendung gt 1 ml der Systempumpe oder der Pumpe P 960 optional Superloop optional 1 150 ml optional Autosampler 1 ul 500 pl 1 Bei Teilf llungen der Probenschleife betr gt das empfohlene Volumen bis zu to 1 ml 2 Abh ngig vom Autosampler Modell und der Auswahl der Kapillaren Siehe A 900 oder A 905 User Manual F r Scouting L ufe Wenn das Probenvolumen automatisch in einer Reihe von Scouting L ufen variiert werden muss kann eine der folgenden Techniken angewandt werden Automatische Teilf llung der Probenschleife unter Verwendung der Pumpe P 960 0 1 2 ml Direkte Aufgabe der Probe auf die S ule mit der Pumpe P 960 gt 1 ml Unter Verwendung eines Superloops 1 150 ml KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 63 4 Betrieb 4 4 Proben
104. er separaten Probenpumpe e _ Probenaufgabe mit einem Superloop e Anschluss eines Fraktionssammlers KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 141 8 Referenzinformationen 8 4 Empfohlene Kapillaren und S ulen 142 e Anschluss eines Monitors zur Messung des pH Wertes und der Leitf higkeit KTApurifier e Anschluss eines Autosamplers e Anschluss von bis zu vier Luftsensoren e Anschluss externer Ger te mit digitalen Eingangs Ausgangssignalen ber den Anschluss REMOTE der Systempumpe P 901 903 e Anschluss eines AD Wandlers 84 Empfohlene Kapillaren und S ulen Die nachstehenden Tabellen zeigen welche Kapillars tze f r jede S ule ver wendet werden sollten Es ist sehr wichtig dass die Empfehlungen in diesen Tabellen ber cksichtigt werden Die Kapillaren die ausgetauscht werden sollten werden im Abschnitt 8 1 2 unter Lage der Komponenten beschrieben 8 4 1 KTApurifier10 Hinweis Zur Verwendung von Niederdrucks ulen wie HiTrap HiPrep und HiLoad muss eine zus tzliche Systemdruckmessung durchgef hrt werden Dies wird sp ter in diesem Abschnitt beschrieben X empfohlener Kapillarsatz P nur zur Pr fung der Reinheit empfohlen RF kann mit der angegebenen Kapillare verwendet werden wenn die optimale in der S ulenliste empfohlene Durchflussgeschwindigkeit verringert wird um den Maximaldruck der S ule nicht zu berschreiten lonenaustauschers ulen
105. er und f llen Sie es dann mit 20 igem Ethanol nicht die pH Elektrode falls verwendet siehe separate Anweisungen im Optional Configurations KTApurifier User manual 4 10 Betrieb im K hlraum Der Betrieb im K hlraum ist manchmal erforderlich um die jeweiligen Biomolek le stabil zu halten 4 10 1 Vorbereitung 1 Stellen Sie die Trenneinheit in den K hlraum 2 Stellen Sie den Computer au erhalb des K hlraums auf Ein 15 m langes UniNet Kabel ist als Zubeh r erh ltlich und sollte verwendet werden um den Computer mit der Trenneinheit zu verbinden 3 Lassen Sie die Trenneinheit sich bei der neuen Temperatur mindestens 12 h lang stabilisieren 4 Ziehen Sie alle Anschl sse fest und pumpen Sie Wasser durch das System um es auf Undichtigkeiten zu untersuchen 5 Ziehen Sie undichte Anschl sse fest 4 10 2 Betrieb im K hlraum Bevor Sie einen Lauf starten pr fen Sie ob die Temperatur der Pufferl sungen die Umgebungstemperatur erreicht hat KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 89 4 Betrieb 4 10 Betrieb im K hlraum 4 10 3 Entfernung aus dem K hlraum 1 L sen Sie alle Anschl sse um zu verhindern dass sie festsitzen wenn das System wieder Raumtemperatur erreicht 2 Lassen Sie die Trenneinheit sich bei Raumtemperatur mindestens 12 h lang stabilisieren 3 Ziehen Sie alle Anschl sse fest und pumpen Sie Wasser durch das System um es auf Undichtigkeiten zu untersuchen 4 Ziehen Sie undichte
106. ere Kurven wiederholen 10 Um den Ma stab der X Achse festzulegen klicken Sie auf Fixed im Feld der X Achse und geben dann die Minimal und Maximalwerte f r diese X Achse ein Klicken Sie auf OK 11 Klicken Sie auf OK unten im Fenster Chromatogram Layout um alle nderungen auszuf hren 12 Wenn Sie die erforderlichen nderungen im Fenster Chromatogram Layout vorgenommen haben k nnen Sie diese als neues Layout speichern e Klicken Sie auf den Registerreiter Layout Library oben im Fenster Chromatogram Layout e Klicken Sie auf Save current layout as und geben Sie eine Bezeichnung ein Klicken Sie auf OK Layouts k nnen in Save current layout ausgew hlt werden alle Ihre gespeicherten Auswahlen werden angewendet Gespeicherte Layouts k nnen auf jede Ergebnisdatei angewendet werden 13 Minimieren Sie das Fenster Chromatogram durch Klicken auf die kleinen Quadrate in der oberen rechten Ecke KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 85 4 Betrieb 4 8 Anzeigen und Ausdrucken des Ergebnisses 14 Klicken Sie auf die Schaltfl che View Documentation Eine Reihe von Seiten erscheint wie im Run Setup im Method Editor Die gesamte Dokumentation f ber den Lauf wird hier gespeichert z B die Methode Antworten auf Fragen Variable Logbook etc Klicken Sie zum Beispiel auf die Seiten Notes und Logbook und sehen Sie sich die Inhalte an Schlie en Sie das Fenster Documentation durch Klicken auf das X in der oberen recht
107. erties 2 Klicken Sie auf die Registerkarte Curves Properties xi Curve Style and Color Flow Scheme Logbook Run Data Groups Run Data Color Curves X Axis Y Axis r Display curves E Select All Clear All OCond Conc Pressure Flow Temp K 3 W hlen Sie die folgenden Kurven f r die Anzeige aus KTApurifier KTApurifier UPC UVI1_215nm UV Conc Conc L schen Sie alle anderen Kurven Klicken Sie auf OK 38 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Installation 2 2 4 3 Automatische Auswertung der Ergebnisse des Installationstests Das System druckt automatisch die Ergebnisse aus wenn der Test abgeschlossen ist Der Ausdruck besteht aus einem Chromatogramm und einer Auswertung der Testergebnisse e Wenn das Ergebnis des Gradiententests in Ordnung ist steht im Ausdruck Gradient linearity accepted Gradientenlinearit t akzeptiert e Wenn das Ergebnis des Gradiententests in Ordnung ist steht im Ausdruck Step response accepted Gradiententest akzeptiert e Wenn das Ergebnis der UV Detektion in Ordnung ist steht im Ausdruck UV response accepted UV Detektion akzeptiert Wenn einer der ermittelten Werte au erhalb des festgelegten Bereichs liegt siehe Abschnitt 2 4 5 Berichtigen fehlerhafter Auswertungsergebnisse 2 4 4 Manuelle Auswertung der Ergebnisse des Installationstests Wenn das Chromato
108. erwendung Ihres Fraktionssammlers siehe entsprechendes Handbuch Hinweis Das Delay Volumen UV Zelle zum Auslass des Fraktionssammlers wird nicht bei der Auslieferung des Systems eingestellt da es von der L nge Ihrer Auslassleitung abh ngt Zum Einstellen des Delay Volumens in UNICORN siehe Abschnitt 8 1 6 Einstellen des Delay Volumens 4 3 1 Methoden der Fraktionssammlung im Method Wizard Der Method Wizard enth lt automatisch die Methoden zur Fraktionssammlung wenn ein Fraktionssammler in UNICORN ausgew hlt wurde Standardm ig wird ein Fraktionssammler automatisch ausgew hlt wenn die korrekten Strategien verwendet werden Zur Pr fung dass der Fraktionssammler in UNICORN ausgew hlt ist 1 W hlen Sie im UNICORN Manager Administration System Setup 2 W hlen Sie im Dialog System Setup das korrekte Systemsymbol und klicken Sie auf Edit 3 Klicken Sie im Dialog Edit System auf Component 4 Pr fen Sie dass der Fraktionssammler ausgew hlt ist Durchflussfraktionierung Durchflussfraktionierung bedeutet dass feste Volumina gesammelt werden bevor die Elution AN beginnt Diese Fraktionierungsmethode ist in allen Reinigungsmethoden mit Ausnahme des Gr en ausschlusses verf gbar Die Parameter sind auf der Seite Frac 920 950 Insert Settings Flowthrough Fractionation im Method aan Wizard zu finden Fraktionsvolumen KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 Frakti
109. eschwindigkeit 1 Erstellen Sie eine neue Methode wie in Abschnitt 4 2 Erstellen einer Methode beschrieben 2 Wenn das Fenster Run Setup erscheint klicken Sie auf die Registerkarte Scouting Wavelength_1 Wavelength_2 Wavelength_3 BufferYalve_ amp 1_Inlet Pump_ amp _Inlet Pump_B_Inlet Target_ConcB Length_of_Gradient Edit vanae Andere Scouting Variablen definieren 3 Eine Liste aller Variablen erscheint W hlen Sie die Variable Flow_Rate und jede andere Variable die Sie ver ndern m chten z B Peak_Frac_Size 4 Klicken Sie auf OK Die ausgew hlten Scouting Variablen erscheinen auf der linken Seite zusammen mit eingef gten Standardwerten 5 Werte f r eine Variable die f r das Scouting ausgew hlt wurden erscheinen auf der Seite Variables in grau und k nnen dort nicht ge ndert werden KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 99 5 Optionale Funktionen 5 3 Scouting 10 11 12 100 Um einen Variablenwert zu ver ndern K 7 i Block Variable setzen Sie den Cursor in das Feld f r den Fiow_Rate Fiow_Rate ml min Wert Run und f hren Sie mit der linken Maustaste einen Doppelklick aus Geben Sie den neuen Wert ein Um f r den n chsten Lauf eine Tabellenspalte hinzuzuf gen klicken Sie auf Add Es erscheint eine zweite Spalte mit einer Kopie der Werte aus dem vorherigen Lauf ndern Sie gegebenenfalls die Werte Wenn Sie nach einer bestimmten Spalte
110. ese voll sind und berlaufen k nnte Fl ssigkeit in das System eindringen und so einen Kurzschluss verursachen KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Einleitung 1 WARNUNG Bei Wartungsma nahmen muss vor dem Austausch von Systemkomponenten immer die Stromzufuhr unterbrochen werden WARNUNG F r Notf lle muss der Netzschalter des Systems immer gut zug nglich sein und der Netzstecker muss immer leicht zu trennen sein WARNUNG Der Computer muss an einem trockenen Ort und entsprechend den in den Herstelleranweisungen genannten Umgebungsanforderungen aufgestellt werden WARNUNG Ergreifen Sie bei der Verwendung von gef hrlichen Chemikalien alle geeigneten Schutzma nahmen z B Tragen von Schutzbrillen und Hand schuhen die gegen ber den verwendeten Chemikalien resistent sind Befolgen Sie alle vor Ort geltenden Vorschriften und Anweisungen zum sicheren Betrieb und zur Wartung des Systems WARNUNG Verwenden Sie f r die Wartung oder Instandsetzung des Systems ausschlie lich die von GE Healthcare gelieferten oder genehmigten Ersatzteile WARNUNG Verwenden Sie ausschlie lich von GE Healthcare gelieferte Ver schlauchungen um sicherzustellen dass die Druckvorgaben der Verschlau chungen erf llt werden WARNUNG Werden gef hrliche Chemikalien verwendet so ist vor der Durch f hrung von Instandhaltungs und Wartungsma nahmen das gesamte System gr ndlich mit bak
111. ethod Editor ffnet ein Dialogfenster zur Erstellung neuer Methoden e System control ffnet ein Dialogfenster zur Steuerung des Systems und zur Durchf hrung Ihrer Methoden e Evaluation ffnet ein Dialogfenster zur Auswertung Ihrer Ergebnisse Um zwischen den Modulen zu wechseln klicken Sie auf die entsprechende Schaltfl che in der Task Leiste am unteren Bildschirmrand lt UNICORN Main Menu lt 4 Method Editor untitled 4 System Control 1 Bjom 7 Qg Evaluation In der Symbolleiste sind weitere Schaltfl chen vorhanden Diese sind e Instant run ffnet ein Dialogfenster in dem Sie direkt eine durchzuf hrende Methode erstellen k nnen Dies ist praktisch um sofort Routinel ufe zu starten e _ Logon Logoff ffnet ein Dialogfenster zur Steuerung des An Abmeldevorgangs 5 e Method Queue ffnet ein Dialogfenster zur Festlegung einer neuen Method Queue K i e Running Method Queues ffnet ein Dialogfenster um anzuzeigen dass ein Method Queue l uft Method Queues werden verwendet um verschiedene Methoden miteinander zu verbinden KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 51 3 System berblick 3 3 UNICORN Software 52 3 3 3 Hilfe Umfassende Online Hilfe ist verf gbar Um Hilfe zu einer Anweisung oder einem Modul zu erhalten e Stellen Sie den Cursor auf die Anweisung das Modul und dr cken Sie die Taste Fl oder e Klicken Sie auf das Men Help in der rechten
112. ette KTApurifier Manual Box enth lt alle User Manuals und Instructions f r alle Komponenten im KTApurifier 10 100 1 11 0014 51 Komplette KTApurifier UPC Manual Box enth lt alle User Manuals und Instructions f r alle Komponenten im KTApurifierUPC 10 100 1 11 0014 51 Handbuchsatz f r UNICORN 5 10 einschlie lich 1 28 4010 25 Getting Started User Reference Manual Chapter Teil 1 User Reference Manual Chapter Teil 2 Administration and Technical Manual KTApurifier Benutzerhandbuch 1 28 4079 53 KTApurifier Getting started 1 28 4079 54 Optional Configurations KTApurifier User manual 1 28 4079 56 Pump P 900 User Manual 1 18 1120 04 Monitor UPC 900 User Manual 1 18 1125 55 Monitor UV 900 User Manual 1 18 1120 05 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 177 8 Referenzinformationen 8 8 Bestellinformationen 178 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Stichwortverzeichnis Stichwortverzeichnis A Abfallentsorgundsasiassenenen ansetzen nenne 12 Anforderungen Hardware Netzwerk Software Anschlie en der Saules i 22 2 a ee a Er as HE aa 72 Anschl sse Stromnetz 128 UniNet 1 127 UniNet 2 127 Austauschen der Kapillarens tze Auswechseln von Kapillaren z 132 119 B Bedienungstasten Betrieb im K hlraum Betriebsdaten Pumpe P 901 Pumpe P 903 Blockieren der W hlr der BufferPrep sismis
113. fahr dass der Gegendruck aus der Kapillare h her als der Maximaldruck der S ule wird und der Lauf sofort nach dem Start anh lt 2 Tauchen Sie die Einlassleitung A in die Pufferl sung A und die Einlassleitung B in die Pufferl sung B bzw A2 und B2 wenn Sie dies in der Methode ge ndert haben 3 Stellen Sie sicher dass die Abfallleitung vom Durchflussbegrenzer in eine leere Abfallflasche geh ngt wird 4 Wenn sich Luft in der Einlassleitung befindet oder wenn Sie Luft in der Pumpe vermuten entl ften Sie die Pumpe mit einer Spritze wie in 2 4 1 Vorbereiten des KTApurifier oder im Kapitel 2 im Pump P 900 User Manual beschrieben 5 Wenn eine pH Wert Messung gew nscht wird kalibrieren Sie den ph Monitor Siehe UNICORN User Manuals oder Monitor pH C 900 User Manual Setzen Sie die pH Elektrode in die Durchflusszelle ein KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 71 4 Betrieb 4 5 Vorbereiten des Systems f r einen Lauf Pr fen der Monitore 1 Stellen Sie sicher dass die korrekte UV Zelle 2 oder 5 mm und der korrekte Filter installiert sind und die korrekte Wellenl nge in der optischen Einheit eingestellt ist Siehe Kapitel 2 im Monitor UPC 900 User Manual 2 Stellen Sie sicher dass der Drucksensor die Leitf higkeitszelle und die pH Elektrode optional gem den im Abschnitt 6 4 Kalibrierungsverfahren aufgelisteten Intervallen kalibriert sind Anschlie en der S ule UV 900 Monitor Verbinden S
114. fernt wird bevor die Probe auf die S ule injiziert wurde kommt es zu einer Selbstentladung und die Schleife wird entleert Leeren der Probenschleife Wenn Sie die Probenschleife leeren sollte ein Pufferl sungsvolumen von mindestens dem 5 Fachen des Probenschleifenvolumens verwendet werden um die Schleife zu sp len und um sicherzustellen dass die gesamte Probe auf die S ule injiziert wird Das zu injizierende Volumen wird ber die Variable Empty_loop_with im Block Sample_Injection eingestellt KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 67 4 Betrieb 4 4 Probenaufgabe 68 4 4 2 Aufbringen gro er Probenvolumina mit einem Superloop WARNUNG Superloop 10 ml und Superloop 50 ml d rfen nicht bei Dr cken ber 4 MPa 40 bar 580 psi verwendet werden Superloop 150 ml darf nicht ber 2 MPa 20 bar 290 psi verwendet werden Bei h heren Dr cken k nnte das Glasrohr zerspringen Ein Superloop erm glicht die Einleitung gr erer Probenvolumina 1 150 ml auf die S ule Ein Superloop darf nicht zusammen mit S ulen verwendet werden die einen S ulendruck erzeugen der h her ist als derjenige der in der nachstehenden Tabelle angegeben ist Wenn der S ulendruck h her ist muss der Fluss reduziert werden so dass die Druckgrenze nicht berschritten wird Stellen Sie die Druck grenze in der Methode mit der Variablen Pressure_limit ein Ein Superloop ist ein Zubeh r das in drei
115. gbook Run Data Groups Run Data Color Curves X Axis Y Axis r Display curves uy Select All Cond Cond Clear AIl Conc Pressure Flow Temp K K K K K K K OK Avbryt 3 Um den Ma stab der Y Achse f r eine Kurve festzulegen klicken Sie auf Y axis dann auf Fixed und geben dann die Minimal und Maximalwerte ein Sie k nnen dies f r die anderen Kurven wiederholen Klicken Sie auf OK 4 Um das Fenster Curve Data zu maximieren setzen Sie den Cursor in das Fenster Curve Data Klicken Sie mit der rechten Maustaste und w hlen Sie Maximize Zur normalen Gr e gelangen Sie durch Klicken auf Restore zur ck 5 Um zum Ma stab f r eine andere Kurve zu gelangen klicken Sie auf die Skala der Y Achse oder klicken Sie auf den Namen der Kurve oben im Fenster Curve Data Die Farbe einer Kurve die Skalierung ihrer Y Achse und ihre Bezeichnung sind immer gleich Klicken Sie auf die x Achse um zwischen Zeit und Volumen zu wechseln KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 79 4 Betrieb 4 7 W hrend eines Laufs Run 13 40 ml min 2 00MPa 45 5 B A1 215 1 123 AU A1 254 0 02345 AU 4 1 280 0 1234 AU AU Cond Tc pH 0 00002 015 0 12 50 pH12 50 Tc 22 4 C 735 8mS cm Tc 78 8 80 Flow scheme Das Flow Scheme ist eine graphische Darstellung des Str mungsweges im Chromatographiesystem W hrend eines Laufs zeigt das Str
116. ge Tage nicht verwenden reinigen Sie den Str mungsweg mit destilliertem Wasser Entfernen Sie die S ule und die pH Elektrode optional Ersetzen Sie die S ule durch eine Kapillare und setzen Sie die Dummy pH Elektrode ein falls zutreffend Reinigen Sie dann das System mit 20 igem Ethanol und lagern Sie es in 20 igem Ethanol Stellen Sie sicher dass alle Kapillaren und alle Str mungs wege gereinigt werden Pumpe P 900 e berpr fen Sie die Pumpe auf Undichtigkeiten Wenn Sie Zeichen f r eine Undichtigkeit zwischen dem Pumpenkopf und dem Seitenteil des Geh uses oder ein erh htes oder verringertes Volumen der Sp ll sung erkennen ersetzen Sie die Kolbendichtungen Siehe Kapitel 4 im Pump P 900 User Manual e Beim Wechseln des Eluenten ist es wichtig eingeschlossene Luft zu entfernen Entl ften Sie die Pumpe entsprechend Kapitel 2 im Pump P 900 User Manual Wenn sich noch Luft in der Einlassleitung be findet stoppen und entl ften Sie die Pumpe entsprechend 5 im Pump P 900 User Manual Hinweis Wenn Luft in die S ule gelangen kann kann ihre Leistung negativ beeinflusst oder zerst rt werden pH Elektrode optional e _ Kalibrieren Sie die pH Elektrode optional Siehe Abschnitt 6 4 unter Kalibrierungsverfahren 106 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Wartung 6 Abstand Ma nahme Jede Woche Einlassfilter F hren Sie eine Sichtkontrolle der Einlassfilter durc
117. ge des Strahlen gangs 2 mm oder 5 mm einer Leitf higkeitsdurchflusszelle mit integriertem Temperatursensor und einer pH Durchflusszelle mit pH Elektrode optional 8 2 4 UV und Leitf higkeitsdurchflusszellen Die Art der verwendeten UV Durchflusszelle h ngt von der aufgebrachten Probenmenge und der Gr e der S ule ab KTApurifier 10 wird mit einer eingebauten Zelle der Gr e 10 mm geliefert Eine Zelle der Gr e 2 mm Strahlengang 2 mm Innenvolumen 2 ul ist als Zubeh r erh ltlich Wenn aufgrund der Begrenzung des Ausgabesignals eine niedrigere Nachweisempfindlichkeit gew nscht wird sollte die Durchflusszelle der Gr e 2 mm verwendet werden KTApurifier 100 wird mit einer eingebauten Zelle der Gr e 2 mm geliefert Eine Zelle der Gr e 10 mm Strahlengang 10 mm Innenvolumen 8 ul ist als Zubeh r erh ltlich F r eine h here Nachweisempfindlichkeit sollte die Durchflusszelle der Gr e 10 mm verwendet werden KTApurifier UPC wird mit einer eingebauten __ Leitf higkeitszelle Zelle der Gr e 2 mm geliefert Eine Zelle der mit im Durchfluss 7 integriertem Gr e 5 mm ist ebenfalls im Lieferumfang Temperatursensor enthalten Wenn aufgrund der Begrenzung des Ausgabesignals eine niedrigere Nach weisempfindlichkeit gew nscht wird sollte die Zelle der Gr e 2 mm verwendet werden UV Durchfluss zellen mit 2 und 5 mm Lichtweg KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB
118. graphiesystem von der Standardkonfiguration abweicht wenn zum Beispiel optionale Komponenten installiert wurden liefert die autom atische Auswertung keine zuverl ssigen Ergebnisse Eine manuelle Auswertung ist erforderlich 1 w hlen Sie das Modul UNICORN Manager 2 Klicken Sie auf im Fenster Results und f hren Sie dann einen Doppel klick auf das Symbol Installation Test01 aus um die Ergebnisdatei zu ffnen 3 Klicken Sie mit der rechten Maustaste in das Fenster Curves und w hlen Sie Properties 4 Klicken Sie auf die Registerkarte Curves und w hlen Sie die folgenden Kurven f r die Anzeige aus KTApurifier KTApurifier UPC Installation Test01 1_UV1_215nm 01 SMTH Installation Test01 1_UV 01 5MTH Installation Test01 1_Conc Installation Test01 1_Conc 5 Klicken Sie auf OK 6 Klicken Sie mit der rechten Maustaste in das Chromatogramm Fenster und w hlen Sie Marker KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 39 2 2 4 40 Installation Installationstest 7 Lesen Sie die Absorption f r die Stufen entsprechend KTApurifier KTApurifier UPC Installation Test01 1_UV1_215nm 01 SMTH Installation Test01 1_UV 01 5MTH Bewegen Sie den senkrechten Balken auf den konstanten Abschnitt jedes Plateaus durch Ziehen Tragen Sie die Absorptionswerte in mAU in Spalte 2 in der Stufengradiententabelle des Testprotokolls siehe Seite 42 ein lassen Sie dabei die Dezimalstellen weg 8 Klicken Sie auf Print u
119. h und tauschen Sie sie gegebenenfalls aus Pumpensp ll sung Wechseln Sie die Pumpensp ll sung aus Verwenden Sie immer 20 iges Ethanol als Sp ll sung Wenn sich das Volumen der Sp ll sung in der Standflasche erh ht hat kann dies ein Hinweis auf eine Undichtigkeit im Inneren der Pumpe sein Wechseln Sie die Kolbendichtungen entsprechend Kapitel 4 im Pump P 900 User Manual aus Wenn sich das Volumen der Sp ll sung in der Standflasche deutlich verringert hat pr fen Sie ob die Anschl sse des Sp lsystems korrekt eingebaut sind Wenn die Anschl sse des Sp lsystems nicht undicht sind sind m glicherweise die Sp lmembranen oder die Kolbendichtungen undicht Wechseln Sie die Membranen und die Kolbendichtungen entsprechend Kapitel 4 im Pump P 900 User Manual aus Reinigung Reinigen Sie das System siehe 6 2 Reinigen der Oberfl che des Systems L fter Pr fen Sie dass alle L fter funktionieren Jeden Monat Durchflussbegrenzer Pr fen Sie dass der Durchflussbegrenzer die folgenden Gegendr cke erzeugt FR 904 0 4 0 05 MPa FR 902 0 2 0 05 MPa Pr fen des Gegendrucks 1 L sen Sie die Anschl sse des Durchflussbegrenzers 2 Schlie en Sie ein St ck Kapillare ca 1 m Innendurchmesser 1 0 mm an einen freien Port im Injektionsventil V2 an Stellen Sie das Ventil manuell auf diesen Port ein H ngen Sie das offene Ende in einen Abfallbeh lter 3 Lassen Sie die Pum
120. hergestellt Der Filter sollte w chentlich berpr ft werden Verwenden Sie zum Auswechseln des Filters gegebenenfalls ein Werkzeug um das Filtergeh use zu l sen Ziehen Sie den Filter beim Einbauen des In Line Filters nur von Hand an Verwenden Sie dazu niemals ein Werkzeug 8 2 9 Monitor pH C 900 optional Der Monitor pH C 900 ist eine Option f r den KTApurifier Dies ist ein kombinierter Monitor f r genaue In Line berwachung des pH Werts der Leitf higkeit und der Temperatur f r viele Anwendungen in der Fl ssigkeitschromato 7 graphie Seine hohe Pr zision ber einen gro en Messbereich machen ihn ideal f r die Anwendung bei allen Chromatographietechniken von der Reversed Phase Chromatographie und Eluenten mit sehr niedriger Leitf higkeit bis zur hydrophoben Interaktionschromatographie und L sungen mit hohem Salzgehalt 8 2 10 Fraktionssammler optional Ein Fraktionssammler der Frac 920 oder Frac 950 kann sowohl f r Reinigungen im kleinen Ma stab als auch im pr parativen Ma stab mit dem KTApurifier verwendet werden Eine Reihe von St ndern f r verschiedene R hrchengr en werden zusammen mit dem Fraktionssammler geliefert KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 Im KTApurifier erm glicht der Fraktionssammler die Fraktionierung mit fest gelegtem Volumen oder die automatische Peak Fraktionierung Die letztgenannte Funktion basiert auf der UV Peak Erkennung mi
121. hlersymptom Kein Text auf dem Frontdisplay M glicher Grund Ma nahme Pr fen Sie ob das Netzkabel angeschlossen und der Hauptschalter auf der Position AN steht Instabile UV Basislinie Versuchen Sie eine gr ere Mischkammer als die Standardmischkammer mit 0 6 ml zu verwenden 7 7 UPC 900 Monitor Fehlersymptom Kein Text auf dem Frontdisplay M glicher Grund Ma nahme Pr fen Sie ob das Netzkabel angeschlossen und der Hauptschalter auf der Position AN steht Instabile UV Basislinie Versuchen Sie eine gr ere Mischkammer als die Standardmisch kammer mit 0 6 ml zu verwenden 118 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Fehlerbehebung 7 Fehlersymptom Der absolute Leitf higkeitswert ist falsch M glicher Grund Ma nahme Drehen Sie die Durchflusszelle so dass das Ende mit den Schrauben zum Durchflussbegrenzer FR 902 zeigt Kalibrieren Sie die Leitf higkeitszelle neu Kalibrierungsl sung 1 00 M NaCl nicht korrekt bereitet Bereiten Sie eine neue Kalibrierungsl sung und kalibrieren Sie die Leitf higkeits zelle neu Instabile Leitf higkeitskurve Versuchen Sie eine gr ere Mischkammer als die Standardmischkammer mit 0 6 ml zu verwenden 7 8 Mischer M 925 Fehlersymptom Undichtigkeit M glicher Grund Ma nahme Pr fen Sie die Anschl sse der Kapillaren Ziehen Sie sie erneut an oder wech
122. hlie en Sie das andere Ende der Entl ftungsleitung an das linke Entl ftungsventil an der Pumpen einheit A an 4 Drehen Sie das Entl ftungsventil 0 lt eine halbe Drehung gegen den N Entl ftungsventil Uhrzeigersinn um es zu ffnen und ziehen Sie langsam Eluent in die Spritze 5 Wenn Fl ssigkeit beginnt in die Spritze zu laufen ziehen Sie noch ein paar Milliliter mehr bevor Sie das Entl ftungsventil schlie en berpr fen Sie dass sich keine Luft mehr in der Einlassleitung befindet 6 Wiederholen Sie die Schritte 3 bis 5 f r die anderen Pumpenk pfe Pr fen der Druckstabilit t F hren Sie einen Drucktest durch um festzustellen ob die gesamte Luft aus den Pumpenk pfen entfernt wurde 1 Schlie en Sie eine Kapillare zur Umgehung der S ule zwischen dem Injektionsventil Port 1 und der Oberseite der UV Zelle an 2 KTApurifier 10 W hlen Sie manuell eine Flussrate von 0 2 ml min und lassen Sie sie bei 0 B laufen destilliertes Wasser Pr fen Sie am Pumpendisplay dass die Druck werte stabil sind weniger als 0 02 MPa Schwankung KTApurifier 100 W hlen Sie manuell eine Flussrate von 10 ml min und lassen Sie sie bei 0 B laufen destilliertes Wasser Pr fen Sie am Pumpendisplay dass die Druck werte stabil sind weniger als 0 2 MPa Schwankung 3 KTApurifier 10 W hlen Sie manuell einen Gradienten von 100 B aus L nge 0 und lassen Sie die Pumpe mit 0 2 ml min destilliertes Wasser
123. hnung des neuen Delay Volumens siehe Abschnitt 8 1 6 Einstellen des Delay Volumens Kalibrieren Sie die pH Elektrode und richten Sie die weiteren f r die pH Messung gew nschten Monitorfunktionen ein Diese Vorg nge werden im Monitor UPC 900 Monitor pH C 900 User Manual und in den UNICORN User Manuals beschrieben Pr fung 1 Auspacken Zeichen Anmerkungen Inhalt entsprechend Packlisten Alle Verpackungsmaterialien entfernt Keine sichtbare Besch digung 2 Installation Abfallleitungen des Injektionsventils Port 4 und 5 gekennzeichnet mit W1 und W2 an Abfallbeh lter Fraktionssammler installiert optional verbunden Abfallleitung gekennzeichnet mit W3 mit Abfallbeh lter Monitor pH C 900 installiert optional pH Elektrodenhalter installiert optional Computer und Drucker installiert UniNet 1 Kabel und optional UniNet 2 Kabel installiert KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 31 2 Installation 2 4 Installationstest Netzkabel installiert S ulenhalter installiert Computer und Drucker installiert 3 Installationstest L sungen vorbereitet Leitungen zur Hinterkolbensp lung in 20 igem Ethanol KTApurifier vorbereitet Installationstest durchgef hrt Ergebnisse des Installationstests ausgewertet Testprotokoll ausgef llt Registrationsformular ausgef llt
124. ie die S ule mit dem Injektionsventil Port 1 und dem Einlassport der UV Zelle UPC 900 Monitor Der Einlassport der UV Zelle mit 5 mm befindet sich ber der optischen Einheit Der Einlassport der IT I UV Zelle mit 2 mm befindet sich unterhalb UV Zelle mit5 mm UV Zelle mit 2 mm der Einheit siehe Abbildung F llen der Einlassleitung 1 Klicken Sie auf die Schaltfl che System Control in der Taskleiste am unteren Bildschirmrand 2 F llen Sie die Einlassleitungen mit den korrekten L sungen indem Sie Manual Pump ausw hlen W hlen Sie die Anweisung PumpWash und stellen Sie die PumpA und Pump auf ON Purifier10 Pump Instructions x Instructions r Parameters Pump PumpA Insert C Flowpath SystemPumpControlMode OFF C ON Delete SystemPIDParameters Alarmst Mon Pump washE xplorer PumpB C Frac OFF CON Close C Other Help IT Auto update If this is checked the parameter fields will be updated during method run 3 Klicken Sie auf Execute um die Einlassleitungen zu f llen Das Injektionsventil schaltet w hrend der Pumpenreinigung automatisch auf Abfall 4 Wenn die Pumpenreinigung abgeschlossen ist klicken Sie in der Symbol leiste des Fensters System Control auf End 5 Schlie en Sie den Dialog durch Klicken auf Close 72 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 F llen der Probenschleife oder des Superloop 1 Stellen
125. ifier KTApurifier UPC I Abschluss widerstand Vom UniNet 2 Anschluss an der R ckseite der Pumpe P 900 Das UniNet 2 Daten bertragungskabel das das Ventil und den Mischer mit Steuersignalen und Strom versorgt geht von der R ckseite der Pumpe P 900 aus und verbindet die Komponenten an der rechten Seite des Systems Das Kabel endet am Injektionsventil V1 mit einem Abschlusswiderstand KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 127 8 Referenzinformationen 8 1 Systembeschreibung Netzkabel Fraktions sammler optional Sicherungshalter mit Sicherung Zur Netzsteckdose geerdet ee Abb 8 5 Netzkabel im KTApurifier System Die Netzkabel im System KTApurifier UPC laufen hnlich WARNUNG Versuchen Sie niemals die Netzsicherung zu entfernen wenn das System mit Netzspannung versorgt wird F r den dauerhaften Schutz vor Brandgefahr ersetzen Sie Sicherungen nur durch solche der vorgegebenen Art und Leistung Daten zu den Sicherungen siehe Technische Spezifikationen Es ist nur ein Netzanschluss erforderlich Die Module CU 950 und der Fraktions samnler optional sind mit der Stromversorgungsbuchse an der R ckseite des Systems ve
126. ifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 175 8 Referenzinformationen 8 8 Bestellinformationen Artikel Menge Code Nr Packung Verbindungsst cke und Anschl sse N Verbindungsst ck 1 16 Innengewinde 1 16 1 18 3855 01 zu Innengewinde f r Kapillaren mit Au endurchmesser 1 16 Titan Stop plug 1 16 PEEK 5 18 1112 52 Stop plug 5 16 PEEK 5 18 1112 50 Anschluss f r Kapillaren M6 Au engewinde 1 18 1017 98 Zubeh rteile KTApurifier BufferPrep Satz einschlie lich zweier 1 28 4044 73 Umschaltventile und Halter Leitungen und Anschl sse f r 10 Systeme und 100 Systeme Durchflussbegrenzer FR 902 0 2 MPa 1 18 1121 35 Durchflussbegrenzer FR 904 0 4 MPa 1 18 1119 63 Kurzer S ulenhalter 1 18 1113 17 Langer S ulenhalter 1 18 1126 32 Kleine S ulenklammer 1 18 1149 98 Halter f r Stativstange 1 18 1113 19 Kapillarschneider 1 18 1112 46 n line Filter 10 ml Systeme 1 18 1118 01 n line Filter Satz 10 mI Systeme 2 18 1120 94 2 Filter n line Filter 100 mI Systeme 1 18 1112 44 n line Filter Satz 100 ml Systeme 10 18 1027 11 10 Filter und 2 Netze n line Filter 100 ml Systeme 25 18 1130 23 25 Filter 176 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 Artikel Menge Code Nr Packung Benutzerhandb cher Kompl
127. igkeit Wenn die Anweisungen oder Spezifikationen f r beide Modelle hnlich sind wird nur die Bezeichnung KTApurifier gew hlt Abb 3 1 Links KTApurifier und rechts KTApurifier UPC 3 1 Trenneinheit KTApurifier ist ein automatisiertes Fl ssigkeitschromatographiesystem zur Verfahrensentwicklung und f r Forschungsanwendungen Die Trenneinheit des Chromatographiesystems hat zwei Hauptmodule die aufeinandergestapelt sind Die Module sind e Pumpe P 900 eine bin re Hochleistungsgradientenpumpe und e _ KTApurifier UV 900 Monitor ein Mehrwellenl ngen UV Vis Monitor f r die Messung von bis zu drei Wellenl ngen gleichzeitig KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 45 3 System berblick 3 1 Trenneinheit e _ KTApurifier UPC Monitor UPC 900 ein kombinierter Hochleistungs Online Monitor f r die Messung der UV Absorption der Leitf higkeit und des pH Wertes optional Komponenten wie der Mischer die S ule und das Injektionsventil werden an der rechten Seite angebracht Die S ulen werden in S ulenhaltern arretiert Die Trenneinheit wird von der UNICORN Software aus gesteuert Die Pumpe P 900 der UV 900 Monitor und der UPC 900 Monitor k nnen auch einzeln an den Modulen ohne UNICORN Software gesteuert werden Dies wird in den jeweiligen Handb chern der Komponenten beschrieben 3 1 1 _Str mungsweg der Fl ssigkeiten Der Str mungsweg zwischen den verschied
128. il oder gegeben enfalls zum Fraktionssammler im KTApurifier 10 erh ltlich e _ Kapillarensatz 0 25 G6 G9 PEEK Kapillare blau markiert mit G Bei Lieferung im Werk installiert F r die meisten S ulen verwendet e _ Kapillarensatz 0 50 H6 H9 Tefzel Kapillare durchsichtig markiert mit H F r Niederdrucks ulen bei hohen Durchflussgeschwindigkeiten Kapillarensatz 0 25 und Kapillarensatz 0 50 Das System wird mit eingebautem Kapillarensatz 0 25 geliefert Der Kapillaren satz 0 50 sollte installiert werden wenn S ulen mit niedrigem H chstdruck bei hohen Durchflussgeschwindigkeit verwendet werden Wenn Sie vom zum Kapillarensatz 0 25 zum vom Kapillarensatz 0 50 wechseln tauschen Sie die f r G6 G9 bestimmten Kapillaren mit H6 H9 F r ihre Position im Str mungsweg siehe Str mungsdiagramm im Abschnitt 8 1 5 132 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 Kapillare L nge mm Innen Lage durch messer mm G1 330 0 50 Pumpe P 900A innen zum Mischer G2 330 0 50 Pumpe P 900B au en zum Mischer G3 200 0 50 Mischer zum In Line Filter G4 180 0 50 In line Filter zum Injektionsventil Pos 7 G5 400 0 50 Umgehung Injektionsventil Pos 1 zur UV Zelle Kapillarensatz 0 25 mm G6 160 0 25 UV Zelle zur Leitf higkeitszelle G7 80 0 25 Leitf higkeitszelle zum Durchfluss begrenzer G8 140 0 25 Durchfl
129. ildschirm anzuzeigen ARCHE gt KL Datt 310 T EA h oraina e UNICORN Report Chromatogram Hinzuf gen von Informationen zum Bericht 1 Klicken Sie auf Edit Mode um nderungen im Report zuzulassen 2 Um eine leere Seite zum Bericht hinzuzuf gen klicken Sie auf Add Page 3 W hlen Sie aus dem Men Insert das Element das aufgenommen werden soll Die verf gbaren Elemente sind Freier Text Bild Methode Chromatogramm Dokumentation Auswertungsprotokoll Quantiative Bestimmung und Molek lgr e optional Frac 950 optional KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 87 4 Betrieb 4 8 Anzeigen und Ausdrucken des Ergebnisses Bewegen Sie den Mauszeiger in den Seitenbereich des Fensters Sie werden feststellen dass der Mauszeiger ein zus tzliches Symbol entsprechend der Elementart hat die Sie einf gen m chten Klicken und ziehen Sie um ein K stchen der gew nschten Gr e zu erzeugen Lassen Sie die Maustaste los Ein f r die Art des eingef gten Elements spezifi scher Dialog wird angezeigt W hlen Sie die entsprechenden Elemente im Dialog aus und klicken Sie dann auf OK um das eingef gte Element zu sehen Seitenlayout ndern 1 2 4 8 3 1 88 Wenn Sie das Seitenlayout ndern m chten w hlen Sie Edit Page Setup Der Dialog Page Setup ffnet sich und Sie k nnen zum Beispiel die Seiten gr e und Elemente die in der Kopf oder Fu zeile eingef gt werden sollen a
130. in sowohl im isokratischen als auch im Gradientenmodus und einen Druckbereich von 0 25 MPa 250 bar 3625 psi 8 2 2 UV 900 Monitor Der UV 900 Monitor ist ein Mehrwellenl ngen UV Vis Monitor der die hochentwickelte Technik der Glasfaseroptik verwendet um bis zu drei Wellenl ngen gleichzeitig im Bereich 190 700 nm mit hoher Empfindlichkeit zu ber wachen Die Verwendung der Glasfaseroptik zusammen mit einer einzigartigen Gestaltung der Durchflusszelle gew hrleistet ein hohes Signal Rausch Verh ltnis mit minimalen Drift und Brechungsindex effekten Der UV 900 Monitor besteht aus einer Haupteinheit Glasfasern und einer Auswahl aus zwei Durchflusszellen KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 137 8 Referenzinformationen 8 2 Komponentenbeschreibung 138 8 2 3 _UPC 900 Monitor Der UPC 900 Monitor ist ein kombinierter Hochpr zisions Online Monitorzur Messung O der UV Absorption des pH Werts und der ET Leitf higkeit in der Fl ssigkeitschromato graphie Der UPC 900 bietet feste Wellen n l ngen von 214 Zn Lampe 254 oder 280 nm Hg Lampe schnelle Antwort hohe Genauigkeit und Reproduzierbarkeit und Durchflusszellen mit geringem Totvolumen Weitere Wellenl ngen k nnen unter Verwendung optischer Filter Zubeh r gemessen werden Der UPC 900 Monitor besteht aus einer Steuereinheit einer optischen Einheit mit Lampeneinheit und einer Auswahl von zwei Durchflusszellen L n
131. ines Fraktionssammlers e Schlie en Sie ein UniNet 1 Kabel zwischen dem Monitor UPC 900 Monitor UV 900 und dem Fraktionssammler an e Stecken Sie einen Abschlusswiderstand in die leere UniNet 1 Buchse nur bei Frac 950 4 Wenn Sie keinen Fraktionssammler verwenden stecken Sie einen Ab schnlusswiderstand in die leere UniNet 1 Buchse im Monitor UPC 900 Monitor UV 900 5 Schlie en Sie das USB Kabel an den USB Port an der CU 950 an Beachten Sie dass die CU 950 an der linken Seite des Systems angebracht werden sollte KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 29 2 Installation 2 3 Installation des KTApurifier Schlie en Sie das andere Ende des USB Kabels an der R ckseite des Computers an F r den Anschluss am Computer und die Installation siehe UNICORN Administration and technical manual Alle anderen UniNet 1 Kabel sind bei Lieferung angeschlossen 2 3 10 Anschlie en der Netzkabel WARNUNG KTApurifier darf nur verwendet werden wenn das System ber das Schutzerdungskabel des Netzkabels ordnungsgem mit der Erdung der Hauptspannungsquelle verbunden ist WARNUNG F r Notf lle muss der Netzschalter des Systems immer gut zug nglich sein und der Netzstecker muss immer leicht zu trennen sein WARNUNG Verwenden Sie ausschlie lich die von GE Healthcare gelieferten bzw genehmigten Netzkabel
132. ionen sammeln D rehflussfrakti nierung u ancseserssiganienaheaskhsktiikessesnsaententenene Fraktionierung mit festem Volumen Peak Fraktionierung Fraktionierung mit festem Volumen Fraktionierungsreihenfolge Frac 950 Fraktionssammler Installieren des Frac 920 Installieren des Frac 950 Fraktionssammlung Auen gehenden KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Stichwortverzeichnis G Gradienten zus an sat an San E E E SRE 91 H Hardware Anforderungen Hochheben des Systems l Injektionsventil In line Filter Auswechseln des Filters Installationstest Installieren der CU 950 Installieren des Systems Installieren von Fraktionssammlern K Kalibrierung zu 82 nr ir A O e AA A 111 Kapillaren Auswechseln Empfehlung berblick Kapillarensatz Austauschen berblick Komponenten Beschreibung einsa a nl tal seen 137 Ba 0 HER ER RIES SER A T ANE SERIEN NEUE EREENA EINEN EEAS SSE EE 8 124 L Leistungsaufnahme Leitf higkeitszelle Letzte Pr fungen M Manuelles F llen von Probenschleifen Materialien fl ssigkeitsf hrend Methoden Erstellen Mischer M 925 Fehlerbehebung Mischkammer MiSchVolumina ze Zr ran ARE al EEE AT a a al lhre Module und Komponenten LAGE ee ee EI S S 8 Monitor pH C 900 Kalibrierung N Netzanschl ssesnn essen RR Li 128 Netzwerk Anforderungen eeeeeeennnannes
133. ird Notieren Sie den spezifischen maximalen Gegendruck f r die S ule bei der Variablen Column_PressureLimit auf der Seite Variables Hinweis Der zul ssige maximale Gegendruck bei einer selbstgepackten S ule sollte niemals 75 des w hrend des Packvorgangs ver wendeten Drucks berschreiten Installieren Sie die S ule und testen Sie einen Lauf bei der Durchfluss geschwindigkeit und mit den Eluenten die verwendet werden sollen mit dem Kapillarsatz mit Innendurchmesser 0 75 mm W hlen Sie den entsprechenden Kapillarsatz wie folgt e Wenn der erzeugte Gegendruck bei dem Durchfluss der verwendet werden soll innerhalb des vorgegebenen Druckgrenzwertes der S ule liegt verwenden Sie den bereits installierten Kapillarsatz e Wenn der erzeugte Gegendruck bei der Durchflussgeschwindigkeit die verwendet werden soll weit unter dem vorgegebenen Druckgrenzwert der S ule liegt und das voraussichtliche Peak Volumen weniger als 1 ml betr gt ist es vorzuziehen auf einen engeren Kapillarsatz mit dem Innendurchmesser von 0 5 mm zu wechseln Wenn die Anforderungen an die untere Bandenverbreiterung weniger kritisch sind verwenden Sie den bereits installierten Kapillarsatz KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 e Wenn der erzeugte Gegendruck bei der Durchflussgeschwindigkeit die verwendet werden soll den vorgegebenen Druckgrenzwert der S ule berschreitet wechseln Sie zu einem weiteren Kapil
134. it Na HPO pKa 2 15 7 20 und 12 33 liefert keine genauen pH Werte ber ca pH 7 6 wenn mit HCI titriert KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 157 8 Referenzinformationen 8 5 Einzelheiten zu BufferPrep Umrechnung der scheinbaren pKa in thermodynamische pKa Nur pKa Werte bei thermodynamischen Bedingungen pKa bei unendlicher Verd nnung d rfen in BufferPrep eingegeben werden Wenn Sie eine neue Puffersubstanz eingeben f r die nur der scheinbare pKa bekannt ist muss eine Umrechnung in den thermodynamischen pKa durchgef hrt werden Der scheinbare pKa wird bei einer Konzentration ungleich Null gemessen Sie finden den thermodynamischen pKa Werte indem Sie zum scheinbaren pKa den Wert addieren den Sie in der nachstehenden Tabelle f r die Puffer konzentration finden bei der der scheinbare pKa gemessen wurde Konz M Base pKal Base pKa2 S ure pKal S ure pKa2 0 02 0 05 0 26 0 05 0 26 0 05 0 07 0 37 0 07 0 37 01 0 09 0 47 0 09 0 47 0 2 0 12 0 60 0 12 0 60 Beispiel Bis Tris hat laut Liste einen pKa von 6 46 bei Konzentrationen von 0 1 M Dies ist eine Base mit nur einem pKa Unter Verwendung der obenstehenden Tabelle finden wir dass 6 37 genauere Ergebnisse liefern sollte 6 46 0 09 6 37 Zwitterionen Die Verwendung von Zwitterionen in einem BufferPrep Rezept kann sich schwierig gestalten Alle Zwitterionen haben mindestens zwei pKa Werte Da Buffer
135. it derselben Pufferl sung scheint sich im Lauf der Zeit zu ver ndern M glicher Grund Ma nahme Reinigen Sie die Durchflusszelle entsprechend Monitor UPC 900 User Manual oder Monitor pH C 900 User Manual Vielleicht ist die Umgebungstemperatur gesunken Verwenden Sie einen Temperaturausgleichsfaktor siehe Reference information im Monitor UPC 900 User Manual oder Monitor pH C 900 User Manual St rpeaks erscheinen im Gradientenprofil Eine belastete Probe wurde entdeckt z B Protein Luftblasen str men durch die Durchflusszelle Pr fen Sie die Anschl sse der Kapillaren Verwenden Sie einen Durchfluss begrenzer KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 115 7 Fehlerbehebung 7 4 Leitf higkeitskurve Fehlersymptom Verschiebung der Basislinie oder verrauschtes Signal M glicher Grund Ma nahme Es befindet sich m glicherweise Luft in der Durchflusszelle Pr fen Sie die Anschl sse der Kapillaren auf Undichtigkeiten Pr fen Sie ob die S ule ausreichend quilibriert wurde Reinigen Sie die S ule wenn erforderlich berpr fen Sie die Funktion des Mischers und der Systempumpe Die Funktion des Mischers wird gepr ft indem ein R hrst bchen auf die Oberseite des Mischergeh uses gelegt wird Das R hrst bchen sollte sich drehen wenn sich das System in Modus Run befindet Die Funktionen der Pumpe und des Mischers k nnen auch mittels Durchf hrung des Installationstests ge
136. larsatz mit Innen durchmesser 1 0 mm Wenn der vorgegebene Druckgrenzwert der S ule mit installiertem Kapillarsatz mit einem Innendurchmesser von 1 0 mm immer noch berschritten wird wechseln Sie zum Durchflussbegrenzer FR 902 und pr fen Sie den erzeugten Gegendruck entsprechend der nachstehenden Beschreibung Hinweis Der Gegendruck kann sich z B w hrend der Probeninjektion und Gradientenbildung aufgrund von Schwankungen der Viskosit t erh hen Achten Sie darauf dass diese Schwankungen bei der Auswahl des Innendurchmessers der Kapillare ber cksichtigt werden 8 5 Einzelheiten zu BufferPrep 8 5 1 Erstellen Ihrer eigenen Rezepte 1 W hlen Sie Edit BufferPrep Recipes im Method Editor 2 Klicken Sie auf New um den Dialog New Recipe zu ffnen 3 W hlen Sie eine Puffersubstanz aus der Liste Wenn die ben tigte Puffer substanz nicht aufgelistet ist kann eine neue Puffersubstanz definiert werden siehe Abschnitt 8 5 2 unter Definieren einer neuen Puffersubstanz unten Bis zu 5 Pufferkomponenten k nnen hinzugef gt werden 4 Stellen Sie die Stammkonzentration der Pufferl sung ein Es sollten Pufferkonzentrationen verwendet werden die 2 4 Mal h her im Vergleich zur normalen Zubereitung sind Wenn BufferPrep verwendet wird wird die Pufferl sung 2 10 Mal verd nnt abh ngig von der Menge an S ure Base die verwendet werden muss um den gew nschten pH Wert zu erreichen Wir empfehlen dass die Gesamtkonzentration f
137. laufen Pr fen Sie am Pumpendisplay dass die Druckwerte stabil sind weniger als 0 02 MPa Schwankung KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 35 2 Installation 2 4 Installationstest KTApurifier 100 W hlen Sie manuell einen Gradienten von 100 B aus L nge O und lassen Sie die Pumpe mit 10 ml min destilliertes Wasser laufen Pr fen Sie am Pumpendisplay dass die Druckwerte stabil sind weniger als 0 2 MPa Schwankung Wenn der Druck stabil ist fahren Sie mit Schritt 5 fort Falls nicht befolgen Sie die Anweisungen zur Fehlerbehebung im Pump P 900 User Manual Klicken Sie auf END Pr fen Sie dass die Einlassfilter in die entsprechenden Pufferl sungen A und B gem der nachstehenden Tabelle eingetaucht sind Leitfaden f r den Installationstest Pufferl sung A Destilliertes Wasser 200 ml Pufferl sung B 1 0 iges Aceton in destilliertem Wasser 200 ml Testdurchfluss 5 ml min geschwindigkeit Testlaufzeit Ca 30 Minuten 2 4 2 Durchf hren des Installationstests 1 36 W hlen Sie File Printer Setup im Modul UNICORN Manager W hlen Sie den entsprechenden Drucker aus der Liste aus und w hlen Sie Landscape Klicken Sie dann auf OK um den gew hlten Drucker zu best tigen Print Setup 21x m Printer Name SEUPPBT_FS1 BL52_D_HP4000_Q Properties Status Ready Type HP LaserJet 4050 Series PCL 5e Where SSEUPPBT_FS14BL52_D_HP4000_Q Comme
138. lle hnlich sind wird nur die Bezeichnung KTApurifier verwendet Der Installationstest kann in regelm igen Abst nden durchgef hrt werden zum Beispiel um die F rderleistung des Pumpensystems und die UV Detektion Ihres KTApurifier Chromatographiesystems zu pr fen F r Einzelheiten zu Spezifikation Verfahren Wartung etc siehe User Manuals und Instructions der Komponenten KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 15 2 Installation 2 1 Allgemeines 16 2 1 1 berblick ber den Installationsvorgang KTApurifier auspacken ccaaaeceeeeesaneseeeeneeeeeeeennnnn 18 Gesicherte Teile l sen und beigelegte Teile installieren 18 Computer auspacken und installieren 2 22cccceceen 25 BH E 900NHStalllerenyeee een user een 22 Frac 920 oder Frac 950 installieren 222222222222seeseeenen 25 UniNet M 1 Daten bertragungskabel anschlie en 29 Netzkabel anschlie en 2222222seeseeeeeesesseeneeeennn 30 Die ersten zwei Abschnitte des Installationsprotokolls ausf llen 31 KTApurifier f r den Installationstest vorbereiten 33 Installationstest durchf hren 2222222cseseeseeeeeeenn 36 Gradienten auswerten 222esseeeseeseesseeseeseeeeeeneeeereenn 40 Stufengradient auswerten 22 22ceeeeeeeeeeeeeneneeeeneneenn 40 UV Detektion auswerten 22222seeseeeseeseeeseesenseeeeeeenen
139. mals an den Ventilen an Trennen Sie alle Kabel und Kapillaren die an periphere Komponenten und Fl ssig keitsbeh lter angeschlossen sind ab bevor Sie das System transportieren Entfernen Sie alle Gegenst nde die auf dem System stehen KTApurifier Halten Sie das System fest indem Sie die Finger in die Aussparung zwischen der Drehplattform und der Grundplatte der Haupteinheit legen und heben Sie das System an KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 7 Fehlerbehebung 7 1 Fehler und Ma nahmen Fehlerbehebung 7 In diesem Abschnitt werden die Fehler aufgef hrt die bei bestimmten Monitorkurven und bestimmten Modulen beobachtet wurden Die Fehler und Ma nahmen werden wie folgt aufgef hrt Art Seite UV Kurve 114 Druckkurve 115 Leitf higkeitskurve 115 Pumpe P 900 117 UV 900 Monitor 118 UPC 900 Monitor 118 ischer M 925 119 Ventil INV 907 119 BufferPrep 120 Wenn der Fehler durch die vorgeschlagenen Ma nahmen nicht behoben wird wenden Sie sich an Ihren Vertreter von GE Healthcare vor Ort KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 113 7 Fehlerbehebung 7 2 UV Kurve UV Kurve Fehlersymptom St rpeaks M glicher Grund Ma nahme e berpr fen Sie dass sich keine Luft im Eluenten befindet Entgasen Sie ihn gegebenenfalls e Reinigen Sie das System entsprechend Kapitel 4 e Reinigen Sie die S ule gem den Anw
140. messer Anschlussst ck 1 16 Au engewinde 1 16 7 Au engewinde 0 5 mm Innendurchmesser Durchflussbegrenzer FR 902 5 Kapillare Innendurchmesser 0 25 x 100 mm 4 9 Kapillare Innendurchmesser 0 50 x 100 mm 19 6 Kapillare Innendurchmesser 0 75 x 100 mm 44 2 Kapillare Innendurchmesser 1 0 x 100 mm 78 5 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 135 8 Referenzinformationen 8 1 Systembeschreibung Beispiel Dieses Beispiel zeigt wie das Delay Volumen im KTApurifier UPC 10 ein schlie lich Fraktionssammler Frac 920 auf der Grundlage der Kapillarl ngen auf der vorhergehenden Seite und der Werte in der obenstehenden Tabelle berechnet wird Die Kapillarl nge vom Durchflussbegrenzer zum Auslass am Abgabearm wird mit 1000 mm angenommen Das Kapillarvolumen wird entsprechend dem folgenden Beispiel berechnet Eine 300 mm lange Kapillare mit einem Innendurchmesser von 0 25 mm hat das Volumen 3x 4 9 14 7 ul Berechnung des Delay Volumens Komponente Kapillare L nge Imm Volumen ul Kapillare UV Zelle Leitf higkeitszelle 170 17x49 8 3 Innendurchmesser 0 25 mm Leitf higkeitszelle 24 0 Anschlussst ck 1 16 Au engewinde 1 8 1 16 Au engewinde 0 25 mm nnendurchmesser Durchflussbegrenzer FR 902 5 0 Kapillare FR 902 Fraktionsventilam 700 7x49 410 Frac 920 Innendurchmesser 0 25 mm Fraktionsventil FV 903 113 Kapillare FR 903 Abgabearm am 300 3 x 4
141. mungsschema die offenen Str mungswege und die Monitorsignale mit numerischen Anzeigen Logbook Alle Aktionen und unerwarteten Zust nde wie Warnungen werden f r jeden Lauf mit Angabe des Datums der Uhrzeit und des aktuellen Benutzernamens proto kolliert Das Logbook liefert den vollst ndigen Ablauf jedes vorgegebenen Laufs Das Protokoll wird in der Ergebnisdatei gespeichert Frontdisplay Die Frontdisplays des UV 900 Monitors des UPC 900 Monitors und der Pumpe P 900 k nnen so eingestellt werden dass sie ihren aktuellen Status anzeigen In jedem Fall zeigt das Display f r das Hauptbedienungsmen die wichtigsten Parameter Das Hauptbedienungsmen der Pumpe P 900 zeigt die aktuelle Flussgeschwindig keit zusammen mit der Angabe des Modus des Drucks und B falls verwendet Die verf gbaren Modi sind Run Die Pumpe l uft mit der eingestellten Durchflussgeschwindigkeit End Das System l uft nicht Pause Die Pumpe wurde angehalten aber die eingestellten Werte f r Durchflussgeschwindigkeit und Gradient werden beibehalten Hold Der Gradient wird auf dem angezeigten Wert gehalten und die Pumpe l uft weiter Die Methode wird auf ihrem aktuellen Status gehalten KTApurifier Das Hauptbedienungsmen des UV 900 Monitors zeigt die Absorptionswerte mit 4 Stellen f r bis zu 3 aktive Wellenl ngen Zur Anzeige f r die dritte Wellenl nge gelangen Sie durch Drehen des Einstellrades im Uhrzeigersinn Es ist auch m glich alle drei
142. n Manual Pump auf 100 B f r Target und 0 f r Length Klicken Sie auf Execute 5 Pr fen Sie den pH Messwert wenn er bei 100 B stabil ist 6 Wenn der Messwert sowohl bei 0 als auch bei 100 B akzeptabel ist m ssen die Korrekturfaktoren nicht ge ndert werden 7 Wenn der pH Messwert nicht akzeptabel ist k nnen Sie die Faktoren f r das Rezept korrigieren W hlen Sie Edit BufferPrep Recipes im Method Editor Klicken Sie auf New Klicken Sie im Dialog New Recipe auf Correction factors Geben Sie die pH Abweichung bei O und bei 100 B ein Wenn der pH Wert zum Beispiel auf 7 0 eingestellt ist und der tats chliche pH Wert bei 7 1 liegt geben Sie 0 1 ein oder wenn der tats chliche pH Wert bei 6 9 liegt geben Sie 0 1 ein Hinweis Einige der vorprogrammierten Rezepte haben standardm ige Korrekturfaktoren F gen Sie Ihre Abweichung zu diesen hinzu um den korrekten Wert zu erhalten Beispiel Wenn Ihr voreingestellter Korrekturfaktor 0 2 lautet und Ihr Messergebnis bei pH 7 bei 7 1 liegt geben Sie 0 2 0 1 0 1 ein 8 Klicken Sie auf Save As um das Rezept zu speichern 156 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 8 5 5 Beispiele und Tipps Pufferkapazit t Wenn die Pufferkapazit t f r BufferPrep Rezepte f r einen breiten Bereich zu gering ist gibt es zwei Alternativen e Wechseln Sie zu einem Rezept mit einer Pufferkomponente deren pKa nahe dem ben tigen pH liegt
143. n Anschlussst ck mit Au engewinde Au engewinde verbindet die Leitf higkeitszelle mit dem Durchflussbegrenzer Kapillare L nge Innen Au en Material Farbe 10 cm durch durch Volumen messer der messer der Kapillare Kapillare A1 B1 170 cm 1 6 mm 1 8 Teflon durchsichtig 201 1 ul G1 G2 33 cm 0 50 mm 1 16 PEEK orange 19 6 ul G3 25 cm 0 50 mm 1 16 PEEK orange 19 6 ul G4 30 cm 0 25 mm 1 16 PEEK blau 4 9 ul G5 17 cm 0 25 mm 1 16 PEEK blau 4 9 ul W1 W3 100 cm 0 75 mm 1 16 Tefzel durchsichtig 44 2 ul KTApurifier UPC 100 Die S ule wird entweder unter Verwendung der mit der S ule mitgelieferten Kapillaren oder mit St cken von PEEK Kapillaren die vom Benutzer auf die geeignete L nge geschnitten wurden installiert PEEK Kapillare mit einem Innendurchmesser von 0 75 mm gr n wird mit dem System KTApurifier UPC 100 geliefert Ein Anschlussst ck mit Au engewinde Au engewinde verbindet die Leitf higkeitszelle mit dem Durchflussbegrenzer Kapillare L nge Innen Au en Material Farbe 10 cm durch durch Volumen messer der messer der Kapillare Kapillare A1 B1 170 cm 2 9 mm 1 16 Teflon durchsichtig 660 ul G1 G2 33 cm 0 75 mm 1 16 PEEK Gr n 44 2 u G3 25 cm 0 75 mm 1 16 PEEK Gr n 44 2 u G4 30 cm 0 75 mm 1 16 PEEK Gr n 44 2 u G5 17 cm 0 75 mm 1 16 PEEK Gr n 44 2 u W1 W3 100 cm 0 75 mm 1 16
144. n bei der Fortsetzung zu vermeiden verwenden Sie eine geringere Durchflussgeschwindigkeit nach der Anweisung Watch als vor der Anweisung Watch 5 5 3 Manuelle Anweisungen zur Durchflussregelung Die Durchflussregelung kann auch verwendet werden wenn die Systempumpe manuell verwendet wird Die Anweisungen finden Sie im Modul System Control durch Auswahl von Manual Pump und sie werden in Tabelle 5 1 erkl rt Anweisung SystemPumpControlMode Parameterbeschreibung Zur Aktivierung der Durchflussregelung w hlen Sie PressFlowControl PressLevel ist der zugelassene H chstdruck MinFlow ist die zugelassene Mindestdurchfluss geschwindigkeit SystemPIDParameters Flow_P Flow_I und Flow_D sind die Parameter zur Anpassung der tats chlichen Durchflussge schwindigkeit an die eingestellte Durchflussge schwindigkeit Aktivieren Sie unten den Wert PressLevel Press_P Press_l und Press_D sind die Parameter zur Verringerung der Durchflussgeschwindigkeit und damit zur Verminderung des Drucks unter den Drucksollwert Aktivieren Sie oben den Wert PressLevel Tabelle 5 1 Anweisungen f r die Durchflussregelung KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 103 5 Optionale Funktionen 5 5 Durchflussregelung 104 5 5 4 Optimieren der PID Parameter Die zwei Regler f r die Systempumpe haben separate PID Parameter Die standardm igen PID Parameter in UNICORN liefern eine stabile Durchfluss regel
145. n sowohl f r Reinigungen im kleinen Ma stab als auch im pr parativen Ma stab mit dem KTApurifier verwendet werden Er sammelt bis zu 175 Fraktionen in R hrchen mit einem Durchmesser von 12 mm bis zu 95 Fraktionen in R hrchen mit einem Durchmesser von 10 18 mm und bis zu 40 Fraktionen in R hrchen mit einem Durchmesser von 30 mm Der Frac 920 erm glicht die Fraktionierung mit festgelegtem Volumen und oder automatischer Peak Erkennung Die letztgenannte Funktion basiert auf der Peak Erkennung mit Abtastung der Steigung oder der H he Fraktionsmarkierungen und Fraktionsnummern erleichtern die Identifikation von Fraktionen und Peaks Ein schneller R hrchenwechsel minimiert das Versch tten zwischen den R hrchen und beseitigt es v llig bei Durchflussgeschwindigkeiten unter 5 ml min Die Tropfsynchronisierung verhindert Probenverlust w hrend des R hrchen wechsels Installation 1 Packen Sie den Frac 920 aus und bauen Sie ihn entsprechend den Anweisungen im Fraction Collector Frac 920 User Manual auf KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 25 2 Installation 2 3 Installation des KTApurifier 2 Stellen Sie den Frac 920 an der rechten Seite des Systems auf Mischer Durchfluss begrenzer Injektions ventil V1 Pumpe A Pumpe B Al B1 Probenschleife w2 3 Schlie en Sie eine Kapillare vom Aus lass des Durchflussbegrenzers zum IN Zum Port auf dem Fraktionsventil an Abg
146. n von R hrchenst ndern f r R hrchen mit dem Durchmessern 12 18 und 30 mm und Mikrotiterplatten mit 96 Wells erh ltlich F r den Pr p Modus sind zwei Gr en von St ndern f r R hrchen mit einem Durchmesser von 30 mm und Flaschen mit 250 ml Inhalt erh ltlich Ein Trichter Set f r den Transport der Fraktionen in andere Gef e ist ebenfalls erh ltlich F r die Verwendung des Frac 950 im Pr p Modus ist ein speziell f r die Pr p Mode St nder angefertigter Verteilerarm erforderlich Probenverlust w hrend des R hrchenwechsels kann durch die Verwendung der Tropfsynchronisierung oder mit Hilfe eines eingebauten Akkumulators zur vor bergehenden Fl ssigkeitsspeicherung w hrend der R hrchenwechsel vermieden werden Installation 1 Packen Sie den Frac 950 aus und bauen Sie ihn entsprechend den Anweisungen im Fraction Collector Frac 950 User Manual auf 2 Stellen Sie den Frac 950 auf der Arbeitsfl che an der rechten Seite des KTApurifier auf KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 27 2 Installation 2 3 Installation des KTApurifier 3 Suchen Sie das Kapillaren Set das mit dem Frac 950 geliefert wird und entscheiden Sie ob Sie den Akkumulator f r den Frac 950 nutzen wollen oder nicht 4 Schlie en Sie die Kapillare vom Durchflussbegrenzer zum Frac 950 wie im Frac 950 User Manual beschrieben an Mischer Injektions ventil V1 Frac 950 5 Schlie en Sie die mitgelieferte Abfallleit
147. ndet wird e als einzeln stehende Einheit verwendet wird e in demselben Zustand verwendet wird in dem es von GE Healthcare geliefert wurde Ausgenommen davon sind die in diesem Handbuch beschriebenen nderungen e an andere Module von GE Healthcare oder ander empfohlene Produkte an geschlossen ist die ebenfalls mit dem CE Symbol gekennzeichnet sind Sicherheitsstandards Dieses Produkt erf llt die Anforderungen der geltenden Niederspannungsrichtlinie NSR 73 23 EWG durch die folgenden harmoni sierten Standards e EN61010 1 e EC 61010 1 e CAN CSA C22 2 No 61010 1 e UL61010 1 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 165 8 Referenzinformationen 8 6 Technische Spezifikationen 166 EMC Standards Dieses Produkt erf llt die Anforderungen der EMC Richtlinie 89 336 EWG durch die folgenden harmonisierten Standards e EN 61326 Emission und St rfestigkeit e EN 55011 GR 1 Klasse A Emission Dies ist ein Produkt der Klasse A In h uslicher Umgebung kann es Funkst rungen hervor rufen wogegen der Benutzer geeignete Gegenma nahmen zu ergreifen hat Dieses Produkt entspricht Teil 15 der FCC Regeln Emission Der Betrieb unterliegt den folgenden zwei Bedingungen e Dieses Ger t darf keine sch dlichen St rungen verursachen e Dieses Ger t muss sicher gegen St rungen sein speziell gegen St rungen die ein Fehlverhalten des Ger ts ver ursachen k nnen 8
148. nen BufferPrep ist f r die Verwendung bei der Entwicklung von Methoden f r die lonenaustauschchromatographie optimiert kann aber auch f r die Gr en ausschluss und f r die Affinit tschromatographie verwendet werden Die vier Stamml sungen bestehen aus 1 Einer Mischung der Pufferkomponenten Bis zu f nf verschiedene Puffer komponenten mit bis zu jeweils drei pKa Werten die die Abdeckung eines breiten pH Bereichs erlauben 2 Einer S ure HCI oder Base NaOH f r die Titration des pH Werts in der Leitung 3 Destilliertem Wasser 4 Einem inerten Salz z B NaCl oder KCI f r die Bildung des Elutionsgradienten KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Optionale Funktionen 5 BufferPrep gleicht die pKa Verschiebung mit ver nderter Ionenst rke und Temperatur aus Eine Reihe vorgegebener Rezepte sind vorhanden Es k nnen auch neue Rezepte erstellt werden siehe Abschnitt 8 5 Der pH Wert wird ausgehend vom Pumpenmodul A und die Salzkonzentration ausgehend vom Pumpenmodul B erzeugt Die Stamml sungen die die Mischung der Pufferkomponenten und das HCI oder NaOH enthalten werden an das Pumpen modul A angeschlossen Die Stamml sungen die das Salz und das Wasser enthal ten werden an das Pumpenmodul B angeschlossen Ein Umschaltventil an jedem Pumpenmodul zusammen mit den BufferPrep Algorithmen erzeugt die korrekten Mischverh ltnisse f r den eingestellten pH Wert Jedes Pumpenmodul liefert 50 de
149. ngssatz 100 ml 1 18 1114 40 Kapillaren f r Pumpenkopf 100 ml zwei Kapillaren 1 18 1117 52 f r ein Pumpenmodul Sp l Ablaufgeh use 100 ml 1 18 1112 03 Pumpenkopf 100 ml komplett 1 18 1128 48 Pumpe P 903 Pumpe P 903 1 18 3000 00 Dichtungssatz 10 ml einschlie lich 1 18 1120 77 2 Kolbendichtungen 2 Sp lmembranen un 2 O Ringe Kolbensatz 10 ml 1 18 1120 75 Einlassleitungssatz 10 ml 1 18 1119 26 Kapillaren f r Pumpenkopf 10 ml zwei Kapillaren f r aR 18 1120 81 ein Pumpenmodul Sp l Ablaufgeh use 10 ml 1 18 1120 76 Pumpenkopf 10 ml komplett 1 18 1128 47 Pumpen P 901 und P 903 Schlauchsatz f r Hinterkolbensp lung 1 18 1113 32 Entl ftungssatz 2 18 1124 53 Entl ftungsventil 1 18 1128 87 O Ring f r Entl ftungsventil 10 19 0036 01 Sperrventilsatz einschlie lich 1 18 1128 66 1 Einlasssperrventil 1 Auslasssperrventil KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 171 8 Referenzinformationen 8 8 Bestellinformationen 172 Artikel Menge Code Nr Packung UPC 900 Monitor UPC 900 Monitor 1 18 1128 95 HG Lampe und Geh use komplett 1 18 1128 22 Zn Lampe und Geh use komplett 1 18 1128 23 UV Durchflusszelle mit 5 mm iR 18 1128 24 UV Durchflusszelle 2 mm 1 18 1128 25 Filter 214 nm 1 18 0622 01 Filter 254 nm 1 18 0620 01 Filter 280 nm 1 18 0621 01 Filter 313 nm 1 18 0623 01 Filter 365 nm 1 18 0624 0
150. njektionsventilport 6 an Betrieb 4 Achten Sie darauf dass alle Anschl sse mit der Hand fest angezogen werden F llen des Superloop Das F llen des Superloop wird wie folgt erreicht 1 2 Stellen Sie das Injektionsventil auf die Position INJECT Starten Sie die Pumpe P 900 und lassen Sie sie laufen bis die bewegliche Dichtung den Boden des Superloop erreicht hat Stoppen Sie die Pumpe P 900 und stellen Sie das Injektionsventil auf die Position LOAD Laden Sie eine gro volumige Spritze mit Probe Laden Sie den Inhalt der Spritze vorsichtig durch Port 3 in den Superloop Lassen Sie die Spritze in dieser Position Die geladene Probe kann auf einmal oder in mehreren kleinen Volumina injiziert werden bis zu Portionen von 1 ml Das zu injizierende Volumen wird ber die Variable Empty_loop_with im Block Sample_Injection eingestellt Die Probe wird auf die S ule aufgebracht wenn das Injektionsventil auf INJECT gestellt wird Wenn das erforderliche Volumen injiziert wurde stellen Sie das Ventil auf LOAD WARNUNG Achten Sie darauf dass die obere Druckgrenze des Systems niedriger ist als der zugelassene H chstdruck des Superloop KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 69 4 Betrieb 4 5 Vorbereiten des Systems f r einen Lauf 4 4 3 Mischen von Gradienten Es gibt zwei verschiedene Techniken zum Mischen von Gradienten Bei der Stand
151. nstallation 2 5 Testprotokoll 2 5 Testprotokoll Datum e A ERE Seriennummer KTApurifier u 2 5 1 Ergebnis Gradiententest Gradient linear von WB biS B 10 90 2 5 2 Ergebnis Stufengradiententest Stufengradiententabelle 1 2 3 4 5 Programmierte Abgelesener Um Basislinie Wert nach Zugelassenes Konz B Wert korrigierter Normalisierung Intervall Wert 100 95 94 96 70 69 71 30 29 31 5 4 6 0 2 5 3 Ergebnis des UV Detektions Tests UV Detektions Tabelle 1 2 3 4 5 Wellenl nge Abgelesener Wert Um Absorptions Zugelassenes nm Basislinie verh ltnis Intervall 100 B 0 B korrigierter Wert 254 265 254 1 11 1 26 265 265 280 1 26 1 53 280 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Installation 2 2 6 Registrationsformular WICHTIG INFORMATIONEN ZUR GARANTIEREGISTRIERUNG Stellen Sie bitte sicher dass dieses Formular ausgef llt und an Service Administration zur ckgesandt wird damit das Ger t des Benutzers f r die Garantie registriert wird Te La ale RE E ER NERE anne errang E E E E E EOT Instit t Unternehmen ennaii teenaa eaS Ea raaa a aa a inate Eeoa oae SEE E Ea iaaa ETEek Adresser hene E E E E E E E RAIE E EEr aR EE Abteilung Standort nseri nirin E E N ARNa RE a a Postleitzahl a ee nr aE A a ER sell Gir aiii Telefonnummer ssssssssesesssesesreesreessserssseesreee
152. nt m Paper Orientation Size Ad X Portrait Source Auto Select 7 Landscape Network OK Cancel Nemo ema KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Installation 2 2 W hlen Sie File Instant Run im Modul System Control Das Fenster Instant Run ffnet sich InstamtRun x 3 W hlen Sie das entsprechende System aus der Liste For system 4 Klicken Sie auf Run Der Method Wizard wird gestartet 5 W hlen Sie Installation_Test in der Liste Main Selection und klicken Sie auf Run Meihod Wizard fon System UPC_I0 6 W hlen Sie im Fenster Evaluation Procedures die Methode f r Ihr System zum Beispiel e InstPurifier_UPC f r KTApurifier e InstBasic_UPC f r KTApurifier UPC e Klicken Sie auf Next 7 Klicken Sie auf Next im Fenster Method Information 8 Klicken Sie auf START im Fenster Result Name Der Fortschritt des Tests wird im Modul System Control berwacht Die Ausf hrungszeit des Installationstests betr gt ca 30 min KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 37 2 Installation 2 4 Installationstest Wenn der Test abgeschlossen ist druckt der Drucker automatisch das Chromatogramm und die Testergebnisse aus Installation Tesi 1 Ergebnis j j E rc en Ergebnis Stufengradient Anpassen des Fensters Curves Zum Anpassen des Fensters Curves 1 Klicken Sie mit der rechten Maustaste in das Fenster Curves und w hlen Sie Prop
153. nter File um das Chromatogramm zu drucken 9 KTApurifier Lesen Sie die Absorption f r die Plateaus ab die 0 B und 100 B f r die Kurve Installation Test01 1_UV1_215nm 01 SMTH ent sprechen und tragen Sie die Werte in die Spalte 2 in der UV Detektions Tabelle des Testprotokolls ein Auswerten des Gradienten Legen Sie ein Lineal an den Gradiententeil der Kurve KTApurifier KTApurifier UPC Installation Test01 1_UV1_215nm 01 5MTH Installation Test01 1_UV 01 5MTH im ausgedruckten Bericht an Die Kurve sollte zwischen 10 B und 90 B linear und frei von Unstetigkeiten sein Auswerten des Stufengradienten Berechnen Sie die relativen Absorptionsplateauh hen f r die Kurve KTApurifier KTApurifier UPC Installation Test01 1_UV1_215nm 01 5MTH Installation Test01 1_UV 01 5MTH wie folgt e _ Subtrahieren Sie den Basislinienwert 0 B von jedem der Werte in Spalte 2 in der Stufengradiententabelle des Testprotokolls siehe Seite 42 und tragen Sie die Ergebnisse in Spalte 3 ein e _ Dividieren Sie jeden Wert in Spalte 3 durch den um die Basislinie korrigierten Wert der 100 B entspricht multiplizieren Sie das Ergebnis mit 100 und tragen Sie das Ergebnis in Spalte 4 ein Die Werte der Spalte 4 sollten alle in den in Spalte 5 angegebenen Intervallen liegen KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Installation 2 KTA purifier Auswerten der UV Detektion Berechnen Sie die UV Detektions Verh
154. onierung mit festem Volumen Fraktionierung mit festem Volumen erm glicht es Ihnen feste Volumina Fraktionsvolumen w hrend der Elution zu sammeln Injektions l23ase7 markierung Die Parameter sind auf der Seite Elution Fractionation im Method Wizard zu finden Fraktionsvolumen Peak Fraktionierung Peak Fraktionierung bedeutet dass nur die Peaks Peak Fraktionierungs Volumen w hrend der Elution gesammelt werden Es gibt z zwei Arten zum Sammeln von Peaks B e Jeder Peak wird in einer Fraktion gesammelt Die Peak Gr e wird auf ein Volumen ein gestellt Peak Fraktionierungs Volumen das gr er ist als das tats chliche Peak Volumen UV Startneigung UV Endneigung Injektions 1 2 markierung e Jeder Peak wird in verschiedenen Fraktionen gesammelt Die Peak Gr e wird auf ein Volumen eingestellt Peak Fraktionierungs Volumen das kleiner ist als das tats chliche Peak Volumen Die Peak Fraktionierung wird auf der Seite Elution Fractionation im Method Wizard ausgew hlt Die Parameter sind auf der Seite Peak Fractionation zu finden Beispiele f r Parameter der Peak Fraktionierung sind e Start und Endpunkte der zu sammelnden Fraktionen die Neigung oder die H he der UV Kurve e zu sammelnde Mindest Peak Breite e Peak Fraktionierungs Volumen Siehe UNICORN User manuals f r weitere Informationen zu den Eigenschaften der Peak Neigungen und H hen KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe
155. or C 10 2 7 76 36 911 Die Ergebnisdatei eines Laufs umfasst ein vollst ndiges Protokoll des Laufs einschlie lich Methode Systemeinstellungen Kurvendaten und Laufprotokoll KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 83 4 Betrieb 4 8 Anzeigen und Ausdrucken des Ergebnisses Hinweis Originaldatenkurven k nnen niemals ver ndern umbenannt oder aus Anzuzeigende Kurven anhaken 84 einer Ergebnisdatei gel scht werden Maximieren Sie das Fenster Chromatogram durch Klicken auf das Quadrat in der oberen rechten Ecke Alle Ver nderungen in Bezug auf die Darstellung der Kurven werden im Fenster Chromatogram Layout vorgenommen Setzen Sie den Cursor in das Fenster Chromatogram Klicken Sie mit der rechten Maustaste und w hlen Sie Properties oder w hlen Sie Edit Chromatogram layout um dieses Fenster zu aktivieren Curve Style and Color Edit Texts Layout Library Header Curve Names l Y Axis l X Axis Curve Peak Table Select curves to display M01 Example Result002 1_UV 05 Example Result002 1_Cond 06 Example Result002 1_Conc 007 008 Example Result002 1_Pressure 09 Example Result002 1_Flow 110 Example Result002 1_Temp 11 Example Result002 1_Fractions 112 Example Result002 1_Inject M17 Example Result002 1_UVY 01 BASEM 018 013 Clear Select all I Apply to all chromatograms Avbryt Help W hlen Sie die Kurven die angezeigt werden sollen
156. or pH C 900 Auspacken des pH C 900 1 Packen Sie den Monitor pH C 900 aus und stellen Sie ihn entsprechend den Anweisungen im Monitor pH C 900 User Manual auf 2 Stellen Sie den Monitor pH C 900 in den KTApurifier Installieren der Leitf higkeitszelle 1 Setzen Sie die Leitf higkeitszelle in ihren Zellenhalter oder an einen ge eigneten Platz so nahe wie m glich an der optischen Einheit S ule Die Zelle kann bis zu 1 5 m vom Geh use des Monitors entfernt positioniert werden 2 Schlie en sie die Leitf higkeitszelle an die Buchse Conductivity Flow Cell Leitf higkeitsdurchflusszelle an der R ckseite des Monitors an 3 Schlie en Sie die Leitung mit den Verbindungsst cken an die von Hand an gezogen werden Die Durchflusszelle selbst hat keine empfohlene Flussrich tung Bei Verwendung in Verbindung mit der pH Elektrode platzieren Sie die Leitf higkeitsdurchflusszelle und w hlen Sie ihre Durchflussrichtung so dass das Schraubenkopfende der Durchflusszelle zur pH Durchflusszelle zeigt in KTApurifier Systemen ist die pH Elektrode optional KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Installation 2 2 3 4 Installieren einer pH Elektrode optional Die pH Elektrode muss in einer getrennten pH Durchflusszelle eingebaut werden die die pH Elektrode selbst sowie eine Dummy pH Elektrode aufnimmt Die Dummy pH Elektrode ersetzt die pH Elektrode wenn die pH Elektrode aus dem System entfernt werden muss z B zur
157. pe bei 10 ml min mit Wasser laufen Notieren Sie den Gegendruck Bp1 am Pumpendisplay oder im Fenster Run Data 4 Schlie en Sie den Durchflussbegrenzer an das offene Ende der Kapillare an beachten Sie die Markierung IN Setzen Sie den Durchflussbegrenzer in den Abfallbeh lter 5 Lassen Sie die Pumpe bei 10 ml min mit Wasser laufen Notieren Sie den Gegendruck Bp2 auf dem Pumpendisplay oder im Fenster Run Data 6 Berechnen Sie den Gegendruck Bp2 Bp1 des Durchfluss begrenzers Wenn er nicht innerhalb der Grenzwerte liegt wechseln Sie ihn aus oder wenden Sie sich an GE Healthcare KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 107 6 Wartung 6 1 Regelm ige Wartung Abstand Alle 3 Monate Ma nahme UV 900 Monitor e Pr fen Sie die Zelle und die Glasfaseranschl sse gem Kapitel 4 im Monitor UV 900 User Manual UPC 900 Monitor e Pr fen Sie das Ger t entsprechend Kapitel 4 im Monitor UPC 900 User Manual Alle 6 Monate UV 900 Monitor e Pr fen Sie das Ger t entsprechend Kapitel 4 im Monitor UV 900 User Manual UPC 900 Monitor e Reinigen Sie die Durchflusszelle entsprechend Kapitel 4 im Monitor UPC 900 User Manual Mischer M 925 e Pr fen Sie dass die Mischkammer sauber und nicht besch digt ist Pr fen Sie die Anschl sse der Kapillaren Ersetzen Sie sie gegeben enfalls J hrlich Ventil INV 907 e berpr fen Sie das Ventil auf u ere und ode
158. pr ft werden Reinigen Sie die Durchflusszelle entsprechend Monitor UPC 900 User Manual Wellen auf dem Gradienten berpr fen Sie dass die Pumpe und die Ventile korrekt funktionieren und korrekt programmiert sind Wechseln Sie gegebenenfalls zu einem gr eren Mischvolumen berpr fen Sie die Funktion des Mischers Die Funktion des Mischers wird gepr ft indem ein R hrst bchen auf die Oberseite des Mischergeh uses gelegt wird Das R hrst bchen sollte sich drehen wenn sich das System in Modus Run befindet Die Funktion des Mischers kann auch mittels Durchf hrung des Installationstests gepr ft werden Nichtlineare Gradienten oder langsame Antwort auf nderungen des B berpr fen Sie dass die Kapillaren ordnungsgem gereinigt wurden und dass die Pumpe funktioniert Wenn ein gr erer Mischer als die Standardkammer mit 0 6 ml verwendet wird versuchen Sie auf ein kleineres Mischvolumen umzusteigen Falsche oder instabile Messung Pr fen Sie dass das Kabel der Leitf higkeitsdurchflusszelle ordnungsgem an der R ckseite des Monitor angeschlossen ist berpr fen Sie ob die Pumpe korrekt funktioniert Wenn ein Temperaturausgleich verwendet wird pr fen Sie ob der Temperatursensor kalibriert ist und ob der korrekte Temperaturaus gleichsfaktor verwendet wird Pr fen Sie ob die S ule ausreichend quilibriert wurde Reinigen Sie die S ule wenn erforderlich berpr fen Sie
159. r eingestellten Gesamtflussrate B1 Wasser zstamml sung A2 S ure Base A1 Pufferstamml sung Pumpenmodul A Um einen eingestellten pH Wert zu erreichen werden die Pufferstamml sung und die Stamml sung mit der S ure Base mit dem Umschaltventil in einem Verh ltnis gemischt das von den Puffersubstanzmerkmalen beim eingestellten pH Wert abh ngt Ein Beispiel f r die Mischverh ltnisse zwischen den zwei Stamml sungen wird nachstehend gezeigt Mischverh ltnisse im Pumpenmodul A bei Pufferl sung 6 SAUTE verschiedenen pH Werten 0 50 25 25 50 0 4 7 10 pH Wert Beachten Sie dass die Form der Mischverh ltniskurve sich f r verschiedene Puffersubstanzen unterscheidet KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 93 5 Optionale Funktionen 5 2 BufferPrep 94 vavea vave B mm g E Pumpenmodul B Um den eingestellten Gradienten zu erreichen werden die Eluentenstamml sung und Wasser mit dem Umschaltventil in einem Verh ltnis gemischt das von der programmierten Eluentenkonzentrationsvariation w hrend der Elution abh ngt Mischverh ltnisse im Pumpenmodul B w hrend eines S ure Elutionsgradienten Pufferl sung 0 50 25 25 50 0 0 50 100 pH Wert 5 2 2 Installieren des BufferPrep Satzes Der BufferPrep Satz enth lt e zwei Ventile mit Ventilhaltern e Leitungen und Anschl sse f r KTApurifier 10 Innendurchmesser 1 6 mm gelbe Endringe
160. r innere Undichtig keiten Wechseln Sie die Verteilerplatte j hrlich oder bei Bedarf Siehe Kapitel 4 in den Instructions des Ventils Alle 2 Jahre Mischer M 925 e Wechseln Sie die komplette Mischkammer aus 108 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Wartung 6 Abstand Ma nahme Bei Bedarf Pumpe P 900 e Wechseln Sie die Kolbendichtungen aus Siehe Kapitel 4 im Pump P 900 User Manual e Wechseln Sie den Kolben aus Siehe Kapitel 4 im Pump P 900 User Manual e Reinigen oder wechseln Sie die Einlass oder Auslass Sperrventile Siehe Kapitel 4 im Pump P 900 User Manual e Kalibrieren Sie den Drucksensor Siehe Abschnitt 6 4 unter Kalibrierungsverfahren UPC 900 Monitor e Reinigen Sie die Durchflusszelle entsprechend Kapitel 4 im Monitor UPC 900 User Manual e _ Kalibrieren Sie den Temperatursensor beim Auswechseln der Leitf higkeitszelle Siehe Abschnitt 6 4 unter Kalibrierungsverfahren e Geben Sie beim Auswechseln der Leitf higkeitszelle eine neue Zellkonstante ein Siehe Abschnitt 6 4 unter Kalibrierungsverfahren e Kalibrieren Sie die Zellkonstante wenn eine spezifische Leitf higkeit mit hoher Genauigkeit gemessen wird Siehe Abschnitt 6 4 unter Kalibrierungsverfahren In line Filter e Wechseln Sie den In Line Filter aus 6 2 Reinigen der Oberfl che des Systems Die Oberfl che des Systems sollte trocken und sauber gehalten
161. rbunden WARNUNG Verwenden Sie ausschlie lich die von GE Healthcare gelieferten bzw genehmigten Netzkabel Die Netzanschlusssicherung befindet sich rechts vom Netzanschluss Um den Sicherungshalter zu ffnen nachdem Sie zuerst die Stromversorgung zum System unterbrochen haben verwenden Sie einen flachen Schraubendreher um den Halter herauszuhebeln 128 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 8 1 5 Str mungsweg Das nachstehende Bild zeigt die Positionen der Komponenten und Kapillaren im KTApurifier F r ihre Positionen im Str mungsweg siehe Str mungsdiagramm KTApurifier KTApurifier UPC S ule Injektions ventil INV 907 N zwi 0 B Mischer M 925 an Mischkammer Mischer M 925 Pumpe A Pumpe B Pumpe A Pumpe B i Durchflussbegrenzer Mischkammer G7 H7 In Line Filter Senn A Durchflussbegrenzer Mischer G2 G9 H9 Injektionsventil V1 Zum Fraktions sammler A2 Nr w2 6 Auslassventil SB vai F3 Abb 8 6 Str mungsdiagramm KTApurifier KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 129 8 Referenzinformationen 8 1 Systembeschreibung G1 Pumpe A A1 130 Pumpe B G2 G3 G4 2 pH option
162. rifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 7 Laden Sie den Inhalt der Spritze vorsichtig in die Probenschleife 8 Lassen Sie die Spritze in dieser Position Die Probe wird auf die S ule injiziert wenn das Ventil w hrend der Methode auf INJECT umgeschaltet wird Hinweis Wenn die Spritze entfernt wird bevor die Probe auf die S ule injiziert wurde kann es zu einer Selbstentladung kommen und die Schleife wird entleert Vollst ndige F llung Bei dieser Methode wird ein Zuviel an Probe verwendet um sicherzustellen dass die Probenschleife vollst ndig gef llt wird Verwenden Sie f r die analytische Reproduzierbarkeit ein Probenvolumen das f nfmal gr er als das Volumen der Probenschleife ist Ca 2 bis 3 Schleifenvolumina der Probe sind erforderlich um 95 des maximalen Schleifenvolumens zu erreichen F nf Schleifenvolumina stellen eine verbesserte Genauigkeit sicher Bei vollst ndiger F llung kann das Probenvolumen nur durch einen Wechsel der Schleifengr e ver ndert werden Die vollst ndige F llung wird wie folgt erreicht 1 Stellen Sie das Injektionsventil auf die Position LOAD 2 Laden Sie die Spritze mit der Probe 2 5 Faches des Schleifenvolumens 3 Laden Sie den Inhalt der Spritze vorsichtig in die Probenschleife 4 Lassen Sie die Spritze in dieser Position Die Probe wird auf die S ule injiziert wenn das Ventil w hrend der Methode auf INJECT umgeschaltet wird Hinweis Wenn die Spritze ent
163. rwendung von gef hrlichen Chemikalien alle geeigneten Schutzma nahmen z B Tragen von Schutzbrillen und Hand schuhen die gegen ber den verwendeten Chemikalien resistent sind Befolgen Sie alle vor Ort geltenden Vorschriften und Anweisungen zum sicheren Betrieb und zur Wartung des Systems KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 53 4 Betrieb 4 1 Inbetriebnahme des Systems 54 4 1 Inbetriebnahme des Systems WICHTIG Lesen Sie vor der Verwendung des KTApurifier alle Sicherheits informationen in Kapitel 1 3 Sicherheit 4 1 1 Voraussetzungen Stellen Sie vor Beginn eines Laufs sicher dass e das System und die Software installiert sind und funktionieren e die Monitore und Pumpen getestet wurden Dies wird in Kapitel 2 Installation beschrieben 4 1 2 Inbetriebnahme des Systems Zur Inbetriebnahme des Systems 1 Schalten Sie die Trenneinheit mit dem Netzschalter links an der Grundplatte ein 2 Schalten Sie den Computers das Display und den Drucker ein 3 Starten Sie UNICORN Siehe Abschnitt 3 3 1 Starten von UNICORN KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 4 2 Erstellen einer Methode Die UNICORN Steuersoftware wird mit einem Method Wizard geliefert der zur Erstellung neuer Methoden verwendet wird Der Method Wizard besteht aus einer Reihe von Dialogen in denen Sie Fragen beantworten und Anweisungen dazu erhalten wie Sie Ihre Methode erstellen k nnen
164. rzeichnis T Technische Spezifikationen Teilf llung von Probenschleifen Transportieren des Systems U UniNet 1 UniNet 2 UPC 900 Monitor Fehlerbehebung UV 900 Monitor 137 162 172 Variablenwert ndern Ventil INV 907 Fehlerbehebung Ver ndern der Parameter w hrend eines Laufs snennenennennnnenene 81 Verbrauchsartikel Vollst ndige F llung von Probenschleifen Vorbereiten der Str mungswegkomponenten Vorbereiten des Systems f r einen Lauf eessesoesessssssssssssssssssnsnennenennennnnnneee Ww Lo 0 1 APAPS TE EE TENES BEEE EEEE ESES AA EEE EET 105 Z Zubehor mner tei nearen en mine 171 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 183 Stichwortverzeichnis 184 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB www gehealthcare com lifesciences GE Healthcare Bio Sciences AB Bj rkgatan 30 SE 751 84 Uppsala Schweden GE Imagination at Work und das GE Monogramm sind Warenzeichen der General Electric Company Drop Design Capto GSTPrep GSTrap HiLoad HiPrep HiTrap HisPrep HisTrap Mabselect SuRe Mini Q Mini S Mono Q Mono S Mono P RESOURCE SOURCE Sephacryl Sepharose Superdex Superose Superloop UNICORN KTA und KTApurifier sind Warenzeichen von Unternehmen von GE Healthcare Microsoft und Windows sind entweder Marken oder eingetragene Marken der Microsoft Corporation in
165. s 8 3 Optionale Konfigurationen ueeene 84 Empfohlene Kapillaren und S ulen 85 _ Einzelheiten zu BufferPrep us 86 Technische Spezifikationen e 87 Chemische Best ndigkeit und chemische Vertr glichkeit 168 88 _ Bestellinformationen eneennn 171 Stichwortverzeichhisa e ee 179 Zu diesem Handbuch Dieses Handbuch beschreibt den Betrieb des KTA purifier und KTApurifier UPC 10 und 100 Sofern nicht im Text ausdr cklich angegeben ist die Beschrei bung f r alle diese Systeme gleich Die wenigen Unterschiede werden mit unter schiedlicher Schriftart hervorgehoben Sie finden auch eine Beschreibung der Installation des Systems Anweisungen zur Systemwartung und Fehlerbehebung in diesem Handbuch KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Einleitung 1 1 Einleitung 1 1 Allgemeines KTATMpurifier ist ein automatisiertes Fl ssigkeitschromatographiesystem zur Ver fahrensentwicklung und f r Forschungsanwendungen Das System vereinfacht den bergang von der Herstellung im Labor zur Gro fertigung Die Ma stabsver gr erung f r die Produktion ist vorhersehbar und problemlos Zwei Versionen sind erh ltlich KTApurifier mit UV 900 Monitor f r Mehrwellenl ngen Detektion und KTApurifier UPC mit UPC 900 Monitor f r eine kombinierte Messung von UV Absorption pH Wert und Leitf higkeit Hinweis Wenn die Anweisungen oder Spezifikationen f r beide Modelle hnli
166. scheinen w hrend der Initialisierung Einige der Seiten werden nachstehend kurz beschrieben Wenn Sie mit einer Seite fertig sind klicken Sie auf Next um zur n chsten Seite zu gelangen Wenn Sie Frac 950 verwenden erscheint die Seite Frac 950 wenn sie im Start Protocol ausgew hlt wurde Auf der Seite Frac 950 k nnen Sie die Reihenfolge der Fraktionierung bestimmen und das letzte verwendete R hrchen einstellen Das System wird angehalten wenn das letzte R hrchen erreicht ist und die Fraktionierung stoppt KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 Frac 9350 x pa 260000908 Se o0o ss crus 080060000388 ERa LIIIIIIIIIIT ca JELEIT 2900926096888 GOOCCHH0O88S NN 60829608808 ETHUEE9958E GUEEEBEHO08 Hack 18 amp 30 mmTubes I Define Inbetppe 2080888608688 i al TAO a Help lt Back Cancel 4 Die Seite Variables ist dieselbe wie im Method Editor Hier k nnen Sie die Methode best tigen und Feinabstimmungen vornehmen bevor Sie fort fahren Dies ist sehr praktisch wenn Sie L ufe mit kleinen Anpassungen wiederholen Va abe Vawe Range om O pes Flow_Rate Flow_Rate ml min 5 00 0 00 20 00 Coum Vahe eoum Posin f m Fiii Raen res Beier Too Eon ta Foo E Do so0am EEE EEE I EEE S ef I Show details T Show unused variables IV Display tooltip for extended variable cells Help
167. seln Sie sie aus wenn n tig Pr fen Sie die Mischkammer Wechseln Sie sie aus wenn Fl ssigkeit durch die W nde und Dichtungen der Mischkammer gedrungen ist Funktionstest Pr fen Sie die Funktion des Mischers indem Sie ein R hrst bchen auf die Oberseite des Mischergeh uses legen Das R hrst bchen sollte sich drehen wenn sich das System in Modus Run befindet Die Funktion des Mischers kann auch mittels Durchf hrung des Installationstests gepr ft werden 7 9 Ventil INV 907 Fehlersymptom Das Ventil schaltet nicht um M glicher Grund Ma nahme berpr fen Sie Verbindungen zur Pumpe Das Ventil sollte an der Buchse UniNet 2 angeschlossen sein berpr fen Sie den ID Schalter am Ventil Die ID Nummer sollte der in UNICORN eingestellten Nummer entsprechen Pr fen Sie das UniNet Kabel und wechseln Sie es gegebenenfalls aus Das Ventil schaltet in die falsche Position Die Ventilteile wurden vielleicht nach dem Auswechseln falsch zusammengebaut Pr fen Sie ob die Markierung 3 der Verteilerplatte horizontal liegt Siehe entsprechende Instructions des Ventils KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 119 7 Fehlerbehebung 7 10 BufferPrep Fehlersymptom M glicher Grund Ma nahme Undichtigkeit au en e Pr fen Sie die Anschl sse der Kapillaren Ziehen Sie sie an oder wechseln Sie sie aus wenn n tig Undichtigkeit innen e Eine Undichtigkei
168. sessessssssssssssssssnnnnnnennnnnnnnnnnnnneeneensessssesssssssnnnnnnnnne 166 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 181 Stichwortverzeichnis 182 P Ps k Fraktionierungs us sanken E det 61 PH Durchflusszelle Installation re u AAEE AEEA EE EEEE 23 pH Elektrode Betrieb Einbau pH Scouting Physikalische Daten PID Durchflussregelung Optimieren der Parameter pKa echt und scheinbar Probenaufgabe Mit einer Probenschleife berblick Probenschleifen Vollst ndige F llung 102 104 67 160 Pufferrezepte Puffersubstanzen 154 Pumpe P 900 137 R Regelm ige Wart ng au 105 Reinigen der Oberfl che des Systems 109 a 110 Reinigen des Systemstr mungsweges S S ule hinzuf gen Scouting Seite essssnnnnenennennnnnneeneneee 100 S ulen und Kapillaren S ulenhalter Schild mit den elektrischen Anschlusswerten Schilder Scouting Ergebnisdatei Scouting der Durchflussgeschwindigkeit Scouting Schema Scoutingvariablen icherheitsinformationen icherheitsstandards cherung oftware Anforderungen pezifikationen art protocol r mungsschema r mungsweg Superloop Anschlie en Beschreibung F llen Systembeschreibung Systemvorbereitung Austauschen des Kapillarensatzes nnuuuuueeee 132 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Stichwortve
169. sseeesreeeseee Fa NUMMEP Sanan its Benutzern neigen E Mdllanun aeg Datum der Installation eeenenssesesesesensnensenenenenen Angebots Nr siriana Kundenauftrags Nr se ssssssessssssesssrssesseessesssessesseess Rechnungs Nr sssesssesssesssssssesssesssesssesssesseessesreesseesees Support Vertrag mit dem Ger t erworben J N Wenn JA bitte Einzelheiten angeben neen Inst lliert von Namel i uasssssissesikenseinaun seinen el Unterschrift der Person die die Installation durchgef hrt hat nnee Installation abgenommen u Datums Hinweis Seriennummern auf der R ckseite eintragen KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 43 2 Installation 2 6 Registrationsformular Komponenten Seriennummern des KTApurifier Systems u Menge Teilenummer Beschreibung Seriennummer Systemgestell ischer M 925 UV 900 Monitor UPC 900 Monitor Pumpe P 900 NV 907 Computer onitor 44 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB System berblick 3 3 System berblick Dieses Kapitel gibt einen kurzen berblick ber das System KTApurifier mit Trenneinheit und UNICORN Software Hinweis Zwei Versionen sind erh ltlich KTApurifier mit UV 900 Monitor f r Mehrwellenl ngen Detektion und KTApurifier UPC mit UPC 900 Monitor f r eine kombinierte Messung von UV Absorption pH Wert und Leitf h
170. sswert wenn er bei 100 B stabil ist 5 Wenn der Messwert sowohl bei O als auch bei 100 B akzeptabel ist kann der Lauf gestartet werden 6 Wenn der pH Messwert nicht akzeptabel ist w hlen Sie Correction Factors auf der Seite BufferPrep des Method Editor Geben Sie die pH Abweichung bei O und 100 B ein Wenn zum Beispiel der pH Wert auf 7 eingestellt wurde und der tats chliche pH Wert bei 7 1 liegt geben Sie 0 1 ein oder wenn der tats chliche pH Wert bei 6 9 liegt geben Sie 0 1 ein Wenn standardm ige Korrekturfaktoren bestehen addieren Sie die gemessene Abweichung zu diesen Faktoren 7 Speichern Sie die Methode Hinweis Die neuen Korrekturfaktoren gelten nur solange diese Methode verwendet wird Wenn eine neue Methode erstellt wird und ein Rezept ausgew hlt wird gelten standardm ige Korrekturfaktoren Zum ndern der standardm igen Korrekturfaktoren f r ein Rezept siehe Abschnitt 8 5 4 5 2 7 Erstellen Ihrer eigenen Rezepte Siehe Abschnitt 8 5 1 Erstellen Ihrer eigenen Rezepte f r Einzelheiten zur Erstellung von Rezepten oder Bearbeitung bestehender Rezepte 98 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Optionale Funktionen 5 5 3 Scouting Das Scouting erm glicht es dass beliebige Laufparameter z B Durchfluss geschwindigkeit automatisch in wiederholten L ufen systematisch variiert werden Nachstehend finden Sie eine Beschreibung der Durchf hrung eines Scoutings der Durchflussg
171. stance den pKa Wert ein F r jede Pufferkomponente k nnen bis zu 3 Werte pKal pKa3 eingegeben werden Die pKa Werte m ssen in der aufsteigenden Reihenfolge der Werte ein gegeben werden wobei mit dem niedrigsten pKa Wert begonnen wird Wenn die Pufferkomponente weniger als drei pKa Werte hat sollten die anderen pKa Werte auf Null gesetzt werden Geben Sie den dpKa dT Wert die Ver nderung des pKa in Abh ngigkeit von der Temperatur f r jeden pKa ein dpKa1 dT dpKa3 dT Null bedeutet dass sich der pKa bei nderungen der Temperatur nicht ver ndert Geben Sie die Number of acidic protons f r die Puffersubstanz in der Form in der sie tats chlich eingewogen wird ein Beispiel F r NaH PO geben Sie 2 ein f r Na HPO geben Sie 1 ein f r Tris geben Sie O ein Geben Sie die Ladung des vollst ndig deprotonierten lons unter Charge of deprotonated ion ein Dies ist bei einer S ure ein negativer Wert bei einer Base ist es O Beispiel F r NaH PO geben Sie 3 ein f r Tris geben Sie O ein Klicken sie auf OK um eine neue Puffersubstanz zur Liste der verf gbaren Pufferl sungen hinzuzuf gen 8 5 3 Definieren eines neuen Salzes Wenn Sie ein neues Salz definieren stellen Sie sicher dass das neue Salz inert ist d h ein Salz ohne Puffereigenschaften 1 Klicken Sie im Dialog New Recipe auf Salt und klicken Sie auf New im Dialog Define Salt Geben Sie den Namen des neuen Salzes im Dialog New Component ein Klicken
172. t Ok Cancel Help 5 W hlen Sie Ihr System aus der Liste Wenn Sie nicht mit einem Netzwerk verbunden sind wird nur ein System angezeigt Klicken Sie auf OK 70 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 6 Wenn das System angeschlossen ist wird im Feld Connection im Fenster Run Data YES angezeigt Sie m ssen das System nur einmal anschlie en Wenn Sie System Disconnect nicht w hlen werden Sie automatisch mit dem System verbunden wenn Sie sich das n chste Mal bei UNICORN anmelden 4 5 2 Vorbereiten der Str mungswegkomponenten Vorbereiten der Kapillaren 1 Verwenden Sie den korrekten Kapillarensatz f r die S ule die Sie verwenden m chten Siehe Abschnitt 8 4 Empfohlene Kapillaren und S ulen Bei den meisten S ulen kann im KTApurifier 10 der Kapillarensatz mit einem Innendurchmesser von 0 50 und im KTApurifier 100 der Kapillarensatz mit einem Innendurchmesser von 0 75 verwendet werden Hinweis Wenn Sie Frac 920 zusammen mit dem KTApurifier 10 verwenden empfehlen wir eine maximale Flussgeschwindigkeit von 3 5 ml min und den Kapillarensatz mit dem Innendurchmesser von 0 25 mm Bei h heren Flussgeschwindigkeiten wird aus den Tropfen ein un unterbrochener Fl ssigkeitsstrom Hinweis Wenn Kapillaren mit einem zu gro en Innendurchmesser verwendet werden werden die Peaks breiter als erforderlich Wenn Kapillaren mit einem zu kleinen Innendurchmesser verwendet werden besteht die Ge
173. t Leitf higkeitsbereich 1 uS cm 999 9 mS cm Abweichung von der theoretischen Leitf higkeit Max 2 des Kalibrationsbereichs bei Voll ausschlag oder 10 uS cm je nachdem was gr er ist im Bereich 1 uS cm 300 mS cm Reproduzierbarkeit Max 1 des Maximums oder 5 uS cm je nachdem was gr er ist im Bereich 1 uS cm 300 mS cm Rauschen Max 0 5 des kalibrierten Bereichs bei Vollausschlag Leitf higkeitsdurchflusszelle Durchflussgeschwindigkeit 0 100 ml min Max Druck 5 MPa 50 bar 725 psi Max Gegendruck 0 01 MPa bei 100 ml min pH Messung optional pH Bereich O bis 14 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Referenzinformationen 8 8 6 2 Physikalische Daten Schutzart IP 20 Leistungsaufnahme 100 240 V 50 60 Hz Stromverbrauch 600 VA Sicherungsspezifikation KTApurifier T 6 3 AL 250 VAC Abmessungen B x H x T 450 x 610 x 490 mm Gewicht KTApurifier 41 kg KTApurifier UPC 38 kg Umgebung 4 bis 40 C 10 95 relative Luft feuchtigkeit nicht kondensierend 84 106 kPa 840 1060 mbar Luftdruck 8 6 3 Einhaltung der Sicherheitsstandards Das CE Symbol und die Konformit tserkl rung Das CE Symbol und die entsprechende Konformit tserkl rung f r das Instrument gelten nur wenn das Ger t e f r die Verwendung im Labor nicht f r klinische oder In vitro Zwecke verwe
174. t S ule Injektionsventil INV 907 UV Durchflusszelle Mischer M 925 Mischkammer Zur Abfallflasche W1 W2 und W3 Abb 1 2 KTApurifier KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Box 900 UPC 900 Monitor Pumpe P 900 P 901 P 903 AN AUS Schalter x a INV 907 N Abb 1 3 KTApurifier UPC 1 2 Schilder Einleitung 1 Injektionsventil Optische Kr Einheit Leitf higkeitszelle Mischer M 925 Mischkammer An der Innenseite des Gestells an der R ckseite des Systems sind Schilder angebracht Das Schild mit den elektrischen Anschlusswerten befindet sich von hinten gesehen links und die Kennzeichnungsschilder rechts KTApurifier Voltage Frequency Power max 100 240 V 50 60 Hz 600 VA Made in Sweden X ce Serial no 12345678 Code no XX XXXX XX Abb 1 4 Das Schild mit den elektrischen Anschlusswerten und die Kennzeichnungsschilder am KTApurifier KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 1 Einleitung 1 3 Sicherheit gt gt gt gt o 10 1 3 Sicherheit e Das System ist ausschlie lich f r den Betrieb in geschlossenen R umen konzipiert e Verwenden Sie es nicht in staubiger Umgebung oder in der N he von Spritzwasser e Betreiben Sie das Ger t entsprechend den vor Or
175. t Abtastung der Steigung oder der H he Fraktionsmarkierungen und Fraktionsnummern erleichtern die Identifikation von Fraktionen und Peaks 83 Optionale Konfigurationen Die Standardsystemkonfiguration des KTApurifier kann einfach in optionale Konfigurationen umge ndert werden Diese eingebaute Flexibilit t im Standard system des KTApurifier erlaubt es dem Benutzer bereits verwendete Reini gungsmethoden zu verbessern und auch neue komplexere Methoden zu entwickeln Optionale Konfigurationen werden vom Benutzer ausgew hlt installiert und implementiert Eine optionale Konfiguration besteht sowohl aus Hardware Komponenten als auch aus Software Anweisungen Zur Unterst tzung des Vorgangs der Implementierung optionaler Konfigurationen finden Sie allgemeine Richtlinien zur Installation und zum Betrieb im separaten Handbuch KTApurifier Optional Configurations User Manual das in der KTApurifier Manual Box enthalten ist Optionale Konfigurationen werden ber Methoden vom UNICORN Steuersystem auf dieselbe Weise berwacht und gesteuert wie die Standardkonfiguration des KTApurifier Optionale Konfigurationen die vom KTApurifier unterst tzt werden sind e Anschluss von bis zu 9 Multiport Motorventilen Diese Ventile k nnen verwendet werden um die folgenden Funktionen zu erf llen e Auswahl der Pufferl sung e Probenauswohl e Auswahl der S ule e Optionale Funktionen e _In Line pH Messung e _ Anschluss ein
176. t geltenden Sicherheits bestimmungen e _ Blockieren Sie nicht den Lufteinlass an der Vorderseite oder die Auslasse an der R ckseite des Instruments WARNUNG Dieses Instrument ist nur f r die Verwendung im Labor nicht f r klinische oder In vitro Zwecke bestimmt WARNUNG Das System muss an eine geerdete Netzsteckdose angeschlossen sein um zu verhindern dass Teile des Systems zu stromf hrenden Teilen werden WARNUNG Die Abdeckungen der Module und Komponenten d rfen vom Benutzer nicht entfernt werden Die Module und Komponenten k nnen Hoch spannungskreise enthalten die einen t dlichen Elektroschock verursachen k nnen WARNUNG Die optischen Einheiten des UPC 900 Monitors und des UV 900 Monitors verwenden intensit tsstarkes ultraviolettes Licht Demontieren Sie die optische Einheit nicht solange die Lampe AN ist WARNUNG Nicht korrekt befestigte Kapillaren k nnen sich lockern und dazu f hren dass Fl ssigkeit herausspritzt Dies ist besonders riskant wenn gef hr liche Chemikalien verwendet werden Zum Anschluss einer Kapillare wird diese vollst ndig eingef hrt und das Verbindungsst ck mit der Hand festgezogen PEEK Kapillaren sollten mit dem mitgelieferten Schl ssel eine weitere 1 4 Dre hung angezogen werden Ziehen Sie TeflonT Kapillaren nicht weiter fest da hierdurch das Kapillarende besch digt wird WARNUNG Stellen Sie niemals Abfallbeh lter oben auf das System Wenn di
177. t im Inneren kann am kleinen Loch an der Unterseite des Ventilk rpers erkannt werden glicherweise sind innen liegende Teile abgenutzt Wechseln Sie die Kanalplatte und die Verteilerplatte aus Siehe entsprechende nstructions des Ventils Hoher Gegendruck e F hren Sie eine Vor Ort Reinigung durch Siehe entsprechende nstructions des Ventils e Wechseln Sie die Kanalplatte und die Verteilerplatte aus Siehe entsprechende Instructions des Ventils 7 10 BufferPrep Fehlersymptom M glicher Grund Ma nahme Instabiler pH Wert e Pr fen Sie das System indem Sie das Verfahren ohne S ule oder Probe durchf hren e Wenn der Wert immer noch instabil ist berpr fen Sie ob die korrekte Mischkammer verwendet wird berpr fen Sie ob die Pumpe korrekt funktioniert Pr fen Sie ob eine pH Elektrode verschmutzt oder zerbrochen ist berpr fen Sie ob die Ventile korrekt funktionieren berpr fen Sie ob der pH Wert nicht zu weit vom pKa der Pufferl sungskomponenten entfernt eingestellt ist e Wenn der pH Wert stabil ist wenn ein Lauf ohne S ule oder Probe durchgef hrt wird pr fen Sie ob die Konzentration der Puffer l sungskomponenten zu niedrig ist was zu einer zu geringen Pufferungskapozit t f hrt 120 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Fehlerbehebung 7 Fehlersymptom Falscher pH Wert M glicher Grund Ma nahme Sammeln Sie etwas Eluent Pr
178. ten und bietet eine Alternative zum Injektionseinf llport Falls verwendet ersetzt der Luer Anschluss den Injektionseinf llport im Port 3 des Injektionsventils KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 Die Probenschleifen sind in f nf verschiedenen Gr en erh ltlich Probenschleife Katalog Nr Schleife 10 ul 25 MPa 18 1120 39 Schleife 100 ul 25 MPa 18 1113 98 Schleife 500 ul 10 MPa 18 1113 99 Schleife 1 ml 10 MPa 18 1114 01 Schleife 2 ml 10 MPa 18 1114 02 Wenn Sie die Schleife mit einem Probenvolumen f llen das dem Schleifenvolumen entspricht werden ca 15 bis 25 der Probe verloren gehen da die Geschwin digkeit der Fl ssigkeit in den Kapillaren der Probenschleife von einem Maximum an der Achse der Kapillare bis beinahe Null an der Wand der Kapillare variiert Die genaue Menge der verlorenen Probe h ngt von der F rderstromgeschwindigkeit ab Zwei Techniken k nnen zum F llen der Probenschleife verwendet werden Teilf llung oder vollst ndige F llung Art des F llens Zu ladendes Volumen Teilf llung Max 50 des Probenschleifenvolumens Vollst ndige F llung Das 2 5 Fache des Probenschleifenvolumens KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 65 4 Betrieb 4 4 Probenaufgabe 66 Teilf llung Die Teilf llung wird verwendet wenn eine hohe Ausbeute erforderlich ist Das geladene Probenvolumen sollte maximal 5
179. teriostatischer L sung z B NaOH und destilliertem Wasser durchzusp len WARNUNG F r den dauerhaften Schutz vor Brandgefahr ersetzen Sie Sicher ungen nur mit solchen der vorgegebenen Art und Leistung Daten zu den Sicherungen siehe Referenzinformationen WARNUNG Wenn das System gedreht wird oder der Fraktionssammler entfernt wird k nnen sich externe Kapillaren und andere Verschlauchungen in nahe gelegenen Gegenst nden verheddern und von ihren Anschl ssen gezogen werden was zu Undichtigkeiten f hrt gt gt ee gt eeo KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 11 1 Einleitung 1 4 Abfallentsorgung x PbDPbPbP gt 12 WARNUNG Es muss immer eine Probenschleife oder ein Superloop an den Ports 2 und 6 des Injektionsventils angeschlossen sein Dadurch wird verhindert dass Fl ssigkeit aus den Ports spritzt wenn das Ventil gewechselt wird Dies ist besonders riskant wenn gef hrliche Chemikalien verwendet werden Wenn eine Probenpumpe f r die Probenaufgabe direkt auf die S ule verwendet wird muss eine Leitung zwischen den Ports 3 und 6 am Injektionsventil ange schlossen sein WARNUNG Superloop 10 ml und Superloop 50 ml d rfen nicht bei Dr cken ber 4 MPa 40 bar 580 psi verwendet werden Superloop 150 ml darf nicht ber 2 MPa 20 bar 290 psi verwendet werden Bei h heren Dr cken k nnte das Glasrohr zerspringen WARNUNG Verwenden Sie niemals Kapillar
180. ul bis 2 ml mit h chster Genauigkeit und Pr zision e _ unter Verwendung von Superloop 10 ml Superloop 50 ml oder Superloop 150 ml f r die Aufbringung von Proben im Bereich 1 10 ml 1 50 ml bzw 1 150 ml Alle drei werden blicherweise mit einer Spritze beladen KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 139 8 Referenzinformationen 8 2 Komponentenbeschreibung 140 8 2 7 Durchflussbegrenzer FR 902 904 Der Durchflussbegrenzer erzeugt einen konstanten Gegendruck um zu verhindern dass sich Luftblasen in den Durchflusszellen bilden FR 902 wird im Werk auf 0 2 MPa eingestellt und wird verwendet wenn eine pH Zelle optional im System eingebaut ist oder wenn Niederdrucks ulen verwendet werden FR 902 ist bei Lieferung im System eingebaut FR 904 wird im Werk auf 0 4 MPa eingestellt Dieser Durchflussbegrenzer wird verwendet wenn mit organischen L sungsmitteln gearbeitet wird wie zum Beispiel bei RPC Anwendungen um die Bildung von Luftblasen in der Durch flusszelle zu verhindern 8 2 8 In line Filter Der In Line Filter wird zwischen dem Auslass des Mischers M 925 und Position 7 des Injektionsventils eingebaut Pfeile auf dem In Line Filter geben die Str mungs richtung an Er erzeugt einen Gegendruck von max 0 5 MPa Der Filter ist ein Tiefenfilter mit einer Porenweite von 2 um Der im System KTApurifier 10 verwendete Filter ist aus Titan hergestellt Im System KTApurifier 100 ist er aus Polypropylen
181. um weitere Informationen zu den Optionen im Method Wizard zu erhalten 6 Klicken Sie im letzten Dialog auf Finish Das Fenster Run Setup erscheint Falls nicht w hlen Sie View Run Setup Klicken Sie hier um die Seite auszuw hlen Method Information Start Protocol Questions Result Name Variables Scouting Notes Gradient BuffePrep Columns Reference Curves Evaluation Procedures Block Variable Value Range Main Column ml 0 100 0 100 999999 000 Flow_Rate Flow_Rate ml min 1 000 0 000 10 000 Column_Pressure_Limit Column_Pressurelimit MPa 4 00 0 00 25 00 Linear_Gradient Target_ConcB B 100 0 0 0 100 0 Length_of_Gradient Cv 20 000 0 000 393999 000 I Show details I Show unused variables IV Display tooltip for extended variable cells Edit Varisbe Das Run Setup besteht aus mehreren Seiten Sie w hlen eine Seite aus indem Sie auf die entsprechende Registerkarte oben im Fenster klicken Einige der wichtigeren Seiten werden nachstehend beschrieben KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 57 4 Betrieb 4 2 Erstellen einer Methode 7 Auf der Seite Variables wird die Methode durch eine Reihe von Bl cken dargestellt Die Bl cke stellen die typischen Schritte in einem chromato graphischen Lauf dar Startanweisungen quilibrierung der S ule Probeninjektion siehe auch Abschnitt 4 4 Probenaufgabe Ungebundene Probe auswaschen
182. und chemische Vertr glichkeit 8 7 Chemische Best ndigkeit und chemische Vertr glichkeit Die chemische Best ndigkeit des KTApurifier gegen ber den meisten gew hnlich bei der Fl ssigkeitschromatographie verwendeten Chemikalien ist in der nachste henden Tabelle angegeben Die Daten basieren auf den folgenden Annahmen 1 Die synergistischen Effekte der Chemikalienmischungen wurden nicht ber cksichtigt 2 Raumtemperatur und begrenzter Gegendruck werden angenommen Hinweis Chemische Wirkungen sind zeit und druckabh ngig Sofern nicht anders angegeben sind alle Konzentrationen 100 Chemikalie Exposition Anmerkungen lt 1 Tag bis 2 Monate Acetaldehyd OK OK Aceton 10 OK Vermeiden PVDF wird durch langfristige Verwendung beeintr chtigt Acetonitril OK OK FFKM PP und PE quellen auf PEEK wird durch langfristige Verwendung beein tr chtigt Ameisens ure OK OK Silikon nicht resistent Ammoniak 30 OK OK Silikon wird durch langfristige Verwendung beeintr chtigt Ammoniumchlorid OK OK Ammoniumhydrogencarbonat OK OK Ammoniumnitrat OK OK Ammoniumsulfat OK OK 1 Butanol OK OK 2 Butanol OK OK Chloroform OK Vermeiden ECTFE PP und PE werden durch lang fristige Verwendung beeintr chtigt Cyclohexan OK OK Dimethylsulfoxid Vermeiden Vermeiden PVDF wird durch langfristige Verwendung beeintr chtigt 1 4 Dioxan Vermeiden Vermeiden ETFE PP PE und PVDF werden dur
183. ung Falls der Kolben besch digt ist wechseln Sie ihn entsprechend Kapitel 4 im Pump P 900 User Manual aus Denken Sie daran die Kolbendichtung durch neue Teile zu ersetzen Undichter Anschluss und oder kristallisiertes Material rund um einen Anschluss L sen Sie den Anschluss und pr fen Sie ob er abgenutzt oder nicht korrekt angebracht wurde In diesem Fall wechseln Sie den Anschluss aus Ziehen Sie den Anschluss ordnungsgem von Hand fest KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 117 7 Fehlerbehebung 7 6 UV 900 Monitor Fehlersymptom Unregelm iger Pumpendruck M glicher Grund Ma nahme Um die Pumpenfunktion zu pr fen protokollieren Sie den Druck oder pr fen Sie ihn in UNICORN Durch Beobachten des Kolben statusindikators im Men Check zusammen mit der Druck verfolgung kann der Pumpenzulinder der nicht normal funktio niert identifiziert werden siehe Reference information im Pump P 900 User Manual Unnormale Druckaufzeichnungen k nnen mehrere Gr nde haben zum Beispiel e in den Pumpenzylindern eingeschlossene Luft e teilweise blockierte L sungsmnittelfilter e undichte Anschl sse e undichte Kolbendichtung e Funktionsst rung des Pumpensperrventils e besch digter Kolben Einige Beispiel f r normale und unnormale Druckverfolgung zusammen mit Anmerkungen finden Sie in Kapitel 5 im Pump P 900 User Manual 7 6 UV 900 Monitor Fe
184. ung W3 an den Abfallauslass am Frac 950 an und f hren Sie sie zu einem geeigneten Abfallbeh lter 6 Stellen Sie das Delay Volumen in UNCORN ein siehe Abschnitt 8 1 6 Einstellen des Delay Volumens 2 3 8 Installieren der Steuereinheit CU 950 POWER pc SYSTEM Z Amershatt 47 Bioscience 1 Packen Sie die CU 950 aus 2 H ngen Sie die CU 950 an die linke Seite des Systems indem Sie die Haken an der Vorderseite der CU 950 in die Rille an der Seite des UV 900 einf hren und in die richtige Position drehen 28 KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Installation 2 2 3 9 Anschlie en der UniNet Kabel VORSICHT Der Netzschalter des KTApurifier muss auf AUS gestellt sei bevor Sie die UniNet 1 Kabel installieren UPC 900 Monitor Pumpe P 900 Fraktions sammler Abschlusswiderstand Nur bei Frac 950 Frac 920 hat nur eine UniNet 1 Buchse CU 950 UniNet 1 Zum Computer USB Kabel Abb 2 2 Abbildung der KTApurifier UPC Anschl sse Die KTApurifier Anschl sse sind hnlich 1 Schlie en Sie ein UniNet 1 Kabel zwischen dem UniNet 1 Port an der CU 950 und der Pumpe P 900 im System an 2 Schlie en Sie ein UniNet 1 Kabel zwischen der Pumpe P 900 und dem Monitor UPC 900 Monitor UV 900 an 3 Bei der Verwendung e
185. ung die f r die meisten Zwecke geeignet ist Hinweis Die PID Parameter sollten nur von erfahrenen Benutzern ge ndert werden Die nachstehende Tabelle beschreibt die drei PID Parameter Parameter P Beschreibung Der Parameter P verringert die Wirkung eines Fehlers aber eliminiert diesen nicht vollst ndig Ein einfacher P Regler f hrt zu einem stabilen Fehler zwischen tats chlichem und gefordertem Durchfluss Der Parameter I eliminiert den station ren Fehler f hrt aber zu einer leichten Instabilit t die zu Schwankungen im tats chlichen Durchfluss f hren kann Der l Parameter kann Werte zwischen 0 und unendlich haben Kleinere Werte haben eine gr ere Wirkung und ein unendlicher Wert hat keine Wirkung Hinweis Unendlich wird in UNICORN als 9999 eingestellt In bestimmten F llen kann der Parameter D die durch einen Pl Regler verursachten Schwankungen verringern D kann Werte zwischen 0 und unendlich haben wobei gr ere Werte eine gr ere Wirkung haben und ein Wert 0 keine Wirkung hat Hinweis In den meisten F llen ist ein einfacher Pl Regler f r die Steuerung der Durchflussgeschwindigkeit vorzuziehen daher ist KTApurifier standardm ig mit einem auf Null eingestellten D Parameter konfiguriert Tabelle 5 2 PID Parameter Faustregeln f r die Optimierung der PID Parameter Verwenden Sie die standardm igen PID Parameter aus Ausgangswerte Um die Standardwerte einzustellen
186. ussbegrenzer zum Auslass ventil mittlerer Port G9 600 0 25 Auslassventil Port 2 zum Fraktions sammler optional F3 1000 0 50 Auslassventil Port 3 A3 150 1 6 SV 903A IN zur Pumpe P 900A B3 150 1 6 SV 903B IN zur Pumpe P 900B A1 1700 1 6 Pufferl sungsgef A1 zu SV 903A NO A2 1900 1 6 Pufferl sungsgef A2 zu SV 903A NC B1 1500 1 6 Pufferl sungsgef B1 zu SV 903B NO B2 1700 1 6 Pufferl sungsgef B2 zu SV 903B NC wi 1000 0 75 Injektionsventil Port 4 zum Abfall w2 1000 0 75 Injektionsventil Port 5 zum Abfall W3 1000 0 75 Auslassventil Port 1 zum Abfall Kapillarensatz 0 50 mm H6 160 0 50 UV Zelle zur Leitf higkeitszelle H7 80 0 50 Leitf higkeitszelle zum Durchfluss begrenzer H8 140 0 50 Durchflussbegrenzer zum Auslass ventil mittlerer Port H9 600 0 50 Auslassventil Port 2 zum Fraktions sammler optional 1 G Allgemeine Kapillare H Kapillare f r gro en Durchsatz W Abfallkapillare A Einlassleitung A B Einlassleitung B F Fraktionskapillare KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB 133 8 Referenzinformationen 8 1 Systembeschreibung KTApurifier UPC 10 Die S ule wird entweder unter Verwendung der mit der S ule mitgelieferten Kapillaren oder mit St cken von PEEK Kapillare die vom Benutzer auf die geeignete L nge geschnitten wurden installiert PEEK Kapillare mit einem Innendurchmesser von 0 5 mm orange wird mit dem System KTApurifier UPC 10 geliefert Ei
187. usw hlen Die hier ausgew hlten Informationen werden im Bericht gedruckt Klicken Sie auf OK Page Setup xi Page Setup First Header Header Footer The selected items will be included in the report r Select Items Font Select All Clear All r Logo MlRun user Current date amp time WVhRun date amp time VlReportt title MiResult file name vIMethod file name Page number Ei MRanart format name Free text Font Report title UNICORN Report Font I Logo C Middle Right m Layout IV Line over IV Line under Klicken Sie auf Print um den Bericht zu drucken Drucken aller Methodenanweisungen mit Erkl rungen W hlen Sie Method Editor File und klicken Sie auf Print Ein Fenster mit Anweisungen die gedruckt werden k nnen ffnet sich Stellen Sie sicher dass das K stchen Instruction Set angehakt ist und l schen Sie unerw nschte Elemente Klicken Sie auf Print um die Anweisungen zu drucken KTApurifier Benutzerhandbuch 28 9192 39 Ausgabe AB Betrieb 4 4 9 Abschluss eines Laufs und Lagerung Die Ventile wechseln nach einem Lauf wieder in die Standardpositionen d h Position 1 4 9 1 Lagerung ber Nacht Lassen Sie das System isokratisch bei geringer Durchflussgeschwin digkeit laufen ca 10 der verwendeten Durchflussgeschwindigkeit Wochenende und langfristige Lagerung Sp len Sie das System mit Wass

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